Tese Osmar

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA
CENTRO DE CINCIAS NATURAIS E EXATAS

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM QUMICA
MTODO RPIDO PARA A DETERMINAO SIMULTNEA DE

RESDUOS DE AGROTXICOS E MEDICAMENTOS
VETERINRIOS EM ALIMENTOS DE ORIGEM ANIMAL
POR LC-MS/MS
TESE DE DOUTORADO
Osmar Damian Prestes
Santa Maria - RS, Brasil

2011
MTODO RPIDO PARA A DETERMINAO SIMULTNEA DE

RESDUOS DE AGROTXICOS E MEDICAMENTOS
VETERINRIOS EM ALIMENTOS DE ORIGEM ANIMAL POR LCMS/MS
por
Tese apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Qumica, rea

de Concentrao em Qumica Analtica, da Universidade Federal de
Santa Maria (UFSM, RS), como requisito parcial para obteno do grau
de
DOUTOR EM QUMICA
Orientador: Prof. Dr. Renato Zanella
Santa Maria - RS, Brasil

2011
Universidade Federal de Santa Maria

Centro de Cincias Naturais e Exatas
Programa de Ps-Graduao em Qumica
A Comisso Examinadora, abaixo assinada,

aprova a Tese de Doutorado
MTODO RPIDO PARA A DETERMINAO SIMULTNEA DE RESDUOS DE

AGROTXICOS E MEDICAMENTOS VETERINRIOS EM ALIMENTOS DE
ORIGEM ANIMAL POR LC-MS/MS
elaborada por
como requisito parcial para a obteno do grau de Doutor em Qumica
Comisso Examinadora
______________________________________
Prof. Dr. Renato Zanella (Orientador, UFSM)
__________________________________________
Profa. Dra. Carol Hollingworth Collins (UNICAMP)
__________________________________________________
Profa. Dra. Isabel Cristina Sales Fontes Jardim (UNICAMP)
__________________________________________________
Profa. Dra. Martha Bohrer Adaime (co-orientadora, UFSM)
______________________________
Prof. Dr. Roger Wagner (UFSM)
Santa Maria, 03 de maro de 2011
DEDICATRIA
Nossa vida um caminho cheio de incertezas,

as quais ningum capaz de prever,
por isso mais importante do que as coisas
que se tem na vida quem temos na vida.
Dedico este trabalho
a todas as pessoas importantes e
que fizeram a diferena na minha vida.
AGRADECIMENTOS
Ao Prof. Dr. Renato Zanella agradeo a orientao neste trabalho, o apoio, o
incentivo e a amizade, sempre se dispondo em ajudar incondicionalmente,
propiciando um ambiente de trabalho favorvel para discusso e anlise de idias e
resultados.
Profa. Dra. Martha Bohrer Adaime, co-orientadora deste trabalho, a quem
no tive dificuldades em admirar, pela simplicidade ao lado de destacada sabedoria
e principalmente pela forma como trabalha essas virtudes.
Aos colegas do LARP, em especial a Lucila, Giovana, Dbora, Juliana,
Danieli, Daniela, Guilherme, Felipe e Fbio agradeo por ter conhecido todos vocs,
pela troca de idias, experincias e pela convivncia.
Caroline Friggi pela amizade, troca de idias constante e por sua
colaborao em todas as etapas deste trabalho.
Mrcia
Botega
pela
convivncia,
pela
parceria
inigualvel,
pela
cumplicidade e forte vnculo que se criou, pelas longas conversas e risadas. Voc
tornaram os obstculos mais amenos e as conquistas mais saborosas e divertidas.
Profa. Dra. Antnia Garrido Frenich e ao Prof. Dr. Roberto Romero do
Grupo de Qumica Analtica de Contaminantes da Universidad de Almeria/Espanha,
pela amizade, ensinamentos e acolhida em seu grupo de pesquisa. E aos amigos
Rocio, Maribel, Nieves, Maria, Padilla. Muchas Gracias!
Ao Prof. Dr. Ednei Primel, Prof. Dr. Roger Wagner e ao Dr. Ubiratan Flores
pelas valiosas sugestes e comentrios no exame de qualificao.
Aos membros da banca Profa. Dra. Carol H. Collins, Profa. Dra. Isabel C. S.
F. Jardim e Prof. Dr. Roger Wagner pelas excelentes contribuies e comentrios na
banca examinadora da defesa desta tese.
Aos meus antigos professores que me ensinaram com prazer e dedicao
parte do que sei.
Ao Ademir e Valria, funcionrios da PPGQ, pela gentileza, simpatia e
ateno no atendimento das suas tarefas.
A minha famlia, em especial a minha me que, assumindo responsabilidades
de pai e me desde muito cedo, ensinou-me a cultivar os princpios e valores de
honra, verdade e fora. Em voc sempre encontrei o melhor exemplo de sacrifcio,
dedicao e disposio sem limites. Por isso, lhe dedico este trabalho.
todos os demais familiares e amigos, e a cada um que de alguma forma

torceu por mim e assim ajudou-me a fortalecer e concretizar este sonho.
Ao CNPq e CAPES pelo auxlio financeiro e pela possibilidade de realizar o
Estgio de Doutorado na Universidad de Almeria/Espanha.
A Deus, que tanto me ajudou, dando-me sade, pacincia, entendimento e
dirigindo meus caminhos, muitas vezes colocando pessoas especiais em minha
vida.
RESUMO
Tese de Doutorado
MTODO RPIDO PARA A DETERMINAO SIMULTNEA DE RESDUOS DE
AGROTXICOS E MEDICAMENTOS VETERINRIOS EM ALIMENTOS DE
ORIGEM ANIMAL POR LC-MS/MS
AUTOR: OSMAR DAMIAN PRESTES
ORIENTADOR: PROF. DR. RENATO ZANELLA
Data e Local da Defesa: 03 de maro de 2011, Santa Maria.
Atualmente, uma das maiores barreiras comerciais que o Brasil tem encontrado para
a comercializao de seus produtos da cadeia do agronegcio a falta de informaes
sobre a presena de resduos em alimentos produzidos no pas. Devido a complexidade das
matrizes de origem animal e das baixas concentraes dos agrotxicos e medicamentos
veterinrios presentes, h uma grande necessidade de desenvolvimento de mtodos
analticos eficientes e confiveis para a identificao e quantificao dos resduos.
Neste estudo avaliou-se a faixa de linearidade das curvas analticas (8 nveis de
concentrao e 6 injees cada), limite de deteco (LOD), limite de quantificao (LOQ),
efeito matriz, bem como preciso e exatido, em termos de percentual de recuperao, para
91 agrotxicos e 9 medicamentos veterinrios analisados e validados pelo mtodo
QuEChERS e Cromatografia Lquida Acoplada Espectrometria de Massas Sequencial em
amostras de carne, fgado, rim, leite e ovo. Para isso, efetuou-se a fortificao dos alimentos
previamente homogeinizados, com solues contendo os 100 compostos, em 3 nveis de
fortificao (10, 25 e 50 g kg-1), 6 rplicas para cada nvel, e aplicou-se o mtodo de
extrao. A extrao pelo mtodo QuEChERS modificado consistiu na pesagem de 10,0 g
da matriz (para leite 10 mL), 10 mL de acetonitrila contendo 1% (v/v) de cido actico e
procedeu-se a agitao manual e vigorosa, por cerca de 1 min. Acrescentou-se 4,0 g de
sulfato de magnsio anidro e 1,7 g de acetato de sdio anidro, repetindo-se a agitao.
Foram, posteriormente, centrifugados por 8 min (3500 rpm), aps 4 mL de extrato foram
transferidos para outro tubo contendo 600 mg de sulfato de magnsio anidro e 500 mg C18,
repetindo a agitao e a centrifugao. O extrato foi diludo (1:1) na fase mvel, e em
seguida analisado por LC-MS/MS.
As curvas analticas, preparadas no solvente e nos extratos das matrizes avaliadas,
apresentaram linearidade adequada entre 1,0 e 250,0 g L-1, com valores de coeficiente de
determinao maiores que 0,995. O mtodo apresentou valores de recuperao satisfatrios
entre 70 e 120% e (RSD 20%) para cerca de 85% dos compostos em todas as matrizes
nos nveis de 10, 25 e 50 g kg-1 (para leite g L-1). Em geral, o mtodo apresentou valor de
LOQm de 10 g kg-1 (g L-1).
Portanto, concluiu-se que o mtodo proposto pode ser aplicado de forma eficiente
para a determinao de resduos de agrotxicos e medicamentos veterinrios nas diferentes
matrizes avaliadas, sem a necessida de alterao do mtodo desenvolvido foi eficiente para
a extrao e clean-up dos extratos de carne, fgado, rim, leite e ovo, uma vez que
apresentou desempenho satisfatrio em ambas as matrizes, dependendo da tcnica de
deteco utilizada.
Palavras-chave: QuEChERS, LC-MS/MS, agrotxicos, medicamentos veterinrios
ABSTRACT
Doctoral Thesis
RAPID SIMULTANEOUS DETERMINATION METHOD FOR PESTICIDES AND
VETERINARY DRUGS RESIDUES IN FOOD OF ANIMAL ORIGIN BY LC-MS/MS
AUTHOR: OSMAR DAMIAN PRESTES
ADVISOR: PROF. DR. RENATO ZANELLA
Date and Place: March 3rd, 2011, Santa Maria.
Currently, one of highest trade barriers that Brazil has found for the marketing
of their products from the agribusiness chain is the lack of informations on the
presence of residues in foods produced in the country. Due to the complexity of the
matrices of animal origin and the low concentrations of pesticides and veterinary
drugs present, there is a great need to develop efficient and reliable analytical
methods for identification and quantification of residues.
In this study we evaluated the linearity range of standard curves (eight
concentration levels and six injections each), limit of detection (LOD), limit of
quantification (LOQ), matrix effect and the precision and accuracy, in terms of
percent recovery for 91 pesticides and 9 veterinary drugs analyzed and validated by
the QuEChERS method and Liquid Chromatography coupled with Tandem Mass
Spectrometry in meat, liver, kidney, milk and egg samples. For this, we performed the
fortification of previously homogenised samples with solutions containing 100
compounds in three fortification levels (10, 25 and 50 g kg-1), 6 replicates for each
level, and applied the method extraction. The modified QuEChERS extraction
method consist weighing 10 g of the matrix (10 mL for milk), 10 mL of acetonitrile
containing 1% of acetic acid (v/v) and shake handly and vigorously for about 1 min.
After, 4 g of anhydrous magnesium sulfate and 1.7 g anhydrous sodium acetate,
repeating the agitation. After centrifugation for 8 min (3500 rpm), 4 mL of extract
were transferred to another tube containing 600 mg of anhydrous magnesium sulfate
and 500 mg C18, repeating the agitation and centrifugation. The extract was diluted
(1:1) in the mobile phase, and then analyzed by LC-MS/MS. Analytical curves
prepared in solvent and in all matrix extracts, showed adequate linearity between 1.0
and 250.0 g L-1, with determination coefficients greater than 0.995. The method
showed satisfactory recovery values between 70 and 120% (RSD 20%) to about
85% of the compounds in all matrices at levels 10, 25 and 50 g kg-1 (for milk g L-1).
In general, the method presented LOQm value of 10 g kg-1 (g L-1). Therefore, we
concluded that the proposed method can be applied efficiently for the determination
of pesticide and veterinary drugs residues in the different evaluated matrices without
any modification of the method.
Keywords: QuEChERS, LC-MS/MS, pesticides, veterinary drugs
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 -
Representao das etapas das principais verses do mtodo

QuEChERS (A) original, (B) acetato e (C) citrato........................ 37
Figura 2 -
Representao esquemtica do ensaio 1 (mtodo QuEChERS

acetato)
para
anlise
de
resduos
de
agrotxicos
medicamentos veterinrios em amostras de origem animal.......

Figura 3 -

citrato)
para
anlise
de
resduos
de
agrotxicos

Figura 4 -
63
64

modificado) para anlise de resduos de agrotxicos e
Figura 5 -
65
Cromatogramas totais obtidos por LC-MS/MS a apartir de

soluo analtica (25 g L-1) preparada em A) acetonitrila e nos
extratos
branco,
obtidos
pelo
mtodo
QuEChERS
modificado, em B) carne, C) fgado, D) rim, E) leite e F) ovo.....

Figura 6 -
76
Cromatograma obtido por LC-MS/MS modo MRM, para uma

soluo analtica (25 g L-1) preparado em extrato de leite
branco. Em destaque a visualizao dos sinais individuais de
alguns
compostos
com
as
respectivas
transies
de
fortificao...................................................................................
Figura 7 -
77
Representao da praticidade de operao do mtodo

QuEChERS.................................................................................. 79
Figura 8 -
Representao do mtodo QuEChERS modificado utilizado

para extrao dos agrotxicos e medicamentos veterinrios
nas amostras de carne, fgado, rim, leite e ovo........................... 81
Figura 9 -
Percentual de agrotxicos e medicamentos veterinrios em

carne, que apresentam faixas de recuperao de <70%, 70-
120%, >120%, aps ensaios de fortificao e recuperao

extrados com o mtodo QuEChERS modificado.......................
Figura 10 -
89

fgado, que apresentam faixas de recuperao de <70%, 70120%, >120%, aps ensaios de fortificao e recuperao
Figura 11 -
92

rim, que apresentam faixas de recuperao de <70%, 70120%, >120%, aps ensaios de fortificao e recuperao
Figura 12 -
95

leite, que apresentam faixas de recuperao de <70%, 70120%, >120%, aps ensaios de fortificao e recuperao
Figura 13 -
98

ovo, que apresentam faixas de recuperao de <70%, 70120%, >120%, aps ensaios de fortificao e recuperao
extrados com o mtodo QuEChERS modificado....................... 101
Figura 14 -
Estrutura dos compostos cidos analisados............................... 102
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 -
Ordem cronolgica dos principais mtodos de anlise de

resduos de agrotxicos em alimentos..........................................
Tabela 2 -
33
Informaes dos padres analticos slidos de agrotxicos e

medicamentos veterinrios utilizados...........................................
57
Tabela 3 -
Gradiente utilizado para eluio dos compostos............................ 61
Tabela 4 -
Condies empregadas no sistema cromatogrfico LC-MS/MS..
Tabela 5 -
Agrotxicos e medicamentos veterinrios quantificados por LC-
71
MS/MS modo ESI (+/-) e modo de aquisio MRM, tempo de

reteno, ons precursores, ons produtos e energia de coliso
para as duas transies monitoradas...........................................
Tabela 6 -
73
Percentual de compostos que apresentaram recuperaes

mdias (70-120%) e RSD ( 20%) obtidos para os trs ensaios
de extrao...................................................................................
Tabela 7 -
80
Coeficientes de determinao (r2) das curvas analticas, obtidos

para os agrotxicos e medicamentos veterinrios analisados
por LC-MS/MS, a partir das solues de 1,0; 5,0: 10,0; 25,0;
50,0; 100,0; 200,0 e 250,0 g L-1..................................................
Tabela 8 -
Percentuais de recuperao e RSD para a repetitividade do

mtodo
de
extrao
de
agrotxicos
medicamentos
veterinrios em carne....................................................................
Tabela 9 -
de
extrao
de
agrotxicos
medicamentos
veterinrios em fgado...................................................................
90

mtodo
de
extrao
de
agrotxicos
medicamentos
veterinrios em rim........................................................................
Tabela 11 -
87

mtodo
Tabela 10 -
82
93
mtodo
de
extrao
de
agrotxicos
medicamentos
veterinrios em leite......................................................................
Tabela 12 -

mtodo
de
extrao
de
agrotxicos
medicamentos
veterinrios em ovo.......................................................................
Tabela 13 -
Percentuais
de
recuperao
RSD
para
99
preciso
intermediria do mtodo QuEChERS modificado.........................

Tabela 14 -
96
104
Avaliao do efeito matriz percentual dos agrotxicos e

medicamentos veterinrios analisados por LC-MS/MS modo EI
positivo, a partir de solues preparadas em acetonitrila e nos
extratos das matrizes avaliadas..........................................................
109
LISTA DE ABREVIATURAS E SMBOLOS

ABIEC Associao Brasileira das Indstrias Exportadoras de Carne
ANVISA - Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
AOAC - Association of Official Analytical Chemists
APCI - Ionizao Qumica a Presso Atmosfrica, do ingls Atmospheric Pressure Chemical
Ionization
API - Ionizao a Presso Atmosfrica, do ingls Atmospheric Pressure Ionization
APPI
Fotoionizao
Presso
Atmosfrica,
do
ingls
Atmospheric
Pressure
Photoionization
ASE Extrao Acelerada por Solvente, do ingls Accelerated Solvent Extraction
BCPC British Crop Protection Council
C18 - Slica modificada com hidrocarboneto linear C18, octadecilsilano
CAD Dissociao Ativada por Coliso, do ingls
CI Ionizao Qumica, do ingls Chemical Ionization
CID Dissociao Induzida por Coliso, do ingls Collisionally Activated Dissociation
DAD - Deteco por Arranjo de Diodos, do ingls Diode Array Detection
D-SPE - extrao em fase slida dispersiva, do ingls Dispersive Solid Phase Extraction
EI Ionizao Eletrnica, do ingls Electron Ionization
EMBRAPA - Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
ESI - Ionizao por Eletronebulizao, do ingls Electrospray Ionization
ESI(-) - Ionizao por Eletronebulizao no modo negativo, do ingls Electrospray Ionization
Negative Mode
ESI (+) - Ionizao por Eletronebulizao no modo positivo, do ingls Electrospray Ionization
Positive Mode
EUA Estados Unidos
FAO - Organizao das Naes Unidas para a Alimentao e Agricultura, do ingls Food
and Agriculture Organization of the United Nations
FDA Food and Drug Administration
FVO Food and Veterinary Office
GARP - Grupo de Analistas de Resduos de Agrotxicos
GC - Cromatografia Gasosa, do ingls Gas Chromatography
GC-ECD - Cromatografia Gasosa com Deteco por Captura de Eltrons, do ingls Gas
Chromatography with Electron Capture Detection
GC-MS - Cromatografia Gasosa acoplada Espectrometria de Massas, do ingls Gas
Chromatography coupled to Mass Spectrometry
GC-MS/MS - Cromatografia Gasosa acoplada Espectrometria de Massas Sequencial, do
ingls Gas Chromatography coupled to Tandem Mass Spectrometry
GC-NPD - Cromatografia Gasosa com Deteco Nitrognio e Fsforo, do ingls Gas
Chromatography Nitrogen Phosphorus Detection
GPC Cromatografia por Permeao em Gel, do ingls Gel Permeation Chromatography
IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica
ICH - Conferncia Internacional sobre Harmonizao, do ingls International Conference on
Harmonisation
INMETRO - Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial
ISO Organizao Internacional para Padronizao, do ingls International Standard
Organization
IUPAC - International Union of Pure and Applied Chemistry
JECFA Joint Expert Committee on Food Additives
LARP - Laboratrio de Anlise de Resduos de Agrotxicos
LC - Cromatografia Lquida, do ingls Liquid Chromatography
LC-MS - Cromatografia Lquida acoplada Espectrometria de Massas, do ingls Liquid
Chromatography Mass Spectrometry
LC-MS/MS - Cromatografia Lquida acoplada Espectrometria de Massas Sequencial, do
ingls Liquid Chromatography - Tandem Mass Spectrometry
LLE - Extrao Lquido-Lquido, do ingls Liquid-Liquid Extraction
LMR - Limite Mximo de Resduos
LOD - Limite de Deteco, do ingls Limit of Detection
LODi - Limite de Deteco do instrumento, do ingls Limit of Detection of Instrument
LODm - Limite de Deteco do mtodo, do ingls Limit of Detection of Method
LOQ - Limite de Quantificao, do ingls Limit of Quantification
LOQi- Limite de Quantificao do Instrumento, do ingls Limit of Quantification of Instrument
LOQm - Limite de Quantificao do mtodo, do ingls Limit of Quantification of Method
LVI Injetor de Grande Volume, do ingls Large Volume Injection
MAE Extrao Assistida por Microondas, do ingls Microwave Assisted Extraction
MAPA Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
MeCN Acetonitrila
MRM - Monitoramento de reaes mltiplas, do ingls Multiple Reactions Monitoring
MS - Espectrometria de Massas, do ingls Mass Spectrometry
MSPD Disperso da Matriz em Fase Slida, do ingls Matrix Solid Phase Dispersion
n nmero de replicatas
n.q. no quantificado
OMC Organizao Mundial do Comrcio
OMS Organizao Mundial da Sade
PCI Ionizao Qumica Positiva, do ingls Positive Chemical Ionization
pH - Potencial hidrogeninico
PLE Extrao com Lquido Pressurizado, do ingls Pressurized Liquid Extraction
PNCRC Plano Nacional de Resduos e Contaminantes de Origem Animal
PSA - Amina primria secundria, do ingls Primary Secondary Amine
PTV Temperatura Programada de Vaporizao, do ingls Programmed Temperature
Vaporized
QuEChERS - Rpido, fcil, econmico, robusto e seguro, do ingls Quick,Easy,Cheap,
Rugged and Safe
r2 - coeficiente de determinao
rpm - rotaes por minuto
RSD - Desvio Padro Relativo, do ingls Relative Standard Deviation
RSDpi - Desvio Padro Relativo para Preciso Intermediria
RSDr - Desvio Padro Relativo para Repetitividade
SANCO - Directorate General for Health and Consumer Affairs

SBSE Extrao sortiva em barra de agitao, ingls Stir Bar Sorptive Extraction
SFE Extrao por Fluido Supercrtico, do ingls Supercritical Fluid Extraction
SIM - Monitoramento do on Selecionado, do ingls Selected Ion Monitoring
SIM Monitoramento do on Selecionado, do ingls Single Ion Monitoring
SPE - Extrao em Fase Slida, do ingls Solid Phase Extraction
SPME Microextrao em fase slida, do ingls Solid Phase Micro Extraction
tR - tempo de reteno
UE Unio Europia
UFSM Universidade Federal de Santa Maria

UV - Ultravioleta
v/v - Volume por volume
SUMRIO
1 INTRODUO.........................................................................................
19
2 REVISO BIBLIOGRFICA....................................................................
21
2.1 A importncia do agronegcio para o Brasil...................................... 21

2.1.1 O setor da carne bovina no Brasil........................................................
22
2.1.2 O setor do leite bovino no Brasil..........................................................
23
2.1.3 A avicultura no Brasil............................................................................
24
2.2 Agrotxicos............................................................................................ 25
2.3 Medicamentos Veterinrios.................................................................. 27
2.4 Resduos e contaminantes em alimentos...........................................
2.5 Programas de monitoramento de resduos e contaminantes em
alimentos no Brasil.....................................................................................
2.6 Mtodos multirresduo para determinao de agrotxicos e
medicamentos veterinrios em alimentos................................................
2.6.1 Mtodo QuEChERS.............................................................................
29
30
31
35
2.6.1.1 Mtodo QuEChERS original.............................................................. 36

2.6.1.2 Modificaes do mtodo QuEChERS...............................................
39
2.6.1.3. Versatilidade e praticidade do mtodo QuEChERS.........................
41
2.6.1.4. Limitaes do mtodo QuEChERS..................................................
42
2.7 Tcnicas cromatogrficas para a determinao de agrotxicos e

medicamentos veterinrios em alimentos................................................
43
2.7.1 Cromatografia Gasosa acoplada Espectrometria de Massas..........
43
2.7.2 Cromatografia Lquida acoplada Espectrometria de Massas...........
45
2.7.2.1 Fontes de ionizao utilizadas no acoplamento LC-MS.................... 45

2.7.2.1.1 Ionizao por eletrobebulizao.....................................................
46
2.7.2.1.2 Ionizao qumica a presso atmosfrica......................................
47
2.7.2.1.3 Fotoionizao a presso atmosfrica............................................. 47

2.7.2.2 Dissociao Induzida por Coliso (CID)............................................ 48
2.8 Validao de Mtodos Analticos......................................................... 49

2.8.1 Seletividade..........................................................................................
50
2.8.2 Linearidade e Curva Analtica..............................................................
51
2.8.3 Limite de Deteco (LOD) e de Quantificao (LOQ)..........................
52
2.8.4 Exatido................................................................................................ 52
2.8.5 Preciso................................................................................................ 53
3 MATERIAIS E MTODOS........................................................................
54
3.1 Intrumentao........................................................................................
54
3.2 Reagentes, solventes e materiais utilizados......................................
55
3.3 Processamento das amostras.............................................................. 55

3.4 Preparo das solues analticas.......................................................... 56
3.5
Otimizao
determinao
do
sistema
simultnea
de
cromatogrfico
resduos
de
LC-MS/MS
para
agrotxicos
e 60
medicamentos veterinrios em amostras de origem animal..................

3.5.1 Escolha da fase mvel.........................................................................
61
3.5.2 Condies do sistema de deteco...................................................... 61

3.6 Otimizao do mtodo QuEChERS para anlise simultnea de
agrotxicos em medicamentos veterinrios em amostras de origem 62
animal...........................................................................................................
3.6.1 Ensaio 1................................................................................................ 62
3.6.2 Ensaio 2................................................................................................ 63
3.6.3 Ensaio 3................................................................................................ 64
3.7 Validao do mtodo QuEChERS modificado para anlise de
resduos de agrotxicos e medicamentos veterinrios em alimentos 66
de origem animal.........................................................................................
3.7.1 Seletividade..........................................................................................
66
3.7.2 Determinao da Linearidade das Curvas Analticas........................... 66

3.7.3 Determinao da Estimativa do LOD e LOQ do instrumento e do
mtodo QuEChERS modificado....................................................................
3.7.4 Ensaios de fortificao utilizando o mtodo QuEChERS modificado
para avaliao da exatido............................................................................
66
67
3.7.5 Preciso (repetitividade e preciso intermediria)...............................
69
3.7.6 Avaliao do efeito matriz....................................................................
69
3.8 Aplicao do mtodo...............................................................................
70
4 RESULTADOS E DISCUSSES............................................................... 71
4.1
Otimizao
determinao
de
do
sistema
resduos
cromatogrfico
de
agrotxicos
LC-MS/MS
e
para
medicamentos 71
veterinrios em alimentos de origem animal............................................

