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22/09/2010

Universidade de So Paulo
Instituto de Qumica de So Carlos
Departamento de Qumica e Fsica Molecular

Disciplina: SQM0418 - Anlise Instrumental II

CROMATOGRAFIA
Princpio Bsico

Separao de misturas por interao diferencial dos seus componentes entre uma
FASE ESTACIONRIA (lquido ou slido) e uma FASE MVEL (lquido ou gs).

lvaro Jos dos Santos Neto


11/08/2010

CROMA-IQSC

Introduo

Cromatograma Esquemtico

Caractersticas de um Pico Gaussiano

22/09/2010

2. Resoluo, RS

1. Fator de Reteno, k
Fator de reteno, k, definido com a relao entre o tempo que o
soluto passa na fase estacionria e o tempo que ele passa na fase
mvel.

tR t M
tM

t 'R
tM

[1]

tM = tempo que uma molcula da fase mvel passa na coluna;


denominado de hold-up time, tempo morto ou tempo de reteno de
um soluto no retido.
tR = tempo de reteno ajustado ou tempo que o soluto passa na fase
estacionria.

adimensional, enquanto que tempo de reteno no .

Controlado pela suficiente interao dos analitos com a


fase estacionria

2. Resoluo, RS

RS

t R 2 t R1
(
2 wb1 wb 2 )

[2]

RS = Resoluo entre dois picos; tR1 = Tempo de reteno do pico 1;


tR2 = Tempo de reteno do pico 2; wb1 = Largura do pico 1 na base;
wb2 = Largura do pico 2 na base.

No confundir RS com R, fator de retardamento, o qual


fornece a frao do componente da amostra na fase mvel, e
est relacionado ao fator de reteno, k.

1
R
1k

[3]

2. Resoluo, RS

Para 2 picos adjacentes wb1 wb2 , podendo-se escrever:

RS

t R 2 t R1 Dt R

wb2
wb2

[4]

RS valer 1 quando DtR = wb2 = 4s.


A separao ser completa com RS > 1,5.
% Separao em funo de RS
RS
% separao
DtR (em s)

0,50
68,28
2,0

0,90
92,82
3,6

1,00
95,44
4,0

1,10
97,22
4,4

1,25
98,76
5,0

1,50
99,73
6,0

2. Resoluo, RS

2,00
2,50
99,99 100,00
8,0
10,0

2. Resoluo, RS

22/09/2010

3. Eficincia da Coluna

3. Eficincia da Coluna

A eficincia de uma coluna cromatogrfica , usualmente, medida


atravs do nmero de pratos, N, o qual mede a relao entre o tempo
de reteno de um pico e sua varincia (s ou wb ).

2
2
2

t
N R
s

t
N 16 R 2
wb 2

t
N 5,54 R 2
wh

Outra maneira de medir-se a eficincia atravs da Altura


Equivalente a um Prato, H:

[5]

Quanto maior tR e menor s (ou wb ou wh ), maior ser N.

L
N

[6]

H o comprimento necessrio de uma coluna para gerar um


prato. Quanto maior N menor ser H e mais eficiente a
coluna.

Controlado pela qualidade da coluna e do cromatgrafo

4. Fator de separao, a
Seletividade

4. Fator de separao, a
Seletividade

O fator de separao, a, a relao existente entre o tempo que dois


picos permanecem na fase estacionria.

t ' R 2 K2

t ' R1 K1

[7]

Quanto maior o valor de a, mais seletiva ser a fase


estacionria para aquele par de compostos.

