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UNIVERSIDAD TCNICA ESTATAL DE QUEVEDO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA INGENIERA


INGENIERA AGROINDUSTRIAL
NOMBRE: Prez Saldaa Braulio Douglas
CURSO: VII Ciclo de Agroindustrias
UNIDAD DE APRENDIZAJE: Mtodos de Anlisis de Semillas
FECHA: Jueves 24 de Julio del 2015

MTODOS DE DETECCIN DE ALIMENTOS TRANSGNICOS


Se pueden considerar dos sistemas generales que ponen de manifiesto la
condicin de transgnico de un alimento bajo sospecha. Por un lado, se
dispone de procedimientos que detectan las nuevas protenas expresadas
por el/los transgenes introducidos y, por otro, existen mtodos que
identifican el ADN correspondiente al gen o genes introducidos.
Los protocolos analticos son muy sensibles, ya que detectan un gen en decenas de
miles de genes del genoma, o una nueva protena entre varios miles de protenas.
Actualmente, los protocolos pueden detectar un evento o grupo de eventos en un
cultivo en particular, pero ninguno puede detectar en un nico ensayo todos los
eventos, por eso no se puede asegurar que una muestra est libre de OGM, slo se
puede asegurar que est libre de los eventos para los cuales se hayan realizado los
anlisis pertinentes
La base de cada tipo de tecnologa de deteccin de OGM es buscar la diferencia entre
la variedad no modificada y la planta transgnica. Existen tres metodologas para
detectar modificaciones genticas en los cultivos tales como soya, algodn, maz, etc.
Una es mediante la diferenciacin fenotpica. La otra es a nivel de protenas por
tcnicas inmunolgicas (tiras reactivas o ELISA), las cuales detectan la presencia de
protenas especficas, por la unin especfica entre el antgeno expresado y el
anticuerpo blanco. El otro mtodo est basado en la deteccin a nivel de ADN,
mediante PCR. Estos dos ltimos mtodos muestran la ausencia o presencia de un
OGM en la muestra, pero tambin pueden dar alguna indicacin de cantidad
(porcentaje) en una muestra tratada
DETECCIN FENOTPICA.
Por lo general, las plantas genticamente modificadas que se encuentran actualmente
en campo presentan la caracterstica de resistencia a herbicida y/o a insectos. La
evaluacin de la resistencia a insectos de una planta se realiza mediante ensayos
biolgicos complejos y de larga duracin, por eso, esta no es una alternativa prctica
para el anlisis de granos. Sin embargo, la resistencia a herbicidas s puede ser
evaluada mediante ensayos sencillos en laboratorio y en campo, pudiendo observarse
los resultados de la evaluacin de la diferencia fenotpica entre una planta
genticamente modificada resistente a herbicida y la planta natural.

DETECCIN INMUNOLGICA.
Los OGMs estn caracterizados por un genoma alterado, el cual puede llevar a la
expresin de una nueva protena; por lo tanto, los alimentos modificados
genticamente pueden ser identificados detectando la presencia de la nueva protena
expresada, codificada por el material gentico (Lipp y cols., 2001).
Los ensayos inmunolgicos para la deteccin de OGM, bsicamente se desarrollan
con dos formatos: las tiras reactivas o strips de flujo lateral y el ELISA (ensayo de
inmunodeteccin ligado a enzima).
ENSAYO DE INMUNODETECCIN LIGADO A ENZIMA (ELISA).
Los anlisis ELISA detectan o miden la cantidad de protena de inters en una
muestra que puede contener numerosas protenas distintas. Se utiliza un anticuerpo
fijado al pocillo que se une especficamente a la protena transgnica, un segundo
anticuerpo conjugado a un enzima cuyo producto genera un color que es visible al
aadir un sustrato determinado y fcilmente cuantificable basado en la comparacin
de
una curva patrn de protena de inters.

Del mismo modo que la PCR, la tcnica de ELISA requiere de personal


capacitado y equipo especializado. Las caractersticas claves de esta tcnica son las
siguientes:

Menos sensible que la PCR, sin embargo esto puede ser una ventaja
en algunos casos ya que es menos susceptible a falsos positivos.
Se necesita desarrollar previamente anticuerpos que reconozcan
especficamente la protena transgnica que se desee. Por lo tanto no
puede utilizarse este mtodo como tcnica de screening.
Por otra parte aunque el desarrollo de anticuerpos es una labor cuanto
menos tediosa, una vez desarrollados, el resto de reactivos resultan
mucho ms econmicos y rpidos que los utilizados en la PCR.

Estos mtodos basados en la localizacin de la proteina son


aplicables siempre y cuando la protena no haya sufrido ninguna
desnaturalizacin en el proceso de manipulacin del alimento
(calentamiento y enfriamiento, prensado, etc).

