Micro Bio

MICROBIOLOGIA Y MEDIOS DE CULTIVO
PRACTICAS DE LABORATORIO
Blgo. ALEJANDRO HANS RAMIREZ MUOZ
T.M. JACQUELINE BALQUI RIVERA
ICA PER
Microbiologa y Medios de Cultivo Prctica de Laboratorio
Ramirez - Balqui
MICROBIOLOGIA Y MEDIOS
DE CULTIVO
Ramirez - Balqui
MICROBIOLOGIA Y
MEDIOS DE CULTIVO
EDICIONES CIENTIFICAS JACBARI S.R.Ltda.

Av. Fernando Len de Vivero.
Urb. El Carmen C 12
Ica Per.
RUC: 10215479761
Se imprimieron 1000 ejemplares
Derechos reservados
Primera Edicin: Enero de 2004.
Ramirez - Balqui
INTRODUCCION
Esta primera edicin, tiene como finalidad, al igual que publicaciones similares,
que el estudiante o profesional dedicado a la Microbiologa cuente con un pequeo
manual que facilite el trabajo de laboratorio.
Esta edicin, ha sido elaborada con algunos conceptos tericos, hay tambin
nuevas tablas, grficos y por supuesto se han agregado nuevos medios de cultivo; por
otro lado hay un reordenamiento de algunas tablas relacionadas con los discos de control
y susceptibilidad antimircrobiana. La presente edicin consta de siete captulos.
En el captulo I se presentan algunos conceptos bsicos de Microbiologa Mdica,
Microscopa y de la Taxonoma bacteriana. En el captulo II se da la teora esencial e
imprescindible para el conocimiento de las bacterias; es decir la estructura, nutricin y
metabolismo bacteriano.
En el captulo III se desarrolla la teora y metodologa para una correcta
desinfeccin y esterilizacin, los agentes fsicos y qumicos y su accin sobre las
bacterias. En este mismo captulo se ha comprendido lo ms esencial sobre antibiticos,
como son su clasificacin y su valoracin.
En el captulo IV se da el fundamento terico y se desarrollan las tcnicas para la
colaboracin bacteriana; de la misma manera para la siembra, aislamiento y transplante
de bacterias tanto aerobias como anaerobias. En el captulo V se da el conocimiento
terico, clasificacin y el correcto uso del material de laboratorio; incluyndose adems
los grficos de un gran nmero de estos instrumentos.
En el captulo VI se desarrolla lo concerniente a las definiciones bsicas, mtodos
de muestreo, aislamiento e identificacin de microorganismos en los alimentos;
incluyndose la moderna tcnica de placa petrifilm.
Finalmente el VII y ltimo captulo trata de los medios de cultivo, razn de ser del
presente manual. Se desarrolla en cada uno de stos su fundamento, composicin,
preparacin e interpretacin. Solamente un adecuado empleo de los medios de cultivo
permitir un correcto diagnstico bacteriano.
Ica, Septiembre del 2003
Ramirez - Balqui
CONTENIDO
Pg.
Introduccin
CAPITULO I. CONCEPTOS E HISTORIA DE LA MICROBIOLOGIA.
Introduccin al concepto y contenido de la microbiologa..
Desarrollo histrico de la microbiologa.
Objeto de estudio de la microbiologa
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CAPITULO II. MICROBIOLOGIA MDICA, MICROSOCOPIA Y

TAXONOMIA BACTERIANA.
Microbiologa Mdica
Microscopa.........................
Taxonoma bacteriana. Categoras taxonmicas..........................
Cepas o clones. Biotipos...........................
Nomenclatura de las bacterias
Patogenicidad y virulencia...
Mtodos inmunolgicos en microbiologa clnica.
Mtodos moleculares en microbiologa clnica.
Bacterias de inters mdico (clasificacin segn Bergey)..........................
Bacterias de inters industrial..........................
CAPITULO III. INTRODUCCION A LA PRACTICA MICROBIOLOGICA
El ciclo del diagnstico.
Virulencia de los microorganismos.
Toma de muestra..
Transporte de muestras...
Recepcin de muestras y observaciones preliminares...
Examen microscpico..
Procesamiento de los cultivos.
Interpretacin de los cultivos...

Informe de resultados.
Seguridad en el laboratorio.
Controles de calidad.
CAPITULO IV. ESTRUCTURA, NUTRICION Y METABOLISMO
BACTERIANO.
Estructura bacteriana. Pared celular..
Bacterias grammpositivas
Bacterias grammnegativas..
Bacterias cido alcohol resistentes.........................
Bacterias sin pared celular.
Cpsula bacteriana...
Flagelo bacteriano..........................
Formas de las bacterias...
Tamao de las bacterias..
Crecimiento bacteriano.
Nutricin bacteriana..
Tipos trficos de las bacterias.
Condiciones fisicoqumicas que influyen en el crecimiento bacteriano.......
Metabolismo bacteriano...
Catabolismo o reacciones energticas...........................
Anabolismo o reacciones biosintticas..
CAPITULO V: EFECTO DE LOS AGENTES FISICOS SOBRE LAS
BACTERIAS.
Introduccin: Efecto de los factores ambientales sobre las
bacterias...
Efecto de la Temperatura..
Liofilizacin..
Desecacin..
Efecto de las radiaciones sobre las bacterias...
Efecto de las ondas sonoras.
Efectos de la presin hidrosttica
Efectos de la presin osmtica.
Efectos del pH.
CAPITULO VI: ACCION DE LOS AGENTES QUIMICOS SOBRE LAS
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Ramirez - Balqui
BACTERIAS.
Conceptos generales
Desinfectantes y antispticos..
Tipos de desinfectantes
Quimioterpicos de sntesis y antibiticos....
Qumioterpicos de sntesis.
Antibiticos.
Resistencia Bacteriana a los antibiticos..
Bases genticas de la resistencia..
Mecanismos bioqumicos.
CAPITULO VII. COLORACION, SIEMBRA, AISLAMIENTO Y
TRANSPLANTE DE BACTERIAS.
Coloraciones bacterianas.
Coloracin Gram
Coloracin cidos Resistente (tincin de Ziehl Neelsen)
Coloracin de cpsulas. Mtodos de Hiss
Siembra, aislamiento y transplante de bacterias................
Aislamiento de bacterias aerobias en placas de Agar
Mtodos de siembra o transplante de bacterias aerobias en tubos.
Aislamiento de microorganismos anaerobios...
CAPITULO VIII. INSTRUMENTACION, PROCEDIMIENTOS Y TECNICAS
DE LABORATORIO.
Normas de seguridad en el laboratorio de Microbiologa..
Material de laboratorio. Material de vidrio y otros
Equipos de laboratorio................
Limpieza del material de laboratorio y su esterilizacin................
Lminas ilustradas de los instrumentos y equipos de laboratorio.
CAPITULO IX. MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS.
Definiciones.................................................................................................
Tipos de anlisis a que pueden someterse los diferentes productos..........
Mtodos de muestreo...
Preparacin y dilucin de las muestras de alimentos.
Numeracin de microorganismos aerobios, mesfilos viables................
Numeracin de Coliformes. Determinacin del Nmero Mas Probable
(NMP)..
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Numeracin de Coliformes fecales. Determinacin del NMP

Deteccin de Salmonella................
Numeracin de Staphylococcus aureus coagulasa positivo..
Prueba de la Coagulasa...
Prueba de la Termonucleasa..
Aislamiento e identificacin del Vibrio cholerae...
Tcnica de la placa Petrifilm en recuento de E. coli y Coliformes
Tcnica de placa Petrifilm para recuento rpido de S. aureus....................
CAPITULO X. MEDIOS DE CULTIVO.
Medios de Cultivo. Preparacin, esterilizacin y conservacin.
Clasificacin de los Medios de Cultivo..
Medios de transporte
Algunas pruebas en relacin con el metabolismo bacteriano..
Relacin de las bacterias con el oxgeno..
Prueba de oxidacin Fermentacin de Hugo Leifson.................
Bacterias fermentativas
Reacciones de la oxidasa
Reaccin de la catalasa...
Reduccin de los Nitratos
Reacciones del Rojo Metilo y de Voges Proskauer................
Reacciones basadas en el Catabolismo
Productos resultantes de los procesos Anablicos.
Microbiologa para pruebas del laboratorio clnico..
Deteccin de microorganismos productores de enfermedades
Cultivo de sangre..
Microbiologa para el anlisis de agua y aguas residuales.........................
Microbiologa para alimentos y bebidas alcohlicas
Microbiologa para productos lcteos
MEDIOS DE CULTIVO
Agar Almidn................
Agar Anaerbico (Brewer)
Agar Azida Sangre (Agar base con sangre y azida)
Agar Baird Parker (Agar selectivo para Estafilococos)
Agar Bismuto Sulfito de Wilson Blair...............
Agar Brolacin (Agar azul de bromo timol lactosa cistina)......................
Agar Brucella...............................................................................................
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Ramirez - Balqui
Agar Catc (Agar citrato azida tween carbonato base)........................

Agar Citrimide (Agar selectivo para Pseudomonas base)...........................
Agar Chocolate............................................................................................
Agar Citrato de Simmons.............................................................................
Agar Columbia (Agar con colistina y cido nalidxico)
Agar Czapek Dox..
Agar Desoxicolato Citrato
Agar DNAsa
Agar Eosina Azul de Metileno (EMB).
Agar Endo...
Agar Extracto de Malta.
Agar Fenilalanina..
Agar Fosfatasa
Agar Gelatina..............
Agar Hierro Tres Azucares (TSI)
Agar Lactosa Rojo Fenol...............
Agar Levine (Agar de Levine con eosina y azul de metileno)
Agar Lisina Hierro (LIA)
Agar Littman (Agar con bilis de buey de Littman)
Agar Mac Conkey..
Agar Manitol Movilidad (M Mov.).
Agar Manitol Salado (AMS)...............
Agar de Middlebrook.
Agar Mosto.
Agar Mueller Hinton..
Agar Mycophil
Agar Nutritivo (AN)
Agar Packer (AP)..
Agar Papa Dextrosa................
Agar Plate Count (Agar peptona de casena glucosa extracto de
levadura)
Agar para cultivo de Microensayo.............
Agar para Enterobactereaceas (HEKTOEN)...............................................
Agar para Salmonella (NZ)
Agar Salmonella Shigella (ASS)..
Agar Sabouraud (Agar glucosado de Sabouraud).............
Agar Sangre.................................................................................................
Agar Selectivo para Candida (Agar base para Candida con Verde Bromo
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Cresol)....................
Agar Selectivo para Clostridios....................................................................
Agar para Dermatofitos (DTM)....................................................................
Agar Selectivo para Enterococos (Barnes)..................................................
Agar Selectivo para Estreptococos..............................................................
Agar Selectivo para Estafilococos N 110 (Chapman)................................
Agar Selectivo para Yersinia.......................................................................
Agar Sulfito..................................................................................................
Agar Thayer Martin...................................................................................
Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sucrosa (TCBS).....................................
Agar Verde Brillante (Kauffman) (Agar verde brillante rojo de fenol
lactosa)......................
Agar Violeta Cristal Rojo Neutro Bilis (VRVA)..............
Agar Xilosa Lisina y Desoxicolato (XLD)..................................................
Agua Peptonada
Agua Peptonada Tamponada................
Caldo Brila (Caldo verde brillante bilis lactosa).
Caldo Cianuro
Caldo de Enriquecimiento para Salmonella (Rappaport)
Caldo de Enriquecimiento para Vibrio cholerae..
Caldo Hajna para Gramnegativos.
Caldo Extracto de Malta...
Caldo Infusin Cerebro Corazn (BHI)..
Caldo Lactosado
Caldo Lauril Triptosa.
Caldo Malonato................
Caldo Manitol Salado
Caldo Mosto...
Caldo Nitrato..
Caldo Nutritivo
Caldo Peptonado...
Caldo Selenito
Caldo Tetrationato Base..
Caldo Tioglicolato (Medio Alternativo de la USP)
Caldo Triptosa..
Caldo Urea...............
Discos Bactrol (Discos de control y susceptibilidad antimicrobiana)
Medio Base para Fermentacin de Azcares y Alcoholes.
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Ramirez - Balqui
Medio de Loefler (suero sanguneo de Loefler)

Medio de Lowenstein Jensen para Micobacterias
Medio de Hugo y Leifson (Medio basal para oxidacin y fermentacin)..
Medio Gelatina Tioglicolato................
Medio Kliger Iron Agar (KIA) (Agar hierro dos azcares)...
Medios Microbiolgicos: Agar Micolgico, Agar Micolgico con bajo pH,
Caldo Micolgico y Caldo Micolgico con bajo pH
Medio para Movilidad Indol Orinitina..
Medio para Movilidad con Infusin de Gelatina
Medio para Decarboxilasa de Arginina Lisina Ornitina.
Medio para Prueba de Rojo de Metilo y Voges Proskauer (MR VP).
Medio SIM (Medio para sulfuro, Indol y Movilidad)................
Prueba de la Beta Galactosidasa (ONPG)
Prueba de la Citocromo Oxidasa.
ANEXOS:
Tabla 32: Diferenciacin de Enterobacteriaceaes mediante pruebas
bioqumicas
Tabla 33: Pruebas claves para la identificacin de las especies con mayor
significado clnico..
Tabla 34: Identificacin presuntiva de los estreptococos .
Tabla 35: Diferenciacin de los cocos grampositivos catalasa negativos..
Tabla 36: Caractersticas diferenciales de las especies Neisseria aisladas
frecuentemente..
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.
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Ramirez - Balqui
CAPITULO I
CONCEPTOS E HISTORIADE LA MICROBIOLOGIA.
Introduccin al concepto y contenido de la microbiologa.

Desarrollo histrico de la microbiologa.
Objeto de estudio de la microbiologa.
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Ramirez - Balqui
CONCEPTOS E HISTORIADE LA MICROBIOLOGIA
I.
INTRODUCCIN AL CONCEPTO Y CONTENIDO DE LA MICROBIOLOGA.

La Microbiologa se puede definir, sobre la base de su etimologa, como la ciencia que trata de
los seres vivos muy pequeos, concretamente de aquellos cuyo tamao se encuentra por
debajo del poder resolutivo del ojo humano. Esto hace que el objeto de esta disciplina venga
determinado por la metodologa apropiada para poner en evidencia, y poder estudiar, a los
microorganismos. Precisamente, el origen tardo de la Microbiologa con relacin a otras
ciencias biolgicas, y el reconocimiento de las mltiples actividades desplegadas por los
microorganismos, hay que atribuirlos a la carencia, durante mucho tiempo, de los instrumentos
y tcnicas pertinentes. Con la invencin del microscopio en el siglo XVII comienza el lento
despegue de una nueva rama del conocimiento, inexistente hasta entonces. Durante los
siguientes 150 aos su progreso se limit casi a una mera descripcin de tipos morfolgicos
microbianos, y a los primeros intentos taxonmicos, que buscaron su encuadramiento en el
marco de los "sistemas naturales" de los Reinos Animal y Vegetal.
El asentamiento de la Microbiologa como ciencia est estrechamente ligado a una serie de
controversias seculares (con sus numerosas filtraciones de la filosofa e incluso de la religin
de la poca), que se prolongaron hasta finales del siglo XIX. La resolucin de estas polmicas
dependi del desarrollo de una serie de estrategias experimentales fiables (esterilizacin,
cultivos puros, perfeccionamiento de las tcnicas microscpicas, etc.), que a su vez dieron
nacimiento a un cuerpo coherente de conocimientos que constituy el ncleo aglutinador de la
ciencia microbiolgica. El reconocimiento del origen microbiano de las fermentaciones, el
definitivo abandono de la idea de la generacin espontnea, y el triunfo de la teora germinal
de la enfermedad, representan las conquistas definitivas que dan carta de naturaleza a la joven
Microbiologa en el cambio de siglo.
Tras la Edad de Oro de la Bacteriologa, inaugurada por las grandes figuras de Pasteur y Koch,
la Microbiologa qued durante cierto tiempo como una disciplina descriptiva y aplicada,
estrechamente imbricada con la Medicina, y con un desarrollo paralelo al de la Qumica, que le
aportara varios avances metodolgicos fundamentales. Sin embargo, una corriente, en
principio minoritaria, dedicada a los estudios bsicos centrados con ciertas bacterias del suelo
poseedoras de capacidades metablicas especiales, incluyendo el descubrimiento de las que
afectan a la nutricin de las plantas, logr hacer ver la ubicuidad ecolgica y la extrema
diversidad fisiolgica de los microorganismos. De esta forma, se estableca una cabeza de
puente entre la Microbiologa y otras ciencias biolgicas, que lleg a su momento decisivo
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cuando se comprob la unidad qumica de todo el mundo vivo, y se demostr, con material y
tcnicas microbiolgicas que la molcula de la herencia era el ADN. Con ello se asiste a un
ntimo y frtil intercambio entre la Microbiologa, la Gentica y la Bioqumica, que se plasma en
el nacimiento de la Biologa Molecular, base del espectacular auge de la Biologa desde
mediados de este siglo.
Por otro lado, el "programa" inicial de la Microbiologa (bsqueda de agentes infectivos,
desentraamiento y aprovechamiento de los mecanismos de defensa del hospedador)
condujeron a la creacin de ciencias subsidiarias (Virologa, Inmunologa) que finalmente
adquirieron su mayora de edad y una acentuada autonoma.
Por ltimo, la vertiente aplicada que estuvo en la base de la creacin de la Microbiologa,
mantuvo su vigencia, enriquecida por continuos aportes de la investigacin bsica, y hoy
muestra una impresionante "hoja de servicios" y una no menos prometedora perspectiva de
expansin a mltiples campos de la actividad humana, desde el control de enfermedades
infecciosas (higiene, vacunacin, quimioterapia, antibioterapia) hasta el aprovechamiento
econmico racional de los mltiples procesos en los que se hallan implicados los
microorganismos (biotecnologas).
As pues, la sencilla definicin con la que se abri este apartado, esconda todo un cmulo de
contenidos y objetos de indagacin, todos emanados de una peculiar manera de aproximarse a
la porcin de realidad que la Microbiologa tiene encomendada. En las prximas pginas
ampliaremos y concretaremos el concepto al que hemos hecho rpida referencia.
Realizaremos un recorrido por su el desarrollo de la Microbiologa a lo largo de su historia, que
nos permitir una visin concreta de algunos de sus caractersticos modos de abordar su
objeto de estudio; finalmente, estaremos en disposicin de definir este ltimo, desglosado
como objeto material y formal.
II.
DESARROLLO HISTRICO DE LA MICROBIOLOGA.

La Microbiologa, considerada como una ciencia especializada, no aparece hasta finales del
siglo XIX, como consecuencia de la confluencia de una serie de progresos metodolgicos que
se haban empezado a incubar lentamente en los siglos anteriores, y que obligaron a una
revisin de ideas y prejuicios seculares sobre la dinmica del mundo vivo.
Siguiendo el ya clsico esquema de Collard (l976), podemos distinguir cuatro etapas o
periodos en el desarrollo de la Microbiologa:
a) Primer periodo, eminentemente especulativo, que se extiende desde la antigedad hasta
llegar a los primeros microscopistas.
b) Segundo periodo, de lenta acumulacin de observaciones (desde l675 aproximadamente
hasta la mitad del siglo XIX), que arranca con el descubrimiento de los microorganismos por
Leeuwenhoek (l675).
c) Tercer periodo, de cultivo de microorganismos, que llega hasta finales del siglo XIX, donde
las figuras de Pasteur y Koch encabezan el logro de cristalizar a la Microbiologa como
ciencia experimental bien asentada.
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Ramirez - Balqui
d) Cuarto periodo (desde principios del siglo XX hasta nuestros das), en el que los
microorganismos se estudian en toda su complejidad fisiolgica, bioqumica, gentica,
ecolgica, etc., y que supone un extraordinario crecimiento de la Microbiologa, el
surgimiento de disciplinas microbiolgicas especializadas (Virologa, Inmunologa, etc.), y la
estrecha imbricacin de las ciencias microbiolgicas en el marco general de las Ciencias
Biolgicas. A continuacin se realiza un breve recorrido histrico de la disciplina
microbiolgica, desglosando los perodos 3 y 4 en varios apartados temticos.
2.1. PERIODO PREVIO AL DESCUBRIMIENTO DEL MICROSCOPIO.
Si bien el descubrimiento efectivo de seres vivos no visibles a simple vista debi
aguardar hasta el ltimo tercio del siglo XVII, sus actividades son conocidas por la
humanidad desde muy antiguo, tanto las beneficiosas, representadas por las
fermentaciones implicadas en la produccin de bebidas alcohlicas, pan y productos
lcteos, como las perjudiciales, en forma de enfermedades infecciosas.
Diversas fuentes escritas de la antigedad griega y romana hablan de grmenes
invisibles que transmiten enfermedades contagiosas. Lucrecio (96-55 a.C.), en su "De
rerum natura" hace varias alusiones a "semillas de enfermedad". En el Renacimiento
europeo, Girolamo Frascatorius, en su libro "De contagione et contagionis" (1546) dice
que las enfermedades contagiosas se deben a "grmenes vivos" que pasan de diversas
maneras de un individuo a otro. Estos inicios de explicacin que renunciaban a invocar
causas sobrenaturales fueron probablemente catalizados por la introduccin en Europa
de la sfilis, una enfermedad en la que estaba clara la necesidad de contacto para su
contagio. Pero la "cosa" que se transmite en la enfermedad sigui siendo objeto de
conjeturas durante mucho tiempo.
2.2.
EL PERIODO DE LOS PRIMEROS MICROSCOPISTAS.

Ya en el siglo XIV, con la invencin de las primeras lentes para corregir la visin, surgi
una cierta curiosidad sobre su capacidad de aumentar el tamao aparente de los
objetos. En el siglo XVI surgieron algunas ideas sobre aspectos de la fsica ptica de las
lentes de aumento, pero no encontraron una aplicacin inmediata. Se dice que Galileo
hizo algunas observaciones "microscpicas" invirtiendo su telescopio a partir de lentes
montadas en un tubo, pero en cualquier caso est claro que no tuvieron ninguna
repercusin.
La primera referencia segura sobre el microscopio (1621) se debe a Constantijn
Huygens, quien relata que el ingls Cornelis Drebbel tena en su taller un instrumento
magnificador, que recibi el nombre de microscopium en l625, en la Accademia dei
Lincei, de Roma.
El descubrimiento de los microorganismos fue obra de un comerciante holands de
tejidos, Antonie van Leeuwenhoek (1632-1723), quien en su pasin por pulir y montar
lentes casi esfricas sobre placas de oro, plata o cobre, casi lleg a descuidar sus
negocios. Fabric unos cuatrocientos microscopios simples, con los que lleg a obtener
aumentos de casi 300 dimetros. En 1675 descubri que en una gota de agua de
estanque pululaba una asombrosa variedad de pequeas criaturas a las que denomin
"animlculos". En 1683 descubre las bacterias, por lo que se considera el "padre de la
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Microbiologa". Durante varias dcadas Leeuwenhoek fue comunicando sus

descubrimientos a la Royal Society de Londres a travs de una serie de cartas que se
difundieron, en traduccin inglesa, en las "Philosophical Transactions". Sus magnficas
dotes de observador le llevaron asimismo a describir protozoos (como Giardia, que
encontr en sus propias heces), la estructura estriada del msculo, la circulacin
capilar, a descubrir los espermatozoides y los glbulos rojos (por lo que tambin se le
considera el fundador de la Histologa animal), as como a detallar diversos aspectos
estructurales de las semillas y embriones de plantas. Leeuwenhoek se percat de la
abundancia y ubicuidad de sus animlculos, observndolos en vinagre, placa dental,
etc.
Aunque los descubrimientos de Leeuwenhoek despertaron inters al ser comunicados,
pocos intentaron o pudieron reproducirlos seriamente. Adems, la fabricacin de lentes
sencillas de gran aumento era difcil y el manejo de los microscopios simples, bastante
engorroso.
Simultneamente el ingls Robert Hooke (1635-1703) usando microscopios
compuestos, describi los hongos filamentosos (1667), y descubri la estructura celular
de las plantas (Micrographia, 1665), acuando el trmino clula. Pero el trabajo con
microscopios compuestos aplicados al estudio de los "animlculos" languideci durante
casi 200 aos, debido a sus imperfecciones pticas, hasta que hacia 1830 se
desarrollaron las lentes acromticas.
2.3.
EL DEBATE SOBRE LA GENERACIN ESPONTNEA.

La autoridad intelectual de Aristteles por un lado, y la autoridad moral representada por
la Biblia, por otro, junto con las opiniones de escritores clsicos como Galeno, Plinio y
Lucrecio, a los que se citaba como referencias incontrovertibles en la literatura mdica
en la Edad Media y Renacimiento, dieron carta de naturaleza a la idea de que algunos
seres vivos podan originarse a partir de materia inanimada, o bien a partir del aire o de
materiales en putrefaccin. Esta doctrina de la "generatio spontanea" o abiognesis, fue
puesta en entredicho por los experimentos de Francesco Redi (1621-1697), quien haba
acuado la expresin "Omne vivum ex ovo" (1668), tras comprobar que los insectos y
nematodos procedan de huevos puestos por animales adultos de su misma especie.
Demostr que si un trozo de carne era cubierto con gasa de forma que las moscas no
podan depositar all sus huevos, no aparecan "gusanos", que l correctamente
identific como fases larvarias del insecto. Los descubrimientos de Redi tuvieron el
efecto de desacreditar la teora de la generacin espontnea para los animales y
plantas, pero la reavivaron respecto de los recin descubiertos "animlculos", de modo
que aunque se acept la continuidad de la vida en cuanto a sus formas superiores, no
todos estaban dispuestos a admitir el ms amplio "Omne vivum ex vivo" aplicado a los
microorganismos.
Hubo que esperar un siglo ms hasta que una serie de naturalistas recomenzaran el
ataque a la teora preformacionista. Lazzaro Spallanzani (1729-1799) sostuvo una
disputa con J.T. Needham (1713-1781) en la que el primero demostr que los
"infusorios" no aparecan en muestras de maceraciones animales o vegetales sometidas
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Ramirez - Balqui
durante tiempo suficiente a ebullicin en frascos hermticamente cerrados, pero volvan

a aparecer si se practicaban agujeros en el recipiente. Sin embargo los
preformacionistas no se daban por vencidos; el mismo Needham, recogiendo una idea
ya expresada por Huygens, amigo de Leeuwenhoek, replic -con argumentos vitalistas
muy propios de la poca- que el calor haba destruido la "fuerza vegetativa" de las
infusiones y haba cambiado la "cualidad" del aire dentro de los frascos.
Durante el primer tercio del siglo XIX la doctrina de la arquegnesis o generacin
espontnea recibi un ltimo refuerzo antes de morir, debido por un lado a razones
extracientficas (el auge del concepto de transmutacin producido por la escuela de la
filosofa de la naturaleza), y por otro al descubrimiento del oxgeno y de su importancia
para la vida, de modo que los experimentos de Spallanzani se interpretaron como que al
calentarse las infusiones, el oxgeno del aire se destrua, y por lo tanto desapareca la
"fuerza vegetativa" que originaba la aparicin de microorganismos.
Theodor Schwann (1810-1882) present en 1836 un mtodo seguro para refutar la
teora abiognica: calent maceraciones en frascos a los que se haba eliminado
previamente el aire, pero no continu trabajando en esta lnea.
Para complicar ms las cosas, la publicacin de "Sobre el origen de las especies" por
Darwin en 1859, fue utilizada por algunos preformacionistas para apoyar sus
argumentos. El mismo Haeckel, en una fecha tan tarda como 1866, se mostraba
escptico ante las pruebas aportadas por Pasteur.
Fue, efectivamente Louis Pasteur (1822-1895) el que asest el golpe definitivo y zanj
la cuestin a favor de la teora biognica. En un informe a la Acadmie des Sciences de
Pars, en 1860 ("Expriences rlatives aux gnrations dites spontanes") y en escritos
posteriores comunica sus sencillos y elegantes experimentos: calent infusiones en
matraces de vidrio a los que estiraba lateralmente el cuello, hacindolo largo, estrecho y
sinuoso, y dejndolo sin cerrar, de modo que el contenido estuviera en contacto con el
aire; tras esta operacin demostr que el lquido no desarrollaba microorganismos, con
lo que elimin la posibilidad de que un "aire alterado" fuera la causa de la no aparicin
de grmenes. Antes bien, comprob que los grmenes del aire quedaban retenidos a su
paso por el largo cuello sinuoso, en las paredes del tubo, y no alcanzaban el interior del
recipiente donde se encontraba la infusin, quedando sta estril indefinidamente. Slo
si se rompa el cuello lateral o si se inclinaba el frasco de modo que pasara parte de
lquido a la porcin de cuello, los grmenes podan contaminar la infusin y originar un
rpido crecimiento.
En 1861 Pasteur publica otro informe en el que explica cmo se pueden capturar los
"cuerpos organizados" del aire con ayuda de un tubo provisto de un tapn de algodn
como filtro, y la manera de recuperarlos para su observacin microscpica. De esta
forma quedaba definitivamente aclarado el origen de los microorganismos, y se abra la
Edad de Oro del estudio cientfico de las formas de vida no observables a simple vista.
23
Los ltimos escpticos quedaron silenciados cuando en 1877 John Tyndall (1820-1893)
aplic su sistema de esterilizacin por calentamiento discontinuo (hoy conocida
precisamente como tindalizacin), que evidenci la existencia de formas microbianas de
reposo muy resistentes al calor, lo cual fue confirmado poco ms tarde por Ferdinand
Cohn al descubrir las esporas bacterianas.
2.4.
EL DEBATE SOBRE LOS FERMENTOS.

Un segundo factor contribuyente al nacimiento de la ciencia microbiolgica fue el
establecimiento de la relacin que une ciertas transformaciones qumicas que se dan en
las infusiones con el crecimiento de los grmenes en ellas existentes. Cagniard-Latour
en 1836, y Schwann y Ktzing en 1837 haban sugerido que las levaduras eran las
causantes de la fermentacin alcohlica por la que el azcar pasa a alcohol etlico y
dixido de carbono, pero se encontraron con la crtica adversa de los grandes qumicos
de la poca (Berzelius, Wohler y Liebig). Liebig, hacia 1840, haba realizado importantes
confirmaciones a la "teora mineral" sobre la nutricin de las plantas, enfrentndose a la
"teora del humus" sostenida por Thaer, asestando un golpe a las ideas vitalistas
heredadas de Leibniz. Puesto que se consideraba a las levaduras como plantas
microscpicas, se supona que los procesos de fermentacin y putrefaccin se deban a
fenmenos qumicos de descomposicin y muerte encuadrables en el marco de la
teora mineral de la fisiologa vegetal. Su convencimiento de que toda actividad vital se
poda explicar en trminos de qumica y fsica retras por algn tiempo la adscripcin de
estos fenmenos a clulas vivas.
Fue Pasteur (que, desde sus primeros estudios sobre las propiedades pticas de los
cristales de tartrato, vena suponiendo que estos compuestos tenan un orgen orgnico)
quien de nuevo intervino en el debate de forma decisiva. En 1857 demostr que los
agentes de la fermentacin lctica eran microorganismos, trabajando sobre un problema
que haba surgido entre los destiladores de Lille cuando en sus cubas la fermentacin
alcohlica se vio sustituida por una indeseable fermentacin lctica. Este fue el inicio de
una larga serie de estudios que habra de durar hasta 1876, en los que Pasteur
identific distintos microorganismos responsables de diferentes clases de procesos
fermentativos. As, en 1860 adscribe inequvocamente la fermentacin alcohlica a
ciertos tipos de levaduras, y en 1866, en sus tudes sur le vin resume sus hallazgos al
respecto, inaugurando la Microbiologa Aplicada, una de las primeras derivaciones
prcticas no empricas emanadas de la Biologa. A finales del siglo XIX eminentes
bilogos como Hansen, en Copenhague, y Beijerink, en Delft, desarrollaban su actividad
en industrias y destileras.
Trabajando sobre los agentes de la fermentacin butrica, Pasteur descubri la
presencia de microorganismos que se desarrollaban en ausencia de oxgeno, lo cual
desmenta la creencia de que todas las formas de vida necesitan aire para crecer.
Acu los trminos aerobiosis y anaerobiosis para denominar, respectivamente, a la
vida en presencia y en ausencia de oxgeno.
24
Ramirez - Balqui
Tras el descubrimiento de la anaerobiosis, el mismo Pasteur comprendi las distintas

implicaciones energticas subyacentes a la utilizacin de sustratos orgnicos en
presencia y en ausencia de oxgeno, demostrando que, en el segundo caso el
rendimiento (medido como crecimiento microbiano) era siempre menor, al no poder
realizarse la degradacin total de las correspondientes sustancias.
Una profundizacin en los fenmenos de fermentacin lleg cuando en 1897 Buchner
obtuvo, a partir de levaduras, una preparacin enzimtica (zimasa) que era capaz de
realizar la misma transformacin de "fermentacin" que las clulas vivas. Este
descubrimiento, que evocaba las propuestas de Berzelius y Liebig, supuso en realidad
la confluencia de los enfoques qumico y biolgico: las fermentaciones eran procesos
qumicos catalizados por enzimas presentes dentro de clulas vivas, que podan ser
estudiados extracelularmente. De esta forma, la Bioqumica, nacida como una rama de
la qumica fisiolgica, que se vena especializando en la enzimologa, encontr una
alianza fructfera y duradera con la joven Microbiologa.
2.5.
LOS AVANCES TCNICOS.

La doctrina del pleomorfismo, vigente durante buena parte del siglo XIX, mantena que
los microorganismos adoptaban formas y funciones cambiantes dependiendo de las
condiciones ambientales. A estas ideas se oponan frontalmente investigadores como
Koch, Pasteur y Cohn, que estaban convencidos de la especificidad y constancia
morfolgica y fisiolgica de cada tipo de microorganismo (monomorfismo). El
pleomorfismo haba surgido como una explicacin a la gran variedad de formas y
actividades que aparecan en un simple frasco de infusin, pero ya Pasteur, en sus
estudios sobre la fermentacin, se haba percatado de que los cultivos que aparecan
podan considerarse como una sucesin de distintas poblaciones de microorganismos
predominantes, que, a resultas de sus actividades, condicionaban la ulterior
composicin de la comunidad microbiana. La solucin definitiva a esta cuestin
dependa, de nuevo, de un desarrollo tcnico, que a su vez iba a suministrar una de las
herramientas caractersticas de la nueva ciencia: los mtodos de cultivo puro.
Los primeros cultivos puros fueron obtenidos por el miclogo Brefeld, quien logr aislar
esporas de hongos y cultivarlas sobre medios slidos a base de gelatina. Por su menor
tamao, este mtodo se haca inviable para las bacterias, por lo que se recurri a un
mtodo basado en diluciones: Lister, en 1878 realiz diluciones secuenciales de cultivos
mixtos, hasta lograr muestras en las que exista una sola clula. Pero la tcnica era
larga y tediosa y, adems, normalmente slo se lograban aislar clulas del tipo
bacteriano ms abundante en el cultivo original; sin embargo, el experimento sirvi para
confirmar la naturaleza "particulada" de los agentes de las fermentaciones.
Por aquella poca Koch buscaba con ahnco mtodos ms sencillos de cultivo puro,
indispensables para proseguir sus investigaciones sobre bacterias patgenas. Primero
(y quiz de forma un tanto casual) emple rodajas de patata como sustrato slido
nutritivo sobre el que se podan desarrollar colonias macroscpicas de bacterias que
presentaban morfologa caracterstica, que Koch interpret como resultantes del
crecimiento a partir de clulas individuales. Pero enseguida recurri a compactar el
25
tpico caldo de cultivo a partir de carne (diseado por Loeffler) aadindole gelatina
(1881). El medio slido as logrado era transparente, lo que permita visualizar
fcilmente los rasgos coloniales, y contena los nutrientes adecuados para el
crecimiento de una amplia gama de bacterias. stas eran inoculadas en la superficie del
medio con un hilo de platino pasado previamente por la llama, por la tcnica de siembra
en estra. Sin embargo, la gelatina presentaba los inconvenientes de ser atacada por
determinados microorganismos, y de tener un bajo punto de fusin; ambos problemas
se solventaron cuando en 1882 el mdico alemn Walter Hesse, siguiendo una
sugerencia de su mujer Fanny, introdujo el agar-agar (polisacrido extrado de algas
rojas) como nuevo agente solidificante. El trabajo de Koch ya citado tuvo la
trascendental consecuencia de derribar las ideas pleomorfistas, y supuso la primera
propuesta del concepto de especie dentro del mundo bacteriano. En 1887 Petri, un
ayudante de Koch, sustituy las engorrosas bandejas de vidrio cubiertas con campanas,
usadas hasta entonces para los cultivos slidos, por un sistema manejable de placas de
cristal planas, que se conoce como cajas de Petri.
El desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento fue una consecuencia de las
investigaciones llevadas a cabo por Beijerinck y Winogradsky entre 1888 y los primeros
aos del siglo XX, sobre bacterias implicadas en procesos biogeoqumicos y
poseedoras de caractersticas fisiolgicas distintivas (quimioauttrofas, fijadoras de
nitrgeno, etc.). Estos medios, donde se aplica a pequea escala el principio de
seleccin natural, se disean de forma que su composicin qumica definida favorezca
slo el crecimiento de ciertos tipos fisiolgicos de microorganismos, nicos capaces de
usar ciertos nutrientes del medio.
Otra importante aportacin a este "perodo de cultivo" dentro del desarrollo de la
Microbiologa surgi del uso de medios diferenciales, en los que se manifiesta algn
rasgo bioqumico o metablico, lo que contribuye a la identificacin microbiana. Fue
Wrtz quien, en 1892, introdujo el uso de indicadores de pH, incorporados en los
medios, lo cual permita revelar la produccin de acidificaciones por fermentacin en
ciertas bacterias.
Mientras tanto, en la ciudad de Jena se haba creado una atmsfera de progreso donde
confluan grandes naturalistas como Haeckel, Strassburger o Abb interaccionando con
una pujante editorial especializada en Biologa y Medicina (Gustav Fischer) y con una
poderosa industria ptica y qumica. Estas influencias recprocas se plasmaron en
numerosos proyectos que reflejaban la efervescencia de las ciencias naturales tras la
estela de Darwin (cfr. Jahn et al., 1985). Concretamente, la industria ptica de Abb y
Zeiss, que se mantena en conexin con la compaa vidriera Schott, pudo satisfacer la
necesidad de Koch de perfeccionar el microscopio compuesto, introduciendo lentes
acromticas y una iluminacin inferior provista de condensador. El mismo Abb
desarroll en 1878 el objetivo de inmersin en aceite. Por otro lado, la industria qumica
BASF, que por aquella poca se encontraba en pleno auge de patentes de nuevos
colorantes, suministr al laboratorio de Koch una serie de derivados de anilina que
tean las bacterias permitiendo su fcil visualizacin al microscopio en frotis de tejidos
infectados. En 1875 Carl Weigert ti bacterias con pirocarmn, un colorante que ya
26
Ramirez - Balqui
vena siendo usado desde haca unos aos en estudios zoolgicos. En aos sucesivos
se fueron introduciendo el azul de metileno (Koch, 1877), la fuchsina, y el violeta cristal.
En 1882-1883 Ziehl y Neelsen desarrollan su mtodo de cido-alcohol resistencia para
teir Mycobacterium tuberculosis. En 1884 el patlogo dans Christian Gram establece
una tincin de contraste que permite distinguir dos tipos bacterianos en funcin de sus
reaccin diferencial de tincin y que, como se vera mucho ms tarde, reflejaba la
existencia de dos grupos de bacterias con rasgos estructurales distintivos. En 1890
Loeffler logra visualizar flagelos bacterianos por medio de su tcnica de impregnacin
argntica. Como veremos ms adelante, la misma industria de colorantes alemana
previa a la primera guerra mundial fue decisiva tambin para los comienzos de la
quimioterapia.
Estas innovaciones tcnicas (mtodos de cultivo, microscopa y tinciones) fueron
fundamentales (junto con los sistemas de esterilizacin abordados en el anterior
apartado) para la consolidacin de la Microbiologa como ciencia, permitiendo eliminar
las grandes dosis de especulacin que hasta entonces haban predominado.
2.6.
EL PAPEL DE LOS MICROORGANISMOS EN LAS ENFERMEDADES.

Durante el siglo XIX la atencin de muchos naturalistas se haba dirigido hacia las
diversas formas de animales y plantas que vivan como parsitos de otros organismos.
Este inters se redobl tras la publicacin de los libros de Darwin, estudindose las
numerosas adaptaciones evolutivas que los distintos parsitos haban adquirido en su
peculiar estilo de vida. Sin embargo, la adjudicacin de propiedades de parsitos a los
microorganismos vino del campo mdico y veterinario, al revalorizarse las ideas sobre el
origen germinal de las enfermedades infecciosas.
En 1835 Agostino Bassi (1773-1856) demostr que cierta enfermedad del gusano de
seda (mal di segno), que haba hecho su aparicin en Lombarda, se deba a un hongo
(Botrytis bassiana). Cuatro aos ms tarde J.L. Schnlein descubri la asociacin de un
hongo con una enfermedad humana de la piel. En 1840 Henle, de la escuela fisiolgica
de Johannes Mller, plante la teora de que las enfermedades infecciosas estn
causadas por seres vivos invisibles, pero de nuevo la confirmacin de estas ideas tuvo
que esperar a que la intervencin de Pasteur demostrara la existencia de
microorganismos especficos responsables de enfermedades.
Hacia mediados del siglo XIX otra enfermedad infecciosa (pebrina) comenz a
diseminarse por los criaderos de gusano de seda de toda Europa, alcanzando
finalmente a China y Japn. A instancias de su maestro Jean Baptiste Dumas, Pasteur
acept el reto de viajar a la Provenza para investigar esta enfermedad que estaba
dejando en la ruina a los industriales sederos, a pesar de que nunca hasta entonces se
haba enfrentado con un problema de patologa. Es ms que probable que Pasteur viera
aqu la oportunidad de confirmar si sus estudios previos sobre las fermentaciones
podan tener una extensin hacia los procesos fisiolgicos del hombre y de los
animales. Es sorprendente que, al principio no se mostrara dispuesto a aceptar la idea
de que la pebrina fuera una enfermedad ocasionada por un agente extrao, creyendo
durante los dos primeros aos que se trataba de alteraciones meramente fisiolgicas.
27
Tras una serie de tanteos, y en medio de una intensa actividad intelectual que le
obligaba a repasar continuamente los experimentos y las conclusiones extradas,
inmerso en el drama personal de la muerte de su padre y de dos de sus hijas en un
corto lapso de tiempo, Pasteur llega finalmente, en 1869, a identificar al protozoo
Nosema bombycis como el responsable de la epidemia, y por medio de una serie de
medidas de control, sta comienza a remitir de modo espectacular.
La intervencin de bacterias como agentes especficos en la produccin de
enfermedades fue descubierta a raz de una serie de investigaciones sobre el carbunco
o ntrax, enfermedad que afecta a ganado y que puede transmitirse al hombre. C.
Davaine, entre 1863 y 1868, encontr que en la sangre de vacas afectadas aparecan
grandes cantidades de microorganismos a los que llam bacteridios; adems, logr
inducir la enfermedad experimentalmente en vacas sanas, inoculndoles muestras de
sangre infectada. En 1872 el mdico alemn C.J. Eberth consigui aislar los bacilos
filtrando sangre de animales carbuncosos. Pero fue Robert Koch (1843-1910), que
haba sido alumno de Henle, quien con su reciente tcnica de cultivo puro logr, en
1876, el primer aislamiento y propagacin in vitro del bacilo del ntrax (Bacillus
anthracis), consiguiendo las primeras microfotografas sobre preparaciones secas,
fijadas y teidas con azul de metileno. Ms tarde (1881), Koch y sus colaboradores
confirmaron que las esporas son formas diferenciadas a partir de los bacilos, y ms
resistentes que stos a una variedad de agentes. Pero ms fundamental fue su
demostracin de que la enfermedad se poda transmitir sucesivamente a ratones sanos
inoculndoles bacilos en cultivo puro, obtenidos tras varias transferencias en medios
lquidos.
Este tipo de estrategias para demostrar el origen bacteriano de una enfermedad fue
llevado a una ulterior perfeccin en 1882, con la publicacin de "Die thiologie der
Tuberkulose", donde se comunica por primera vez la aplicacin de los criterios que
Henle haba postulado en 1840. Estos criterios, que hoy van asociados al nombre de
Koch, son los siguientes:
a) El microorganismo debe de estar presente en todos los individuos enfermos.
b) El microorganismo debe poder aislarse del hospedador y ser crecido en cultivo puro.
c) La inoculacin del microorganismo crecido en cultivo puro a animales sanos debe
provocar la aparicin de sntomas especficos de la enfermedad en cuestin.
d) El microorganismo debe poder ser reaislado del hospedador infectado de forma
experimental.
Fue asimismo Koch quien demostr el principio de especificidad biolgica del agente
infeccioso: cada enfermedad infecciosa especfica est causada por un tipo de bacteria
diferente. Estos trabajos de Koch abren definitivamente el campo de la Microbiologa
Mdica sobre firmes bases cientficas.
Durante las dos dcadas siguientes la Microbiologa experiment una autntica edad de
oro, en la que se aislaron y caracterizaron muchas bacterias patgenas. La Alemania
del Reich, que a la sazn se haba convertido en una potencia poltica y militar, se
28
Ramirez - Balqui
decidi a apoyar la continuidad de los trabajos del equipo de Koch, dada su enorme
importancia social y econmica, creando un Instituto de investigacin, siendo Koch su
director en el Departamento de Salud. De esta forma, en la Escuela Alemana se
aislaron los agentes productores del clera asitico (Koch, 1883), de la difteria (Loeffler,
1884), del ttanos (Nicolaier, 1885 y Kitasato, 1889), de la neumona (Fraenkel, 1886),
de la meningitis (Weichselbaun, 1887), de la peste (Yersin, 1894), de la sfilis
(Schaudinn y Hoffman, 1905), etc. Igualmente se pudieron desentraar los ciclos
infectivos de agentes de enfermedades tropicales no bacterianas que la potencia
colonial se encontr en ultramar: malaria (Schaudinn, 1901-1903), enfermedad del
sueo (Koch, 1906), peste vacuna africana (debida al ingls Bruce, 1895-1897), etc.
2.7.
DESARROLLO DE LA ASEPSIA, QUIMIOTERAPIA Y NTIBIOTERAPIA.