Controlado pelas diferentes caractersticas qumicas dos


analitos e fases de separao (estacionria e mvel)

22/09/2010

5. Equao Mestra da
Resoluo

Equao Mestra da Resoluo

Dividindo numeradores e denominadores por k, e introduzindo o fator a


da equao [7]:

N a 1 k2
4 a 1 k2

RS

N a 1 k2
4 a 1 k2

RS

[13]

eficincia separao reteno

eficincia seletividade reteno/afinidade

k e a: so determinados por condies que afetam reteno e


equilbrio de distribuio da amostra entre fase mvel e estacionria

Qualidade da
coluna e do
cromatgrafo

composio da fase mvel; composio da fase estacionria; temperatura


N: depende da qualidade da coluna; varia com as condies instrumentais

Preferncia pela a
fase mvel ou pela
estacionria

Interao
suficiente com a
fase estacionria

vazo da fase mvel; comprimento da coluna; tamanho da partcula

EFEITO DE k, a e N NA
SEPARAO
t0

6. Relao entre tR e N

t R2

inicial

(1 k2 )

[14]

L = comprimento da coluna;
= velocidade linear mdia do gs de arraste (pode ser calculado
do tM ).
Quando k = 0, a equao [14] pode ser escrita como:

L
L

varia k

tM

aumenta a

tM

[15]

Na equao [14] o comprimento L pode ser substitudo por N.H [6]:

NH
t R2
(1 k2 )
[16]

aumenta N

7. Nmero de Pratos
Requeridos, Nreq

8. Influncia de N, a e k em RS

O nmero de pratos requeridos (Nreq ) para separar dois componentes


que apresentam uma reteno relativa igual a , com uma resoluo
RS , pode ser derivado da equao [13] e expresso como:
2
2

2 a k 2 1
[17]
N 16 R
req


a 1 k 2

Substituindo equao [17] na [16], teremos:

2
2 a k 2 1 H
t R 2 16 RS
2
a 1 k 2

[18]

Para minimizar o tempo de reteno, tR , a Resoluo (RS ) deve


ser minimizada, evitando-se sobre-resoluo.
Para uma dada separao, o tempo de anlise ser 1 minuto
para RS = 1 e 4 minutos para RS = 2.

22/09/2010

8. Influncia de N, a e k em RS

Apresentar Planilha

1. Nmero de Pratos, N
A resoluo proporcional a raiz quadrada de N. Aumentando-se N
por um fator de 4 (por ex. de N = 20.000 para N = 80.000) a
resoluo dobrar (RS = 1,40 para RS = 2,80).
2. Fator de Separao, a
Apresenta grande impacto em RS . Aumentando a de 1,05 para 1,10,
a resoluo praticamente dobra (de 1,40 para 2,68), enquanto que
uma pequena diminuio em a (de 1,05 para 1,03) causa drstica
perda de resoluo (de 1,40 para 0,86).
3. Fator de Reteno, k
Para valores superiores a 5, a influncia de k em RS pequena.
Aumentando k de 5 para 20 a resoluo aumenta apenas 14%
(de 1,4 para 1,6). Aumentando k de 0,25 para 5 a resoluo
aumenta em mais de 300% (de 0,37 para 1,4).

Fundamentao Terica
Alargamento da banda cromatogrfica:
Teoria Cintica
Por que

E no

Situao ideal

Equao de van Deemter

Situao real

H A

B
C

A = Efeito dos mltiplos caminhos


B = Difuso molecular
C = Resistncia transferncia de massa
t0

tN

t0

t1

t2

= Velocidade linear da fase mvel

L
tM

22/09/2010

H
termo A
termo B
termo C

altura do prato (H)

Grfico de van Deemter

altura do prato (H)

Grfico de van Deemter

velocidade linear mdia (m)

termo B
termo C

velocidade linear mdia (m)

(coluna empacotada)

H
termo A
termo B
termo C

velocidade linear mdia (m)

Equao de Van Deemter

2 Dgas

termo C

altura do prato (H)

altura do prato (H)

termo A

H HEPT 2 dp

termo B

Grfico de van Deemter

termo A

velocidade linear mdia (m)

Grfico de van Deemter

Efeito dos mltiplos


caminhos (A)

8k
df 2

2 ( k 1) 2 Dliq .