4.2 Condies de Anlise por LC-MS/MS.................................................. 72
4.3 Mtodo de extrao QuEChERS modificado otimizado....................
78
4.3.1 Avaliao dos procedimentos de extrao........................................... 78

4.4 Mtodo de extrao otimizado.............................................................
80
4.5 Validao do mtodo QuEChERS modificado.................................... 81

4.5.1 Seletividade..........................................................................................
82
4.5.2 Curva analtica e linearidade................................................................
82
4.5.3 Determinao da estimativa do LOD e LOQ do instrumento e do

mtodo...........................................................................................................
4.5.4 Ensaio de fortificao para avaliao da exatido do mtodo............
85
86
4.5.5 Preciso (repetitividade e preciso intermediria)............................... 103

4.5.6 Efeito matriz em LC-MS/MS................................................................. 108
4.6 Aplicao do mtodo............................................................................ 113
5 CONCLUSES.......................................................................................... 114
TRATAMENTO DOS RESDUOS GERADOS............................................. 116
SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS..........................................
117
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS............................................................ 118
19
1 INTRODUO
O cenrio mundial da produo de alimentos revela o grande interesse da
sociedade quanto inocuidade do produto final a ser consumido. Os acontecimentos
envolvendo a contaminao de alimentos, como foi o caso de benzeno na gua e
em sucos de frutas, nitrofuranos em carne de frango, cloranfenicol no mel, entre
outros, h muito tm despertado a ateno do consumidor (WHO, 2010). Este
quadro tem forado os pases a estabelecerem normas legislativas rgidas visando
garantir o consumo de alimentos seguros por parte da populao.
Quando se fala em resduos e contaminantes em alimentos, faz-se referncia
a uma grande variedade de substncias. H muito tempo a agropecuria lana mo
de artifcios envolvendo aplicao de agrotxicos e medicamentos veterinrios
durante o processo de produo. Essas substncias podem permanecer no alimento
na forma original ou, ainda, como subprodutos ou metablitos, quando degradados
ou biotransformados.
Atualmente, uma das maiores barreiras comerciais que o Brasil tem
encontrado para a comercializao de seus produtos da cadeia do agronegcio a
falta de dados cientficos sobre a presena de resduos e contaminantes em
alimentos produzidos no pas. De acordo com o relatrio da misso de
representantes da Uniao Europia (UE) realizada no Brasil em maro de 2008,
vrias foram as observaes, ajustes e/ou implementaes propostos, a fim de que
o Brasil tenha uma harmonizao no seu plano de controle de resduos e
contaminantes em produtos de origem animal (FVO, 2010). As modificaes,
propostas visam suprir as exigncias dos principais parceiros comerciais do pas
(EUA e UE), alm disponibilizar ao mercado interno produtos de qualidade. Entre as
solicitaes e/ou recomendaes presentes no relatrio pode-se citar:
1)
necessidade de recursos humanos qualificados, para a gerao e

reproduo de conhecimentos em anlise qumica na rea de resduos e
contaminantes em alimentos;
2)
necessidade de implementao de mtodos analticos que representem o

estado da arte em anlise de resduos e contaminantes em alimentos;
3)
acreditao e validao dos mtodos de anlise utilizados, a fim de obter

resultados reconhecidos por organismos internacionais;
20
4)
aumento do nmero de compostos a serem analisados em alimentos de

origem animal.
Considerando a importncia do agronegcio para a economia do Brasil, do

uso de agrotxicos e medicamentos veterinrios para o controle de pragas e
doenas, bem como a consequente possibilidade destes contaminarem os alimentos
e o homem, os objetivos deste trabalho foram: (i) otimizar e validar um mtodo de
extrao (baseado nos fundamentos do mtodo QuEChERS) para determinao
simultnea de resduos de agrotxicos e medicamentos veterinrios utilizando
Cromatografia Lquida acoplada Espectrometria de Massas em Srie (LC-MS/MS);
(ii) demonstrar a aplicabilidade do mtodo otimizado na determinao de resduos
de agrotxicos e medicamentos veterinrios em alimentos de origem animal (carne
bovina, fgado bovino, rim bovino, leite bovino e ovo).
Este estudo torna-se relevante devido existncia de poucos trabalhos
cientficos sobre a extrao simultnea de resduos de diferentes classes. Alm
disso, este trabalho contribuir para o desenvolvimento de mtodo analtico validado
empregando tcnicas modernas de extrao e determinao de resduos de
agrotxicos e medicamentos veterinrios por LC-MS/MS. Por este motivo, monitorar
as possveis contaminaes em amostras de alimentos tornou-se um assunto de
extrema relevncia, devido ao risco que estes compostos oferecem sade
humana, alm da persistncia no meio ambiente e tendncia de bioacumulao.
21
2 REVISO BIBLIOGRFICA
2.1 A importncia do agronegcio para o Brasil
O agronegcio, entendido como a soma dos setores produtivos com os de

processamento do produto final e os de fabricao de insumos, responde por 26,4%
do Produto Interno Bruto (PIB) do Brasil, alm de ser responsvel por 39% dos
empregos gerados no pas (MAPA, 2010).
A histria revela que o Brasil desde a sua colonizao caracteriza-se como um
pas agroexportador. De acordo com dados do Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento (MAPA), as exportaes do agrogegcio cresceram 2,5 vezes nos
ltimos dez anos e renderam US$ 76,4 bilhes de dlares em 2010. Este valor
18% maior do que o registrado em 2009 (US$ 64,7 bilhes) e supera em US$ 4,6
bilhes o recorde anterior, conquistado em 2008, de US$ 71,8 bilhes.
As importaes aumentaram 35,2%, passando de US$ 9,9 bilhes, em 2009, para
US$ 13,4 bilhes em 2010. Com isso, a balana comercial do agronegcio registrou
supervit de R$ 63 bilhes no ano passado (MAPA, 2010).
Os nveis tecnolgicos alcanados pelos produtores rurais brasileiros atingiram
patamares expressivos que podem ser mensurados pelo aumento da produtividade
no campo. Isso explica, por exemplo, o fato de o Brasil ter conseguido dobrar sua
produo agropecuria. Este desempenho no campo s foi possvel devido a
investimentos em pesquisa, novas tecnologias e utilizao de insumos (sementes,
adubos, agrotxicos e medicamentos veterinrios) de primeira linha disponveis para
o setor (GUANZIROLI, 2008).
A melhoria da competitividade da agricultura e produo animal no Brasil,
sobretudo nos ltimos dez anos e o prprio empenho do governo e da iniciativa
privada em estimular e divulgar o produto agropecurio brasileiro no exterior tem
proporcionado o aumento das exportaes. Para aumentar a participao dos
produtos agrcolas brasileiros no mercado internacional, alm do trabalho
promocional desenvolvido em conjunto com a iniciativa privada, o governo tem
atuado junto a Organizao Mundial do Comrcio (OMC) no sentido da eliminao
das barreiras comerciais nos pases importadores (GUANZIROLI, 2008).
22
Para a Organizao das Naes Unidas para Agricultura e Alimentao (Food

and Agriculture Organization, FAO), com a atual taxa de crescimento da populao
mundial haver a necessidade de dobrar a produo de alimentos a cada 50 anos.
O Brasil um dos poucos pases com elevado potencial para suprir este aumento de
demanda. Entre as vantagens que o pas apresenta pode-se citar: elevada oferta de
reas agriculturveis com solo, relevo e clima favorveis, avano recente em
pesquisas e no desenvolvimento de variedades adaptadas aos cultivos regionais e
consolidao do binmio de explorao lavoura-pecuria (FAO, 2010).
O agronegcio brasileiro altamente competitivo e demonstra elevado grau
de crescimento, porm necessita da adoo de procedimentos mais eficazes para a
manuteno da qualidade, visto que a segurana alimentar e qualidade dos produtos
em grande parte advm das barreiras tcnicas aplicadas pelos pases importadores
dos produtos agropecurios brasileiros. Este fato est mudando prticas e tambm a
populao brasileira est se tornando cada vez mais exigente (LOURENO, 2010).
Segundo levantamento realizado pelo MAPA, o mercado interno ter um forte
crescimento. Haver, assim, uma dupla presso sobre o aumento da produo
nacional, o crescimento do mercado interno e as exportaes do pas (MAPA, 2010).
2.1.1 O setor da carne bovina no Brasil
Segundo a Associao Brasileira das Indstrias Exportadoras de Carne

(ABIEC), o Brasil tem um rebanho bovino de cerca de 190 milhes de cabeas, em
contnuo crescimento e tem apresentado avanos nos ndices de produtividade. O
custo de produo do bovino brasileiro se situa dentre os mais baixos do mundo, o
que traz uma grande vantagem competitiva. A bovinocultura de corte representa a
maior fatia do agronegcio brasileiro, gerando faturamento de mais de R$ 50
bilhes/ano e cerca de 7,5 milhes de empregos (ABIEC, 2010).
O setor de carnes no Brasil modificou-se radicalmente nas ltimas dcadas. A
pecuria bovina, apesar de ainda no incorporar to rapidamente as novas
tecnologias de produo e gesto, tem evoludo significativamente, com aumento da
produtividade do rebanho e modernizao de muitas empresas rurais. Estes
avanos foram resultados de mudanas no mercado consumidor de alimentos e
mudanas da prpria economia (OLIVEIRA et al., 2003).
23
A pecuria bovina do Brasil vem batendo recordes consecutivos de

exportao e, em 2010, foram exportadas 1,864 milho de toneladas, resultando em
US$ 4,795 bilhes. As previses da Assessoria de Gesto Estratgica do MAPA
que o Brasil amplie nos prximos anos a participao no mercado mundial de carne
bovina. O Brasil deve consolidar a liderana mundial nas exportaes de carne
bovina em volume e em receita (MAPA, 2010).
Apesar dos bons indicadores econmicos, a carne bovina brasileira tem
enfrentado uma srie de restries sanitrias em alguns dos principais mercados
importadores Estados Unidos (EUA) e Unio Europia (EU). Estima-se que o pas
deixou de exportar at US$ 2 bilhes em carne bovina at o fim de 2010. Somente
com os entraves impostos pela UE, o "prejuzo" acumulado desde 2008 calculado
em US$ 1 bilho (MAPA, 2010).
Entre os meses de maio e dezembro de 2010, o mercado americano
embargou toda a exportao de carne industrializada proveniente do Brasil. Neste
perodo o Brasil deixou de exportar 33,8 mil toneladas de carne industrializada (U$
76,34 milhes) devido a presena de resduos de medicamentos veterinrios acima
dos valores permitidos (ABIEC, 2010).
A soluo dos problemas da pecuria brasileira passa, necessariamente, pela
organizao da cadeia produtiva e por melhorias profundas nas prticas de manejo
aplicadas pelo setor produtivo. O conjunto de agentes que compe a cadeia
produtiva da carne apresenta grande heterogeneidade: de pecuaristas altamente
capitalizados a pequenos produtores, de frigorficos com alto padro tecnolgico,
capazes de atender a uma exigente demanda externa, a abatedouros que
preenchem requisitos mnimos da legislao sanitria (ABIEC, 2010).
2.1.2 O setor do leite bovino no Brasil
A importncia que a atividade leiteira adquiriu no pas incontestvel, tanto

no desempenho econmico como na gerao de empregos permanentes. A
produo brasileira, em 2009, foi de 29,1 bilhes de litros, gerando um valor bruto
superior a R$ 15 bilhes (IBGE, 2010). O setor primrio envolve cerca de cinco
milhes de pessoas, considerando, tambm, os 1,3 milhes de produtores de leite.
24
Duas caractersticas so marcantes na pecuria de leite brasileira: a primeira

que a produo ocorre em todo o territrio nacional. Existe informao de
produo de leite em 554 microrregies, das 558 consideradas pelo Instituto
Brasileiro de Geografia e Estatstica (IBGE). A segunda caracterstica que no h
um padro de produo. A heterogeneidade dos sistemas de produo muito
grande e ocorre em todas as unidades da federao. Existe desde propriedades de
subsistncia, sem tcnica e produo diria menor que dez litros, at produtores
comparveis aos mais competitivos do mundo, com tecnologias avanadas e
produo diria superior a 60 mil litros (EMBRAPA, 2008; CNA, 2010).
O Brasil sempre atuou no mercado internacional como um dos maiores
importadores de leite. Porm, a partir do crescimento da produo e dos ganhos na
produtividade, o pas passou a ser exportador de leite, uma virada comercial
importante, que poder trazer uma srie de benefcios para diversos elos da cadeia
produtiva, alm de consolidar a posio do pas no mercado internacional de
produtos lcteos (PONCHIO et al., 2005).
2.1.3 A avicultura no Brasil
No Brasil, a avicultura emprega mais de 4,5 milhes de pessoas, direta e

indiretamente, e responde por quase 1,5% do PIB nacional. A importncia social da
avicultura no Brasil se verifica tambm pela presena macia no interior do pas,
principalmente nos estados do Sul e Sudeste. Em muitas cidades a produo de
frangos a principal atividade econmica (BRAZILIAN CHICKEN, 2010).
Em 2009 a produo brasileira atingiu a marca de 10,9 milhes de toneladas,
garantindo ao Brasil uma posio entre os trs maiores produtores mundiais de
carne de frango, juntamente com EUA e China. Desse total, cerca de 65%
permanecem no mercado interno, o que comprova a fora dessa indstria para o
pas. O consumo per capita de carne de aves no Brasil est em aproximadamente
39 quilos por ano. Nas exportaes, o Brasil mantm, desde 2004, a posio de
maior exportador mundial, tendo terminado 2009 com a marca de 3,6 milhes de
toneladas embarcadas para mais de 150 pases (IBGE, 2010).
Visando atender s crescentes exigncias dos importadores, as empresas
exportadoras brasileiras do setor passaram a investir em melhoria na gentica, em
25
novas tecnologias e em processos que aumentassem a eficincia de toda a cadeia

produtiva. O alto nvel tecnolgico alcanado pela avicultura nacional, notadamente
a de corte, colocou a atividade em posio privilegiada em relao a outras
atividades pecurias desenvolvidas no Brasil, com nvel de produtividade
internacional. Em 2009, os trs principais pases produtores de frango no mundo,
EUA, China e Brasil, responderam por 54% da produo mundial (BRAZILIAN
CHICKEN, 2010).
De acordo com os dados da Pesquisa Pecuria Municipal, realizada pelo
IBGE, em 2009, o Estado de So Paulo foi o principal produtor de ovos no Brasil
(860,9 milhes de dzias), seguido por Minas Gerais, Paran e Rio Grande do Sul. A
produo brasileira de ovos em 2009 foi de 3,3 bilhes de dzias. O crescimento da
produo e da qualidade deste produto habilitam o Brasil para um mercado
gigantesco de ovos e sub-produtos de ovos frescos e processados. O setor
produtivo de ovos brasileiros est voltado para o mercado externo e dever atender
s diretivas da UE e de outros provveis pases compradores do produto. Trata-se
de uma padronizao para granja, fbricas de rao, entrepostos, indstrias de
conserva de ovos, entre outros elos da produo (IBGE, 2010).
2.2 Agrotxicos
Pesticida, segundo o Codex Alimentarius toda e qualquer substncia

utilizada com o propsito de prevenir, destruir, atrair, repelir ou controlar qualquer
peste, incluindo espcies indesejveis de plantas, insetos ou animais, durante as
etapas de produo, armazenamento, transporte, distribuio e processamento do
alimento ou rao animal (ou que seja fornecido aos animais para controle de
ectoparasitas). O termo inclui substncias utilizadas como reguladoras do
crescimento das plantas, desfolhantes, dessecantes, ou inibidores de brotos, e
substncias aplicadas tanto antes como aps a colheita, para proteger a mesma da
deteriorao durante o armazenamento e transporte (FAO, 2005).
No Brasil (2002), o Decreto n 4.074 regulamenta a Lei n 7802/1989 e
estabelece que os defensivos agrcolas, ou agrotxicos, so produtos e agentes de
processos fsicos, qumicos ou biolgicos, destinados ao uso nos setores de
produo, no armazenamento e beneficiamento de produtos agrcolas, nas
26
pastagens, na proteo de florestas, nativas ou plantadas, e de outros ecossistemas

e de ambientes urbanos, hdricos e industriais, cuja finalidade seja alterar a
composio da flora ou da fauna, a fim de preserv-las da ao danosa de seres
vivos considerados nocivos, bem como as substncias de produtos empregados
como desfolhantes, dessecantes, estimuladores e inibidores de crescimento.
Observa-se uma diferena importante entre as duas definies j que aquela
efetuada pela FAO contempla substncias que possam vir a serem utilizadas no
apenas diretamente durante o plantio, mas em todas as etapas do cultivo
propriamente dito e tambm aps a colheita, como nas etapas de armazenamento,
transporte, distribuio e processamento do alimento.
Os agrotxicos esto sendo largamente utilizados desde a metade do sculo
XX. De acordo com os dados do British Crop Protection Council (BCPC),
aproximadamente 860 substncias ativas so comercializadas como agrotxicos nos
mais variados tipos de formulaes. Estas substncias esto divididas em mais de
100 classes, sendo benzoilurias, carbamatos, organofosforados, organoclorados,
piretrides, sulfonilurias e triazinas os grupos mais importantes (BCPC, 2010).
As caractersticas fsico-qumicas dos agrotxicos so consideravelmente
diferentes, uma vez que podem apresentar carter cido, bsico e neutro. Estes
compostos podem conter em sua estrutura: halogneos, fsforo, enxofre ou
nitrognio, heterotomos que possuem uma grande relevncia no mtodo de
deteco destes compostos. Um grande nmero de agrotxicos muito voltil,
outros no, e esta grande diversidade causa srios problemas no desenvolvimento
de um mtodo universal para anlise de resduos destes compostos.
O uso de agrotxicos para a proteo das mais diferentes culturas permitiu
um aumento no volume de produo, porm, o aparecimento de resduos destas
substncias nos alimentos , atualmente, uma das principais preocupaes de
sade pblica. Sendo assim, programas internacionais para o controle legal de
agrotxicos esto estabelecidos para prevenir a contaminao de gneros
alimentcios. Portanto, o controle de resduos de agrotxicos em alimentos um dos
mais importantes aspectos de segurana alimentar.
O emprego de agrotxicos na agricultura tem seus benefcios econmicos,
uma vez que asseguram o controle e o combate de pragas e doenas, protegendo a
qualidade da produo. Por outro lado, os consumidores destes produtos agrcolas
podem estar expostos aos agrotxicos, devido a presenas destes nos alimentos.
27
Entre os efeitos nocivos causados ao homem, por estas substncias, pode-se citar:
diversos tipos de cncer, danos ao sistema nervoso central, problemas no sistema
reprodutivo e locomotor, deficincia mental, entre outros.
A utilizao de agrotxicos contribui para o aumento na produo, porm h
uma preocupao crescente com seus efeitos adversos no ambiente, tais como
contaminao dos recursos hdricos, impactos em organismos no alvos e na sade
humana. Os agrotxicos podem apresentar diferentes rotas de degradao no meio
ambiente e serem transferidos em partes para diferentes compartimentos
ambientais. Quando aplicados em pulverizao, os agrotxicos podem ser
transportados pelo vento para locais distantes dos quais foram aplicados. Quando
aplicados diretamente no solo, podem ser levados pela gua de chuva ou irrigao e
atingir os mananciais de guas superficiais ou as reservas subterrneas atravs da
lixiviao com a gua. Embora existam muitas possibilidades para que os
agrotxicos sejam transportados no ambiente e contaminem as fontes de gua, nem
todos os produtos apresentam a mesma persistncia e mobilidade no ambiente.
2.3 Medicamentos Veterinrios
A Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) classifica os

medicamentos veterinrios como toda e qualquer substncia aplicada, em qualquer
animal destinado produo de alimentos, com fins teraputicos, profilticos ou de
diagnstico, ou para modificar as funes fisiolgicas, de comportamento ou como
promotor de crescimento (ANVISA, 2010).
Na pecuria moderna, os medicamentos veterinrios tm sido amplamente
utilizados e administrados como aditivos em gua ou nos alimentos dos animais
destinados ao consumo humano, com o intuito de prevenir o aparecimento de
doenas. Alm disso, agentes promotores do crescimento so aplicados para
estimular o crescimento dos animais, o que considerado uma prtica excessiva no
uso desses medicamentos (STOLKER & BRINKMAN, 2005).
evidente que h benefcios importantes para os pecuaristas ao usar estas
substncias, geralmente, o uso desses medicamentos melhora a absoro e a
converso dos alimentos levando a um ganho em protenas e sais minerais
28
estimulando o crescimento dos animais. No entanto, essas susbtncias podem

permanecer nos alimentos derivados dos animais tratados, levando a resduos
destes nos alimentos.
Muitos destes compostos podem exercer efeitos genotxicos, carcinognicos,
endcrinos, entre outros. A agncia Food and Drug Administration (FDA) e a UE
exigem um severo controle no uso destes compostos envolvendo a produo de
alimentos. De acordo com estes rgos reguladores, estas substncias so
classificadas em dois grupos, o grupo A compreende as substncias proibidas
(estilbenos, agentes antitireideos, esterides, lactonas do cido resorclico, betaantagonistas e nitrofuranos), e o grupo B compreende outros medicamentos
veterinrios autorizados, mas que possuem limites estabelecidos (bactericidas, antihelmnticos, carbamatos e piretrides, sedativos, anti-inflamatrios no esterides,
organoclorados e organofosforados) (FDA, 2010; FVO, 2010).
Os antibiticos, na sua maioria, atuam como promotores do crescimento e
tm sido utilizados de forma abusiva levando principalmente ao desenvolvimento de
resistncia microbiana no homem. Por outro lado, os anti-helmnticos, embora sejam
usados para o seu propsito, no tratamento de infeces parasitrias, tambm tm
causado srios problemas, devido ao no cumprimento do prazo de carncia e da
posologia aplicada ao animal. Em geral, animais que so alimentados com
antibiticos ganham peso mais rpido, so menos suscetveis a infeces
bacterianas e apresentam maior eficincia alimentar (ARCURI & MANTOVANI,
2010). A maioria dos antibiticos utilizados em ruminantes no afeta o metabolismo
do animal diretamente, e os efeitos benficos geralmente esto relacionados com
ao indireta do medicamento veterinrio, melhorando as condies de higiene do
animal ou influenciando a digesto dos alimentos (ARCURI & MANTOVANI, 2010).
Alm de inibir patgenos responsveis por quadros clnicos que diminuem o
desempenho do animal, vrios antibiticos utilizados como aditivos alimentares em
bovinos afetam o metabolismo de alimentos no rmen e alteram os produtos de
fermentao de grupos microbianos especficos do trato gastrointestinal. A
modificao da fermentao ruminal pode ser caracterizada como o principal efeito
dos antibiticos adicionados alimentao dos ruminantes. Desta forma, mais
energia e nitrognio so disponibilizados para o animal, resultando na melhora do
desempenho e ganho de peso (ARCURI & MANTOVANI, 2010).
29
2.4 Resduos e contaminantes em alimentos
De acordo com a norma NBR ISO 22000 o termo "segurana alimentar"

descreve aspectos relacionados inocuidade, ou seja, os alimentos no devem
constituir vias de exposio a perigos que possam causar danos sade, sejam
eles agentes biolgicos, fsicos ou qumicos. Entre os perigos qumicos existentes,
destacam-se os resduos e contaminantes (SPISSO et al., 2008).
A FAO define o termo resduo como a frao de uma substncia, seus
metablitos, produtos de converso ou reao e impurezas que permanecem no
alimento proveniente de produtos agrcolas e/ou animais tratados com estas
substncias (CODEX ALIMENTARIUS, 2010).
O termo contaminante definido como qualquer substncia que no seja
intencionalmente adicionada aos alimentos. Os contaminantes podem estar
presentes nos alimentos como resultado das etapas de produo, transformao,
acondicionamento, embalagem, transporte e armazenagem do alimento (CODEX
ALIMENTARIUS, 2010).
As deficincias nas boas prticas para a utilizao de agrotxicos e
medicamentos de uso veterinrio incorrem no aparecimento de resduos que, em
nveis acima dos Limites Mximos de Resduos (LMR), que podem representar risco
sade humana. Estes riscos esto estritamente correlacionados com o desrespeito
s instrues de uso do fabricante contidas na bula dos agrotxicos e dos
medicamentos veterinrios, tais como: indicao de uso para a espcie alvo,
dosagem, via de administrao e perodo de carncia.
As organizaes internacionais envolvidas com a sade pblica, como o Joint
Expert Committee on Food Additives (JECFA), rgo da FAO, e o FDA dos EUA,
estabelecem as diretrizes para os Limites Mximos de Resduos (LMR) (DENOBILI,
2004). Estes so definidos como a concentrao mxima de resduo resultante do
uso de um pesticida ou medicamento veterinrio em produtos agropecurios. O LMR
a quantidade legalmente permitida, ou reconhecida, como aceitvel no alimento e
estabelecido para cada composto aprovado para uso em um determinado
alimento. O LMR sempre est correlacionado Ingesto Diria Aceitvel. Esta
obtida a partir de ensaios de experimentao avaliando-se a toxicidade,
teratogenicidade,
carcinogenicidade
destes
compostos
no
intencionais
30
(DENOBILI, 2004). No Brasil, a competncia para estabelecer limites mximos de

resduos em alimentos, seja de medicamentos veterinrios ou de agrotxicos, do
Ministrio da Sade atravs da ANVISA (2010).
O conhecimento da exposio da populao a estes compostos de
fundamental importncia para nortear as aes de controle e monitoramento visando
a proteo do consumidor.
2.5 Programas de monitoramento de resduos e contaminantes em alimentos

no Brasil
O agronegcio nacional vem incorporando novas tecnologias na produo de

alimentos de origem animal, incluindo manejos diferenciados na utilizao de
pastagens, alimentao, gentica e na sade animal. Aliado a este fato, h uma
preocupao crescente com questes relacionadas a presena de resduos e
contaminantes em animais destinados a produo de alimentos.
O Brasil possui destaque na produo agropecuria, estabelecendo-se como
um dos principais produtores de alimentos de origem animal do mundo. Assim, a
produo animal no pas vem se profissionalizando e dispondo de ferramentas e
tecnologias para maximizar a produo animal. Para este intento, a utilizao de
medicamentos de uso veterinrio constitui uma importante ferramenta para o
tratamento de infeces e para aumento de produtividade.
O Plano Nacional de Controle de Resduos e Contaminantes em Produtos de
Origem Animal (PNCRC), foi institudo pela Portaria n 51, de 6 de maio de 1986,
sendo sua adequao realizada pela Portaria n 527, de 15 de agosto de 1995. um
programa do MAPA, que visa garantir a sade do consumidor por meio de um
monitoramento da presena de resduos de medicamentos veterinrios e
contaminantes ambientais em produtos de origem animal (carnes, leite, pescado, e
mel) (MAPA, 2010). Um dos principais objetivos do PNCRC integrar o esforo
destinado melhoria da produtividade e da qualidade destes alimentos colocados
disposio da populao brasileira, e secundariamente, proporcionar ao pas,
condies de se adequar do ponto de vista sanitrio, s regras do comrcio
31
internacional de alimentos, preconizadas pela Organizao Mundial do Comrcio

(OMC) e outros rgos como FAO e Organizao Mundial da Sade (OMS).
As principais metas do PNCRC caminham no sentido da verificao do uso
correto e seguro das drogas veterinrias, de acordo com as boas prticas
veterinrias recomendadas e das tecnologias utilizadas nos processos de
incrementao da produo e produtividade pecuria. As aes deste plano esto
direcionadas para se conhecer e evitar a violao dos nveis de segurana ou dos
LMR de substncias com uso autorizado, bem como a ocorrncia de quaisquer
nveis de resduos de compostos qumicos de uso proibido no pas (MAPA, 2010).
Deve-se ressaltar a importncia do PNCRC para o pas, visto que o no
cumprimento das metas anuais previstas para o controle de resduos acarreta srios
problemas e embargos nas exportaes para os principais parceiros comerciais do
pas (UE e EUA).
Em 2002 a ANVISA, iniciou a implantao do Programa Nacional de Anlise
de Resduos de Medicamentos Veterinrios em Alimentos Expostos ao Consumo
(PAMVet). Este visa avaliar o potencial de exposio do consumidor aos resduos de
medicamentos veterinrios pela ingesto de alimentos de origem animal adquiridos
no comrcio. Entre os alimentos selecionados, est priorizado o leite bovino, porm
outras matrizes como carnes (frango, bovina e suna), pescado, ovo e mel, devero
fazer parte do escopo monitorado, devido ao grande consumo destes produtos
(ANVISA, 2010).
2.6 Mtodos multirresduos para determinao de resduos de agrotxicos e

medicamentos veterinrios em alimentos.
Nos ltimos anos, ocorreu um rpido desenvolvimento de novos mtodos

analticos visando determinao de resduos de agrotxicos em alimentos. Estes
avanos tiveram como objetivo a substituio dos mtodos tradicionais de anlise de
resduos, que apresentavam como caractersticas a morosidade de suas diversas
etapas, emprego de grandes volumes de solvente, alto custo, etc. (PRESTES et al.,
2009).
Geralmente, a complexidade da composio dos alimentos, ocasiona
dificuldades para a quantificao dos agrotxicos, sendo necessria a realizao de
32
uma etapa de limpeza do extrato, aps extrao com solvente. Essa etapa
fundamental, uma vez que reduz as interferncias e o efeito matriz, alm de diminuir
a necessidade de manuteno do sistema cromatogrfico. No sentido de melhorar a
anlise quantitativa, esforos foram realizados no desenvolvimento de novos
mtodos de extrao e limpeza (PRESTES et al., 2009).
As limitaes na anlise de resduos de agrotxicos foram minimizadas aps
o desenvolvimento dos mtodos multirresduo. Estes apresentam como vantagens a
possibilidade de analisar um grande nmero de compostos, altos percentuais de
recuperao dos analitos, remoo dos possveis interferentes da amostra, boa
preciso e robustez, baixo custo, rapidez, facilidade e segurana (utilizam pequenos
volumes de solventes de baixa toxicidade). A Tabela 1 apresenta em ordem
cronolgica o desenvolvimento destes mtodos.
O
primeiro
mtodo
multirresduo
para
extrao
de
agrotxicos
foi
desenvolvido por Mills et al. (1963), nos laboratrios do FDA, nos EUA. O mtodo
baseia-se em uma extrao com acetonitrila (MeCN), sendo utilizado basicamente
na determinao de compostos organoclorados apolares em amostras nogordurosas. A adio de gua ao extrato, seguida de uma etapa subsequente de
partio, promovida atravs da adio de solventes apolares (etr de petrleo ou
hexano). Alm de gua, acares e sais tambm so removidos do extrato nesta
etapa.
O desenvolvimento e aplicao de agrotxicos com caractersticas mais
polares, como por exemplo, organofosforados e organonitrogenados, demandou
novos mtodos de extrao multirresduo que englobassem estes compostos. Em
1975, Luke et al. desenvolveram o denominado mtodo de Luke, que consiste em
uma etapa de extrao de 100 g de amostra utilizando acetona (200 mL), seguida de
uma partio lquido-lquido com solventes apolares (ter de petrleo e
diclorometano), sendo utilizados 100 mL de cada. Com o objetivo de obterem-se
maiores percentuais de recuperao para os compostos polares, adicionou-se
cloreto de sdio (NaCl) na fase aquosa para favorecer a transferncia destes para a
fase orgnica.
33
Tabela 1. Ordem cronolgica dos principais mtodos de anlise de resduos de

agrotxicos em alimentos
Dcada
Mtodo
Extrao e Limpeza
Caractersticas
Mills
O mtodo baseia-se em uma extrao com

acetonitrila sendo utilizado basicamente na
determinao de compostos organoclorados em
amostras no-gordurosas. A etapa de limpeza
realizada atravs da utilizao de uma coluna de
florisil .
A extrao seguida por uma

etapa de partio com ter de
petrleo. Compostos
organofosforados apresentavam
baixos percentuais de
recuperao quando analisados
por este mtodo.
1960
Storherr
1970
Mtodo para
determinar
organoclorados,
organofosforafos
e nitrogenados
Luke
1980
atual
Realizou-se algumas modificaoes no mtodo de