Los avances de las tcnicas quirrgicas hacia mediados del siglo XIX, impulsados por la
introduccin de la anestesia, trajeron consigo una gran incidencia de complicaciones
post-operatorias derivadas de infecciones. Un joven mdico britnico, Joseph Lister
(1827-1912), que haba ledo atentamente los trabajos de Pasteur, y que crea que
estas infecciones se deban a grmenes presentes en el aire, comprob que la
aplicacin de compuestos como el fenol o el bicloruro de mercurio en el lavado del
instrumental quirrgico, de las manos y de las heridas, disminua notablemente la
frecuencia de infecciones post-quirrgicas y puerperales.
Ms tarde, Paul Ehrlich (1854-1919), que haba venido empleando distintas sustancias
para teir clulas y microorganismos, y que conoca bien el efecto de tincin selectiva
de bacterias por ciertos colorantes que dejaban, en cambio, incoloras a clulas
animales, concibi la posibilidad de que algunos de los compuestos de sntesis que la
industria qumica estaba produciendo pudieran actuar como "balas mgicas" que fueran
txicas para las bacterias pero inocuas para el hospedador. Ehrlich concibi un
programa racional de sntesis de sustancias nuevas seguido de ensayo de stas en
infecciones experimentales. Trabajando en el laboratorio de Koch, prob
sistemticamente derivados del atoxilo (un compuesto que ya Thompson, en 1905,
haba mostrado como eficaz contra la tripanosomiasis), y en 1909 inform de que el
compuesto 606 (salvarsn) era efectivo contra la sfilis. Aunque el salvarsn presentaba
algunos efectos colaterales, fue durante mucho tiempo el nico agente disponible contra
enfermedades producidas por espiroquetas, y sirvi para ilustrar brillantemente la
validez del enfoque de la llamada quimioterapia (trmino acuado por el mismo Ehrlich),
de modo que encauz toda la investigacin posterior.
En 1927 Gerhard Domagk, en conexin con la poderosa compaa qumica I.G.
Farbenindustrie, inici un ambicioso proyecto de bsqueda de nuevos agentes
quimioterpicos, siguiendo el esquema de Ehrlich; en 1932-1935 descubre la accin del
rojo de prontosilo frente a neumococos hemolticos dentro del hospedador, pero seala
que esta droga es inactiva sobre bacterias creciendo in vitro. La explicacin la
suministra el matrimonio Trfoul, del Instituto Pasteur, al descubrir que la actividad
antibacteriana depende de la conversin por el hospedador en sulfanilamida. El
mecanismo de accin de las sulfamidas (inhibicin competitiva con el cido paraaminobenzoico) fue dilucidado por el estadounidense Donald D. Woods. Las
29
investigaciones de ste encaminaron a la industria farmacutica hacia la sntesis de

anlogos de metabolitos esenciales, introduciendo un enfoque ms racional frente a la
poca anterior, ms emprica.
En 1874, el mdico ingls W. Roberts haba descrito las propiedades antibiticas de
ciertos cultivos de hongos (Penicillium glaucum) contra las bacterias, e introdujo en
Microbiologa el concepto de antagonismo. Otros investigadores de finales del siglo XIX
realizaron observaciones similares, pero fue Fleming quien, en 1929, logr expresar
ideas claras sobre el tema, al atribuir a una sustancia qumica concreta (la penicilina) la
accin inhibidora sobre bacterias producida por el hongo Penicillium notatum. Fleming
desarroll un ensayo crudo para determinar la potencia de la sustancia en sus filtrados,
pudiendo seguir su produccin a lo largo del tiempo de cultivo, y mostrando que no
todas las especies bacterianas eran igualmente sensibles a la penicilina. Las
dificultades tcnicas para su extraccin, junto al hecho de que el inters de la poca an
estaba centrado sobre las sulfamidas, impidieron una pronta purificacin de la
penicilina, que no lleg hasta los trabajos de Chain y Florey (1940), comprobndose
entonces su gran efectividad contra infecciones bacterianas, sobre todo de Grampositivas, y la ausencia de efectos txicos para el hospedador.
Inmediatamente comenz una bsqueda sistemtica de microorganismos del suelo que
mostraran actividades antibiticas. En 1944 A. Schatz y S. Waksman descubren la
estreptomicina, producida por Streptomyces griseus, siendo el primer ejemplo de
antibitico de amplio espectro. Los diez aos que siguieron al trmino de la segundad
guerra mundial vieron la descripcin de 96 antibiticos distintos producidos por 57
especies de microorganismos, principalmente Actinomicetos.
En la dcada de los 60 se abri una nueva fase en la era de los antibiticos al
obtenerse compuestos semisintticos por modificacin qumica de antibiticos
naturales, palindose los problemas de resistencia bacteriana a drogas que haban
empezado a aparecer, disminuyndose en muchos casos los efectos secundarios, y
amplindose el espectro de accin.
Aparte de la revolucin que supusieron en el campo de la aplicacin clnica, los
antibiticos ha permitido notables avances en el desentraamiento de determinados
aspectos de arquitectura y funcin moleculares de las clulas susceptibles (paredes
celulares microbianas, ribosomas, sntesis proteica, etc.).
2.8.
30
AUGE DE LA MICROBIOLOGA GENERAL.

Gran parte de los avances en Microbiologa descritos hasta ahora se debieron a la
necesidad de resolver problemas prcticos. Pero hacia finales del siglo XIX una serie de
investigadores -algunos de ellos procedentes de reas ms clsicas de la Historia
Natural- desarrollaron importantes estudios bsicos que fueron revelando una enorme
variedad de microorganismos y sus actividades metablicas, as como su papel crucial
en ciclos biogeoqumicos, sus relaciones con procesos de nutricin vegetal, etc.
Ramirez - Balqui
El descubrimiento de la quimioautotrofa, obra del gran microbilogo ruso Sergei

Winogradsky (1856-1953), oblig a revisar los conceptos previos, procedentes de la
Fisiologa Vegetal, de que el crecimiento autotrfico dependa de la presencia de
clorofila. Winogradsky haba comenzado investigando las bacterias del hierro
descubiertas por Cohn en 1875, observando que podan crecer en medios minerales,
por lo que supuso que obtenan su energa de la oxidacin de sales ferrosas a frricas
(1888). En 1889, combinando tcnicas de observacin secuencial de cultivos
microscpicos con ensayos microqumicos sobre bacterias del azufre (Beggiatoa,
Thiothrix), infiri que estos microorganismos oxidaban sulfuro de hidrgeno hasta azufre
elemental (acumulando ste como grnulos), y luego hasta cido sulfrico, obteniendo
de este modo su energa. Estas observaciones pueden haber sido el arranque del
concepto de litotrofa. Pero el descubrimiento de la quimioautotrofa lleg cuando al ao
siguiente Winogradsky y Omeliansky pasaron a estudiar las bacterias nitrificantes,
demostrando de manera clara que la energa obtenida de la oxidacin del amonio o del
nitrito era usada para fijar CO2 (1889-1890). Ms tarde el mismo Winogradsky extendi
la demostracin a cultivos puros en los que el agente solidificante de los medios era el
gel de slice. La explicacin del proceso de oxidacin de los compuestos de azufre no
lleg hasta los estudios de Dangeard (1911) y Kiel (1912). Nuevas capacidades
metablicas fueron reveladas al estudiar los procesos respiratorios de las bacterias que
oxidan hidrgeno o metano (Shngen, 1906).
El qumico Berthelot haba sealado (1885) que los microorganismos del suelo podan
incorporar nitrgeno molecular directamente del aire. Fue igualmente Winogradsky el
primero en aislar una bacteria capaz de fijar nitrgeno atmosfrico (Clostridium
pasteurianum) y en explicar el ciclo del nitrgeno en la naturaleza (1890), siendo el
holands Martinus Beijerinck (1851-1931) el descubridor de Azotobacter como bacteria
aerobia fijadora de vida libre (1901). Ms tarde Beijerinck demostr por mtodos
qumicos que, en efecto, Azotobacter incorpora nitrgeno de la atmsfera mientras
crece (1908). La importancia de la fijacin de nitrgeno para la nutricin vegetal lleg
con los estudios sobre bacterias formadoras de ndulos en las races de las
leguminosas. Ya los experimentos cuantitativos sobre plantas creciendo en recipientes,
realizados por Boussingault a mediados del siglo XIX, haban indicado que las
leguminosas asimilaban nitrgeno de la atmsfera. En 1866 Voronin descubri las
bacterias de los ndulos radicales de esta familia de plantas. Frank, en 1879, demostr
que los ndulos parecan inducirse por las mismas bacterias albergadas en ellos, y
Ward (1887) us bacterias procedentes de ndulos machacados para inocular semillas,
logrando la produccin de ndulos en suelo estril, y describiendo en un bello trabajo el
proceso de infeccin, con su produccin de "hifas" (cordn de infeccin). Tras la
introduccin del concepto de simbiosis por De Bary, en 1878, fue Schindler (1884) el
primero en describir los ndulos radicales como resultado de una simbiosis entre planta
y bacterias. Los trabajos de Hermann Hellriegel (1831-1895) y de su colaborador
Hermann Willfahrt (1853-1904), que trabajaban en la Estacin Experimental de
Bernburg, comunicados en primer lugar en un congreso en Berln, en 1886, y
publicados en un artculo ejemplar en 1888, asociaron la fertilidad nitrogenada natural
de las leguminosas con la presencia de sus ndulos radicales, sealando que estos
ndulos se inducan por microorganismos especficos; de este modo lograron una
31
brillante sntesis de las observaciones microbiolgicas y qumicas. El mismo ao de

1888 Beijerinck logr el cultivo puro in vitro de las bacterias nodulares (a las que bautiz
como Bacillus radicicola), observando que no reducan nitrgeno en vida libre; ms
tarde (1890) aport la prueba definitiva de que las bacterias aisladas eran capaces de
nodular especficamente ciertas especies de leguminosas, adquirindose de esta forma
la facultad de fijar nitrgeno en su asociacin con la raz de la planta. Irnicamente el
nombre definitivo para las bacterias de los ndulos de leguminosas (Rhizobium) fue
propuesto por Frank, quien durante mucho tiempo se haba negado a reconocer los
resultados de Hellriegel y Willfahrt, y que haba oscilado en sus opiniones, desde
suponer que la fijacin de nitrgeno era un rasgo general de las plantas, hasta creer
que las estructuras nodulares observadas a microcopio (bacteroides) eran grnulos de
reserva (incluidas las que l mismo observ en plantas no leguminosas de los gneros
Alnus y Eleagnus, originadas por una bacteria bautizada en su honor -Frankia); incluso
cuando se convenci de que los simbiontes eran bacterias (y no hongos o
mixomicetes), pensaba que stas slo estimulaban a que las plantas fijaran nitrgeno
en sus hojas; su "conversin" (y an as incompleta y con reticencias) no lleg hasta
1892. El aislamiento de los bacteroides intranodulares (Prazmowski, 1890), y la relacin
entre su formacin y la fijacin de nitrgeno (Nobbe y Hiltner, 1893) complet esta
primera oleada de investigacin sobre este tema que tanta trascendencia presentaba
para la Agronoma. Estos estudios estn en la base de todos los ulteriores trabajos de
Microbiologa Agrcola, de modo que esta especialidad fue incorporada tempranamente
a los laboratorios cientficos y estaciones experimentales.
Las obras trascendentales de Winogradsky y Beijerinck abrieron un nuevo horizonte
para el estudio de la diversidad microbiana. La escuela de Beijerinck, en la Universidad
Tcnica de Delft, fue continuada por A.J. Kluyver y C.B. van Niel, siendo este ltimo el
"padre" de la escuela norteamericana desde su establecimiento en California, ya que
form a figuras tan importantes como R.Y. Stanier, R.E. Hungate o M. Doudoroff. La
escuela holandesa fundada por Beijerinck tuvo asimismo otra fructfera "colonia" en la
ciudad alemana de Konstanz, donde N. Pfennig continu el trabajo emprendido junto a
van Niel en Delft. Todos estos autores, y sus colaboradores, fueron realizando
contribuciones esenciales sobre una amplia diversidad de bacterias, descubriendo la
variedad de las bacterias fotosintticas, los tipos de organismos litotrficos, y
profundizando en multitud de aspectos estructurales y fisiolgicos de las bacterias
recin descubiertas. Como dice T.D. Brock en una recensin de Kluyver (1961) "los
hombres de la escuela de Delft de Microbiologa General fueron pioneros en una poca
en la que la mayora de los investigadores estaban demasiado fascinados por
problemas aplicados en medicina, agricultura o industria, como para preocuparse por
microorganismos quimiosintticos o fotosintticos, o por aquellos que muestran
fermentaciones inusuales...". Pero, como en tantas otras ocasiones, este enfoque de
ciencia bsica ha sido extraordinariamente frtil, y aparte de la profundizacin en la
unidad y diversidad de la vida ha dado origen a penetrantes percepciones en multitud
de problemas planteados, tarde o temprano, a las ciencias biolgicas.
2.9.
32
DESARROLLO DE LA INMUNOLOGA.
Ramirez - Balqui
La inmunologa es, en la actualidad, una ciencia autnoma y madura, pero sus orgenes
han estado estrechamente ligados a la Microbiologa. Su objeto consiste en el estudio
de las respuestas de defensa que han desarrollado los animales frente a la invasin por
microorganismos o partculas extraos, aunque su inters se ha volcado especialmente
sobre aquellos mecanismos altamente evolucionados e integrados, dotados de
especificidad y de memoria, frente a agentes reconocidos por el cuerpo como nopropios, as como de su neutralizacin y degradacin.
Como tantas otras ciencias, la Inmunologa presenta un prolongado perodo precientfico, de observaciones y aproximaciones meramente empricas. La resistencia a
ulteriores ataques de una enfermedad infecciosa fue ya recogida en escritos de la
antigedad; el historiador griego Tucdides (464-404 a.C.) narra que en una epidemia
acaecida durante la guerra del Peloponeso, los enfermos eran atendidos solo por
aquellos que haban sobrevivido previamente a la enfermedad, en la seguridad de que
stos no volveran a ser contagiados. Igualmente, en la antigua China se haba
observado que las personas que en su niez haban padecido la viruela no la adquiran
ms adelante en su vida. Los mismos chinos, en el siglo XI a. C., fueron los primeros en
intentar una aplicacin de estas observaciones que indicaban la induccin de un estado
protector por medio de una forma suave de la enfermedad: la inhalacin de polvo de
escaras de viruela provocaba un ataque suave que confera resistencia ante infecciones
posteriores. Una modificacin fue introducida en Occidente en el siglo XVIII por Pylarini
y Timoni, y fue popularizada en Gran Bretaa por Lady Mary Wortley Montagu, esposa
del embajador ingls en Constantinopla, tras una serie inicial de pruebas sobre
"voluntarios" (prisioneros). Sin embargo, este tipo de prcticas no llegaron a arraigar
ampliamente, ya que no estaban exentas de riesgos, entre los cuales figuraba la
posibilidad de transmisin de otras enfermedades.
El primer acercamiento a la inmunizacin con criterios racionales fue realizado por el
mdico ingls Edward Jenner (1749-1823), tras su constatacin de que los vaqueros
que haban adquirido la viruela vacunal (una forma benigna de enfermedad que slo
produca pstulas en las manos) no eran atacados por la grave y deformante viruela
humana. En mayo de 1796 inocul a un nio fluido procedente de las pstulas
vacunales de Sarah Nelmes; semanas despus el nio fue inyectado con pus de una
pstula de un enfermo de viruela, comprobando que no quedaba afectado por la
enfermedad. Jenner public sus resultados en 1798 ("An enquiry into the causes and
effects of the variolae vaccinae..."), pronosticando que la aplicacin de su mtodo podra
llegar a erradicar la viruela. Jenner fue el primero en recalcar la importancia de realizar
estudios clnicos de seguimiento de los pacientes inmunizados, consciente de la
necesidad de contar con controles fiables.
La falta de conocimiento, en aquella poca, de las bases microbiolgicas de las
enfermedades infecciosas retras en casi un siglo la continuacin de los estudios de
Jenner, aunque ciertos autores, como Turenne, en su libro "La syphilization" (1878)
lograron articular propuestas tericas de cierto inters.
33
El primer abordaje plenamente cientfico de problemas inmunolgicos se debi, de

nuevo, a Pasteur. Estudiando la bacteria responsable del clera aviar (ms tarde
conocida como Pasteurella aviseptica), observ (1880) que la inoculacin en gallinas de
cultivos viejos, poco virulentos, las protega de contraer la enfermedad cuando
posteriormente eran inyectadas con cultivos normales virulentos. De esta forma se
obtuvo la primera vacuna a base de microorganismos atenuados. Fue precisamente
Pasteur quien dio carta de naturaleza al trmino vacuna, en honor del trabajo pionero de
Jenner. En los aos siguientes Pasteur abord la inmunizacin artificial para otras
enfermedades; concretamente, estableci de forma clara que cultivos de Bacillus
anthracis atenuados por incubacin a 45C conferan inmunidad a ovejas expuestas a
contagio por carbunco. Una famosa demostracin pblica de la bondad del mtodo de
Pasteur tuvo lugar en Pouilly le Fort, el dos de junio de 1881, cuando ante un gento
expectante se pudo comprobar la muerte del grupo control de ovejas y vacas no
inoculadas, frente a la supervivencia de los animales vacunados. Aos despus,
abordara la inmunizacin contra la rabia, enfermedad de la que se desconoca el
agente causal. Pasteur observ que ste perda virulencia cuando se mantenan al aire
durante cierto tiempo extractos medulares de animales infectados, por lo que dichos
extractos se podan emplear eficazmente como vacunas. Realiz la primera vacunacin
antirrbica en humanos el 6 de julio de 1885, sobre el nio Joseph Meister, que haba
sido mordido gravemente por un perro rabioso. A este caso siguieron otros muchos, lo
que vali a Pasteur reconocimiento universal y supuso el apoyo definitivo a su mtodo
de inmunizacin, que abra perspectivas prometedoras de profilaxis ante muchas
enfermedades. Estos logros determinaron, en buena medida, la creacin del Instituto
Pasteur, que muy pronto reuni a un selecto grupo de cientficos, que enfocaran sus
esfuerzos en diversos aspectos de las inmunizaciones y de sus bases biolgicas. A su
vez, los norteamericanos Salmon y Smith (1886) perfeccionaron los mtodos
serologicos de Pasteur, lo que les permiti producir y conservar ms fcilmente sueros
tipificados contra la peste porcina.
A finales del siglo XIX existan dos teoras opuestas sobre los fundamentos biolgicos
de las respuestas inmunes. Por un lado, el zologo ruso Ilya Ilich Mechnikov (18451916), que haba realizado observaciones sobre la fagocitosis en estrellas de mar y
pulgas de agua, estableci, a partir de 1883, su "Teora de los fagocitos", tras estudiar
fenmenos de englobamiento de partculas extraas por los leucocitos de conejo y de
humanos. Inform que existan fenmenos de eliminacin de agentes patgenos por
medio de "clulas devoradoras" (fagocitos) que actuaban en animales vacunados contra
el carbunco, y explic la inmunizacin como una "habituacin" del hospedador a la
fagocitosis. Ms tarde, ya integrado en el Instituto Pasteur, propugn la idea de que los
fagocitos segregan enzimas especficos, anlogos a los "fermentos" digestivos (1900).
Esta teora de los fagocitos constituy el ncleo de la teora de la inmunidad celular, de
modo que la fagocitosis se consideraba como la base principal del sistema de defensa
inmune del organismo.
Por otro lado, la escuela alemana de Koch haca hincapi en la importancia de los
mecanisnos humorales. Emil von Behring (1854-1917) y Shibasaburo Kitasato (18561931), a resultas de sus trabajos sobre las toxinas del ttanos y de la difteria,
34
Ramirez - Balqui
observaron que el cuerpo produce "antitoxinas" (ms tarde conocidas como

anticuerpos) que tendan a neutralizar las toxinas de forma especfica, y evidenciaron
que el suero que contiene antitoxinas es capaz de proteger a animales expuestos a una
dosis letal de la toxina correspondiente (1890). La intervencin de Ehrlich permiti
obtener sueros de caballo con niveles de anticuerpos suficientemente altos como para
conferir una proteccin eficaz, e igualmente se pudo disponer de un ensayo para
cuantificar la "antitoxina" presente en suero. Ehrlich dirigi desde 1896 el Instituto
Estatal para la Investigacin y Comprobacin de Sueros, en Steglitz, cerca de Berln, y,
a partir de 1899, estuvo al frente del mejor equipado Instituto de Terapia Experimental,
en Frankfurt. Durante este ltimo periodo de su vida, Ehrlich produce una impresionante
obra cientfica, en la que va ahondando en la comprensin de la inmunidad humoral. En
1900 da a luz su "Teora de las cadenas laterales", en la que formula una explicacin de
la formacin y especificidad de los anticuerpos, estableciendo una base qumica para la
interaccin de stos con los antgenos. Por su lado, R. Kraus visualiza por primera vez,
en 1897, una reaccin antgeno-anticuerpo, al observar el enturbiamiento de un filtrado
bacteriano al mezclarlo con un suero inmune especfico (Antisuero). En 1898 Jules
Bordet (1870-1961) descubre otro componente srico relacionado con la respuesta
inmunitaria, al que bautiza como "alexina", caracterizado, frente al anticuerpo, por su
termolabilidad e inespecificidad. (Ms tarde se impondra el nombre de complemento,
propuesto por Ehrlich). El mismo Bordet desarroll, en 1901, el primer sistema
diagnstico para la deteccin de anticuerpos, basado en la fijacin del complemento, y
que inici una larga andadura, que llega a nuestros das.
La conciliacin de las dos teoras se debi a Almorth Wrigth y Stewart R. Douglas,
quienes en 1904 descubren las opsoninas, anticuerpos presentes en los sueros de
animales inmunizados y que, tras unirse a la superficie bacteriana, incrementan la
capacidad fagoctica de los leucocitos.
El rea de la inmunopatologa inicia su andadura con la descripcin del fenmeno de
anafilaxia producido por introduccin en un animal de un suero de una especie distinta
(Portier y Richet, 1902; Arthus, 1903), lo que a su vez abrira la posibilidad de mtodos
de serodiagnstico, con aplicaciones mltiples en Medicina, Zoologa, y otras ciencias
biolgicas. En 1905 Pirquet sugiere que la enfermedad del suero (un fenmemo de
hipersensibilidad) tiene relacin directa con la produccin de anticuerpos contra el suero
inyectado, introduciendo el trmino de alergia para referirse a la reactividad
inmunolgica alterada.
La inmunoqumica cobra un gran impulso en las primeras dcadas del siglo XX con los
trabajos de Karl Landsteiner (1868-1943). Su primera contribucin de importancia haba
sido la descripcin, mediante reacciones de aglutinacin, del sistema de antgenos
naturales (ABC0) de los eritrocitos humanos (1901-1902), completada (en colaboracin
con Von Dungern y Hirzfeld), con las subdivisiones del grupo A y el estudio de su
transmisin hereditaria. Estos trabajos sirvieron de estmulo para avanzar en el
desentraamiento de la especificidad qumica de los antgenos que determinan la
formacin de anticuerpos. Landsteiner estudi sistemticamente las caractersticas de
inmunogenicidad y especificidad de reaccin de antgenos con anticuerpos, valindose
35
de la modificacin qumica de antgenos, denominando haptenos a aquellos grupos

qumicos que por s mismos no desencadenan formacin de anticuerpos, pero s lo
hacen tras ser conjugados a protenas portadoras.
La cuestin de las reacciones antgeno-anticuerpo se convirti en otra polmica entre
escuelas hasta finales de los aos 20. Mientras Ehrlich y sus seguidores mantenan que
estas reacciones tienen una base puramente qumica, Bordet y sus discpulos las
explicaban como fenmenos fsicos de reacciones entre coloides. La resolucin del
debate debi aguardar hasta finales de los aos 30, al incorporarse avances tcnicos
como la electroforesis, la cromatografa en papel, la ultracentrifugacin y el microscopio
electrnico. Heidelberg y Kendall (1936) purificaron anticuerpos a partir de sueros por
disociacin de precipitados. Tiselius (1939) demostr que los anticuerpos constituyen la
fraccin gamma-globulnica del suero. Veinte aos despus R.R. Porter y G.M. Edelman
establecen la estructura de las inmunoglobulinas. Durante este lapso de tiempo se
descubre que la sntesis de anticuerpos ocurre en las clulas plasmticas, aunque stas
no son puestas en relacin an con los linfocitos; durante muchos aos se sigui
creyendo que los linfocitos eran clulas pasivas, sin funcin inmune. Por aquella poca
se describe, tambin, la diversidad de inmunoglobulinas, llegndose al establecimiento
de una nomenclatura. Enseguida comienza la era de los mltiples experimentos sobre
timectoma en ratones neonatos y sobre bursectoma en aves, as como los de
reconstitucin de animales irradiados, con timocitos y clulas de la medula sea, y que
permiten afirmar el papel esencial de los linfocitos, encuadrarlos en tipos funcionales T y
B, y relacionarlos con las respuestas inmunes celular y humoral, respectivamente.
Una importante faceta de la inmunologa de la primera mitad del siglo XX fue la
obtencin de vacunas. Se lograron toxoides inmunognicos a partir de toxinas
bacterianas, en muchos casos por tratamiento con formol: toxoide tetnico (Eisler y
Lowenstein, 1915) y toxoide diftrico (Glenny, 1921). En 1922 se desarrolla la vacuna
BCG contra la tuberculosis, haciendo uso de una cepa atenuada de Mycobacterium
tuberculosis, el bacilo de Calmette-Gurin. La utilizacin de coadyuvantes se inicia en
1916, por LeMoignic y Piroy.
La inmunogentica nace cuando Bernstein describe en 1921 el modelo de transmisin
hereditaria de los cuatro grupos sanguneos principales, basndose en el anlisis
estadstico de sus proporciones relativas, y con el descubrimiento por Landsteiner y
Levne (1927) de los nuevos sistemas MN y P. Los experimentos de transfusiones
sanguneas interespecficas permitieron distinguir la gran complejidad de los antgenos
sanguneos, explicables segn unos 300 alelos mltiples.
Una contribucin esencial a las ideas sobre el mecanismo de formacin de los
anticuerpos la realiz el australiano Macfarlane Burnet (1899-1985), al establecer su
teora de la seleccin clonal; sta argumenta que cada linfocito B sintetiza un nico tipo
de anticuerpo, especfico para cada antgeno (determinante antignico), de modo que la
unin del antgeno causa la proliferacin clonal del linfocito B, con la consecuente
sntesis incrementada de anticuerpos especficos. Igualmente, Burnet lanz una
hiptesis sobre el mecanismo subyacente a la auto-tolerancia inmunolgica, que fue
36
Ramirez - Balqui
confirmada experimentalmente por Peter Medawar. Ms recientemente Niels Jerne ha

realizado nuevas aportaciones y refinamientos a la teora de la seleccin clonal,
proponiendo un modelo de regulacin inmune conocido como teora de las redes
idiotpicas.
Los avances en Inmunologa durante los ltimos aos han sido espectaculares,
consolidando a sta como ciencia independiente, con su conjunto propio de
paradigmas, ya relativamente escindida de su tronco originario microbiolgico. Entre los
hitos recientes hay que citar la tcnica de produccin de anticuerpos monoclonales a
partir de hibridomas, desarrollada originalmente por Csar Milstein y Georges Kohler en
1975, y que presenta una enorme gama de aplicaciones en biomedicina, o el
desentraamiento de los fenmenos de reorganizacin gentica responsables de la
expresin de los genes de inmunoglobulinas, por Susumu Tonegawa.
2.10. ORIGEN Y DESARROLLO DE LA VIROLOGA.
La Virologa ha sido la ciencia microbiolgica de origen ms tardo, habiendo surgido
como resultado del hallazgo de enfermedades infecciosas en las que la demostracin
de implicacin de microorganismos se demostraba esquiva con los medios habituales
disponibles a finales del siglo XIX. La euforia que se viva en los mbitos cientficos y
mdicos, al socaire de la edad de oro de aislamiento de bacterias patgenas, se plasm
en el prejuicio de que la incapacidad de hacer crecer los agentes causantes de ciertas
enfermedades se deba a una tcnica inapropiada o mal aplicada.
El botnico ruso Dimitri Iwanovski haba observado (1892) que la enfermedad del
mosaico del tabaco poda ser reproducida experimentalmente usando el fluido que
atravesaba los filtros de porcelana que normalmente retenan a las bacterias, pero
siendo incapaz de aislar y crecer el supuesto microorganismo, abandon la
investigacin. Pocos aos ms tarde (1898), y probablemente sin tener noticias del
trabajo de Iwanovski, Beijerink realiz experimentos similares con el mismo sistema, y
en otro rasgo de su genio, enfrentndose a los conceptos de la poca, avanz la idea
de que el agente filtrable (un contagium vivum fluidum, segn su expresin), deba de
incorporarse al protoplasma vivo del hospedador para lograr su reproduccin. Este tipo
de agentes infectivos que atravesaban los filtros de porcelana fueron llamados en
principio "virus filtrables", quedando ms tarde su denominacin simplemente como
virus. Aquel mismo ao de 1898 Loeffler y Frosch descubren los virus animales al
comprobar que un virus filtrable es responsable de la glosopeda del ganado. En 1901
Reed descubre el primer virus humano, el de la fiebre amarilla, y en 1909 Landsteiner y
Pope detectan el de la poliomielitis. A comienzos de siglo Copeman desarrolla su
tcnica de multiplicacin de virus animales en embriones de pollo, con la que P. Rous
asla y cultiva el virus del sarcoma aviar (1911).
Los virus bacterianos fueron descubiertos en 1915 por F.W. Twort, si bien su trabajo no
alcanz la elegancia y claridad del desarrollado poco ms tarde por el canadiense Flix
d'Hrelle (1917); fue ste quien acu el trmino bacterifago, y supuso correctamente
que el fenmeno de lisis por estos agentes deba de estar ampliamente difundido entre
las bacterias. Aunque su esperanza en la aplicacin de los fagos como elementos
37
bactericidas para uso mdico no pudo satisfacerse, la contribucin de los virus

bacterianos al avance de la gentica y biologa moleculares ha sido decisiva: de hecho,
los primeros estudios cuantitativos sobre replicacin virsica se realizaron sobre fagos
de Escherichia coli, lo que suministr modelos aplicables a otros virus, incluidos los de
animales. En 1925 Bordet y Bal describen por primera vez el fenmeno de lisogenia,
pero las relaciones entre los ciclos ltico y lisognico de los fagos no fueron aclaradas
hasta los estudios de Andr Lwoff (1950).
La primera visualizacin de un virus se debe a las observaciones a microscopio
ultravioleta del bacterilogo ingls Barnard (1925), y en 1939 se realiza la primera
fotografa de un virus a microscopio electrnico. Pero los avances ms significativos en
el estudio de la composicin y estructura de los virus se inician con la purificacin y
cristalizacin, por Wendell M. Stanley, del virus del mosaico del tabaco -TMV- (1935),
aplicando procedimientos tpicos de la cristalizacin de enzimas. Inicialmente Stanley
comprob que el TMV contena gran proporcin de protena, pero poco ms tarde
detecta, adems, la presencia de cido nucleico. A partir de aqu, la Virologa entra en
una fase de ciencia cuantitativa, en la que participan numerosos fsicos, bioqumicos y
genetistas, en un esfuerzo interdisciplinario que da origen a la moderna Biologa
Molecular.
Un importante avance metodolgico para el estudio de los virus animales se debi a
Enders, Weller y Robbins (1949), al desarrollar por primera vez un mtodo para la
multiplicacin virsica sobre cultivos de tejidos de mamferos, tcnica que fue
perfeccionada ms tarde por el equipo de Renato Dulbecco.
Los recientes progresos en las numerosas tcnicas de biologa molecular han
propiciado una autntica explosin de descubrimientos sobre la biologa de los virus y
de sus clulas hospedadoras; baste citar la replicacin del genomio de ARN de los
retrovirus por reversotranscripcin a ADN, los fenmenos de transformacin oncognica
virsica y su aplicacin a los estudios generales del cncer, el diseo de vacunas
recombinantes por manipulacin in vitro de genomios virsicos, la prxima aplicacin
clnica de la primeras terapias gnicas en humanos recurriendo a vectores virsicos,
etc. En el terreno de las necesidades urgentes, la metodologa existente ha permitido la
rpida identificacin y caracterizacin del virus de la inmunodeficiencia humana, lo que
se est traduciendo en una intensa y racional bsqueda de procedimientos para
prevenir y eliminar la inesperada epidemia de SIDA.
En aos recientes han sido descubiertos dos nuevos tipos de entidades infectivas,
subvirsicas: T.O. Diener describi en 1967 la existencia de ARN desnudos infectivos
en plantas, a los que llam viroides, y en 1981 Prusiner puso de manifiesto que
determinadas enfermedades de mamferos se deben a partculas proteicas
aparentemente desprovistas de material gentico, a las que bautiz como priones.
2.11. RELACIONES ENTRE LA MICROBIOLOGA Y OTRAS CIENCIAS BIOLGICAS.
El auge de la microbiologa desde finales del siglo XIX se plasm, entre otras cosas, en
el aislamiento de gran variedad de cepas silvestres de microorganismos, lo que
38
Ramirez - Balqui
suministr un enorme volumen de nuevo material biolgico sobre el que trabajar,

aplicndose una serie de enfoques que eran ya habituales en las ciencias naturales
ms antiguas; as, haba que crear un marco taxonmico (con sus normas de
nomenclatura) para encuadrar a los organismos recin descubiertos, era factible
desarrollar trabajos sobre morfologa y fisiologa comparadas, sobre variabilidad y
herencia, evolucin, ecologa, etc. De este modo la joven Microbiologa fue objeto, en
pocos aos, de la utilizacin, a un ritmo acelerado, de los mtodos taxonmicos y
experimentales que haban ido surgiendo y madurando desde el siglo XVIII en los
mbitos de la "Historia Natural" clsica.
Los avances de Taxonoma Microbiana, vale la pena resear aqu los esfuerzos
tempranos para lograr un clasificacin bacteriana por parte de Cohn (1875) y Migula
(1894), que sustentaban su concepto de especie predominantemente sobre caracteres
morfolgicos. Pero hacia 1900 era evidente la arbitrariedad e insuficiencia de este tipo
de clasificaciones, de modo que los intentos posteriores hicieron uso de caracteres
bioqumicos (Orma Jensen, 1909), o de una mezcla de rasgos morfolgicos,
bioqumicos, patognicos y de tincin (Buchanan, 1915). El sistema de taxonoma
bacteriana adquiri un nuevo impulso a partir de la 1 edicin del "Bergey's Manual of
Determinative Bacteriology" (1923), y de las propuestas de Kluyver y van Niel
("Prospects for a natural system of classification of bacteria", 1936). En cuanto a la
nomenclatura, no fue hasta 1958 en que cuaj un Cdigo Internacional de
Nomenclatura Bacteriolgica, aunque ya se vena aplicando desde haca tiempo el
procedimiento tipolgico para los microorganismos, con criterios similares a los de la
Zoologa y la Botnica.
El establecimiento de relaciones taxonmicas precis el recurso a mtodos cada vez
ms amplios y afinados de anlisis gentico, estructural o fisiolgico. En un apartado
anterior ya vimos las conexiones tempranas entre la Bioqumica y la Microbiologa a
propsito del descubrimiento de la base enzimtica de las fermentaciones, lo cual abri
el camino para dilucidar el metabolismo energtico microbiano, y para demostrar su
similitud qumica con rutas metablicas de organismos superiores. Otro paso importante
en la percepcin de la unidad bioqumica del mundo vivo deriva del descubrimiento de
las vitaminas (trmino acuado por Funk en 1911), al establecerse que determinados
factores de crecimiento requeridos por algunos microorganismos eran qumicamente
similares a las vitaminas necesarias en la dieta de los animales, y que este tipo de
compuestos representa precursores biosintticos de coenzimas del metabolismo
celular. As pues, este tipo de investigaciones sent claramente la idea de la unidad
qumica de los seres vivos, independientemente de su encuadre taxonmico, y encauz
una buena parte de los trabajos bioqumicos hacia los microorganismos, dadas sus
cualidades de facilidad de manejo y cultivo en laboratorio.
En cuanto a las conexiones de la Microbiologa con la Gentica, ya Beijerink, en 1900,
tras analizar la teora de la mutacin de De Vries, haba predicho que los
microoganismos podran convertirse en objetos de investigacin ms adecuados que
los sistemas animales o vegetales. Pero las primeras conexiones entre ambas ciencias
arrancan de la necesidad que hubo, a principios del siglo XX, de determinar la
39
sexualidad de los hongos con fines taxonmicos. En 1905 Maire demostr la existencia
de meiosis en la formacin de ascosporas, y Claussen (1907) evidenci fusin de
ncleos en Ascomicetos, mientras que Kniepp, hacia finales de los aos 30 haba
recogido un gran volumen de informacin sobre procesos sexuales en Basidiomicetos.
El sueco Lindegren (1936) realiza las primeras cartografas genticas en cromosomas
de Neurospora, durante su estancia en el laboratorio californiano de Morgan; este
ltimo, propugnador de la "teora de los genes" (1926), confiaba desde haca aos en
ampliar sus xitos, logrados en Drosophila, hacia el estudio de la gentica microbiana.
En 1941, otros dos discpulos de Morgan, Beadle y Tatum, aslan mutantes auxotrficos
de Neurospora, con lo que se inicia el estudio de la base bioqumica de la herencia, y
convierten a este hongo en una valiosa herramienta de trabajo en esta lnea de
investigacin.
Las estrategias diseadas por Beadle y Tatum fueron aplicadas por Luria y Delbrck
(1943) a cultivos bacterianos, investigando la aparicin de mutaciones espontneas
resientes a fagos o estreptomicina. La conexin de estos experimentos con las
observaciones previas de Griffith (1928) sobre la transformacin del neumococo, llev a
Avery y colaboradores (1944) a demostrar que el "principio transformante" portador de
la informacin gentica es el ADN. En 1949 Erwin Chargaff demuestra bioqumicamente
la transmisin gentica mediante ADN en Escherichia coli, y en 1952 Alfred Hershey y
Martha Chase, en experimentos con componentes marcados de fagos, ponen un
elegante colofn a la confirmacin de la funcin del ADN, con lo que se derribaba el
antiguo y asentado "paradigma de las protenas" que hasta mediados de siglo intentaba
explicar la base de la herencia. De esta forma, la Microbiologa experimental se sita en
pleno centro del nacimiento de la Gentica molecular, de la mano de los avances
paralelos en Bioqumica (anlisis por rayos X de la estructura del ADN debido a Maurice
Wilkins y Rosalind Franklin, modelo de Watson y Crick de la doble hlice del ADN, etc.),
dando origen esta confluencia a lo que se ha llamado la "edad de oro" de la Biologa
Molecular.
III. INTRODUCCIN AL CONCEPTO Y CONTENIDO DE LA MICROBIOLOGA.
El objeto de estudio de una ciencia se puede desglosar en dos apartados: objeto material y
objeto formal.
3.1.
40
OBJETO MATERIAL: LOS MICROORGANISMOS

La Microbiologa es la ciencia que se ocupa del estudio de los microorganismos, es
decir, de aquellos organismos demasiado pequeos para poder ser observados a
simple vista, y cuya visualizacin requiere el empleo del microscopio. Esta definicin
implica que el objeto material de la Microbiologa viene delimitado por el tamao de los
seres que investiga, lo que supone que abarca una enorme heterogeneidad de tipos
estructurales, funcionales y taxonmicos: desde partculas no celulares como los virus,
viroides y priones, hasta organismos celulares tan diferentes como las bacterias, los
protozoos y parte de las algas y de los hongos. De esta manera la Microbiologa se
distingue de otras disciplinas (como la Zoologa y la Botnica) que se centran en grupos
de seres vivos definidos por conceptos biolgicos homogneos, ya que su objeto de
indagacin se asienta sobre un criterio artificial que obliga a incluir entidades sin ms
Ramirez - Balqui
relacin en comn que su pequeo tamao, y a excluir a diversos organismos

macroscpicos muy emparentados con otros microscpicos.
A pesar de esto (o incluso debido a ello), la Microbiologa permanece como una
disciplina perfectamente asentada y diferenciada, que deriva su coherencia interna del
tipo de metodologas ajustadas al estudio de los organismos cuyo tamao se sita por
debajo del lmite de resolucin del ojo humano, aportando un conjunto especfico de
conceptos que han enriquecido la moderna Biologa.
Podemos definir, pues, a los microorganismos como seres de tamao microscpico
dotados de individualidad, con una organizacin biolgica sencilla, bien sea acelular o
celular, y en este ltimo caso pudiendo presentarse como unicelulares, cenocticos,
coloniales o pluricelulares, pero sin diferenciacin en tejidos u rganos, y que necesitan
para su estudio una metodologa propia y adecuada a sus pequeas dimensiones. Bajo
esta denominacin se engloban tanto microorganismos celulares como las entidades
subcelulares.
3.1.1. MICROORGANISMOS CELULARES.
Comprenden todos los procariotas y los microorganismos eucariticos (los
protozoos, los mohos mucosos, los hongos y las algas microscpicas).
3.1.2. VIRUS Y PARTICULAS SUBVIRASICAS.
Otro tipo de objetos de estudio de la microbiologa son las entidades no celulares,
que a pesar de no poseer ciertos rasgos atribuibles a lo que se entiende por vida,
cuentan con individualidad y entidad biolgica, y caen de lleno en el dominio de
esta ciencia.
Los virus son entidades no celulares de muy pequeo tamao (normalmente
inferior al del ms pequeo procariota), por lo que debe de recurrirse al
microscopio electrnico para su visualizacin. Son agentes infectivos de
naturaleza obligadamente parasitaria intracelular, que necesitan su incorporacin
al protoplasma vivo para que su material gentico sea replicado por medio de su
asociacin ms o menos completa con las actividades celulares normales, y que
pueden transmitirse de una clula a otra. Cada tipo de virus consta de una sola
clase de cido nucleico (ADN o ARN, nunca ambos), con capacidad para codificar
varias protenas, algunas de las cuales pueden tener funciones enzimticas,
mientras que otras son estructurales, disponindose stas en cada partcula
virsica (virin) alrededor del material gentico formando una estructura regular
(cpsida); en algunos virus existe, adems, una envuelta externa de tipo
membranoso, derivada en parte de la clula en la que se desarroll el virin
(bicapa lipdica procedente de membranas celulares) y en parte de origen virsico
(protenas).
En su estado extracelular o durmiente, son totalmente inertes, al carecer de la
maquinaria de biosntesis de protenas, de replicacin de su cido nucleico y de
obtencin de energa. Esto les obliga a un modo de vida (sic) parasitario
41
intracelular estricto o fase vegetativa, durante la que el virin pierde su integridad,

y normalmente queda reducido a su material gentico, que al superponer su
informacin a la de la clula hospedadora, logra ser expresado y replicado,
producindose eventualmente la formacin de nuevos viriones que pueden
reiniciar el ciclo.
Los viroides son un grupo de nuevas entidades infectivas, subvirsicas,
descubiertas en 1967 por T.O. Diener en plantas. Estn constituidos
exclusivamente por una pequea molcula circular de ARN de una sola hebra,
que adopta una peculiar estructura secundaria alargada debido a un extenso, pero
no total, emparejamiento intracatenario de bases por zonas de homologa interna.
Carecen de capacidad codificadora y muestran cierta semejanza con los intrones
autocatalticos de clase I, por lo que podran representar secuencias intercaladas
que escaparon de sus genes en el transcurso evolutivo. Se desconocen detalles
de su modo de multiplicacin, aunque algunos se localizan en el nucleoplasma,
existiendo pruebas de la implicacin de la ARN polimerasa II en su replicacin, por
un modelo de crculo rodante que genera concatmeros lineares. Esta replicacin
parece requerir secuencias conservadas hacia la porcin central del viroide. Los
viroides aislados de plantas originan una gran variedad de malformaciones
patolgicas. El mecanismo de patogenia no est aclarado, pero se sabe que
muchos de ellos se asocian con el nucleolo, donde quiz podran interferir; sin
embargo, no existen indicios de que alteren la expresin gnica (una de las
hiptesis sugeridas); cada molcula de viroide contiene uno o dos dominios
conservados que modulan la virulencia.
En 1986 se descubri que el agente de la hepatitis delta humana posee un
genomio de ARN de tipo viroide, aunque requiere para su transmisin (pero no
para su replicacin) la colaboracin del virus de la hepatitis B, empaquetndose
en partculas similares a las de este virus. A diferencia de los viroides vegetales,
posee capacidad codificadora de algunas protenas.
Los ARNs satlites son pequeas molculas de tamao similar al de los viroides
de plantas (330-400 bases), que son empaquetados en cpsidas de determinadas
cepas de virus (con cuyos genomios no muestran homologas). Se replican slo
en presencia del virus colaborador especfico, modificando (aumentando o
disminuyendo) los efectos patgenos de ste.
Los virusoides constituyen un grupo de ARNs satlites no infectivos, presentes
en el interior de la cpsida de ciertos virus, con semejanzas estructurales con los
viroides, replicndose exclusivamente junto a su virus colaborador.
Los priones son entidades infectivas de un tipo totalmente nuevo y original,
descubiertas por Stanley Prusiner en 1981, responsables de ciertas enfermedades
degenerativas del sistema nervioso central de mamferos (por ejemplo, el "scrapie"
o prurito de ovejas y cabras, la encefalitis espongiforme bovina), incluyendo los
humanos (kuru, sndrome de Gerstmann-Strassler, enfermedad de Creutzfeldt-
42
Ramirez - Balqui
Jakob). Se definen como pequeas partculas proteicas infectivas que resisten la

inactivacin por agentes que modifican cidos nucleicos, y que contienen como
componente mayoritario (si no nico) una isoforma anmala de una protena
celular. Tanto la versin celular normal (PrPC) como la patgena (PrPSc en el caso
del "scrapie") son glicoprotenas codificadas por el mismo gen cromosmico,
teniendo la misma secuencia primaria. Se desconoce si las caractersticas
distintivas de ambas isoformas estriban en diferencias entre los respectivos
oligosacridos que adquieren por procesamiento post-traduccional.
A diferencia de los virus, los priones no contienen cido nucleico y estn
codificados por un gen celular. Aunque se multiplican, los priones de nueva
sntesis poseen molculas de PrP que reflejan el gen del hospedador y no
necesariamente la secuencia de la molcula del PrP que caus la infeccin previa.
Se desconoce su mecanismo de multiplicacin, y para discernir entre las diversas
hiptesis propuestas quiz haya que dilucidar la funcin del producto normal y su
posible conversin a la isoforma patgena infectiva.
Recientemente se ha comprobado que, al menos algunas de las enfermedades
por priones son simultneamente infectivas y genticas, una situacin inslita en
la Patologa humana, habindose demostrado una relacin entre un alelo
dominante del PrP y la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob. El gen del prin (Prn-p)
est ligado genticamente a un gen autosmico (Prn-i) que condiciona en parte
los largos tiempos de incubacin hasta el desarrollo del sndrome.
3.2.
OBJETO FORMAL.
Todos los aspectos y enfoques desde los que se pueden estudiar los microorganismos
conforman lo que denominamos objeto formal de la Microbiologa: caractersticas
estructurales, fisiolgicas, bioqumicas, genticas, taxonmicas, ecolgicas, etc., que
conforman el ncleo general o cuerpo bsico de conocimientos de esta ciencia. Por otro
lado, la Microbiologa tambin se ocupa de las distintas actividades microbianas en
relacin con los intereses humanos, tanto las que pueden acarrear consecuencias
perjudiciales (y en este caso estudia los nichos ecolgicos de los correspondientes
agentes, sus modos de transmisin, los diversos aspectos de la microbiota patgena en
sus interacciones con el hospedador, los mecanismos de defensa de ste, as como los
mtodos desarrollados para combatirlos y controlarlos), como de las que reportan
beneficios (ocupndose del estudio de los procesos microbianos que suponen la
obtencin de materias primas o elaboradas, y de su modificacin y mejora racional con
vistas a su imbricacin en los flujos productivos de las sociedades).
Finalmente, la Microbiologa ha de ocuparse de todas las tcnicas y metodologas
destinadas al estudio experimental, manejo y control de los microorganismos, es decir,
de todos los aspectos relacionados con el modo de trabajo de una ciencia emprica.
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Ramirez - Balqui
CAPITULO II
MICROBIOLOGIA MDICA, MICROSOCOPIA Y