ELISA APLICADO ACTUALMENTE A LA DETECCIN DE ALIMENTOS


TRANSGNICOS
El nico lmite tcnico para utilizar este mtodo como anlisis rutinario es que se
debe de conocer qu protena concreta se ha debido modificar en cada caso, y se
deben desarrollar anticuerpos frente a esa protena.
El desarrollo de estos anticuerpos es posterior a las exigencias marcadas por la ley,
que en la actualidad en Europa se aplican a la protena Bt-176 del maz y la
CP4EPSPS (Roundup Ready) expresada en soja.
Actualmente se dispone de anticuerpos para la deteccin de la protena modificada en
soja (grano, harina, concentrado, aislado) y en breve espacio de tiempo se espera
disponer de los anticuerpos que reconocen la Bt-176 del maz.
REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) sirve para la deteccin directa del
transgn. Se pueden utilizar primers (oligonucletidos) para cualquiera de los
elementos que forman parte de la secuencia. Mediante un termociclador se consigue
la amplificacin de los fragmentos, que se separan en un gel de agarosa en razn de
su tamao. La tincin con un compuesto 40 41 puesto que fluoresce cuando se
expone a la luz ultravioleta permite identificar el fragmento de ADN buscado con
facilidad.
Una variante de esta tcnica, la PCR cuantitativa se ha revelado como un instrumento
poderoso en la deteccin de OMGs, pues permite identificar en tiempo real la
amplificacin de un genoma de inters objeto de bsqueda.
Casi todas las variantes de este mtodo se basan en la utilizacin de una sonda de
ADN, complementaria de una parte del ADN que se pretende amplificar, la cual va
adherida a una molcula fluorescente y a otra inhibidora, sta ltima denominada
quencher; de este modo, solo en el caso de que la sonda se desplace de su sitio por
accin de la ADN-polimerasa, la molcula fluorescente se libera y fluoresce al ser
estimulada por un lser.
Simplemente, la cuantificacin de la fluorescencia en cada ciclo de la PCR es
proporcional a la cantidad de ADN que se est amplificando y ofrece, por tanto, una
medida indirecta de la misma.
APLICACIN DE LA PCR A LA DETECCIN DE ALIMENTOS TRANSGNICOS
La PCR es un mtodo muy sensible para la deteccin de alimentos transgnicos,
ya que puede localizar especficamente cualquier gen del que se conozca su
secuencia.

En los alimentos transgnicos, como ya se coment anteriormente, hay


secuencias exgenas que corresponden a un promotor, al gen de inters y a un
terminador.
Cuando se est realizando un estudio de un alimento del que se desconoce qu
gen se ha introducido, se debe realizar un estudio de screening en el cual se
intentar
localizar el promotor frecuentemente utilizado para la insercin del gen (p35S) o el
terminador (NOS). En otros casos deben disearse iniciadores para localizar el gen
concreto.
Adems de este mtodo tambin se dispone de kits desarrollados para el anlisis
de cualquier tipo de alimentos en los que puedan estar presentes ingredientes
procedentes de material transgnico.

SOUTHERN BLOT
Es, igualmente, una tcnica muy til para la deteccin de genes extraos. A tal efecto,
despus de extraer el ADN total de la planta en la que se busca el transgen, se
fragmenta con enzimas de restriccin y se separa en un gel de electroforesis por razn
de su tamao molecular.

Despus se procede a la transferencia a una membrana de nailon (o semejante) y ya


solo queda revelar la presencia del gen buscado, para lo cual se hace uso de una
secuencia complementaria previamente diseada con ese fin, que ha sido marcada
con un isotopo radiactivo. Finalmente slo queda detectar el compuesto radiactivo, que
permanece en la membrana si est presente el gen problema, puesto que de forma
contraria ser eliminado.
Southern Blot es, igualmente, una tcnica muy til para la deteccin de genes
extraos. A tal efecto, despus de extraer el ADN total de la planta en la que se busca
el transgen, se fragmenta con enzimas de restriccin y se separa en un gel de
electroforesis por razn de su tamao molecular. Despus se procede a la
transferencia a una membrana de nailon (o semejante) y ya solo queda revelar la
presencia del gen buscado, para lo cual se hace uso de una secuencia
complementaria previamente diseada con ese fin, que ha sido marcada con un
isotopo radiactivo. Finalmente slo queda detectar el compuesto radiactivo, que
permanece en la membrana si est presente el gen problema, puesto que de forma
contraria ser eliminado.
PRINCIPALES DIFERENCIAS DE LOS ENSAYOS BASADOS EN LA DETECCIN
DE ADN Y EN LA DETECCIN DE PROTENAS

ANEXOS

BIBLIOGRAFIA

F. Elas, Jos M Z., O. Carballeira, Calleja. Lo que usted debe saber sobre: los
alimentos transgnicos. EDICION CAJA ESPAA. 2003.

Zamudio, T. (2005). Evaluacin de alimentos derivados de OGM.

Tozzini, A. C. (2004). Deteccin de OGM en la cadena alimentaria.

Martnez, M. C. (2002). Laboratorio de deteccin de organismos genticamente


modificados.