Mills. A extrao realizada com acetonitrila,
porm o ter de petrleo substitudo por
diclorometano. A etapa de limpeza realizada
com carvo ativado
Este mtodo possibilitou que o

mtodo de Mills fosse aplicado a
compostos organoclorados e
organofosforados em frutas e
vegetais.
Utiliza acetona na etapa de extrao. Este

processo seguido de uma partio lquidolquido utilizando diclorometano ou mistura de
diclorometano e ter de petrleo, a fim de
remover da gua. A etapa de limpeza realizada
com carvo ativado.
A extrao dos agrotxicos realizada com
acetona. Adiciona-se cloreto de sdio para saturar
a fase aquosa, tendo como consequncia maiores
valores de recuperao dos compostos polares. A
etapa de limpeza, quando realizada, feita com
coluna de florisil .
Este o primeiro mtodo em

que uma soluo de cloreto de
sdio foi adicionada ao extrato
para promover o efeito
salting out.
Esta poca foi marcada pelo desenvolvimento de

mtodos que no exigiam a utilizao de grandes
quantidades de solventes clorados. Estes foram
substitudos por outros, por exemplo, mistura 1:1
(v/v) de cicloexano e acetato de etila. Alm disso,
os solventes apolares foram substitudos por sais
(Na2SO4, MgSO4, NaCl, etc), durante o processo
de partio. A extrao em fase slida (SPE, do
ingls Solid Phase Extraction) comeou a ser
amplamente utilizada, substituindo muitos
mtodos baseados na extrao lquido-lquido.
A acetona continua sendo o

solvente mais utilizado na etapa
de extrao. Porm, h o
desenvolvimento de mtodos,
nos quais a etapa de extrao
era realizada com acetonitrila e
acetato de etila. A fim de
melhorar os percentuais de
recuperao dos compostos
polares o sulfato de sdio
(Na2SO4) foi amplamente
utilizado. Alm disso, diversos
procedimentos de limpeza foram
desenvolvidos.
Os avanos da qumica analtica em consonncia

com o conceito sustentabilidade
levaram ao desenvolvimento de vrias tcnicas
alternativas de extraao como por exemplo a
SFE, MAE, MSPD, SPME e ASE.
34
Krijgsman & van de Kamp (1976), com o intuito de melhorar os resultados

obtidos com o mtodo de Luke, propuseram a extrao de agrotxicos utilizando
acetato de etila com subsequente adio de sulfato de sdio anidro, obtendo maior
rapidez, simplicidade, limpeza dos extratos e melhores valores de recuperao para
os compostos polares, quando comparado ao mtodo de Luke. A imiscibilidade do
sistema acetato de etila - gua tornou desnecessria a adio de solventes
apolares. Todas estas vantagens fizeram deste o mtodo oficial para extrao
multirresduo de agrotxicos em vrios pases europeus. Uma das desvantagens
deste mtodo a quantidade de co-extrativos apolares tais como, lipdios e ceras,
tornando necessria uma etapa posterior de limpeza utilizando Cromatografia por
Permeao em Gel (Gel Permeation Chromatography, GPC), aumentando
significativamente o tempo e o custo do preparo da amostra.
Na dcada de 1980, o Food and Consumer Product Safety Authority da
Holanda desenvolveu em seu laboratrio o mtodo de extrao mini-Luke, o qual
uma miniaturizao do mtodo de extrao Luke original, omitindo-se a etapa de
particionamento com cloreto de sdio (HIEMSTRA & KOK, 2007). O mtodo consiste
na extrao de 15 g de frutas ou vegetais j processados, adicionando-se acetona
(30 mL) seguida de agitao em homogeneizador Ultraturrax por cerca de 30 s,
sendo posteriormente adicionados ter de petrleo (30 mL) e diclorometano (30 mL),
agitando-se novamente por cerca de 30 s. A miniaturizao deste mtodo
possibilitou a reduo da quantidade de amostra, bem como de solventes utilizados.
Entretanto, valores baixos de recuperao (< 70%) foram obtidos para agrotxicos
polares, como metamidofs, ometoato, monocrotofs entre outros. Como um mtodo
de extrao alternativo, foi desenvolvida uma modificao do mtodo de extrao
mini-Luke nos anos 90, no qual foi adicionado sulfato de sdio anidro na etapa de
extrao levando, assim, a uma melhor extrao dos agrotxicos polares (PRESTES
et al., 2009).
Durante os anos 1990, devido s fortes presses de ambientalistas e tambm
a fatores relacionados sade humana, ocorreu um grande desenvolvimento de
mtodos alternativos de extrao baseados na reduo do volume de solvente
utilizado na etapa de extrao. Entre estes novos mtodos pode-se citar a Extrao
em Fase Slida (Solid Phase Extraction, SPE) (LANAS, 2004), a qual tambm tem
sido empregada com frequncia na etapa de purificao do extrato para amostras de
alimentos. Outros mtodos que foram desenvolvidos neste perodo tambm tinham
35
como objetivo a simplificao de etapas como, por exemplo, Disperso da Matriz em

Fase Slida (Matrix Solid Phase Dispersion, MSPD) (BARKER et al.,1989) e
Microextrao em Fase Slida (Solid Phase Micro Extraction, SPME) (ARTHUR &
PAWLISZYN, 1990). Em 1999, foi proposta por Baltussen et al. (1999) a Extrao
Sortiva em Barra Magntica (Stir Bar Sorptive Extraction, SBSE), que fornece baixos
limites de deteco, especialmente para analitos hidrofbicos. A Extrao por Fluido
Supercrtico (Supercritical Fluid Extraction, SFE) (MENDIOLA et al., 2007), Extrao
Acelerada por Solventes (Pressurized Liquid Extraction, PLE) (CARABIASMARTNEZ et al., 2005) e Extrao Assistida por Micro-ondas (Microwave Assisted
Extraction, MAE) (CAMEL, 2000) so exemplos de mtodos que apresentam, dentre
outras caractersticas, elevada eficincia, entretanto geralmente demandam
investimento considervel em instrumentao.
Os novos mtodos que tm como base a instrumentao, sendo a extrao
muitas vezes automatizada, demandam analistas treinados e etapas de limpeza
entre extraes, o que implica em um maior tempo de anlise. Outra desvantagem
geralmente apresentada o escopo limitado de agrotxicos que podem ser
extrados sob determinadas condies. Sendo assim, estes procedimentos, podem
ser empregados em algumas aplicaes, mas esto distantes de serem
considerados ideais para um mtodo multirresduo (WARDENCKI, et al. 2004).
2.6.1 Mtodo QuEChERS
Em 2003, Anastassiades et al. (2003) com o objetivo de superar limitaes

prticas dos mtodos multirresduo existentes, na poca introduziram um novo
procedimento de preparo de amostra para extrao de resduos de agrotxicos
denominado QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe) sendo que
a pronncia, de acordo com os autores, deve ser "catchers" (MAJORS, 2007). Esse
mtodo, que tem como vantagens ser rpido, fcil, econmico, efetivo, robusto e
seguro, explora as possibilidades oferecidas pela instrumentao analtica moderna.
Com o objetivo de atender aos rigorosos Limites Mximos de Resduos,
estabelecidos por legislaes internacionais, este mtodo foi idealizado para gerar
extratos
que
pudessem
ser
analisados
por
Cromatografia
Lquida
e/ou
Cromatografia Gasosa acopladas Espectrometria de Massas (GC-MS/MS e LC-
36
MS/MS) (ANASTASSIADES et al., 2003). A praticidade e os excelentes resultados

fornecidos pelo mtodo QuEChERS em combinao com estas tcnicas, ajudaram
na popularizao deste mtodo e dos seus conceitos. De acordo com o ISI Web of
Knowledge (2010), o artigo no qual este mtodo foi descrito pela primeira vez j
possui mais de 210 citaes.
2.6.1.1 Mtodo QuEChERS original
Durante o desenvolvimento do mtodo QuEChERS, Anastassiades et al.

(2003) revisaram as condies comumente utilizadas na anlise multirresduo de
agrotxicos e propuseram este novo mtodo de preparo de amostra, baseado nas
seguintes etapas: extrao com acetonitrila, seguida da partio, promovida pela
adio de sais (ex. sulfato de magnsio (MgSO4) e cloreto de sdio (NaCl). Um novo
mtodo de limpeza denominado Extrao em Fase Slida Dispersiva (Dispersive
Solid Phase Extraction, D-SPE) foi proposto juntamente com o mtodo QuEChERS.
Na Figura 1 A esto representadas as principais etapas do mtodo QuEChERS
original.
A utilizao de acetonitrila como solvente possibilita a extrao de uma menor
quantidade de co-extrativos lipoflicos provenientes da amostra, como por exemplo,
ceras, gorduras e pigmentos (MATOVSK & LEHOTAY, 2004). A acetonitrila
proporciona a extrao de uma ampla faixa de agrotxicos com diferentes
polaridades e, quando acidificada, permite recuperaes satisfatrias de agrotxicos
que geralmente apresentam problemas de estabilidade. Outra grande vantagem
que acetonitrila mais adequada para LC-MS/MS do que acetona e acetato de etila
e pode ser utilizada sem problemas na anlise por GC-MS/MS. Assim, acetonitrila foi
escolhida como solvente de extrao para o mtodo QuEChERS (ANASTASSIADES
et al., 2003; LEHOTAY et al., 2001).
37
EXTRAO
PARTIO
CLEAN-UP
(A)
QuEChERS
(original)
(B)
QuEChERS
(acetato)
(B)
QuEChERS
(citrato)
10 g amostra
+
10 mL acetonitrila
15 g amostra
+
15 mL acetonitrila
10 g amostra
+
10 mL acetonitrila
4 g MgSO4
+
1 g NaCl
6 g MgSO4
+
1,5 g CH3COONa
4 g MgSO4
+
1 g NaCl
+
1 g C6H5 Na3O7.2H2O
+
0,5 g C6H5 Na3O7.1,5H2O
1 mL sobrenadante
+
150 mg MgSO4
+
25 mg PSA
1 mL sobrenadante
+
150 mg MgSO4
+
50 mg PSA
1 mL sobrenadante
+
150 mg MgSO4
+
25 mg PSA
Anlise Cromatogrfica
Figura 1. Representao das etapas das principais verses do mtodo QuEChERS

(A) original, (B) acetato e (C) citrato.
38
A maioria dos mtodos multirresduo de preparo de amostra empregam

processadores, como o Ultraturrax, durante o procedimento de extrao. O
procedimento de agitao manual ou com auxlio do Vortex possui vrias vantagens
em relao agitao mecnica, tais como, possibilidade de realizar a extrao a
campo; a extrao ocorre em um nico frasco fechado no expondo o analista;
rapidez, uma vez que no h necessidade de lavagem do homogeneizador no
intervalo entre as extraes. Portanto, no mtodo QuEChERS a agitao pode ser
manual ou utilizando Vortex.
A adio de sais para promover o efeito salting out utilizada em vrios
mtodos multirresduo. Dependendo da natureza do solvente utilizado na etapa de
partio obtm-se melhores percentuais de recuperao para analitos polares, uma
vez que a adio de sais diminui a solubilidade destes compostos na fase aquosa,
bem como, a quantidade de gua na fase orgnica e vice-versa (GHIP, 1996;
STAHN, 2000; PIZZUTTI et al., 2007).
Nos mtodos multirresduo que utilizam acetona, a partio controlada
atravs de uma combinao de NaCl e solventes apolares, porm tm como
desvantagens a diluio do extrato e o consumo de um maior volume de solvente.
Os mtodos multirresduo que utilizam acetonitrila, desenvolvidos at ento, no
empregam adio de nenhum tipo de solvente apolar no processo de partio
(SCHENCK et al., 2008; KOESUKWIWAT, 2008). Na extrao com acetonitrila, a
adio de sais muito conveniente uma vez que rpida, fcil, apresenta baixo
custo, tem a grande vantagem de no diluir o extrato da amostra e proporciona a
separao das fases orgnica e aquosa.
A utilizao de sais secantes como sulfato de sdio (Na2SO4) tem a finalidade
de melhorar a recuperao de agrotxicos polares (ANDERSSON & PALSHEDEN,
1991). A escolha do MgSO4 no desenvolvimento do mtodo QuEChERS foi devido a
maior capacidade de remover gua quando comparado a outros sais. Alm de
reduzir o volume de fase aquosa, sua hidratao uma reao exotrmica, tendo
como resultado o aquecimento entre 40 e 45 C da amostra durante as etapas de
extrao/partio, favorecendo a extrao, especialmente dos compostos apolares
(ANASTASSIADES et al., 2003).
A etapa de limpeza essencial para promover robustez e confiabilidade aos
resultados obtidos pelo sistema cromatogrfico, uma vez que componentes novolteis da matriz podem ficar aderidos no sistema de injeo e tambm na coluna
39
cromatogrfica, alterando a resposta do sistema e aumentando a frequncia de

manutenes tcnicas no equipamento (SAITO et al., 2004; UENO et al., 2004).
Tradicionalmente a etapa de limpeza emprega SPE, a qual utiliza cartuchos
ou colunas que contm entre 250 e 1000 mg de sorvente (HYTYLINEN, 2008).
Esta tcnica envolve operao manual, uso de diferentes solventes para lavagem do
sorvente, etapas de evaporao e secagem. Muitos fatores afetam a preciso
quando se trabalha com SPE, entre eles o ajuste do sistema de vcuo e a vazo dos
solventes. Esta tcnica, quando automatizada, requer manuteno frequente, alm
dos
sistemas
hoje
disponveis
apresentarem
um
custo
considervel
(HYTYLINEN, 2003).
Ao contrrio dos mtodos j existentes para limpeza com SPE que utilizam
cartuchos ou colunas, a D-SPE permite que a limpeza e a reduo de gua residual
sejam efetuadas de uma forma rpida e simultnea (ANASTASSIADES et al., 2003).
Esta etapa de remoo de gua proporciona um extrato final de menor polaridade,
facilitando assim a precipitao de co-extrativos polares. O sorvente PSA (Primary
Secondary Amine) retm as interferncias da matriz, sendo que depois da agitao
manual e centrifugao o extrato est pronto para ser injetado no sistema
cromatogrfico (ANASTASSIADES et al., 2003). A estrutura bidentada do PSA tem
um elevado efeito quelante, devido presena dos grupos amino primrio e
secundrio. Como resultado, a reteno de cidos graxos livres e de outros
compostos polares presentes na matriz muito forte. Uma limpeza eficiente garante
uma maior vida til para insersores e colunas cromatogrficas, reduzindo assim a
contaminao do sistema cromatogrfico e minimizando o efeito matriz (MARTINEZVIDAL et al., 2006; SHIMELIS et al., 2007).
2.6.1.2 Modificaes do mtodo QuEChERS
Durante o desenvolvimento da primeira verso do mtodo QuEChERS (Figura

1 A), apenas 25 agrotxicos comumente analisados por GC-MS/MS foram avaliados
(ANASTASSIADES et al., 2003).
Apesar de a verso original ter demonstrado
excelentes resultados em diferentes tipos de amostras, (LEHOTAY et al., 2005a;

CVUA, 2006; PAY et al., 2007) algumas aplicaes mostraram que certos
compostos apresentavam problemas de estabilidade e/ou recuperao de acordo
40
com o pH da matriz (LEHOTAY et al., 2005ab; ANASTASSIADES et al., 2007)

Desta forma, durante o perodo de otimizao do mtodo, percebeu-se que a
utilizao de tampes (pH 5,0) promoviam recuperaes satisfatrias (>70%) para
compostos dependentes do pH (por ex.: pimetrozina, imazalil e tiabendazol),
independente da matriz utilizada (LEHOTAY, 2005b; ANASTASSIADES et al., 2007).
A adio de uma etapa de tamponamento foi a primeira modificao proposta
para o mtodo QuEChERS, com o objetivo de melhorar os percentuais de
recuperao (70-120%) (MAJORS, 2010). Lehotay et al. (2005b) desenvolveram o
mtodo QuEChERS-acetato (Figura 1 B), no qual o efeito tamponante (pH 4,8)
promovido pela adio de acetato de sdio. Este mtodo foi adotado em 2007 como
mtodo oficial da Association of Official Analytical Chemists (AOAC) para a
determinao
de
resduos
de
agrotxicos
em
alimentos
(AOAC,
2007)
Anastassiades et al. (2007) propuseram o mtodo QuEChERS-citrato (Figura 1 C),

este utiliza uma mistura de citrato de sdio di e sesquiidratados como responsveis
pelo efeito tamponante (pH 5,0-5,5). Em 2008, o European Committee for
Standarisation, oficializou o mtodo QuEChERS citrato como mtodo de referncia
na UE (CEN, 2008).
Outra modificao bastante relevante foi a adio do sorvente C18
(octadecilsilano), (LEHOTAY et al., 2005c) juntamente com PSA na etapa de D-SPE,
para promover uma limpeza mais efetiva de algumas matrizes, em especial aquelas
que contm gordura (CUNHA et al., 2007; LEHOTAY et al., 2006; LEHOTAY et al.,
2010a; LEHOTAY et al., 2010b; KOESUKIWIWT et al., 2010). A combinao do
mtodo QuEChERS com limpeza do extrato baixa temperatura, visando a reduo
dos co-extrativos lipdicos, tambm foi empregada com sucesso. Porm, a adio do
sorvente C18 na etapa de D-SPE mais rpida e fcil, e promove uma remoo
igualmente eficaz dos lipdios (LEHOTAY et al., 2010a).
Alm destas modificaes, a reduo do teor de clorofila nos co-extrativos
provenientes de amostras com pigmentao verde, foi outro avano efetuado na
etapa de limpeza, (ANASTASSIADES et al., 2003; ANASTASSIADES et al., 2007),
obtido atravs da adio de uma pequena quantidade de carbono grafitizado
(CUNHA et al., 2007; LEHOTAY et al., 2006, LEHOTAY et al., 2010a). Outra
modificao realizada na etapa de limpeza foi o uso de uma maior quantidade de
PSA na etapa de D-SPE em amostras de cereais como objetivo de remover, de
41
forma mais eficiente, os cidos graxos co-extrados (MARTNEZ-GALERA et al.,

2008).
2.6.1.3. Versatilidade e praticidade do mtodo QuEChERS
Ensaios de proficincia empregando este mtodo comprovaram sua robustez,

sendo o mtodo transferido com sucesso entre os laboratrios participantes
(MARTNEZ-GALERA et al., 2008).
As modificaes j realizadas no mtodo QuEChERS indicam um futuro
promissor na anlise multirresduo de agrotxicos em alimentos e outros produtos
agrcolas. Alm dos trabalhos citados, o mtodo tem sido empregado de forma
satisfatria quando aliado Espectrometria de Massas, porm no est limitado
somente a este tipo de detector.
Hernndez-Borges et al. (2009), utilizaram o mtodo QuEChERS e GC-NPD
para a determinao de 11 agrotxicos em banana, com valores de limite de
quantificao (LOQ) na faixa de 0,01 a 0,14 mg kg-1, percentuais de recuperao
entre 67 e 118% e RSD < 16%. O mtodo QuEChERS tambm foi utilizado na
extrao de 36 agrotxicos em amostras de mel, seguida da determinao por GCECD e GC-NPD. Obtiveram-se percentuais de recuperao entre 70 e 120% e RSD
< 22% (BARAKAT et al., 2007).
Os inseticidas diflubenzurona e triflumurona foram extrados de amostras de
tomate empregando-se o mtodo QuEChERS e determinados por LC acoplada a
sistema de fotoderivatizao ps-coluna com detector de quimioluminescncia. A
recuperao ficou entre 79,7 e 94,2%, com valores de RSD < 10%, valores de LOD
na faixa de 0,05 a 0,26 g kg-1 e valores de LOQ entre 10 e 20 g kg-1 (LEHOTAY,
2007).
42
2.6.1.4. Limitaes do mtodo QuEChERS
Nos
ltimos
anos,
mtodo
QuEChERS
iniciou
uma
verdadeira
transformao no preparo de amostra para anlise de resduos de agrotxicos em

alimentos, uma vez que suas caractersticas de simplicidade, rapidez, baixo custo,
entre outras, foram incorporadas em vrios laboratrios de rotina. Porm, ao ser
comparado com mtodos comumente utilizados para anlise de resduos de
agrotxicos em alimentos, observa-se que a relao entre a quantidade de
amostra:solvente (1 g mL-1) obtida no mtodo QuEChERS baixa se comparada
com os valores tpicos de 2 a 5 g mL-1 dos mtodos que utilizam solventes apolares
(HIEMSTRA & KOK, 2007). Portanto, se a matriz no uma fonte de rudos na etapa
de anlise isto pode conduzir, no mtodo QuEChERS, a valores de LOQ mais
elevados, para o mesmo volume de injeo. Entretanto, considerando a alta
detectabilidade das tcnicas cromatogrficas disponveis atualmente, principalmente
com GC-MS/MS e LC-MS/MS, o mtodo QuEChERS adequado para o preparo de
amostra visando o controle de resduos de agrotxicos em alimentos.
Alm disso, a acetonitrila um excelente solvente para os mtodos de
determinao que utilizam LC-MS/MS, mas no ideal para anlises empregando
GC-MS/MS. Porm, os avanos nos sistemas de injeo permitem a combinao
perfeita entre o mtodo QuEChERS e GC-MS/MS. Entre eles pode-se citar a injeo
de grandes volumes (Large Volume Injection - LVI), que permite a injeo de uma
maior quantidade de extrato e consequentemente de analitos, promovendo um
aumento significativo de detectabilidade. Outro avano bastante significativo nos
sistemas de injeo foi a possibilidade da realizao de programao de
temperatura de vaporizao (Programmed Temperature Vaporized, PTV) que
possibilita a obteno de uma melhor resposta cromatogrfica (FERNANDEZ-ALBA,
2005).
43
2.7 Tcnicas cromatogrficas acopladas Espectrometria de Massas para a

determinao de resduos e contaminantes em alimentos
2.7.1 Cromatografia Gasosa acoplada Espectrometria de Massas
Desde os anos 70 tm-se utilizado a tcnica de GC acoplada a sistemas

clssicos de deteco como, por exemplo, captura de eltrons (Electron Capture
Detection, ECD), nitrognio e fsforo (Nitrogen and Phosphorus Detection, NPD) e
fotometria de chama (Flame Photometric Detection, FPD) para a determinao de
resduos de agrotxicos (ROMERO-GONZALEZ et al., 2006; HERNNDEZBORGES et al., 2007). Porm, muitos agrotxicos que eram analisados por estes
detectores, esto sendo substitudos por outros compostos que possuem, em geral,
melhor ao e menor impacto ambiental, entretanto muitos quando analisados por
GC, no so detectados ao nvel de g kg-1 (ALDER et al., 2006).
Atualmente, a tcnica GC-MS utilizada com frequncia para determinao
multirresduo de agrotxicos em alimentos. A facilidade do acoplamento GC-MS,
alm da disponibilidade de um banco de espectros de massas padro obtidos no
modo de ionizao por impacto de eltrons (Electron Ionization, EI) ajudaram na
disseminao da tcnica GC-MS (LEANDRO et al., 2005; CHIARADIA et al., 2008).
GC-MS uma das principais ferramentas aplicadas em anlise de resduos
de agrotxicos por permitir que a confirmao e a determinao de um grande
nmero de compostos sejam feitas simultaneamente. Os baixos LOD obtidos so
consequncia da alta seletividade promovida pelo uso de diferentes modos como,
por exemplo, o modo SIM (Selective Ion Monitoring) que tem sido utilizado para
determinar resduos de agrotxicos em alimentos (FERNANDEZ-ALBA, 2005;
MERCER, 2005).
A ionizao dos agrotxicos em GC-MS pode ser realizada utilizando os
modos EI e ionizao qumica (Chemical Ionization, CI), positiva ou negativa. As
vantagens da utilizao do modo EI so a baixa influncia da estrutura molecular na
resposta e o grande nmero de fragmentos caractersticos que so gerados.
Entretanto, o modo CI positivo ou negativo proporciona uma melhor seletividade
para muitos agrotxicos quando comparado com o modo EI. O modo CI
preferencialmente utilizado para a determinao de organo-halogenados, piretrides
44
e organofosforados. Este modo menos utilizado em mtodos multirresduo, por

no ser uma tcnica de ionizao universal, alm de fornecer espectros contendo
um pequeno nmero de fragmentos, oferecendo menos informao qualitativa
(ALDER et al., 2006).
Na seletividade, porm, interferncias provenientes da matriz podem
influenciar o resultado, e a identificao dos analitos pode ficar comprometida.
Recentes avanos em MS propem um aumento da especificidade, a partir da
excluso dos ons dos interferentes da amostra. Uma maior seletividade tambm
observada quando se utiliza CI, entretanto, a informao relacionada estrutura dos
compostos que esto sendo analisados tambm diminuda (BEGUIN et al., 2006).
Os ons que so formados, tanto por EI como por CI, precisam ser separados
de acordo com suas razes m/z. H 4 classes de analisadores (filtros de massas),
que so utilizados para selecionar e filtrar os ons, sendo eles: rdio frequncia
(tanto quadrupolo quanto trapeamento de ons) (GARRIDO-FRENICH et al., 2005);
tempo de vo; transformada de Fourier e setor magntico, sendo que os mais
utilizados so a rdio frequncia e o tempo de vo (DIEZ et al., 2006).
O uso de GC acoplada Espectrometria de Massas em srie (Tandem Mass
Spectrometry, MS/MS) promove um aumento de seletividade em conjunto com uma
reduo do rudo, sem perder a capacidade de identificao, permitindo a anlise de
resduos de agrotxicos ao nvel de traos na presena de interferentes
provenientes da matriz. Esta tcnica particularmente utilizada na anlise de
amostras complexas, uma vez que permite a determinao de diferentes analitos
coeluentes (MARTINEZ-VIDAL et al., 2002). Nos ltimos anos, vrios avanos na
rea de instrumentao possibilitaram aos equipamentos um aumento de
detectabilidade, sendo possvel a identificao e quantificao de analitos em nveis
inferiores aos estabelecidos pelos LMR (FERNANDEZ-ALBA, 2005).
O grande desafio para os analistas no desenvolvimento de um mtodo
multirresduo a obteno de percentuais satisfatrios de recuperao dos analitos,
bem como, a minimizao das interferncias atravs da utilizao de mtodos de
extrao e limpeza apropriados. Nos ltimos anos, vrias foram as aplicaes e
modificaes realizadas no mtodo QuEChERS, a fim de alcanar este objetivo.
45
2.7.2 Cromatografia Lquida acoplada Espectrometria de Massas
No passado, os mtodos que utilizavam LC eram aplicados com menor

frequncia na anlise de resduos de agrotxicos, devido a uma menor seletividade
e detectabilidade apresentada pelos detectores utilizados como, por exemplo,
ultravioleta e arranjo de diodos, quando comparados aos mtodos de GC existentes
na poca (ALDER et al., 2006). Porm, o desenvolvimento de agrotxicos polares,
que apresentam em geral menor persistncia e toxicidade quando comparados com
os compostos apolares, exigiu a adequao dos mtodos de anlise existentes, uma
vez que a maioria destes novos compostos no apresenta uma boa resposta quando
analisados por GC (GARRIDO-FRENICH et al., 2004). A potencialidade do
acoplamento entre LC e MS j havia sido reconhecida h vrias dcadas, porm
incompatibilidades relacionadas vazo do eluente com relao velocidade de
bombeamento do sistema de vcuo e o projeto da fonte de ons do espectrmetro de
massas fez com que a utilizao desta tcnica em anlises de rotina ocorresse
recentemente (CHIARADIA et al., 2008). Este acoplamento oferece uma srie de
vantagens, dentre elas, elevada detectabilidade e seletividade (ALDER et al., 2006).
2.7.2.1 Fontes de ionizao utilizadas no acoplamento LC-MS
As fontes de ionizao, inicialmente investigadas para o acoplamento LC-MS,

foram baseadas no impacto eletrnico (EI) e na ionizao qumica (CI) empregadas
com
sucesso
no
acoplamento
GC-MS.
Entretanto,
devido
diferentes
caractersticas existentes entre as fases mveis empregadas nas duas tcnicas de

separao (GC e LC), este acoplamento mostrou-se inadequado para anlise de
compostos em baixas concentraes, alm de no apresentarem a robustez
necessria (LANAS, 2009).
Desde o desenvolvimento de fontes de ionizao que operam presso
atmosfrica (Atmospheric Pressure Ionization, API) como, por exemplo, a ionizao
por eletronebulizao (Electrospray Ionization, ESI) e a ionizao qumica presso
atmosfrica (Atmospheric Pressure Chemical Ionization, APCI), vrios instrumentos
robustos e confiveis esto disponveis (ALDER et al., 2006; CHIARADIA et al.,
2008).
46
2.7.2.1.1 Ionizao por eletronebulizao
A ionizao por eletronebulizaao (electrospray, ESI) permite a formao de

ons na presso atmosfrica. Neste processo, a amostra dissolvida, e pressurizada
em um tubo capilar de ao inox, ao qual aplicada uma voltagem tipicamente entre
3.000 e 5.000 V. Como resultado, o lquido emerge do capilar presso atmosfrica,
na forma de um aerossol. As gotculas formadas perdem sucessivamente o solvente
(so dessolvatadas) e os ons fluem para o espectrmetro de massas induzidos
pelos efeitos das atraes eletrostticas e pela presso reduzida. Neste processo,
apenas a ionizao ocorre presso atmosfrica, o espectrmetro de massas se
encontra sob vcuo (LANAS, 2009).
Os detalhes de como efetivamente ocorre o processo de eletronebulizao
ainda so motivos de muita discusso e controvrsia. Os dois mecanismos mais
aceitos para explicar o fenmeno so o proposto por Dole (1968), tambm
conhecido como mecanismo do resduo de carga ou da fisso, e o proposto por
Iribarne e Tomson (1976), conhecido como mecanismo da evaporao do on. De
acordo com Dole, medida que as gotculas evaporam, sua carga permanece
inalterada. Ainda de acordo com este mecanismo, como a tenso superficial das
gotculas incapaz de se opor s foras repulsivas resultantes da carga imposta,
estas explodem em inmeras gotculas menores, denominada exploso
coulmbica. Este processo continua at que apenas um on do analito permanea;
aps a evaporao da ltima gotcula do solvente, forma-se um on em fase gasosa
(LANAS, 2009). De acordo com o mecanismo proposto por Iribarne e Tomson,
pequenas gotculas tambm so formadas na exploso coulmbica, como proposto
por Dole. A diferena principal entre estes modelos que Iribarne e Tomson prope
que a partir da formao das gotculas, a fora de campo eltrico na superfcie
destas suficientemente elevada para remov-las da superfcie, transferindo
diretamente para a fase gasosa energeticamente mais favorvel para ons
solvatados (LANAS, 2009).
47
2.7.2.1.2 Ionizao qumica presso atmosfrica
A ionizao qumica a presso atmosfrica (atmospheric pressure chemical

ionization, APCI) uma tcnica apropriada para determinao de massas molares
menores do que 2000 unidades e da estrutura molecular. aplicada para anlise de
molculas inicas, polares e apolares, podendo ser usada no modo positivo (Positive
Chemical Ionization, PCI) e negativo (Negative Chemical Ionization, NCI) (PRIMER,
2004; FERNANDEZ-ALBA, 2005; NUEZ, 2005).
No modo APCI, o eluato do cromatgrafo a lquido vaporizado atravs de
um vaporizador aquecido (normalmente de 250 a 400 C), sob presso atmosfrica.
O aquecimento vaporiza o lquido e as molculas do solvente na fase gasosa so
ionizadas por uma descarga de eltrons a partir uma agulha condutora. Ento, os
ons do solvente transferem cargas para as molculas do analito atravs de reaes
qumicas (ionizao qumica). A APCI aplicada a uma larga faixa de molculas
polares e apolares. Devido a isso e ao fato de altas temperaturas estarem
envolvidas, a APCI menos utilizada do que o ESI para a anlise de biomolculas
grandes que podem ser termicamente instveis. APCI usada com cromatografia
em fase normal mais frequentemente do que o ESI, porque os analitos so
usualmente apolares (PRIMER, 2004; FERNANDEZ-ALBA, 2005; NUEZ, 2005).
2.7.2.1.3 Fotoionizaao a presso atmosfrica
A fotoionizaao a presso atmosfrica (Atmospheric Pressure Photoionization,