TAXONOMIA BACTERIANA.
Microbiologa Mdica
Microscopa
Taxonoma bacteriana. Categoras taxonmicas
Cepas o clones. Biotipos
Nomenclatura de las bacterias
Patogenicidad y Virulencia
Mtodos inmunolgicos en microbiologa clnica
Mtodos moleculares en microbiologa clnica
Bacterias de inters mdico (clasificacin segn Bergey)
Bacterias de inters industrial
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Ramirez - Balqui
MICROBIOLOGIA MDICA, MICROSOCOPIA Y TAXONOMIA

BACTERIANA
I.
MICROBIOLOGIA
En general, las bacterias son organismos unicelulares, desprovistos de clorofila que pueden
vivir libres o bien agruparse.
Su tamao varia entre 0.2 y 3 micras de dimetro. Aunque son verdaderas clulas, su
estructura presenta rasgos especiales:
a) Por ser procariticas carecen de ncleo diferenciado. El citiplasma presenta un solo
cromosoma en forma de anillo (ADN circular).
b) Una pared rgida (pared bacteriana) rodea la membrana plasmtica. La composicin
qumica de la pared bacteriana vara en los distintos grupos de bacterias y se refleja en la
capacidad de retener o no determinados colorantes. Segn esto, las bacterias se clasifican
en grampositivas o gramnegativas. Adems, ciertas bacterias presentan una capa viscosa
formada por azcares complejos sobre la pared bacteriana que es lo que llamamos
cpsula.
c) Algunas bacterias son inmviles; otras se desplazan mediante la utilizacin de cilios o
flegelos.
d) No presentan mitocondrias, aunque por tratarse de seres vivos, tambin respiran.
Segn su forma o morfologa reciben distintos nombres bacilos, con forma de bastn; vibrio,
semejantes a una coma; o parecidos a un sacacorchos, como los espirilos.
Por ltimo, los cocos son de forma redondeada y pueden agruparse por parejas (diplococos),
en cadena (estreptococos) o de modo irregular (estafilococos).
En el mundo de las bacterias, las formas de alimentacin son muy variadas. Algunas viven en
el suelo y, partiendo de sustancias inorgnicas, son capaces de sintetizar su propio alimento;
presentan, por tanto, nutricin auttrofa.
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Dentro de este grupo podemos distinguir las que realizan la fotosntesis, si bien se trata de un
proceso algo distinto del que tiene lugar en las plantas; poseen variedades nicas de clorofila
(bacterioclorofila), y las que aprovechan la energa de ciertas reacciones qumicas (y no la del
sol) para construir sus propias sustancias. Entre sta ltima, llamadas quimiotrofas, se
encuentran:
Las bacterias sulfurosas, que adsorben azcar (o cido sulfhdrico) y lo combinan con
oxgeno.
Las bacterias ferricas, que viven en aguas dulces o saladas en las que existe hierro en
disolucin; absorben estos compuestos y los combina con el oxgeno.
Las bacterias hidrgenas, que combinan hidrgeno y oxgeno dando agua como
subproducto de su actividad.
Las bacterias nitrificantes, que oxidan ciertos compuestos nitrogenados.
Estos cuatros tipos de bacterias aprovechan la energa que se libera en las reacciones
descritas.
Sin embargo, la mayora de las bacterias dependen de otros seres vivos para alimentarse.
Estas bacterias, hetertrofas, pueden ser saprofitas y vivir a expensas de la materia orgnica
en descomposicin, los parsitos si viven sobre o dentro de animales o vegetales vivos, o
simbiticas cuando se asocian a otros organismos para obtener ambos un beneficio mutuo.
Las bacterias viven en todo tipo de medios: en el agua, en la tierra y en los seres vivos. En este
ltimo caso pueden tener efectos benficos para el organismo en el que se encuentran, como
sucede por ejemplo con unas bacterias del intestino del hombre, que producen una sustancia
muy importante: la vitamina K..
En muchos casos las bacterias producen enfermedades cuando se hallan presentes en los
animales y en las plantas. En tal caso reciben el nombre de bacterias patgenas.
Las "insignificantes" bacterias han producido grandes epidemias a lo largo de la historia, como
lo es el caso de la peste o el clera. Pero tambin son responsables de enfermedades muy
comunes entre nosotros, tales como el canto o las anginas.
La reproduccin ms tpica en las bacterias es la asexual, multiplicndose por simple escisin
o biparticin.
Este proceso es enormemente eficaz porque, en condiciones apropiadas, pueden llegar a
dividirse cada veinte minutos. A las seis o sietes horas, una slo bacteria puede dar lugar a un
milln de descendiente. No cabe duda, que son los organismos vivos ms abundantes sobre la
tierra.
Por su simplicidad ante organismos ms complejos, las bacterias son muy utilizadas en la
investigacin bioqumica y gentica.
Algunos bacilos tienen la propiedad de formar estructuras de resistencia o esporas cuando las
condiciones se vuelven adversas.
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Ramirez - Balqui
Los mecanismos parasexuales mediante los cuales realizan intercambios de material gentico
son:
La conjugacin: hay una bacteria donadora y otra receptora.
La transduccin; el agente transmisor es un virus que transporta fragmentos de la ltima
bacteria que ha parasitado.
La transformacin: una bacteria introduce fragmentos de ADN que hay libres en el medio.
En la conjugacin, una clula donadora emite un apndice tubular llamado pili o fimbria que
comunica su citoplasma con el de la clula receptora. Por esto puente puede pasar una porcin
del cromosoma donador.
II.
MICROSCOPIA.
Un microscopio simple (de un lente o varios lentes), es un instrumento que amplifica una
imagen y permite la observacin de mayores detalles de los posibles a simple vista. El
microscopio ms simple es una lente de aumento o un par de anteojos.
El poder de resolucin del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos
separados estos deben estar como mnimo a esa distancia.
El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para captar la informacin.
La resolucin depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor del espcimen,
la calidad de la fijacin y la intensidad de la coloracin.
Tericamente la mxima resolucin que se puede alcanzar es de 0,2 m dada por una luz con
longitud de onda de 540 nm, la cual pasa por un filtro verde (muy sensible por el ojo humano) y
con objetos condensadores adecuados. El ocular aumenta la imagen producida por el objetivo,
pero no puede aumentar la resolucin.
Existen distintos microscopios pticos generales y de investigacin que se diferencian en
factores tales como la longitud de onda de la iluminacin del espcimen, la alteracin fsica de
la luz que incide en la muestra y procesos analticos que se aplican a la imagen final.
2.1. TIPOS DE MICROSCOPIOS
Microscopio de campo claro Es descendiente de los disponibles a partir de 1800.
Compuestos por:
Fuente luminosa que ilumina la muestra.
Condensador que enfoca los rayos de luz sobre la muestra.
Platina sobre la cual se coloca la muestra.
Objetivo que recibe la luz que atraves la muestra.
Ocular que recibe directamente la imagen formada por el objetivo.
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La muestra a observar debe ser fina para que pueda ser atravesada por la luz. Con este
tipo de microscopio se deben utilizar mtodos de tincin porque el campo claro de este
no produce un nivel til de contraste.
Microscopio de contraste de fase Permite observar clulas sin colorear y resulta
especialmente til para clulas vivas.
Este aprovecha las pequeas diferencias de los ndices de refraccin en las distintas
partes de una clula y en distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por
regiones de mayor ndice de refraccin experimenta una deflexin y queda fuera de fase
con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Aparea otras
longitudes de onda fuera de fase por medio de una serie de anillos pticos del objetivo y
del condensador, anula la amplitud de la porcin fuera de fase inicial del haz de luz y
produce un contraste til sobre la imagen. Las partes oscuras de la imagen
corresponden a las porciones densas del espcimen; las partes claras de la imagen
corresponden a porciones menos densas. Por lo tanto estos microscopios se utilizan
para observar clulas vivas, tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados.
Dos modificaciones del microscopio de fase son el microscopio de interferencia y el
microscopio de interferencia diferencial.
Microscopio de campo oscuro El objetivo recibe la luz dispersa o refractada por las
estructuras del espcimen. Para lograrlo, el microscopio de campo oscuro est
equipado con un condensador especial que ilumina la muestra con luz fuerte indirecta.
En consecuencia el campo visual se observa como un fondo oscuro sobre el cual
aparecen pequeas partculas brillantes de la muestra que reflejan parte de la luz hacia
el objetivo.
El efecto es similar a las partculas de polvo que se ven en el haz de luz emanado de un
proyector de diapositivas en una habitacin oscura. La luz reflejada por las partculas de
polvo llega hasta la retina del ojo y las hacen visibles.
La resolucin de este microscopio no puede ser mejor que la del microscopio de campo
oscuro porque emplea la misma fuente de longitud de onda, sin embargo puede
detectar partculas individuales ms pequeas en las imgenes de campo oscuro,
debido al contraste creado.
Es til para observar autorradiografas, cristales en la orina y para detectar espiroquetas
en particular el Treponema pallidum microorganismo causante de la sfilis.
Microscopio de fluorescencia Una molcula que fluorece emite luz de longitud de onda
que se encuentra dentro del espectro visible, cuando es expuesta a una fuente de luz
ultravioleta. Se usa para revelar molculas fluorescentes naturales, como la vitamina A
y algunos neurotransmisores. Al ser escasas las molculas autofluorecentes su
aplicacin ms difundida es para revelar una fluorescencia agregada, como en la
deteccin de antgenos o anticuerpos en procedimientos de coloracin
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Ramirez - Balqui
inmunocitoqumica. Tambin se puede inyectar molculas fluorescentes especficas en

un animal o directamente en clulas y usarlas como marcadores. Estos mtodos
sirvieron para estudiar uniones intercelulares, trayectorias de las fibras nerviosas en
neurobiologa y en deteccin de marcadores del crecimiento fluorescentes en tejidos
mineralizados.
Se insertan distintos filtros entre la fuente de luz ultravioleta y la muestra para producir
luz monocromtica o casi monocromtica, o entre el espcimen y el objetivo
permitiendo que la estrecha banda de longitudes de onda de fluorescencia llegue hasta
el ojo o incida en una emulacin fotogrfica u otro procedimiento analtico.
Microscopio de barrido confocal Se usa para estudiar la estructura de los materiales
biolgicos. Emplea un sistema de iluminacin con rayo lser que es muy convergente y,
en consecuencia produce un punto de barrido muy poco profundo. La luz que emerge
del punto es dirigida a un tubo fotomultiplicador, donde es analizada. Se utiliza un
sistema de espejos para mover el rayo lser a travs del espcimen, iluminando un solo
punto por vez. Se registran los datos de cada punto de la muestra recorrida con este
rayo mvil y se guardan en una computadora. Luego se puede llevar la imagen a un
monitor de alta resolucin. Este mtodo tiene la ventaja de que se pueden tomar
imgenes de la muestra en cortes muy finos. Las regiones fuera de foco se restan de la
imagen mediante un programa para dar una definicin mxima a la imagen.
Es posible tambin crear imgenes mltiples a diferentes profundidades dentro del
espcimen y realizar reconstrucciones tridimensionales.
Microscopio de luz ultravioleta La imagen en el microscopio de luz ultravioleta
depende de la absorcin de esa luz por las molculas de la muestra. La fuente de luz
ultravioleta tiene una longitud de onda de 200 nm, por lo tanto puede alcanzar una
resolucin de 0,1 m. La microscopia ultravioleta no es muy diferente del
funcionamiento de un espectrofotmetro pero sus resultados son registrados en
fotografas. La muestra no se puede observar directamente a travs del ocular porque la
luz ultravioleta puede daar la retina.
El mtodo sirve para detectar cidos nucleicos, protenas que contienen determinados
aminocidos. Mediante longitudes de ondas especficas para la iluminacin se puede
obtener mediciones espectrofotomtricas para cuantificar el DNA y el RNA de cada
clula.
Microscopio de polarizacin Este microscopio es una simple modificacin del
microscopio ptico, contiene un filtro polarizante llamado polarizador entre la fuente de
luz y la muestra y se ubica un segundo polarizador, denominado analizador entre el
objetivo y el observador.
Se puede rotar el polarizador y el analizador; la diferencia entre sus ngulos de rotacin
se usa para determinar el grado en que una estructura afecta el haz de luz polarizada.
La capacidad que tiene un cristal o estructura cristalina de rotar el plano de la luz
polarizada se denomina birrefringencia.
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Exhiben birrefringencia el msculo estriado o esqueltico y las inclusiones cristaloides

de las clulas intersticiales testiculares.
2.2. MICROSCOPIA ELECTRNICA.
Dentro de los microscopios electrnicos tenemos el de barrido y el de transmisin.
La ventaja de los microscopios electrnicos frente a los pticos esta en que la longitud
de onda del haz de luz es aproximadamente 1/200, lo cual aumenta la resolucin.
Microscopio electrnico de transmisin La ptica es muy similar al ptico pero se
diferencia en que usa un haz de electrones en vez de un haz de luz visible.
Este microscopio se basa en los siguientes principios:
Una fuente, un filamento de tungsteno calentado que emite electrones (ctodo).
Un nodo, hacia el cual son atrados los electrones.
Una diferencia de potencial entre el ctodo y el nodo imparte un voltaje de
aceleracin entre 20.000 y 200.000 voltios a los electrones, que crea la haz.
El haz pasa por una serie de electroimanes que tienen las mismas funciones que las
lentes de vidrio de un microscopio ptico.
El condensador forma el haz y modifica el dimetro del haz que incide en el plano del
espcimen. El haz que atraviesa la muestra se coloca en foco y se aumenta por medio
de un objetivo y se aumenta aun ms con una o ms lentes proyectoras. La imagen final
se visualiza sobre una planilla cubierta por fsforo. Las porciones de la muestra que han
sido atravesadas por los electrones aparecen brillantes, las porciones que absorvieron o
esparcieron los electrones por su densidad inherente o debido al agregado de metales
pesados durante la preparacin del espcimen aparecen oscuras. Se coloca una placa
fotogrfica o un detector de video por encima o por debajo de la pantalla del visor, con
la finalidad de obtener un registro permanente de la imagen sobre la pantalla.
Las muestras se preparan sobre la misma base que la del microscopio ptico pero
requieren mtodos ms finos.
Los preparados la restriccin que tienen es que en cada paso se trabaja con
especimenes de magnitud 3-4 rdenes menores o ms finos que los utilizados para el
microscopio ptico. Debido a la gran resolucin de estos microscopios electrnicos la
calidad de la fijacin, es decir el grado de preservacin de la estructura subcelular debe
ser la mejor posible.
La preparacin de rutina de los especimenes para la microscopia electrnica de
transmisin comienza con la fijacin con glutaraldehdo, seguida de un lavado con un
buffer y de una fijacin con tetrxido de osmio.
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Ramirez - Balqui
Por lo general, se fijan para el microscopio electrnico de transmisin piezas de tejido

no mayores de 1 mm3.
El proceso de deshidratacin es idntico al empleado en la microscopia ptica.
El tejido incluido en material plstico se secciona por medio de micrtomos
especialmente diseados, que usan cuchillas de diamante.
Debido al limitado poder de penetracin de los electrones, el espesor de los cortes
preparados para el microscopio electrnico de transmisin varia entre 50 nm y 150 nm.
Estos cortes son demasiado finos para poder ser manipulados; se los hace flotar desde
el filo de la cuchilla en la superficie de una bandeja llena de lquido, se recuperan y se
colocan en rejillas de malla de cobre recubiertas por plstico. Estas rejillas tienen 50400 orificios por pulgada o hendiduras especiales para observar cortes seriados.
Por lo general, la coloracin de los cortes para microscopio electrnico de transmisin
se realiza por medio del agregado a la muestra de materiales de elevada densidad,
tales como iones de metales pesados. Estos iones de metales pesados se unen a los
tejidos durante la fijacin o la deshidratacin o al sumergir las muestras en soluciones
de tales iones despus del corte. El terxido de osmio que se emplea de rutina en el
fijador se une a los componentes fosfolipdicos de las membranas, lo cual agrega
densidad a la membrana.
A menudo se agrega nitrato de uranilo a las soluciones alcohlicas usadas en la
deshidratacin, con el fin de agregar densidad a los componentes de las uniones
celulares y a otros sitios. La inmersin secuencial en soluciones de acetato de uranilo y
citrato de plomo se usa rutinariamente para teir los cortes antes de observarlos con
microscopio electrnico de transmisin.
La congelacin-fractura es un mtodo especial de preparacin de la muestra para
microscopia electrnica de transmisin, de gran importancia en el estudio de
membranas.
El material a examinar puede estar fijado o no; en el primer caso se elimina el fijador del
tejido por medio de lavados, antes de procesarlo. Se infiltra el tejido con un
crioprotector, como el glicerol y se congela rpidamente a unos 160 grados
centgrados.
Microscopio electrnico de barrido Se asemeja ms que al microscopio electrnico de
transmisin a los tubos de televisin de donde deriva la microscopia electrnica. Para
analizar la mayora de los tejidos se deja la muestra, se deshidrata por desecacin de
punto crtico, se cubre con una pelcula evaporada de oro-carbn, se monta en un taco
de aluminio y se coloca en la cmara de muestras del microscopio. En los tejidos
mineralizados es posible eliminar todos los tejidos blandos con una leja y analizar las
caractersticas estructurales del mineral.
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Se logra el barrido con el mismo tipo de rastreo que explora el haz de electrones a
travs de la superficie un tubo de televisin. Los electrones reflejados desde la
superficie y los electrones forzados hacia el exterior de la superficie son captados por
uno o ms detectores y reprocesados para formar una imagen tridimensional en una
televisin.
Se pueden tomar fotografas para registrar los datos o la imagen en una cinta de video.
Se pueden usar otros detectores para medir los rayos X emitidos desde la superficie, la
catodoluminiscencia de las molculas del tejido por debajo de la superficie y los
electrones de Auger emitidos en la superficie.
Muchos microscopios combinan las caractersticas de un microscopio electrnico de
transmisin y de barrido, el cual permite microanlisis por rayos X con sonda
electrnica.
Se pueden adosar detectores al microscopio para reunir los rayos X emitidos cuando el
haz de bombardea el corte histolgico, y mediante analizadores apropiados se
construye un mapa que muestra la distribucin en los cortes de los elementos que
tienen nmero atmico mayor de 12, en concentracin suficiente para producir rayos X
en cantidad tal que se pueda analizar.
III. TAXONOMIA BACTERIANA. CATEGORIAS TAXONOMICAS.
En el caso de las bacterias, el concepto de especie, un grupo de organismos que pueden
reproducirse entre ellos y dar descendencia frtil, no es apropiado, pues su reproduccin es
asexual. En microbiologa se dice que una especie est formada por un conjunto de
poblaciones clonales, o cepas, que se parecen mucho entre ellas y se pueden diferenciar de
otros grupos de bacterias.
La clasificacin, de las bacterias se hace principalmente basndose en propiedades
bioqumicas, fisiolgicas y ecolgicas, como por ejemplo ser aerbicas, anaerbicas o aerobias
facultativas.
Para clasificar una bacteria, primero hay que aislarla para obtener un cultivo puro. Esto se
consigue distribuyendo la muestra, de manera que al sembrar las bacterias se desarrollen
separadamente y se pueda aislar un clon en concreto. Despus este se ha de sembrar en
diferentes medios de cultivo, convenientemente preparados para realizar diferentes pruebas y
observar el tipo de crecimiento que se produce en ellos, por ejemplo ver si puede degradar la
lactosa o no, etc.
Niveles Taxonmicos:
Taxonoma.- Conjunto de tcnicas y procedimientos para ordenar y agrupar a los seres vivos
en grupos afines o taxones.
Sistemtica.- Se encarga de agrupar a los seres vivos de acuerdo a criterios de semejanzas y
diferencias y relaciones evolutivas. Establece rboles genealgicos:
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Ramirez - Balqui
Reino
Phylum
Clase
Orden
Familia
Gnero
Especie
Reino.Phylum.Clase.Orden.Familia.Gnero.Especie.-
Conjunto de phyla
Conjunto de clase
Conjunto de rdenes similares.
Conjunto de familias relacionadas
Rene a los gneros con grandes semejanzas.
Conjunto de especies muy cercanas entre s.
Es la unidad fundamental de clasificacin y se define como conjunto de
organismos que poseen antepasados comunes anatmicos o fisiolgicos
similares.
Robert Whittaker, bilogo estadounidense, propuso que los seres vivos se pueden clasificar en
cinco reinos:
Reino mineral, incluye a organismos unicelulares, procariontes, algunos de ellos forman
colonias, su reproduccin es por biparticin, habitan en todos los lugares conocidos. La
mayora son hetertrofos aunque algunos utilicen luz solar o bien energa que prende durante
los procesos de descomposicin de compuestos orgnicos o inorgnicos.
Bacterias (importancia)
a) cocos Estafilococos:- Estreptococos:
b) Bacilos lactobacilos
c) Espirilos
Existen as mismo bacterias que son importantes para todos los seres vivos llamadas que son
fijadoras del N2 nitrgeno.
IV. CEPAS O CLONES
V. NOMENCLATURA.
VI. BACTERIAS DE INTERES MEDICO
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VII. MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSRIAL.

7.1. CLASIFICACION DE LOS MICROORGANISMOS
Existen millones de organismos vivos en la Naturaleza, siendo algo caracterstico del
hombre su afn por ordenar esa gran variedad de organismos. Con esa necesidad de
ordenamiento surge la Taxonoma como la ciencia de la clasificacin, nomenclatura e
identificacin. La Clasificacin es algo creado por el hombre. Consecuencia de esta
artificialidad es la controversia que existe desde mediados del siglo XVIII sobre las
divisiones que se establecen entre los seres vivos. Lo que comenz con Linneo siendo
una sencilla divisin de los seres vivos, los reinos Animalia y Plantae, ha ido hacindose
cada vez ms complejo al pasar por distintas modificaciones hasta llegar a nuestros das
con la propuesta de los tres dominios y varios reinos y con la sospecha de que no ser la
ltima, ya que los conocimientos de que se dispone son cada vez mayores, as como las
posibilidades de aumentar esos conocimientos.
Carolus Linnaeus, a mediados del siglo XVIII, orden a todos los seres vivos en dos
Reinos bien definidos: el Reino Animalia que agrupaba a los animales, organismos
mviles y hetertrofos; y el Reino Plantae que inclua a los vegetales, individuos
inmviles, auttrofos y fotosintticos. Segn el esquema de los dos reinos, los protozoos
se incluyeron en el Reino Animalia y el resto de microorganismos en el Reino Plantae.
Sin embargo, esta clasificacin encontr pronto dificultades ya que existan numerosos
microorganismos que posean caractersticas intermedias que no permitan su clara
adscripcin a uno de los dos reinos preestablecidos. En 1866 Ernst Haeckel propuso un
tercer reino, el Reino Protista, para reordenar todos los seres vivos con organizacin
biolgica sencilla ya fueran unicelulares, cenocticos o multicelulares, pero todos ellos
carentes de especializacin tisular y en los que cada individuo era capaz de realizar las
funciones propias y especficas que los tejidos de organismos superiores, animales y
plantas, tenan encomendadas. Segn Haeckel, el Reino Protista incluira bacterias,
algas, hongos y protozoos. Sin embargo, la validez del Reino Protista fu cuestionada a
medida que se obtena ms informacin acerca de la estructura interna de los
microorganismos debido a los avances en microscopa electrnica.
En 1937 Chatton dividi el mundo de los seres vivos en dos grandes grupos segn
tuvieran o no membrana nuclear. Aparecieron as los trminos eucariota para definir
organismos con clulas nucleadas que van desde los protozoos, algas y hongos hasta los
animales y plantas; y procariota para agrupar clulas sin membrana nuclear, como es el
caso de las bacterias. La dicotoma eucariota-procariota fue utilizada por los taxnomos
como una caracterstica filogentica de primera magnitud.
Aparecieron de esta forma los esquemas de cinco reinos en los que los microorganismos
procariotas constituyeron un grupo taxonmico filogenticamente independiente. El ms
aceptado de todos ellos fue el de Whittaker, que en 1969 propuso un sistema de
clasificacin de los seres vivos basado en los dos niveles de organizacin celular y las
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Ramirez - Balqui
tres formas principales de nutricin (fotosntesis, absorcin e ingestin) que dieron lugar a
los Reinos Monera (procariotas), Protista (eucariotas unicelulares), Plantae (eucariotas
fotosintticos), Animalia (eucariotas fagotrofos) y Fungi (eucariotas osmotrofos). En el
esquema de Whittaker los microorganismos quedaron incluidos en los Reinos Monera
(bacterias), Protista (protozoos y microalgas) y Fungi (hongos filamentosos y levaduras).
Hasta este momento se utilizaron caractersticas morfolgicas y fisiolgicas hasta que el
desarrollo de la biologa molecular permiti utilizar los constituyentes moleculares como
nuevos criterios clasificatorios.
As, en 1987, Woese utilizando el 16S rRNA como reloj molecular comprob que, a travs
de la secuenciacin de esta molcula, los procariotas quedaban divididos en dos grupos.
El primero de ellos incluye las bacterias ms comunes, aisladas en su mayora del
cuerpo, suelo y agua denominndose eubacterias. El segundo grupo incluye las bacterias
que producen metano (metangenas), ciertas bacterias del azufre que pueden crecer en
ambientes muy cidos y calientes (termfilas extremas) y bacterias que viven en
ambientes salinos (halobacterias). Estas bacterias se denominaron arqueobacterias.
En 1990 Carl Woese propuso un nuevo taxn superior a Reino que denomin Dominio
(Dominio Reino Divisin Clase Orden Familia Gnero Especie).
Todos los seres vivos se agruparan en 3 dominios: Bacteria, Archaea y Eukarya. De los
cuales, dos son exclusivamente microbianos y estn compuestos nicamente por clulas
procariotas pertenecientes al Reino Monera (Bacteria y Archaea) y el tercero (Eukarya),
formado por eucariotas, incluira entre otros los Reinos Protista, Plantae, Animalia y
Fungi.
7.2. CARACTERISTICAS DE LOS MICROORGANISMOS INDUSTRIALES.
Existen una serie de caractersticas que comparten todos los microorganismos y que
suponen ciertas ventajas para su uso en la industria. la ms fundamental, el pequeo
tamao de la clula microbiana y su correspondiente alta relacin de superficie a
volumen. Esto facilita el rpido transporte de nutrientes al interior de la clula y permite,
por consiguiente, una elevada tasa metablica. As, la tasa de produccin de protena en
las levaduras es varios rdenes de magnitud superior que en la planta de soja, que, a su
vez, es 10 veces ms alta que en el ganado. Esta velocidad de biosntesis microbiana
extremadamente alta permite que algunos microorganismos se reproduzcan en tan solo
20 minutos (Escherichia coli). Los ambientes capaces de albergar vida microbiana son
muy variados. Se han encontrado especies que viven a temperaturas comprendidas entre
el punto de congelacin del agua y el punto de ebullicin, en agua salada y dulce, en
presencia y en ausencia de aire. Algunos han desarrollado ciclos de vida que incluyen
una fase de latencia en respuesta a la falta de nutrientes: en forma de esporas
permanecen inactivos durante aos hasta que el medio ambiente, ms favorable, permita
el desarrollo de las clulas. Los microorganismos se hallan capacitados para acometer
una extensa gama de reacciones metablicas y adaptarse as a muchas fuentes de
nutricin. Versatilidad que hace posible el que las fermentaciones industriales se basen
en nutrientes baratos.
Un microorganismo de uso industrial debe producir la sustancia de inters; debe estar
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disponible en cultivo puro; debe ser genticamente estable y debe crecer en cultivos a
gran escala. Otra caracterstica importante es que el microorganismo industrial crezca
rpidamente y produzca el producto deseado en un corto perodo de tiempo. El
microorganismo debe tambin crecer en un relativamente barato medio de cultivo
disponible en grandes cantidades. Adems, un microorganismo industrial no debe ser
patgeno para el hombre o para los animales o plantas. Otro requisito importante es la
facilidad de separar las clulas microbianas del medio de cultivo; la centrifugacin es
dificultosa o cara a gran escala. Los microorganismos industriales ms favorables para
esto son aquellos de mayor tamao celular (hongos filamentosos, levaduras y bacterias
filamentosas) ya que estas clulas sedimentan ms fcilmente que las bacterias
unicelulares e incluso son ms fciles de filtrar.
7.3. DIFERENTES TIPOS DE MICROORGANISMOS INDUSTRIALES.
Los microorganismos que sintetizan productos tiles para el hombre representan, como
mximo, unos pocos centenares de especies de entre las ms de 100000 descritas en la
Naturaleza. Los pocos que se han encontrado con utilidad industrial son apreciados por
elaborar alguna sustancia que no se puede obtener de manera fcil o barata por otros
mtodos.
a). Levaduras
Las levaduras se vienen utilizando desde hace miles de aos para la fabricacin de
pan y bebidas alcohlicas. La levadura que sin duda fue la primera y an hoy en da
sigue siendo la ms utilizada por el hombre es Saccharomyces cerevisiae de la que
se emplean diferentes cepas para la fabricacin de cerveza, vino, sake, pan y
alcoholes industriales. Kluyveromyces fragilis es una especie fermentadora de la
lactosa que se explota en pequea escala para la produccin de alcohol a partir del
suero de la leche. Yarrowia lipolytica es una fuente industrial de cido ctrico.
Trichosporum cutaneum desempea un importante papel en los sistemas de
digestin aerbica de aguas residuales debido a su enorme capacidad de oxidacin
de compuestos orgnicos, incluidos algunos que son txicos para otras levaduras y
hongos, como los derivados fenlicos.
b). Hongos filamentosos.
Los hongos tienen una gran importancia econmica, no tan slo por su utilidad, sino
tambin por el dao que pueden causar. Los hongos son responsables de la
degradacin de gran parte de la materia orgnica de la Tierra, una actividad
enormemente beneficiosa ya que permite el reciclaje de la materia viva. Por otro
lado, los hongos causan gran cantidad de enfermedades en plantas y animales y
pueden destruir alimentos y materiales de los que depende el hombre.
Los efectos perjudiciales de los hongos estn contrarrestados por su utilizacin
industrial. Los hongos son la base de muchas fermentaciones como la combinacin
de soja, habichuelas, arroz y cebada que dan lugar a los alimentos orientales miso,
shoyu y tempeh. Los hongos son tambin la fuente de muchos enzimas comerciales
(amilasas, proteasas, pectinasas), cidos orgnicos (ctrico, lctico), antibiticos
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Ramirez - Balqui
(penicilina), quesos especiales (Camembert, Roquefort) y, evidentemente, de las

setas.
c). Bacterias.
Entre las especies bacterianas de inters industrial estn las bacterias del cido
actico, Gluconobacter y Acetobacter que pueden convertir el etanol en cido
actico. El gnero Bacillus es productor de antibiticos (gramicidina, bacitracina,
polimixina), proteasas e insecticidas. Del gnero Clostridium cabe destacar
Clostridium acetobutylicum que puede fermentar los azcares originando acetona y
butanol. Las bacterias del cido lctico incluyen, entre otras, las especies de los
gneros Streptococcus y Lactobacillus que producen yogur. Corynebacterium
glutamicum es una importante fuente industrial de lisina. El olor caracterstico a tierra
mojada se debe a compuestos voltiles (geosmina) producido por Streptomyces
aunque su principal importancia radica en la produccin de antibiticos como
anfotericina B, kanamicina, neomicina, estreptomicina, tetraciclina, etc.
59
60
Ramirez - Balqui
CAPITULO III
INTRODUCCION A LA PRACTICA MICROBIOLOGICA
Conceptos bsicos.
Clases de nutrientes.
Medios de cultivo.
Metabolismo energtico
Captacin de energa en las bacterias quimiotrofas.
Captacin de energa en las bacterias fototrofas: Fotofosforilacin.
Obtencin de energa en Halobacterium.
El oxgeno y el metabolismo bacteriano.
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Ramirez - Balqui
CAPITULO IV
ESTRUCTURA, NUTRICION Y METABOLISMO

BACTERIANO
Conceptos bsicos.
Clases de nutrientes.
Medios de cultivo.
Metabolismo energtico
Captacin de energa en las bacterias quimiotrofas.
Captacin de energa en las bacterias fototrofas: Fotofosforilacin.
Obtencin de energa en Halobacterium.
El oxgeno y el metabolismo bacteriano.
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Ramirez - Balqui
ESTRUCTURA, NUTRICION Y METABOLISMO BACTERIANO
I.
NUTRICION BACTERIANA. CONCEPTOS BSICOS

La nutricin es el proceso por el que los seres vivos toman del medio donde habitan las
sustancias qumicas que necesitan para crecer. Dichas sustancias se denominan nutrientes, y
se requieren para dos objetivos:
fines energticos (reacciones de mantenimiento);
fines biosintticos (reacciones plsticas o anabolismo).
Las biosntesis de nuevos componentes celulares son procesos que requieren energa
procedente del medio ambiente. En el captulo anterior vimos los principales modos de
captacin y obtencin de energa existentes en las bacterias.
El estudio de la nutricin microbiana se puede desglosar en varios apartados: as, podemos
considerar los tipos de nutrientes requeridos, los aspectos cuantitativos, e incluso podemos
abordar los aspectos ambientales (en cuyo caso entramos dentro del campo de la
Ecofisiologa). Igualmente podemos estudiar la aplicacin prctica de la nutricin bacteriana,
que se plasma sobre todo en el diseo de medios de cultivo para manejar los microorganismos
en el laboratorio.
Es importante tener claros desde el principio una serie de conceptos y nomenclaturas
relacionados con los principales tipos de nutricin bacteriana. Puesto que, como acabamos de
ver, la nutricin presenta un aspecto de aprovisionamiento de energa y otro de suministro de
materiales para la sntesis celular, podemos hablar de dos "clasificaciones" de tipos de
nutricin:
Desde el punto de vista de los fines de aprovisionamiento de energa, las bacterias se pueden
dividir en:
litotrofas: son aquellas que slo requieren sustancias inorgnicas sencillas (SH2 S0, NH3,
NO2-, Fe, etc.).
organotrofas: requieren compuestos orgnicos (hidratos de carbono, hidrocarburos, lpidos,
protenas, alcoholes...).
Desde el punto de vista biosinttico (o sea, para sus necesidades plsticas o de
crecimiento), las bacterias se pueden dividir en:
autotrofas: crecen sintetizando sus materiales a partir de sustancias inorgnicas sencillas.
Ahora bien, habitualmente el concepto de autotrofa se limita a la capacidad de utilizar una
fuente inorgnica de carbono, a saber, el CO2.
hetertrofas: su fuente de carbono es orgnica (si bien otros elementos distintos del C
pueden ser captados en forma inorgnica).
65
Otros conceptos:
autotrofas estrictas son aquellas bacterias incapaces de crecer usando materia orgnica
como fuente de carbono.
Mixotrofas son aquellas bacterias con metabolismo energtico litotrofo (obtienen energa de
compuestos inorgnicos), pero requieren sustancias orgnicas como nutrientes para su
metabolismo biosinttico.
Sean autotrofas o hetertrofas, todas las bacterias necesitan captar una serie de elementos
qumicos, que se pueden clasificar (segn las cantidades en que son requeridos) como:
macronutrientes (C, H, O, N, P, S, K, Mg), y
micronutrientes o elementos traza (Co, Cu, Zn, Mo...)
En la naturaleza, estos elementos se encuentran combinados, formando parte de sustancias
orgnicas y/o inorgnicas. Algunos de los nutrientes sern incorporados para construir
macromolculas y estructuras celulares; otros solo sirven para la produccin de energa, y no
se incorporan directamente como material celular; finalmente, otros pueden ejercer ambos
papeles.
El mundo bacteriano, como conjunto, exhibe una gigantesca versatilidad metablica de uso de
nutrientes: desde auttrofos que obtienen su carbono por reduccin del CO2 y los dems
elementos a partir de fuentes igualmente inorgnicas, hasta hetertrofos capaces de usar
amplia gama de fuentes orgnicas de carbono.
A su vez, dentro de los hetertrofos, podemos encontrar muchos tipos de nutricin muy
distintos, desde bacterias metilotrofas que slo usan metano o metanol como fuente de
carbono y energa, hasta los muy verstiles Pseudomonas, que pueden recurrir a degradar
ms de 100 tipos de fuentes de C, incluyendo sustancias tan "exticas" como hidrocarburos
alifticos y cclicos. De cualquier modo, entre los hetertrofos, una de las fuentes ms tpicas
de carbono consiste en glucosa.
En los hetertrofos-organotrofos, los sustratos carbonados (con un nivel de oxidacin no muy
distinto del material celular -CH2O-) entran simultneamente a:
metabolismo energtico (donde la fuente de C se transforma en CO 2, o en CO2 junto con
otras sustancias no totalmente oxidadas);
metabolismo plstico (anabolismo = biosntesis de nuevo material celular).
Aunque dentro del mundo de los procariotas se encuentre tanta variedad de nutriciones, las
bacterias que pueden nutrirse solamente de sustancias inorgnicas sencillas (H 2O, CO2, N2,
NO3--, NH3, SO4=, fosfatos, etc.) son minora, pero sus procesos metablicos son muy
interesantes. De hecho, existen tipos metablicos que slo han evolucionado en
procariotas.
Como paradigma de esto citaremos los microorganismos quimioautotrofos (o
quimiolitoautotrofos): obtienen su energa de la oxidacin de sustancias inorgnicas
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Ramirez - Balqui
sencillas, el carbono procede del CO2, y el resto de elementos a partir de sales inorgnicas, por
lo que pueden vivir en soluciones de sales minerales.
Lo habitual, sin embargo, es que muchas bacterias recurran, siempre que puedan, a tomar de
los medios ciertos compuestos ms complejos, ya que carecen de ciertas rutas biosintticas.
II.
CLASES DE NUTRIENTES
Podemos clasificar los nutrientes en las siguientes categoras:
universales: agua, CO2, fosfatos y sales minerales;
particulares;
factores de crecimiento.
2.1. NUTRIENTES UNIVERSALES.
El agua
Las bacterias necesitan grandes cantidades de agua. De hecho, salvo excepciones, se
pueden considerar como organismos acuticos. Requieren cierto grado de humedad para
crecer. Desde el punto de vista de sus posibles papeles, el agua es:
el principal constituyente del protoplasto bacteriano;
el medio universal donde ocurren las reacciones biolgicas;
un reactante en exceso (es decir, un producto resultante de algunas reacciones
bioqumicas).
Las fuentes de agua pueden ser:
endgena: procedente de procesos de oxido-reduccin;
exgena (la ms importante): procedente del medio, y que difunde a travs de las
membranas.
Ahora bien, no toda el agua de un ambiente est disponible para la bacteria:
Existen determinadas sustancias y superficies que absorben y adsorben
(respectivamente), de modo ms o menos intenso, molculas de agua, dejndolas
inasequibles a la bacteria.
Los solutos disueltos en agua (p. ej., sales, azcares) tienen afinidad por las molculas
de H2O que los rodean, por lo que stas tampoco estarn a disposicin del
microorganismo.
La disponibilidad de agua se mide por un parmetro llamado actividad de agua o
potencial de agua, indicativo del agua libre, y que se expresa como
aw
Ps
Pw
Donde PS es la presin parcial de vapor de agua en la solucin problema y PW es la

presin parcial de vapor del agua destilada.
Cmo medir el potencial de agua de un medio lquido determinado? Se mide la
humedad relativa del aire que hay encima del medio (en frascos), y este valor se refiere al
67
valor de 100, que es la humedad del aire encima del agua destilada. O sea, la a W =
humedad relativa/100).
Las bacterias tienen valores de aW normalmente entre 0.90 y 0.99.
Bacterias de hbitats oligotrficos (como Caulobacter, Spirillum) tienen aW cercanos a
1.
Bacterias como Escherichia y Streptococcus, que viven en sangre y fluidos corporales,
tienen aW de alrededor de 0.995.
Bacterias marinas como ciertos Vibrio y Pseudomonas encuentran valores de 0.980.
Ciertos bacilos Gram-positivos que resisten mejor la sequedad poseen valores de
0.950.
En el extremo de resistencia encontramos ciertas bacterias xerfilas, capaces de vivir
a aW muy bajos (en torno a 0.75). Muchas de estas bacterias viven de hecho en
medios acuosos, pero donde gran parte del agua no est disponible por las razones
arriba citadas:
bacterias halfilas extremas, como la arqueobacteria Halobacterium, que habita
lagunas hipersalinas;
bacterias (y sobre todo, ciertos microorganismos eucariticos como levaduras)
sacarfilos, que viven en jugos y zumos con altas concentraciones de azcares
El CO2
El anhdrido carbnico es requerido por todo tipo de bacterias:
Las autotrofas lo requieren como fuente de carbono, y lo reducen usando como fuente
de energa la luz (en el caso de las fotoautotrofas) u oxidaciones de determinadas
sustancias inorgnicas (los quimioautolitotrofos).
Las arqueobacterias metanognicas pueden usar el CO2 como aceptor de los
electrones procedentes de la oxidacin del H2, proceso por el que obtienen su energa:
CO2 + 4H2 CH4 + 2H2O (D G'0<0)
Los hetertrofos, aunque no usan el CO2 como fuente de C ni como aceptor de
electrones, necesitan pequeas cantidades para las carboxilaciones en determinadas
rutas anablicas y catablicas.
El origen del CO2 puede ser:
endgeno: procedente de descarboxilaciones que ocurren al degradar la fuente
orgnica de carbono;
exgeno: el CO2 de la atmsfera o disuelto en las soluciones acuosas.
Normalmente, las bacterias crecen a la concentracin de CO2 atmosfrico (0.03%), pero
algunas bacterias (Neisseria, Brucella), cuando se aslan por primera vez, requieren
atmsferas enriquecidas, con 5-10% de CO2. Ello parece deberse a que poseen alguna
enzima con baja afinidad hacia el carbnico; sin embargo, tras varios subcultivos, suelen
adaptarse a crecer a tensiones normales.
68
Ramirez - Balqui
Fsforo
Suele requerirse en forma de fosfatos, sea orgnico o inorgnico. Las bacterias que
pueden usar los fosfatos orgnicos (merced a la posesin de fosfatasas) no dependen
absolutamente de ellos, ya que pueden recurrir igualmente a los fosfatos inorgnicos. Los
fosfatos orgnicos son hidrolizados por fosfatasas extracelulares o (en las Gramnegativas) periplsmicas (p.ej., la fosfatasa alcalina).
El fsforo se usa principalmente para la sntesis de los cidos nucleicos y los fosfolpidos,
pero aparece tambin en coenzimas y en protenas.
Sales minerales
Las sales minerales son la fuente de aniones (p. ej. el Cl --) y de cationes para la clula.
Los siguientes cationes, concretamente, se necesitan en cantidades relativamente
+
++
++
++
grandes: K , Mg , Ca , Fe .
El in potasio (K+):
interviene en la activacin de una variedad de enzimas, incluyendo las que participan
en la sntesis de protenas.
En Gram-positivas est asociado con los cidos teicoicos de la pared.
El in magnesio (Mg++):
estabiliza ribosomas, membranas y cidos nucleicos;
como cofactor en muchas reacciones, especialmente las que implican transferencia de
grupos fosfato. Por ejemplo, en las reacciones que requieren ATP, el Mg++ puede unir
la enzima al sustrato durante el mecanismo de accin de la primera.
Participa de las clorofilas y bacterioclorofilas de bacterias fotosintticas.
El in calcio (Ca++):
es un cofactor de ciertas enzimas, como proteinasas.
El hierro (principalmente como in ferroso, Fe++) suele estar acomplejado en la
naturaleza, formando sales insolubles. Las bacterias disponen de una serie de molculas,
denominadas siderforos, capaces de captar ese hierro (p.ej., hidroxamtas y
enterobactina). El hierro
participa en muchas molculas implicadas en procesos de respiracin, como
citocromos y ferroprotenas no hmicas (protenas con Fe-S);
interviene como cofactor en ciertas enzimas.
Aparte de estos iones que se requieren en cantidades relativamente grandes, las
bacterias necesitan minsculas cantidades de otros elementos (oligoelementos), a los
que tambin se denomina como micronutrientes o elementos traza.
El manganeso (Mn++) es un cofactor de ciertas enzimas, y a veces puede sustituir al
Mg++.
El cobalto (Co++) se requiere casi exclusivamente para la vitamina B12 (de hecho, si
suministramos esta vitamina al medio, la bacteria se vuelve independiente del Co ++
libre).
69
El zinc interviene en la estabilizacin de complejos enzimticos como las ADN- y ARNpolimerasas.

