Utilizao de metodologias Problem-based Learning (PBL), no ensino de

anlise instrumental II: Anlise de Bixinas em extrato de urucum mediante

LC, GC, HPLC, EC e MS/MS.
Vargas, D.A.; Schwerz, L; Catai, J.R.; Ishikawa, A.A.; Santos-Neto, A.J.; Carrilho, E.
Resumo
A metodologia de Problem Based Learning (PBL) uma estratgia moderna de aprendizagem ativa que, surgiu como contraproposta metodologia tradicional de ensino e busca estabelecer uma
alternativa pedaggica na qual o estudante seja o ator principal do seu processo de aprendizado. Nesta abordagem, os docentes propem um caso de estudo, uma situao problema especfica, e os
estudantes identificam o problema, investigam, debatem, interpretam e propem possveis solues. Neste caso, como tarefa complementar e paralela s prticas previamente estabelecidas, os
estudantes enfrentaram o desafio de analisar, mediante as diferentes, tcnicas abordadas no curso da disciplina, o extrato de urucum utilizado na primeira prtica da disciplina (cromatografia lquida
clssica). Assim, aps realizar a primeira coluna e coletar as respetivas fraes separadas, os estudantes investigaram, consultaram a literatura e propuseram condies de anlise apropriadas, que
permitiram a identificao de bixina, metil-bixina e nor-bixina no extrato de urucum fazendo uso de cromatografia gasosa (GC), cromatografia lquida de alta eficincia HPLC, eletroforese capilar (EC)
e espectrometria de massas (MS). Finalmente os estudantes, depois de avaliar as diferentes alternativas, estavam em condies de estabelecer qual ou quais das tcnicas abordadas seriam as mais
apropriadas para realizar uma anlise deste tipo.
Palavras chave: Cromatografia, Urucum, Bixinas.

REVSISO BIBLIOGRAFICA

Durante esta primeira etapa, os estudantes deveram consultar na literatura, as

informaes disponveis referentes composio qumica do extrato de bixa
orellana, principais componentes, mtodos e condies de analise .

Bixina e norbixina so os carotenos responsveis pela colorao do extrato de bixa

orellana, legando a representar at o 80% da sua composio

Resultados da pesquisa na base de dados

Scopus, sobre o nmero de publicaes
referentes ao analise de extratos de Bixa
orellana,
mediante
mtodos
cromatogrficos, eletroforticos ou de
espectrometria de massas.

PRTICA 2: CROMATOGRAFIA GASOSA (GC-FID)

Cromatograma do extrato bruto de Bixa orellana
(GC-FID)

Solvente

PRTICA 1: CROMATOGRAFIA L LQUIDA CLSSICA

Um soluo preparada a partir de 500 mg de extrato de Urucum, dissolvidos em
uma soluo 4% de etanol em diclorometano, foi eluida em uma coluna
preenchida com silica-gel . No total, foram coletadas 96 fraes-, de estas foram
selecionadas algumas (segunda a mudana na colorao)para anlise mediante
cromatografia em camada delgada (TIC), usando estes resultados como critrio
para o reagrupamento das fraes. As fraes finais assim obtidas seriam
analisadas, mediante outras tcnicas no transcorrer das praticas posteriores.

Derivatizao do extrato bruto de Bixa orellana

Obteno de metil steres de cidos

graxos (FAMES), mediante reao com
Possveis produtos de decomposio metanol em meio acido:
trmica

A uma amostra de colorfico de urucum

(0.1 g) foi dissolvida em metanol (10 mL)
se adicionaram 5 gotas de acido clordrico
concentrado e levada a ebulio em
refluxo, durante 2 horas.
O produto de reao foi extrado ter vezes
com hexane e analisado mediante GC-FID.
Tempo (min)

PRTICA 3: CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA

EFICINCIA (HPLC- UV/Vis)
Cromatograma do extrato bruto de Bixa orellana
(HPLC UV/Vis)

Tempo (min)

PRTICA 5: ESPECTROMETRIA DE MASSAS (MS)

Durante esta prtica, ao igual que no caso

de GC e EC, os estudantes deveram
investigar, propor e testar condies de
operao que levaram separao das
bixinas com adequada resoluo.

PRTICA 4: ELETROFORESE CAPILAR (EC)

Cromatograma do extrato derivatizado

(GC-FID)
Hexane Possveis produtos de derivatizao

cis-norbixin (MW:380 Da)

bixin (MW:394 Da)
trans-norbixin
(MW:378 Da)

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
GIRIDHAR , P.; VENUGOPALAN ,A.; PARIMALAN, R. A Review on Annatto Dye Extraction, Analysis and
Processing A Food Technology Perspective. Journal of Scientific Research and Reports, v. 13, n. 2, p.
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TOCCHINI, L.; ZERLOTTI MERCADANTE, A. Extrao e determinao, por CLAE, de bixina e norbixina em
colorficos. Cincia e Tecnologia de Alimentos, v. 21, n. 3, p. 310-313, 2001.