APPI) aplicada na anlise de compostos menos polares do que aqueles menos
ionizveis por APCI, podendo ser operada no modo positivo e negativo (PRIMER,
2004; FERNANDEZ-ALBA, 2005; NUEZ, 2005).
A APPI para LC-MS relativamente uma tcnica nova. Como a APCI, o
vaporizador converte o eluato do cromatgrafo a lquido em uma fase gasosa. A
descarga de uma lmpada gera ftons em uma faixa estreita de energia de
ionizao. A faixa de energia cuidadosamente escolhida para ionizar o maior
nmero possvel de molculas do analito, enquanto minimiza a ionizao das
molculas do solvente. Os ons resultantes passam atravs de um capilar de vidro
para dentro do analisador de massas. APPI aplicvel para anlise de muitos dos
48
compostos que so normalmente analisados por APCI. Tambm mostra uma

possibilidade particular para anlise de compostos no ionizados por APCI, como os
hidrocarbonetos poliaromticos. Uma fonte APPI um complemento til para as
tcnicas tradicionais de ionizao na LC-MS, para aquelas amostras que
apresentam pobre ou nenhuma ionizao, usando tcnicas tradicionais como ESI e
APCI. Em todos os casos, a natureza do analito e as condies de separao tm
uma forte influncia sobre qual tcnica de ionizao (ESI, APCI ou APPI) ir
promover os melhores resultados (PRIMER, 2004; FERNANDEZ-ALBA, 2005;
NUEZ, 2005).
2.7.2.2 Dissociao Induzida por Coliso (CID)
As tcnicas de ionizao sob presso atmosfrica (API) citadas at aqui so

todas chamadas de tcnicas brandas de ionizao, nas quais os espectros de
massas resultantes so geralmente o on molecular como os ons (M+H)+, (M-H)-, (M
+ NH4)+, a menos que tcnicas de fragmentao sejam aplicadas. A informao
resultante sobre a massa molar importante, mas informaes sobre a estrutura da
molcula so geralmente necessrias (PRIMER, 2004; FERNANDEZ-ALBA, 2005;
NUEZ, 2005).
Para obterem-se informaes sobre a estrutura, os ons dos analitos so
fragmentados atravs de colises com molculas neutras de um gs, num processo
conhecido dissociao induzida por coliso (Collision Induced Dissociation, CID).
Aplicam-se voltagens para se acelerar os ons dos analitos, assim com maior
energia, para a coliso com o gs, gerando mais fragmentos (PRIMER, 2004;
FERNANDEZ-ALBA, 2005; NUEZ, 2005).
Assim como ocorre com GC-MS/MS, a LC-MS/MS permite um aumento de
seletividade e detectabilidade proporcionando o monitoramento de centenas de
agrotxicos em uma nica anlise. LC-MS/MS tornou-se uma ferramenta
indispensvel em laboratrios que trabalham com anlise multirresduo de
agrotxicos e medicamentos veterinrios. Apesar do alto custo de aquisio e
manuteno destes equipamentos, apresentam uma srie de vantagens, entre elas
alta eficincia analtica, menor tempo no desenvolvimento de mtodos e elevada
robustez. Nos ltimos anos, vrios estudos e determinaes de resduos de
49
agrotxicos e medicamentos veterinrios, utilizando o mtodo QuEChERS e LCMS/MS, tm sido realizados em alimentos de origem animal.
2.8 Validao de Mtodos Analticos
Mtodos analticos tm sido desenvolvidos para a determinao de resduos

de contaminantes em alimentos como ferramenta principal para assegurar que os
produtos estejam enquadrados nas determinaes legais. Para que estes mtodos
garantam a disponibilidade de um alimento seguro, preciso que sejam
normalizadas e cumpram requisitos que garantam bons resultados. Com o objetivo
de assegurar a confiabilidade dos resultados obtidos, so delineados procedimentos
de validao do processo analtico empregado, como garantia da qualidade das
medies qumicas, atravs da sua comparabilidade, rastreabilidade e confiabilidade
(PASCHOAL et al., 2008).
Os laboratrios que realizam as anlises em alimentos precisam ter
capacidade tcnica comprovada para tal compromisso, a qual garantida pelas
normas de credenciamento estabelecidas por rgos responsveis, que no Brasil
so representados pela ANVISA (2010a) e pelo Instituto Nacional de Metrologia,
Normalizao e Qualidade Industrial (INMETRO, 2010) que disponibilizam guias
para procedimentos de validao de mtodos analticos (Resoluo ANVISA RE n
899, de 29/05/2003, (ANVISA, 2003a) e o documento INMETRO DOQ-CGCRE-008,
de 03/2003, (INMETRO, 2003). H ainda rgos internacionais, como Unio
Internacional de Qumica Pura e Aplicada (IUPAC, 2010) , Organizao Internacional
para Padronizao (ISO, 2010), Conferncia Internacional em Harmonizao (ICH,
2010), que tambm estabelecem procedimentos de validao como critrio
fundamental no credenciamento de laboratrios.
Atualmente, h vrios conceitos e definies, provenientes tanto de
pesquisadores (HILL & REINOLDS, 1999; LANAS, 2004) como de agncias e
normas reguladoras nacionais (INMETRO, 2003; ANVISA, 2010) e internacionais
(ISO, 2010; CODEX ALIMENTARIUS, 2001), que objetivam responder questes
como: qual a funo da validao de mtodos e de que maneira deve ser realizada.
Considerando-se as diversas e inmeras reas que necessitam gerar dados
confiveis, consenso que esses conceitos e definies no esto completa e
50
rigidamente estabelecidos, mas continuam a evoluir e aprimorarem-se, no sentido de

se efetuar a validao do mtodo de maneira que atenda os objetivos e as
necessidades para os quais o mtodo proposto (HILL & REINOLDS, 1999).
Ribani et al. (2004) apresentaram uma excelente reviso sobre validao de
mtodos como sendo um processo contnuo de avaliao dos mtodos, desde a
etapa de planejamento, passando pelo desenvolvimento e coleta de dados, at o
monitoramento constante da aplicao e transferncia deste.
O objetivo desse incessante cuidado nada mais do que garantir que os
dados gerados possuam a qualidade necessria, em termos de confiabilidade e
rastreabilidade, entre outros, para o fim que se prope. Caso no haja o
cumprimento desse objetivo, ou seja, caso no seja assegurada a qualidade dos
resultados analticos, raramente este fato ocorrer sem grandes consequncias.
Essas podem ser, desde a no acreditao do laboratrio pelos rgos competentes
at enormes prejuzos financeiros relacionados s barreiras alfandegrias que
podem ser impostas pelo comrcio exterior.
Assim,
deve-se
selecionar,
estudar
monitorar
constantemente
os
parmetros mnimos necessrios para garantir a interpretao inequvoca dos

resultados.
Alguns dos parmetros envolvidos no processo de validao de mtodos
analticos so: curva analtica, linearidade, exatido, preciso, limites de deteco e
de quantificao e seletividade.
2.8.1 Seletividade
Definida como a habilidade de um mtodo para a determinao do analito, de

forma exata, em presena de interferentes provenientes da matriz da amostra, a
seletividade um importante parmetro especialmente na anlise de amostras
complexas, como na determinao de resduos de agrotxicos em alimentos
(LANAS, 2004). Assim, tambm pode-se dizer que a seletividade a habilidade
dos mtodos de extrao, de purificao, de derivatizao, do sistema de separao
e deteco, em realizar a discriminao entre o analito de interesse e outros
compostos (SANCO, 2010). A seletividade garante que o sinal analtico seja
exclusivamente do composto de interesse. Se este parmetro no for assegurado, a
51
linearidade, exatido e a preciso estaro seriamente comprometidas (RIBANI et al.,

2004).
2.8.2 Linearidade e Curva Analtica
A linearidade de um mtodo analtico pode ser definida como sendo a

habilidade deste mtodo em gerar resultados diretamente proporcionais
concentrao do analito, em uma determinada faixa de concentrao (INMETRO,
2003; RIBANI et al., 2004).
Na prtica, a linearidade determina atravs das chamadas curvas analticas,
que so grficos de calibrao que relacionam a resposta do equipamento em
funo das diferentes concentraes do analito (LANAS, 2004).
Para a maioria das tcnicas cromatogrficas, observa-se uma relao linear
de primeira ordem entre a resposta instrumental medida (eixo y) (varivel
dependente) e a concentrao do analito (eixo x) (varivel independente). Essa
relao produz uma equao de regresso linear y = ax + b, que relaciona as duas
variveis x e y e gera os coeficientes de regresso a (inclinao da curva) e b
(interseo da curva analtica com o eixo y, quando x = 0). Essa equao vlida
para um intervalo determinado de concentrao do analito, independente da tcnica
instrumental utilizada. Tambm possvel calcular o coeficiente de correlao r, que
pode ser utilizado para estimar a qualidade da curva analtica, uma vez que
demonstra uma menor variao dos dados obtidos quanto mais prximo de 1 for o
valor de r (RIBANI et al., 2004). Valores de r iguais ou superiores a 0,99 e 0,90, so
recomendados, respectivamente, pela ANVISA (2003b) e pelo INMETRO (2003). J
os valores do coeficiente de determinao r2 so tidos como satisfatrios a partir de
0,98 (CHASIN et al., 1998).
A faixa linear de um mtodo de ensaio o intervalo entre os nveis inferior e
superior de concentrao do analito no qual foi demonstrado ser possvel a
determinao com preciso, exatido e linearidade exigidas, sob as condies
especficas do ensaio. A faixa linear definida como sendo a faixa de concentrao
na qual a detectabilidade pode ser considerada constante e normalmente expressa
nas mesmas unidades do resultado obtido pelo mtodo analtico (INMETRO, 2003).
52
2.8.3 Limite de Deteco (LOD) e de Quantificao (LOQ)
O LOD representa a menor concentrao do analito que pode ser detectada,

e o LOQ expressam a menor concentrao do analito que pode ser quantificada, ao
empregar-se um determinado procedimento experimental (RIBANI et al., 2004). So
geralmente expressos em unidades de concentrao (CHASIN et al., 1998).
H vrias maneiras de se calcular o LOD, como atravs do mtodo visual,
mtodo da relao sinal/rudo e aquele baseado em parmetros da curva analtica.
Nesse estudo, a maneira utilizada para a obteno da estimativa do LOD e do
LOQ, tanto do instrumento como do mtodo, est descrita no item 3.7.3.
2.8.4 Exatido
uma medida da concordncia existente entre os dados obtidos em uma

determinada medida e um valor de referncia assumido como sendo o verdadeiro
(RIBANI et al., 2004).
A exatido representa a existncia de erros sistemticos, e um dos critrios
mais importantes para o julgamento do desempenho de um mtodo analtico.
Na indisponibilidade de material de referncia certificado, a exatido pode ser
avaliada
atravs
dos
ensaios
de
fortificao
recuperao
(CODEX
ALIMENTARIUS, 2001) (geralmente expressa em percentual), podendo ser

calculada pela Equao 1.
R%
C1 C2
x 100
C3
onde:
C1 = Concentrao determinada na amostra fortificada;
C2 = Concentrao determinada na amostra no fortificada;
C3 = Concentrao usada para fortificao.
Equao 1
53
Em geral, so aceitos intervalos de recuperao entre 70 e 120%, com

preciso de at 20% para a maioria dos mtodos analticos, inclusive para anlise
de resduos de agrotxicos (SANCO, 2010).
2.8.5 Preciso
o termo geral utilizado para avaliar a disperso dos resultados de ensaios

independentes, repetidos de uma mesma amostra, amostras semelhantes ou
solues analticas de referncia, analisadas em condies definidas (INMETRO,
2004).
A preciso pode ser numericamente expressa em termos de estimativa do
desvio padro relativo (RSD) (Equao 2).
RSD %
s
x 100
xm
Equao 2
onde:
s = estimativa do desvio padro absoluto = {(xi xm)2 / N 1} ;
xi = valores individuais; xm = mdia das medidas em replicatas;
N = nmero de medidas.
Para mtodos empregados em determinaes ao nvel de traos, valores de

RSD% de at 20% so aceitveis (HUBER, 1998).
A preciso pode ser determinada em termos de repetitividade, preciso
intermediria e reprodutibilidade.
54
3 MATERIAIS E MTODOS
O desenvolvimento experimental deste trabalho consistiu na otimizao e
validao do Mtodo QuEChERS para a extrao simultnea de resduos de
agrotxicos e medicamentos veterinrios em alimentos de origem animal (carne,
fgado, rim, leite e ovos) e posterior quantificao por LC-MS/MS.
Este trabalho foi realizado no Laboratrio de Anlises de Resduos de
Agrotxicos (LARP) do Departamento de Qumica da Universidade Federal de Santa
Maria (UFSM).
3.1 Instrumentao
Os equipamentos utilizados no desenvolvimento deste trabalho esto
descritos abaixo:
Agitador Vortex - Biomixer Modelo QL-901 (Microtcnica, Brasil);
Balana analtica de preciso AND, modelo SV-200 (Japo);
Centrfuga Thermo Fisher Scientific, modelo IEC CENTRA CL2 (Waltham,
MA, USA);
Micropipetadores automticos com capacidade varivel (Brand, Alemanha e
Eppendorf, Canad);
Processador de Alimentos VariMix (Targo, Espanha);
Sistema de purificao de gua Milli-Q Direct UV3 (Millipore, Bedford, MA,
USA).
Sistema LC-MS/MS: Cromatgrafo a Lquido Varian 320-MS, equipado com:
Detector MS, 320-MS TQ Mass Spectrometer com fonte API, utilizando
o modo de ionizao por eletronebulizao (Varian, EUA);
Amostrador automtico ProStar 410, bomba quaternria 212-LC, forno
para coluna e sistema de desgaseificao (Varian, EUA);
Coluna analtica Pursuit XRS C18, (100 x 2,0 mm d.i) e 2,8 m de
tamanho de partcula (Varian, EUA)
Sistema de aquisio de dados atravs do Software MS Workstation
Version 6.0 (Varian, EUA);
Sistema gerador de nitrognio da marca Domnick Hunter LC/MS 12/2.
55
3.2 Reagentes, solventes e materiais utilizados

Acetato de sdio anidro p.a. (J.T. Baker, Estados Unidos);
Acetonitrila grau HPLC (Mallinckrodt, NJ, USA);
cido actico glacial 96% (Merck, RJ, Brasil);
gua ultrapura, purificada em sistema Milli-Q Direct UV3 (resistividade de
18,2 M cm);
Citrato de sdio diidratado (Sigma Aldrich, Estados Unidos);
Cloreto de sdio p.a. (Merck, Brasil);
Extran neutro (Merck, Brasil);
Formiato de Amnio (Sigma Aldrich, Estados Unidos);
Frascos de vidro (vial), capacidade de 2,0 mL;
Gs argnio 6.0 usado como gs de coliso no sistema LC-MS/MS (White
Martins, Brasil);
Hidrogenocitrato de sdio sesquiidratado (Sigma Aldrich, Estados Unidos);
Metanol grau HPLC (Mallinckrodt, NJ, USA);
Padres slidos dos agrotxicos, conforme Tabela 2.
Sorvente C18 com tamanho de partculas de 40 m (Varian, Estados Unidos);
Sorvente PSA com tamanho de partculas de 40 m (Varian, Estados Unidos);
Sulfato de magnsio anidro (J.T. Baker, Japo);
Tubos de polipropileno, com tampas rosqueadas, capacidade de 50 e 15 mL
(Sarstedt, Alemanha);
Vidrarias comum de laboratrio;
3.3 Processamento das amostras

As amostras branco das matrizes avaliadas neste estudo foram adquiridas
em supermercados de Santa Maria e processadas conforme descrito abaixo:
a) carne, fgado e rim: pores de 500 g foram processadas at completa

homogeneizao, com auxlio do processador VariMix, e a seguir foram
acondicionadas em freezer (abaixo de 4 C), at sua utilizao.
56
b) ovo: as amostras de ovo (sem a casca), aps homogeneizao com o

processador VariMix, foram imediatamente submetidas ao processo de extrao.
c) leite: no foi realizada nenhuma etapa prvia de processamento.
3.4 Preparo das solues analticas
A Tabela 2 apresenta o nome, grau de pureza, classe, grupo qumico e LMR

dos padres analticos slidos utilizados para o desenvolvimento deste trabalho.
Para o preparo das solues analticas estoques, efetuou-se o clculo para
determinar a quantidade de cada padro slido a ser pesado, para se obterem-se
solues individuais de cada composto, na concentrao de 1000 g mL-1.
Prepararam-se individualmente, 10 mL da soluo estoque 1000 mg L -1 de
cada pesticida e medicamento veterinrio, considerando a pureza dos padres
slidos. A massa do padro slido pesado foi dissolvida em metanol grau HPLC e as
solues estoque foram armazenadas em frascos mbar a temperatura menor que 4 C.
Aps, foram preparadas solues analticas individuais de cada composto em
estudo, na concentrao de 100 mg L-1, em metanol. A partir destas solues,
preparou-se uma mistura na concentrao 5 mg L-1 contendo todos os compostos.
57
Tabela 2 - Informaes dos padres analticos slidos de agrotxicos e medicamentos

veterinrios utilizados
LMR (g kg-1)
n0
Pesticida
Pureza
(%)
Classe
Grupo Qumico
MAPA
cido
ariloxialcanico
cido
ariloxialcanico
2,4 D
99,0
2,4,5 T
98,5
3-OH carbofurano
98,6
Carbamato
atrazina
99,0
Triazina
azinfos etilico
97,7
Organofosforado
azinfos metilico
99,0
Organofosforado
azoxistrobina
99,0
Estrobirulina
bentazona
97,0
Benzotiadiazinona
bispiribaque
99,0
cido
pirimidiniloxibenzoico
10
bitertanol
98,5
Triazol
11
boscalida
99,5
Carbaxamida
12
bromoconazole
99,0
Triazol
13
buprofezina
99,0
Tiadizinona
14
carbaril
98,5
Carbamato
15
carbendazina
99,0
Benzimidazol
16
carbofurano
98,5
Carbamato
17
carboxim
99,9
Anilida
18
cianizina
99,0
Clorotriazina
19
clomazone
98,5
Triazina
20
cloranfenicol
98,5
Aminopropanodiol
21
clorimurom
97,0
Sulfoniluria
22
clorpirifos etilico
99,5
Organofosforado
23
clorpirifos metlico
97,0
Organofosforado
24
clorprofam
99,5
Carbanilato
25
deltametrina
99,0
Piretride
500(G)/
30(R)(F)
26
diazinona
99,0
Organofosforado
10(M)(L)/
30(R)(F)
CODEX
10(O)
20(M)/50(L)
40(M)/20(L)
50(O)
10(O)
20(L)/3000(R)
1000(F)
50(O)
100(M)(L)
0,3(O)
10(M)(L)
10(O)
10(M)(L)
50(O)
200(L)
50(F)(R)/
30(M)(L)/
500(G)/30(F)/
20(O)/50(L)
2000(G)/
30(F)/20(O)/
10
58
27
diclofluanida
99,0
Sulfamida
28
difenoconazole
99,0
Triazol
29
dimetoato
98,0
Organofosforado
30
epoxiconazole
99,0
Triazol
31
etiona
96,5
Organofosforado
32
fempropatrina
99,5
Piretride
10(O)
33
fempropimorfe
94,5
Morfolina
50(50)/300(F)
34
fenarimol
97,5
Pirimidina
35
fentiona
97,0
Organofosforado
36
fipronil
96,5
Pirazol
37
fluquiconazole
98,5
Triazol
38
fluroxipir
96,5
Piridina
39
flutalonil
99,0
Carboxamida
40
imazalil
97,5
Imidazol
41
imidacloprido
98,0
Neonicotinoide
42
iprovalicarbe
97,5
Carbamato
43
linurom
99,4
reia
44
malationa
99,0
Organofosforado
45
mecarbam
98,0
Organofosforado
46
mepronil
99,0
Carboxamida
47
meticonazole
99,0
Triazol
48
metalaxil
99,5
Fenilamida
49
metamidofos
98,5
Organofosforado
50
metiocarbe sulfona
99,0
Carbamato
51
metiocarbe sulfoxido
95,0
Carbamato
52
metsulfurom metilico
99,0
Sulfoniluria
53
mevinfos
92,0
Organofosforado
54
miclobutanil
98,5
Triazol
55
monensina
98,0
Ionforo
56
monocrotofos
97,5
Organofosforado
57
monolinurom
99,0
Uria
58
oxamil
97,0
Carbamato
59
Paraoxon etlico
99,0
Organofosforado
60
pendimetalina
98,0
Dinitroanilina
61
piraclostrobina
97,5
Metoxicarbamato
50(L)
50(O)
10(O)
20(O)
100(R)/200(F)
50(O)
20(O)
20(M)/10(L)
20(M)/50(L)
10(F)
50(M)(L)
20(O)
50(O)
59
62
pirazofos
97,0
Organofosforado
63
piridaben
99,0
Organoclorado
64
piridafetiona
97,5
Organofosforado
65
piridato
96,5
Piridazina
66
pirimetanil
99,0
Anilinopirimidina
67
pirimicarbe
98,5
Carbamato
68
pirimifos metilico
99,0
Organofosforado
69
procloraz
97,0
Imidazol
70
profenofos
98,0
Ac
Organofosforado
71
profoxidim
97,5
Oxima
72
propargito
96,0
ster sulfito
73
propiconazole
99,0
Triazol
74
propizamida
99,5
Benzimidazol
75
propoxur
99,0
Carbamato
76
quinclorac
97,6
An
cido
Quinolinocarboxil
77
quinoxifeno
99,0
Quinolina
78
robenidina
95,0
Guanidina
79
salbutamol
99,0
Betagonista
80
salinomicina
98,0
Ionforo
81
simazina
98,5
Clorotriazina
82
sulfadimetoxina
97,5
Sulfonamida
83
sulfametazina
99,0
Sulfonamida
84
sulfatiazol
99,5
Sulfonamida
85
tebuconazole
98,8
Triazol
86
terbufos
94,0
Organofosforado
87
terbutilazina
99,0
Clorotriazina
88
tetraconazole
98,5
Triazol
89
tiacloprido
98,0
Neonicotinide
90
tiametoxam
98,0
Neonicotinide
91
tiodicarbe
99,5
Carbamato oxima
92
Tolclofos metlico
99,5
Hidrocarboneto
aromtico
93
triadimefom
99,5
Triazol
94
triadimenol
98,0
Triazol
95
triazofos
97,0
Organofosforado
10(O)
10(M)/50(L)
10(0)
100(O)
20(O)
10(O)
50(M)(L)
10(O) 50(O)
10(O)
5(F)/0,1(U)
100(F)(O)(L)
100(F)(L)
100(F)(O)(L)
30(L)
10(O)
10(O)
10(O)
60
96
triclorfom
97,0
Organofosforado
97
trifloxistrobina
99,0
Oximinoacetato
98
triflumizole
98,5
Imidazol
99
trimetroprima
99,5
Pirimidina
98,0
Organofosforado
100 vamidationa
40(R)/50(F)
40(O)
*Todos os padres slidos foram adquidiridos da empresa Dr. Ehrenstorfer

A (Antibitico); Ac (Acaricida); An (Anticoccidiano) (H) Herbicida; (I) Inseticida; (F) Fungicida;
F(Fgado); G(Gordura); L(Leite); M(Msculo); O(Ovo); R(Rim)
A partir da mistura 5,0 mg L-1, foram preparadas as solues de trabalho nas

concentraes de 2,0; 10,0; 20,0; 50,0; 100,0; 200,0; 400,0 e 500,0 g L-1 em
acetonitrila e nos extratos das matrizes avaliadas (carne, fgado, rim, leite e ovo).
Para injeo no sistema LC-MS/MS, foram realizadas diluies na proporo 1:1
(v/v) destas solues em fase mvel (soluo 5 mmol L-1 de formiato de amnio e
metanol), de modo que as concentraes finais das solues de trabalho avaliadas
foram 1,0; 5,0; 10,0; 25,0; 50,0; 100,0, 200,0 e 250,0 g L-1. Estas solues de
trabalho foram utilizadas para o estudo da linearidade do mtodo. Todas as solues
foram armazenadas em frascos mbar e estocadas abaixo de - 4 C.
3.5 Otimizao do sistema cromatogrfico LC-MS/MS para determinao

simultnea de resduos de agrotxicos e medicamentos veterinrios em
amostras de origem animal
Neste trabalho, as anlises foram realizadas empregando a Cromatografia

Lquida acoplada Espectrometria de Massas em Srie (LC-MS/MS). Este sistema
apresenta maior detectabilidade e seletividade em relao aos sistemas acoplados a
detectores convencionais. Alm disso, LC-MS/MS possibilita eliminar interferncias
espectrais e minimizar o problema de co-eluio de substncias encontradas, sendo
o detector de massas uma ferramenta analtica essencial para anlise e confirmao
dos analitos de interesse em nveis de traos. A seguir, esto descritos os principais
parmetros do sistema cromatogrfico LC-MS/MS que foram otimizados para a
determinao dos compostos em estudo.
61
3.5.1 Escolha da fase mvel

A escolha da fase mvel foi realizada atravs de informaes obtidas por
meio de reviso bibliogrfica sobre o assunto (PIZZUTTI, et al. 2007). Neste
trabalho, a fase mvel empregada foi soluo 5 mmol L-1 de formiato de amnio
(solvente A) e metanol (solvente B) Tabela 3, em uma programao linear.
Tabela 3. Gradiente utilizado para eluio dos compostos
Gradiente 1
Tempo (min)
%A
%B
0,00
75
25
2,00
75
25
15,00
95
20,00
95
25,00
75
25
30,00
75
25
-1
% A: Soluao 5 mmol L de formiato de amnio

% B: metanol
3.5.2 Condies do sistema de deteco
A fim de obterem as condies timas de anlise de cada um dos compostos

em estudo, foram realizadas injees diretas no espectrmetro de massas, com
soluo analtica padro 1,0 mg L-1 de cada composto individualmente. A partir das
infuses foi selecionado o modo de ionizao da fonte (eletrobulizaao positiva e/ou
eletronebulizaao negativa), voltagem do capilar, energias de coliso para
fragmentar o on precursor e gerar ons produtos, temperatura da fonte, temperatura
e presso do gs de dessolvatao para secagem do solvente.
Aps a escolha destas condies, foram selecionados os ons a serem
monitorados para quantificao e qualificao dos compostos estudados.
62
3.6 Otimizao do mtodo QuEChERS para anlise simultnea de agrotxicos

e medicamentos veterinrios em amostras de origem animal
Devido complexidade das amostras em estudo (carne, fgado, rim, leite e

ovo) e tambm aos baixos nveis de concentrao em que estes compostos podem
ser encontrados, o preparo de amostra se torna uma importante etapa da anlise
para a obteno de resultados confiveis.
Neste trabalho foram realizadas modificaes no mtodo QuEChERS original,
proposto por ANASTASSIADES et al. (2003). Para isto, foram realizados alguns
ensaios para obterem os melhores percentuais de extrao dos compostos em
estudo.
3.6.1 Ensaio 1
Para avaliar a eficincia da extrao do mtodo QuEChERS acetato (Figura
2), pesaram-se 15,0 0,1 g de amostra, diretamente em tubo de polipropileno
(capacidade 50 mL) com tampa rosqueada. Realizaram-se fortificaes (n=6) no
nvel 25,0 g kg-1, contendo os agrotxicos e os medicamentos veterinrios em
estudo. Aps o tempo de contato de 30 min, adicionaram-se, 15 mL de acetonitrila
(1% HAc) e realizou-se agitao manual e vigorosa por cerca de 1 min. Em seguida,
acrescentaram-se 6,0 g de sulfato de magnsio anidro, 1,5 g de acetato de sdio,
seguido de agitao manual por 1 min e centrifugao a 3500 rpm por 8 min.
Posteriormente, transferiram-se 4 mL do sobrenadante para outro tubo de
polipropileno (capacidade de 15 mL), contendo 600 mg de sulfato de magnsio
anidro e 200 mg de PSA, sendo novamente agitados manualmente por 1 min, e
centrifugados como citado anteriormente. Aps, o sobrenadante foi retirado e
colocado em vial com capacidade para 2 mL, seguido de anlise por LC-MS/MS.
63
EXTRA O
PARTI O
CLEAN-UP
15 g amostra
+
15 mL acetonitrila
Agitao manual 1 min
6 g MgSO4
+
1,5 g CH3COONa
1 mL sobrenadante
+
150 mg MgSO4
+
50 mg PSA
Agitao manual 1 min