El molibdeno participa en las llamadas molibdoflavoprotenas, implicadas en la
asimilacin de nitratos. Por otro lado, participa como cofactor, junto con el Fe, en el
complejo nitrogenasa de las bacterias fijadoras de N2 atmosfrico.
El nquel participa en hidrogenasas, enzimas que captan o liberan H2.
2.2. NUTRIENTES PARTICULARES.
Se trata de elementos que pueden ser cubiertos de modo muy distinto, dependiendo del
tipo de bacteria que consideremos. Concretamente, los elementos N y S (que requieren
todos los seres vivos) pueden ser captados por las bacterias de modos muy distintos,
dependiendo de sus capacidades biosintticas.
Tanto el N como el S se encuentran en la clula en estado reducido:
el radical -NH2 forma parte de los aminocidos (que a su vez son los sillares de las
protenas) y de las bases nitrogenadas (que participan en los cidos nucleicos y en
algunas coenzimas);
el radical -SH interviene en determinados aminocidos y en coenzimas como la CoA.
En qu formas qumicas entran N y S a las bacterias?
La mayora de bacterias fotosintticas y muchas hetertrofas asimilan estos elementos en
forma combinada inorgnica oxidada:
como NO3--, merced a la actuacin secuencial de nitrato-reductasas y nitritoreductasas asimilatorias.
como SO4=. Este sulfato se activa con ATP, y luego se reduce hasta sulfito y
finalmente sulfhdrico, que ya tiene el estado de reduccin adecuado para la
incorporacin del S.
Muchas bacterias hetertrofas pueden usar alguna forma reducida:
de N inorgnico: amonio (NH4+)
de S inorgnico: sulfuros (S=, SH-)
de N orgnico: aminocidos, pptidos
de S orgnico: cistena.
Muchas de las bacterias que pueden usar amonio como nica fuente de nitrgeno
tambin pueden usar nitratos.
2.2.1. FIJACIN DE NITRGENO.
La atmsfera contiene enormes cantidades de nitrgeno no combinado (libre) en
estado gaseoso: el nitrgeno molecular o dinitrgeno (N 2), que procede de
microorganismos desnitrificantes. Sin embargo, esta gran reserva slo puede
servir de fuente de nitrgeno a ciertos procariotas, las llamadas bacterias
fijadoras de nitrgeno o diazotrofos. Esta notable capacidad bioqumica no ha
evolucionado en eucariotas. (Lo ms a que ha llegado la evolucin es a
seleccionar ciertos tipos de asociaciones simbiticas entre procariotas diazotrofos
y ciertos eucariotas).
70
Ramirez - Balqui
La fijacin del N2 es un proceso de reduccin que convierte el nitrgeno molecular

en amoniaco, segn la siguiente ecuacin:
N2 + 8H+ + 8e + 18 ATP 2NH3 + H2 + 18 (ADP + Pi)
Esta reaccin est catalizada por un complejo enzimtico denominado
nitrogenasa o dinitrogenasa, que consta de dos componentes:
Componente I o nitrogenasa propiamente dicha; posee un cofactor de hierro y
molibdeno (FeMoCo) que forma parte del centro activo. Por ello, a este
componente tambin se le conoce como molibdoferroprotena. (En realidad
existen dos copias del cofactor, cuya estequiometra es MoFe7S9-homocitrato)
Componente II o nitrogenasa-reductasa, que posee tomos de Fe
acomplejados con S de determinadas cistenas (por lo que este componente se
denomina a veces ferroprotena).
Dos cosas llaman la atencin de la ecuacin anterior:
Obsrvese que la reaccin requiere un gran aporte de energa en forma de al
menos 18 ATP (en ocasiones puede llegar a 24 ATP). Ello se debe a que el
dinitrgeno (N = N) es una molcula extremadamente inerte (su energa de
disociacin es de 940 kJ), y su reduccin precisa una gran energa de
activacin para transferirle 6 electrones.
Parte de la actividad nitrogenasa (as como ATP y electrones) "se pierden" en
reducir dos iones H+ hasta H2. Se desconoce la razn de este "despilfarro",
pero se sabe que es un efecto intrnseco de este complejo enzimtico.
Los electrones para la reduccin llegan al complejo por medio de una ferredoxina,
que los transfiere al componente II, que queda reducido al tiempo que por cada
dos electrones transferidos se hidroliza una molcula de ATP. La nitrogenasareductasa reducida se asocia entonces con la nitrogenasa (componente I), y le
transfiere los electrones. Una vez reducida la molibdoferroprotena, sta transfiere
los electrones (y los protones) al N2, hasta convertirlo en dos molculas de
amoniaco. (El centro activo es FeMoCo).
Un aspecto muy importante del complejo nitrogenasa es su extrema sensibilidad
al oxgeno, de modo que queda rpida e irreversiblemente inactivado por este
gas. Ahora bien, esto no significa que la capacidad de diazotrofa est relegada a
bacterias anaerobias, ya que, como veremos en la seccin de taxonoma, la
evolucin ha "inventado" distintas estrategias para proteger a la nitrogenasa en
fijadores aerobios.
Debido a lo "caro" que resulta fijar nitrgeno, no es extrao comprobar que este
proceso est regulado de forma muy estricta ante la presencia en el medio de
fuentes combinadas de nitrgeno (nitratos, amonio, aminocidos):
la actividad nitrogenasa se ve inhibida ante la presencia de N combinado;
ante N combinado, se reprime la transcripcin de los genes codificadores
de la nitrogenasa y dems funciones relacionadas (genes nif).
La nitrogenasa es una enzima relativamente "inespecfica", ya que puede reducir
otras pequeas molculas provistas de triples enlaces, como cianuros (N = C-) y
71
acetileno (HC = CH). La reduccin de acetileno a etileno sirve de base al mtodo

ms usual de medir la actividad nitrogenasa, el llamado ensayo de reduccin del
acetileno, que se registra mediante aparatos de cromatografa gaseosa.
2.3. FACTORES DE CRECIMIENTO.
Los factores de crecimiento son molculas orgnicas especficas que, en muy pequea
cantidad, algunas bacterias necesitan para crecer. Salvo excepciones no tienen funcin
plstica (no son sillares de macromolculas) ni sirven como fuente de energa. Suelen ser
coenzimas o sus precursores, vitaminas, que determinadas bacterias no pueden fabricar
por s mismas, al carecer de parte o toda de una ruta biosinttica.
Ejemplos:
las bacterias del gnero Brucella requieren como factores de crecimiento en sus
medios de cultivo la biotina, niacina, tiamina y cido pantotnico.
Haemophilus necesita suplementos de grupos hemo y piridn-nucletidos.
En la siguiente tabla se muestran algunas de las vitaminas y cofactores requeridos por
algunas bacterias:
Factor o vitamina
p-aminobenzoico (PABA)
Acido flico
Biotina
Cobalamina (vitamina B12)
Niacina (cido nicotnico)
Riboflavina
cido pantotnico
Tiamina (vitamina B1)
Complejo B6 (piridoxal,
piridoxamina)
Grupo
Vitamina
K,
quinonas
I.
72
Funciones principales
Precursor del cido flico
Metabolismo
de
compuestos
C 1,
transferencia de grupos metilo.
Biosntesis de cidos grasos; fijacin de CO2
Reduccin y transferencia de compuestos
C1; sntesis de desoxirribosa
Precursor del NAD; transferencia de
electrones en reacciones redox
Precursor de FAD y FMN
Precursor de la CoA
Descarboxilaciones; transcetolasas.
Transformaciones
de
aminocidos
y
cetocidos
Transportadores de electrones (ubiquinonas,
menaquinonas, etc.)
MEDIOS DE CULTIVO
El conocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el
laboratorio. Como acabamos de ver, en general, todos los microorganismos tienen parecidos
requerimientos de macro- y micronutrientes, aunque ha quedado claro que la forma en que
cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y otras, as como la
cantidad relativa de cada nutriente. Los microbilogos, en su trabajo cotidiano, estn
acostumbrados a manejar multitud de "recetas" o frmulas correspondientes a muchos tipos de
medios de cultivo.
Ramirez - Balqui
Un medio de cultivo es una solucin acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un coloide
en estado de gel) en la que estn presentes todas las sustancias necesarias para el
crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s). Los medios de cultivo se pueden
clasificar, en primera instancia, en tres grandes tipos:
1).
Medios complejos o indefinidos: su composicin qumica exacta se desconoce, ya que

son el producto de realizar infusiones y extractos de materiales naturales complejos:
Ejemplos:
Digeridos crudos de extracto de carne
Digeridos de extracto de levadura
Digeridos de peptona de carne o de soja
Digeridos de casena (de la leche).
Con ellos se logra un tipo de medio rico nutricionalmente, aunque indefinido
qumicamente. Si lo que pretendemos simplemente es obtener un buen crecimiento
bacteriano, este tipo de medios es ideal, ya que su confeccin es fcil y rpida (basta
pesar una cierta cantidad del extracto desecado, suministrado por casas comerciales,
disolverlo en agua y esterilizar en autoclave, antes de inocular e incubar la bacteria con la
que queramos trabajar). Estos medios contienen fuentes variadas de C y N orgnicos,
sales minerales y micronutrientes. Sin embargo, con ellos no podemos tener un control
nutricional preciso, ya que desconocemos la composicin qumica y proporcin exacta de
los distintos nutrientes.
2).
Medios sintticos o definidos: se obtienen disolviendo en agua destilada cantidades

concretas de distintas sustancias qumicas puras, orgnicas y/o inorgnicas. La
composicin concreta de un medio sinttico depender de la bacteria que queramos
cultivar: lgicamente, un medio definido para una bacteria con grandes capacidades
biosintticas ser ms sencillo que el medio definido de otra bacteria con menores
posibilidades biosintticas.
3).
En tercer lugar, podemos fabricar un tipo de medio "mezcla" de los anteriores,

denominado medio semisinttico: llevan algunas sustancias qumicas cuya naturaleza y
cantidad conocemos, junto con sustancias de naturaleza y composicin indefinidas.
Cualquiera que sea el tipo de medio, de los tres que acabamos de citar, podemos
elaborar dos tipos de "versiones", segn su estado aparente:
medios lquidos (por ejemplo, los dos de la tabla)
medios slidos: derivan de los lquidos simplemente aadiendo a la solucin nutritiva
un coloide en estado de gel, que solidifica (da consistencia) a esta solucin.
En los primeros tiempos de la Bacteriologa slo se conoca como sustancia gelificante
incorporable a los medios la gelatina. Sin embargo, presenta muchos inconvenientes, ya
que funde a 25oC (por encima de esta temperatura el medio se lica), y adems, muchas
bacterias presentan gelatinasas que hidrolizan la gelatina.
73
El gelificante ms usado es el agar-agar, extrado de algas rojas (p. ej. Gelidium), del
cual existen versiones ms o menos purificadas (las ms puras estn ms enriquecidas
en el polisacrido agarosa; son las que se emplean para los medios definidos, con objeto
de evitar la introduccin de sustancias "contaminantes" inadvertidas que falseen las
interpretaciones sobre el comportamiento nutricional de la bacteria).
El agar presenta la gran ventaja de que una vez gelificado, no funde hasta cerca de los
100oC, lo que permite su uso para la inmensa mayora de bacterias, que son mesfilas.
Para cultivar ciertas bacterias (sobre todo los quimioautotrofos) se suele recurrir a un
gelificante inorgnico, el silicagel o gel de slice.
Finalmente, introduciremos otra serie de conceptos relativos a medios de cultivo, que al
igual que los anteriores, sern tratados con la suficiente amplitud en las sesiones de
clases prcticas:
Medios selectivos son aquellos que permiten seleccionar un tipo (o unos pocos tipos) de
microorganismos. En el laboratorio se emplean mucho medios selectivos slidos que
incorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas bacterias, pero
permiten el crecimiento de otras. (P. ej. medios que llevan violeta cristal inhiben el
crecimiento de bacterias Gram-positivas.
Medios diferenciales son aquellos que permiten distinguir a simple vista dos o ms tipos
de bacterias en funcin de su distinto comportamiento respecto de algn nutriente del
medio. Ese comportamiento diferencial se traduce normalmente en un viraje de color de
una sustancia indicadora presente en el medio.
Ejemplos:
en el medio EMB (eosina-azul de metileno) ciertos tipos metablicos de bacterias
producen cambios de color y precipitacin de sales cuando producen cidos por
fermentacin de ciertas fuentes de carbono.
El medio llamado agar-sangre lleva un 5% de sangre de caballo o carnero, lo cual
revela la capacidad (y el tipo) de hemolisis de ciertas bacterias.
Algunos medios son simultneamente selectivos y diferenciales.
P. ej., el agar de MacConkey, que el alumno manejar en la segunda tanda de prcticas.
Se trata de un medio de color rosado y transparente, que posee, entre otras sustancias,
lactosa, peptonas, el colorante vital rojo neutro, sales biliares y violeta cristal.
Este medio es selectivo contra muchas bacterias Gram-positivas debido al violeta cristal,
y tambin contraselecciona muchas Gram-negativas debido a las sales biliares (que son
agentes tensioactivos que desorganizan muchas membranas externas). En cambio, las
Enterobacterias estn evolutivamente adaptadas a soportar sales biliares en su hbitat
natural (el intestino de vertebrados superiores), y pueden crecer en este medio.
74
Ramirez - Balqui
En su faceta de medio diferencial, el agar MacConkey permite visualizar dos tipos de

Enterobacterias segn que puedan o no fermentar la lactosa, con produccin de cidos.
Las bacterias fermentadoras de lactosa (Lac+), excretan al medio gran cantidad de cidos
orgnicos, lo que provoca que sus colonias, y sus alrededores aparezcan de color rojo
intenso, debido al viraje del rojo neutro; adems, se forma un halo turbio a cierta distancia
de estas colonias, fenmeno ocasionado por la precipitacin de las sales biliares inducida
por la acidez. En cambio, las bacterias Lac-, al no poder usar la lactosa, recurren como
fuente de C a las peptonas, a las que desaminan: incorporan el esqueleto carbonado,
excretando iones NH4+, que alcalinizan el medio de cultivo, lo cual se traduce en que el
indicador rojo neutro vira a amarillo.
II.
METABOLISMO ENERGTICO.
El metabolismo es el conjunto de reacciones bioqumicas que permiten el crecimiento de un
organismo (por lo tanto, en bacterias, que conduce a la creacin de nuevas clulas). El
metabolismo de la clula comprende dos grandes tipos de reacciones:
1. reacciones de mantenimiento, que suministran
a. energa
b. poder reductor
c. precursores metablicos
2. reacciones del anabolismo (biosntesis), que usan energa y poder reductor procedente de
las reacciones de mantenimiento.
Las bacterias requieren aporte continuo y de acceso inmediato de energa, que es usada en
procesos de:
biosntesis (anabolismo)
transporte activo
translocacin de protenas a travs de la membrana citoplsmica
movimiento flagelar
bioluminiscencia
En bacterias, al igual que en eucariotas, la conservacin intracelular de energa ocurre
principalmente por medio de la sntesis de ATP:
ADP3- + H+ + PO4H2-
ATP4- + H2O
La hidrlisis de ATP hasta ADP y P genera una variacin de energa libre Go'= -31 kJ (-7,3
kcal). La sntesis de ATP a partir de ADP y P requiere una Go' de +31 kJ. Los mtodos
usados por las bacterias para generar este ATP son principalmente:
fosforilacin a nivel de sustrato;
fosforilacin oxidativa;
fotofosforilacin (durante la fotosntesis).
Cada uno de estos procesos implica uno o varios pasos de reacciones redox exergnicas,
pero la manera en que esas reacciones exergnicas se acoplan a la sntesis de ATP vara
entre la fosforilacin a nivel de sustrato y las otras dos.
75
En esta reaccin se libera energa libre, cuyo valor viene expresado por la frmula:
G0'= - n F E0'
n
= n de electrones transferidos
F
= constante de Faraday = 96,6 kJvolt-1equivalentes--1
E0' es la diferencia entre los potenciales de reduccin del donador (pareja D/DH 2) y del
aceptor (pareja A/AH2).
Una reaccin redox exergnica de este tipo se puede acoplar a la consecucin de trabajo til:
formacin de un compuesto rico en energa;
formacin de un gradiente de concentracin y/o de carga elctrica a ambos lados de una
membrana.
Ambos tipos de trabajo se pueden usar en la sntesis de ATP.
Por lo tanto, los seres vivos, para poder obtener su moneda energtica (principalmente ATP),
han de captar alguna fuente de energa externa, del medio ambiente. Veamos, pues, cules
son los tipos de energa que captan las bacterias y los correspondientes tipos de
metabolismos energticos:
1. Si la energa procede de radiaciones (en los cuantos de una determinada longitud de onda
de la luz visible): bacterias fototrofas, que a su vez pueden ser:
a. fotolitotrofas: captan energa lumnica en presencia de sustancias inorgnicas;
b. fotoorganotrofas: captan energa lumnica con requerimiento de sustancias orgnicas.
2. Si la energa se desprende a partir de molculas qumicas en reacciones biolgicas de
xido-reduccin: bacterias quimiotrofas, que a su vez pueden ser:
a. quimiolitotrofas: captacin de energa qumica a partir de sustancias inorgnicas;
b. quimiorganotrofas: captacin de energa qumica a partir de sustancias orgnicas.
Veamos ahora lo que diferencia a grandes rasgos a la fosforilacin a nivel de sustrato respecto
de la fosforilacin oxidativa y la fotofosforilacin:
A) La fosforilacin a nivel de sustrato es un sistema usado por ciertas bacterias
quimiorganotrofas. El sustrato orgnico (donador de electrones) es oxidado por un
coenzima (p. ej., NAD+), de manera que se origina un intermediario no fosforilado con una
gran energa de hidrlisis. Dicho intermediario experimenta una sustitucin con un fosfato,
para dar la correspondiente forma acil-fosfato (siendo este enlace de alta energa).
Finalmente, este acil-fosfato dona su fosfato de alta energa al ADP, que pasa a ATP.
Las fosforilaciones a nivel de sustrato se caracterizan por lo siguiente:
son procesos escalares (es decir, no influye su situacin espacial dentro de la clula);
son series de reacciones bioqumicas en las que la transferencia de un grupo qumico
(ej., el fosfato) se cataliza por enzimas solubles (en el citoplasma);
existen intermediarios metablicos (antes de llegar al ATP) en los que el fosfato est
unido covalentemente.
76
Ramirez - Balqui
B) En cambio, tanto la fosforilacin oxidativa como la fotofosforilacin son procesos

caracterizados por:
ser vectoriales (orientados en el espacio);
estar ligados a membrana;
implicar una secuencia ordenada de transportadores de electrones que sufren
oxidaciones y reducciones reversibles (cadena transportadora de electrones, c.t.e.).
no hay intermediarios covalentes ricos en energa, sino que la transferencia de energa
se realiza por medio de un gradiente electroqumico de protones (y, en algunos
casos, de cationes). Este gradiente de protones se puede emplear a su vez para:
o sntesis de ATP,
o transporte de nutrientes,
o translocacin de protenas fuera del protoplasto,
o movimiento flagelar.
III. CAPTACIN DE ENERGA EN LAS BACTERIAS QUIMIOTROFAS.
En los organismos quimiotrofos, la captacin de energa consiste esencialmente en la
oxidacin de un sustrato reducido (orgnico en quimiorganotrofos e inorgnico en
quimiolitotrofos) con una reduccin concomitante de un aceptor de electrones (que a su vez
puede ser orgnico o inorgnico), y todo ello acoplado a un sistema de fosforilacin del ADP,
que se convierte en ATP.
3.1. FOSFORILACIN A NIVEL DE SUSTRATO. FERMENTACIONES.
Recordemos aqu lo dicho anteriormente: La fosforilacin a nivel de sustrato es un
sistema usado por ciertas bacterias quimiorganotrofas. El sustrato orgnico (donador de
electrones) es oxidado por un coenzima (p. ej., NAD+), de manera que se origina un
intermediario no fosforilado con una gran energa de hidrlisis. Dicho intermediario
experimenta una sustitucin con un fosfato, para dar la correspondiente forma acil-fosfato
(siendo este enlace de alta energa). Finalmente, este acil-fosfato dona su fosfato de alta
energa al ADP, que pasa a ATP.
gliceraldehido-3-P 1,3-difosfoglicrico 3-fosfoglicrico
La fosforilacin a nivel de sustrato est acoplada a un proceso metablico denominado
fermentacin. Durante la fermentacin, el sustrato orgnico reducido (DH 2) es
catabolizado, de modo que como acabamos de ver, se produce ATP. Este catabolismo
genera, adems:
equivalentes de reduccin (en forma de NADH y otros cofactores reducidos), e
intermediarios oxidados de la ruta catablica.
Pues bien, es caracterstico de las fermentaciones que los equivalentes de reduccin
reaccionen con uno de esos intermediarios (A), que de este modo se reduce a AH 2
(producto de la fermentacin), regenerndose el cofactor en forma oxidada (NAD +)
para el siguiente ciclo.
77
El rendimiento de las fermentaciones, expresado como variacin de energa libre, es

bajo. En la fermentacin homolctica se producen 2 moles de ATP por cada mol de
glucosa consumido (frente a los 28 moles de ATP/mol de glucosa en la respiracin
aerobia). Esto significa que para que el microorganismo crezca en estas condiciones,
degrada grandes cantidades de sustrato fermentable.
Las fermentaciones se dan en determinados microorganismos quimiorganotrofos, que
pueden ser anaerobios obligados o anaerobios facultativos (cuando crecen en ausencia
de O2).
Hay una gran variedad de fermentaciones microbianas, y cada tipo libera uno o varios
productos de fermentacin caractersticos. Algunos ejemplos:
Fermentacin lctica
Fermentacin alcohlica
Fermentacin cida-mixta
Fermentacin butilngliclica
Fermentacin aceto-butrica
Lactato
etanol, CO2
etanol, succinato,
lactato, CO2, H2
butilnglicol, CO2
acetato, acetona,
etanol, CO2, H2
acetato,
formiato,
butirato,
butanol,
3.2. FOSFORILACIN OXIDATIVA. RESPIRACIONES.

Respiracin es la obtencin de energa por oxidacin de sustratos orgnicos (en
quimiorganotrofas) o inorgnicos (quimiolitotrofas), pero los coenzimas reducidos (ej.,
NADH) transfieren los electrones a un aceptor final oxidado, no directamente (como en la
fermentacin), sino a travs de una cadena transportadora de electrones.
Si el aceptor final es el O2, hablamos de respiracin aerobia;
Si el aceptor final es distinto del O2 (nitrato, sulfato, etc.), respiracin anaerobia.
En ambos casos, la transferencia se da ordenadamente, en la direccin de mayor
potencial redox positivo, con la consiguiente liberacin de energa libre. Como veremos
enseguida, esta energa libre se va a traducir en un potencial electroqumico de protones,
cuya disipacin a travs de ATP-asas de membrana origina ATP, conocindose este
proceso como fosforilacin oxidativa.
Esquema y balance de la fosforilacin oxidativa
Como el alumno seguramente sabr, el mecanismo de la fosforilacin oxidativa se suele
explicar en base a la teora quimiosmtica de Mitchell (1961 y aos siguientes).
Recordemos que la c.t.e. est formada por una serie ordenada de molculas
transportadoras situadas (en bacterias) en la membrana citoplsmica (y en sus
invaginaciones), molculas que sufren oxidaciones y reducciones reversibles:
DH2 + A
78
AH2 + D
Ramirez - Balqui
El alumno conocer por la asignatura de Bioqumica los principales tipos de componentes

de las c.t.e. respiratorias
flavoprotenas (Fp), dotadas de grupos FAD o FMN
protenas no hmicas de Fe-S
quinonas:
o ubiquinona (UQ)
o menaquinona (MQ), ms frecuente en bacterias Gram-positivas.
citocromos (protenas hmicas con Fe quelado).
Observar que algunos de estos transportadores transportan tomos de H (o sea,
protones y electrones), mientras que otros transportan nicamente electrones.
La situacin de los transportadores dentro de la membrana es asimtrica, lo que
condiciona que el transporte sea un proceso vectorial (es decir, tiene un sentido
determinado), de modo que los H salen hacia afuera y los electrones tienden a entrar al
interior.
Como resultado de todo ello, tenemos que existen determinados puntos de la c.t.e.
(llamados bucles o lazos translocadores de protones) en los que el efecto neto es la
salida de protones al exterior de la membrana citoplsmica (concretamente, en los puntos
donde confluyen un transportador de H y otro de electrones). Es decir, existe una
translocacin de protones hacia el exterior ligada a las reacciones redox que ocurren en
la c.t.e.
Por otro lado, la membrana es impermeable a los protones, por lo que los protones
translocados a resultas del funcionamiento de las c.t.e. no pueden entrar directamente.
Por lo tanto, se crea un gradiente electroqumico de protones, compuesto de gradiente
osmtico de esos iones H+ (pH) y un gradiente de carga elctrica (). Este gradiente
es una forma de energa potencial que puede realizar trabajo.
El valor de este gradiente electroqumico de protones o fuerza protn motriz (f.p.m.) es:
p = Z H (expresado en milivoltios, mV),
Donde Z = 2,3 R T/F, siendo R = constante de los gases, T = temperatura absoluta, F =
constante de Faraday
Como ya dijimos, esta p (f.p.m.) es capaz de realizar trabajo, bajo la forma de:
transporte activo
alimentar el motor flagelar
sntesis de ATP.
Veamos, pues, cmo se produce esta sntesis de ATP a partir del gradiente de
protones:
La sntesis de ATP ocurre gracias al complejo ATP-asa, funcionando como ATPsintetasa. Este complejo consta de varios polipptidos que conforman dos porciones:
79
la hidrofbica BF0, inserta en la membrana citoplsmica, y la BF1 a modo de tallo que

se proyecta hacia el interior celular.
La porcin BF0 forma un canal a travs de la membrana, por donde pueden pasar H +
desde el exterior al interior, y agua desde dentro hacia afuera.
La porcin BF1 es la parte enzimticamente activa del complejo.
Esencialmente, el mecanismo consiste en que la disipacin del gradiente de protones a
travs de BF0 suministra la energa para la sntesis de ATP por parte de la BF 1. La
reaccin se puede expresar as:
2H+ (ext) + ADP (int) + P (int)
2H+ (int) + ATP (int) + H2O (ext)
El balance final del funcionamiento de la c.t.e. es:

DH2(int) + A(int) + ADP(int) + P(int) D(int) + AH2 + ATP(int) + H2O (ext)
El esquema anterior hace referencia al funcionamiento de una cadena transportadora con
un solo bucle translocador de protones. Pero en la realidad las c.t.e. suelen poseer ms
de uno de estos bucles.
Vase en la Fig. la c.t.e. de Paracoccus, una bacteria que posee un sistema similar al
de las mitocondrias, donde se observan 3 sitios donde termodinmicamente la
variacin de energa libre es suficiente para apoyar la sntesis de una molcula de
ATP.
Vase tambin la c.t.e. de E. coli, cuando usa el O2 como aceptor final de electrones.
En esta cadena podemos constatar algo relativamente frecuente en las cadenas
bacterianas:
En los quimiolitotrofos, la c.t.e. respiratoria funciona en los dos sentidos:
en su sentido "normal", ya estudiado. Un donador inorgnico de electrones cede
electrones, que llegan a la c.t.e., que crea un gradiente de protones, cuya disipacin a
travs de ATP-asa genera ATP;
pero estas bacterias necesitan equivalentes de reduccin (NADPH) para reducir el
CO2 (su fuente exclusiva de C) hasta material orgnico celular [CH 2O]. Este NADPH lo
logran merced a un flujo invertido de electrones a travs de la c.t.e., usando para
ello como energa parte del potencial de protones generado por el flujo normal.
Cadenas de electrones ramificadas:
Muchas cadenas respiratorias aerobias muestran ramificaciones alternativas, sobre todo
a nivel de los citocromos terminales. El papel principal de estas ramificaciones es lograr
flexibilidad en la ruta de transferencia de electrones, de manera que se obtengan
rendimientos mximos en ciertos sustratos y condiciones de crecimiento, y para
minimizar los efectos nocivos de otros.
Por ejemplo, cuando Azotobacter (fijador aerobio de N2) crece fijando nitrgeno, usa
una ramificacin que gasta muchsimo oxgeno como aceptor final (aunque el
80
Ramirez - Balqui
rendimiento en ATP es menor); con ello logra evitar que entre oxgeno al citoplasma,
con lo que protege a la nitrogenasa de la inactivacin por oxgeno.
Mecanismo de la ATP-sintasa dependiente de protones
En los aos recientes se est avanzando en el mecanismo de la ATP-sintasa (con
concesin de premio Nobel de Qumica 1997 a tres bilogos que han contribuido en este
aspecto):
F0 es un complejo integral de membrana, que transloca los protones. Est compuesto
de {a, b2, c10}. F1 constituye la porcin intracitoplasmtica, dotada de los sitios
catalticos. Su composicin se puede expresar como {3, 3, , , ). Ambas porciones
estn unidas entre s por enlaces inicos e hidrfobos.
Al parecer, la translocacin de unos 4 protones a travs de F0 est acoplada, por
medio de grandes cambios conformacionales, a la sntesis de una molcula de ATP en
las subunidades de la F1, por un notable mecanismo de catlisis rotacional:
El que los 4 protones entren por F0 parece que induce un cambio conformacional en la
subunidad de F1, que a su vez obliga a girar al F1, con una sntesis de ATP.
Las ATP-asas de membrana pueden funcionar tambin en sentido inverso al de sntesis,
es decir, como ATP-hidrolasas: se produce hidrlisis de ATP y extrusin de protones al
exterior. Por lo tanto, en este sentido de funcionamiento, se genera un gradiente de
protones a expensas de gasto de ATP intracelular. Esto muestra una vez ms que el ATP
y el gradiente de protones se pueden considerar como formas diferentes e
interconvertibles de energa celular.
Las ATP-asas productoras de gradientes de protones existen en bacterias no
respiratorias, que carecen de c.t.e., como por ejemplo, las bacterias anaerobias del cido
lctico. Estas bacterias obtienen su ATP por fosforilacin a nivel de sustrato, en sus
procesos de fermentacin, y a su vez, parte del ATP lo convierten, por las ATP-asas
hidrolticas, en una fuerza protn-motriz que se usa para transporte de nutrientes y para
alimentar al motor flagelar.
Respiraciones anaerbicas
Como ya hemos dicho, en algunas bacterias, al final de la c.t.e. puede existir un aceptor
diferente del oxgeno (respiracin anaerobia). Los aceptores y sus respectivos productos
reducidos (A AH2) son:
NO3-- N2
SO42- SH2
fumarato succinato
CO2 CH4
Fe3+ Fe2+
Con estos aceptores se obtiene menos energa que con el oxgeno, porque la pareja
O2/H2O es ms oxidante que las otras.
El uso de nitratos, sulfatos y CO2 como aceptores finales de electrones (y no como
material a incorporar al metabolismo plstico) se denomina metabolismo disimilativo (o
81
desasimilativo). Para distinguirlo del asimilativo. El producto reducido se excreta al

ambiente de la bacteria.
El uso disimilativo de nitrato se llama desnitrificacin, y ocurre por medio de una serie
de fases donde el N va cambiando su estado de oxidacin:
NO3-- NO2- (nitrito) NO (xido ntrico) N2O (x. nitroso) N2 (dinitrgeno)
Hasta la llegada de las actividades industriales humanas, todo el dinitrgeno de la
atmsfera proceda de estos procesos desnitrificantes.
El uso de sulfato como aceptor de electrones slo lo hacen las bacterias
sulfatorredutoras, por una ruta especial en la que el sulfato primero tiene que activarse
con ATP (formando la adenosina-fosfo-sulfato, APS). La mayora son quimiorganotrofos,
pero algunos pueden usar H2 donador de electrones (quimiolitotrofos).
Las arqueobacterias metanognicas son los nicos seres vivos capaces de obtener
energa acoplando la oxidacin del hidrgeno molecular con el uso de CO 2 como aceptor
de electrones (actuando en estas condiciones como quimiolitotrofos):
4H2 + CO2 CH4 + 2H2O
Tipos de quimiolitotrofos
Insistamos en el hecho de que la capacidad de obtener energa por fosforilacin oxidativa
a partir de donadores inorgnicos de electrones slo ha evolucionado en ciertos grupos
de procariotas. Cada grupo fisiolgico usa un tipo de donador inorgnico:
bacterias de hidrgeno (H2)
bacterias del hierro (Fe2+)
20
bacterias del azufre (S , S ).
bacterias nitrificantes, con dos subtipos diferentes: las oxidadoras de amoniaco
(llamadas nitrosas) y las oxidadoras del nitrito (llamadas ntricas).
En general, el mecanismo de generacin de ATP es similar al de quimioorganotrofas
respiradoras. Los electrones extrados del donador exgeno (en este caso inorgnico)
pasan a una cadena transportadora de electrones hasta un aceptor final, que suele ser el
oxgeno.
Pero a excepcin del H2, los dems donadores inorgnicos de electrones tienen un
potencial de oxidacin E0' menor que el del NADH, por lo que la oxidacin de estos
donadores inorgnicos slo puede generar energa, pero no poder reductor de modo
directo. Para obtener poder reductor emplean transporte inverso de electrones: parte del
gradiente electroqumico creado se emplea en hacer que electrones viajen por la c.t.e. (o
una parte de ella) en sentido inverso, para poder reducir el NAD.
82
Ramirez - Balqui
IV. CAPTACIN DE ENERGA EN LAS BACTERIAS FOTOTROFAS: FOTOFOSFORILACIN

Los organismos fotosintticos usan energa de la luz para convertir el CO2 en material celular,
segn la frmula general:
2 H2A + CO2
energa
de
luz
(hv)
[CH2O] + H2O + 2 A
En Oxifotobacterias, algas y plantas verdes, H2A = H2O, como agente reductor. Por lo tanto,
al oxidarse se genera O2.
En Anoxifotobacterias el reductor exgeno ("H2A") puede ser H2, S=, S2O3-, etc.
Tenemos, pues, dos modalidades de fotosntesis, la oxignica y la anoxignica. Como
veremos, en ambas pueden existir dos versiones de un mecanismo de obtencin de energa a
partir de la luz visible: fotofosforilacin cclica y acclica.
En la fotofosforilacin cclica (FFC) no existe aporte de un agente reductor externo ni de
agente oxidante externo.
Su nica funcin es transformar la energa de la luz en un gradiente de protones (f.p.m.),
que a su vez puede convertirse en ATP.
No se originan equivalentes de reduccin (NADPH), y por lo tanto, no hay fijacin de CO2.
En cambio, en la fotofosforilacin acclica (FFA) un donador exgeno de electrones (H2A)
servir para que, por accin de la luz, se produzcan equivalentes de reduccin (NADPH, o
NADH), que a su vez se usarn para la reduccin (asimilacin) de CO2 hasta materia orgnica.
Al igual que en la cclica, se produce gradiente de protones, convertible en ATP.
4.1. COMPONENTES DEL APARATO FOTOSINTTICO.
Fotosistemas: Catalizan la conversin de la energa de la luz, capturada en
molculas excitadas de clorofila o bacterioclorofila en una forma til de energa. Estn
constituidos por complejo antena y centro de reaccin.
Cadenas transportadoras de electrones: Estas cadenas estn ligadas de forma
estrecha al centro de reaccin, y crean una f.p.m.
Antes de describir el funcionamiento del aparato fotosinttico, describamos brevemente
las principales molculas implicadas:
A) Clorofilas y bacterioclorofilas. Estos tetrapirroles cclicos quelados con Mg++
pueden formar parte tanto de los pigmentos antena como de los centros de reaccin.
Las clorofilas del centro de reaccin son mucho menos abundantes que las del
complejo antena. Tpicamente son 4 molculas, de las cuales dos estn asociadas a
protenas, de modo que en este estado actan como "trampas" para los cuantos de
luz. Como veremos, estas clorofilas especiales, tras excitarse, se oxidan, por lo que
se denominan clorofilas fotoactivas. La luz convierte a estas clorofilas desde su
estado basal a su estado excitado, en el que tienen un E0' negativo, por lo que
entonces pueden ceder electrones (oxidarse) fcilmente.
83
B) Carotenoides. Forman parte del complejo antena. Sus funciones son:

proteccin contra los efectos potencialmente perjudiciales derivados de la
interaccin entre la luz y el oxgeno;
como pigmentos antena, captadores de luz (aunque menos eficientes que otros).
C) En las Oxifotobacterias, existe, adems un conjunto de ficobiliprotenas,
organizadas en complejos supramoleculares denominados ficobilisomas,
dispuestos (como ya vimos en el tema 8) en la superficie de los tilacoides.
Las principales ficobiliprotenas son ficocianina, ficoeritrina y aloficocianina, y
constituyen el complejo antena en las Cianobacterias.
D) Feofitinas y bacteriofeofitinas. Son similares a las respectivas (bacteria) clorofilas,
++
excepto que no estn queladas con Mg . Actan como aceptores inmediatos del
electrn que pierde cada (bacterio) clorofila del centro de reaccin.
E) Otros componentes. En el mismo centro de reaccin se encuentran los primeros
componentes de la c.t.e. fotosinttica: quinonas especiales acomplejadas con Fe.
Por lo dems, las c.t.e. fotosintticas contienen molculas de tipos parecidos a las ya
estudiadas en las c.t.e. respiratorias: quinonas, citocromos y ferroprotenas no
hmicas.
4.2. FUNCIONAMIENTO DE UN FOTOSISTEMA.
Para estudiar el funcionamiento, hagmonos una idea de cmo estn organizados los
principales componentes que acabamos de citar dentro del aparato fotosinttico:
Complejo antena
Es un conjunto de pigmentos captadores de luz, en gran nmero (desde unos 50 hasta
miles). Sobre ellos incide la luz solar, de manera que se van transfiriendo la energa de
unos a otros, en paquetes (excitones), pero sin oxidarse, en un fenmeno conocido como
resonancia inductiva.
El complejo antena acta como un "embudo", captando energa lumnica, y canalizndola
hacia el centro de reaccin, donde como veremos enseguida, esta energa podr ser
convertida a una forma til.
Centro de reaccin (C.R.).
Para hacernos una idea concreta de un centro de reaccin, mostraremos uno de los
mejor estudiados: el de la anoxifotobacteria purprea Rhodopseudomonas viridis (el
primero en desentraarse a nivel molecular, en el ao 1985, mediante tcnicas de
difraccin de rayos X).
posee 4 bacterioclorofilas, de las cuales dos (denominadas P870) son las
fotoqumicamente activas, debido a su asociacin con tres protenas del centro de
reaccin (denominadas L, M y H). Todo el conjunto se encuentra en la bicapa lipdica.
2 bacteriofeofitinas
2 ubiquinonas y un Fe, que constituyen el complejo QFe.
84
Ramirez - Balqui
Antes de dar una visin ms detallada, veamos un pequeo resumen del modo de
funcionamiento del centro de reaccin:
Llega un cuanto de luz al par de bacterioclorofilas especiales. La bacterioclorofila
(Bcfla.) se excita (Bclfla*);
la Bclfla* excitada se oxida (pierde un electrn) Bclfla+;
el electrn es captado rpidamente por el aceptor inmediato (la bacteriofeofitina), que
a su vez lo pasa a la quinona cercana.
En todo este proceso se va produciendo una separacin de cargas, porque el
electrn va quedando cada vez ms separado de la Bclfla+ oxidada. El electrn pasar
a otra quinona situada fuera del C.R., convirtindose en un electrn de alta energa.
Veamos en detalle la secuencia de transferencias en el centro de reaccin.
1. Cada Bclfla. especial (P870 en el ejemplo que estamos estudiando), tras excitarse
(pasar Bclfla*), se oxida (pierde electrn), pasando a Bclfla+.
2. El electrn pasa a una Blcfla. "normal" (P800, no asociada a protenas).
3. El electrn original de cada una de las dos Blcflas. especiales es recogido por las
bacteriofeofitinas.
4. Los dos electrones (uno por feofitina) pasan a una ubiquinona (QA) estrechamente
ligada al centro de reaccin (la quinona se reduce: QAH). Observar que se ha originado
una separacin de cargas, de modo que se ha formado una especie de "agujero"
cargado positivamente: las bacterioclorofilas con carga positiva tienen ahora una alta
afinidad por electrones.
5. La Bclfla+. captura un electrn de un citocromo cercano (cit c2, ligado al centro de
reaccin). Normalmente este citocromo es un donador dbil de electrones, pero ahora
los cede, debido al intenso "agujero" de carga positiva representado por las Bclflas +.
6. Mientras tanto, el electrn de la QA pasa a una segunda ubiquinona del centro de
reaccin (QB).
7. El electrn abandona el centro de reaccin y pasa a otra quinona, que se encuentra
libre en la bicapa lipdica. Esta quinona, una vez reducida, es un buen reductor
(donador de electrones). El electrn pasa a la c.t.e. (con citocromos b-c).
8. El funcionamiento de esta c.t.e. provoca una translocacin de protones fuera de la
membrana, o sea, un potencial electroqumico de protones o f.p.m., cuya disipacin a
favor de las ATP-asas se traduce en produccin de ATP (fotofosforilacin).
4.3. TIPOS DE FOTOFOSFORILACIN.
Fotofosforilacin cclica
En la FFC, la (bacterio) clorofila del centro de reaccin (fotosistema I) sirve tanto como
donador primario de electrones como aceptor final de electrones procedentes de una
c.t.e.
Los electrones no pueden salir del ciclo. Cuando los electrones pasan por la confluencia
entre una quinona y un complejo de citocromos se produce translocacin de protones al
exterior, lo que supone p, que a su vez se puede convertir en ATP.
85
Como los electrones no pueden salir del ciclo, no se crea poder reductor. Por lo tanto,
este poder reductor ha de venir de otra fuente, y no del funcionamiento del fotosistema.
(Fuente qumica, que permite un flujo invertido de electrones).
Fotofosforilacin acclica
En Anoxifotobacterias: FFA anoxignica
El fotosistema I (FSI) se excita y la Bclfla. Se oxida (Bclfla+). Los electrones cedidos por el
C.R. sirven para reducir (junto con protones) al NAD (P)+ hasta NAD (P)H + H+ (es decir,
se crea poder reductor).
Ahora bien, cmo se regenera la bacterioclorofila, es decir, cmo se reduce la Bclfla+
oxidada? En la FFA existe un donador exgeno de electrones distinto del H2O: SH2, S0,
H2, ciertos compuestos orgnicos. Dicho donador cede electrones al C.R. a travs de una
c.t.e., que como es habitual, crea un potencial p (f.p.m.) convertible en ATP.
En Oxifotobacterias, al igual que en algas verdes y plantas superiores: FFA
oxignica
Estos organismos usan H2O como donador exgeno de electrones; la FFA es ms
compleja, ya que el H2O requiere un elevado potencial de reduccin para poder extraerle
los electrones, y el FSI no es un oxidante suficientemente fuerte como para captar
electrones directamente del agua.
La manera de resolver este problema es acoplar un fotosistema adicional (FSII), dotado
de un E0' ms alto que el FSI, y que funciona en paralelo con ste.
El FSI se activa y se oxida por la luz, transfiriendo los electrones a una ferredoxina,
que a su vez los cede al NADP+, para generar poder reductor (NADPH + H+).
Ahora bien, como hemos dicho, el FSI+ no puede regenerarse directamente por el
agua, sino que recibe los electrones desde el FSII, a travs de una c.t.e. (por
supuesto, con creacin de p y por lo tanto, ATP).
Esta c.t.e. consta de la serie de transportadores siguiente:
PQ (plastoquinona) citocromo bf PC (plastocianina)
El FSII se excita por la luz (y como acabamos de decir, enva los electrones al FSI va
c.t.e.). Este FSII+ s puede regenerarse extrayendo los electrones del H2O,
desprendindose O2.
En resumen, el FSI+ acta como un aceptor final de electrones procedentes del FSII. A su
vez, el FSII+ (oxidado) se reduce directamente por el agua (merced a un complejo
enzimtico que contiene Mn, llamado complejo ltico del agua o "reloj oxidante del agua").
V. CAPTACIN DE ENERGA EN HALOBACTERIUM.
Algunas arqueobacterias halfilas (p. ej., Halobacterium) presentan una capacidad de sntesis
de ATP mediada por la luz, pero sin implicacin de clorofilas ni fijacin de CO 2. Cuando estas
bacterias se encuentran en condiciones de baja aireacin (bajas tensiones de O 2), sintetizan
86
Ramirez - Balqui
una cromoprotena especial llamada bacteriorrodopsina, que forma "parches" de color prpura
en sus membranas citoplsmicas.
La bacteriorrodopsina consta de:
porcin proteica: bacteriopsina, que forma 7 hlices atravesando la membrana;
grupo cromforo: retinal (el mismo de la rodopsina retiniana de los vertebrados). El retinal
es un carotenoide C20 que puede absorber la luz y catalizar la transferencia de protones a
travs de la membrana. Se encuentra unido como una base de Schiff a una determinada
lisina de la bacteriopsina.
El retinal, como base de Schiff (con una carga positiva), tiene en principio la configuracin 13cis. Esta forma del retinal absorbe un cuanto de luz de = 565 nm, de lo que resulta un
bombeo de un protn fuera de la membrana. Para regenerar la base de Schiff, la forma neutra
anterior pasa conformacin todo-trans, capta un protn y pasa a la forma protonada 13-cis.
El funcionamiento del sistema crea, pues, un gradiente de protones, cuya disipacin a favor de
ATP-asas de membrana es convertido a ATP. Obsrvese que funciona como una bomba de
protones, que saca H+ al exterior.
VI. EL OXGENO Y EL METABOLISMO BACTERIANO.

6.1. REACCIONES MEDIADAS POR FLAVOPROTENAS.
Aparte de las bacterias que usan O2 como aceptor terminal de electrones de sus c.t.e.
respiratorias, todos los procariotas presentan algunos enzimas que pueden reaccionar
directamente con este oxgeno. De estos enzimas, los ms tpicos son las
flavoprotenas, que se pueden autooxidar en presencia de O2, dando inevitablemente
perxido de hidrgeno (H2O2), que es un compuesto muy txico; tambin se pueden
generar pequeas cantidades de otro producto txico, el radical superxido (O2 -). Por lo
tanto, no es de extraar que en bacterias haya evolucionado un arsenal de enzimas para
detoxificar estas sustancias:
Proteccin respecto de los perxidos:
En muchas bacterias aerobias existe el enzima catalasa:
H2O2
catalasa
H2O + 2 O2
Algunos anaerobios aerotolerantes producen peroxidasa, capaz de eliminar cualquier

perxido, incluyendo el de hidrgeno. Las peroxidasas catalizan la oxigenacin de
compuestos orgnicos por el perxido de hidrgeno, que pasa a agua:
H2O2 + NADH + H+
peroxidasa
2 H2O + NAD+
Proteccin respecto del superxido:

El radical superxido se produce por:
accin de oxidasas;
87
autooxidacin de quinonas, ferredoxinas y flavoprotenas.

Este radical es muy txico, de modo que todas las bacterias aerobias y anaerobias
aerotolerantes presentan el enzima superxido dismutasa (SOD), que cataliza la
conversin del superxido en oxgeno molecular y agua oxigenada, que a su vez se
destruye por los mecanismos que acabamos de ver:
2 O2
+ 2 H+
SOD
O2 + H2O2
6.2. RELACIONES DE LAS BACTERIAS CON EL OXGENO.

Dependen en buena medida de la disponibilidad de las enzimas eliminadoras de
perxidos y superxidos, que acabamos de estudiar. Veamos los tipos de bacterias
segn sus relaciones con el oxgeno:
Bacterias aerobias: Necesitan O2 para crecer, ya que lo usan (al menos en algunas
ocasiones) como aceptor final de electrones para la captacin de energa qumica.
Algunos aerobios requieren para crecer tensiones de oxgeno inferiores a la atmosfrica
(del 2 al 10% de O2, en lugar del 20%). A estas bacterias se las califica como
microaerfilas.
Algunas microaerfilas lo son permanentemente (microaerfilas estrictas).
Otras se comportan como microaerfilas slo cuando crecen usando determinadas
fuentes de energa qumica o de nitrgeno (microaerfilas condicionales).
Bacterias anaerobias: Son aquellas que pueden crecer en ausencia de oxgeno, debido
a que pueden usar aceptores finales distintos del oxgeno, o porque poseen
metabolismo estrictamente fermentativo.
Anaerobias estrictas: El oxgeno les resulta txico ya que carecen de catalasa,
peroxidasa y SOD, y por lo tanto, no pueden eliminar los productos nocivos resultantes
del oxgeno.(Por ejemplo, las especies de Clostridium, y las arqueobacterias
metanognicas).
Anaerobias aerotolerantes (aerodricas): Al igual que las anteriores, presentan un
metabolismo energtico anaerobio, pero soportan el oxgeno debido a que poseen
enzimas detoxificadores. Ejemplos tpicos son las bacterias del cido lctico, como
Streptococcus, Leuconostoc, Lactobacillus). Tambin se les llama anaerobios
indiferentes.
Anaerobios facultativos: Pueden realizar metabolismo energtico aerobio o
anaerobio, dependiendo del ambiente y la disponibilidad de aceptores finales de
electrones. Ejemplos son las enterobacterias como E. coli.
88
Ramirez - Balqui
CAPITULO V
EFECTO DE LOS AGENTES FISICOS SOBRE LAS

BACTERIAS
Introduccin: Efecto de los factores ambientales sobre las bacterias.