22/09/2010

Termo A - Efeito dos mltiplos


caminhos

Termo B - Difuso molecular

A = 2 dp
= Fator de empacotamento
dp = dimetro das partculas

Partculas menores, bem empacotadas em tubo de d.i.


pequeno diminuem A.
Colunas capilares abertas no apresentam o termo A pois
no h partculas de empacotamento.

Termo B - Difuso molecular

Termo B - Difuso molecular


B = 2 DFM
= Fator de tortuosidade
DFM = Coeficiente de difuso da amostra na fase mvel

= velocidade linear, cm/seg

F
t1

t2

Fluxos rpidos evitam a difuso.

t3

Termo C - Transferncia de
Massa

Termo C - Transferncia de
massa
C

8
k,
df 2
2 (1 k , ) 2 DLiq

k = Fator de reteno = tR/t0


df = Espessura do filme da fase estacionria
DLiq = Coeficiente de difuso da amostra na fase
lquida (FE)

Usar filme fino de baixa viscosidade espalhado


uniformemente sobre um suporte slido inerte.
Usar fluxos baixos.

22/09/2010

Grfico de Van Deemter

A+B/ +C
C

B/

H A

Efeito da reduo no valor do termo C

EQUAO DE GOLAY

Porcentagem de reduo: 0%

Grfico de van Deemter

(A, B, C = constantes)
- Colunas Capilares: Equao de
Golay

altura do prato (H)

- Colunas Empacotadas: Equao de van


Deemter

H
termo A
termo B
termo C

(B, CM, CS = constantes)

velocidade linear mdia (m)

22/09/2010

Efeito da reduo no valor do termo C

Efeito da reduo no valor do termo C

Porcentagem de reduo: 5%

Porcentagem de reduo: 10%

Grfico de van Deemter

H
termo A
termo B
termo C

altura do prato (H)

altura do prato (H)

Grfico de van Deemter

velocidade linear mdia (m)

H
termo A
termo B
termo C

velocidade linear mdia (m)

Efeito da reduo no valor do termo C

Efeito da reduo no valor do termo C

Porcentagem de reduo: 20%

Porcentagem de reduo: 30%

Grfico de van Deemter

H
termo A
termo B
termo C

altura do prato (H)

altura do prato (H)

Grfico de van Deemter

velocidade linear mdia (m)

H
termo A
termo B
termo C

velocidade linear mdia (m)

Efeito da reduo no valor do termo C

Efeito da reduo no valor do termo C

Porcentagem de reduo: 40%

Porcentagem de reduo: 50%

Grfico de van Deemter

H
termo A
termo B
termo C

velocidade linear mdia (m)

altura do prato (H)

altura do prato (H)

Grfico de van Deemter

H
termo A
termo B
termo C

velocidade linear mdia (m)

22/09/2010

Efeito da reduo no valor do termo B

Efeito da reduo no valor do termo B

Porcentagem de reduo: 0%

Porcentagem de reduo: 10%

Grfico de van Deemter

altura do prato (H)

altura do prato (H)

Grfico de van Deemter

H
termo A
termo B
termo C

velocidade linear mdia (m)

H
termo A
termo B
termo C

velocidade linear mdia (m)

Efeito da reduo no valor do termo B

Efeito da reduo no valor do termo B

Porcentagem de reduo: 50%

Porcentagem de reduo: 75%

Grfico de van Deemter

altura do prato (H)

altura do prato (H)

Grfico de van Deemter

H
termo A
termo B
termo C

velocidade linear mdia (m)

termo A
termo B
termo C

velocidade linear mdia (m)

A curva eficincia (HEP) x velocidade se torna menos


inclinada para partculas menores.

HEP (m)

EFEITO DA VELOCIDADE DA FASE MVEL

Dong, M., Todays Chemist at Work, 2000.

Fluxo (mL/min)

Vazes maiores podem ser empregadas


sem perda de eficincia.
Resulta em uma separao mais rpida.

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