Centrifugao
(8 min 3500 rpm)
Agitao manual 1 min

Centrifugao
(8 min 3500 rpm)
Anlise
Cromatogrfica
Figura 2. Representao esquemtica do ensaio 1 (mtodo QuEChERS acetato)

para anlise de resduos de agrotxicos e medicamentos veterinrios em amostras
de origem animal.
3.6.2 Ensaio 2
No ensaio 2, buscou-se avaliar o mtodo QuEChERS citrato (Figura 3).
Pesou-se 10,0 0,1 g de amostra, diretamente em tubo de polipropileno
(capacidade 50 mL) com tampa rosqueada. Realizaram-se fortificaes (n=6) no
nvel 25,0 g kg-1, contendo os agrotxicos e os medicamentos veterinrios em
estudo. Aps o tempo de contato de 30 min, adicionaram-se, 10 mL de acetonitrila
contendo 1% (v/v) de cido actico e realizou-se agitao manual e vigorosa por
cerca de 1 min. Em seguida, acrescentaram-se 4,0 g de sulfato de magnsio anidro,
1,0 g de cloreto de sdio, 1 g de citrato de sdio diidratado e 0,5 g de
hidrogenocitrato sesquiidrato de sdio, seguido de agitao manual por 1 min e
centrifugao a 3500 rpm por 8 min. Transferiram-se 4 mL do sobrenadante para
64
outro tubo com capacidade de 15 mL, contendo 600 mg de sulfato de magnsio

anidro e 100 mg de C18, sendo novamente agitados manualmente por 1 min, e
centrifugados como citado anteriormente. Aps, o sobrenadante foi retirado e
colocado em vial com capacidade para 2 mL, seguido de anlise por LC-MS/MS.
EXTRA O
10 g amostra
+
10 mL acetonitrila
Agitao manual 1 min
PARTI O
CLEAN-UP
4 g MgSO4
+
1 g NaCl
+
1 g C6H5 Na3O7.2H2O
+
0,5 g C6H5 Na3O7.1,5H2O
1 mL sobrenadante
+
150 mg MgSO4
+
25 mg PSA
Anlise
Cromatogrfica
Agitao manual 1 min

Centrifugao
(8 min 3500 rpm)
Agitao manual 1 min

Centrifugao
(8 min 3500 rpm)
Figura 3. Representao esquemtica do ensaio 2 (mtodo QuEChERS citrato)

de origem animal.
3.6.3 Ensaio 3
No ensaio 3, avaliaram-se os percentuais de recuperao obtidos atravs da
utilizao do mtodo QuEChERS modificado (Figura 4). Desta maneira, pesaram-se
10,0 0,1 g de amostra, diretamente em tubos de polipropileno com tampa
rosqueada (capacidade de 50 mL). Realizaram-se fortificaes (n=6) no nvel 25,0
65
g kg-1, contendo os compostos estudados. Adicionaram-se, 10 mL de acetonitrila

contendo 1% (v/v) de cido actico e realizou-se agitao manual e vigorosa por
cerca de 1 min. Em seguida, acrescentaram-se 4,0 g de sulfato de magnsio anidro
e 1,7 g de acetato de sdio anidro, seguido de agitao manual por 1 min e
centrifugao a 3500 rpm por 8 min. Na sequncia, transferiram-se 4 mL do extrato
lquido para outro tubo de polipropileno (capacidade de 15 mL), contendo 600 mg
de sulfato de magnsio anidro e 500 mg de C18, sendo novamente agitados
manualmente por 1 min, e centrifugados como citado anteriormente. Aps, o
sobrenadante foi retirado e colocado em vial com capacidade para 2 mL, seguido
de anlise por LC-MS/MS.
EXTRA O
PARTI O
CLEAN-UP
10 g amostra
+
10 mL acetonitrila
Agitao manual 1 min
4 g MgSO4
+
1,7 g CH3COONa
1 mL sobrenadante
+
150 mg MgSO4
+
125 mg C18
Anlise
Cromatogrfica
Agitao manual 1 min

Centrifugao
(8 min 3500 rpm)
Agitao manual 1 min

Centrifugao
(8 min 3500 rpm)
Figura 4. Representao esquemtica do ensaio 3 (mtodo QuEChERS modificado)

de origem animal.
66
3.7 Validao do mtodo QuEChERS modificado para anlise de agrotxicos e

medicamentos veterinrios em alimentos de origem animal.
Neste trabalho os parmetros utilizados para a validao do mtodo analtico

foram: seletividade, curva analtica, linearidade, limite de deteco, limite de
quantificao, exatido (recuperao) e preciso (repetitividade e preciso
intermediria) (SANCO, 2010; INMETRO, 2010; ANVISA, 2010).
3.7.1 Seletividade
A seletividade foi avaliada por comparao dos cromatogramas obtidos por

injees no sistema LC-MS/MS de extratos de amostras branco e fortificadas. Este
ensaio teve por objetivo avaliar a ocorrncia de co-eluio de interferentes da matriz
e dos analitos de interesse.
3.7.2 Determinao da Linearidade das Curvas Analticas

Avaliou-se a linearidade das curvas analticas a partir das solues analticas
preparadas no item 3.3, tanto em solvente, quanto nos extratos da matriz, nas
concentraes de 1,0; 5,0; 10,0; 25,0; 50,0; 100,0; 200,0 e 250,0 g L-1.
Posteriormente, realizaram-se os clculos da mdia das reas, do RSD (%),
da equao da curva analtica bem como do coeficiente de determinao (r 2), e da
faixa de linearidade, para cada composto analisado por LC-MS/MS.
3.7.3 Determinao da Estimativa do LOD e LOQ do Instrumento e do Mtodo
A partir da avaliao dos dados de linearidade das curvas analticas, de cada

um dos compostos estudados, procedeu-se determinao da estimativa do LOD
do instrumento (LODi) e do mtodo (LODm), bem como do LOQ do instrumento
(LOQi) e do mtodo (LOQm) (PIZZUTTI, 2007).
67
A partir, das reas e do RSD% (6 rplicas), de cada composto, presente nas

oito solues analticas estudadas, aplicando-se a Equao 1, obteve-se a
estimativa do LODi, em g L-1.
LODi (g mL-1) = 3 x RSD x C
(1)
onde:
RSD: Desvio padro relativo das reas obtidas;
C: Concentrao da soluo analtica.
Multiplicando-se o valor estimado do LODi pelo fator de concentrao ou

diluio do mtodo de extrao (fator = 1), obtm-se a estimativa do LODm, em g
kg-1.
A partir do LODi, aplicando-se a Equao 2, obtm-se o LOQi.

LOQi (g mL-1) = LODi x 3,33
(2)
Multiplicando-se o LOQi, pelo fator de concentrao ou diluio do mtodo de

extrao, obtm-se o LOQm estimado. Mas, se considera o valor verdadeiro do
LOQm (em g kg-1), como sendo a menor concentrao que, ao ser fortificada na
matriz, apresentar recuperaes entre 70 e 120%, com RSD% menor ou igual a
20%.
3.7.4 Ensaios de fortificao utilizando o Mtodo QuEChERS modificado para

avaliao da exatido
Neste trabalho, para o estudo da exatido do mtodo, foram utilizados

ensaios de fortificao, avaliando-se, dessa maneira, a recuperao dos compostos
em estudo. Foram realizadas fortificaes das amostras branco em trs nveis de
concentrao 10; 25 e 50 g kg-1 para carne, fgado, rim e ovo e 10; 25 e 50 g L-1
para leite.
A exatido expressa em percentagem e foi calculada conforme a Equao 3
(INMETRO, 2007):
68
R (%)
C1 C 2
100
C3
(3)
Onde:
C1 = Concentrao determinada na amostra fortificada;
C2 = Concentrao determinada na amostra no fortificada;
C3 = Concentrao usada para fortificao.
O procedimento de extrao das amostras fortificadas foi realizado utilizando
amostras branco, isto , livre da presena dos agrotxicos e medicamentos
veterinrios em estudo.
Inicialmente, para o procedimento de extrao do mtodo QuEChERS
modificado, pesaram-se 10,0 0,1 g de amostra diretamente em tubos de
polipropileno, com tampa rosqueada (capacidade de 50 mL). Logo aps, efetuou-se
a fortificao em 3 nveis, nas concentraes de 10; 25 e 50 g kg-1. O tempo de
contato entre a amostra e os analitos foi de 30 min. Aps, adicionaram-se, 10 mL de
acetonitrila contendo 1% (v/v) de cido actico, efetuou-se agitao manual e
vigorosa por 1 min. Decorrido este tempo, acrescentaram-se 4,0 g sulfato de
magnsio anidro e 1,7 g de acetato de sdio. Novamente, efetuou-se agitao
manual e vigorosa por 1 min e posterior etapa de centrifugao a 3500 rpm, durante
8 min.
Durante a etapa de limpeza dispersivo, transferiu-se 4 mL do sobrenadante
para outro tubo de polipropileno (capacidade de 15 mL), contendo 600 mg de sulfato
de magnsio anidro e 500 mg de C18, sendo novamente agitados manualmente por
1 min, e centrifugados como citado anteriormente. Aps, em vial com capacidade
para 2 mL, realizou-se uma diluio na proporo 1:1 (v/v) do extrato final na fase
mvel, no qual foram adicionados 0,5 mL do extrato obtido aps o limpeza
dispersivo e 0,5 mL de fase mvel (soluo 5 mmol L-1 de formiato de amnio e
metanol), seguido de anlise por LC-MS/MS.
69
3.7.5 Preciso (repetitividade e preciso intermediria)

A preciso pode ser avaliada atravs de um valor numrico (RSD) que
calculado atravs da Equao 4.
RSD (%)
s
100
xm
(4)
Onde:
s = estimativa de desvio padro absoluto;
s = {(xi xm)2/ N- 1}1/2 ;
xi = valores individuais;
xm = mdia das medidas em replicatas;
n = nmero de medidas.
Neste trabalho, o estudo da preciso do instrumento foi realizado efetuandose trs injees de cada concentrao das solues analticas preparadas no extrato
da matriz, no sistema LC-MS/MS.
A preciso do mtodo, em termos de repetitividade (RSDr) foi efetuada
procedendo-se a extrao e anlise das amostras fortificadas. Foram realizadas seis
extraes de cada nvel de fortificao e cada um dos extratos foi injetado uma vez.
A preciso intermediria (RSDpi) do mtodo foi avaliada utilizando dias
diferentes para a injeo dos padres dos agrotxicos e das amostras fortificadas.
3.7.6 Avaliao do Efeito Matriz
Para a avaliao da existncia do efeito matriz dos extratos obtidos, realizouse a comparao entre as reas obtidas das solues analticas (25,0; 10,0 e 5,0 g
L-1) em solvente (acetonitrila) e daquelas obtidas com solues analticas
preparadas nos extratos de carne, fgado, rim, leite e ovos. O clculo foi efetuado
atravs da Equao 5 (PIZZUTTI, 2007).
EfeitoMatr iz %
X1 X 2
x 100
X2
(5)
70
onde:
X1= Mdia das reas da soluo analtica de cada composto avaliado, preparado no
extrato da matriz, numa dada concentrao;
X2= Mdia das reas da soluo analtica de cada composto avaliado, preparada em
solvente, numa dada concentrao.
Assim, verifica se a matriz exerce efeito positivo (aumento de sinal) ou

negativo (decrscimo de sinal) sobre o resultado da anlise. Quando o resultado for
acima de 10% considera-se que o efeito matriz comea a exercer influncia nas
anlises.
3.8 Aplicao do mtodo
O mtodo desenvolvido e validado foi aplicado para a determinao de

resduos dos agrotxicos e medicamentos veterinrios
em amostras de carne,
fgado, rim, leite e ovo adquiridos em supermercados da regio de Santa Maria-RS

no perodo de janeiro e fevereiro de 2011.
71
4 RESULTADOS E DISCUSSES
4.1 Otimizao do sistema cromatogrfico LC-MS/MS para determinao de

agrotxicos e medicamentos veterinrios em alimentos de origem animal
A Tabela 4 apresenta as condies empregadas no sistema cromatogrfico

LC-MS/MS para determinao dos agrotxicos e medicamentos veterinrios
avaliados neste estudo.
Tabela 4. Condies empregadas no sistema cromatogrfico LC-MS/MS
Parmetros
LC-MS/MS
Coluna analtica
Pursuit XRS C18 (100 x 2,0 mm d.i, 2,4 m)
Fase mvel
Formiato de Amnio 5 mmol L-1 (A) e Metanol (B)

75% (A) e 25% (B) de 0 a 2 min; alterando at 5% (A) e
95% (B) em 15 min (permanecendo at 20 min);
Gradiente de eluio
alternando at atingir 75% (A) e 25% (B) em 25 min

(permanecendo at 30 min).
Vazo
0,15 mL min-1
Volume de injeo
3 L
Fonte de ionizao
ESI
Detector
Espectrmetro de massas, do tipo Triplo Quadrupolo,
% A: formiato de amnio 5 mmol L
operando no modo MS/MS

-1
% B: metanol
A anlise cromatogrfica dos 100 compostos avaliados por LC-MS/MS foi

realizada em cerca de 23 min, sendo necessrio mais 7,0 min para o reequilbrio da
coluna s condies iniciais do gradiente, resultando em um tempo total de anlise
de 30 min.
72
4.2 Condies de Anlise por LC-MS/MS
A partir da realizao das infuses, de cada um dos compostos, foram

determinadas quais as melhores condies de fragmentao dos ons monitorados
utilizando a fonte de ionizao na temperatura de 50 C, a temperatura do gs de
dessolvatao (N2) foi de 250 C, a presso do gs de dessolvatao foi de 40 psi, e
a presso do gs de secagem foi de 20 psi.
A fonte de ionizao API foi empregada com interface ESI, devido
moderada polaridade da maioria dos analitos. ESI a interface mais indicada para
compostos neutros ou polares, que podem ser protonados ou desprotonados em
condies apropriadas de pH. Na ESI ocorre a produo de ons do analito na fase
lquida, a transformao destes em ons gasosos, que em seguida so introduzidos
no espectrmetro de massas (FERNNDEZ-ALBA, 2005).
A Tabela 5 apresenta os agrotxicos e medicamentos veterinrios analisados
por LC-MS/MS, usando modo de ionizao ESI+ e ESI-, modo de aquisio MRM,
os ons precursores e ons produtos, energia de coliso as transies monitoradas e
tempo de reteno dos compostos estudados.
Para cada composto, quando possvel, foram selecionadas duas transies
caractersticas, como apresentado na Tabela 5. A transio mais intensa (mais
estvel) foi utilizada para a quantificao dos compostos e a segunda transio mais
intensa para a confirmao dos mesmos.
A Figura 5 apresenta os cromatogramas de ons totais obtidos por LC-MS/MS
para solues analticas (25 g L-1) preparadas no solvente (acetonitrila) e nas
matrizes avaliadas (carne, fgado, rim, leite e ovo) contendo os 100 agrotxicos e os
medicamentos veterinrios. A Figura 6 apresenta um cromatograma obtido por LCMS/MS modo MRM (contendo as transies de quantificao), para solues
analticas (25 g L-1) preparada no extrato branco de leite.
73
Tabela 5. Agrotxicos e medicamentos veterinrios quantificados por LC-MS/MS modo ESI (+/-) e
modo de aquisio MRM, tempo de reteno, ons precursores, ons produtos e energia de coliso
para as duas transies monitoradas
a
10,75-13,50 min
9,4 -10,7 min
5,5 9,4 min
0,0 5,5 min
1 Transio
Quantificao
n0
tR
(min)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
2,581
3,533
3,610
4,384
6,186
6,260
6,627
6,997
7,146
10
11
12
13
7,328
7,393
7,782
7,928
14
15
16
17
18
19
8,091
8,274
8,521
8,702
8,872
8,916
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
8,962
9,616
9,848
9,903
9,956
11,079
11,136
11,406
11,681
11,746
11,853
12,242
12,252
12,300
Compostos
metamidofos
sulfatiazol
salbutamol
oxamil
tiametoxam
sulfametazina
monocrotofos
quinclorac
bentazona
metsulfurom
metilico
fluroxipir
imidacloprido
sulfadimetoxina
metiocarbe
sulfoxido
trimetroprima
vamidationa
3-OH
Carbofuran
triclorfom
dimetoato
metiocarbe
sulfona
tiacloprido
mevinfos
cloranfenicol
carbendazina
2,4 D
cianizina
clorimurom
propoxur
carbofurano
simazina
carboxim
carbaril
tiodicarbe
2 Transio
Confirmao
on
Produto
(m/z)
Energia
de
Coliso
(eV)
142,0
256,0
240,0
237,0
292,0
279,0
224,0
242,0
239,0
124,8
91,9
222,0
89,9
181,0
155,9
126,9
160,9
196,6
12,5
23,0
7,0
5,0
19,5
17,0
13,5
37,0
19,0
12,0
11,5
14,0
17,5
382,0
252,8
256,1
311,0
198,9
232,6
175,0
107,9
19,5
6,0
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258,0
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198,9
8,5
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15,5
8,5
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288,0
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201,0
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220,8
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11,0
19,5
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125,8
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202,0
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252,9
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192,0
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210,0
222,0
202,0
236,0
202,0
355,0
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on
Coliso
Precursor
(eV)
(m/z)
15,85-18,35 min
13,50-15,85 min
74
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
12,651
12,675
12,762
12,885
12,915
13,241
13,242
13,273
13,824
13,834
13,968
14,425
14,467
14,548
14,599
14,600
14,681
14,826
14,841
14,852
14,880
14,983
14,986
15,012
15,156
15,163
15,184
15,227
15,279
15,296
15,357
15,381
15,466
15,656
16,248
16,270
16,295
16,373
16,396
16,425
16,426
16,612
16,639
16,682
16,781
monolinurom
2,4,5 T
bispiribaque
pirimicarbe
paraoxon
pendimetalina
atrazina
metalaxil
azinfos metilico
azoxistrobina
clomazone
linurom
boscalida
terbutilazina
flutalonil
pirimetanil
malationa
mepronil
triadimefom
piridafetiona
miclobutanil
propizamida
clorprofam
triazofos
diclofluanida
iprovalicarbe
fluquiconazole
triadimenol
azinfos etilico
tetraconazole
fenarimol
mecarbam
epoxiconazole
fipronil
imazalil
tebuconazole
bromoconazole
fentiona
diazinona
propiconazole
piraclostrobina
bitertanol
procloraz
metaconazole
pirazofos
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
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+
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+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
215,0
252,8
453,0
239,0
293,0
216,0
216,0
280,0
318,0
404,0
240,0
249,1
343,0
230,0
324,2
200,0
331,0
270,0
294,0
341,0
289,1
255,9
214,0
314,0
350,0
321,0
376,0
296,0
346,0
372,0
331,0
330,0
330,0
435,0
297,0
308,0
378,0
279,0
305,1
342,0
388,0
338,0
376,0
320,1
374,0
125,8
160,6
296,6
182,0
219,9
174,0
173,9
220,0
131,9
372,0
124,9
159,9
306,9
174,0
261,9
106,9
126,9
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189,0
69,9
189,9
171,9
162,0
223,8
203,0
306,8
69,9
131,9
158,9
267,9
226,9
120,9
329,7
158,9
69,9
158,9
246,9
169,0
158,9
194,0
269,1
307,8
69,9
222,0
15,0
11,5
17
12,5
16,0
15,5
13,5
12,0
11,0
14,5
18,0
16,0
17,5
12,0
16,5
21,0
9,0
15,0
12,0
20,0
11,5
10,5
6,0
16,0
14,0
8,0
24,0
5,5
12,0
24,0
22,5
7,0
17,5
15,5
17,5
14,0
23,5
11,5
17,5
25,5
9,0
8,0
11,0
15,5
19,0
215,0
147,9
12,0
453,0
179,0
18,5
293,0
216,0
216,0
280,0
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343,0
230,0
324,2
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103,8
103,8
248,0
160,0
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181,9
270,9
131,9
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24,5
9,0
5,0
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13,5
30,5
20,5
23,0
331,0
270,0
294,0
341,0
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314,0
350,0
321,0
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197,0
204,9
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172,9
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118,9
332,8
118,9
348,9
227,1
160,0
8,0
20,5
14,5
20,0
25,0
18,0
14,0
32,0
7,5
14,0
18,5
9,0
5,5
331,0
330,0
330,0
435,0
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279,0
305,1
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388,0
338,0
376,0
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122,9
249,6
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124,9
160,9
169,0
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163,0
251,0
265,8
124,9
194,0
24,5
13,0
12,5
26,5
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23,5
14,5
17,0
14,0
22,0
9,5
16,5
31,5
30,0
18,35-30 min
75
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
10
0
16,830
16,885
16,923
16,933
17,021
17,030
17,272
17,298
17,660
17,960
18,012
18,104
18,652
18,704
18,706
18,833
19,303
19,872
20,304
20,802
21,646
21,794
pirimifos metilico
tolclofos
difenoconazole
trifloxistrobina
profoxidim
robenidina
clorpirifos
metlico
triflumizole
profenofos
buprofezina
terbufos
etiona
clorpirifos etilico
quinoxifeno
propargito
fempropatrina
deltametrina
piridaben
monesina
piridato
salinomicina
fempropimorfe
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
306,0
300,9
406,0
409,0
466,0
334,0
322,0
346,0
375,0
306,0
288,9
384,9
349,9
308,0
368,0
367,2
523,0
365,0
693,5
379,2
773,5
304,6
164,0
268,7
250,9
186,0
280,0
154,9
124,8
278,0
304,7
201,0
102,9
198,9
197,8
196,9
231,1
124,9
280,8
309,0
461,0
206,9
431,2
147,0
19,5
15,5
24,0
14,0
14,0
17,0
15,0
10,5
19,5
9,5
5,0
7,0
16,0
29,0
9,5
12,5
15,0
11,5
45,0
14,0
45,0
24,5
300,9
406,0
409,0
466,0
334,0
322,0
346,0
375,0
306,0
288,9
384,9
349,9
308,0
368,0
367,2
523,0
365,0
693,5
379,2
773,5
304,6
124,8
336,9
206,0
238,0
137,9
289,7
220,2
346,7
115,9
232,9
170,9
321,7
271,9
175,1
350,7
505,9
147,0
675,5
351,0
531,7
129,9
13,5
15,5
11,0
17,5
22,0
14,5
13,5
12,0
14,0
5,0
13,0
10,5
24,5
12,0
7,0
9,0
21,0
28,5
8,5
40,5
20,5
76
Figura 5 - Cromatogramas de ons totais obtidos por LC-MS/MS a partir de soluo analtica (25 g L-1) preparada em A)
acetonitrila e nos extratos branco, obtidos pelo mtodo QuEChERS modificado, em B) carne, C) fgado, D) rim, E) leite e F) ovo.
77
Figura 6 - Cromatograma obtido por LC-MS/MS modo MRM obtido para uma soluo analtica (25 g L-1) preparado em extrato
de leite branco. Em destaque a visualizaao dos sinais individuais de alguns compostos com as respectivas transies de
quantificao.
78
Observa-se que vrios compostos co-eluram, pois obtiveram tempos de

reteno muito semelhantes, a deteco de agrotxicos e/ou demais analitos em
misturas ou em amostras mais complexas, pode ser um problema para a LC, quando
a resoluo dos cromatogramas no est adequada, com detectores tradicionais,
como por exemplo, detector UV ou at mesmo detector DAD, os quais no so
especficos suficientes quando as diferenas espectrais so pequenas, prejudicando
a quantificao (FERNNDEZ-ALBA, 2005; PIC et al., 2004).
Entretanto, o emprego de LC-MS/MS pode contornar estes problemas de
separao cromatogrfica, pois o detector de massas em srie operando no modo
MRM altamente seletivo para os analitos da mistura (FERNNDEZ-ALBA, 2005;
PIC et al., 2004).
4.3 Mtodo otimizado de extrao QuEChERS modificado
4.3.1 Avaliao dos procedimentos de extrao

Para avaliar os trs procedimentos de extrao realizados neste estudo,
utilizaram-se amostras branco de carne, fgado, rim, leite e ovo fortificadas na
concentrao de 25,0 g kg-1. A praticidade de execuo do mtodo QuEChERS
pode ser observada na Figura 7. Os resultados destes ensaios de extrao descritos
no item 3.6, esto apresentados na Tabela 6. A partir destes testes preliminares,
avaliaram-se quais dos mtodos de extrao apresentaram as melhores
recuperaes para os compostos em estudo.
LIMPEZA
PARTIO
EXTRAO
79
Antes
limpeza
Depois
limpeza
ANLISE CROMATOGRFICA
Figura 7. Representao da praticidade de operao do mtodo QuEChERS.
80
Tabela 6. Percentual de compostos que apresentaram recuperaes mdias (70120%) e RSD ( 20%) obtidos para os trs ensaios de extrao.
Mtodo
% Compostos
QuEChERS acetato
75
QuEChERS citrato
69
QuEChERS modificado
85
A partir destes resultados preliminares, optou-se pela validao do mtodo de

extrao QuEChERS modificado.
4.4 Mtodo de extrao QuEChERS otimizado

A partir dos testes anteriormente apresentados, obteve-se o procedimento de
extrao otimizado, utilizado para a validao do mtodo proposto e para a sua
aplicao na determinao de resduos de agrotxicos e medicamentos veterinrios
em amostras de origem animal (carne, fgado, rim, leite e ovo).
O procedimento de extrao otimizado est descrito no item 3.6.3. O mtodo
envolve uma etapa de extrao com acetonitrila, seguida de uma etapa de partio
com os sais sulfato de magnsio e acetato de sdio. A etapa de clean-up dispersivo
realizada com C18 e sulfato de magnsio.
Durante a etapa de validao do mtodo QuEChERS modificado utilizado
neste estudo, amostras branco de carne, fgado, rim e ovo foram fortificadas em
trs nveis (10; 25 e 50 g kg-1). A amostra branco de leite foi fortificada em trs
nveis (10; 25 e 50 g L-1).
A Figura 8 demonstra todas as etapas do mtodo de extrao otimizado
(QuEChERS modificado) .
81
4.5 Validao do Mtodo QuEChERS modificado

Todas as solues analticas empregadas neste estudo foram preparadas em
solvente (acetonitrila) e nos extratos das matrizes (Mtodo QuEChERS modificado),
assim foi possvel avaliar o efeito da presena do extrato da matriz na determinao
dos valores de LOD e LOQ (instrumento e mtodo), da linearidade das curvas
analticas (faixa linear, equao da curva e coeficiente de determinao), uma vez
que o efeito matriz pode influenciar nos resultados, dependendo dos compostos e da
tcnica cromatogrfica empregada. Sendo assim, foi realizada a validao do
mtodo QuEChERS modificado para a anlise dos agrotxicos e medicamentos
veterinrios, segundo os parmetros descritos a seguir.
10 g amostra
EXTRA O
Fortificao
10, 25 e 50 (g kg-1)
Amostras Branco
10 mL acetonitrila
(1% HAc)
Agitao manual por 1 min
PARTI O
CLEAN-UP
4 g MgSO4
+
1,7 g CH3COONa
4 mL sobrenadante
+
600 mg MgSO4
+
500 mg C18
Anlise
LC-MS/MS
Agitao manual por 1 min e

centrifugao (3500 rpm 8 min)
Agitao manual por 1 min e

centrifugao (3500 rpm 4 min)
Figura 8. Representao do mtodo QuEChERS modificado utilizado para extrao dos

agrotxicos e medicamentos veterinrios nas amostras de carne, fgado, rim, leite e ovo.
82
4.5.1 Seletividade
A anlise por LC-MS/MS considerada altamente seletiva. A seletividade do
mtodo foi assegurada pela ausncia de interferentes com mesmos ons de
quantificao e identificao no tempo de reteno dos analitos avaliados em
amostras branco de cada uma das matrizes avaliadas neste estudo.
4.5.2 Curva analtica e linearidade

A Tabela 7 apresenta os valores de coeficiente de determinao (r2) para as
equaes das curvas analticas em solvente (acetonitrila) e nos extratos das
matrizes de carne, fgado, rim, leite e ovo para os agrotxicos e medicamentos
veterinrios estudados.
Tabela 7. Coeficientes de determinaao (r2) das curvas analticas, obtidos para os
agrotxicos e medicamentos veterinrios analisados por LC-MS/MS, a partir das
solues de 1,0; 5,0: 10,0; 25,0; 50,0; 100,0; 200,0 e 250,0 g L-1.
n0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
Compostos
2,4 D
2,4,5 T
3-OH Carbofuran
atrazina
azinfos etilico
azinfos metilico
azoxistrobina
bentazona
bispiribaque
bitertanol
boscalida
bromoconazole
buprofezina
carbaril
carbendazina
carbofurano
carboxim
Coeficiente de determinao (r2)