Efecto de la Temperatura.
Liofilizacin
Desecacin
Efecto de las radiaciones sobre las bacterias
Efecto de las ondas sonoras
Efectos de la presin hidrosttica
Efectos de la presin osmtica
Efectos del pH
89
90
Ramirez - Balqui
ESTRUCTURA, NUTRICION Y METABOLISMO BACTERIANO
I.
INTRODUCCION: EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES SOBRE LAS BACTERIAS.

Debido a su pequeo tamao y a su estilo de vida individual, las clulas procariticas sufren los
cambios ambientales de un modo mucho ms directo e inmediato que las clulas de los
organismos pluricelulares. A lo largo de miles de millones de aos, las bacterias han venido
estando sometidas a diversas presiones ambientales, y han respondido evolutivamente
creando numerosos mecanismos de adaptacin. Actualmente, las nicas formas de vida
existentes en determinados ambientes extremos son exclusivamente procariticas. Desafiando
a nuestras ideas preconcebidas de lo que es la vida "normal", encontramos extraordinarios
seres vivos unicelulares viviendo a pH muy cidos o muy alcalinos, medrando en salmueras y
salinas, o reproducindose a temperaturas de ms de 100C y a grandes presiones...En este
captulo y en el siguiente veremos algunas de estas notables adaptaciones.
Hasta ahora hemos venido considerando el crecimiento de las bacterias en funcin de su fondo
gentico, en relacin con los nutrientes, y en unas hipotticas condiciones ideales (ptimas).
Sin embargo, el trabajo experimental con microorganismos ha de tener en cuenta los factores
ambientales, es decir, una serie de agentes fsicos y qumicos que
1. modifican la velocidad de crecimiento, provocando cambios que, a determinados valores de
dichos factores pueden llegar a ocasionar la muerte de microorganismos;
2. condicionan la distribucin de los microorganismos en sus ecosistemas y hbitat naturales;
3. permiten a los humanos controlar el crecimiento microbiano, por medio de la fijacin de
parmetros para:
a. la mutagnesis,
b. la esterilizacin y desinfeccin,
c. la quimioterapia.
No todos los microorganismos toleran del mismo modo un determinado factor ambiental. As,
unas determinadas condiciones pueden ser nocivas para una especie bacteriana, y en cambio
ser neutras o beneficiosas para otra.
Antes de abordar el estudio de distintos agentes ambientales, conviene distinguir entre los
efectos que un determinado agente puede tener sobre la viabilidad y los efectos que pueden
simplemente afectar al crecimiento, a la capacidad de diferenciacin (si la hubiera) o de
reproduccin.
Los principales tipos de factores a considerar se pueden desglosar de la siguiente manera:
AGENTES FSICOS
AGENTES QUMICOS
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Temperatura
Desecacin
Radiaciones
Ondas sonoras
Presin hidrosttica
Presin osmtica
II.
Desinfectantes y antispticos.
Quimioterpicos de sntesis
Antibiticos
EFECTO DE LA TEMPERATURA
2.1. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL CRECIMIENTO
La temperatura es uno de los parmetros ambientales ms importantes que condicionan
el crecimiento y la supervivencia de los microorganismos.
La temperatura afecta a la velocidad de crecimiento (y, por lo tanto al tiempo de
generacin, g). Cada bacteria (y suponiendo que el resto de condiciones ambientales se
mantienen constantes) muestra una curva caracterstica de tasa de crecimiento en
funcin de la temperatura, donde podemos distinguir tres puntos caractersticos
llamados temperaturas cardinales:
Temperatura mnima: por debajo de ella no hay crecimiento.
Temperatura mxima: por encima de ella tampoco existe crecimiento.
Temperatura ptima: permite la mxima tasa de crecimiento (o sea, g mnimo).
El margen entre la temperatura mnima y la mxima se suele llamar margen de
crecimiento, y en muchas bacterias suele comprender unos 40 grados.
La temperatura mnima se puede explicar en funcin de:
un descenso de la fluidez de la membrana, de modo que se detienen los procesos
de transporte de nutrientes y el gradiente de protones;
un aumento de la viscosidad del citoplasma;
un debilitamiento de los enlaces hidrfobos de las protenas (debido a cambios
fsicos en la estructura del agua de solvatacin) que provoca inactivacin de enzimas
alostricos y de actividad funcional de los ribosomas. En muchos casos los
polisomas no se ensamblan.
Por encima de la temperatura mnima la tasa de crecimiento va aumentando
proporcionalmente hasta alcanzar la temperatura ptima, debido a que las
reacciones metablicas catalizadas por enzimas se van aproximando a su ptimo. En
dicha temperatura ptima las enzimas y reacciones se dan a su mxima tasa posible.
A partir de la temperatura ptima, si seguimos subiendo la temperatura se produce
un descenso acusado de la tasa de crecimiento hasta alcanzar la temperatura
mxima. Dicha temperatura refleja:
desnaturalizacin e inactivacin de protenas enzimticas esenciales;
colapsamiento de la membrana citoplsmica;
lisis trmica de la bacteria.
92
Ramirez - Balqui
Obsrvese en el grfico que la temperatura ptima est ms cerca de la mxima que

de la mnima.
Cada especie o cepa bacteriana tiene temperaturas cardinales distintas, de modo
que una bacteria puede presentar una temperatura ptima superior a la temperatura
mxima de otra, o inferior a la temperatura mnima de una tercera.
Segn el rango de temperaturas al que pueden crecer las distintas bacterias, se
pueden establecer tres tipos principales:
1.
psicrfilas o crifilas: crecen a partir de entre -5 a 5oC.

a. Las llamadas psicrfilas obligadas tienen t0 ptima a 15-18oC y t0 mxima
a19-22oC, como por ejemplo Flavobacterium. La bacteria Polaromonas
vacuolata, recientemente aislada en aguas heladas de la Antrtida es lo que
pudiramos llamar un psicrfilo extremo: tiene su ptimo de crecimiento en
4C, y es incapaz de crecer a 14C.
b. Las psicrfilas facultativas (tambin llamadas psicrotrofas) presentan t0
ptima en torno a los 20-30oC y mximas a los 35oC.
2.
Las mesfilas presentan t0 mnimas a los 10-15oC, ptimas a los 25-40oC y

mximas entre 35 y 47oC. La mayor parte de las bacterias (incluyendo las
patgenas) pertenecen a esta categora.
3.
Las termfilas presentan mnimos a 25oC, ptimos a 50-75oC y mximos entre

80 y 105oC. Dentro de esta categora se suele distinguir las termfilas extremas
(hipertermfilas), que pueden llegar a presentar ptimos cercanos a los 100 oC, y
que taxonmicamente pertenecen al dominio de las Archaea.
a. Las termfilas estrictas (o estenotermfilas), con ptimos por encima de los
o
80C son de hecho incapaces de crecer a menos de 37 C, como las citadas
arqueas (Ej., Thermoproteus, Pyrococcus, Pyrodictium). La arquea Pyrolobus
fumarii, habitante de los humeros termales submarinos tiene su ptimo nada
menos que a 105C y puede llegar a aguantar 113C, y parece detiene su
metabolismo (por "fro") a la "agradable" temperatura de 90C (!)
b. Las termfilas facultativas (o euritermfilas) pueden crecer a menos de 37 oC,
como p. Ej. Thermus aquaticus.
Veamos brevemente unos cuantos casos de bacterias (y algn microorganismo
eucaritico) adaptado a medios con temperaturas extremas, y sus respectivas
adaptaciones a dichas condiciones:
Ejemplos de medios permanentemente fros son la mayor parte de las aguas
ocenicas (cuya temperatura media es de unos 5oC, pero que en las
profundidades alcanzan slo 1-2oC por encima de cero) y las reas
permanentemente heladas del rtico y de la Antrtida.
93
En los medios helados existen pequeas bolsas o microcavidades de agua

lquida, donde pueden medrar algunos microorganismos. Un ejemplo no
bacteriano muy caracterstico es el alga de las nieves (Chlamydomonas nivalis),
que llega a conferir color rojo a la nieve en algunas zonas de montaa a mitad de
la estacin estival.
Los psicrotrofos (psicrfilos facultativos) son ms abundantes, ya que estn
adaptados a soportar grandes oscilaciones trmicas, y en verano pueden crecer
a unos 30oC-40C.
Algunas bacterias y hongos pueden crecer en alimentos (carne, leche, frutas y
hortalizas) que se guardan en frigorficos, alterando las cualidades
organolpticas e incluso, echndolos a perder (una experiencia que casi todos
hemos tenido).
Las principales adaptaciones bioqumicas a medios fros exhibidas por estos
microorganismos son:
enzimas ms resistentes al fro;
sistemas de transporte adaptados a bajas temperaturas;
los fosfolpidos de la membrana celular aumentan la proporcin de cidos
grasos insaturados (y en algunas bacterias, poliinsaturados); ello supone que
la membrana sigue en su estado semifluido, evitndose su congelacin.
Los hbitats naturales con temperaturas permanentemente altas (por encima
de 45-50oC) estn restringidas a unas pocas zonas de la biosfera, normalmente
relacionadas con fenmenos volcnicos:
fuentes termales volcnicas terrestres (en zonas de EE UU, Japn, Nueva
Zelanda e Islandia);
fuentes termales submarinas: los llamados "humeros" (fumarolas
hidrotermales) asociados a las grandes dorsales ocenicas);
fumarolas.
Como ejemplo "clsico", muy conocido por documentales de divulgacin,
recordemos que en el famoso Parque Nacional de Yellowstone, en EE UU, existe
la mayor concentracin mundial de fuentes volcnicas, con giseres que emiten
a ms de 100oC, siendo esta temperatura bastante constante, con oscilaciones
de +/- 1 2oC. Cuando esta agua sale, lo hace a punto de ebullicin. El riachuelo
que genera va bajando su temperatura en su recorrido, de modo que se genera
un gradiente de temperatura en el que se pueden estudiar fascinantes
comunidades microbianas adaptadas a esas diversas temperaturas. All fue
donde T.D. Brock descubri la eubacteria termfila Thermus aquaticus, de la que
se extrae la ADN polimerasa termorresistente empleada en la reaccin en
cadena de la polimerasa (PCR). Recientemente se est recurriendo a usar la
polimerasa de una arquea hipertermfila, Pyrococcus furiosus, que funciona muy
bien a 100C.
94
Ramirez - Balqui
Si confeccionamos una tabla donde se agrupen distintos seres vivos en funcin

de las temperaturas mximas a las que pueden vivir comprobaremos (Fig.1) que
los procariotas, como conjunto aguantan ms que los eucariotas. Dentro de los
procariotas, las bacterias no fotosintticas crecen a mayores temperaturas que
las fotosintticas. Obsrvese que existen bacterias con ptimos a 55, 70 e
incluso 100oC (el asombroso Pyrodictium crece a 110oC). Como ya dijimos, el
"rcord" de termofilia lo tienen ciertas arqueobacterias (como la que acabamos
de citar), y crecen a esas temperaturas a gran velocidad (tiempos de generacin
g del orden de 1-7 horas).
Se han aislado bacterias termfilas en medios artificiales, como calentadores de
agua domsticos e industriales.
Las principales adaptaciones bioqumicas a altas temperaturas en clulas
vegetativas bacterianas son:
enzimas termorresistentes. Algunas de ellas tienen un interior molecular muy
hidrfobo;
ribosomas termorresistentes;
membranas ricas en cidos grasos saturados, que permiten enlaces
hidrofbicos ms fuertes.
En Arqueas hipertermfilas los lpidos son muy especiales: en vez de basarse
en steres de cidos grasos con el glicerol, se trata de teres de
hidrocarburos unidos al glicerol (el enlace ter es ms resistente). Algunas,
adems, en vez de la tpica bicapa lpdica, exhiben una monocapa
bioqumica de C40-bifitanil-tetrateres (resultado de unirse "cola con cola" dos
C20-fitanil-diteres), que condicionan una extrema resistencia a agentes
ambientales.
2.2.
EFECTO LETAL DEL CALOR.

Al subir la temperatura por encima de la temperatura mxima de crecimiento, se dejan
sentir los efectos sobre la viabilidad: la prdida de viabilidad significa que las bacterias
dejan de ser capaces de crecer y dividirse, aun cuando las transfiramos a un medio
idneo. La muerte por calor es una funcin exponencial de primer orden:
dN
- KT .N
dt
O sea, y como se puede constatar en el grfico adjunto, la accin del calor supone la
muerte de una fraccin constante (KT) de la poblacin sobreviviente en cada momento.
La cintica de primer orden sugiere que no existen efectos acumulativos, sino que la
muerte se debe a la destruccin o inactivacin irreversible de una molcula o estructura
esencial (como p. ej. el ADN cromosmico o por creacin de un dao irreparable en la
membrana).
95
En la prctica podemos encontrarnos con grficos distintos al anterior, debidos a

desviaciones respecto de esta cintica:
Cmo podemos caracterizar o medir en la prctica la inactivacin por calor de una
suspensin bacteriana? Aqu algunos parmetros utilizados:
tiempo trmico mortal: es el tiempo mnimo requerido para que mueran todas las
bacterias de una determinada suspensin a una determinada temperatura;
tiempo de reduccin decimal: es el tiempo requerido para reducir al 10% la
densidad de la suspensin, a una determinada temperatura (tambin llamado valor
D);
punto trmico mortal: es la temperatura mnima que mata a todas las bacterias en
un tiempo determinado (normalmente el tiempo de referencia empleado es de 10
min.).
Ejemplos
punto trmico mortal
55oC
60oC
120oC
Especies
Escherichia coli
Mycobacterium tuberculosis
Endosporas de especies muy resistentes de Bacillus.
Estos tres parmetros se emplean frecuentemente en industrias alimentarias, como en

las de fabricacin de conservas, centrales lecheras, etc.
Antes de seguir adelante, es importante tener claro que, dependiendo de la temperatura
y el tiempo a que sometamos un material a tratamiento trmico, lograremos
inactivacin parcial de la poblacin microbiana (es decir, queda una fraccin de
clulas viables) o bien esterilizacin (inactivacin total).
En general, entendemos por esterilizacin todo tratamiento de un material con un
agente fsico (como el calor, que nos ocupa en este momento) o qumico (como
veremos en el captulo 19) que acarrea la eliminacin de toda forma de vida en l. Una
vez estril, el material sigue estril indefinidamente con tal de que est encerrado en un
compartimiento estanco, sellado y libre del contacto con microorganismos del ambiente
exterior.
Centrndonos de nuevo en el calor, la inactivacin parcial o la esterilizacin se pueden
lograr por calor hmedo o por calor seco.
La inactivacin (total o parcial) por calor se debe a la desnaturalizacin de protenas y a
la fusin de lpidos de membrana, debido a que se rompen muchos enlaces dbiles,
sobre todo los puentes de hidrgeno entre grupos C = O y H2-N . Estos enlaces se
rompen ms fcilmente por calor hmedo (en atmsfera saturada de vapor de agua),
debido a que las molculas de agua pueden desplazar a los puentes de hidrgeno.
96
Ramirez - Balqui
2.2.1. Calor hmedo

Por lo tanto, la inactivacin por calor hmedo requiere menores temperaturas que
la que se realiza en ausencia de agua. Veamos algunos ejemplos de condiciones
de inactivacin total por calor hmedo:
Microorganismo
La mayora de clulas vegetativas, de bacterias,
levaduras y hongos
bacilo tuberculoso
bacilo tuberculoso
bacilo tuberculoso
Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis
La mayora de esporas de bacterias patgenas
esporas del patgeno Clostridium botulinum
esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos
esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos
Condiciones
80oC, 5-10 min.
58oC, 30 min.
59oC, 20 min.
65oC, 2 min.
60oC, 60 min.
100oC, pocos min.
100oC, 5,5 horas
100oC, muchas horas
120oC, 15 minutos
Veamos los mtodos principales de lograr esterilizacin de materiales por calor

hmedo:
Autoclave (introducido por Chamberland en 1884).- Es un aparato que permite
calentar muestras por calor hmedo a temperaturas superiores a las de ebullicin
del agua (sin que sta hierva), debido a que el tratamiento se efecta en un
compartimiento estanco saturado con vapor de agua y a presiones superiores a la
atmosfrica. (El funcionamiento del autoclave ser oportunamente explicado en
clases prcticas). Los parmetros de esterilizacin suelen ser: temperatura 121oC
y 10-15 min. Como se puede deducir, estos parmetros vienen fijados por la
resistencia de las esporas de especies saprofitas (ver ltima lnea de la tabla
anterior), que son las formas de vida que ms aguantan el calor sin perder
viabilidad.
(Hay que tener en cuenta que, en la prctica, a veces hay que emplear
condiciones diferentes; por ejemplo: si queremos esterilizar grandes volmenes de
lquido, habr que prolongar el tratamiento, 30 o 40 min., ya que el centro del
recipiente donde va el lquido tarda ms en alcanzar la temperatura de
esterilizacin. Los medios de cultivo que incluyen glucosa deben esterilizarse a
115oC, ya que a temperaturas superiores la glucosa "carameliza"; por lo tanto, en
estas ocasiones, el tiempo tambin es mayor: 30 min).
La accin rpida del calor hmedo depende en buena parte del alto valor de calor
latente del agua (540 calg-1); ello hace que los objetos ms fros (como las
muestras a esterilizar) se calienten rpidamente por condensacin de agua en su
superficie.
Tindalizacin (nombre en honor de John Tyndall).- Es un mtodo de esterilizacin
fraccionada para materiales que se inactivan o estropean a ms de 100oC.
97
Consiste en someter el material a varios ciclos (normalmente 3 4) de dos fases

sucesivas cada uno:
a. en la primera fase el material se calienta a una temperatura entre 50 y 100oC,
durante 1 2 horas;
b. en la segunda fase el material se incuba en una estufa, a 30-37oC durante 24
horas.
Durante las fases de tipo a) mueren todas las clulas vegetativas de la muestra,
pero permanecen viables las esporas, que quedan activadas para germinar.
Durante las fases de tipo b) se produce la germinacin de las esporas activadas
en la respectiva fase anterior. En la siguiente fase de tipo a) morirn las clulas
vegetativas procedentes de la germinacin en la fase anterior; y as
sucesivamente, hasta que al cabo de unos cuantos ciclos no queda ningn
microorganismo en la muestra.
Como se puede ver, este mtodo es bastante engorroso y consumidor de tiempo,
por lo que en los ltimos aos ha sido reemplazado por otro mtodo de
esterilizacin, aunque ya no dependiente del calor: se trata de la esterilizacin por
filtracin. Consiste de hacer pasar una solucin a travs de una membrana o filtro
de un tipo de material (normalmente nitrato de celulosa) que presenta poros de un
tamao inferior al de cualquier clula bacteriana (dimetro de poro =0,22 mm).
Aplicaciones principales del calor hmedo:
1. En la prctica cotidiana del laboratorio de microbiologa, en la esterilizacin de
medios de cultivo y soluciones.
2. En la esterilizacin de material quirrgico.
3. En la esterilizacin o inactivacin parcial, en las industrias alimentarias
(conservas, leche y derivados).
En la industria conservera se emplean los parmetros ya estudiados de punto
trmico mortal y tiempo trmico mortal; este ltimo permite elegir la temperatura
que altera menos las cualidades del material a conservar.
El tiempo trmico mortal vara segn:
el tipo de material: normalmente, los materiales cidos (tomates, frutas)
requieren menos tiempo que los neutros (como el maz o las alubias).
la concentracin de azcares, protenas o grasas: una mayor concentracin de
este tipo de sustancias supone emplear ms temperatura y/o ms tiempo.
la concentracin de sales: puede obligar a aumentar o disminuir los valores de
tiempo y temperatura, dependiendo del tipo de microorganismos.
En la industria lctea se emplean como mtodos de esterilizacin el autoclave o la
llamada uperizacin.
La uperizacin consiste en un tratamiento de calor hmedo donde se emplean
temperaturas muy altas durante unos pocos segundos (p. Ej.: 135-150oC durante
98
Ramirez - Balqui
1-2 seg.).- Pero no siempre es imprescindible esterilizar la leche, sino que puede
bastar eliminar los posibles microorganismos patgenos que pueden contaminarla,
y que son ms sensibles al calor que los saprfitos inofensivos. Con esta
inactivacin parcial de la poblacin microbiana de la leche logramos que sta se
conserve durante unos das, sin alterar apenas sus cualidades organolpticas y
nutricionales. He aqu los procedimientos ms habituales para conseguir esto:
La pasteurizacin (en honor a Pasteur, que la introdujo en los aos 1860)
consiste en tratar la leche a 63oC durante 30 min, tras los cuales se enfra y
envasa rpidamente.La pasteurizacin instantnea (tambin conocida por sus siglas en ingls HTST,
de high temperature-short time) se logra calentando a 72oC durante slo 15
segundos, tras de lo cual la muestra se enfra rpidamente. Esta tcnica es la ms
usada actualmente, ya que:
mata ms rpidamente;
mata mejor organismos ms resistentes;
altera menos el sabor;
acta en flujos continuos (y permite procesar grandes volmenes de leche).
Tras la pasteurizacin, el nmero de bacterias viables desciende un 97-99%. Los
potenciales patgenos que pueda llevar la leche (Brucella, Salmonella, bacilo
tuberculoso, Streptococcus, etc.) son eliminados fcilmente.
La pasteurizacin tambin se emplea para la preparacin de vacunas a base de
microorganismos inactivados por el calor.
2.2.2. Calor seco:
Como ya dijimos, la esterilizacin por calor seco necesita recurrir a mayores
temperaturas que la efectuada por el calor hmedo, ya que al no existir agua, la
rotura de puentes de hidrgeno y la desnaturalizacin de protenas, as como la
fusin de membranas, se efectan a mayores energas. Otros efectos del calor
seco son los daos por oxidacin y el provocar un aumento de la concentracin de
electrolitos.
Aplicaciones del calor seco:
1. El llamado horno de Pasteur, mediante calentamiento a 160-170oC durante
2-3 horas permite esterilizar materiales inertes de laboratorio resistentes al
calor: material de vidrio y metlico, aceites y jaleas, etc.
2. Flameado a la llama (hasta el rojo) de asas metlicas de siembra, con las
que se inoculan las bacterias.
3. Incineracin de materiales de desecho.
2.3.
EFECTO DE LAS BAJAS TEMPERATURAS SOBRE LAS BACTERIAS.

Las bajas temperaturas (por debajo de la temperatura mnima) no son tiles para la
esterilizacin, ya que, aunque existen algunas bacterias que mueren por congelacin (p.
99
ej., especies patgenas de Neisseria), el efecto de este tratamiento sobre otras muchas
es, sobre todo, bacteriosttico, sin contar aquellos organismos psicrfilos o psicrotrofos.
Los efectos de someter una suspensin bacteriana a temperaturas menores de 0oC
dependen de:
el medio donde estn suspendidas las bacterias;
el modo en que se realice la congelacin y una ulterior descongelacin.
2.3.1. Congelacin de la suspensin en un medio habitual.
Cuando la temperatura es ligeramente inferior al punto de congelacin del medio,
el citoplasma queda en sobrefusin (sin congelar) entre -1 y -10oC. Pero como la
tensin de vapor de agua en el interior es mayor que en el exterior, existe una
tendencia a restablecer el equilibrio, que puede ser:
por prdida de agua de la clula (cuando la congelacin se efecta
lentamente), o bien
por cristalizacin de agua en el interior (cuando la congelacin se realiza
rpidamente).
En ambos casos la consecuencia es que las sales intracelulares se concentran, lo
que supone que la solucin del citoplasma puede llegar a saturarse, con
precipitacin de sales. Ello conlleva varias consecuencias:
los cristales de sales y la alta concentracin de electrolitos provocan la
desnaturalizacin de protenas y daos a la membrana, de modo que
pueden salir componentes del citoplasma (fosfato, ribosa, pptidos y
nucletidos, procedentes de la actuacin de ribonucleasas y peptidasas
latentes).
Otro efecto de menor importancia es el dao mecnico a la pared celular y a
la membrana provocada por los cristales de hielo.
En general, el enfriamiento rpido es ms lesivo que el lento, existiendo una
velocidad ptima. Cuando una bacteria se enfra rpidamente a -35oC se producen
cristales de hielo que provocan daos cuando la muestra se descongela.
Por lo tanto, otro factor a tener en cuenta es la manera de realizarse la
descongelacin, y el nmero de ciclos de congelacin-descongelacin. La
descongelacin lenta es ms letal que la rpida, ya que aumenta el volumen de
cristales de hielo.
El grado de muerte por congelacin se puede desglosar en dos componentes:
1. El efecto inmediato: muertes que ocurren al congelarse la muestra;
2. El efecto de almacenamiento, consistente en la lenta prdida de viabilidad
debida al tiempo que permanecen las bacterias sobrevivientes en estado
congelado, y que depende de la temperatura a la que se mantenga la muestra.
Aplicaciones de la congelacin:
100
Ramirez - Balqui
La congelacin se aplica, en laboratorio, para preservar muestras bacterianas

durante largos periodos de tiempo. Como acabamos de ver, y con objeto de
maximizar la viabilidad bacteriana el mayor tiempo posible, es importante cmo se
efecta tanto la descongelacin como la descongelacin. Una vez congeladas, las
bacterias supervivientes conservan su viabilidad durante mucho tiempo, siempre
que la temperatura se mantenga por debajo del punto eutctico.
en nieve carbnica (CO2 slido), a -78oC;
en nitrgeno lquido, a -180oC.
Por ello, este mtodo es usado en el laboratorio para guardar cultivos durante
largas temporadas. El inconveniente de emplear nieve carbnica o nitrgeno
lquido es que hay que reponerlos con relativa frecuencia. Como veremos
enseguida, hay mtodos menos engorrosos y caros de mantener viables muestras
microbianas durante largos periodos de tiempo.
2.3.2. Congelacin en presencia de sustancias que evitan daos a las bacterias.
Para preservar an mejor las bacterias a bajas temperaturas, se recurre a aadir a
la suspensin ciertas sustancias, como por ejemplo:
Sustancias no ionizables de bajo peso molecular que provocan la
solidificacin amorfa y vtrea, en lugar de la cristalizacin, evitando as la
formacin de zonas intracelulares con alta concentracin de sales: glicerina,
sacarosa, lactosa, dimetilsulfxido (DMSO).
Materiales ricos en protena: leche, suero, extracto de carne.
Protenas purificadas (p. Ej., la albmina).
Determinadas macromolculas: polivinilpirrolidona (PVP), dextranos.
La suspensin bacteriana puede aguantar varios meses congelada con estas
sustancias a -25 a -30oC, en congelador.
III. LIOFILIZACION.
La liofilizacin es la desecacin al vaco de una muestra previamente congelada. Aplicada a
bacterias, es uno de los mtodos que mantiene por ms tiempo la viabilidad bacteriana (varios
aos). Para obtenerla, el cultivo bacteriano se adiciona de leche o suero (vase epgrafe
anterior), se congela sobre nieve carbnica (-78oC), y se conecta a una bomba de vaco, que
provoca la desecacin. La eliminacin de toda el agua sobre la muestra congelada aumenta la
viabilidad de sta, que se guarda en ampollas cerradas de vidrio a temperatura ambiente,
hasta su uso, que como vemos, puede ser incluso muchos aos despus.
IV. EFECTO DE LA DESECACION SOBRE LAS BACTERIAS
La desecacin al aire (sin vaco) mata a las clulas vegetativas bacterianas, pero no a las
endosporas. La sensibilidad a la desecacin vara de una especie a otra.
Ejemplos:
Mycobacterium tuberculosis (el bacilo tuberculoso) es muy resistente al aire (en ausencia
de luz), de ah que pueda aguantar varios meses a partir de los esputos de enfermos.
101
En cambio, el vibrin colrico (Vibrio cholerae) muere expuesto al aire al cabo de slo dos
horas.
Las causas de la muerte son, principalmente:

el aumento de concentracin intracelular de sales, lo que conlleva efectos txicos y
desnaturalizantes de protenas;
daos por oxidacin.
La mayor eficacia de la desecacin al aire se logra con 50% de humedad relativa.
V. EFECTO DE LAS RADIACIONES SOBRE LAS BACTERIAS.
5.1. CONCEPTOS GENERALES SOBRE RADIACIONES Y BIOMOLCULAS.
Se puede definir la radiacin como la propagacin de energa por el espacio. Los
principales tipos de radiaciones que pueden tener efectos sobre los seres vivos son:
radiacin electromagntica
Radiacin infrarroja (IR)
Radiacin visible
Ultravioleta (UV)
Rayos x
Rayos
Rayos csmicos
(longitudes de onda, en nm)

800-106
380-800
13,6-380
0.14-13.6
0.001-0.14
< 0.001
La radiacin particulada, con carga y masa consiste en:

rayos (ncleos de He).
rayos (electrones).
Como se recordar, la radiacin electromagntica presenta un doble aspecto: ondulatorio
y cuntico (paquetes discretos de energa, cuantos o quanta).
Cuando una molcula absorbe la energa de un cuanto de radiacin electromagntica, se
pueden producir una serie de cambios en los niveles energticos de algunos de sus
tomos.
La energa de un cuanto (E) est inversamente relacionada con su longitud de onda ( ,
en nm), segn la ecuacin de Planck:
E h.
Siendo h = constante de Planck (6.6210-27 ergseg-1) y c = velocidad de la luz (2.991017

nmseg-1)
Teniendo en cuenta los valores de las constantes y la equivalencia 1 eV =1.5910-12 erg,
la ecuacin de Planck se puede expresar como:
102
Ramirez - Balqui
1240 (En eV)
Sustituyendo por sus valores concretos correspondientes a distintos tipos de

radiaciones electromagnticas, se calculan fcilmente los respectivos rangos de energa:
Rayos x: 9000-91 eV
Luz UV: 91-3.3 eV
Visible: 3.3-1.5 eV
Fuentes de radiaciones:
Las fuentes naturales nos llegan desde el espacio: radiaciones de la luz solar (visible +
UV) y los rayos csmicos. Sin embargo, la capa de ozono de la alta atmsfera sirve de
pantalla, evitando que lleguen a la biosfera las longitudes de onda del ultravioleta de
menos de 190 nm, que son las ms energticas.
Los UV generados artificialmente son apantallados por material de vidrio.
Los rayos csmicos tampoco llegan a la superficie terrestre.
Las principales fuentes artificiales de radiaciones (aparte de las visibles) son:
mquinas de rayos X;
radioistopos (como el Co-60);
reactores nucleares;
aceleradores de partculas.
5.2. CLASES DE EFECTOS DE LAS RADIACIONES.
El nmero de cuantos absorbidos por un sistema biolgico es proporcional al producto
de: duracin de la radiacin por la intensidad de la radiacin y por el coeficiente de
absorcin del material.
Los efectos derivados de la absorcin de esa radiacin dependen de:
la energa de la radiacin absorbida;
la naturaleza del material.
Hagamos un tratamiento del tema en funcin de que la radiacin provoque o no
ionizaciones en el material, lo cual depende de la energa de los cuantos:
1) Si la energa es E>10 eV, hablamos de radiaciones ionizantes: son los rayos X y los
rayos ..
El fotn de gran energa incide sobre el tomo, provocando la expulsin de un electrn
de gran energa (fotoelectrn), y quedando el tomo en forma ionizada (cargado
positivamente). El electrn expulsado suele tener energa suficiente para originar una
nueva ionizacin, de la cual surge otro electrn de alta energa, etc. producindose
una cadena de ionizaciones, con transferencia linear de energa, hasta que sta
se disipa en el material: el ltimo electrn de la cadena es captado por otro tomo o
103
molcula, que queda cargado negativamente. El resultado final es que se forman

pares de iones (uno positivo y otro negativo).
A su vez, esos iones originados tienden a experimentar reorganizaciones electrnicas
ulteriores, que dan pie a cambios qumicos en el sistema que se haba sometido a la
irradiacin.
2) Si la energa es E<10 eV, no se producen ionizaciones: los electrones del tomo o
molcula pasan transitoriamente (de 10-8 a 10-10 segundos) a un nivel energtico
superior (entonces se habla de que el tomo o molcula estn excitados), pero
enseguida dicho electrn vuelve al estado energtico inicial.
En su regreso a su nivel energtico previo, el electrn puede dar origen a una variedad
de fenmenos:
fluorescencia: emisin de energa a una longitud de onda mayor que la del fotn
incidente;
fotosensibilizacin: la energa se transfiere a otra molcula;
reacciones fotoqumicas: se origina un cambio qumico;
emisin de calor: la energa simplemente se disipa en colisiones entre molculas.
La luz visible y UV pueden dar origen a reacciones fotoqumicas, aparte de calor. Pero
la radiacin infrarroja slo conduce a disipacin de calor, si bien ciertas bacterias
fotosintticas anoxignicas pueden aprovechar el infrarrojo para la fotosntesis.
5.3. EFECTOS DE LAS RADIACIONES IONIZANTES Y SUS APLICACIONES.
Los efectos de las radiaciones ionizantes dependen de la dosis de exposicin, o sea, de
la cantidad de radiacin a que se somete un material. Se suele medir en unidades
Roentgen (R):
-1
1 R = energa de absorcin de 83 ergg de aire.

Por otro lado, la dosis de absorcin es la fraccin de la dosis de exposicin que
realmente se absorbe por el sistema biolgico (es decir, es la dosis biolgicamente
efectiva). Se suele medir en rads:
1 rad = energa de absorcin de 100 ergg-1 de aire.
En la prctica, la unidad que se emplea en Biologa es el megarad (Mrad), equivalente a
un milln de rads, y que es el rango de la dosis requerida para esterilizaciones. Tambin
se emplea el Gray (1Gy equivale a 100 rads).
En general, los microorganismos son ms resistentes a las radiaciones ionizantes que los
seres superiores. Por ejemplo, la dosis de reduccin decimal (D10) para las endosporas
de ciertas especies de Clostridium es de 2000-3000 Gy. Las clulas vegetativas de la
bacteria Deinococcus radiodurans (observe el nombre especfico) es de 2.200 Gy. Otras
especies ms "normales" poseen una dosis de reduccin decimal en torno a 200-600 Gy.
Compare estos datos con el valor de slo 10 Gy como dosis letal para humanos.
104
Ramirez - Balqui
Las fuentes de radiaciones ionizantes son los aparatos de rayos x, los rayos y los
radioistopos, como el Co60 o el Cs137.
Los efectos de las radiaciones ionizantes son letales, tanto directos como indirectos, as
como mutagnicos. Los efectos letales directos se logran a altas dosis de radiacin,
mientras que los letales indirectos y mutagnicos se consiguen a menores dosis.
1.
Efecto letal directo: por impacto de cuantos de radiacin ionizante sobre alguna
molcula esencial para la vida. Los estudios cuantitativos demuestran que debe de
existir una molcula vital nica que, al ser alterada, provoca la muerte (teora del
golpe nico). Esta molcula debe ser el ADN (ya que obviamente es absolutamente
esencial y suministra una sola copia de la mayora de los genes bacterianos), y no
las protenas, de las que existen muchas copias en la clula, y que podran
regenerarse. Los daos al ADN son, principalmente: roturas en ambas cadenas, y
entrecruzamiento entre dichas cadenas, que no puedan repararse.
2.
Efecto mutagnico: deriva de la produccin de daos menores al ADN que pueden

repararse por mecanismos propensos a error.
3.
Efecto letal indirecto: este tipo de efecto es el ms importante, y deriva de la

radiolisis del agua que provoca la aparicin de radicales hidroxilo (OH-) e hidrgeno
naciente (H+). El hidrgeno naciente o radical H libre es un potente reductor, y el
radical hidroxilo es un potente oxidante. El radical hidroxilo reacciona fcilmente con
macromolculas, sobre todo con ADN, provocando roturas en ambas cadenas, lo
cual se traduce en efectos de letalidad. Si, adems, la bacteria est expuesta al
oxgeno mientras se la est irradiando, el efecto es an ms intenso, debido a que el
O2 reacciona con los radicales libres, originando cadenas de reacciones de
autooxidacin, muy destructivas, y promoviendo la formacin de perxidos y
epxidos, asimismo letales:
H + O2 HO2
2 HO2- H2O2 + O2
Las principales aplicaciones de las radiaciones ionizantes son la esterilizacin de:

material farmacutico;
material mdico-quirrgico (guantes de cirujano, suturas de nylon, jeringas
desechables, agujas, bistures, catteres, prtesis, etc.);
alimentos envasados (aunque en algunos pases an sigue abierta la polmica por
parte de ciertos grupos sobre la seguridad de este tratamiento).
La dosis de esterilizacin por radiacin se suele establecer en 12 veces la dosis de
reduccin decimal (12 D10) requerida frente a las endosporas de Clostridium botulinum.
Debido al gran poder penetrante de las radiaciones hay que mantener unas normas y
controles de seguridad muy estrictos en su manipulacin: planchas protectoras de plomo
y revisiones peridicas de los manipuladores.
105
5.4. EFECTOS DE LAS RADIACIONES ULTRAVIOLETA.

La radiacin UV tiene un efecto letal y mutagnico, que depende de su longitud de onda.
Ello se debe a la absorcin selectiva de longitudes de onda por parte de ciertas
molculas biolgicas:
Las protenas tienen dos picos (es decir, mximos) de absorcin: uno a 280 nm,
debido a los aminocidos aromticos (Trp, Tyr, Phe), y otro a 230 nm, debido a los
enlaces peptdicos.
El ADN y el ARN absorben a 260 nm, debido al enlace doble entre las posiciones 4 y 5
de las bases pricas y pirimidnicas.
Los rayos UV no tienen actividad ionizante, pero provocan cambios qumicos en las
molculas absorbentes, de modo que aparecen molculas alteradas denominadas
genricamente fotoproductos. Los fotoproductos originan la inactivacin de
macromolculas, aunque, como veremos enseguida, el ADN dispone de mecanismos
para paliar o eliminar estas modificaciones potencialmente lesivas.
Las consecuencias de inactivar protenas o ARN no se dejan sentir a efectos de letalidad,
ya que existen muchas copias de cada uno de estos tipos de macromolculas, y se
pueden volver a sintetizar.
En cambio, la inactivacin del nico cromosoma de la bacteria tiene efectos letales
primarios y efectos mutagnicos secundarios. Por lo tanto, el espectro de accin
biolgica de la luz UV equivale al de absorcin del UV por el ADN (260 nm).
5.4.1. FOTOPRODUCTOS DEL ADN OCASIONADOS POR LA LUZ UV.
Los fotoproductos generados por la luz UV en el ADN derivan principalmente de
alteraciones en las bases pirimidnicas (citosina, timina):
a. dmeros de pirimidina (anillo ciclobutano)
b. fotoproducto de la endospora (5-timinil-5,6-dihidrotimina)
c. hidratos de pirimidina.
Los dmeros de pirimidina son los fotoproductos ms importantes en las clulas
vegetativas bacterianas. El principal es el dmero de timina (T-T), aunque tambin
se producen T-C y C-C. Se trata de aductos (uniones) entre dos pirimidinas
adyacentes en la misma hebra de ADN, mediante la creacin de un anillo de
ciclobutano. Su efecto principal es la distorsin local de la configuracin de la
doble hlice, que interfiere en el normal emparejamiento de bases
complementarias; ello, a su vez, provoca una interferencia en los procesos de
replicacin y transcripcin, y secundariamente en el crecimiento y la respiracin.
A dosis muy altas de rayos UV se forman tambin dmeros entre pirimidinas de las
dos cadenas, es decir, se provocan entrecruzamientos de las dos hebras que
igualmente afectan a la replicacin y a la transcripcin, aunque este tipo de daos
reviste menos significacin biolgica.
106
Ramirez - Balqui
El fotoproducto de la espora es la 5-timinil-5,6-dihidrotimina. Como vimos en el

captulo 12, se forma en la endospora bacteriana debido al alto grado de
deshidratacin, pudiendo ejercer igualmente efectos inactivantes.
Los hidratos de pirimidina (como la 6-hidroxi-5,6-dihidrotimina) se forman a altas
dosis de luz UV. Tienen efecto mutagnico (no letal), favoreciendo la aparicin de
transiciones T = A a C = G.
5.4.2. MECANISMOS DE REPARACION DE LOS FOTOPRODUCTOS.
Debido al carcter esencial del ADN como molcula central informativa de los
seres vivos, la evolucin ha desarrollado una serie de mecanismos capacitados
para enfrentarse con los posibles daos ocasionados por la luz ultravioleta. Los
principales mecanismos hallados en bacterias se pueden agrupar as:
1. Mecanismos prerreplicativos:
a. reparacin fotoenzimtica o fotorreactivacin, que permite la reparacin
directa del dao en s.
b. reparacin por escisin y resntesis.
2. Mecanismos posreplicativos:
a. reparacin por recombinacin.
b. reparacin inducible de emergencia (SOS).
A) Reparacin fotoenzimtica
Se debe a la actuacin de una enzima denominada fotoliasa o enzima
fotorreactivante, que muchas bacterias sintetizan de manera constitutiva. Las
fotoliasas reparan directamente los dmeros de pirimidina, en una reaccin
que requiere luz visible de 300-500 nm de longitud de onda (luz azul). Estas
enzimas poseen dos grupos prostticos coloreados (cromforos):
flavina reducida (FADH2)
una pterina.
Mecanismo
1. La primera fase del mecanismo es independiente de la luz. La fotoliasa
reconoce el dmero de pirimidina, y se une a l, formando un complejo
enzima-sustrato [E-S].
2. La flavina reducida (FADH2) de la fotoliasa, en presencia de luz ( = 300500), se excita, y dona electrones al anillo de ciclobutano del dmero de
pirimidina, rompindolo, y regenerando las dos pirimidinas sin alterar.
Aunque se sabe que el segundo cromforo (la pterina) favorece la reparacin,
no est claro cul es su papel exacto.
No todas las bacterias tienen enzimas fotorreactivantes, pero en cambio la
fotorreparacin est muy extendida entre eucariotas.
107
B) Reparacin por escisin-resntesis.

La distorsin en la doble hlice provocada por el dmero es reconocida por un
complejo proteico con actividad de endonucleasa correctora, conocido como
correndonucleasa o escinucleasa. El dao se repara indirectamente (es
decir, no se acta sobre el propio fotoproducto), sino que las bases daadas
se eliminan (se escinden) formando parte de un oligonucletido, y el hueco
resultante se rellena por resntesis reparadora de ADN.
Mecanismo:
1. Un complejo formado por dos subunidades de la protena UvrA y una de la
UvrB (Uvr [A2B]) se une cerca del dmero de pirimidina, usando la energa
de la hidrlisis del ATP, y merced a su actividad helicasa, desenrolla
localmente la doble hlice.
2. Se une la protena UvrC, con lo que se completa el complejo Uvr [A2BC],
es decir, la correndonucleasa, unido a la cadena daada del ADN, cerca
del dmero.
3. La correndonucleasa realiza dos cortes en la cadena afectada por el
dmero: corta el 8 enlace fosfodister "a la izquierda" del dmero (o sea,
hacia el lado 5') respecto de la localizacin del dmero y corta el 4 o 5
enlace fosfodister "a la derecha" (en direccin 3' del dmero). Por lo tanto,
se produce y libera un fragmento de unos 12 nucletidos de longitud, que
incluye al dmero de pirimidina, al mismo tiempo que se retira la
escinucleasa, que se separa en sus polipptidos constituyentes.
4. Queda, pues, un hueco de cadena sencilla en el ADN. Este hueco es
ocupado ahora por la ADN-polimerasa-I y por la ADN-helicasa-II
(codificada por el gen uvrD), que llevan a la sntesis de nuevo ADN para
rellenar el hueco (por supuesto, en sentido 5'--->3'), tomando como molde
la cadena intacta, y usando como cebador ("primer") el extremo 3'-OH que
se haba generado en la fase anterior.
5. Finalmente, la actuacin de la ADN-ligasa sella la cadena (regeneracin
del enlace fosfodister del lado 5').
C) Reparacin por recombinacin.
Cuando la ADN-polimerasa-III bacteriana (que es la enzima que normalmente
replica el cromosoma) se encuentra, en la cadena que est usando como
molde, con un dmero de pirimidina, deja de replicar esa zona, y "salta" unos
1000 nucletidos ms adelante para seguir la replicacin. Por lo tanto, deja un
gran hueco o mella de unos 1000 nucletidos. Esta discontinuidad (llamada
mella post-replicativa) se puede rellenar por el mecanismo de reparacin por
recombinacin general, recurriendo a la protena RecA, que verifica una
recombinacin con la hebra parental homloga intacta.
Mecanismo:
1. Numerosas unidades de protena RecA recubren la zona de cadena
sencilla de la mella posreplicativa, formando estructuras helicoidales.
108
Ramirez - Balqui
2. La protena RecA promueve emparejamiento homlogo de la cadena

sencilla a la que recubre con la doble cadena "hermana" intacta.
3. Se produce un intercambio recproco de cadenas.
4. El extremo 3'-OH libre de la cadena daada (que merced al intercambio
recproco est ahora emparejada con la cadena complementaria
procedente de la doble hlice "hermana") sirve de cebador a la ADNpolimerasa-I, que sintetiza ADN nuevo usando como molde la cadena
complementaria intacta del dplex.
5. Ligacin e isomerizacin espontneas, que produce la llamada "estructura
de Holliday", una figura en "X" donde hay dos sobrecruzamientos
("crossing-over") que mantienen unidos entre s a los dos duplex.
6. Resolucin de los dos sobrecruzamientos por sendas roturas y
religaciones, lo cual genera dos dobles hlices ininterrumpidas. Como se
ve en la figura, uno de estos dplex lleva el dmero de pirimidina, y el otro
es una doble cadena intacta, aunque parte de ella contiene ADN de nueva
sntesis.
Como se puede ver, el mecanismo de reparacin por recombinacin no repara
por s mismo la lesin en el ADN, pero logra reparar la mella postreplicativa,
evitando que se detenga la replicacin del cromosoma. Al final del proceso el
dmero como tal sigue sin reparar, pero ahora tendr una oportunidad de ser
reparado por algn otro mecanismo, como el de escisin-resntesis.
D) Reparacin de emergencia (SOS) propensa a error.
Cuando la bacteria se somete a dosis elevadas de luz UV o a determinados
agentes qumicos que daan severamente el ADN, o que interfieren
seriamente con la replicacin, puede ocurrir que los sistemas de reparacin
que hemos visto hasta ahora no sean suficientes para reparar todos los
daos; en estas circunstancias se pone en marcha un nuevo mecanismo, que
es inducible y que calificamos como de emergencia, ya que tiende a
salvaguardar la viabilidad de la clula, a costa de acumular mutaciones con
frecuencia elevada (y por eso lo llamamos tambin propenso a error).
El sistema SOS en realidad consiste en una serie de funciones "de
emergencia" ante estrs, una de las cuales es este tipo de reparacin de ADN
propenso a error. Otras funciones del sistema SOS son:
Induccin de varios profagos (lo veremos en la seccin de Virologa, al
tratar el fago l).
Retraso en la formacin del tabique transversal, por lo que las clulas se
alargan anormalmente. (El significado adaptativo de esta respuesta de
inhibicin de la septacin parece ser el impedir la segregacin de ADN sin
reparar a la clula hija, lo que podra ocasionarle la muerte).
Desconexin de la respiracin.
Incremento de la degradacin de protenas.
Descripcin del sistema en una clula normal (no sometida a daos al ADN):
109
El gen lexA posee un nivel basal de expresin, de modo que codifica la

protena LexA, que acta como represor sobre su propio gen (represin
autgena), as como sobre los genes recA, uvrA, B, C, umuDC. La represin
no es total, sino que se da un nivel basal de produccin de los polipptidos
correspondientes a estos genes. As, por ejemplo, el nivel de protena RecA
es suficiente para efectuar los procesos normales de recombinacin, y los
niveles de UvrABC son suficientes para reparar pequeos daos en el ADN.
Descripcin del sistema en una clula severamente daada:
Una clula seriamente afectada por un agente que daa el ADN o interfiere
con su replicacin poseer zonas de cromosoma con ADN de cadena sencilla
(c.s.) sin reparar. Pues bien, este ADN de c.s. constituye una seal de
situacin de emergencia para la protena RecA: dicha protena se une a esas
regiones de c.s., de modo que adquiere una actividad proteasa muy especfica
(para distinguir esta actividad, usamos la nomenclatura RecA*). La protena
RecA* (activada como proteasa) induce la protelisis del represor LexA
(rompindolo entre dos aminocidos concretos hacia la mitad de la molcula).
Por lo tanto, ya no hay suficiente protena LexA intacta como para seguir
reprimiendo a los genes citados (recA, uvrABC, umuDC). Dichos genes
(llamados genricamente genes SOS) se pueden expresar ahora a altos
niveles, de modo que:
Aumentan los niveles de RecA, lo que conlleva un aumento de la eficiencia
de la reparacin por recombinacin;
Aumentan los niveles de la escinucleasa (Uvr[A2BC]), lo que supone
mejorar la reparacin por escisin-resntesis;
Se expresan los genes umuDC, lo que se traduce en un aumento de la
mutagnesis. Pero) por qu aumenta la mutagnesis? El mecanismo
exacto no est claro. Se sabe que en esta situacin de emergencia algunos
dmeros de pirimidina son procesados con la intervencin de los productos
de recA y de umuD y umuC, de modo que hay una sntesis de
emergencia de ADN que acarrea la frecuente introduccin de bases
incorrectas (es decir, es un proceso de reparacin propenso a error).
Hay dos hiptesis principales sobre este respecto:
1. Los genes umuD,C codificaran una nueva polimerasa de emergencia con
menor fiabilidad de copia que las polimerasas habituales;
2. O bien, los productos de umuDC modificaran alguna polimerasa normal
(como la ADN-Pol-III) de manera que sta "relajara" su capacidad
correctora de pruebas (exonucleasa 3' 5'), de modo que ante ausencia
de molde, o ante un molde afectado por el dao colocara nucletidos "al
azar", lo que sera la base de las frecuentes mutaciones.
Hay pruebas que favorecen a esta segunda hiptesis.
De esta manera, la clula salvara su integridad en esta situacin "lmite", pero
a costa de adquirir frecuentes mutaciones.
110
Ramirez - Balqui
5.4.3. APLICACIONES PRACTICAS DE LA LUZ UV.