Matriz
Solvente
carne fgado
rim
leite
ovo
0,9981 0,9970 0,9996 0,9980 0,9992 0,9979
0,9930 0,9991 0,9986 0,9990 0,9988 0,9973
0,9981 0,9991 0,9953 0,9963 0,9985 0,9985
0,9995 0,9975 0,9985 0,9955 0,9983 0,9986
0,9959 0,9969 0,9953 1,0000 0,9993 0,9965
0,9989 0,9977 0,9977 0,9987 0,9987 0,9945
0,9963 0,9992 0,9986 0,9980 0,9992 0,9995
0,9978 1,0000 0,9952 0,9984 0,9939 0,9987
0,9960 0,9962 0,9970 0,9949 1,0000 0,9973
0,9935 0,9990 0,9993 0,9992 0,9988 0,9976
0,9924 0,9970 0,9993 0,9941 1,0000 0,9905
0,9967 0,9997 0,9989 0,9997 0,9988 0,9973
0,9978 0,9999 0,9912 0,9999 1,0000 0,9972
0,9994 0,9970 0,9982 0,9966 0,9950 0,9980
0,9968 0,9995 0,9956 0,9968 0,9984 0,9966
0,9959 0,9994 0,9945 0,9985 0,9915 0,9996
0,9973 0,9989 0,9934 0,9978 0,9991 0,9986
83
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
cianizina
clomazone
cloranfenicol
clorimurom
clorpirifos etilico
clorpirifos metil
clorprofam
deltametrina
diazinona
diclofluanida
difenoconazole
dimetoato
epoxiconazole
etiona
fempropatrina
fempropimorfe
fenarimol
fentiona
fipronil
fluquiconazole
fluroxipir
flutalonil
imazalil
imidacloprido
iprovalicarbe
linurom
malationa
mecarbam
mepronil
metaconazole
metalaxil
metamidofos
metiocarbe sulfona
mevinfos
miclobutanil
monesina
monocrotofos
monolinurom
oxamil
paraoxon
pendimetalina
piraclostrobina
pirazofos
0,9984
0,9955
0,9933
0,9930
0,9895
0,9912
0,9907
0,9957
0,9958
0,9974
0,9953
0,9981
0,9982
0,9980
0,9988
0,9989
0,9983
0,9997
0,9963
0,9954
0,9904
0,9978
0,9973
0,9957
0,9958
0,9948
0,9982
0,9970
0,9915
0,9985
0,9977
0,9962
0,9984
0,9995
0,9916
0,9966
0,9973
0,9956
0,9989
0,9959
0,9951
0,9974
0,9972
0,9957
0,9977
0,9949
0,9992
0,9981
0,9983
0,9910
0,9952
0,9948
0,9981
0,9983
0,9985
0,9975
0,9981
0,9921
0,9993
0,9989
0,9912
0,9982
0,9956
0,9975
0,9984
0,9988
0,9979
0,9966
0,9988
0,9998
0,9984
0,9935
0,9987
0,9980
0,9973
0,9964
1,0000
1,0000
1,0000
0,9977
0,9994
0,9945
0,9993
0,9992
0,9929
0,9983
0,9987
0,9913
0,9992
0,9949
0,9932
0,9945
0,9987
0,9992
0,9973
0,9976
0,9905
0,9973
0,9972
0,9973
0,9976
0,9905
0,9973
0,9972
0,9967
0,9987
0,9954
0,9932
0,9978
0,9914
0,9943
0,9919
0,9971
0,9920
0,9945
0,9987
0,9993
0,9978
0,9930
0,9910
0,9946
0,9989
0,9981
0,9993
0,9953
0,9958
0,9949
0,9953
0,9997
0,9958
0,9994
0,9940
0,9988
0,9914
0,9989
0,9974
0,9960
0,9960
0,9984
0,9910
0,9952
0,9933
0,9981
0,9983
0,9993
0,9975
0,9990
0,9953
0,9993
0,9989
0,9912
1,0000
0,9956
0,9975
0,9967
0,9920
0,9960
0,9966
0,9953
0,9994
0,9971
0,9983
1,0000
0,9948
0,9949
0,9986
0,9982
0,9942
0,9985
0,9995
0,9986
0,9988
0,9953
0,9992
0,9998
0,9956
0,9992
0,9977
0,9992
0,9916
0,9964
0,9981
1,0000
0,9954
0,9994
0,9981
0,9995
0,9952
0,9944
0,9949
0,9992
0,9994
0,9984
0,9989
0,9970
0,9970
0,9991
0,9929
0,9962
0,9988
0,9913
0,9975
0,9964
0,9971
0,9970
0,9992
0,9992
0,9970
0,9984
0,9979
0,9987
0,9999
0,9935
0,9980
0,9997
0,9982
0,9945
0,9978
0,9948
0,9989
0,9998
0,9985
0,9950
0,9984
0,9960
0,9953
0,9985
0,9953
0,9990
0,9986
0,9976
0,9962
0,9971
0,9987
0,9968
0,9989
0,9993
0,9973
0,9976
0,9905
0,9973
0,9972
0,9973
0,9977
0,9986
0,9952
0,9970
0,9993
0,9972
0,9983
0,9981
0,9990
0,9994
0,9959
0,9953
0,9972
0,9984
0,9975
0,9973
0,9987
0,9985
0,9967
0,9984
0,9981
0,9986
0,9998
0,9968
0,9976
0,9978
0,9971
84
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
piridaben
piridafetiona
piridato
pirimetanil
pirimicarbe
pirimifos metilico
procloraz
profenofos
profoxidim
propargito
propiconazole
propizamida
propoxur
quinclorac
quinoxifeno
robenidina
salbutamol
salinomicina
simazina
sulfadimetoxina
sulfametazina
sulfatiazol
tebuconazole
terbufos
terbutilazina
tetraconazole
tiacloprido
tiametoxam
tidicarbe
tolclofos
triadimefom
triadimenol
triazofos
triclorfom
trifloxistrobina
triflumizole
trimetroprima
vamidationa
0,9926
0,9983
0,9973
0,9962
0,9921
0,9905
0,9988
0,9932
0,9986
0,9982
0,9977
0,9981
0,9929
0,9959
0,9949
0,9971
0,9982
0,9959
0,9972
0,9947
0,9919
0,9972
0,9900
0,9977
0,9960
0,9974
0,9951
0,9969
0,9949
0,9989
0,9947
0,9968
0,9966
0,9928
0,9968
0,9979
0,9902
0,9981
-1
0,9953
0,9997
0,9958
0,9994
0,9988
0,9916
0,9992
0,9996
0,9989
0,9986
0,9980
0,9978
0,9992
0,9939
0,9946
0,9945
0,9992
0,9974
0,9984
0,9984
0,9987
0,9984
0,9912
0,9975
0,9987
0,9931
0,9954
0,9993
0,9986
0,9991
0,9982
0,9960
0,9989
0,9964
0,9921
0,9993
0,9950
0,9915
0,9999
1,0000
0,9967
0,9979
0,9923
0,9950
0,9976
1,0000
0,9974
0,9970
0,9994
0,9958
0,9986
0,9982
0,9985
0,9992
0,9986
0,9980
0,9992
0,9995
0,9991
0,9964
0,9981
1,0000
0,9954
0,9994
0,9981
0,9995
0,8952
0,9944
0,9949
0,9992
0,9985
0,9950
0,9984
0,9960
0,9976
0,9954
0,9993
0,9973
0,9958
0,9987
0,9974
0,9991
0,9973
0,9996
0,9989
0,9986
0,9980
0,9923
0,9955
0,9953
0,9946
0,9921
0,9996
0,9974
0,9997
1,0000
0,9979
0,9984
0,9912
0,9975
0,9951
1,0000
0,9969
0,9959
0,9952
0,9990
0,9974
0,9015
0,9991
0,9955
0,9945
0,9993
1,0000
0,9969
*Faixa linear: 1,0 250,0 g L (para todos os compostos avaliados)
0,9931
0,9897
0,9982
0,9971
0,9975
0,9955
0,9997
0,9912
0,9956
0,9980
0,9992
0,9983
0,9992
0,9973
0,9949
0,9921
0,9916
0,9990
0,9991
0,9975
0,9945
0,9989
0,9952
0,9993
0,9996
0,9999
0,9975
0,9993
0,9910
0,9986
0,9946
0,9989
0,9981
0,9993
0,9953
0,9958
0,9974
0,9912
0,9986
0,9979
0,9972
0,9983
0,9954
0,9996
0,9984
0,9979
0,9938
0,9970
0,9929
0,9967
0,9974
0,9935
0,9982
0,9955
0,9664
0,9950
0,9962
0,9950
0,9953
0,9992
0,9987
0,9951
0,9984
0,9991
0,9991
0,9945
0,9995
0,9955
0,9952
0,9908
0,9979
0,9961
0,9980
0,9985
0,9970
0,9984
85
Atravs dos dados obtidos para a construo das curvas analticas, e anlise
das equaes das retas obtidas no LC-MS/MS possvel concluir que o modelo de
regresso linear adequado para as determinaes analticas em estudo. Os
agrotxicos e medicamentos veterinrios presentes nas solues analticas
apresentaram r2 de no mnimo de 0,99, sendo que mais de 75% de todas as
solues apresentaram este parmetro acima de 0,995. Desta forma, este
parmetro esta de acordo com as orientaes da ANVISA e do INMETRO. Todos os
compostos analisados apresentaram faixa linear entre 1,0 250,0 g L-1.
4.5.3 Determinao da estimativa do LOD e LOQ, do instrumento e do mtodo
Para a determinao da estimativa dos valores de LOD e LOQ (instrumento e

mtodo) utilizaram-se os valores de rea obtidos atravs das 6 injees, que foram
realizadas para obteno das curvas analticas no solvente (acetonitrila) e no extrato
de cada uma das matrizes avaliadas (carne, fgado, rim, leite e ovo).
Os valores calculados dos LOD e LOQ estimados, tanto para o instrumento
quanto para o mtodo, foram calculados conforme o item 3.7.3. As solues
preparadas respectivamente em acetonitrila e nos extratos das matrizes foram
analisadas por LC-MS/MS modo ESI (+/-), conforme descrito no item, 3.4.1 e 3.4.2.
Avaliando os resultados observa-se que todos os compostos foram detectados na
faixa de concentrao entre 1,0 g L-1 e 250 g L-1, tanto nas solues preparadas
em acetonitrila como naquelas preparadas nos extratos das matrizes. Desta forma
os valores estimados de LODi e LOQi para todos os compostos foram de 1,0 g L-1 e
3,3 g L-1, respectivamente. Estes valores foram estimados tantos nas solues
preparadas no solvente, como nos extratos obtidos a partir das matrizes avaliadas
(carne, fgado, rim, leite e ovo).
O LODm e o LOQm foram avaliados conforme descrito no item 3.7.3. O
mtodo desenvolvido no apresenta fator de diluio e/ou concentrao, sendo
assim, todos os compostos apresentaram valores estimados de LODm e LOQm de
1,0 g kg-1 e 3,3 g kg-1, para carne, fgado, rim, ovo e 1,0 g L-1 e 3,3 g L-1 para
leite.
86
4.5.4 Ensaio de fortificao para avaliao da exatido do mtodo

As Tabelas 8, 9, 10, 11 e 12 apresentam os resultados das recuperaes
mdias (n=6) percentuais, o RSD% e o LOQm para os 91 agrotxicos e 9
medicamentos veterinrios que foram fortificados em carne, fgado, rim e ovo, nos
nveis de 10, 25 e 50 g kg-1 e leite (10, 25 e 50 g L-1), extrados pelo mtodo
QuEChERS modificado.
Os valores de recuperao foram calculados utilizando-se as curvas analticas
preparadas nos extratos da matriz, de acordo com o mtodo de extrao utilizado.
Neste
trabalho,
seguiu-se
recomendao
de
validao
de
mtodos
cromatogrficos, na qual as recuperaes devem estar entre 70 e 120% (RIBANI et

al., 2004; SANCO, 2010).
O valor do LOQm (em g kg-1 e/ou g L-1), foi determinado como sendo a
menor concentrao que, ao ser fortificada na matriz, apresentou recuperaes
entre 70 e 120%, com RSD% menor ou igual a 20% (PIZZUTTI et al., 2007)
87
Tabela 8. Percentuais de recuperao e RSD para a repetitividade do mtodo de extrao

de agrotxicos e medicamentos veterinrios em carne
Compostos
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
2,4 D
2,4,5 T
3-OH Carbofuran
atrazina
azinfos etilico
azinfos metilico
azoxistrobina
bentazona
bispiribaque
bitertanol
boscalida
bromoconazole
buprofezina
carbaril
carbendazina
carbofurano
carboxim
cianizina
clomazone
cloranfenicol
clorimurom
clorpirifos etilico
clorpirifos metil
clorprofam
deltametrina
diazinona
diclofluanida
difenoconazole
dimetoato
epoxiconazole
etiona
fempropatrina
fempropimorfe
fenarimol
fentiona
fipronil
fluquiconazole
fluroxipir
flutalonil
imazalil
Nveis de Fortificao (g kg-1)

10
25
50
rec (%) RSD (%) rec (%) RSD (%) rec (%) RSD (%)
48,0
19,4
25,2
19,0
39,1
10,7
101,3
11,3
71,7
11,9
70,1
8,1
98,8
13,7
92,1
4,9
93,8
9,7
84,2
7,4
90,6
4,7
93,6
8,1
92,8
14,7
104,6
3,3
104,5
7,6
87,3
12,3
106,3
4,7
94,4
7,2
93,2
10,7
100,7
2,5
94,8
7,3
97,6
8,5
99,4
8,8
104,9
6,5
74,8
14,0
78,1
3,8
75,5
7,8
90,9
16,0
92,5
7,9
108,8
11,2
94,5
17,6
97,5
14,3
108,1
10,5
81,3
8,6
85,4
5,6
82,8
4,5
76,7
13,6
84,5
6,3
78,6
5,5
89,7
10,7
81,9
13,5
84,0
4,1
83,0
9,7
90,0
8,8
85,8
8,9
79,7
13,3
100,9
14,8
115,8
3,4
82,8
9,0
98,5
6,6
97,2
5,3
94,8
10,0
95,6
6,9
83,1
18,0
82,6
14,7
101,0
3,8
94,9
7,2
98,2
6,6
100,3
8,4
95,6
2,3
72,7
16,2
94,3
5,8
97,7
4,7
71,9
5,0
105,6
10,2
104,0
10,0
72,5
4,3
92,6
10,3
89,4
16,7
72,0
12,0
107,0
9,2
104,9
9,2
74,4
18,2
82,7
5,3
75,7
13,4
80,6
12,8
91,4
7,7
95,4
8,4
45,5
2,2
62,8
10,1
60,0
5,2
84,3
16,6
91,2
5,2
80,5
5,1
95,5
9,6
93,1
8,7
93,5
4,3
100,3
10,2
98,7
5,6
104,5
8,9
80,0
13,6
90,1
8,3
85,2
7,0
76,5
13,9
87,1
3,4
80,2
11,2
58,1
15,7
81,9
11,9
79,6
7,3
98,7
18,3
112,0
18,9
110,7
10,2
80,0
13,2
89,8
8,7
85,5
3,9
76,0
9,2
94,1
0,7
89,3
10,4
82,3
13,5
103,5
6,5
102,6
6,1
36,8
16,0
41,4
17,0
46,0
7,6
94,8
11,3
99,3
11,7
106,4
18,5
76,2
5,6
94,9
14,4
88,4
9,2
LOQm
(g kg-1)
n.q.
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
n.q.
10
10
10
10
10
25
10
10
10
10
n.q.
10
10
88
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
imidacloprido
iprovalicarbe
linurom
malationa
mecarbam
mepronil
metaconazole
metalaxil
metamidofos
metiocarbe sulfona
mevinfos
miclobutanil
monesina
monocrotofos
monolinurom
oxamil
paraoxon
pendimetalina
piraclostrobina
pirazofos
piridaben
piridafetiona
piridato
pirimetanil
pirimicarbe
pirimifos metilico
procloraz
profenofos
profoxidim
propargito
propiconazole
propizamida
propoxur
quinclorac
quinoxifeno
robenidina
salbutamol
salinomicina
simazina
sulfadimetoxina
sulfametazina
sulfatiazol
tebuconazole
terbufos
terbutilazina
93,2
91,6
88,6
83,9
92,1
93,2
87,9
88,0
76,7
83,6
89,9
76,0
92,5
94,7
71,0
85,8
91,8
99,6
109,7
82,5
83,6
90,7
71,5
97,5
63,1
81,6
99,8
85,2
81,2
77,5
73,6
82,1
89,7
87,2
92,0
30,3
75,9
75,5
75,0
45,1
102,1
95,4
94,8
81,4
86,8
82,6
83,1
9,7
15,6
19,1
14,9
11,9
12,2
16,7
12,7
7,0
15,2
4,6
8,0
4,9
11,7
19,4
5,9
12,5
13,9
6,1
9,5
14,4
14,0
17,9
12,6
14,2
9,2
8,7
10,2
11,3
14,9
17,4
14,1
13,3
14,6
10,7
18,0
15,0
5,8
12,0
13,6
8,2
6,8
9,4
6,4
2,0
14,1
11,6
90,0
110,2
109,1
96,4
109,3
99,5
93,6
94,3
72,1
104,3
118,8
79,8
90,7
103,0
72,0
86,6
100,8
89,5
98,7
102,0
89,9
95,0
78,6
108,9
71,6
78,7
94,9
89,9
87,5
82,8
87,2
86,4
94,8
106,1
106,9
30,7
103,8
80,7
81,0
61,9
84,5
93,6
90,2
86,8
91,1
85,5
104,4
5,3
2,9
3,9
14,4
5,0
7,3
6,0
7,7
6,7
9,6
3,8
5,1
4,8
12,2
11,1
1,2
16,3
6,2
11,3
3,0
9,0
3,4
4,9
3,1
5,5
5,8
16,0
9,7
4,5
6,8
5,9
3,7
9,5
4,8
1,8
19,0
12,4
4,4
8,0
19,3
17,5
10,7
4,1
15,9
6,5
10,9
3,6
86,9
100,1
107,5
116,2
96,4
90,5
88,3
91,7
70,0
101,9
106,1
75,8
98,2
89,8
75,0
87,6
102,8
110,9
102,9
92,0
106,3
85,5
71,5
102,6
73,0
77,8
93,4
93,4
81,2
79,9
74,9
79,9
87,5
94,7
103,4
45,0
99,0
81,0
85,0
45,1
90,6
105,0
87,4
97,1
91,8
94,0
97,4
8,2
8,3
5,6
2,1
3,0
4,9
1,8
3,9
4,4
7,8
8,3
3,7
7,6
8,2
6,5
11,6
5,2
5,8
7,0
15,1
7,1
3,9
10,0
1,4
13,4
7,4
11,8
3,4
3,7
3,6
15,1
10,1
3,4
4,4
5,7
11,7
9,3
12,1
13,0
16,9
7,2
6,2
7,6
7,4
10,6
13,3
7,8
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
25
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
n.q.
10
10
10
n.q.
10
10
10
10
10
10
10
89
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
tetraconazole
tiacloprido
tiametoxam
tidicarbe
tolclofos
triadimefom
triadimenol
triazofos
triclorfom
trifloxistrobina
triflumizole
trimetroprima
vamidationa
97,8
92,6
93,1
42,0
97,9
91,5
92,8
93,2
87,6
91,6
79,9
86,3
90,2
12,8
7,6
8,6
13,7
13,3
12,4
11,1
14,5
11,9
13,0
13,7
8,1
7,2
112,4
83,3
96,0
70,7
83,6
101,9
98,4
108,3
84,4
95,7
83,5
80,4
94,5
3,0
50,1
5,8
17,6
20,0
10,2
4,3
3,8
49,7
1,9
5,3
4,5
12,2
101,6
106,8
96,1
74,0
78,6
97,1
92,2
100,4
94,7
86,7
79,5
75,0
101,8
4,0
7,3
11,9
5,5
14,9
9,9
6,0
1,7
7,2
9,4
4,0
3,8
6,4
10
10
10
25
10
10
10
10
10
10
10
10
10
* n= 6 (6 extraes x 1 injeo de cada extrato)

n.q.= no quantificado com confiana nos nveis de fortificao avaliados
A Tabela 8, mostra que 84% dos agrotxicos avaliados na matriz carne

apresentaram percentuais de recuperao entre 70-120% (RSD 20%) e LOQm de
10 g kg-1 (Figura 9). Por outro lado, os compostos fempropimorfe, piridato e
tiodicarbe apresentaram LOQm de 25 g kg-1, Os agrotxicos 2,4D, diclofluanida,
fluroxipir e quinclorac, no foram quantificados com segurana nos nveis de
fortificao avaliados, uma vez que apresentaram valores mdios de recuperao
fora da faixa permitida para anlise de resduos (70-120%) e/ou valores de RSD >
20%. Dos 9 medicamentos veterinrios analisados, somente o composto
salinomicina no apresentou percentuais de recuperao e RSD considerados
satisfatrios.
100
Pesticidas
100
10 (g kg-1)
60
25 (g kg-1)
50 (g kg-1)
40
80
Compostos (%)
Compostos (%)
80
Medicamentos Veterinrios
10 (g kg-1)
25 (g kg-1)
60
50 (g kg-1)
40
20
20
Figura 9. Percentual de agrotxicos e medicamentos veterinrios em carne, que apresentaram

faixas de recuperao de <70%, 70-120% e >120%, aps ensaios de fortificao e recuperao,
extrados com mtodo QuEChERS modificado.
90

de agrotxicos e medicamentos veterinrios em fgado
Compostos
2,4 D
2,4,5 T
3-OH Carbofuran
atrazina
azinfos etilico
azinfos metilico
azoxistrobina
bentazona
bispiribaque
bitertanol
boscalida
bromoconazole
buprofezina
carbaril
carbendazina
carbofurano
carboxim
cianizina
clomazone
cloranfenicol
clorimurom
clorpirifos etilico
clorpirifos metil
clorprofam
deltametrina
diazinona
diclofluanida
difenoconazole
dimetoato
epoxiconazole
etiona
fempropatrina
fempropimorfe
fenarimol
fentiona
fipronil
fluquiconazole
fluroxipir
flutalonil
imazalil
imidacloprido
Nveis de Fortificao (g kg-1)

10
25
50
64,0
14,0
43,9
14,0
31,1
14,3
47,7
5,8
40,8
18,4
20,0
0,3
89,0
4,2
97,3
3,5
89,0
0,1
73,5
14,0
82,5
6,0
93,3
1,0
88,1
13,0
100,4
0,5
98,7
2,8
71,3
19,0
100,9
0,3
93,1
1,9
75,4
9,2
92,2
10,2
86,6
2,5
83,1
1,5
94,4
16,8
93,0
1,4
93,8
2,2
75,7
3,5
52,5
5,9
95,8
1,6
73,8
12,7
82,5
4,2
80,9
12,0
98,9
2,1
95,3
3,0
81,1
3,5
85,5
1,4
82,4
3,6
92,0
8,5
80,0
9,0
70,1
0,1
75,6
12,7
86,6
6,9
84,8
3,0
96,4
5,1
98,4
2,1
83,1
1,5
89,3
5,1
101,4
9,4
93,4
2,4
85,2
2,3
95,0
6,5
83,9
0,5
84,5
14,4
90,8
1,9
90,4
0,9
88,0
9,0
94,4
12,8
84,8
0,3
108,8
2,8
100,1
1,9
86,9
0,7
88,3
6,9
80,6
14,4
78,4
3,3
83,9
16,7
90,0
22,5
110,8
0,2
75,7
4,2
85,7
24,4
78,6
6,0
75,3
10,1
103,1
0,2
97,1
1,3
79,9
4,8
81,5
3,0
72,9
9,1
91,6
2,8
81,8
0,9
79,6
0,1
64,8
9,9
43,8
14,4
51,4
19,8
89,7
7,7
86,6
3,5
80,5
0,1
87,7
5,2
97,5
9,4
89,8
1,1
72,3
10,3
98,4
0,1
98,8
3,7
80,1
5,8
81,0
21,3
79,9
3,3
93,1
8,5
85,5
1,8
70,9
10,6
50,5
0,6
93,9
7,4
73,0
10,2
79,4
9,5
111,7
10,0
93,5
0,6
84,0
4,3
83,0
12,9
86,4
6,5
104,5
0,7
98,7
6,9
89,1
1,4
75,4
18
104,3
5,8
72,5
14,4
45,0
5,4
66,9
19,0
23,7
7,1
80,9
10,7
104,5
10,6
96,7
3,9
107,1
4,5
87,6
11,9
78,9
1,5
108,5
17,1
79,2
8,4
91,8
2,2
LOQm
(g kg-1)
n.q.
n.q.
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
n.q.
10
10
10
10
10
25
10
10
10
10
n.q.
10
10
10
91
iprovalicarbe
linurom
malationa
mecarbam
mepronil
metaconazole
metalaxil
metamidofos
metiocarbe sulfona
mevinfos
miclobutanil
monesina
monocrotofos
monolinurom
oxamil
paraoxon
pendimetalina
piraclostrobina
pirazofos
piridaben
piridafetiona
piridato
pirimetanil
pirimicarbe
pirimifos metilico
procloraz
profenofos
profoxidim
propargito
propiconazole
propizamida
propoxur
quinclorac
quinoxifeno
robenidina
salbutamol
salinomicina
simazina
sulfadimetoxina
sulfametazina
sulfatiazol
tebuconazole
terbufos
terbutilazina
tetraconazole
76,4
70,7
74,0
79,0
72,8
99,7
88,7
75,0
78,5
85,8
81,3
73,2
74,3
83,1
84,7
81,1
87,1
86,0
86,0
95,6
100,2
77,1
80,3
61,7
70,5
97,3
83,0
84,6
74,8
76,7
75,9
86,2
87,9
80,2
65,0
86,7
85,7
76,7
55,1
75,0
88,2
98,5
89,5
88,5
78,3
73,2
76,0
8,9
9,4
9,5
5,6
11,4
4,6
0,8
2,3
3,6
2,9
2,1
11,0
12,0
4,3
8,9
4,1
2,2
3,5
3,1
11,2
4,8
2,0
12,0
19,0
3,2
7,4
8,2
0,7
3,0
2,4
13,0
4,8
10,3
2,8
12,0
2,0
1,9
8,0
10,0
8,6
4,5
0,2
1,8
2,3
2,6
11,7
10,7
105,7
98,5
100,8
110,8
101,2
89,4
85,9
77,3
80,3
102,1
77,5
85,8
112,2
66,0
76,8
92,1
90,1
99,9
93,0
97,3
91,8
80,9
113,7
66,8
74,2
92,6
81,2
84,3
78,0
87,4
83,0
91,5
107,6
101,0
23,7
86,4
79,7
75,7
53,5
78,3
119,4
89,8
89,0
90,8
86,4
93,9
115,4
7,4
10,9
2,0
8,2
11,5
4,2
7,0
7,9
3,5
15,7
2,3
2,8
19,8
4,4
17,3
1,4
2,1
9,5
15,5
7,2
3,4
5,4
11,8
1,0
0,9
6,6
1,0
4,0
7,4
5,3
1,4
3,0
5,1
7,4
10,7
2,3
0,1
7,9
0,9
13,5
14,0
1,2
2,4
10,7
3,1
10,2
1,5
103,6
90,1
90,3
98,7
92,3
82,1
87,1
76,9
89,4
87,6
82,2
89,2
96,3
74,2
83,7
84,5
103,9
93,6
85,5
85,6
85,0
72,5
94,8
76,0
79,6
84,0
85,9
80,2
75,3
75,2
77,1
82,7
89,2
91,3
50,1
79,1
81,3
80,0
47,3
88,5
93,9
90,6
97,2
89,1
76,2
85,1
105,9
4,2
5,6
4,4
2,6
1,0
0,2
1,6
3,2
1,2
3,7
1,5
0,6
4,4
5,4
2,9
6,7
0,7
1,5
3,4
3,3
1,2
2,6
3,0
4,8
10,4
2,3
1,2
0,8
1,1
0,2
2,2
1,3
0,3
0,6
5,2
2,7
1,2
5,0
4,2
0,8
1,2
1,9
0,4
0,9
1,7
0,9
3,6
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
50
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
n.q.
10
10
10
n.q.
10
10
10
10
10
10
10
10
92
tiacloprido
tiametoxam
tidicarbe
tolclofos
triadimefom
triadimenol
triazofos
triclorfom
trifloxistrobina
triflumizole
trimetroprima
vamidationa
76,0
94,2
55,8
95,1
74,5
78,3
88,2
92,2
87,2
81,1
76,5
107,7
7,4
13,6
1,9
5,2
3,1
10,7
8,3
18,4
5,2
17,5
4,8
1,7
90,2
94,7
50,6
103,6
113,1
100,7
109,5
93,6
93,9
80,5
71,0
87,9
2,3
0,6
3,8
13,8
9,2
11,0
8,5
6,2
1,0
1,3
7,06
0,5
87,2
92,2
58,8
102,6
93,0
100,2
99,6
93,5
88,1
78,3
84,5
87,9
0,8
4,1
14,0
2,3
1,6
5,3
2,3
1,1
1,0
4,2
0,6
0,7
10
10
n.q.
10
10
10
10
10
10
10
10
10

A Tabela 9, mostra que 84% dos agrotxicos avaliados na matriz fgado

apresentaram percentuais de recuperao entre 70-120% (RSD 20%) e LOQm de
10 g kg-1 (Figura 10). Por outro lado, os compostos fempropimorfe e piridato e
apresentram LOQm de 25 e 50 g kg-1, respectivamente. Os agrotxicos 2,4D, 2,4,5
T, fluroxipir, quinclorac e tiodicarbe, no foram quantificados com segurana nos
nveis de fortificao avaliados, uma vez que apresentaram valores mdios de
recuperao fora da faixa permitida para anlise de resduos (70-120%) e/ou valores
de RSD > 20%. Dos 9 medicamentos veterinrios analisados, somente o composto
salinomicina no apresentou percentuais de recuperao e RSD considerados
satisfatrios.
80
10 (g kg-1)
25 (g kg-1)
50 (g kg-1)
60
40
80
Compostos (%)
Compocstos (%)
100
100
Pesticidas
10 (g kg-1)
25 (g kg-1)
60
50 (g kg-1)
40
20
20
Figura 10. Percentual de agrotxicos e medicamentos veterinrios em fgado, que apresentaram

faixas de recuperao de <70%, 70-120% e >120%, aps ensaios de fortificao e recuperao,
extrados com mtodo QuEChERS modificado.
93
Tabela 10. Percentuais de recuperao e RSD para a repetitividade do mtodo de

extrao de agrotxicos e medicamentos veterinrios em rim
Compostos
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
2,4 D
2,4,5 T
3-OH Carbofuran
atrazina
azinfos etilico
azinfos metilico
azoxistrobina
bentazona
bispiribaque
bitertanol
boscalida
bromoconazole
buprofezina
carbaril
carbendazina
carbofurano
carboxim
cianizina
clomazone
cloranfenicol
clorimurom
clorpirifos etilico
clorpirifos metil
clorprofam
deltametrina
diazinona
diclofluanida
difenoconazole
dimetoato
epoxiconazole
etiona
fempropatrina
fempropimorfe
fenarimol
fentiona
fipronil
fluquiconazole
fluroxipir
flutalonil
imazalil
rec
(%)
28,2
84,5
90,8
107,0
70,0
95,1
79,3
70,3
95,6
100,6
83,2
84,7
86,4
100,2
94,5
88,1
91,8
86,2
94,7
87,0
92,3
90,3
96,0
81,8
87,3
60,7
96,9
88,7
91,6
85,8
91,8
67,4
92,5
88,7
102,3
90,0
92,6
73,3
Nveis de Fortificao (g L-1)