La luz UV se puede producir artificialmente en lmparas de vapor de mercurio de
baja presin, que emiten el 90% de su radiacin a 254 nm. La unidad de energa
de radiacin se mide en watts / (segcm2).
Por ejemplo, una lmpara de 15 watios emite una energa de 38m wattscm -2seg.1
, a una muestra situada a 1 metro de la lmpara.
La luz UV es efectiva sobre bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. La dosis
letal para clulas vegetativas suele estar entre 1800 y 6500 wattcm-2, pero las
endosporas requieren 10 veces ms dosis.
El uso prctico de la luz UV como agente esterilizante est limitado, ya que tiene
poco poder penetrante: no entra en objetos slidos, y adems se ve apantallada
por el cristal y penetra poco en los lquidos. Su aplicacin concreta ms frecuente
es en el control de infecciones por va area: lmparas de desinfeccin en salas
de hospitales y de laboratorios de investigacin. En Microbiologa se emplea la luz
UV como agente mutagnico en bacterias (en muchos estudios que requieran
obtener mutantes correspondientes a cualquier tipo de fenotipos, para conocer las
correspondientes bases genticas).
5.5. EFECTOS DE LA LUZ VISIBLE.
A diferencia de la UV, la luz visible es de baja energa, y adems, sus cuantos no tienen
efectos selectivos sobre el ADN, por lo que no sera de esperar, en principio, que este
tipo de radiacin tuviera efectos negativos sobre las bacterias. Sin embargo, la luz visible
puede ejercer un efecto negativo indirecto, en el fenmeno de sensibilizacin
fotodinmica.
5.5.1. Sensibilizacin fotodinmica natural.
La luz visible de fuerte intensidad (p. Ej., exposicin a pleno sol) es capaz de
matar las bacterias, debido a que ciertas molculas de stas (riboflavinas,
porfirinas, citocromos) absorben la energa de los cuantos y se excitan durante 10 6
-10-8 seg., tras lo cual reemiten la energa a otras molculas, originando
fotooxidaciones en residuos His y Trp de las protenas y en las bases de los
cidos nucleicos. Tambin se puede generar oxgeno singlete ( 1O2), que es un
radical muy reactivo, oxidante, que puede destruir la clula con rapidez.
As pues, en la prctica de laboratorio habitual, no es conveniente exponer las
bacterias en cultivo a la luz, sino que habrn de cultivarse en oscuridad (salvo el
cultivo de las bacterias fototrofas).
Ciertas bacterias (entre ellas las fotosintticas, y las que se propagan va area)
poseen abundantes pigmentos de tipo carotenoide que las protegen de estos
efectos fotosensibilizadores. (Los carotenoides captan la energa del oxgeno
singlete y la reenvan al estado basal, no excitado).
111
5.5.2. Sensibilizacin fotodinmica artificial:

Si a una suspensin de bacterias aadimos ciertos pigmentos artificiales
fluorescentes (colorantes), como el rosa de Bengala, el azul de metileno, la
eosina, etc., la energa del visible absorbida por dichos pigmentos no la reemiten
como fluorescencia, sino que provoca cambios en protenas y cidos nucleicos.
Esto conduce a efectos de esterilizacin, sobre todo por desnaturalizacin de
protenas.
VI. EFECTOS DE LAS ONDAS SONORAS.
Las ondas sonoras audibles para los humanos poseen un rango de frecuencias entre los 9
kilociclos y los 20 kilociclos/segundo. Por encima de 20 Kc se sitan las ondas supersnicas
(hasta los 200 Kc/seg.) y las ultrasnicas (desde 200 hasta 2000 Kc/seg.). Estos tipos de
ondas de frecuencias superiores a las audibles (sobre todo las ultrasnicas) tienen el efecto de
desintegrar las clulas.
El fundamento de esta accin es el siguiente: el paso del sonido a travs de un lquido
produce cambios de presin alternantes (por los sucesivos frentes de ondas), que a grandes
frecuencias originan cavidades (burbujas de gases disueltos) de unos 10 m de dimetro
(fenmeno de cavitacin). Dichas cavidades van aumentando de tamao y terminan
colapsando violentamente, dando lugar a enormes presiones locales (de hasta 1000
atmsferas o 10 Tm/cm2). Las consecuencias del colapso son:
la clula se desintegra;
si existe oxgeno en el lquido de suspensin, se forman perxidos (como el H 2O2);
despolimerizacin de macromolculas;
cortes en ambas hebras del ADN.
Las bacterias son variables en cuanto a su susceptibilidad a las vibraciones sonoras. En
general, son ms sensibles las Gram-negativas y ms resistentes las Gram-positivas. Sin
embargo, ante un tratamiento por ultrasonidos siempre cabe la posibilidad de que sobrevivan
algunos individuos, por lo que este mtodo no tiene utilidad para la esterilizacin.
El uso habitual de los supra- y ultrasonidos en laboratorio es para la llamada "sonicacin" o
disrupcin ultrasnica de clulas para obtener extractos celulares, en investigaciones
bioqumicas. El tratamiento se realiza en un aparato llamado generador de ultrasonidos o
"sonicador", que opera en un rango de frecuencias desde 9 hasta 100 Kc/seg.
VII. EFECTO DE LA PRESION HIDROSTATICA.
La mayor parte de las especies bacterianas de hbitats continentales no pueden crecer (e
incluso mueren) cuando son sometidas a altas presiones (unos 600 Kg/cm2). Ello se debe a los
siguientes efectos adversos:
aumento de la viscosidad del citoplasma;
disminucin de la capacidad de las enzimas de unirse a sus respectivos sustratos;
(posiblemente) interferencia en procesos de transporte a nivel de membrana;
(posiblemente) interferencia en la biosntesis de protenas;
112
Ramirez - Balqui
interferencia en la divisin celular: las bacterias se alargan, se filamentan, pero sin

produccin de tabique transversal (crecimiento sin divisin celular).
Sin embargo, existen bacterias (sobre todo marinas) que toleran o requieren altas presiones
(barotolerantes y barfilas, respectivamente):
Bacterias barotolerantes:
Crecen a la presin atmosfrica, pero aguantan hasta unas 500 atmsferas. Su hbitat son las
aguas ocenicas, entre los 2000 y los 4000 metros de profundidad.
Bacterias barfilas:
Crecen ptimamente a ms de 400 atmsferas. Podemos distinguir entre barfilas moderadas
(facultativas) y barfilas extremas (obligadas):
Las barfilas moderadas son aquellas bacterias que pueden crecer a presin atmosfrica,
aunque su ptimo est a unas 400 atmsferas. Habitan profundidades entre los 5000 y 7000
metros.
Las barfilas extremas presentan ptimos de crecimiento a muy altas presiones (por encima de
600-700 atmsferas), y son incapaces de crecer a presin atmosfrica. Se han llegado a
aislar a ms de 10000 metros de profundidad. Debido a que a esas profundidades la
temperatura del agua es de slo 2-3oC, suelen ser simultneamente crifilas. Este tipo de
bacterias est empezando a ser investigado actualmente, y su manejo es engorroso, ya que
hay que cultivarlas en cmaras especiales presurizadas que suministran las altas presiones
que requieren.
Aplicacin prctica de las altas presiones a bacterias barosensibles:
La llamada prensa de French (que frecuentemente se denomina incorrectamente como prensa
francesa) es un aparato de laboratorio que permite aplicar grandes presiones y brusca
descompresiones, lo que logra la rotura mecnica de las bacterias, con objeto (al igual que la
sonicacin) de obtener extractos libres de clulas.
VIII. EFECTOS DE LA PRESIN OSMTICA.
Exceptuando los micoplasmas, que carecen de pared celular, las bacterias pueden vivir en
medios tanto hipotnicos como hipertnicos, debido a la proteccin de una pared celular rgida
y a la membrana citoplsmica semipermeable.
Normalmente el citoplasma de las bacterias poseen una osmolaridad ligeramente superior a la
del entorno, lo que garantiza el paso de agua al interior. La presin de turgor es relativamente
constante porque la membrana citoplsmica se topa con la rigidez de la pared celular. Esta
presin de turgor permite que la bacteria aguante cambios bruscos de concentracin de solutos
en su entorno (dentro de ciertos lmites). Pero esto plantea una pregunta (que intentaremos
responder a continuacin): cmo logra la bacteria ajustar su osmolaridad interna a esos
cambios exteriores?.
113
A) En medios hipotnicos (con una aw>aw del citoplasma) es la pared celular la que ejerce
todo el papel: su rigidez se opone a la entrada de agua, y por lo tanto, evita que la
membrana citoplsmica tienda a sufrir una presin de turgor excesiva.
Recordemos que las bacterias Gram-negativas poseen dos compartimentos acuosos: el
citoplasma y el periplasma. Como se dijo oportunamente, en el periplasma existe un
oligosacrido especial, derivado de la membrana (el MDO, consistente en 6-10 unidades
de -D-glucosa unidas por enlaces (1 2), y con residuos de fosforilcolina y fosfatidiletanolamina), que interviene en regular la osmolaridad. Sus grupos negativos estn
contrarrestados por contraiones positivos, que igualmente colaboran en la regulacin
osmtica.
En un medio con baja osmolaridad (p. Ej., aguas fecales) aumenta la concentracin del
MDO, lo cual supone un aumento de la osmolaridad del periplasma, que presiona contra el
peptidoglucano. De esta manera la presin de turgor del protoplasto se transmite al
periplasma y de l al peptidoglucano, que es la estructura ms resistente.
B) En medios hipertnicos (cuando la aw del exterior es menor que la del citoplasma). Las
bacterias poseen mecanismos compensatorios por los que tienden a aumentar la
osmolaridad interior por encima de la del medio (para garantizar la entrada de agua del
ambiente y mantener su metabolismo). Ello se logra esencialmente aumentando la
concentracin de un soluto muy soluble en agua en el interior celular, soluto llamado
genricamente soluto compatible, lo cual se puede lograr por varios posibles
mecanismos:
bombeando iones al interior;
sintetizando una molcula orgnica osmticamente activa;
bombeando sustancias osmoprotectoras.
+
1.
En el caso de los iones, el in bombeado suele ser el potasio (K ), por un sistema de

antiporte K+/H+. Ahora bien, para que no se desequilibre la fuerza inica, la entrada de
K+ suele ir en paralelo con una salida de otros cationes, que suelen ser poliaminas
(como la putrescina). Se ha propuesto que existe un sistema de antiporte K+/putrescina
que en ciertas bacterias tiende a mantener la fuerza inica mientras aumenta la
tonicidad interior, como sistema para compensar la alta tonicidad del medio. La seal
que desencadena el transporte de iones potasio es directamente la presin de turgor
de la membrana y no la osmolaridad externa.
2.
Como ejemplos de sntesis de solutos orgnicos compatibles y osmticamente activos

tenemos el glutamato, la glutamina y la trehalosa.
Muchas bacterias Gram-negativas sintetizan glutamato ante grandes concentraciones

extracelulares de iones Na+. El mecanismo es el siguiente: al aadir grandes cantidades de
Na+, se produce un eflujo (salida) de H+ al exterior de la clula, lo que supone la
alcalinizacin del citoplasma. En estas condiciones se activa la enzima glutamatodeshidrogenasa (GDH), que sintetiza grandes cantidades de glutamato, que funciona como
soluto compatible que equilibra la osmolaridad del medio.
114
Ramirez - Balqui
En ciertas enterobacterias lo que ocurre es una inhibicin del uso metablico del
glutamato, por lo que este se acumula.
Igualmente se da una acumulacin de trehalosa por induccin de una ruta biosinttica e
inhibicin de la ruta catablica.
La ectona es un derivado cclico de la prolina, sintetizado como soluto compatible por
ciertas anoxifotobacterias purpreas.
Ahora bien, si el medio es muy hipertnico, estos mecanismos ya son incapaces de evitar
la salida de agua desde el citosol, lo cual conlleva una retraccin de la membrana
citoplsmica. La prdida de agua puede suponer la deshidratacin del citoplasma, lo que
conlleva la detencin del crecimiento.
En Gram-positivas se produce una plasmolisis autntica (retraccin de la membrana
citoplsmica respecto de la pared rgida suprayacente)
En Gram-negativas no existe autntica plasmolisis, ya que la pared celular y la
membrana citoplsmica se retraen al mismo tiempo. Las bacterias entricas crecen
lentamente por encima de 0.65M de NaCl.
3.
Sin embargo, las bacterias pueden crecer a osmolaridades superiores a la mxima

terica, si en el medio existen determinados compuestos llamados osmoprotectores.
La bacteria bombea esos compuestos a su interior, usndolos como solutos
compatibles.
Ejemplos de osmoprotectores:
Prolina (p. ej. en Salmonella typhimurium y Staphilococcus aureus)
Betana (glicnbetana), un derivado trimetilado de la glicocola (en cianobacterias y
en algunas Gram-positivas).
Colina (en Escherichia coli).
Ectona en enterobacterias.
Por ejemplo, S. typhimurium crece muy lentamente en 1M de ClNa, pero mejora si al

medio se aade 1mM de prolina. Un mtodo normal de aislar S.aureus es comprobar el
crecimiento en medio con 7.5% de ClNa en presencia de prolina.
Algunas bacterias han desarrollado evolutivamente sistemas inducibles de transporte de
estas sustancias, muy eficaces para garantizar su utilizacin como solutos compatibles. Es
el caso de la colina en E. coli, que una vez introducida se metaboliza hasta el autntico
soluto compatible, la glicnbetana.
Algunas bacterias patgenas, al destruir tejidos de su hospedador, provocan la liberacin
de sustancias, algunas de las cuales les sirven como osmoprotectores ante la alta
osmolaridad de los fluidos corporales.
Otro mecanismo de control ante variaciones de presin osmtica presente en algunas
bacterias Gram-negativas, es la variacin en la proporcin de porinas de membrana
externa.
115
Existen ciertos microorganismos especializados que viven en medios hipertnicos, y en

general se llaman osmfilos. Entre los osmfilos podemos distinguir los sacarfilos y los
halfilos.
Uno de los ejemplos de microorganismos sacarfilos no es una bacteria, sino las
levaduras, que viven en jugos vegetales, nctares, zumos, etc. Utilizan como solutos
compatibles polioles como el sorbitol, el ribitol, etc.
Entre los organismos halfilos, podemos distinguir los halfilos moderados y los halfilos
extremos o hiperhalfilos.
Halfilos moderados: suelen ser bacterias marinas que viven en 3.5% de NaCl, y que ven
inhibido su crecimiento a concentraciones mayores o menores de sales. Los halfilos
moderados tienen requerimientos concretos de una aw equivalente a la de agua de mar,
+
+
as como concentraciones determinadas de iones Na . El papel jugado por este Na es:
mantenimiento de los sistemas de membrana citoplsmica y transporte;
estabilizacin de la pared celular;
requerimiento por parte de muchas enzimas.
Halfilos extremos (hiperhalfilos), representados paradigmticamente por las arqueas
de la familia Halobacteriaceae (halobacterias), que viven en (y de hecho requieren)
concentraciones saturantes de sales (salitrales, lagunas salinas). Usan como soluto
compatible el K+, concentrndolo a partir del medio donde viven, hasta que el citoplasma
queda prcticamente saturado con l (4 a 7 M). Esta gran concentracin de potasio es
esencial para mantener la estabilidad y actividad de sus ribosomas, enzimas y sistemas de
transporte. Pero las estructuras superficiales de estas arqueas requieren altas
concentraciones de cloruro sdico.
Dejando aparte las bacterias halfilas, hay algunas bacterias halotolerantes (como por
ejemplo, S. aureus), pero la inmensa mayora de los procariotas viven a valores de
actividad de agua de 0.98. Por ello, un mtodo que ya se conoca empricamente en la
antigedad para conservar ciertos alimentos era el desecarlos o salarlos, o aadirles
grandes cantidades de azcar (como en las mermeladas).
IX. EFECTO DEL pH.
La mayora de las bacterias pueden crecer dentro de un margen de pH de su medio,
manteniendo al mismo tiempo su pH interno ptimo prcticamente constante.
Por ejemplo, Escherichia coli puede crecer bien entre pH 6 y pH 8, pero su pH interno es
siempre 7.6 o muy cercano a ese valor.
Respecto del margen normal de pH a los que crecen las bacterias, stas se pueden clasificar
en:
Neutrfilas, si crecen de modo ptimo en torno a la neutralidad (entre pH 5.5 y 8.
Acidfilas, si crecen normalmente entre pH 0 y pH 5.
Alcalfilas, si crecen entre pH 8.5 y pH 11.5.
116
Ramirez - Balqui
La mayor parte de las bacterias son neutrfilas. Muchas bacterias neutrfilas modifican el pH
del medio, y resisten entornos relativamente cidos o alcalinos. Por ejemplo, algunas bacterias
fermentativas excretan cidos, mientras otras alcalinizan el medio, p. ej., produciendo amonio a
partir de desaminacin de aminocidos.
Aunque los microorganismos pueden crecer en un margen ms o menos amplio de pH
(alrededor de un ptimo), los cambios bruscos pueden ser lesivos (afectando a la membrana y
al transporte de solutos, e inhibiendo enzimas). Si el pH citoplsmico cae rpidamente hasta 5
o menos, la bacteria puede morir.
Uno de los mecanismos que, al menos en neutrfilos parece controlar el pH interior es un
sistema de antiporte H+/K+: a pH cidos, el interior celular puede quedar en principio ms
alcalino que el exterior. Este sistema introduce protones en el interior y saca iones potasio. De
esta manera neutralizan el pH interior y siguen teniendo un potencial de membrana para
establecer una fuerza protn motriz que les suministre energa.
Si el pH interior cae en torno a 6 o 5.5, bacterias como E. coli o S. typhimurium inducen una
respuesta de tolerancia a cidos, consistente en ATPasas translocadoras de protones
(expulsan protones al exterior) y chaperonas (protenas celadoras) para corregir las protenas
desnaturalizadas.
Existen algunos notables procariotas cuyo pH ptimo es muy bajo (acidfilos extremos u
obligados): Algunas eubacterias del gnero Thiobacillus (T. thiooxidans, T. ferrooxidans) y las
arqueas del gnero Sulfolobus tienen su ptimo a pH 2, y generan ellas mismas estos bajos pH
al oxidar sulfuros hasta cido sulfrico. (Sulfolobus es un notable ejemplo de procariota
extremfilo: su hbitat son fuentes termales cidas y solfataras: es un termoacidfilo). De
hecho, estas bacterias necesitan esas altas concentraciones de H+ para mantener la integridad
de sus membranas y envueltas: a pH neutro esas envueltas se desintegran.
Las especies alcalfilas obligadas tienen ptimos de pH en torno a 10-11. Por ejemplo,
Bacillus alcalophilus, cuyo pH interno es de 9. Sus hbitats tpicos son suelos carbonatados y
lagunas alcalinas (algunos son tambin halfilos, como Natronobacterim gregoryi).
117
118
Ramirez - Balqui
CAPITULO VI
ACCIN DE LOS AGENTES QUMICOS SOBRE LAS

BACTERIAS
Conceptos generales.
Desinfectantes y antispticos.
Tipos de desinfectantes.
Quimioterpicos de sntesis y antibiticos. Introduccin.
Quimioterpicos de sntesis
Antibiticos
Resistencia bactriana a los antibiticos
Bases genticas de la resistencia
Mecanismos bioqumicos implicados en la resistencia a antibiticos
119
120
Ramirez - Balqui
ACCIN DE LOS AGENTES QUMICOS SOBRE LAS

BACTERIAS
I.
CONCEPTOS GENERALES
Existen ciertas sustancias qumicas que influyen negativamente sobre las bacterias, pudiendo
ejercer dos tipos de efectos diferentes:
bacteriostticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano;
bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.
En general, si no slo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de microorganismos,
hablamos respectivamente de agentes microbiostticos y microbicidas. Ahora bien, para
una misma sustancia qumica, la lnea de demarcacin entre un efecto microbiosttico y otro
microbicida depende muchas veces de la concentracin de dicha sustancia y del tiempo
durante el que acta.
Cmo podemos saber que un microorganismo est "muerto"? El nico criterio vlido es la
prdida irreversible de la capacidad de divisin celular, es decir, de la prdida de viabilidad, y
se suele comprobar empleando tcnicas con placas de Petri (es decir, confirmando que no
crecen en medios slidos adecuados). (Pero ni siquiera esto es garanta de que una bacteria
"no viable" est "muerta": hay bacterias viables pero no cultivables. Como se ve, demostrar que
una bacteria est "muerta" es algo bastante complicado).
Antes de proceder al estudio de las diversas molculas que pueden afectar el crecimiento y/o
la viabilidad de los microorganismos, veamos unas cuantas definiciones bsicas.
Agentes esterilizantes son aquellos que producen la inactivacin total de todas las
formas de vida microbiana (o sea, su "muerte" o prdida irreversible de su viabilidad).
(Tambin existen agentes fsicos esterilizantes, como ya vimos en los dos captulos
anteriores).
Agentes desinfectantes (o germicidas) son agentes (sobre todo qumicos)
antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patgenos (infecciosos) de un
material. Pueden (y en muchos casos suelen) presentar efectos txicos sobre tejidos vivos,
por lo que se suelen emplear slo sobre materiales inertes.
Agentes antispticos son sustancias qumicas antimicrobianas que se oponen a la sepsis
o putrefaccin de materiales vivos. Se trata de desinfectantes con baja actividad txica
hacia los tejidos vivos donde se aplican.
Quimioterpicos son compuestos qumicos con actividad microbicida o microbiosttica,
con una toxicidad suficientemente baja como para permitir su administracin a un
organismo superior, en cuyos fluidos corporales y tejidos permanece estable un cierto
tiempo a concentraciones tales que los hace eficaces como antimicrobianos dentro del
organismo.
121
II.
DESINFECTANTES Y ANTISPTICOS
Como se recordar cuando tratamos el tema del calor como agentes esterilizante, la muerte de
una poblacin bacteriana se poda representar como una curva exponencial, expresin de la
cintica de primer orden. Este tipo de cintica tambin es aplicable a la muerte microbiana
cuando se aplica un agente qumico a una concentracin suficientemente alta:
Sin embargo, cuando se aplican menores concentraciones del agente, se pueden encontrar
cinticas diferentes, expresables como curvas sigmoidales:
Como se ve, hay un margen en el que la curva sigue una cintica de primer orden, pero dicha
cintica no se puede extrapolar: obsrvese que a tiempos prolongados la curva se hace casi
paralela al eje de abscisas, lo cual indica que queda una fraccin de clulas viables.
2.1.
FACTORES QUE AFECTAN LA POTENCIA DE UN DESINFECTANTE

Concentracin del agente y tiempo de actuacin
La concentracin para obtener un determinado efecto, as como el rango de
concentraciones en que se puede demostrar un determinado efecto, dependen de:
tipo qumico del desinfectante,
tipo de microorganismos a eliminar,
mtodo de ensayo del efecto.
Existe una estrecha relacin entre la concentracin del agente y el tiempo necesario
para matar una determinada fraccin de la poblacin bacteriana, segn la siguiente
expresin:
c n . t K
Donde C es la concentracin del agente, n es el coeficiente de dilucin (una constante),
y t es el tiempo de actuacin.
Esta ecuacin nos dice qu relacin existe entre la variacin de la concentracin del
agente y el tiempo para matar una fraccin de la poblacin microbiana.
Por ejemplo:
los fenoles poseen un coeficiente de dilucin n = 5 6; ello implica que aun
pequeos cambios en la concentracin provocan cambios muy acentuados en el
tiempo para lograr un mismo efecto: as, si reducimos la concentracin de fenol
desde un valor dado a su mitad, necesitamos emplear 64 veces ms de tiempo para
conseguir matar una misma proporcin de bacterias.
En cambio, los hipocloritos (constituyentes de las lejas) tienen coeficiente n = 1, lo
que se refleja en que pequeos cambios en la concentracin requieren pequeos
cambios en el tiempo de aplicacin.
Finalmente, y refirindonos al tiempo, no todas las bacterias mueren al mismo tiempo, ni
siquiera cuando se aplica un exceso del agente (repsense los grficos anteriores).
122
Ramirez - Balqui
pH.
El pH afecta tanto a la carga superficial neta de la bacteria como al grado de ionizacin
del agente. En general, las formas ionizadas de los agentes disociables pasan mejor a
travs de las membranas biolgicas, y por lo tanto son ms efectivos.
los agentes aninicos suelen ser ms efectivos a pH cidos;
los agentes catinicos muestran ms eficacia a pH alcalinos.
Temperatura
Normalmente, al aumentar la temperatura aumenta la potencia de los desinfectantes.
Para muchos agentes la subida de 10 grados supone duplicar la tasa de muerte. Pero
con el fenol, la subida de 10 grados representa multiplicar por 5 o por 8 la eficacia.
Naturaleza del microorganismo y otros factores asociados a la poblacin
microbiana
Segn la especie empleada: p. ej., el bacilo tuberculoso resiste los hipocloritos mejor
que otras bacterias;
Segn la fase de cultivo;
Dependiendo de la presencia de cpsulas o de esporas (suelen conferir ms
resistencia);
Nmero de microorganismos iniciales.
Presencia de materiales extraos
La existencia de materia orgnica en el material a tratar (p. ej., sangre, suero, pus)
afecta negativamente a la potencia de los desinfectantes de tipo oxidante (como los
hipocloritos) y de tipo desnaturalizante de protenas, hasta el punto que pueden llegar a
hacerlos inactivos en cuanto a su poder desinfectante y/o esterilizante.
Los principales mecanismos por los que se pierde actividad son:
adsorcin (o sea, absorcin superficial) del desinfectante a coloides de protenas;
formacin de complejos inertes o poco activos;
unin de grupos activos del desinfectante a protenas extraas.
Ejemplos:
los agentes mercuriales se inhiben por sustancias que lleven grupos sulfhidrilo (-SH).
las sales cuaternarias de amonio se inhiben en presencia de jabones y lpidos.
Por lo tanto, para el empleo eficaz de muchos desinfectantes hay que contar con este
factor, determinando previamente el gasto de materia orgnica inerte, o calculando la
potencia neta del desinfectante en presencia de la materia orgnica.
2.2.
DETERMINACION (EVALUACION) DE LA POTENCIA DE UN DESINFECTANTE.

La determinacin de la actividad desinfectante de un determinado agente es necesaria
para conocer su posible eficacia. El mtodo primario que se viene empleando desde
hace muchos aos es comparar la potencia del compuesto a ensayar con la de un
desinfectante-tipo o estndar, que por motivos histricos es el fenol.
123
Coeficiente fenol o coeficiente fenlico: consiste en la siguiente relacin.

mxima dilucin del desinfectante que mata a un microorganismoen 10 min,pero no en 5 min.
mxima dilucin del fenol que mata a ese microorganismoen 10 min,pero no en 5 min.
En los EEUU, la Administracin Federal de Alimentos y Medicamentos (F.D.A.= Food

and Drug Administration) emplea un test oficial para desinfectantes en condiciones
normalizadas, usando una serie de cepas bacterianas concretas, cuya susceptibilidad al
fenol se conoce exactamente:
una cepa concreta de Salmonella typhimurium
una cepa de Staphylococcus aureus
una cepa de Pseudomonas aeruginosa
El mtodo consiste, en esencia, en lo siguiente:
1. un cultivo de una de estas cepas se diluye 10 veces (1/10) en sucesivas diluciones
del desinfectante problema, y se dejan a 20 minutos;
2. de cada una de las diluciones se siembran alcuotas, a los 5 y a los 10 minutos, en
placas de Petri provista con un medio de cultivo adecuado;
3. se determina el coeficiente fenol segn la frmula que hemos expuesto;
4. una vez determinado, se recomienda usar concentraciones 5 veces superiores a las
indicadas por el coeficiente fenol.
Limitaciones de este mtodo:
El coeficiente fenol slo es indicativo cuantitativamente en desinfectantes
qumicamente similares al fenol, y que tengan coeficientes de dilucin (n) parecidos.
Aun cuando conozcamos el coeficiente fenol de un compuesto, su valor indicativo se
limita a las diluciones que se hayan empleado en la determinacin.
Hay que atender a las condiciones de valoracin, ya que como dijimos antes, la
presencia de materia orgnica supone una merma del poder real de desinfeccin.
Para solucionar algunos de estos inconvenientes se han puesto a punto otros mtodos
de valoracin:
Prueba de la concentracin equivalente
Consiste en determinar la concentracin del desinfectante a ensayar que ejerce el
mismo efecto sobre la bacteria de referencia que otra concentracin de un
desinfectante-tipo (estndar).
Determinacin de la toxicidad del desinfectante
Como se coment anteriormente, no todos los agentes esterilizantes son aptos como
desinfectantes de tejidos, ya que pueden presentar efectos txicos. Por ello, siempre
que se intenta introducir el uso de un nuevo compuesto desinfectante, hay que evaluar
su potencial txico, mediante el llamado ndice de toxicidad, que es el cociente entre el
poder desinfectante y el poder txico
124
Ramirez - Balqui
III. TIPOS DE DESINFECTANTES.

Se suelen clasificar de acuerdo con su mecanismo de accin:
A) AGENTES QUE DAAN LA MEMBRANA.
1). Detergentes.
a). acatinicos
b). aninicos
c). no inicos
2). Compuestos fenlicos.
a). fenol
b). cresoles
c). difenilos halogenados
d). alquilsteres del para-hidroxibenzoico
e). aceites esenciales de plantas
3). Alcoholes.
a). etanol
b). isopropanol
B) AGENTES DESNATURALIZANTES DE PROTEINAS.
1). cidos y bases fuertes
2). cidos orgnicos no disociables
C) AGENTES MODIFICADORES DE GRUPOS FUNCIONALES.
1). Metales pesados
a). mercuriales
b). compuestos de plata
c). compuestos de cobre
2). Agentes oxidantes
a). halgenos
b). agua oxigenada
c). permanganato potsico
d). cido peractico
3). Colorantes
a). derivados de la anilina
b). derivados de la acridina (flavinas)
4). Agentes alquilantes
a). formaldehido
b). glutaraldehido
c). xido de etileno
d). -propionil-lactona
125
3.1.
AGENTES QUE DAAN LA MEMBRANA CELULAR.

Los solventes orgnicos (fenoles, alcoholes) y los desinfectantes tensioactivos
(detergentes) daan la integridad estructural de la membrana (es decir, la disposicin
ordenada de lpidos y protenas), de modo que interfieren con su funcin, ejerciendo un
efecto neto de
Interferencia con procesos de transporte y metabolismo energtico;
Salida de pequeas molculas de la clula.
3.1.1. Detergentes (desinfectantes tensioactivos o surfactantes).
Los detergentes sintticos, al igual que los jabones, contienen una porcin
hidrofbica (normalmente una larga cadena lipfila) y una porcin hidrfila (un
grupo polar), lo cual les permite formar micelas en solucin acuosa, as como
formar capas que cubren y solubilizan molculas hidrfobas.
Segn sea la porcin hidrfila, los detergentes se pueden clasificar en:
Detergentes inicos:
detergentes catinicos (grupo activo con carga positiva)
detergentes aninicos (grupo activo con carga negativa)
Detergentes no inicos (no suelen tener actividad antimicrobiana).
3.1.1.1. Detergentes catinicos.
Son los detergentes ms potentes en cuanto a su actividad desinfectante,
siendo activos contra bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Los
principales son los llamados compuestos de amonio cuaternario:
Sales de amonio cuaternario, sobre todo aquellas que van como
cloruros o bromuros. Su frmula general se puede representar as:
Los cuatro sustituyentes (R1 a R4) del N son cadenas de hidrocarburos
variados. Las sales de amonio cuaternario ms activas son aquellas que
tienen tres grupos alqulicos cortos y un grupo alqulico largo: cloruro de
cetilpiridinio, cloruro de benzalconio.
Mecanismo de accin: La porcin hidrfoba penetra en las membranas,
mientras que el grupo polar catinico se asocia con los fosfatos de los
fosfolpidos, provocando alteraciones en dichas membranas, reflejadas en
la prdida de su semipermeabilidad, con salida de metabolitos de N y P
desde el citosol. Es entonces cuando el detergente puede entrar al interior
celular, con un efecto secundario de desnaturalizacin de protenas. Su
actividad se mejora a pH alcalino.
Son rpidamente bactericidas a concentraciones muy bajas (del orden de
una parte por milln, 1 ppm), siempre que en el material a tratar no exista
materia orgnica.
126
Ramirez - Balqui
Usos, ventajas e inconvenientes: Tienen baja toxicidad, por lo que se

pueden emplear como desinfectantes y antispticos de la piel. Se
emplean igualmente en la desinfeccin de material de industrias
alimentarias.Su actividad se ve neutralizada por jabones y fosfolpidos,
precipitando en su presencia.
3.1.1.2. Detergentes aninicos.
Con grupos carboxilo como porcin hidrfila:
jabones
saponinas
sales biliares
cidos grasos disociables
Con grupos sulfato como porcin hidrfila:
dodecilsulfato sdico (SDS), tambin llamado laurilsulfato sdico
sulfonato de alquilbenceno
Mecanismo: Provocan una gran disrupcin de membranas, con efectos
de lisis. Son activos sobre todo a pH cido, preferentemente sobre
bacterias Gram-positivas, pero poco sobre Gram-negativas, ya que stas
quedan ms protegidas por la barrera del lipopolisacrido de la membrana
externa.
Usos: Cuando los detergentes aninicos se combinan con cidos, se
logran desinfectantes sanitarios muy potentes (debido al efecto sinrgico
de ambos componentes) y de rpida actuacin (unos 30 segundos).
3.1.1.3. Detergentes no inicos.
No tienen actividad antimicrobiana, pero algunos tienen empleo en otros
campos de la Microbiologa: los steres del cido oleico (bajo nombres
comerciales como CarbowaxJ, Tween-80J) pueden adicionarse a medios
de cultivo para evitar la formacin de grumos y favorecer el crecimiento
disperso de ciertas bacterias (como Mycobacterium tuberculosis); adems
el oleico puede estimular el crecimiento.
3.1.2. Fenoles.
Son rpidamente bactericidas a bajas concentraciones, causando:
daos a membranas, con prdida de constituyentes citoplsmicos;
inactivacin irreversible de oxidasas y deshidrogenasas de membrana;
desnaturalizacin de protenas.
Tienen baja solubilidad en agua, por lo que se emplean en frmulas que incluyen
agentes emulsificadores (jabones) que, adems, aumentan su actividad.
127
3.1.2.1. Fenol.
El fenol o cido carblico, histricamente uno de los primeros
desinfectantes en usarse, slo se emplea en la actualidad como patrn
para ensayar el poder desinfectante de otros compuestos.
A partir del fenol se pueden lograr desinfectantes con mayor actividad
antibacteriana y con menor toxicidad sustituyendo hidrgenos del anillo
bencnico por radicales alqulicos o por halgenos. H aqu algunos
ejemplos:
3.1.2.2. Cresoles.
Son los alquil-fenoles. El radical alqulico puede estar en posicin orto,
meta o para, dando respectivamente el orto-cresol, el meta-cresol y el paracresol. Normalmente se emplea la mezcla de los tres, denominada
tricresol.
Se obtienen por destilacin del alquiltrn de carbn, y se emplean como
emulsiones de jabn verde bajo los nombres comerciales de Lysol J y
Creoln J.
Se usan como desinfectantes de material de desecho bacteriolgico y
como desinfectantes de la piel.
3.1.2.3. Difenilos halogenados.
El hexaclorofeno (hexacloro-orto-difenilmetano) es bacteriosttico a bajas
concentraciones (sobre todo contra cocos Gram-positivos), incluso
incorporado en jabones, pasta de dientes y cosmticos.
Algunas marcas comerciales incluan hace unos aos este compuesto,
hasta que se comprob que su absorcin por la piel, sobre todo inflamada,
puede causar neurotoxicidad e incluso, toxicidad sistmica, por lo que en la
actualidad ha dejado de usarse.
3.1.2.4. Alquilsteres del para-hidroxibenzoico.
Actan de forma similar a los alquilfenoles, pero no son txicos, debido a
que al ser ingeridos, se hidrolizan rpidamente, dando el inocuo parahidroxibenzoato.
Se emplean como
farmacuticos.
conservantes
de
alimentos
de
productos
3.1.2.5. Ciertos aceites esenciales de origen vegetal.

Desde la antigedad, y de modo emprico, se vienen usando algunos
aceites esenciales de plantas aromticas como conservantes y
antispticos, ya que como se ha podido comprobar, contienen varios
compuestos fenlicos:
128
Ramirez - Balqui
el timol (de Thymus, los tomillos);

el eugenol se emplea en odontologa como antisptico.
3.1.3. Alcoholes.
Los alcoholes desorganizan las bicapas lipdicas penetrando en la regin
hidrocarbonada de los lpidos. No afectan a las endosporas, por lo que no son
esterilizantes. Su accin desinfectante mejora conforme aumenta la longitud de la
cadena aliftica de los alcoholes, hasta aquellos con 8 a 10 tomos de carbono
(C8-C10), ya que los alcoholes de cadenas ms largas de C 10 tienen una baja
solubilidad en agua.
3.1.3.1. Etanol (CH3-CH2OH).
Se emplea en desinfeccin de la piel antes de inyecciones cutneas, as
como en desinfeccin de los termmetros clnicos, siempre que se deje el
tiempo suficiente de contacto. Es ms efectivo en soluciones acuosas entre
50-70%, ya que para su mejor accin se implica la intervencin del agua. A
100% de pureza es poco efectivo.
3.1.3.2. Isopropanol.
Es menos voltil y ms efectivo que el etanol. Se emplea igualmente en
desinfeccin de termmetros. Sin embargo, su efecto txico (narctico) es
mayor y ms duradero que aquel.
3.2.
AGENTES DESNATURALIZANTES DE PROTEINAS.

3.2.1. cidos y lcalis fuertes.
Son activamente bactericidas, debido a sus grupos H+ y OH- disociados,
respectivamente. En principio, su actividad es proporcional al grado de
disociacin, pero algunos hidrxidos son ms potentes de lo sugerido por su
mero grado de disociacin, debido a la accin txica directa que puede ejercer el
catin metlico.
Existen ciertas especies bacterianas que resisten relativamente bien la accin de
bases fuertes. Tal es el caso del bacilo tuberculoso. Esto se aprovecha para
aislarlo y purificarlo: se lica un esputo de enfermo sospechoso en una solucin
1M de sosa (NaOH) y se deja 30 minutos antes de sembrar. Bajo estas
condiciones, prcticamente slo sobrevive el Mycobacterium tuberculosis.
3.2.2. cidos orgnicos.
Los cidos orgnicos, que son poco disociables, ejercen sus efectos en cuanto a
molculas intactas (sin disociar), que penetran a la clula.
El cido benzoico y el cido srbico se usan ampliamente como conservantes
alimentarios.
Ciertos cidos (como el actico, lctico, propinico) aparecen en alimentos
fermentados, actuando como conservantes naturales. Estos mismos, as como el
129
ctrico se pueden aadir a otros tipos de alimentos, para prolongar el periodo de

posible almacenamiento de los productos.
3.2.3. El cido brico se ha usado como conservante (a veces ilegal) de alimentos,
as como en oftalmologa.
3.3.
AGENTES MODIFICANTES DE GRUPOS FUNCIONALES DE PROTEINAS Y DE

ACIDOS NUCLEICOS.
Esta amplia clase de agentes se caracteriza, en general, por los siguientes efectos:
alteran grupos que forman parte de los centros activos de enzimas y otras protenas;
alteran grupos funcionales de cidos nucleicos, componentes de pared y de
membrana.
Como ya vimos en la clasificacin de agentes desinfectantes, dentro de este grupo se
distinguen a su vez:
1. metales pesados
2. agentes oxidantes
3. tinturas de colorantes
4. agentes alquilantes
3.3.1. Metales pesados.
Las sales solubles de Hg, As, Ag, Cu, etc., "envenenan" la actividad enzimtica
formando mercptidos con los grupos -SH de la cistena. Tambin interaccionan
con -NH2, -COOH y radicales fosfato.
Los ms efectivos son los derivados del mercurio y de la plata (actan a menos
de 1 ppm).
3.3.1.1. Mercuriales. Se vienen usando desde antiguo en Medicina.
Cloruro de mercurio (HgCl2). En solucin al 0,1% fue muy usado como
desinfectante potente, pero es muy txico, y apenas se emplea en la
actualidad.
Compuestos orgnicos de mercurio (como el Mercurocromo, la
Mercromina, el Mertiolato): No son totalmente fiables como
desinfectantes y presentan cierta (aunque baja) toxicidad, pero se
emplean mucho como antispticos de la piel y de heridas.
Sales de fenilmercurio. Son potentes inhibidores no slo de bacterias,
sino de levaduras, hongos y algas. Se usan especialmente en el control
de posibles contaminantes microbianos (p. ej., bacterias oportunistas del
gnero Pseudomonas) en productos farmacuticos, cosmticos y
oftalmolgicos.
130
Ramirez - Balqui
3.3.1.2. Compuestos de plata.

Bien sea en forma de sales solubles, o en preparaciones coloidales, los
compuestos de plata se usan ampliamente como antispticos, aunque
estn restringidos, al tener efectos irritantes y custicos.
Nitrato de plata (AgNO3). Es muy bactericida frente al gonococo
(Neisseria gonorrhoeae), y por ello se usa habitualmente para prevenir la
oftalmia gonoccica del recin nacido.
Coloides orgnicos de plata. En ellos los iones Ag+ se van liberando
lentamente. Tienen efectos bacteriostticos, y encuentran su principal
aplicacin en oftalmologa.
Cremas de nitrato de plata y sulfodiazina de plata. Usadas para el
tratamiento de quemaduras, han reducido notablemente la mortalidad
derivada de las grandes quemaduras.
3.3.1.3. Sales y compuestos de cobre.
No tienen aplicacin en Bacteriologa Mdica, pero se emplean en
Agricultura para el control de hongos y algas.
3.3.2. Agentes oxidantes.
Los efectos de los agentes oxidantes que se tratan a continuacin son la
inactivacin de protenas enzimticas (convirtiendo los radicales -SH en
disulfuros -S-S-). Adems, los ms potentes tambin atacan radicales amino, el
grupo indol (presente en el triptfano), y la tirosina.
3.3.2.1. Halgenos.
Son bactericidas muy tiles y muy potentes. El iodo no tiene parangn
como desinfectante de la piel, y el cloro no tiene igual en el tratamiento
de aguas.
Yodo: Aparte de su efecto oxidante, se combina irreversiblemente con
residuos de tirosina de las protenas. Sus principales presentaciones son
la tintura de iodo y los iodforos.
Tintura de iodo: es una mezcla de 2% de I2 + 2% de IK en alcohol de
70%. Su mximo efecto bactericida lo tiene a pH<6. Es un magnfico
antisptico de la piel, de hecho el mejor de los conocidos, pero tiene un
efecto doloroso y custico en heridas abiertas.
Iodforos: son mezclas de iodo con agentes tensioactivos
(detergentes), en los que stos actan como portadores del iodo, al que
van liberando lentamente, sin provocar irritacin. Tambin se emplean
en desinfeccin de instalaciones de industrias alimentarias.
131
Cloro. El cloro fue uno de los primeros antispticos en usarse (antes de

conocerse su mecanismo, e incluso antes de que se supiera el autntico
papel de los microorganismos en las enfermedades infecciosas). Holmes
(Boston, 1835) y Semmelweiss (Viena, 1847) lo introdujeron en la
prctica de los mdicos y matronas para impedir la transmisin de la
sepsis puerperal, que era contagiada de mujer a mujer por las manos de
los doctores y de las parteras, y que era una notable causa de
mortalidad de mujeres durante muchos siglos.
El cloro se presenta bajo las formas de Cl2 (gaseoso), hipocloritos y
cloraminas. El efecto desinfectante se debe a la liberacin de cloro libre
(Cl2); a su vez, el Cl2 reacciona con el agua para dar cido hipocloroso,
que a pH cido o neutro es un oxidante fuerte:
Cl2 + H2O ClOH + H+ + Cl(ClO)2Ca + H2O Ca++ + H2O + 2 ClO(ClO)2Ca + 2H2O Ca(OH)2 + 2 ClOH
La disociacin del cido hipocloroso depende del pH (se realiza a pH<7)
ClOH H+ + ClOCloro gaseoso: a 1-3 ppm se usa en la cloracin de aguas para bebida
y de aguas de piscinas. Su actividad se ve muy influida (mermada) por la
presencia de materia orgnica; por ello, se suele determinar la demanda
de cloro del agua a tratar. Descontada dicha demanda, el cloro gaseoso
mata rpidamente (15-30 segundos) a slo 1 ppm.
Soluciones de hipocloritos: hipocloritos de sodio, de calcio o de litio. A
200 ppm de cloro se usan ampliamente, ya como lquidos (lejas), o en
polvo, en industrias alimentarias y lcteas (para desinfectar el
equipamiento y maquinaria que ha de entrar en contacto con los
alimentos a procesar), en restaurantes, hoteles, hospitales, etc.
3.3.2.2. Agua oxigenada.
El perxido de hidrgeno (H2O2), en solucin al 3%, se us en otro
tiempo como desinfectante, pero est actualmente en desuso, debido a
que algunas bacterias son resistentes, por la posesin de catalasas y
peroxidasas. Adems, en desinfeccin de heridas abiertas su efecto es
muy pobre, porque el agua oxigenada es descompuesta por la catalasa
tisular.
Se emplea en la desinfeccin de lentillas blandas, dejando tiempo
suficiente de actuacin. Tambin, en desinfeccin de superficies inertes
y equipos quirrgicos.
132
Ramirez - Balqui
3.3.2.3. Permanganato potsico (K3MnO4).

Al 1%, se usa como antisptico uretral.
3.3.2.4. Acido peractico (CH3-CO-O-OH).
Es un fuerte agente oxidante. En forma de vapor se usa en la
esterilizacin de cmaras de cra de animales libres de grmenes.
3.3.3. Tinturas de colorantes bsicos.
Algunos colorantes derivados de la destilacin del alquitrn de carbn, sobre
todo los trifenilmetanos y las acridinas, no slo tien las bacterias (recurdense
las prcticas), sino que tambin actan como antibacterianos, incluso a
pequeas concentraciones. Los colorantes bsicos son los ms efectivos.
En general, su mecanismo depende de su afinidad hacia los grupos fosfato
(cidos) presentes en las nucleoprotenas.
Encuentran su uso como antispticos de lesiones dermatolgicas, infecciones de
la piel y pequeas heridas.
Su principal inconveniente es que muchos de ellos se inactivan en presencia de
suero y otras protenas.
3.3.3.1. Colorantes de trifenilmetano:
Son derivados de la anilina. Entre ellos se encuentran el verde brillante,
el verde malaquita, el violeta de genciana, el violeta cristal y la fuchsina
bsica.
Son muy selectivos hacia bacterias Gram-positivas, sobre las que son
efectivos a slo 0,2-2 ppm. En cambio, las Gram-negativas suelen ser
resistentes, debido a su membrana externa.
El efecto antibacteriano se debe a la pseudobase, que es ms lipfila
que el respectivo catin, y bajo esa forma accede al interior celular,
donde se une a los grupos fosfato de los cidos nucleicos.
3.3.3.2. Colorantes derivados de la acridina (llamados flavinas, por su color
amarillento -Lat: flavus-).
Los ejemplos tpicos son la acriflavina, la proflavina y la tripoflavina.
Interfieren en la biosntesis de cidos nucleicos (intercalndose en la
doble hlice del ADN) y protenas. Son bactericidas y bacteriostticos
sobre una gran diversidad de bacterias.
A diferencia de las anilinas, ejercen su accin tambin en presencia de
materiales como suero, pus, etc.
Su uso principal es la antisepsia de heridas.
133
3.3.4. Agentes alquilantes.

Son agentes esterilizantes, activos tanto sobre clulas vegetativas como sobre
esporas, que ejercen su efecto letal por su accin alquilante de protenas y
cidos nucleicos.
3.3.4.1. Formaldehido (HCHO).
La alquilacin la produce reemplazando hidrgenos lbiles de ciertos
grupos qumicos (-NH2, -OH, -COOH y -SH), produciendo:
hidroximetilaciones
condensaciones (entrecruzamientos).
Usos comerciales:
como gas, en la descontaminacin de habitaciones;
como formalina (solucin acuosa al 35%);
como paraformaldehido (polmero slido de 91-99% de pureza).

La formalina se emplea para preservar tejidos, en lquidos de
embalsamamiento, y al 0,2-0,4% en la preparacin de vacunas de virus.
3.3.4.2. Glutaraldehdo.
Es menos txico y ms potente que el formaldehdo, y no se afecta por
materiales con protenas. Cada vez se emplea ms como esterilizante
fro de instrumental quirrgico. Es el nico recomendado para esterilizar
equipamiento de terapia respiratoria.
3.3.4.3. Oxido de etileno.
Tiene un efecto similar al del formaldehdo: Sustituciones y
entrecruzamientos irreversibles en grupos amino, sulfhidrilo, etc., de
protenas. Tambin reacciona con grupos fosfato y anillos nitrogenados
de los cidos nucleicos.
Es un agente empleado como esterilizante gaseoso, aunque es de
accin lenta. Se emplea cuando no se puede recurrir a la esterilizacin
por calor: esterilizacin de material de plstico, drogas, ciertos productos
biolgicos, equipamiento electrnico. La operacin se realiza en
cmaras parecidas al autoclave. Sin embargo, es un mtodo caro y
exhibe ciertos riesgos: presenta accin vesicante y toxicidad para el
hombre (mutgeno y carcingeno).
3.3.4.4. -propionil-lactona.
Es 25 veces ms activa que el formaldehdo. Acta como gas en
presencia de 80-90% de humedad relativa, aunque es poco penetrante.
IV. QUIMIOTERPICOS DE SNTESIS Y ANTIBITICOS. INTRODUCCIN
Los quimioterpicos son sustancias con actividad antimicrobiana (microbicida o
microbiosttica) con toxicidad suficientemente baja como para poder ser administrados a un
134
Ramirez - Balqui
organismo por la va adecuada, hasta alcanzar y mantener concentraciones eficaces en los

tejidos.
Recordemos aqu esta pgina notable de la historia de la Microbiologa:
1900-15
Ehrlich concibe la idea de usar compuestos qumicos de
sntesis
como
"balas
mgicas"
selectivas
hacia
microorganismos, pero inofensivas para las personas o
animales superiores. En 1909 descubre que el salvarsn es
efectivo contra la sfilis. Acua el trmino "quimioterapia".
1932-35
Domagk, siguiendo los pasos de Ehrlich, descubre la accin
del rojo de prontosilo (la primera sulfamida) sobre el
neumococo y otros estreptococos in vivo.
1940
Woods descubre el mecanismo de accin de las sulfamidas.
Estamos en plena "Edad de oro de la Quimioterapia de
sntesis".
1929
Fleming descubre la penicilina, el primer antibitico natural,
pero fracasa en su intento de purificarlo. La industria
farmacutica se muestra "indiferente".
1940
Chain y Florey purifican la penicilina.
1944
Waksman, un microbilogo de suelos, ha iniciado una
bsqueda de microorganismos productores de antibiticos.
Descubre la estreptomicina. Comienza la poca dorada de los
antibiticos (quimioterpicos naturales), y la bsqueda racional
rinde decenas de nuevos antimicrobianos procedentes de
Actinomicetos, otras bacterias y hongos.
V. QUIMIOTERPICOS DE SNTESIS
5.1. INHIBIDORES EN LA RUTA DE BIOSINTESIS DEL TETRAHIDROFOLATO (THF).
La ruta biosinttica del cido tetrahidroflico est ilustrada en la Fig.1. El THF es lo que
se denomina habitualmente "donador de unidades de 1 tomo de carbono", y los seres
vivos lo requieren en ciertas rutas biosintticas:
biosntesis de los aminocidos Met, Gly. Adems, las Eubacterias lo necesitan para el
grupo formilo del fMet-ARNt (el ARN transferente que incorpora la formil-metionina al
comienzo de la protena).
Biosntesis de las purinas y pirimidinas, y sobre todo del dTMP.
Biosntesis del pantotnico.
Como veremos a continuacin, sobre algunos pasos de esta ruta acta una serie de
agentes quimioterpicos, muchos de ellos con gran importancia clnica.
5.1.1. SULFAMIDAS (SULFONAMIDAS).
Como ya hemos comentado, su descubrimiento y la comprobacin de su accin
quimioterpica, marcaron el comienzo de la Quimioterapia con criterios racionales.
Despertaron gran inters cuando se mostr que su mecanismo de accin depende
del hecho de que funcionan como anlogos de metabolitos, actuando como
inhibidores competitivos respecto de cierta enzima.
135
Domagk (1935), siguiendo la estela de Ehrlich, descubre que el Rojo de Prontosilo

confiere proteccin a ratones inoculados experimentalmente con estreptococos.
Sin embargo, se vio que este mismo compuesto no inhiba a los mismos
estreptococos in vitro, es decir, en tubo de ensayo o en placas de Petri. Cul era
la razn de este disimilar comportamiento de esta sustancia in vivo e in vitro? La
explicacin la encontr el matrimonio Trfoul (que a la sazn trabajaba en el
Instituto Pasteur): el metabolismo de los ratones rompe el Rojo de Prontosilo, que
por s mismo es inactivo contra las bacterias, generando el compuesto activo (con
actividad antibacteriana): la sulfanilamida (para-aminobencenosulfonamida).
A partir de la sulfanilamida se sintetizaron desde entonces gran nmero de
derivados por sustitucin de uno de los hidrgenos del grupo sulfonamida,
formando estos derivados la llamada familia de las sulfamidas.
Ejemplos:
sulfapiridina (por unin del grupo piridina)
sulfatiazol (con el grupo tiazol)
sulfadiazina (con el grupo pirimidina)
sulfaguanidina.
Lo que tienen en comn las sulfamidas con actividad antibacteriana es:
tener libre el grupo amino en para (o, como le ocurre al rojo de Prontosilo, que
quede libre en el organismo hospedador como consecuencia de algn
procesamiento metablico);
grupo sulfona (-SO2-) unido al anillo bencnico;
La sustitucin del grupo amido unido a la sulfona, aunque no modifica
sustancialmente la actividad antibacteriana, puede suponer una serie de ventajas
de tipo farmacolgico:
disminuir la toxicidad hacia el organismo hospedador;
aumentar su solubilidad en agua;
mejorar la absorcin del compuesto por el intestino (lo que permite
administracin va oral);
mayor persistencia de la sulfamida en el organismo (excrecin ms lenta), lo
que permite dar menos dosis para lograr el mismo efecto.
La introduccin de las sulfamidas en los aos 40 supuso un gran xito en el
tratamiento de enfermedades provocadas por cocos Gram-positivos (infecciones
estreptoccicas y neumonas por el neumococo). Aunque la "poca dorada de las
sulfamidas" ya ha pasado (debido sobre todo al ulterior descubrimiento de
antibiticos naturales), hoy da siguen emplendose en el tratamiento de
infecciones de las vas urinarias, algunas formas de meningitis, y en Veterinaria.
136
Ramirez - Balqui
Mecanismo de accin de las sulfamidas (descubierto por Woods y cols. en

1940):
Las sulfamidas tienen un efecto bacteriosttico. Su accin antibacteriana se
debe al hecho de que funcionan como anlogos estructurales del cido paraaminobenzoico (PABA), inhibiendo competitivamente por el acceso a la enzima
dihidropteroil-sintetasa.
Como se puede ver, la dihidropteroil-sintetasa cataliza la condensacin del
PABA con el 2-amino,4-hidroxi, 6-hidroximetil dihidropteroil-pirofosfato, que
lleva a la sntesis de cido dihidropteroico (una de las fases intermedias de la
sntesis del tetrahidroflico -THF). En la figura se puede apreciar que el PABA y
las sulfamidas son muy parecidas. De hecho, la sulfamida es usada por la
enzima como un sustrato alternativo al PABA. En este caso, la enzima
cataliza una reaccin que genera un producto que no puede actuar como
intermediario en los siguientes pasos de la ruta de sntesis del THF.
Los microorganismos son sensibles a las sulfamidas porque sus necesidades
de THF las han de satisfacer sintetizndolo a partir de PABA usando la ruta de
la que estamos hablando. Sin embargo, los animales son resistentes, debido a
que carecen de esta ruta, y en cambio, se aprovisionan de flico directamente
en su dieta. Pero un ms: en teora el cido flico de la dieta del organismo
hospedador podra anular el efecto teraputico si fuera captado por la bacteria,
pero en la realidad esto no ocurre, porque el flico no puede entra a la clula
bacteriana.
El notable xito teraputico de las sulfamidas, junto con el desentraamiento de
su mecanismo de accin, condujo durante los aos 40 y 50 a una gran lnea de
investigacin consistente en sintetizar compuestos que fueran anlogos de
factores bacterianos de crecimiento, con la esperanza de "disear"
racionalmente nuevos quimioterpicos. Sin embargo, el gran esfuerzo de
bsqueda no rindi apenas frutos. Y la razn hay que buscarla de nuevo en la
excepcional confluencia de hechos que acabamos de citar para las sulfamidas
y que hacen que las sulfamidas funcionan tan bien: inhibicin competitiva,
presencia de la ruta en bacterias pero ausencia en animales, la no entrada del
flico en bacterias pero s en las clulas animales. Esta "suerte" no ha
acompaado cuando se ha investigado el posible potencial de anlogos de
otros metabolitos.
5.1.2. SULFONAS.
Son derivados de la dapsona (4,4'-diamino-difenilsulfona). Aunque no se usa
contra infecciones normales, ha encontrado una importante aplicacin en el
tratamiento de la lepra (producida por Mycobacterium leprae); de hecho es el
quimioterpico de eleccin para esta enfermedad. Probablemente su mecanismo
de accin est basado en actuar como competidor del PABA.
5.1.3. PARA-AMINOSALICILICO (PAS).
Es uno de los agentes que se emplean para el tratamiento de la tuberculosis
(provocada por Mycobacterium tuberculosis). Alcanza el interior de los monocitos
137
y macrfagos, que son las clulas donde penetra el bacilo tuberculoso (que es un
parsito intracelular)
Al igual que el PAS, las sulfonas parecen actuar como competidores del PABA,
pero se desconoce la razn por la que estos dos compuestos sean tan especficos
de las especies patgenas de Mycobacterium.
5.1.4. INHIBIDORES DE LA DIHIDROFOLATO-REDUCTASA (DHFR).
El ltimo paso en la sntesis del THF es la reduccin del dihidroflico (DHF),
catalizado por la dihidrofolato-reductasa (DHFR). Esta reaccin es inhibida por dos
quimioterpicos:
el metotrexato, que al ser txico no encuentra aplicacin clnica;
el trimetoprm, que tiene un uso clnico, sobre todo en terapia sinrgica junto
con el sulfometoxazol (una sulfamida). Este doble quimioterpico se emplea
contra infecciones urinarias recurrentes, bronquitis crnicas por neumococos, y
algunas infecciones de Salmonella y Shigella.
Tienen efectos bactericidas, con alta afinidad hacia la enzima DHFR bacteriana,
pero baja hacia la DHTR de animales. Esto deriva del hecho de que, aunque la
mayor parte de los seres vivos tienen DHFR, la enzima bacteriana difiere en
estructura respecto de la de mamferos.
Existen inhibidores especficos de las versiones de la DHFR de ciertos protozoos
parsitos: as por ejemplo, la pirimetamina y el proguanil se usan contra
Plasmodium, el agente de la malaria. Incluso el metotrexato se puede emplear en
el tratamiento de ciertos cnceres.
5.2. ISONIAZIDA.
Es la hidrazida del cido isonicotnico (tambin conocida por sus iniciales inglesas, INH).
Como se puede ver, es un anlogo estructural de dos vitaminas: la nicotinamida y el
piridoxal.
e incluso
intracelularmente, lo que permite su empleo contra las especies patgenas de
Mycobacterium, y en general contra bacterias cido-alcohol resistentes (Nocardia,
Corynebacterium).
Mecanismo de accin: Ejerce varios efectos, probablemente debido a mecanismos
pleiotrpicos (relacionados entre s):
interferencia -por mecanismo an desconocido- con la biosntesis de la pared celular
de las bacterias AAR, que conduce a desorganizar los cidos miclicos;
actuacin como antimetabolito de nicotinamida y piridoxal;
activacin de la NAD-asa, lo que conduce a reducir el "pool" de NAD.
138
Ramirez - Balqui
5.3. QUINOLONAS.
El cido nalidxico (4-oxo, 8-azaquinolina) se sintetiz en 1962, y encontr su aplicacin
en el tratamiento de infecciones por Gram-negativas del tracto urinario, donde se
concentra.
Recientemente se han sintetizado las llamadas fluoroquinolonas, como por ejemplo el
ciprofloxacn. Presentan 600 veces ms actividad que el nalidxico, y actualmente se
recetan frecuentemente como quimioterpicos de amplio espectro.
Mecanismo de accin: Las quinolonas bloquean la ADN-girasa, unindose a la
subunidad de tipo A. Recordemos que las bacterias poseen una clase especial de
topoisomerasas de tipo II, llamadas girasas, que introducen superenrollamiento negativo
en la doble hlice del ADN. La ADN-girasa est constituida por dos subunidades de tipo A
y dos de tipo B (A2B2); las de tipo A producen los cortes y empalmes sucesivos en la
doble cadena, mientras que las subunidades B son ATPasas que proporcionan la energa
para la reaccin.
El bloqueo de las quinolonas sobre la girasa supone que sta queda "congelada" en la
fase en que el ADN est unido al enzima. Ello provoca la acumulacin de roturas de
doble cadena, lo que conduce a la muerte de la bacteria.
En la seccin 3.5 de este captulo (sobre antibiticos que inhiben el metabolismo de los
cidos nucleicos) veremos algunos que actan sobre las subunidades de tipo A.
5.4. NITROFURANOS.
Los nitrofuranos, como por ejemplo la nitrofurantona, tienen efecto contra Gram-positivas
y Gram-negativas, sobre todo en la orina, siendo poco efectivos en otros fluidos
corporales.
5.5. 5-FLUOROCITOSINA (FLUCITOSINA, 5FC).
Es un anlogo estructural de la citosina, interfiriendo con la sntesis de ADN y ARN. Su
aplicacin es como antifngico, sobre todo contra infecciones por algunas levaduras.
VI. ANTIBITICOS.
Los antibiticos son sustancias normalmente de bajo peso molecular producidas por seres
vivos (antibiticos naturales) o modificadas artificialmente a partir de ellas (antibiticos
semisintticos), que a pequeas concentraciones tienen efectos antimicrobianos (microbicidas
o microbiostticos), tras ser administrados por va adecuada a un organismo receptor.
La mayor parte de los antibiticos proceden del metabolismo secundario de microorganismos
procariotas (actinomicetos, Bacillus, etc.) o eucariotas (hongos de los gneros Penicillium,
Cephalosporium, etc.).
Se conocen unos 5 000 antibiticos distintos, y cada ao se descubre unos 300 nuevos. Su
importancia econmica se pone de manifiesto al pensar en las 100.000 TM de antibiticos
producidas al ao, por un valor equivalente a 400.000 millones de pesetas.
139
La mayor parte de los antibiticos comerciales se emplean para tratar enfermedades de

etiologa bacteriana, aunque algunos se usan contra hongos y levaduras, y unos pocos
presentan actividad antitumoral.
Desde el punto de vista qumico, se clasifican en grandes familias:
antibiticos que contienen carbohidratos;
lactonas macrocclicas;
quinonas y compuestos relacionados;
antibiticos peptdicos y con aminocidos;
heterociclos del N;
heterociclos del O;
aromticos;
alifticos;
etc.
La mayora de los antibiticos son molculas complejas, con regiones hidrofbicas que facilitan
el transporte al interior celular. Muchos poseen varios anillos, algunos de los cuales mejoran la
interaccin de la molcula con su diana macromolecular.
Para estudiarlos es ms til agrupar a los antibiticos no por clases segn su naturaleza
qumica, sino en funcin de las "dianas" sobre las que actan y con las que interfieren:
A) antibiticos que interfieren con la biosntesis de la pared celular
B) antibiticos que actan sobre la membrana celular
C) antibiticos que inhiben la sntesis de protenas
D) antibiticos que actan sobre la sntesis de cidos nucleicos.
Los antibiticos ms abundantes, y los mejor estudiados, son los que interfieren con enzimas
de la biosntesis del peptidoglucano de las eubacterias, y los que interfieren con la funcin del
ribosoma.
6.1. INHIBIDORES DE LA BIOSINTESIS DE LA PARED CELULAR BACTERIANA.
6.1.1. FOSFOMICINA (FOSFONOMICINA).
Este antibitico de estructura muy simple est producido por Streptomyces fradiae. Su
accin inhibitoria es ejercida a nivel de la primera reaccin de la sntesis del PG, a saber,
impidiendo la condensacin reductora del UDP-NAG con el PEP para dar UDP-NAM. Ello
lo logra unindose con la enzima transferasa correspondiente, inactivndola.
Aunque tiene baja toxicidad para organismos superiores, apenas ha encontrado
aplicacin en la clnica (se emple en Espaa, pero no est admitido en los EE UU).
6.1.2. CICLOSERINA.
Producido por Streptomyces orchidaceus, este antibitico muestra cierto parecido
estructural con la D-alanina, lo que explica el hecho de que acta como inhibidor
competitivo de las dos reacciones secuenciales de la sntesis del PG donde
aparece la D-ala:
140
Ramirez - Balqui
inhibe la racemasa que cataliza la conversin de L-ala en D-ala;

inhibe la D-alanil-D-alanina sintetasa (que condensa dos D-ala para dar el
dipptido D-ala-D-ala).
La cicloserina tiene mayor afinidad que el sustrato natural (D-ala) hacia las dos
enzimas.
Es un antibitico de amplio espectro, pero apenas se emplea clnicamente, debido
a su neurotoxicidad. Se recurre a l slo para tratar ciertos casos de tuberculosis,
en combinacin con otros antibiticos.
6.1.3. VANCOMICINA.
Es un glucopptido complejo producido por Streptomyces orientalis. Se une rpida
e irreversiblemente con el extremo D-alanil-D-alanina del pentapptido del
precursor del PG que se halla unido al undecaprenil-P (a nivel de membrana
citoplsmica), de modo que inhibe la reaccin de transglucosidacin.
Es un antibitico de espectro estrecho, bactericida frente a muchas bacterias
Gram-positivas. Recientemente se est usando frente a infecciones severas de
Staphylococcus aureus y de Streptococcus pneumoniae que sean resistentes a
otros antibiticos. Es la droga de eleccin ante colitis asociadas a antibiticos
ocasionadas por Clostridium difficile.
6.1.4. RISTOCETINA.
Es un antibitico parecido al anterior, producido por Nocardia lurida, y que, al igual
que la vancomicina inhibe la transglucosidacin, siendo activo frente a Grampositivas.
6.1.5. BACITRACINA-A.
Producida por Bacillus subtilis variedad "tracy" (de ah su nombre), es un
antibitico polipeptdico provisto de un anillo tiazol, bactericida frente a muchos
Gram-positivos as como frente al Gram-negativo Neisseria. Es demasiado txico
(sobre todo nefrotxico) como para ser administrado sistmicamente, pero tiene
uso tpico (p. ej., en ciruga del colon).
Su mecanismo de accin estriba en que se une al pirofosfato del undecaprenil-PP, e impide su regeneracin hasta undecaprenil-P por la fosfatasa especfica; por
lo tanto, evita la reentrada del undecaprenil-P en el ciclo biosinttico del PG.
6.1.6. ANTIBIOTICOS -LACTAMICOS.
Todos los antibiticos de este grupo contienen un anillo caracterstico: el anillo lactmico.
Todos los subgrupos de -lactmicos se pueden considerar derivados de un
ncleo qumico en el que, adems del anillo lactmico puede existir un heterociclo
conjugado:
141
Ncleo
Penm
Cefn
Carbapenem
Oxacefn
Clavm
Monobactam
Ejemplos
Penicilinas
Cefalosporinas
Tienamicina
Moxalactam
Clavulnico
aztreonm
PENICILINAS
Como ya sabemos, las penicilinas fueron los primeros antibiticos naturales en
descubrirse, pero en general, todos los -lactmicos tienen el mismo mecanismo
de accin. Nos concentraremos en estudiar las penicilinas.
El grupo comn a todas las penicilinas es el cido 6-aminopenicilnico (6-APA),
que en realidad es un dipptido ciclado por condensacin de L-cys y D-val, que
genera el anillo -lactmico (anillo A) y el anillo tiazolidnico (anillo B). Las
penicilinas se pueden considerar derivadas del 6-APA, sustituyendo el hidroxilo (OH) del grupo carboxilo por un radical acilo (R). Este radical acilo es variable de
unas penicilinas a otras. La variacin se puede lograr de dos maneras principales:
modificando el medio de cultivo donde se hace crecer la cepa del hongo
Penicillium.
por transformaciones qumicas "in vitro", lo que genera las llamadas penicilinas
semisintticas.
La penicilina natural, purificada por primera vez en los aos 40, es la penicilina-G
(o benzil-penicilina), en la que el radical acilo es el grupo bencilo (fenilactico).
Esta penicilina presenta una serie de limitaciones e inconvenientes:
tiene un espectro estrecho: acta frente a estreptococos del grupo A y otros
cocos Gram-positivos, pero no frente a la mayora de bacterias Gramnegativas.
Es sensible a cidos, por lo que no puede ser administrada va oral (se inactiva
a su paso por el estmago).
Es susceptible a enzimas inactivadoras (penicilinasas) producidas por muchas
bacterias.
Se elimina rpidamente por la orina (no permanece mucho tiempo en el
organismo receptor).
En algunos individuos puede provocar respuestas de hipersensibilidad (alergia
a la penicilina).
Para solventar estos problemas se fueron "creando" variantes de esta penicilina
que mejoraban algunas de sus cualidades. Por ejemplo, manipulando el medio de
cultivo del hongo se pudo lograr la llamada penicilina-V (fenoximetil-penicilina),
que es ms resistente a bajos pH. Sin embargo, las ms recientes generaciones
de penicilinas son semisintticas. Para obtenerlas se partir del ncleo del 6-APA.
142
Ramirez - Balqui
El 6-APA se puede obtener de dos modos distintos:

cultivando el hongo en medio carente de cidos grasos (lo que evita la adicin
de radical acilo);
o bien partiendo de penicilina G, y digirindola con amidasas especficas que
producen el 6-APA.
Una vez obtenido el 6-APA, ste se hace reaccionar qumicamente con un
compuesto carboxlico. Dependiendo del compuesto en cuestin, se obtiene una
amplia variedad de penicilinas semisintticas, con propiedades mejoradas:
con ms amplio espectro de accin;
con ms tiempo de permanencia en suero y fluidos corporales;
con resistencia a penicilinasas y en general -lactamasas;
resistentes pH cido, y por lo tanto susceptibles de ser administradas va oral.
Estas penicilinas semisintticas se pueden englobar en tres grupos principales:
1). resistentes a penicilinasas.Se usan sobre todo frente a cocos Grampositivos (Staphylococcus aureus, S. epidermidis).
2). De espectro ampliado. Permiten un uso efectivo frente a muchas bacterias
Gram-negativas (Haemophilus influenzae, E. coli, Proteus, Salmonella,
Shigella, etc.).
Dentro de este grupo, destacamos las "aminopenicilinas", como la ampicilina,
o la amoxicilina: el grupo -NH2 del radical acilo permite que estas penicilinas
puedan atravesar la membrana externa de las bacterias Gram-negativas.
Resisten los cidos, pero desgraciadamente slo tienen la mitad de actividad
contra Gram-positivas, y algunas son inactivadas por -lactamasas.
3).
Penicilinas anti-Pseudomonas. La carbenicilina y la piperacilina se usan

frente a Pseudomonas, un patgeno oportunista muy peligroso cuando
coloniza grandes quemaduras, heridas quirrgicas, etc.
Mecanismo de accin de las penicilinas y otros antibiticos -lactmicos:

Todas las penicilinas (incluidas las semisintticas), son bactericidas sobre
bacterias en crecimiento, y poseen el mismo mecanismo: Inhiben el sistema
enzimtico implicado en la reaccin de transpeptidacin del peptidoglucano
naciente, o sea que impiden los entrecruzamientos entre cadenas de PG. Ello
origina:
acumulacin de precursores del PG, sin ensamblar;
activacin de una serie de autolisinas (amidasas, glucosidasas), que
hidrilozan el PG maduro de la bacteria; si la bacteria se encuentra en un medio
hipotnico, termina lisndose.
En Gram-positivas, adems, se produce desorganizacin de los cidos teicoicos
y lipoteicoicos. (De hecho, parece que en este tipo de bacterias son estos cidos
los que regulan de algn modo a las autolisinas).
143
Por lo tanto, la accin bactericida y ltica de las penicilinas depende de que la

bacteria se encuentre creciendo en un medio hipotnico. Cuando la bacteria no
est creciendo, no est haciendo renovacin ("turnover") de su pared celular, lo que
implica que la penicilina no tiene "diana" sobre la que actuar; por lo tanto, en estas
condiciones la bacteria puede sobrevivir.
Esta es la base de las "recadas" de muchas infecciones, una vez que se ha dado
por terminado el tratamiento de un paciente con un antibitico -lactmico.
Una visin ms en profundidad del mecanismo de accin:
Las penicilinas tienen como dianas a una serie de autolisinas llamadas protenas
de unin a la penicilina (PBPs). Como ya vimos en el apartado 5 del captulo 6,
las PBPs son protenas implicadas en las ltimas fases de la sntesis y maduracin
del PG. Veamos en la siguiente tabla las funciones de las PBPs de E. coli, y los
efectos sobre cada una al aadir penicilina.
PBPs con actividad
transglucosidasa y
transpeptidasa:
PBP 1a y PBP 1b
PBP 2
PBP 3
PBPs con actividad
D-D
carboxipeptidasa
(endopeptidasa)
PBP 4, PBP 5, PBP
6
funcin natural
accin penicilina
Elongacin
del
cilindro
celular
Condiciona la forma de la
clula
Formacin
del
septo
transversal
Funcin natural
lisis rpida
Eliminan la D-ala terminal

delpentapptido
(maduracin PG)
no letal
la clula se redondea y
muere
Filamentacin y muerte
accin penicilina
As pues, las PBPs 1 a 3 son esenciales para la bacteria, y son las dianas de las
penicilinas que explican la actividad bactericida. Se ha propuesto que el grupo -CON- del anillo -lactmico funciona como un anlogo estructural del sustrato de las
transpeptidasas implicadas en la reaccin de entrecruzamiento (transpeptidacin)
entre el pptido del PG naciente y el del PG aceptor. La penicilina se combina con
el sitio activo de la transpeptidasa, dando un complejo enzima-penicilina (peniciloiltranspeptidasa) inactivo y bastante estable.
-LACTMICOS
BASADOS
EN
EL
NCLEO
DEL
CIDO
7AMINOCEFALOSPORNICO
El ncleo cefm es el cido 7-aminocefalospornico. Existen dos tipos de lactmicos naturales (y sus derivados semisintticos) basados en este ncleo:
cefalosporinas, producidas por hongos del gnero Cephalosporium;
144
Ramirez - Balqui
cefamicinas, producidas por ciertas especies del actinomiceto Streptomyces.

Desde un punto de vista biosinttico, derivan de los dos mismos aminocidos que
las penicilinas, pero aqu, uno de los metilos (-CH3) de la valina se incorpora al
anillo en vez de quedar fuera, haciendo que el anillo B sea el anillo dihidrotiazina.
La cefalosporina natural tiene poca actividad, pero sustituyendo artificialmente R 1 y
R2 se obtienen derivados semisintticos muy activo. Como es habitual con muchos
antibiticos de uso clnico, a lo largo de los aos la industria farmacutica ha ido
"creando" sucesivas "generaciones" de estos compuestos, con aplicaciones y
ventajas diferentes:
Las cefalosporinas se introdujeron en principio para uso en pacientes alrgicos a las
penicilinas. Algunas de ellas combinan la ventaja de tener un amplio espectro
(incluyendo bacterias difciles de tratar, como Haemophilus) y el de ser resistentes a
las -lactamasas de muchas bacterias Gram-negativas.
MONOBACTMICOS
Tienen un ncleo monocclico (slo el anilo -lactmico). El derivado semisinttico
aztreonam se puede usar contra bacterias Gram-negativas aerobias (estrictas o
facultativas) como Haemophilus, Neisseria, Pseudomonas y Enterobacterias.
Su espectro de accin estrecho es til, ya que su administracin va oral "respeta"
mejor la flora intestinal autctona del paciente.
CARBEPNICOS
Se basan en el ncleo del carbapenm. Ejemplos son las tienamicinas (como el
imipenm). Poseen un espectro muy amplio, con actividad intensa contra casi todas
las bacterias de inters mdico, incluyendo resistentes a otros antibiticos lactmicos: Staphylococcus aureus, Streptococcus, Pseudomonas, Bacteroides,
Haemophilus, Neisseria, etc.
INHIBIDORES DE LA -LACTAMASA
Un ejemplo tpico es el cido clavulnico (una oxa--lactama): tiene poca actividad
como antibitico, pero se une a las -lactamasas, inactivndolas
irreversiblemente. Actualmente los mdicos lo recetan con frecuencia en
combinacin con alguna ampicilina (una aminopenicilina, como vimos): la mezcla
ampicilina + clavulnico tiene efectos sinrgicos (se potencian el uno al otro). El
clavulnico pasa fcilmente a travs de porinas al espacio periplsmico de muchas
bacterias Gram-negativas, donde se acumula, y all inactiva a las -lactamasas;
mientras tanto, la ampicilina, "salvada" de la inactivacin de las lactamasas, puede
ejercer su efecto bactericida (por bloqueo de la transpeptidacin del PG).
6.2. ANTIBIOTICOS QUE ACTUAN SOBRE LA MEMBRANA CELULAR.
A diferencia de los antibiticos que actan a nivel de pared, los que interfieren con la
membrana celular ejercen sus efectos independientemente de que el microorganismo
145
est o no creciendo. Suelen carecer de especificidad (afectan a membranas de

procariotas y de organismos superiores), por lo que resultan ms o menos txicos para
los mamferos y, en general, han encontrado escasa aplicacin clnica.
6.2.1. ANTIBIOTICOS POLIPEPTIDICOS.
Son antibiticos producidos por especies de Bacillus durante las primeras fases de
la esporulacin. Se trata de molculas con aminocidos en configuraciones L y D,
y con presencia de ciertos aminocidos "raros" (no proteinogenticos). Algunos de
estos antibiticos son polipptidos cclicos. Su sntesis no se realiza en los
ribosomas, sino que se produce por una secuencia de reacciones enzimticas que
nada tienen que ver con el proceso de traduccin de los mensajeros genticos.
Suelen ser antibiticos de efecto bactericida. Su mecanismo consiste en que se
unen a la cara externa de la membrana citoplsmica (y, adems, a la membrana
externa de las bacterias Gram-negativas), alterando su estructura y su
permeabilidad osmtica; ello condiciona la inhibicin de procesos bsicos de la
membrana, as como la salida de metabolitos del citoplasma.
POLIMIXINAS
Producidas por Bacillus polymyxa, son decapptidos cclicos con aminocidos en
L y D, y con abundancia del "raro" L-diaminobutrico (L-DAB), y que llevan unido
una cadena aliftica C8 (el 6-metil-octanoico).
Su actividad est restringida a Gram-negativas: el anillo peptdico, que est
cargado positivamente, se une electrostticamente con los grupos negativos de la
membrana externa, desplazando a los cationes Mg++ y otros que estabilizan dicha
membrana; al mismo tiempo, la "cola" hidrofbica (la cadena aliftica) del
antibitico se introduce entre las cadenas de cidos grasos de la membrana. El
efecto neto de todo ello es que se desorganiza la estructura y la funcin de la
membrana externa.
Presentan toxicidad para organismos superiores (sobre todo nefrotoxicidad), por lo
que su empleo parenteral se reserva para infecciones severas de Pseudomonas.
Pero es apto para uso tpico.
TIROCIDINA-A Y GRAMICIDINA-S
Producidas por Bacillus brevis, son antibiticos plenamente cclicos, con efectos
similares a la polimixina.
6.2.2. IONOFOROS.
Los antibiticos ionforos actan aumentando grandemente la permeabilidad de la
membrana hacia iones inorgnicos especficos. Forman canales que atraviesan la
membrana, dejando un hueco central que permite el paso de cationes concretos,
lo que se traduce en una disipacin de los gradientes electroqumicos a
ambos lados de la membrana (destruyendo, por tanto, la capacidad de obtencin
de energa de las bacterias).
146
Ramirez - Balqui
VALINOMICINA
Es un depsipptido cclico, formado por la ciclacin de tres unidades del siguiente
mdulo:
D-hidroxibutrico-D-valina-Lactato-L-valina
Como se puede comprobar, se trata de una cadena de -aminocidos y hidroxicidos alternantes, conectados por enlaces peptdicos y enlaces ster. Las
cadenas alifticas se disponen hacia afuera del anillo, mientras que los grupos
carboxilo se colocan hacia adentro, dejando un canal hidrfilo que permite el libre
paso de K+, lo que desacopla los mecanismos de obtencin de energa a nivel de
membrana.
GRAMICIDINA A
Es un antibitico a base de aminocidos alternantes en configuraciones D y L, que
forma una estructura helicoidal. Disipa iones K+, as como Na+ e H+. La
configuracin permite al antibitico formar una especie de cilindro donde la cadena
sigue una hlice que est estabilizada por puentes de H casi paralelos al eje del
cilindro, dejando un canal central de 0.4 nm de dimetro, y con las cadenas
laterales de los aminocidos dirigidas hacia auera, formando una especie de vaina
hidrfoba. Esto permite que la molcula se inserte a travs de la membrana,
dejando un canal por el que pueden pasar iones, con la consiguiente destruccin
del gradiente electroqumico.
6.2.3. ANTIBIOTICOS POLINICOS.
Son de tipo macrlido (o sea, un gran anillo provisto un enlace lactnico); este tipo
de antibiticos se caracteriza por poseer una porcin flexible hidroxilada y otra
porcin ms rgida, a base de dobles enlaces conjugados.
La anfotericina B (producida por Streptomyces nodosus) y la nistatina (por S.
nursei) contienen, adems, el aminoazcar llamado micosamina.
Inhiben selectivamente las membranas que contienen esteroles: por lo tanto,
actan sobre microorganismos eucariticos (hongos, levaduras), pero no sobre los
procariticos, a excepcin de los micoplasmas. Parece que son bastante
especficos hacia el ergosterol (muy abundante en hongos), pero debido al
parecido de ste con el colesterol, tienen cierta toxicidad hacia los animales
superiores (su margen de seguridad teraputica es muy estrecho).
Estos antibiticos tienen forma de bastn rgido (debido a la configuracin todo trans de los dobles enlaces conjugados). Una de las superficies de este cilindro es
hidrfoba (la de los dobles enlaces), y la superficie opuesta es hidrfila (la que es
rica en hidroxilos). En un extremo del bastn, la micosamina y el carboxilo forman
una zona altamente polar. Los modelos fisicoqumicos revelan que 10 molculas
del antibitico se agregan entre s, con los ejes de sus respectivos bastones
paralelos entre s y perpendiculares a la membrana (atravesndola), de modo que
147
dejan un canal central de uno 0,7 nm de dimetro, y con los grupos polares hacia
afuera. Esta estructura permite el paso libre de iones, as como el que se escapen
metabolitos (como la glucosa) desde la clula al exterior.
6.3. ANTIBIOTICOS QUE INTERFIEREN EN LA BIOSINTESIS DE PROTEINAS.
Se recomienda al alumno repasar, siquiera sea en esquema, el proceso de sntesis de
protenas, con sus fases de iniciacin, elongacin y terminacin).
Los antibiticos que interfieren en la sntesis de protenas son muy variados y
abundantes, y la mayora de ellos funcionan interfiriendo con el ribosoma, sobre todo los
que se unen a protenas ribosmicas y/o a alguno de los ARN ribosmicos. Nosotros
vamos a detenernos principalmente en aquellos antibiticos que afectan a la elongacin
de la cadena naciente del polipptido. Obviamente, los ms tiles son aquellos que tienen
efectos selectivos frente a los ribosomas 70S procariticos, pero no sobre los 80S
eucariticos. Dentro de ellos, y siguiendo el orden natural del funcionamiento de la
elongacin de la cadena polipeptdica, podemos agruparlos segn la fase concreta de la
elongacin sobre la que actan:
1. inhibicin del reconocimiento de un aminoacil-ARNt (aa-ARNt) hacia el sitio A del
ribosoma;
2. introduccin de errores en la lectura de los ARNm;
3. inhibicin de la reaccin de formacin del enlace peptdico;
4. inhibicin de la traslocacin del peptidil-ARNt (pp-ARNt) desde el sitio A al sitio P.
5. bloqueo de los factores de elongacin.
6.3.1. INHIBIDORES DE LA FASE INICIAL DE LA ELONGACION (O SEA, DEL
RECONOCIMIENTO Y ENTRADA DEL aa-ARNt AL SITIO "A" DEL
RIBOSOMA).
TETRACICLINAS
Son antibiticos de muy amplio espectro (frente a Gram-positivas, Gramnegativas, Rickettsias y Clamidias, e incluso Micoplasmas), producidos por
distintas especies de Streptomyces. Actan como bacteriostticos, siempre y
cuando las bacterias estn en crecimiento activo. Como se puede ver por su
espectro, son tiles incluso contra bacterias que viven como parsitos
intracelulares (como las Rickettsias), debido a que su carcter hidrofbico
facilita su difusin a travs de membranas.
Mecanismo de accin: Provocan que la unin del aa-ARNt al sitio A del
ribosoma sea inestable y est distorsionada, con lo cual se evita la elongacin
de la cadena. In vitro actan tanto frente a ribosomas 70S como frente a los 80S.
Entonces, por qu in vivo slo inhiben a las bacterias? La explicacin est en el
hecho de que las bacterias transportan complejos tetraciclina-Mg de forma
"suicida", cosa que no ocurre en eucariotas. Al llegar la tetraciclina a la subunidad
30S, se une a las protenas S4 y S18 del ribosoma 70S intacto, ejerciendo el
efecto que hemos descrito en el prrafo anterior.
Efectos secundarios:
148
Ramirez - Balqui
Las tetraciclinas naturales se absorben mal por el intestino, y pueden destruir la

flora autctona, favoreciendo infecciones secundarias. Las semisintticas evitan
este problema.
Se depositan en tejidos calcificados, ocasionando daos a huesos y dientes, y
tiendo los dientes de amarillo en los nios.
6.3.2. INDUCTORES DE ERRORES EN LA LECTURA DEL ARNm.
AMINOGLUCSIDOS.
Es un grupo amplio y variado de antibiticos producidos por diversas especies de
Streptomyces. Como se puede ver en las figuras, todos tienen en comn varios
rasgos qumicos:
son muy polares, policatinicos;
presentan un anillo de aminociclitol (un ciclohexitol o inositol con grupo amino);
uno o ms azcares, incluyendo al menos un aminoazcar (aparte del
aminociclitol). As, por ejemplo, la estreptomicina contiene como aminociclitol la
llamada estreptidina, mientras que otros aminoglucsidos presentan la 2desoxiestreptamina).
Ejemplos de
aminoglucsidos
de uso clnico
Estreptomicina
Kanamicina
Amikacinas
Neomicina
Gentamicina
bacteria productora
Streptomyces griseus
S. kanamyceticus
(derivados semisintticos de la kanamicina)
S. fradiae
Micromonospora purpurea
Los aminoglucsidos son antibiticos bactericidas de amplio espectro. Sus

propiedades farmacocinticas se deben al carcter polar del policatin:
mala absorcin va oral (hay que administrarlos va parenteral);
penetran poco en el fluido cerebroespinal;
se excretan rpidamente por la orina.
Por otro lado, en algunos individuos pueden ocasionar reacciones adversas:
parlisis neuromuscular, ototoxicidad (pueden llegar a provocar sorderas) y
nefrotoxicidad. Su margen de dosis teraputica es estrecho, por lo que su uso
debe limitarse frente a infecciones ocasionadas por bacterias resistentes a otros
antibiticos.
Mecanismo de accin: Como veremos enseguida, su mecanismo no se limita a lo
que dice el presente epgrafe (inducir errores en la lectura del mensajero), sino
que tienen efectos pleiotrpicos (mltiples), que se influyen entre s. El mecanismo
lo podemos desglosar en varias fases:
1. Unas pocas molculas del antibitico entran a la bacteria, probablemente
aprovechando pequeas imperfecciones de la membrana en crecimiento;
149
2. estas molculas se unen a los polisomas, es decir, los polirribosomas que