LOQm
10
25
50
(g
L-1)
rec
rec
RSD (%) (%) RSD (%) (%)
RSD (%)
n.q.
12,0
29,4
15,1
49,0
3,1
n.q.
13,7
91,3
7,6
90,5
10,6
10
3,6
83,6
5,0
88,6
6,4
10
6,3
112,7
11,2
88,7
8,6
10
7,0
96,1
7,5
92,3
4,5
10
3,0
89,4
3,2
89,6
5,4
10
3,2
74,3
9,0
82,4
11,1
10
19,8
73,0
16,2
77,0
8,2
10
11,5
96,4
9,2
82,1
5,0
10
10,2
82,3
2,2
93,2
7,0
10
8,4
82,9
7,1
82,6
7,0
10
12,4
76,0
5,6
76,7
7,6
10
18,4
92,3
1,2
93,3
6,7
10
12,7
101,8
13,5
100,6
10,5
10
2,1
93,2
5,7
88,9
3,7
10
2,9
85,1
3,3
85,6
5,2
10
14,6
86,8
7,5
106,1
8,7
10
4,6
80,6
4,5
83,9
6,2
10
8,9
96,6
1,6
92,9
13,9
10
4,8
80,6
6,9
99,5
18,4
10
10,5
98,8
13,9
106,8
10,6
10
14,5
83,5
13,2
79,7
16,3
10
16,6
106,8
5,5
103,2
13,9
10
7,7
77,6
6,6
79,9
5,0
10
7,6
80,8
6,0
89,7
7,0
10
18,0
56,2
14,1
62,0
18,0
n.q.
10,0
88,7
4,6
92,1
13,6
10
5,8
88,9
6,8
85,2
5,3
10
10,5
103,8
3,7
90,5
7,1
10
4,4
76,0
9,6
72,3
14,9
10
4,1
82,0
4,9
82,0
4,3
10
11,6
77,6
9,0
75,0
16,8
25
13,0
96,1
7,5
85,4
11,6
10
12,1
70,9
10,3
87,3
10,4
10
5,5
96,9
4,2
97,0
7,0
10
13,0
108,2
11,1
80,1
8,6
10
n.q.
3,6
91,2
5,4
92,5
4,6
10
7,3
79,1
6,4
81,3
5,2
10
94
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
imidacloprido
iprovalicarbe
linurom
malationa
mecarbam
mepronil
metaconazole
metalaxil
metamidofos
metiocarbe sulfona
mevinfos
miclobutanil
monesina
monocrotofos
monolinurom
oxamil
paraoxon
pendimetalina
piraclostrobina
pirazofos
piridaben
piridafetiona
piridato
pirimetanil
pirimicarbe
pirimifos metilico
procloraz
profenofos
profoxidim
propargito
propiconazole
propizamida
propoxur
quinclorac
quinoxifeno
robenidina
salbutamol
salinomicina
simazina
sulfadimetoxina
sulfametazina
sulfatiazol
tebuconazole
terbufos
terbutilazina
93,3
87,1
70,8
93,2
87,4
89,1
100,6
92,3
74,9
89,9
87,0
79,9
75,3
99,4
70,0
84,4
89,6
91,9
88,4
85,3
87,8
102,2
73,6
92,1
55,7
78,3
89,0
84,7
84,6
82,9
85,6
82,7
85,9
96,9
93,5
70,3
70,5
87,0
43,8
84,6
106,3
92,1
90,0
78,4
76,1
85,2
2,8
5,2
13,0
7,3
16,0
6,0
2,8
2,8
6,3
18,6
5,0
2,8
9,6
8,7
5,4
5,1
4,1
6,1
7,4
2,9
4,7
6,5
4,3
4,4
4,3
4,3
7,7
6,9
6,6
12,4
5,5
11,4
11,8
6,5
6,9
13,9
14,9
18,0
13,2
7,3
4,5
7,1
6,9
13,0
11,0
3,0
80,6
105,5
82,9
103,1
109,9
110,3
85,9
91,9
77,2
78,6
88,7
76,2
85,6
114,3
73,0
70,0
87,4
87,5
98,2
86,1
90,0
95,7
75,0
119,2
59,9
81,2
86,6
82,6
83,7
75,9
79,6
84,4
88,4
114,3
91,1
75,0
73,5
92,0
54,7
70,0
90,7
87,3
79,0
88,9
85,6
86,3
10,0
6,0
8,4
8,7
5,7
4,1
6,6
2,6
5,7
18,1
5,8
7,7
3,0
7,0
7,2
2,6
7,5
4,5
10,5
3,8
3,3
3,1
8,4
2,8
5,5
6,7
4,7
5,6
2,5
6,3
5,5
3,1
3,9
6,5
5,7
6,8
7,3
16,0
4,2
1,4
4,0
3,9
5,2
10,7
9,4
6,0
88,5
88,7
84,9
90,4
87,4
94,4
83,3
88,4
78,6
73,5
87,3
78,2
77,7
95,6
76,0
83,0
75,0
96,5
90,3
88,2
84,3
93,3
75,3
93,3
59,9
80,2
85,8
82,4
80,1
78,8
79,3
74,4
86,6
87,3
92,0
76,7
70,9
79,0
54,8
90,1
84,8
87,5
87,8
87,4
76,3
82,1
7,4
3,0
7,1
8,6
7,1
7,2
7,6
6,7
12,9
12,8
8,7
10,7
14,6
12,7
3,7
7,5
18,9
7,4
3,8
7,6
7,4
5,8
4,4
6,2
13,4
13,8
11,2
4,3
5,2
10,7
5,5
17,9
10,8
3,3
8,0
9,9
13,6
12,0
15,6
17,2
16,5
8,2
7,8
17,2
14,8
6,3
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
n.q
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
n.q.
10
10
10
n.q.
10
10
10
10
10
10
10
95
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
tetraconazole
tiacloprido
tiametoxam
tidicarbe
tolclofos
triadimefom
triadimenol
triazofos
triclorfom
trifloxistrobina
triflumizole
trimetroprima
vamidationa
107,6
88,8
87,9
56,9
91,7
84,3
94,0
99,3
102,0
90,6
90,8
93,0
92,2
6,6
3,6
2,6
4,0
7,2
13,1
7,0
9,1
5,7
10,0
6,3
13,4
9,9
107,5
85,4
88,0
53,5
98,2
118,8
105,6
117,8
88,9
90,8
80,6
72,7
88,4
8,2
3,9
6,1
19,2
10,4
1,7
8,2
5,4
10,7
5,1
4,9
7,1
1,8
88,8
86,3
84,3
86,6
92,8
93,9
86,1
89,9
91,3
86,1
75,8
82,9
92,4
13,9
9,7
6,7
3,9
16,0
8,6
13,4
13,0
10,5
5,8
14,9
6,6
7,3
10
10
10
50
10
10
10
10
10
10
10
10
10

A Tabela 10 apresenta os resultados das recuperaes mdias (n=6)

percentuais e o RSD% para os 100 compostos que foram fortificados em rim nos
nveis de 10, 25 e 50 g kg-1. Cerca de 80% dos agrotxicos apresentaram
percentuais de recuperao entre 70-120% e valores de RSD 20% (LOQm de 10
g kg-1). Os compostos fempropimorfe e tiodicarbe apresentaram LOQm de 25 e 50
g kg-1, respectivamente. Um total de 89% dos medicamentos veterinrios avaliados
apresentou a faixa de 70-120% de recuperao e RSD 20% (LOQm de 10 g kg-1)
(Figura 11). Os agrotxicos diclofluanida, 2,4,5 T, fluroxipir, quinclorac,
2,4D,
piridato e o medicamento veterinrio salinomicina, no foram quantificados.
100
10 (g kg-1)
80
25 (g kg-1)
50 (g kg-1)
60
40
80
Compostos (%)
Compocstos (%)
100
Pesticidas
10 (g kg-1)
25 (g kg-1)
60
50 (g kg-1)
40
20
20
Figura 11. Percentual de agrotxicos e medicamentos veterinrios em rim, que apresentaram

faixas de recuperao de <70%, 70-120% e >120%, aps ensaios de fortificao e
recuperao, extrados com mtodo QuEChERS modificado.
96

de agrotxicos e medicamentos veterinrios em leite
n
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
Compostos
2,4 D
2,4,5 T
3-OH Carbofuran
atrazina
azinfos etilico
azinfos metilico
azoxistrobina
bentazona
bispiribaque
bitertanol
boscalida
bromoconazole
buprofezina
carbaril
carbendazina
carbofurano
carboxim
cianizina
clomazone
cloranfenicol
clorimurom
clorpirifos etilico
clorpirifos metil
clorprofam
deltametrina
diazinona
diclofluanida
difenoconazole
dimetoato
epoxiconazole
etiona
fempropatrina
fempropimorfe
fenarimol
fentiona
fipronil
fluquiconazole
fluroxipir
flutalonil
imazalil
imidacloprido

LOQm
10
25
50
(g L-1)
22,0
16,0
46,0
15,0
50,0
11,1
n.q.
81,7
15,5
88,4
10,3
80,6
6,2
10
83,3
17,7
100,1
12,3
82,9
5,0
10
90,8
15,7
96,9
13,9
82,3
1,6
10
87,3
15,2
94,0
14,2
109,4
5,8
10
81,5
14,2
88,7
8,6
82,8
4,8
10
76,5
12,9
85,3
15,7
83,4
1,1
10
90,1
15,0
96,2
8,9
103,3
14,8
10
89,0
18,8
96,1
13,8
83,6
6,4
10
89,5
14,6
92,9
8,0
89,9
6,3
10
100,6
11,8
104,6
12,1
103,5
9,0
10
74,4
13,1
87,6
13,8
73,8
4,0
10
73,7
15,8
80,3
19,9
71,0
3,1
10
77,9
10,2
102,6
18,7
78,9
3,4
10
74,6
19,3
97,4
14,4
79,0
1,6
10
90,1
13,6
106,4
15,3
84,3
2,2
10
79,0
19,2
98,2
8,0
82,4
3,7
10
82,0
14,1
102,7
12,2
84,8
3,6
10
85,5
16,6
101,3
15,8
85,5
2,2
10
93,5
17,2
96,8
14,9
77,2
3,0
10
98,2
13,2
83,7
16,0
100,9
9,3
10
96,0
9,0
99,6
2,6
98,7
11,4
10
87,4
6,4
90,0
5,1
93,3
9,4
10
98,7
15,1
79,1
3,4
84,3
3,7
10
61,2
13,0
86,5
16,6
74,3
4,1
25
79,7
19,0
86,6
13,5
77,5
2,9
10
46,5
5,5
30,7
9,7
49,8
56,3
n.q.
73,3
12,3
88,9
18,3
77,9
2,8
10
86,6
12,8
101,1
10,3
85,0
3,0
10
101,8
12,0
105,7
13,9
96,2
11,2
10
74,0
1,6
102,5
10,3
79,6
1,9
10
68,9
10,6
91,7
14,4
77,7
3,1
25
104,2
2,0
102,2
8,4
95,2
1,8
10
98,5
14,9
96,7
16,8
87,8
7,5
10
78,8
14,0
90,9
15,2
85,6
5,6
10
79,6
10,3
84,8
14,9
83,8
1,7
10
118,9
1,3
106,9
13,3
98,8
19,1
10
42,5
13,0
44,3
19,0
8,0
15,7
n.q.
99,6
3,9
99,4
13,8
97,6
11,6
10
72,1
17,8
91,2
13,7
75,6
5,9
10
94,6
19,2
96,5
6,6
80,4
4,5
10
97
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
iprovalicarbe
linurom
malationa
mecarbam
mepronil
metaconazole
metalaxil
metamidofos
metiocarbe sulfona
mevinfos
miclobutanil
monesina
monocrotofos
monolinurom
oxamil
paraoxon
pendimetalina
piraclostrobina
pirazofos
piridaben
piridafetiona
piridato
pirimetanil
pirimicarbe
pirimifos metilico
procloraz
profenofos
profoxidim
propargito
propiconazole
propizamida
propoxur
quinclorac
quinoxifeno
robenidina
salbutamol
salinomicina
simazina
sulfadimetoxina
sulfametazina
sulfatiazol
tebuconazole
terbufos
terbutilazina
tetraconazole
82,4
92,0
98,0
77,1
87,3
85,7
77,1
87,0
102,4
99,5
79,0
85,1
103,4
71,0
82,2
83,2
91,8
108,1
77,6
92,1
78,1
60,6
95,2
58,0
80,3
85,8
72,1
70,6
74,5
93,3
78,3
84,9
88,4
85,6
40,0
62,4
74,3
84,8
55,6
75,9
105,8
98,2
92,1
86,1
70,7
88,6
98,0
4,1
14,9
12,3
5,5
6,7
16,9
9,1
17,8
13,5
14,7
11,8
16,8
9,2
11,6
14,5
13,7
12,2
5,6
10,5
13,8
14,5
7,1
15,1
6,0
17,1
18,8
8,5
12,7
5,3
18,3
19,9
16,6
15,8
15,3
20,7
11,8
18,4
18,5
9,4
5,2
12,0
14,7
17,2
8,1
13,1
19,0
11,7
89,3
104,4
107,2
97,0
83,0
91,3
95,7
101,2
92,9
101,9
96,4
97,5
97,4
78,1
98,8
100,4
106,5
110,1
91,1
101,5
85,0
94,0
96,9
63,5
99,7
105,8
84,2
92,1
89,5
89,5
99,3
87,7
94,9
104,4
67,0
80,8
80,6
86,0
56,2
100,6
108,2
99,9
99,8
88,9
83,3
105,0
87,6
15,5
19,7
6,9
19,9
13,0
19,5
10,9
13,9
10,7
6,6
17,1
6,6
4,5
14,8
5,3
19,6
7,3
8,0
15,0
14,8
14,3
14,6
13,5
15,7
17,1
18,0
15,4
19,6
19,9
17,7
11,0
18,9
17,8
12,8
16,5
11,7
16,6
13,0
18,0
13,6
4,7
9,7
14,0
14,8
16,3
14,4
16,5
88,1
81,8
104,8
90,0
85,1
73,4
84,0
72,3
104,0
98,0
82,6
80,2
87,7
79,0
81,9
85,8
89,5
101,8
82,3
95,2
80,0
71,4
83,6
68,0
78,3
76,9
78,2
79,1
78,3
78,2
80,9
76,4
91,7
81,4
56,0
75,7
74,7
87,0
58,4
86,1
104,6
81,5
81,4
77,8
76,4
87,0
84,6
7,8
4,0
6,0
4,4
5,6
6,4
1,3
2,8
7,8
9,5
3,2
4,5
19,2
2,7
2,5
3,6
3,0
13,0
2,3
6,3
2,0
1,7
9,3
3,1
3,8
3,1
2,3
3,1
4,7
2,3
2,7
2,3
9,6
4,0
3,1
3,5
1,8
10,0
3,0
4,0
2,6
1,3
1,3
5,9
2,2
7,4
10,5
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
25
10
n.q.
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
n.q.
25
10
10
n.q.
10
10
10
10
10
10
10
10
98
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
tiacloprido
tiametoxam
tidicarbe
tolclofos
triadimefom
triadimenol
triazofos
triclorfom
trifloxistrobina
triflumizole
trimetroprima
vamidationa
82,5
99,0
79,2
106,6
81,6
103,2
90,4
83,6
76,6
70,0
84,2
88,2
18,6
12,4
16,7
9,8
5,7
6,1
14,2
10,7
12,8
9,2
12,9
14,1
101,2
102,7
102,2
111,9
106,3
92,7
101,2
109,0
104,4
105,7
94,0
97,1
10,2
9,1
17,4
13,6
6,0
11,3
14,5
11,0
13,5
12,8
12,5
9,9
83,3
81,3
80,8
74,4
93,0
84,0
86,2
82,9
81,2
75,2
77,7
84,5
2,0
2,8
4,5
8,6
8,8
0,7
6,7
5,3
3,6
2,4
1,7
1,5
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10

Observou-se que na matriz leite os compostos salinomicina, quinclorac,

fluroxipir, diclofluanida e 2,4D no puderam ser quantificados em funo de
apresentarem valores percentuais de recuperao menores que 70%. Por outro
lado, 83% dos agrotxicos e 89% dos medicamentos veterinrios apresentaram
valores de LOQm de 10 g L-1, isto significa que apresentaram percentuais de
recuperao e RSD% considerados satisfatrios neste nvel de fortificao 70-120%
de recuperao e RSD 20% (Figura 12).
Compostos (%)
80
100
Pesticidas
10 (g kg-1)
25 (g kg-1)
60
40
20
50 (g kg-1)
80
Compostos (%)
100
10 (g kg-1)
25 (g kg-1)
60
50 (g kg-1)
40
20
0
Figura 12. Percentual de agrotxicos e medicamentos veterinrios em leite, que apresentaram

99
Tabela 12. Percentuais de recuperao e RSD para a repetitividade do mtodo de

extrao de agrotxicos e medicamentos veterinrios em ovo
n
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
Compostos
2,4 D
2,4,5 T
3-OH Carbofuran
atrazina
azinfos etilico
azinfos metilico
azoxistrobina
bentazona
bispiribaque
bitertanol
boscalida
bromoconazole
buprofezina
carbaril
carbendazina
carbofurano
carboxim
cianizina
clomazone
cloranfenicol
clorimurom
clorpirifos etilico
clorpirifos metil
clorprofam
deltametrina
diazinona
diclofluanida
difenoconazole
dimetoato
epoxiconazole
etiona
fempropatrina
fempropimorfe
fenarimol
fentiona
fipronil
fluquiconazole
fluroxipir
flutalonil
imazalil
imidacloprido

LOQm
10
25
50
(g kg-1)
20,5
13,0
23,6
12,0
25,0
15,0
n.q.
32,5
13,0
43,0
14,7
48,0
7,2
n.q.
108,7
6,0
102,9
2,2
89,7
1,8
10
106,0
6,8
95,9
2,5
88,5
4,6
10
113,2
4,1
97,3
6,0
98,9
1,7
10
109,9
5,8
101,6
2,4
88,2
6,6
10
100,9
15,5
105,6
5,5
83,1
5,9
10
105,6
8,1
90,1
4,5
89,4
4,6
10
83,7
5,7
86,0
6,1
83,0
8,3
10
109,5
6,6
97,2
5,6
79,9
7,0
10
111,5
5,7
96,4
6,7
91,8
4,3
10
95,6
5,3
88,7
3,3
81,4
2,6
10
79,6
6,8
70,5
3,4
70,0
1,1
10
111,3
4,7
97,2
4,2
86,8
4,3
10
104,0
1,7
93,6
2,2
81,9
1,8
10
106,1
4,9
98,6
3,9
92,0
2,6
10
94,4
5,5
92,8
2,2
84,5
2,3
10
107,9
6,8
104,8
3,3
88,9
3,1
10
106,2
5,2
94,6
3,5
83,8
1,9
10
115,5
3,2
93,1
3,8
87,4
2,4
10
106,8
5,3
86,7
3,9
79,6
3,7
10
102,1
13,0
99,6
4,3
108,4
3,5
10
109,1
6,1
79,7
14,1
75,8
9,3
10
98,3
15,4
93,2
7,5
93,0
5,0
10
88,7
4,8
76,0
4,2
71,0
5,5
10
101,4
6,2
88,2
2,5
80,5
2,0
10
33,0
2,0
27,0
3,0
21,0
4,0
n.q.
114,4
3,6
95,9
2,2
79,9
2,3
10
108,9
3,6
97,0
2,8
88,6
2,5
10
106,2
8,6
101,9
5,8
98,8
2,5
10
104,1
4,8
84,7
2,8
78,3
3,3
10
95,2
8,8
75,2
2,6
71,4
5,7
10
85,5
5,8
90,8
2,8
73,0
8,5
10
99,8
16,4
84,9
4,2
96,0
4,4
10
103,3
4,8
93,1
4,3
82,6
5,2
10
110,7
4,6
102,9
2,0
88,4
2,0
10
101,9
10,9
109,0
6,9
94,4
7,7
10
39,8
19,0
25,1
15,0
38,0
10,7
n.q.
117,2
1,6
106,7
2,8
94,9
3,0
10
94,6
5,7
84,3
4,6
76,2
4,3
10
110,5
5,8
102,0
4,1
90,6
3,2
10
100
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
iprovalicarbe
linurom
malationa
mecarbam
mepronil
metaconazole
metalaxil
metamidofos
metiocarbe sulfona
mevinfos
miclobutanil
monesina
monocrotofos
monolinurom
oxamil
paraoxon
pendimetalina
piraclostrobina
pirazofos
piridaben
piridafetiona
piridato
pirimetanil
pirimicarbe
pirimifos metilico
procloraz
profenofos
profoxidim
propargito
propiconazole
propizamida
propoxur
quinclorac
quinoxifeno
robenidina
salbutamol
salinomicina
simazina
sulfadimetoxina
sulfametazina
sulfatiazol
tebuconazole
terbufos
terbutilazina
tetraconazole
107,1
111,8
109,5
114,3
107,8
114,2
112,2
92,4
108,1
111,6
104,9
112,4
112,5
101,6
109,1
110,5
108,5
114,5
108,5
113,3
106,3
79,7
106,8
67,1
94,9
106,5
98,0
107,8
92,5
86,4
105,0
111,0
110,4
114,5
30,0
64,0
88,8
76,0
69,0
97,0
109,9
112,9
105,3
109,7
107,2
109,5
110,4
9,6
5,7
8,9
4,8
9,6
1,7
6,5
7,5
9,0
6,1
2,9
4,5
3,7
4,6
2,3
6,3
9,0
1,9
3,9
2,7
7,6
5,2
6,9
5,1
8,1
7,7
4,5
6,3
8,2
4,9
4,3
7,2
6,4
4,4
11,0
5,0
13,6
10,0
9,1
10,6
5,8
4,0
3,4
6,3
12,5
3,0
3,7
90,9
92,7
100,8
100,0
102,2
94,0
104,2
85,6
100,9
98,6
89,1
94,1
104,2
79,3
96,1
94,4
99,2
105,1
93,1
96,9
100,6
75,0
102,9
48,1
83,1
95,2
86,4
91,4
82,4
76,0
81,1
91,6
95,4
96,2
20,8
60,6
79,2
78,0
54,6
97,6
96,6
99,5
94,5
96,2
84,4
83,1
111,5
17,6
4,9
1,7
4,0
1,5
4,0
2,5
2,9
4,7
4,4
3,8
4,6
4,8
5,2
2,8
5,3
3,3
2,9
1,8
3,4
3,9
2,9
2,5
4,2
2,2
4,8
3,2
2,8
2,0
2,5
3,5
5,5
5,7
2,3
6,2
3,9
4,9
9,0
6,8
11,0
1,4
5,3
4,1
4,0
6,0
19,2
5,3
101,9
88,8
92,3
96,7
91,8
79,8
87,2
76,8
86,5
87,1
82,0
87,8
93,5
73,4
83,5
84,7
98,9
92,3
84,5
84,9
86,8
74,0
92,8
45,9
78,0
83,5
84,2
80,1
74,8
76,1
76,3
83,2
89,3
90,6
19,6
58,2
80,6
74,0
46,7
86,8
93,4
92,2
93,5
87,3
77,6
84,5
105,1
2,8
4,0
3,7
2,5
0,8
4,3
1,3
3,3
4,0
2,1
2,1
3,3
3,8
4,4
1,8
5,4
8,8
1,8
2,4
3,0
2,2
2,1
3,7
4,7
6,0
3,7
2,9
0,7
2,0
2,9
1,5
2,8
5,9
1,9
6,3
3,1
4,8
9,0
5,9
2,1
1,7
2,8
6,4
3,3
3,6
1,1
3,5
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
n.q.
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
n.q.
n.q.
10
10
n.q.
10
10
10
10
10
10
10
10
101
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
tiacloprido
tiametoxam
tidicarbe
tolclofos
triadimefom
triadimenol
triazofos
triclorfom
trifloxistrobina
triflumizole
trimetroprima
vamidationa
114,0
112,5
46,0
107,6
111,8
111,7
117,4
109,5
109,7
102,5
93,7
111,5
2,3
2,9
17,0
4,6
7,8
4,4
0,9
5,0
9,8
4,2
10,1
3,1
100,0
103,6
42,0
102,6
95,4
94,4
100,8
99,1
100,5
88,7
90,2
98,9
1,7
4,1
2,0
7,2
3,0
6,4
3,6
4,5
2,5
2,3
2,7
2,3
86,7
89,6
47,0
104,0
89,9
98,9
97,5
92,1
86,3
78,4
84,4
86,8
1,4
3,7
18,5
5,7
3,6
4,2
2,6
5,1
1,9
3,7
3,8
1,6
10
10
n.q.
10
10
10
10
10
10
10
10
10
n= 6 (6 extraes x 1 injeo de cada extrato)
A Tabela 12 apresenta os resultados dos percentuais de recuperao e

RSD% obtidos aps fortificao (10, 25 e 50 g kg-1) em amostras branco de ovo.
Resultados similares foram obtidos quando se comparam os dados obtidos na
amostra ovo com as demais matrizes. Nos trs nveis avaliados, 91% dos compostos
apresentram percentuais de recuperao na faixa de 70-120% e RSD 20% (Figura
13). Observa-se que os compostos diclofluanida, fluroxipir, tiodicarbe, quinclorac,
salinomicina, quinoxifeno, 2,4,5 T e 2,4D, tambm apresentaram problemas de
quantificao na amostra ovo, em funo de seu baixo percentual de recuperao
(<70%).
Compostos (%)
80
60
40
100
Pesticidas
80
10 (g kg-1)
25 (g kg-1)
50 (g kg-1)
Compostos (%)
100
10 (g kg-1)
25 (g kg-1)
60
50 (g kg-1)
40
20
20
Figura 13. Percentual de agrotxicos e medicamentos veterinrios em ovo, que apresentaram

102
2,4 D
Quinclorac
Fluroxipir
2,4,5 T
Figura 14. Estruturas qumicas dos compostos 2,4D, fluroxipir, quinclorac e

2,4,5 T.
Na Figura 14 esto representadas as estruturas qumicas dos compostos 2,4

D, fluroxipir, quinclorac e 2,4,5 T. Estes compostos so fenxi-cidos e
apresentaram baixos percentuais de recuperao (<70%) nas matrizes avaliadas
durante este estudo.
A natureza polar destes compostos e sua a alta solubilidade em gua fazem
com que a extrao especfica destes compostos seja extremamente difcil. Eles so
cidos relativamente fortes (pKa <4) os quais, so mais estveis em pH baixo.
Portanto, o pH da extrao um importante fator o qual, deve ser adequadamente
controlado. O monitoramento de fenxi-cidos ao nvel de traos um grande
desafio, no caso de matrizes complexas devido natureza qumica e fsica destes
compostos, bem como, ao grande nmero de co-extrativos da matriz que podem
afetar adversamente a eficincia de extrao e o desempenho do instrumento
utilizado para a deteco quantitativa.
103
4.5.5 Preciso (repetitividade e preciso intermediria)
A preciso do mtodo QuEChERS modificado foi avaliada em funo da

repetitividade e da preciso intermediria, estimadas de acordo com as
recomendaes da ANVISA. Os valores mais detalhados de RSDr e RSDpi so
apresentados juntamente aos resultados de recuperao, nas Tabelas 8, 9, 10, 11,
12 e 13.
Os valores para o estudo da repetitividade e preciso intermediria dos
agrotxicos e medicamentos veterinrios em amostras de carne, fgado, rim, leite e
ovo ficaram abaixo de 20 % para a maioria dos compostos avaliados. Para matrizes
ambientais e de alimentos, a preciso dependente da matriz da amostra, da
concentrao do analito e da tcnica de anlise, podendo variar entre 2% e mais de
20% (SANCO, 2010).
Para validao de mtodos cromatogrficos, na faixa de concentrao
avaliada nesse trabalho, recomenda-se que a preciso deve apresentar RSD 20%
(RIBANI et al., 2004; SANCO, 2010). Portanto, todos os resultados obtidos esto
dentro dos limites sugeridos para a maioria dos compostos analisados.
104
Tabela 13. Percentuais de recuperao e RSD para a preciso intermediria do mtodo QuEChERS modificado, no nvel
de fortificao de 25 g kg-1 (n=6)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
Compostos
2,4 D
2,4,5 T
3-OH Carbofuran
atrazina
azinfos etilico
azinfos metilico
azoxistrobina
bentazona
bispiribaque
bitertanol
boscalida
bromoconazole
buprofezina
carbaril
carbendazina
carbofurano
carboxim
cianizina
clomazone
cloranfenicol
clorimurom
Carne
rec
(%)
15,4
65,3
89,7
87,4
104,4
105,5
98,7
98,1
77,3
92,6
109,7
82,3
82,3
82,2
84,5
107,2
99,5
94,3
99,5
103,2
56,0
RSD
(%)
35,4
1,1
2,1
0,6
1,5
1,6
0,1
2,7
1,8
3,8
1,9
1,0
1,2
0,1
0,0
0,3
0,1
1,8
1,2
0,6
0,3
Nvel de Fortificao de 25 g kg-1