estn traduciendo el ARNm (p. ej., la estreptomicina se une al ARNr 16S de la
subunidad 30S). All provocan errores en la lectura del ARNm, al distorsionar
la estructura del ribosoma. Concretamente, el efecto aqu es que los codones
del ARNm se emparejan con ARNt cargados "errneos", en los que slo 2 de
las 3 bases del anticodn corresponden correctamente con las del codn.
3. Por lo tanto, la bacteria comienza a sintetizar protenas defectuosas;
algunas de ellas son protenas de membrana, que al incorporarse a la bicapa
lipdica, introducen imperfecciones en su funcionamiento y estructura. Se van
formando cada vez ms "canales", correspondientes a defectos en esa
membrana;
4. a travs de los nuevos "canales" e imperfecciones de la membrana, entran
cada vez ms molculas del antibitico, con lo cual todo el proceso se acelera
y retroalimenta positivamente, de modo autocataltico.
El efecto final es bactericida:
se detiene finalmente la sntesis de protenas;
se producen daos irreversibles a las membranas.
Cada aminoglucsido se une a una zona distinta de la subunidad 30S del
ribosoma, por lo que no suelen darse reacciones cruzadas de resistencia entre
distintos antibiticos de este grupo.
La mayora de los aminoglucsidos se une a varios sitios a la vez, dentro de la
subunidad 30S, por lo que la aparicin espontnea de mutaciones de resistencia a
ellos suele ser baja. Una excepcin a esto es el caso de la estreptomicina.
Efectos de la estreptomicina:
Diana de la estreptomicina: La estreptomicina ejerce su efecto antibitico
unindose a una zona concreta del ARNr 16S del ribosoma eubacteriano.
Mutacin de resistencia a la estreptomicina: Con relativa frecuencia (10-9
/clula y divisin) surge en la poblacin bacteriana una mutacin espontnea que
convierte a la bacteria afectada en resistente a la estreptomicina (fenotipo Str R);
esta mutacin afecta al gen strA, que codifica la protena S12 de la subunidad
pequea del ribosoma. El efecto de la mutacin es alterar la protena S12 de
modo que el ribosoma que contenga esa protena mutante evita la unin de la
estreptomicina con el ARNr 16S (de algn modo, la S12 mutante "tapa" la va de
acceso del antibitico a su diana molecular).
Supresin fenotpica de mutaciones puntuales: Como veremos en la seccin
de Gentica Bacteriana (cap.23), uno de los tipos de mutaciones se denomina
puntual, porque transforma un par de bases en otro distinto; ello puede suponer
alterar el sentido del codn afectado (el codn mutante puede codificar un
aminocido distinto al original, o incluso puede ser uno de los tres codones de
parada de traduccin), lo cual puede conducir a que la protena mutante
respectiva deje de ser funcional.
150
Ramirez - Balqui
Pues bien, cuando una bacteria que posee una mutacin puntual que inactiva una
determinada protena (fenotipo mutante) se pone en un medio con estreptomicina
u otro antibitico aminoglucsido, con cierta frecuencia la lectura errnea del
ARNm del gen mutante ("errneo") conduce a que la protena sea funcional,
generndose un fenotipo silvestre. A este fenmeno se le denomina supresin
fenotpica (en este caso inducida por estos antibiticos), para distinguirlo de la
supresin genotpica, que como veremos oportunamente, regenera el fenotipo
pero por medio de cambios en el genomio.
Este efecto depende de la porcin del anillo aminociclitol de la molcula del
aminoglucsido, y su mecanismo es a nivel del sistema secundario de correccin
de errores de lectura que tiene el ribosoma ("correccin de pruebas").
Mutantes dependendientes de la estreptomicina: Existe una mutacin allica
de la StrR (es decir, que afecta al mismo gen), pero que en vez de dar fenotipo de
resistencia al antibitico produce un fenotipo por el que la bacteria depende de la
estreptomicina para poder crecer (!). Esta mutacin (denotada Strd) tiene unos
efectos muy especficos de supresin fenotpica condicionada:
la protena ribosmica mutante S12, en ausencia de estreptomicina, hace que
el ribosoma traduzca introduciendo frecuentes errores (hay ambigedades en la
lectura de los mensajeros); por lo tanto, en ausencia de este antibitico, la
bacteria no crece.
Si a la bacteria se le suministra el antibitico, ste compensa fenotpicamente
el efecto de la mutacin de la protena S12, de modo que ahora los
ribosomas pueden efectuar correctamente la traduccin de los ARNm (se
reactivan los ribosomas para su funcionalidad normal).
6.3.3. ANTIBIOTICOS INHIBIDORES DE LA FORMACION DEL ENLACE PEPTIDICO.
Se trata de un grupo variado y heterogneo de agentes antibacterianos que
interfieren con el centro peptidil-transferasa de la subunidad grande del ribosoma.
Cloranfenicol (antes llamado cloromicetina)
Antiguamente la industria lo obtena a partir de Streptomyces venezuelae, pero
actualmente es ms barato fabricarlo por sntesis qumica. Es un bacteriosttico
de amplio espectro. Se absorbe bien va oral y penetra bien en todos los tejidos,
incluyendo cerebro y lquido cerebroespinal, por lo que se puede usar frente a
meningitis ocasionadas por Haemophilus influenzae, as como tratamiento de
fiebres tifoideas y anaerobios Gram-negativos.
Sin embargo, hay que controlar bien las dosis, ya que puede provocar supresin
de mdula sea (aplasia medular); de hecho, casi no se emplea en pases de
Occidente, aunque se receta demasiado en el Tercer Mundo.
Mecanismo de accin: Se une a varios lugares de la subunidad 50S, entre los
cuales el ms importante es la protena L16, que forma parte del centro peptidil-
151
transferasa, cerca del sitio del ribosoma donde encaja el extremo aminoacil del
ARNt, en el sitio A.
El cloranfenicol ha sido muy til en el estudio de los ribosomas, ya que estabiliza
los polisomas rpidamente.
Lincomicina y clindamicina.
La lincomicina est producida por Streptomyces lincolniensis, y la clindamicina es
un derivado clorado del anterior, mucho ms eficaz y con mejor absorcin
intestinal. Son tiles para tratar infecciones donde no pueda aplicarse penicilina, y
contra anaerobios como Bacteroides.
Mecanismo de accin: Se une a la subunidad 50S del ribosoma procaritico,
bloqueando la formacin del enlace peptdico. Parece que esto lo logra
interfiriendo con la colocacin adecuada del aa-ARNt en el sitio A, y del pp-ARNt
en el sitio P. Hace que se desorganicen los polisomas, disocindose en sus
subunidades 30S y 50S.
Algunos macrlidos como la carbomicina
La carbomicina (producida por Streptomyces halstedii) y otros macrlidos se unen
a la protena L4 de la subunidad 50S, inhibiendo la formacin del enlace peptdico.
6.3.4. INHIBIDORES DE LA TRANSLOCACION.
El representante ms tpico es otro macrlido, la eritromicina. (Actualmente se
usan mucho en clnica dos derivados semisintticos de ella: la roxitromicina y la
claritromicina). Producida por Streptomyces erithraeus), es un agente
bacteriosttico que se administra en infecciones de vas respiratorias
ocasionadas por Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila (legionelosis),
Corynebacterium dyphteriae (difteria) y Bordetella pertussis (tosferina).
Mecanismo de accin: Se une a la protena L15, que forma parte del centro
peptidil-transferasa.
Bloquea
el
paso
de
translocacin
interfiriendo
especficamente con la liberacin del ARNt desacilado, es decir, impide que el
ARNt "descargado" (una vez que ha cumplido su misin al transferirse el pptido
naciente al aa-ARNt del sitio A) salga del sitio P; por lo tanto, el pp-ARNt cargado
y situado en el sitio A no puede translocarse al sitio P, y se produce la parada de
la sntesis de proteinas.
6.3.5. INHIBIDORES DE LOS FACTORES DE ELONGACION.
Tiostreptn
Es un antibitico policclico muy grande, producido por ciertas especies de
Streptomyces. Se une a la subunidad 50S, concretamente a la protena L11 y a
una zona concreta del ARNr 23S, impidiendo la unin de los factores de
elongacin EFTu y EFG.
152
Ramirez - Balqui
cido fusdico
Es un derivado esteroideo producido por hongos del gnero Fusarium, usado
contra estafilococos resistentes a -lactmicos. Se une al factor de elongacin
EFG, inhibiendo la liberacin del complejo EFG-GDP, por lo que el pp-ARNt queda
fijado en el sitio P, lo cual impide que se pueda unir el complejo ternario EFTuGTP-ARNt.
Kirromicina y pulvomicina
Se unen al factor EFTu. La kirromicina bloquea la liberacin del complejo binario
EFTu-GDP; la pulvomicina bloquea la adicin de aa-ARNt al EFTu para formar el
complejo ternario.
En resumen de este apartado, existen antibiticos que afectan prcticamente
cualquier aspecto de la funcin del ribosoma. Muchos de ellos, aparte del inters
clnico que puedan tener, han sido muy tiles para desentraar diversos aspectos
de la estructura y funcin del ribosoma.
6.4. ANTIBITICOS QUE INTERFIEREN EN LA SINTESIS DE LOS ACIDOS NUCLEICOS.
6.4.1. INHIBIDORES DE LA FUNCION DEL ADN.
Pocos de los antibiticos que interfieren con las funciones del ADN son tiles en
clnica, ya que no pueden discriminar entre ADN de procariotas y eucariotas. Sin
embargo, han sido muy valiosos para estudiar diversos aspectos de la biologa
molecular del ADN
Actinomicina-D (Dactinomicina)
Observar en la figura que su grupo cromforo tiene tres anillos y es planar; de
cada anillo de los extremos sale una lactona pentapeptdica. Esta estructura es
importante para entender su mecanismo de accin:
El hecho de tener tres anillos conjugados en un plano le permite intercalarse
entre pares de bases adyacentes de la doble hlice del ADN, mientras que las
dos L-treoninas establecen puentes de H con guaninas del ADN adyacentes al
sitio de intercalacin del antibitico. De esta forma inhibe la replicacin del ADN
y su transcripcin a ARNm.
Mitomicina C
Al entrar a la clula es convertida a su forma hidroquinona, que es muy reactiva,
funcionando como un agente alquilante bifuncional que origina
entrecruzamientos entre las dos hebras del ADN. Las consecuencias de ello
son:
las dos hebras no pueden separarse durante el intento de replicacin, por lo
que sta se detiene.
A continuacin el ADN entrecruzado es atacado y destruido por las nucleasas
de la propia clula.
153
Novobiocina y coumermicina
Se unen a la subunidad B de las ADN girasas bacterianas, impidiendo el
superenrollamiento negativo del ADN al competir por el sitio de unin de esta
subunidad al ATP.
6.4.2. INHIBIDORES DE LA TRANSCRIPCION.
Las ARN polimerasas de virus, de bacterias y de mamferos difieren mucho entre
s, por lo que los tipo de antibiticos que las afecten suelen ser bastante
selectivos. Recurdese que las ARN polimerasas eubacterianas constan de un
ncleo {a2'} y que requieren el factor para la iniciacin de la transcripcin.
Rifampicinas
Son antibiticos producidos por Streptomyces mediterranei, con buena actividad
contra bacterias Gram-positivas y contra Mycobacterium tuberculosis. Se han
usado en clnica molculas naturales (como la rifampicina) as como derivados
semisintticos (como la rifampina). Constan de un anillo cromforo aromtico
atravesado por un largo puente de naturaleza aliftica.
Su mecanismo de accin estriba en la inhibicin del inicio de la transcripcin,
unindose de modo no covalente a la subunidad de la ARN polimerasa
eubacteriana.
Estreptolidigina
Se une tambin a la subunidad de la ARN polimerasa, pero su efecto es inhibir
la fase de elongacin de la transcripcin.
VII. RESISTENCIA BACTERIANA A LOS ANTIBIOTICOS
La sntesis de quimioterpicos artificiales y el descubrimiento y mejora de los antibiticos han
supuesto en este siglo una autntica revolucin mdica en el tratamiento de enfermedades
infecciosas. Sin embargo, la extrema versatilidad y adaptabilidad de los microorganismos ha
impedido que la victoria humana sobre las bacterias patgenas haya sido total: muchas
bacterias han ido desarrollando en los ltimos decenios mecanismos que las protegen frente a
muchos frmacos.
Ya el mismo Paul Ehrlich, al introducir por primera vez la quimioterapia en protozoos, se dio
cuenta (1907) de que algunas cepas desarrollaban resistencia a la droga durante el curso del
tratamiento.
Tras el optimismo inicial que acompa a los xitos de la introduccin de las sulfamidas y
penicilinas (aos 40 y 50), se constat igualmente un fenmeno de surgimiento de resistencias
bacterianas a estas drogas. Si bien la quimioterapia ha doblegado las grandes epidemias
bacterianas del pasado, las enfermedades infecciosas siguen con nosotros, constituyendo un
serio problema.
De hecho, desde la introduccin de la antibioterapia en todo el mundo, estamos realizando un
gigantesco "experimento" de intervencin gentica en los seres vivos ms abundantes del
154
Ramirez - Balqui
planeta: las bacterias. Estamos "sufriendo" la verdad de la supervivencia darwiniana de los

ms aptos, ya que la presin selectiva que representa la aplicacin a gran escala de los
quimioterpicos ha permitido la diseminacin de cepas microbianas con mecanismos de
resistencia que, en muchas ocasiones dificultan el adecuado tratamiento clnico.
Al cabo de 6 aos de introducir la penicilina G, la frecuencia de cepas de Staphylococcus
aureus resistentes en los hospitales ingleses pas de menos del 10% a un 60%.
Actualmente el valor ronda el 90%.
Con los nuevos -lactmicos tambin han empezado a surgir cepas bacterianas resistentes,
aunque an con frecuencia relativamente baja.
Actualmente existen problemas de tratamiento con las enterobacterias, e incluso con el
gonococo y el meningococo, que tradicionalmente haban sido muy sensibles a las
penicilinas.
Recientemente se ha dado la voz de alarma por la diseminacin de cepas de bacilo
tuberculoso resistentes a los quimioterpicos de eleccin a los que eran sensibles. La
capacidad de las bacterias de desarrollar resistencias constituye una seria amenaza al
futuro uso de los antibiticos, y hace que se tengan que invertir grandes sumas de dinero y
esfuerzos de investigacin adicionales para intentar hacer frente al problema. Algunos
autores han comparado este problema con el episodio de Alicia en el Pas de las Maravillas
en el que la Reina Roja tena que correr cada vez ms deprisa para quedarse en el mismo
sitio.
Sin embargo, algunos quimioterpicos de ltima generacin han vuelto a levantar esperanzas:
las fluoroquinolonas estn manteniendo e incluso incrementando su efectividad. Por otro lado,
hay que pensar en un dato de tipo evolutivo: la mayor parte de las especies bacterianas han
sido seleccionadas de modo natural con fenotipos sensibles a antibiticos; los cambios
genticos mutacionales que las convierten en resistentes puede que disminuyan su adaptacin
a otros factores ecolgicos, de modo que probablemente la presin de los antibiticos en
realidad conduzca en muchos casos a un equilibrio entre cepas sensibles y cepas resistentes.
De hecho se ha comprobado un descenso en la frecuencia de cepas resistentes a los
antibiticos que se introdujeron hace ms tiempo, lo que quiz indique que para ellos se est
alcanzando dicho equilibrio.
Aclaraciones de nomenclatura:
llamamos cepa insensible a aquella cuyo fenotipo silvestre le permite "resistir" de modo
natural a un determinado antibitico. La base de esta insensibilidad suele ser alguna
estructura de la bacteria que acta como barrera (como por ejemplo, la membrana externa
de Gram-negativas, que dificulta el paso de muchos agentes antibacterianos).
Llamamos cepa resistente a una variante surgida por cambios genticos a partir de un
fenotipo silvestre originalmente sensible.
VIII. BASES GENTICAS DE LA RESISTENCIA
Una de las aplicaciones prcticas ms interesantes de los avances realizados en las ltimas
dcadas en el campo de la Gentica Bacteriana ha sido comprender los mecanismos genticomoleculares de la resistencia a antibiticos, lo que est permitiendo un "ataque" ms racional a
155
este problema clnico. Una cepa bacteriana puede volverse resistente a un antibitico por dos
tipos principales de mecanismos:
1). mutacin en un gen cromosmico;
2). introduccin de un plsmido R de resistencia. Este segundo mecanismo supone el
problema ms serio, ya que:
a. est muy extendido;
b. puede conferir resistencia a varios antibiticos a la vez;
c. a diferencia del mecanismo mutacional, no suele suponer una desventaja adaptativa (no
disminuye la tasa de crecimiento de la bacteria ni le hace perder sus propiedades de
virulencia).
8.1.
SELECCION DE MUTANTES RESISTENTES.

Las mutaciones gnicas se dice que son espontneas cuando ocurren sin intervencin
de procedimientos mutagnicos experimentales. Las mutaciones bacterianas
espontneas son aleatorias, y afectan a un gen cualquiera con frecuencias dentro del
rango de 10--5 a 10--10 por clula y divisin.
En los aos 50 se observ el siguiente fenmeno: cuando un cultivo bacteriano de una
cepa sensible a un antibitico se pone en contacto con ese antibitico, al cabo del
tiempo se comprueba que todo el cultivo consta de bacterias resistentes.
Esta es precisamente la base gentica del surgimiento de ciertas cepas patgenas
resistentes a antibiticos: el frmaco inhibe o mata las bacterias silvestres sensibles,
pero no afecta a los pocos individuos que por mutacin espontnea hayan adquirido un
alelo resistente; estos individuos se multiplican, de modo que al final son los ms
prevalentes.
El conocimiento de la frecuencia de aparicin de mutacin a resistencia a un
quimioterpico o antibitico en una determinada especie bacteriana, as como el sitio de
accin de dicho frmaco, son factores importantes para una aproximacin racional a la
quimioterapia.
As por ejemplo, el bacilo tuberculoso produce frecuentemente lesiones en el pulmn,
donde se concentran enormes cantidades de la bacteria. Aqu, la quimioterapia con un
solo agente no da xito, ya que aunque ese agente mate a casi todos los individuos de
esta especie bacteriana, no afectar a la pequea subpoblacin que posea el alelo
resistente; estos pocos individuos sobreviviran a este tratamiento, y recolonizaran el
resto del pulmn, por lo que la infeccin persistira. As pues, en este tipo de casos hay
que tratar con varios quimioterpicos simultneamente (la probabilidad de resistencias
mltiples basadas en mutaciones espontneas equivale al producto de las
probabilidades individuales).
8.2.
156
RESISTENCIA POR INTERCAMBIO GENTICO.

La principal amenaza al xito de la quimioterapia est representada por la transmisin
gentica de plsmidos de resistencia a antibiticos (plsmidos R).
Ramirez - Balqui
Veamos un poco de historia: en los aos 50, poco despus de la introduccin de los
primeros antibiticos, se detect en Japn un espectacular aumento de pacientes de
disentera bacilar resistentes al tratamiento con varios de estos antibiticos. Las cepas
de Shigella dysenteriae aisladas de estos pacientes posean el fenotipo SuR, StrR, CmR,
TetR. Se comprob que los genes correspondientes a esas resistencias formaban parte
de un gran plsmido. Los plsmidos de este tipo se denominan plsmidos R. Pero an
ms: los mismos pacientes tenan en sus intestinos cepas de Escherichia coli (que
como sabemos ya, es un simple comensal que forma parte de nuestra flora endgena)
que eran igualmente resistentes a esos antibiticos. Ello sugera que este tipo de
plsmidos se poda transferir de unas especies a otras. La explicacin estribaba en un
fenmeno de intercambio dependiente de contactos clula-clula, llamado
conjugacin.
En resumidas cuentas, se descubri que existen plsmidos R capaces de diseminarse
por conjugacin no slo entre clulas de la misma especie, sino entre especies
distintas, incluyendo bacterias patgenas.
Al poco tiempo comenzaron a aparecer en Occidente cepas patgenas resistentes a
uno o varios antibiticos. Actualmente las cepas con resistencias mltiples codificadas
por plsmidos son muy abundantes en todo el mundo, lo que complica (y a veces
desaconseja) la quimioterapia.
Existen plsmidos R de distintos grupos de incompatibilidad. Son abundantes en
Pseudomonas y en Enterobacterias, desde donde pueden ser transferidos a una amplia
gama de bacterias Gram-negativas (plsmidos promiscuos).
Aparte de los plsmidos R conjugativos existen otros no conjugativos, que sin embargo
pueden ser transferidos entre distintas bacterias por otros medios:
los plsmidos no conjugativos movilizables pueden ser transferidos por otro plsmido
conjugativo compatible residente en la misma clula.
por transduccin (mediante bacterifagos);
por transformacin (ADN desnudo del plsmido puede ser captado por una bacteria
sensible receptora;).
Ventajas adaptativas de los plsmidos R:
Los plsmidos R han evolucionado en respuesta a presiones selectivas ambientales
(antibiticos usados por los humanos o inhibidores presentes en los medios naturales de
las bacterias).
1). Son capaces de conferir varias resistencias simultneamente a las bacterias que los
adquieran.
2). Tienen capacidad de diseminarse epidmicamente de modo "horizontal" (es decir,
entre clulas distintas de la misma especie o -en el caso de los promiscuos- distintas
especies).
3). Estn constituidos por "mdulos" mviles (transposones), de modo que tienen
flexibilidad para adquirir nuevos mdulos a partir de otras especies.
4). Economa: cuando no existe presin selectiva, pueden perderse de la mayor parte de
las bacterias de una determinada poblacin (curacin espontnea), pero su modo de
157
transmisin "epidmica" los capacita para diseminarse rpidamente a la mayora de

la poblacin cuando la ocasin lo requiere (cuando vuelve la presin selectiva).
5). No tienen apenas efectos negativos sobre los dems caracteres de la bacteria
(incluyendo, en las patgenas, su poder virulento).
6). Muchos de ellos responden a mayores concentraciones del antibitico aumentando
su nmero de copias (amplificacin del nmero de copias en los plsmidos de control
relajado.
Otro ejemplo de esta facultad de diseminacin y evolucin lo tenemos en que desde que
los hospitales hacen uso frecuente de detergentes catinicos como desinfectante, ha
crecido la proporcin de cepas de Staphylococcus resistentes a dichos agentes.
Como se puede comprender, el estudio epidemiolgico de los plsmidos R reviste
actualmente un gran inters de cara a la salud pblica. Este tipo de estudios recurre
principalmente a dos tipos de enfoques:
por deteccin de grupos de incompatibilidad (algo complejo);
por anlisis de restriccin y comparacin de mapas fsicos (ms fcil y rpido).
IX. MECANISMOS BIOQUIMICOS IMPLICADOS EN LA RESISTENCIA A ANTIBIOTICOS.
Los principales mecanismos se pueden agrupar de la siguiente manera:
1. Disminucin de la permeabilidad hacia el antibitico.
2. Inactivacin enzimtica del antibitico
3. Modificacin qumica de la diana sobre la que acta el antibitico
4. Sntesis de una enzima resistente.
9.1. DISMINUCION DE LA PERMEABILIDAD CELULAR HACIA EL ANTIBIOTICO.
Modificacin de una barrera preexistente
Como ya sabemos, la membrana externa de Gram-negativas supone una barrera natural
que hace que muchas bacterias de este grupo sean insensibles a varios antibiticos (p.
ej., la vancomicina y la bacitracina no pueden atravesar las porinas).
No todas las bacterias Gram-negativas son igualmente impermeables a los mismos
antibiticos:
Entre las menos impermeables estn Haemophilus y Neisseria, que dejan pasar a
numerosos -lactmicos.
Las Enterobacterias suelen ser intermedias.
Las bacterias del gn. Pseudomonas son insensibles a la mayora de antibiticos lactmicos, porque no pueden pasar a travs de la membrana externa. Se han aislado
mutantes que se han vuelto resistentes a los -lactmicos de ltima generacin: el
cambio ha afectado a una determinada porina que ahora no deja pasar a estos nuevos
antibiticos.
En otros casos, la resistencia se debe a alteraciones en la cpsula: algunos neumococos
resistentes a estreptomicina y eritromicina dependen de este tipo de mecanismo.
158
Ramirez - Balqui
Mecanismo de extrusin activa del antibitico

El ejemplo ms tpico estriba en la resistencia a las tetraciclinas desarrollada por muchas
bacterias. Como sabemos, el efecto inhibidor de las tetraciclinas depende de la
acumulacin activa de este tipo de antibiticos por parte de las bacterias. Pues bien,
ciertos plsmidos R poseen transposones (como el Tn10 o el Tn1721) que codifican un
sistema para "bombear" tetraciclina desde el interior bacteriano hacia el exterior, en
contra del gradiente de concentracin.
Igualmente se conocen resistencias a sulfamidas dependientes de un mecanismo
especfico de impermeabilidad.
Alteracin del mecanismo de transporte del antibitico
Cuando el antibitico accede al interior bacteriano por algn mecanismo de transporte
especfico, una mutacin que afecte a dicho sistema de transporte supondr una mayor
resistencia al antibitico. Por ejemplo, en E. coli la cicloserina entra aprovechando el
sistema de transporte de la valina o la glicocola. Determinados mutantes incapaces de
transportar estos aminocidos son resistentes a la cicloserina.
9.2. INACTIVACION ENZIMATICA DEL ANTIBIOTICO.
Este tipo de mecanismo depende en muchos casos de plsmidos R. Los ejemplos tpicos
son las resistencias a -lactmicos, la resistencia al cloranfenicol y las resistencias a
aminoglucsidos.
Resistencia a -lactmicos por accin de -lactamasas
Como ya sabemos, ciertas bacterias producen penicilinasa (-lactamasa), capaz de
abrir el anillo -lactmico de la penicilina para dar cido peniciloico, que carece de
actividad antibacteriana. Lo mismo ocurre con las cefalosporinas, donde la -lactamasa
(cefalosporinasa) genera un producto inestable inactivo que se descompone
rpidamente. Sin embargo, la naturaleza de la cadena lateral (grupo acilo, R) influye
notablemente en la susceptibilidad de rotura del anillo -lactmico por las lactamasas.
-lactamasas codificadas por cromosoma y de bajo nivel (-lactamasas de tipo
TEM).
Estn muy distribuidas entre bacterias Gram-negativas, y confieren resistencia a
cefalosporinas y penicilinas. La base de la resistencia en muchos casos es la siguiente:
cuando se expone la bacteria al -lactmico durante mucho tiempo, pueden
seleccionarse determinadas mutaciones en genes cromosmicos que codifican protenas
parecidas de tipo PBP, de modo que adquieren un fuerte promotor que permite su
expresin a alto nivel. Este tipo de -lactamasa es excretada al medio, donde inactiva al
antibitico.
-lactamasas de origen plasmdico.
En la Gram-positiva Staphylococcus aureus existen cuatro variantes, responsables del
espectacular aumento de cepas resistentes de esta especie surgidas en los aos 50. Se
trata de enzimas inducibles: el gen que codifica la -lactamasa se induce por pequeas
cantidades de penicilina o cefalosporina, y se producen enormes cantidades del
159
antibitico, que se excreta, de modo que inactiva al -lactmico en el entorno de la

bacteria. El gen responsable es portado por plsmidos de tipo R (que llevan genes de
resistencia para otros antibiticos).
En las Gram-negativas se han descubierto unos 20 tipos de -lactamasas de codificacin
plasmdica. Suelen ser enzimas de sntesis constitutiva que se expresan a bajos niveles,
y cuya localizacin es periplsmica; esta localizacin permite que el antibitico sea
inactivado antes de que llegue a la membrana citoplsmica, donde se localizan las
protenas diana de los -lactmicos. Algunas de ellas vienen codificadas por genes
plasmdicos que forman parte de transposones (p. ej., el Tn1 o el Tn4).
Cul es el origen de las -lactamasas?
Aunque la prevalencia de cepas (sobre todo patgenas) resistentes a -lactmicos es un
fenmeno que se "dispar" desde los aos 50 con el uso masivo de estos antibiticos,
est claro que la resistencia deba de existir previamente al uso humano de los
antibiticos. La aplicacin clnica a gran escala (incluyendo el abuso) de las penicilinas y
cefalosporinas slo ha permitido que veamos en accin un caso "acelarado" de evolucin
bacteriana, donde las cepas ms aptas han sobrevivido y se han multiplicado, y en el
que, merced a los procesos de intercambio gentico y a la construccin "modular"
(transposones) de muchos plsmidos R, las entidadess genticas responsbles se han
diseminado de unas especies bacterianas a otras. Se supone que en la Naturaleza (p. ej.,
en los suelos), ciertas cepas bacterianas, antes de la aparicin de la Quimioterapia,
posean ya mecanismos para destruir los -lactmicos segregados por hongos con los
que coexistan.
Profundizando ms en el tema, parece que las propias -lactamasas proceden
evolutivamente (por mutaciones sucesivas) de alguno de los genes que originalmente
codificaban algunas de las "autolisinas" (PBPs) que intervienen en la maduracin del
peptidoglucano. Es decir, las -lactamasas seran formas modificadas de las mismas
dianas (p. ej., las transpeptidasas) sobre las que actan los -lactmicos.
Como sabemos, los -lactmicos forman complejos covalentes estables con algunas de
las PBPs (peniciloil-PBPs), que hacen que estas autolisinas se inactiven. Pues bien,
existen indicios de que las -lactamasas seran unas "autolisinas" evolucionadas que en
vez de formar complejos estables con los -lactmicos, se habran especializado en
cortar el anillo lactmico (dando peniciloico) a expensas de su actividad transpeptidasa
original.
Resistencia al cloranfenicol
La resistencia al cloranfenicol suele deberse a una enzima inactivante de dicho
antibitico, denominada cloranfenicol-acetiltransferasa (CAT), que normalmente est
codificada por genes plasmdicos. Uno de los genes de CAT de Gram-negativas ms
estudiados forma parte del transposn Tn9.
La CAT convierte el cloranfenicol en su derivado 3-acetoxi, usando el acetil-CoA; a
continuacin una reaccin qumica (no catalizada por enzima) hace que el grupo acetoxi
160
Ramirez - Balqui
pase a la posicin 1; finalmente ocurre una segunda acetilacin catalizada

enzimticamente, que genera el producto final, 1,3-diacetoxi-cloranfenicol. Los derivados
mono o diacetilados del cloranfenicol son inactivos como antibiticos.
Resistencia a ciertos aminoglucsidos
Como ya vimos en el captulo anterior, los aminoglucsidos son un grupo amplio y
abundante de antibiticos, por lo que no es sorprendente que las bacterias hayan
evolucionado distintos mecanismos para inactivarlos; se pueden agrupar en tres tipos:
Fosforilacin
Adenilacin
Acetilacin
Las fosforilaciones y adenilaciones se dan sobre grupos -OH susceptibles, mientras que
las acetilaciones recaen sobre determinados grupos -NH2.
La modificacin enzimtica de los aminoglucsidos ocurre en el espacio periplsmico o
en la membrana citoplsmica, y produce un doble efecto:
el antibitico modificado covalentemente ya no puede usar el mecanismo de transporte
facilitado a travs de la membrana; por lo tanto, accede en menor cantidad al
citoplasma;
el compuesto modificado ya no puede afectar al ribosoma, por lo que no ejecuta
accin inhibitoria sobre el crecimiento de la bacteria.
9.3. MODIFICACION QUIMICA DE LA DIANA DEL ANTIBIOTICO.
Resistencia a la estreptomicina
Este mecanismo ya fue comentado en la mutacin cromosmica strA produce una
protena ribosmica S12 alterada que impide la unin de la estreptomicina.
Resistencia a la eritromicina
Ciertos plsmidos de cepas de Staphylococcus aureus y de Streptococcus codifican una
metilasa de ARN inducida por la presencia de eritromicina: esta enzima modifica por
metilacin un determinado nucletido del ARNr 23S de la subunidad grande del
ribosoma. Concretamente introduce dos metilos en el N de una determinada adenina,
usando S-adenosilmetionina (SAM) como donador. Esto produce un cambio
conformacional en el ribosoma que disminuye su afinidad hacia la eritromicina y hacia la
lincomicina (resistencia cruzada a los dos antibiticos).
El mecanismo gentico subyacente al carcter inducible de la metilasa es muy
interesante; en lugar de un mecanismo a nivel transcripcional, como es habitual en las
bacterias, se trata de un mecanismo de regulacin traduccional: en las bacterias en
ausencia de eritromicina el ARNm de la enzima posee una estructura secundaria que
evita su traduccin por los ribosomas, pero en presencia de eritromicina este ARNm
cambia de conformacin y puede ser ledo, producindose la metilasa que inactivar la
diana del antibitico.
161
Resistencia a las rifampicinas

Como ya sabemos por el cap. 20, las rifampicinas actan unindose a la subunidad de
la ARN polimerasa eubacteriana. La resistencia a estos antibiticos depende de una
mutacin cromosmica que altera dicha subunidad, hacindola insensible a estos
inhibidores.
Resistencia a las quinolonas, novobiocina y coumermicina
Las mutaciones cromosmicas que interesan a la subunidad A de la ADN-girasa
bacteriana producen resistencia al cido nalidxico. Sin embargo, las quinolonas de ltima
generacin (fluoroquinolonas como el ciprofloxacino) no se ven afectadas, quiz debido a
la enorme potencia de estos quimioterpicos.
Las mutaciones cromosmicas que afectan a la subunidad B de la girasa rinden
resistencia a la novobiocina y a la coumermicina
9.4. SINTESIS DE UNA NUEVA ENZIMA RESISTENTE.
Resistencia a sulfamidas
Determinados plsmidos R portan genes de resistencia a sulfamidas (SuR), que codifican
una dihidropteroico sintetasa muy resistente a la accin de estos quimioterpicos, debido
a que tienen una afinidad 10 000 veces menor que la enzima normal codificada por el
cromosoma.
Resistencia a trimetoprim
Muchos plsmidos R llevan un gen que codifica una dihidrofolatorreductasa (DHFR) muy
resistente al trimetoprim.
Resistencia a meticilina
En muchos hospitales medran cepas muy peligrosas de Staphylococcus aureus
resistentes al -lactmico meticilina. Estas cepas producen una forma especial de
protena PBP2 (la llamada PBP2a) que posee una baja afinidad por los -lactmicos,
incluyendo la meticilina. Parece que el gen codificador correspondiente reside en un
transposn.
162
Ramirez - Balqui
REFERENCIA BIBLIOGRAFICAS
1).
2).
3).
4).
5).
6).
7).
8).
9).
10).
11).
12).
13).
14).
15).
16).
17).
18).
19).
20).
21).
22).
23).
ABRAHAM, E.P. (1981): Antibiticos beta-lactmicos. Inv. y Ciencia 59 (agosto): 30-41.

AHARONOVWITZ, Y., G. COHEN, J.F. MARTIN (1992): Penicillin and cephalosporin
biosinthetic genes: structure, organization, regulation and evolution. Annu. Rev. Microbiol.
46: 461-496.
ANRAKU, Y. (1988): Bacterial electron transport chains. Ann. Rev. Biochem. 57: 101132.
ANRAKU, Y., R.B. GENNIS (1987): The aerobic respiratory chain of Escherichia coli.
Trends Biochem. Sci. 12: 262- 266.
BAARBER, J. (1987): Photosynthetic reaction centres: a common link. Trends Biochem.
Sci. 12: 321-326.
BAGG, A., J.B. NEILANDS (1987): Molecular mechanism of regulation of siderophoremediated iron assimilation. Microbiol Rev. 51: 509-518.
BALDRY, P. (1981): La batalla contra las bacterias. Revert, Barcelona.
BASTARRECHEA, F., L. SERVIN-GONZALEZ, A.A. COVARRUBIAS (1986): Regulacin
de la asimilacin de compuestos nitrogenados en Escherichia coli. En: Bioqumica y
Biologa Molecular (coordinador: L. Cornudella). Salvat, Barcelona, pgs. 192-197.
BROCK, T.D. (1961): Milestones in Microbiology (reedicin de 1975). American Society
for Microbiology, Washington, D.C.
CAMPBELL, W.H., J.R.KINGHORN (1990): Functional domains of assimilatory nitrate
reductases and nitrite reductases. Trends Biochem. Sci. 15:315-319.
COLEMAN, G., W.J. COLEMAN (1990): Cmo producen oxgeno las plantas. Inv. y
Ciencia (abril): 50COLLARD, P. (1976): The development of Microbiology. Cambridge University Press,
Cambridge. Existe versin espaola: "El desarrollo de la Microbiologa", Ed. Revert.
CROSA, J.H. (1989): Genetics and molecular biology of siderophore-mediated iron
transport in bacteria. Microbiol. Rev. 53: 517-530.
CSONKA, L.N., A.D. HANSON (1991): Prokaryotic osmoregulation: genetics and
physiology. Annu. Rev. Microbiol. 45: 569-606.
CSONKA, L.N., W. EPSTEIN (1996): Osmoregulation. En: "Escherichia coli and
Salmonella typhimurium. Cellular and molecular biology", 2 edicin (F.C. Neidhart, ed.).
American Society for Microbiology Press. Washington, D.C., pgs. 1210-1223.
CUNDLIFFE, E. (1989): How antibiotic-producing organisms avoid suicide. Ann. Rev.
Microbiol. 43: 207-233.
de KRUIJF, P. : Cazadores de microbios. Biblioteca Cientfica Salvat.
DEBR, P. (1995): Louis Pasteur. Barcelona: Crculo de Lectores-Ediciones Debate.
DEMMING, J.W. (1987): Ecological strategies of barophilic bacteria in the deep ocean.
Microbiol. Sci. 3: 205-211.
DICKERSON, R.E. (1980): El citocromo c y la evolucin del metabolismo energtico. Inv.
y Ciencia (mayo): 76-88.
DUBOS, R. Louis Pasteur. Biblioteca Salvat de Grandes Biografas.
F.E.M.S. (1996): Extremophiles. Nmero especial de la revista FEMS Microbiology
Reviews, 18 (mayo).
FERGUSON, S.J. (1987): Denitrification: a question of the control and organization of
electron and ion transport. Trends Biochem. Sci. 12: 354-357.
163
24).
25).
26).
27).
28).
29).
30).
31).
32).
33).
34).
35).
36).
37).
38).
39).
40).
41).
42).
43).
164
FOSTER, J.W. (1992): Beyond pH homeostasis: the acid tolerance response of

Salmonellae. ASM News 58: 266-270.
FRANKLIN, T.J., G.A. SNOW (1989): Biochemistry of antimicrobial action (4th edition).
Chapman and Hall, Londres. Para los contenidos del presente tema, se recomienda el
captulo 3.
FRANKLIN, T.J., G.A. SNOW (1989): Biochemistry of antimicrobial action. Chapman and
Hall, Londres.
FRANKLIN, T.J., G.A. SNOW (1989): Biochemistry of antimicrobial action (4th edition).
Chapman and Hall, Londres. Se recomienda leer el captulo 8.
GARCIA LOBO, J.M., F. DE LA CRUZ (1990): Mecanismos de formacin de
transposones bacterianos con resistencia a mltiples antibiticos. En: "Microbiologa
1990" (coordinado por J. Casadess y F. Ruiz-Berraquero). pp. 45-51. Secretariado de
Publicaciones de la Universidad de Sevilla.
GARLAND, P.B. (1981): The evolution of membrane-bound bioenergetics systems: the
development of vectorial oxidoreductions. En: "Molecular and cellular aspects of microbial
evolution", pgs. 273-283. (Eds.: M.J. Carlile, J.F. Collins, B.E.B. Moseley). Cambridge
University Press, Cambridge.
HARDER, W., L. DIJKHUISEN (1983): Physiological responses to nutrient limitation. Ann.
Rev. Microbiol. 37: 1-23.
HARRISON Jr., A.P. (1984): The acidophilic thiobacilli and other acidophilic bacteria that
share their habitat. Ann. Rev. Microbiol. 38: 265-292.
HERRERO, A., E. FLORES (1990): Las cianobacterias: fotosntesis y fijacin de
nitrgeno. En "Microbiologa 1990", pg. 112-121. Univ. de Sevilla.
HOOPER, A.B., A.A. DISPIRITO (1985): In bacteria which grow on simple reductants,
generation of a proton gradient involves extracytoplasmic oxidation of substrate.
Microbiol. Rev. 49: 140-157.
HOWARD-FLANDERS, P. (1982): Reparacin inducible del ADN. Inv. y Ciencia 64
(enero): 28-37.
INGRAHAM, J.L., A.G. MARR (1996): Effect of temperature, pH and osmotic stress on
growth. En: "Escherichia coli and Salmonella typhimurium. Cellular and molecular
biology", 2 edicin (F.C. Neidhart, ed.). American Society for Microbiology Press.
Washington, D.C., pgs. 1570-1578.
JAHN, I., R. LTHER, K. SENGLAUB (eds.) (1990): Historia de la Biologa. Labor,
Barcelona. (Original alemn: VEB Gustav Fischer Verlag, Jena 1985).
JONES, C.W. (1982): Bacterial respiration and photosynthesis. ASM, Whashington, D.C.
KLEINHAUF, H., H. von DHREN (1987): Biosynthesis of peptide antibiotics. Ann. Rev.
Microbiol. 41: 259-289.
KOLTER, R., F. MORENO (1992): Genetics of ribosomally synthesized peptide
antibiotics. Annu. Rev. Microbiol. 46: 141-164.
KRIEG, N.R. (1988): Bacterial classification: an overview. Can. J. Microbiol. 34: 536-540.
KRULWICH, T.A. (1990): Bacterial energetics. Academic Press, Londres.
KRULWICH, T.A., A.A. GUFFANTI (1989): Alkalophilic bacteria. Ann. Rev. Microbiol. 43:
435-463.
KUSHNER, S.R. (1987): DNA repair. En: "Escherichia coli and Salmonella typhimurium.
Cellular and molecular biology". (F.C. Neidhart, ed.). American Society for Microbiology.
Washington, D.C. (1987), pgs. 1044-1053.
Ramirez - Balqui
44).
45).
46).
47).
48).
49).
50).
51).
52).
53).
54).
55).
56).
57).
58).
59).
60).
61).
62).
63).
64).
LESSIE, T.G., P.V. PHIBBS, jr. (1984): Alternative patways of carbohydrate utilization in
Pseudomonads. Ann. Rev. Microbiol. 38: 359-387.
LINDAHL, T., B. SEDGWICK, M. SEKIGUCHI, Y. NAKABEPPU (1988): Regulation and
expression of the adaptative response to alkilating agents. Ann. Rev. Biochem. 57: 133157.
LOSADA, M. (1977): Los distintos tipos de fotosntesis y su regulacin. Inv y Ciencia
(abril): 6-8.
MADIGAN, M.T., B.L. MARRS (1997): Extremfilos. Inv y Ciencia 249 (junio): 60-66.
MARGULIS, L., K.V. SCHWARTZ (1985): Cinco Reinos. Labor, Barcelona.
MARTIN, J.F., P. LIRAS (1989): Organization and expression of genes involved in the
biosynthesis of antibiotic and other secondary metabolites. Ann. Rev. Microbiol. 43: 173206.
MATIN, A. (1978): Organic nutrition of chemolithotrophic bacteria. Ann. Rev. Microbiol.
32: 433-468.
MATIN, A., E.A. ANGER, P.H. BLUM, J.E. SCHULTZ (1989): Genetic basis of starvation
survival in nondifferentiating bacteria. Ann.Rev. Microbiol. 43: 293-316.
MAURER, I.M. (1969): A test for stability and long-term effectiveness in disinfectants.
Pharm. J. 203: 529-534.
MILLER, K.J., J.M. WOOD (1996): Osmoadaptation by rhizosphere bacteria. Annu. Rev.
Microbiol. 50: 101-136.
MURRAY, R.G.E. (1984): Higher taxa, or a place for everithing...?. En: "Bergey's manual
of Systematic Bacteriology". Williams & Wilkins, Baltimore.
MYERS, T. (1988): Failing the test: germicides or use dilution technology? ASM News 54:
1921.
NEIDHART, F.C., J.L. INGRAHAM, M. SCHAECHTER (1990): Physiology of the bacterial
cell: a molecular approach. Sinauer Associates, Sunderland, Massachusetts. Consultar el
captulo 8.
NEIDHART, F.C., J.L. INGRAHAM, M. SCHAECHTER (1990): Physiology of the bacterial
cell: a molecular approach. Sinauer Associates, Sunderland, Massachusetts. Consultar el
cap. 5, especialmente pgs. 148-171.
NEIDLANS, J.B. (1982): Microbial envelope proteins related to iron. Ann. Rev. Microbiol.
36: 285-309.
NELSON, N., L. TAIZ (1989): The evolution of H+-ATPases. Trends Biochem. Sci. 14:
113-116.
NICHOLS, D.G. (1987): Bioenergtica: introduccin a la teora quimiosmtica. Ed.
Revert, Barcelona. (Versin original: "Bioenergetics- an introduction to the
Chemiosmotic Theory", Academic Press, Londres, 1982., pero acaba de salir -1993- la
segunda edicin inglesa).
PARMEGGIANI, A., G.W.M. SWART (1985): Mechanism of action of kirromycin-like
antibiotics. Ann. Rev. Microbiol. 39: 557-577.
POOLE, R.K., W.J. INGLEDEW (1987): Patways of electrons to oxygen. En: "Escherichia
coli and Salmonella typhimurium. Cellular and molecular biology". (F.C. Neidhart, ed.).
American Society for Microbiology. Washington, D.C. (1987), pgs. 170-200.
RADMAN, M., R. WAGNER (1988): Fidelidad en la duplicacin del ADN. Inv. y Ciencia
145 (octubre): 20-29.
REES, D.C., H. KOMIYA, T.O. YEATES, J.P. ALLEN, G. FEHER (1989): The bacterial
165
65).
66).
67).
68).
69).
70).
71).
72).
73).
74).
75).
76).
77).
78).
79).
80).
81).
82).
83).
166
photosynthetic reaction center as a model for membrane proteins. Ann. Rev. Biochem.
58: 607-633.
RUPP, W.D. (1996): DNA repair mechanisms. En: "Escherichia coli and Salmonella
typhimurium. Cellular and molecular biology", 2 edicin (F.C. Neidhart, ed.). American
Society for Microbiology Press. Washington, D.C., pgs. 2277-2294.
SALYERS, A.A., B.S. SPEER, N.B. SHOEMAKER (1990): New perspectives in
tetracycline resistance. Molec. Microbiol. 4: 151-156.
SANCAR, A., G.B. SANCAR (1988): DNA repair enzymes. Ann. Rev. Biochem. 57: 29-67.
SANCAR, G.B., A. SANCAR (1987): Structure and function of DNA photolyases . Trends
Biochem. Sci. 12: 259-261.
SANDERS, C.C. (1987): Chromosomal cephalosporinases responsible for multiple
resistance to newer beta-lactam antibiotics. Ann. Rev. Microbiol. 41: 573-593.
SLONCZEWSKI, J.L., J.W. FOSTER (1996): pH-regulated genes and survival at extreme
pH. En: "Escherichia coli and Salmonella typhimurium. Cellular and molecular biology", 2
edicin (F.C. Neidhart, ed.). American Society for Microbiology Press. Washington, D.C.,
pgs. 1539-1550.
SPENCER, M.E., J.R. GUEST (1987): Regulation of citric acid cycle genes in facultative
bacteria. Microbiol Sci. 4: 164-168.
STACKEBRANDT, E. (1988): Phylogenetic relationships vs. phenotypic diversity: how to
achieve a phylogenetic classification system of the eubacteria. Can. J. Microbiol. 34: 552556.
TABITA, F.R. (1988): Molecular and cellular regulation of autotrophic carbon dioxide
fixation in microorganisms. Microbiol. Rev. 52: 155-189.
TEMPEST, D.W., O.M. NEIJSSEL (1984): The status of YATP and maintenance energy as
biologically interpretable phenomenon. Ann. Rev. Microbiol. 38: 459-486.
TRIEU-CUOT, P., M. ARTHUR, P. COURVALIN (1987): Origin, evolution and
dissemination of antibiotic resistance genes. Microbiol. Sci. 4: 263-266.
Van VERSEVELD, H.W., G. BOSMA (1987): The respiratory chain and energy
conservation in the mitochondrion-like bacterium Paracoccus denitrificans. Microbiological
Sci. 4: 329-333.
VINING, L.C. (1990): Functions of secondary metabolites. Ann. Rev. Microbiol. 44: 395427.
WALKER, G.C. (1996): The SOS response of Escherichia coli. En: "Escherichia coli and
Salmonella typhimurium. Cellular and molecular biology", 2 edicin (F.C. Neidhart, ed.).
American Society for Microbiology Press. Washington, D.C., pgs. 1400-1416.
WOMBLE, D.D., R.H. ROWND (1988): Genetic and physical map of plasmid NR1:
comparison with other IncFII antibiotic resistance plasmids. Microbiol. Rev. 52: 433-451.
WOOD, H.G., S.W. RAGSDALE, E. PEZACKA (1986): The acetyl-CoA pathway: a newly
discovered pathway of autotrophic growth. Trends Biochem. Sci. 11: 14-17.
YOUVAN, D.C., B.L. MARSS (1987): Mecanismo molecular de la fotosntesis. Inv. y
Ciencia 131 (agosto): 34-41.
ZACCAI, G., H. EISENBERG (1990): Halophilic proteins and the influence of solvent on
protein stabilization. Trends Biochem. Sci. 15: 333-337.
ZUBER, H. (1986): Structure of ligth-harvesting antenna complexes of photosynthetic
bacteria, cyanobacteria and red algae. Trends Biochem. Sci. 11: 414-419.
Ramirez - Balqui
167

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