Fgado
Rim
Leite*
rec
RSD
rec
RSD
rec
RSD
(%)
(%)
(%)
(%)
(%)
(%)
19,5
14,4
27,9
10,0
92,1
35,8
87,0
11,4
22,3
6,4
89,7
13,2
110,2
3,6
84,4
6,7
90,0
5,8
107,5
8,8
83,0
6,3
86,3
3,1
85,2
0,6
104,3
8,6
102,9
14,6
92,4
10,5
98,4
9,0
84,9
5,6
108,7 10,5
91,3
3,2
77,7
3,3
92,4
8,3
74,7
12,3
52,0
14,0
105,9 11,0
70,9
1,4
86,2
1,2
98,4
0,1
96,4
14,6
87,4
7,7
110,6
0,2
83,4
3,8
98,7
18,6
96,5
11,2
81,9
10,0
78,6
0,1
92,8
12,4
79,5
8,3
67,8
3,8
119,0
4,0
91,7
0,1
86,2
0,6
109,3
2,7
107,8
1,6
85,6
5,3
119,8
1,5
98,2
6,3
93,1
9,5
114,9
6,0
84,7
0,6
81,5
1,4
113,0
1,9
89,2
11,6
92,4
6,6
114,7
3,0
81,1
3,7
87,9
7,2
109,2
1,0
95,6
0,8
84,4
3,5
111,5
2,9
82,3
11,1
55,9
14,1
Ovo
rec
RSD
(%)
(%)
15,8 44,9
19,5
3,3
101,2
2,3
94,5
3,8
93,8
2,2
102,9
1,1
103,8
7,6
86,5
4,4
63,3
4,4
94,0
6,9
92,3
1,7
87,8
2,4
70,6
2,0
95,8
6,9
93,1
1,5
96,0
2,1
92,6
0,1
107,4
2,3
93,5
2,2
91,3
2,3
85,3
0,0
105
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
clorpirifos etilico
clorpirifos metil
clorprofam
deltametrina
diazinona
diclofluanida
difenoconazole
dimetoato
epoxiconazole
etiona
fempropatrina
fempropimorfe
fenarimol
fentiona
fipronil
fluquiconazole
fluroxipir
flutalonil
imazalil
imidacloprido
iprovalicarbe
linurom
malationa
mecarbam
mepronil
metaconazole
metalaxil
metamidofos
109,9
93,5
98,9
80,6
84,4
59,0
86,4
101,4
95,5
92,1
86,7
83,2
104,9
88,1
93,9
54,3
33,5
109,2
85,3
85,0
109,6
110,0
82,4
103,4
92,6
87,7
91,3
70,7
1,8
2,6
1,5
0,4
0,9
1,0
0,8
0,9
1,1
0,4
0,9
6,6
4,9
1,0
0,1
35,4
35,4
1,0
4,0
0,4
0,5
1,3
0,8
0,3
0,1
0,4
3,7
1,2
98,7
93,4
100,3
86,5
95,2
97,6
102,7
109,0
116,3
102,5
91,7
105,3
110,5
98,4
93,5
117,8
52,9
98,0
101,7
101,5
92,5
121,8
104,9
113,1
76,0
106,5
104,2
113,3
1,9
0,4
27,2
16,6
11,2
5,4
4,2
4,3
4,1
10,3
14,4
0,3
0,2
18,0
13,6
2,6
141,4
2,5
1,8
1,3
24,6
2,4
8,3
7,7
12,5
4,2
3,2
2,6
107,7
82,5
108,4
78,0
81,3
59,5
86,2
92,7
105,7
60,7
81,2
72,5
100,6
62,0
96,4
97,7
5,3
90,7
81,8
84,3
102,5
77,6
100,2
108,0
113,0
86,5
93,2
79,8
9,8
14,8
8,7
3,5
10,6
20,7
4,7
1,3
2,3
13,4
4,0
8,9
1,9
0,8
4,7
9,6
108,9
5,6
8,4
16,9
6,2
3,6
8,9
5,9
2,5
1,5
1,2
2,9
100,6
86,6
78,1
58,8
78,0
83,8
75,0
93,2
95,1
71,5
65,5
99,0
82,8
83,4
76,1
95,9
113,7
100,7
80,8
91,6
86,1
86,9
109,5
80,9
89,9
76,2
87,2
89,1
3,7
4,6
3,8
8,7
0,7
4,1
2,3
7,9
14,0
0,4
8,3
13,6
6,1
7,2
5,5
11,2
91,8
23,3
6,7
5,0
4,3
7,5
7,4
3,2
9,0
3,8
5,8
1,5
96,7
81,7
93,2
66,1
88,8
33,4
96,1
94,4
99,2
85,7
73,8
88,1
83,5
89,3
100,7
106,7
19,1
106,6
87,7
101,6
99,5
90,3
100,6
97,0
102,0
91,9
101,6
85,2
3,5
9,4
7,7
0,2
1,5
9,6
0,3
3,1
5,2
1,9
0,9
0,4
2,5
3,3
0,7
3,1
49,0
0,0
3,2
1,1
3,3
1,2
1,6
1,1
1,0
1,5
0,5
0,8
106
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
metiocarbe sulfona
mevinfos
miclobutanil
monesina
monocrotofos
monolinurom
oxamil
paraoxon
pendimetalina
piraclostrobina
pirazofos
piridaben
piridafetiona
piridato
pirimetanil
pirimicarbe
pirimifos metilico
procloraz
profenofos
profoxidim
propargito
propiconazole
propizamida
propoxur
quinclorac
quinoxifeno
108,8
114,6
77,6
86,9
96,0
65,8
86,2
102,8
89,0
108,3
102,7
90,5
91,8
76,9
105,6
69,6
74,5
98,4
88,9
84,1
81,1
87,0
82,7
87,8
101,9
107,4
33,6
103,6
3,3
0,4
0,6
0,2
0,2
1,0
0,1
3,4
1,0
0,6
0,2
4,6
0,9
0,4
0,5
1,2
0,3
0,6
2,8
0,9
0,4
1,5
0,2
0,7
0,6
0,4
7,6
0,1
92,7
106,5
110,0
103,0
98,9
83,9
102,1
117,3
111,0
106,9
97,5
114,5
92,8
94,0
105,6
81,8
114,3
116,7
108,2
107,3
103,9
102,4
99,3
99,5
101,9
115,9
86,4
88,7
6,2
1,0
8,0
1,8
6,6
9,8
3,1
1,0
0,6
13,0
19,1
2,1
15,2
14,6
13,8
12,0
4,3
2,9
11,8
6,7
9,5
7,4
11,0
16,0
22,3
1,8
7,3
4,3
90,9
93,0
77,3
86,0
110,1
60,3
67,5
86,1
89,0
102,6
88,9
88,6
94,8
70,6
116,1
59,1
83,5
83,5
81,2
83,8
75,1
77,9
83,4
89,8
110,0
88,6
79
67,3
15,2
2,0
6,8
4,8
5,6
3,7
5,7
8,5
1,7
11,6
0,1
1,8
0,3
4,7
1,8
3,4
9,3
5,7
2,6
0,1
8,7
1,3
3,5
0,9
2,6
2,2
20,0
0,7
93,2
97,2
82,8
92,0
95,9
59,5
95,4
83,5
102,0
113,3
84,8
88,5
77,2
64,9
88,3
57,9
85,2
81,7
76,7
76,9
75,0
76,6
71,6
75,8
87,9
92,9
66,8
72,8
17,5
7,1
1,6
1,3
2,5
16,8
5,5
4,6
9,7
0,6
9,0
1,1
0,3
2,9
1,3
4,3
0,6
4,2
0,2
1,5
5,5
7,4
1,4
2,8
13,4
2,6
11,2
1,9
100,7
97,1
89,4
91,1
103,5
79,5
93,8
89,9
96,8
103,9
93,8
99,5
100,5
64,8
102,2
49,7
82,7
93,3
84,8
90,1
82,4
76,7
79,5
87,8
93,3
94,4
20,2
61,0
2,6
8,9
3,5
2,4
1,1
2,0
1,1
2,1
1,6
0,2
1,0
5,5
3,3
1,5
4,5
5,7
3,6
2,3
1,3
0,9
2,1
2,4
2,3
5,3
0,5
1,6
1,4
3,1
107
78 robenidina
79 salbutamol
80 salinomicina
81 simazina
82 sulfadimetoxina
83 sulfametazina
84 sulfatiazol
85 tebuconazole
86 terbufos
87 terbutilazina
88 tetraconazole
89 tiacloprido
90 tiametoxam
91 tidicarbe
92 tolclofos
93 triadimefom
94 triadimenol
95 triazofos
96 triclorfom
97 trifloxistrobina
98 triflumizole
99 trimetroprima
100 vamidationa
* (g L-1
78,3
70,0
54,9
88,6
75,0
88,1
91,0
88,8
80,2
101,3
112,8
94,5
94,0
61,3
85,5
94,9
98,6
104,7
99,0
94,5
82,4
76,7
91,4
0,7
12,0
0,6
1,1
0,4
1,0
4,2
2,0
1,9
0,2
0,4
1,1
0,4
1,8
3,3
4,1
2,1
0,6
0,5
0,1
0,5
0,1
1,3
89,8
56,00
63,2
112,0
112,2
108,2
111,2
98,7
94,5
117,9
90,8
108,7
110,2
117,2
111,9
110,1
94,3
113,7
118,3
104,4
105,7
101,2
101,8
14,8
17,0
13,8
5,2
2,9
2,7
2,1
11,5
7,8
0,1
26,3
4,5
5,5
6,4
13,6
7,1
18,8
0,8
0,3
13,5
12,8
13,8
9,4
74,3
56,3
56,6
60,5
89,7
83,7
77,4
90,1
78,7
86,8
102,8
85,3
89,6
54,7
91,0
117,3
113,8
118,0
88,3
89,3
79,5
73,7
89,6
4,2
7,5
0,4
6,6
1,8
1,8
6,2
2,2
8,0
10,9
12,0
1,6
6,3
11,0
4,4
1,5
0,1
6,7
5,7
8,3
1,9
11,8
1,4
71,4
45,0
49,1
89,2
104,2
91,7
88,3
79,1
72,2
92,1
84,3
93,7
95,2
87,3
60,8
102,4
91,2
88,7
99,7
73,2
71,1
86,7
92,3
6,7
17,0
11,4
3,3
1,6
1,0
8,7
3,1
0,6
4,4
4,6
8,9
1,1
2,2
28,5
1,0
3,1
5,7
9,4
4,4
3,0
3,8
10,5
76,0
58,0
56,7
95,8
95,6
99,4
93,2
100,1
86,2
90,8
107,9
98,6
102,5
3,7
105,5
94,1
92,7
100,1
103,0
100,2
87,6
87,4
101,7
5,0
10,0
5,0
15,4
1,2
5,0
2,8
3,5
7,3
1,7
4,0
0,3
2,6
13,5
4,8
0,1
8,7
3,7
3,6
2,2
0,9
0,5
0,6
108
4.5.6 Efeito Matriz em LC-MS/MS

A taxa de recuperao em alimentos, nem sempre satisfatria devido aos
efeitos de matriz da anlise cromatogrfica (Tabela 14). A quantificao dos
compostos pode ser afetada pela presena de compostos co-extrados da matriz.
O efeito matriz nos resultados pode ser significativo (>10%) e deve ser
determinado cuidadosamente. A avaliao exata do efeito matriz pode evitar
estimativas errneas dos teores dos analitos, alm de ser mais confivel. Para
reduo do efeito matriz recomendvel o uso de curva analtica preparada em
extratos da matriz isenta de agrotxicos (RIBANI et al., 2004), ou ainda submeter os
extratos a novos processos de limpeza. O efeito matriz sempre sofre variaes ao
longo do tempo e tambm varia dependendo da condio do instrumento utilizado,
devendo, por isso, ser constantemente avaliado, tanto na etapa de desenvolvimento
do mtodo quanto na aplicao deste mtodo nas anlises de rotina (PRESTES,
2007).
109
Tabela 14. Avaliaao do efeito matriz percentual dos agrotxicos e medicamentos veterinrios analisados por LCMS/MS modo EI (+/-), a partir de solues preparadas em acetonitrila e nos extratos das matrizes avaliadas.
n
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
Compostos
2,4 D
2,4,5 T
3-OH Carbofuran
atrazina
azinfos etilico
azinfos metilico
azoxistrobina
bentazona
bispiribaque
bitertanol
boscalida
bromoconazole
buprofezina
carbaril
carbendazina
carbofurano
carboxim
cianizina
clomazone
cloranfenicol
clorimurom
Carne
25,0 10,0
0
5
1
-5
14
22
-14
-4
-3
-4
7
12
-2
15
5
4
4
12
0
-6
30
37
5
6
9
6
8
2
-14
11
17
20
-75 -75
0
-15
-13
-4
-13
-4
5
12
5,0
18
25
13
3
21
47
33
23
39
16
65
26
25
22
-35
80
-74
18
29
-20
37
Fgado
25,0 10,0
-74 -70
-77 -75
5
9
-70 -76
10
3
-6
0
0
13
-3
24
0
20
-3
0
1
-6
-1
-18
-15 -18
-4
3
-6
15
-52 -52
2
6
8
24
11
24
0
12
-1
9
5,0
-62
-69
36
-60
26
18
43
21
37
-41
1
29
21
-4
34
-60
14
41
30
32
16
Efeito Matriz (%)

Rim
25,0 10,0 5,0
1
-1
62
10
16
60
17
-2
103
-1
-1
29
0
6
33
-1
11
-11
-3
-2
13
15
-13 105
-9
1
38
3
-5
37
2
8
28
-17 -24
15
9
9
41
-2
6
42
5
14
26
-11
-7
-8
14
-7
34
4
12
31
8
15
55
8
20
52
-5
8
18
Leite
25,0 10,0 5,0
1
-1
62
10
16
60
17
-2
103
-1
-1
29
0
6
33
-1
10
-11
-3
-2
13
15
-13 105
-9
1
38
3
-5
37
2
8
28
-17 -24
15
9
9
41
-2
6
42
5
14
26
-11
-7
-8
14
-7
34
4
12
31
8
15
55
8
20
52
-5
8
18
Ovo
25,0 10,0
-1
-3
23
1
4
-1
12
-15
39
-4
-1
-6
10
-52
16
2
-1
8
10
11
16
0
0
-1
13
6
24
12
20
-2
0
0
-6
1
-18
14
-18 -14
3
-3
16
7
5,0
0
-6
-18
-18
3
15
-52
6
24
24
12
9
2
-5
13
5
-5
22
-4
-4
12
110
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
clorpirifos etilico
clorpirifos metil
clorprofam
deltametrina
diazinona
diclofluanida
difenoconazole
dimetoato
epoxiconazole
etiona
fempropatrina
fempropimorfe
fenarimol
fentiona
fipronil
fluquiconazole
fluroxipir
flutalonil
imazalil
imidacloprido
iprovalicarbe
linurom
malationa
mecarbam
mepronil
metaconazole
metalaxil
metamidofos
-14
-10
8
3
-11
-18
-3
-7
-3
-11
-15
-7
-1
-36
-10
-20
-21
6
10
-12
-10
-12
-7
-11
13
-15
-8
-15
9
5
13
-2
0
-1
14
2
-12
-6
0
-1
-9
-41
-6
-11
-10
6
15
23
-5
-8
9
-6
6
-2
23
-2
12
24
33
24
12
29
-27
30
27
24
14
23
25
-20
23
17
11
-38
49
-15
-17
25
33
9
45
8
28
140
6
12
-2
0
1
14
-14
-3
7
-2
5
4
0
30
5
9
8
-14
17
-75
0
-13
-13
5
-14
-10
8
3
2
-5
13
5
-5
22
-4
-4
12
15
4
12
-6
37
6
6
2
11
20
-75
-15
-4
-4
12
9
5
13
-2
28
71
16
18
25
13
3
21
47
33
23
39
16
65
26
25
22
-35
80
-74
18
29
-20
37
12
24
33
24
10
8
8
-3
-5
12
-1
29
-4
-3
9
-1
1
-16
2
-2
4
6
-2
-17
2
0
-4
-9
-9
4
-3
-3
17
15
12
13
18
32
9
3
-10
0
2
10
1
-14
14
1
16
0
2
-8
8
13
5
-9
7
16
22
-1
43
25
30
20
11
31
19
17
4
31
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-19
36
20
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8
8
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1
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1
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2
-8
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7
16
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-1
43
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11
31
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15
28
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19
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36
31
-19
36
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48
46
38
-3
-12
27
7
12
47
-4
-10
4
-4
-10
4
-7
-1
23
4
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-1
10
16
-1
10
16
-3
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-18
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24
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0
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0
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17
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80
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2
19
-8
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18
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-3
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4
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2
17
9
2
17
23
-15
-75
-75
-74
-17
-8
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9
33
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12
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-7
111
50
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61
62
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64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
metiocarbe sulfona
mevinfos
miclobutanil
monesina
monocrotofos
monolinurom
oxamil
paraoxon
pendimetalina
piraclostrobina
pirazofos
piridaben
piridafetiona
piridato
pirimetanil
pirimicarbe
pirimifos metilico
procloraz
profenofos
profoxidim
propargito
propiconazole
propizamida
propoxur
quinclorac
quinoxifeno
-19
-3
-5
12
-1
29
-4
-3
9
-1
1
-16
2
-2
4
6
-2
-17
2
0
-4
-9
-9
4
-3
-3
-6
-19
1
13
18
32
9
3
-10
0
2
10
1
-14
14
1
16
0
2
-8
8
13
5
-9
7
16
22
-1
6
-9
3
20
11
31
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17
4
31
17
16
17
29
44
15
28
40
19
21
36
31
-19
36
20
48
46
38
10
1
-11
-18
-3
-7
-3
-11
-15
-7
-1
-36
-10
-20
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6
10
-12
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-12
-7
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13
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-1
14
2
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0
-1
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-6
-11
-10
6
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-2
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1
6
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-17
12
29
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27
24
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23
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17
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-38
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-17
25
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28
140
3
0
2
-8
-6
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5
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-17
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14
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-9
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-6
11
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-5
-6
8
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10
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-8
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19
26
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49
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8
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20
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14
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50
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0
5
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17
10
1
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19
26
8
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49
56
18
1
8
5
20
15
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18
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27
68
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29
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1
-19
-9
1
-9
7
20
-8
23
28
-5
10
-4
-5
10
-4
-15
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26
31
0
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31
-66
14
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6
-1
27
6
-1
27
4
16
48
-15
-2
140
-9
13
50
-9
13
50
5
11
33
-19
-4
5
-19
5
2
30
-15
-6
26
-15
-6
26
-3
22
46
-19
1
3
6
10
31
6
10
31
-10
-2
25
36
-9
-9
36
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112
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
robenidina
salbutamol
salinomicina
simazina
sulfadimetoxina
sulfametazina
sulfatiazol
tebuconazole
terbufos
terbutilazina
tetraconazole
tiacloprido
tiametoxam
tidicarbe
tolclofos
triadimefom
triadimenol
triazofos
triclorfom
trifloxistrobina
triflumizole
trimetroprima
vamidationa
6
-15
5
-10
-25
-11
-17
-8
-22
-17
-12
3
2
9
3
6
14
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-5
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6
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-2
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-6
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7
20
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3
-17
10
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10
27
26
33
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5
23
19
26
8
-4
49
56
18
1
8
5
20
15
14
18
-4
50
31
36
31
-19
36
20
48
46
38
10
1
27
-5
0
5
-6
-76
-1
40
19
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36
31
-19
2
0
-4
-9
-9
4
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-3
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-19
6
-8
-7
17
5
-66
5
-12
-10
-12
-7
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13
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-9
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-1
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-8
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18
0
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27
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-20
-8
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20
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3
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-6
5
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-10
-6
23
-22
-12
13
10
15
40
-12
16
23
113
4.6 Aplicao do mtodo
O mtodo desenvolvido foi aplicado para a determinao de resduos de

agrotxicos e medicamentos veterinrios em 7 amostras de carne, 5 de fgado, 5 de
rim, 16 amostras de leite e 8 de ovo obtidas em supermercados da cidade de Santa
Maria-RS. Em nenhuma das amostras analisadas, foram quantificados resduos
acima de 10 g kg-1 (carne, fgado, rim e ovo) ou 10 g L-1 (leite). Porm, em 3
amostras de carne, 2 de fgado e 1 de rim, foram detectados (>LOQ) os
medicamentos veterinrios sulfatiazol e sulfametazina.
114
5 CONCLUSES
O mtodo de extrao QuEChERS modificado, otimizado neste trabalho, tem
como vantagem ser um procedimento moderno e dinmico, que pode ser aplicado
em qualquer laboratrio, devido a simplificao de etapas lentas e trabalhosas,
geralmente empregadas em outros mtodos de extrao. Dessa forma, o mtodo de
extrao proposto apresenta como vantagens ser um procedimento simples e
rpido, com um menor nmero de etapas analticas, o que diminui a probabilidade
de erros, alm de ser barato e ambientalmente correto, devido ao baixo consumo de
solventes orgnicos (somente 10 mL de acetonitrila).
Alm disso, contribui no sentido do desenvolvimento de metodologias
analticas validadas empregando tcnicas modernas de extrao, e tambm devido
a existncia de poucos trabalhos cientficos publicados at o momento sobre a
extrao conjunta de agrotxicos e medicamentos veterinrios em amostras
utilizando o mtodo QuEChERS.
O pequeno consumo de reagentes e menor gerao de resduos tornam o
mtodo QuEChERS modificado vantajoso em comparao com os mtodos de
extrao convencionais, atendendo portanto aos princpios da qumica verde,
podendo o mesmo ser utilizado como um protocolo para investigar a presena
multirresduo de agrotxicos e medicamentos veterinrios simultaneamente em
amostras de origem animal (carne, fgado, rim, leite e ovo).
Destaca-se, tambm a vantagem do mtodo de extrao ser unificado para as
diferentes matrizes avaliadas, simplificando a aplicao em rotina.
O mtodo proposto demonstrou ser eficiente, apresentando bons resultados
de recuperao (70-120%) e de preciso (< 20%) para a maioria dos compostos
avaliados, comprovando a confiabilidade do mtodo.
Os valores de limite de quantificao do mtodo variaram entre 10 g kg-1 e
50 g kg-1, permitem que sejam determinados resduos destes compostos em
amostras de alimentos de origem animal, visando averiguar a observncia dos
limites legais de resduos permitidos.
A determinao dos agrotxicos em estudo por LC-MS/MS foi adequada,
permitindo a realizao de uma anlise qualitativa, obtida a partir de fragmentos de
massa caractersticos de cada analito, e quantitativa, atravs do modo de aquisio
115
MRM. As condies cromatogrficas otimizadas para determinao por LC-MS/MS

permitiram a identificao e quantificao dos 100 compostos estudados, em um
tempo total de anlise de 30 min.
As curvas analticas apresentaram linearidade entre 1,0 e 250,0 g L-1, com
valores de coeficiente de determinao maiores que 0,995 para a grande maioria
dos compostos avaliados.
Portanto, conclui-se que o mtodo mostrou-se adequado anlise simultnea
dos agrotxicos e medicamentos veterinrios em alimentos de origem animal (carne,
fgado, rim, leite e ovo) podendo ser usado na rotina de laboratrios de anlises de
resduos de agrotxicos e medicamentos veterinrios, visto que todos os parmetros
de validao encontraram-se dentro dos limites exigidos para validao de mtodos
cromatogrficos, atendendo satisfatoriamente os objetivos traados para este
trabalho.
116
TRATAMENTO DOS RESDUOS GERADOS
As atividades laboratoriais normalmente geram considerveis quantidades de

resduos lquidos e slidos proveniente dos ensaios analticos, que devem ser
tratados e descartados de forma adequada.
Neste trabalho, os resduos lquidos foram recolhidos, colocados em
recipientes separados e rotulados como halogenados e no-halogenados e logo
aps, encaminhados para o Almoxarifado, responsvel pelo tratamento final dos
resduos gerados, no Departamento de Qumica da UFSM.
J os resduos slidos, foram colocados em sacos plsticos de cor preta,
devidamente rotulados e logo em seguida, encaminhados ao Almoxarifado do
Departamento de Qumica da UFSM.
117
SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS
- Ampliao do escopo de agrotxicos e medicamentos veterinrios a serem

analisados;
- Avaliar a possibilidade de aplicao deste mtodo em outras matrizes de origem

animal, por exemplo, mel, derivados do leite e produtos crneos processados;
118
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ABIEC (ASSOCIAO BRASILEIRA DAS INDUSTRTIAS EXPORTADORAS DE
CARNE). Disponvel em <http://www.abiec.com.br>. Acesso em janeiro de 2011.
ALDER, L.; GREULICH, K.; KEMPE, G.; VIETH, B. Residue analysis of 500 high
priority pesticides: Better by GCMS or LCMS/MS? Mass Spectrometry Reviews,
25 (2006) 838.
ANASTASSIADES, M.; LEHOTAY, S.J.; STAJNBAHER, D.; SCHENCK, F.J. Fast

and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/partitioning and
"dispersive solid-phase extraction" for the determination of pesticide residues in
produce. Journal of AOAC International, 86 (2003) 412.
ANASTASSIADES, M.; SCHERBAUM E.; TASDELEN, B.; STAJNBAHER, D., Crop
Protection, Public Health, Environmental Safety, Wiley-VCH, Weinheim, Germany
(2007) 439.
ANDERSSON, A.; PALSHEDEN, H. Comparison of the efciency of different GLC
multi-residue methods on crops containing pesticide residues. Fresenius Journal
Analytical Chemistry, 339 (1991) 365.
ANVISA (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA). Disponvel em

<http://www.anvisa.gov.br>. Acesso em janeiro de 2011.
ANVISA (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA); Guia para Validao

de Mtodos Analticos e Bioanalticos, RE n 899, de 29/05/2003a.
ANVISA (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA), Resoluo RE n 899

de 29 de Maio, 2003b.
AOAC (Official Method 2007.01: Pesticide residues in foods by acetonitrile extraction

and partitioning with magnesium sulphate, AOAC International (2007).
119
ARCURI, P.B.; & MANTOVANI, H.C. Por que utilizar antibiticos em animais
produtores
de
alimentos.
Disponvel
<https://www.cptcursospresenciais.com.brbovinos/?pagina=artigos&>.
em
Acesso
em
janeiro de 2011.
ARTHUR, C.L.; PAWLISZYN, J. Solid phase microextraction with thermal desorption

using fused silica optical fibers. Analytical Chemistry, 62 (1990) 2145.
BALTUSSEN, E.; SANDRA, P.; DAVID, F.; JANSSEN, H.G.; CRAMERS, C. Study
into the Equilibrium Mechanism between Water and Poly(dimethylsiloxane) for Very
Apolar Solutes: Adsorption or Sorption? Analytical Chemistry, 71 (1999) 5213.
BANCO DO BRASIL. Diretoria do Agronegcio. Poltica Agrcola, 4 (2004) 4.
BARAKAT, A.A., BADAWY, H.M.A.; SALAMA, E.; ATTALLAH, E.; MAATOOK G.

Simple and rapid method of analysis for determination of pesticide residues in honey
using dispersive solid phase extraction and GC determination. International Journal
of Food, Agriculture & Environmental, 5 (2007) 97.
BARKER, S.A.; LONG, A.R.; SHORT, C.R. Isolation of drug residues from tissues by
solid phase dispersion. Journal of Chromatography A, 475 (1989) 353.
BCPC
(BRITISH
CROP
PRODUCTION
COUNCIL).
Disponvel
em
<http://www.bcpc.org/>. Acesso em janeiro de 2011.
BEGUIN, S.; JADAS-HCART, A.; TABET, J.C. Protocols for optimizing MS/MS
parameters with an ion-trap GC-MS instrument. Journal of Mass Spectrometry, 41
(2006) 1304.
BRAZILIAN
CHIKEN
(UNIO
BRASILEIRA
DE
AVICULTURA
(UBA)
ASSOCIAO BRASILEIRA DOS PRODUTORES E EXPORTADORES DE

FRANGOS). Disponvel em <http://www.brazilianchicken.com.br/>. Acesso em
janeiro de 2011.
120
CAMEL, V. Microwave-assisted solvent extraction of environmental samples. Trends

in Analytical Chemistry, 19 (2000) 229.
CARABIAS-MARTNEZ, R.; RODRGUEZ-GONZALO, E.; REVILLA-RUIZ, P.;

HERNNDEZ-MNDEZ; J. Pressurized liquid extraction in the analysis of food and
biological samples. Journal of Chromatography A, 1089 (2005) 1.
CEN
(EUROPEAN
COMMITTEE
FOR
STANDARDIZATION),
CEN/TC
275
15662:2008: Foods of plant origin - Determination of pesticide residues using GC-MS

and/or LC-MS/MS following acetonitrile extraction/partitioning and clean-up by
dispersive SPE - QuEChERS-method, European Union, 2008.
CHASIN, A.M.; NASCIMENTO, E.S.; NETO, L.M.R.; SIQUEIRA, M.E.P.B.;

ANDRAUS, M.H.; SALVADOR, M.C.; FERNCOLA, N.A.G.; GORNI, R.; SALCEDO,
S. Validao de mtodos em anlises toxicolgicas: uma abordagem geral. Revista
Brasileira de Toxicologia, 11 (1998) 1.
CHIARADIA, M.C.; COLLINS, C.H.; JARDIM, I.C.S.F. O estado da arte da
cromatografia associada espectrometria de massas acoplada espectrometria de
massas na anlise de compostos txicos em alimentos. Qumica Nova, 31 (2008)
623.
CNA (CONFEDERAO NACIONAL DA AGRICULTURA E PECURIA DO
BRASIL). Disponvel em <http://www.cna.org.br>. Acesso em janeiro de 2011.
CODEX ALIMENTARIUS, METHOD VALIDATION, JOINT FAO/WHO FOOD

STANDARDS PROGRAMME, Codex on Methods of Analysis and Sampling,
Budapeste, 2001.
CUNHA, S.C.; LEHOTAY, S.J., MASTOVSKA; K.; FERNANDES J.O.; Beatriz M.;
OLIVEIRA, P.P. Evaluation of the QuEChERS sample preparation approach for the
analysis of pesticide residues in olives. Journal of Separation Science, 30 (2007)
620.
121
CVUA (CHEMISCHEN UND VETERINRUNTERSUCHUNGSMTER). Disponvel

em <http:www.quechers.com>. Acesso em fevereiro de 2011.
DENOBILE, M., NASCIMENTO, E. S. Validao de mtodo para determinao de

resduos dos antibiticos oxitetraciclina e doxitetraciclina em leite por cromatografia
lquida de alta eficincia. Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas, 40 (2004)
209.
DIEZ, C.; TRAAG, W.A.; ZOMMER, P.; MARINERO, P.; ATIENZA, J. Comparison of
an acetonitrile extraction/partitioning and dispersive solid-phase extraction method
with classical multi-residue methods for the extraction of herbicide residues in barley
samples. Journal of Chromatography A, 1131 (2006) 11.
DOLE, M.; MACK, L.L.; HINES, R. L.; MOBLEY, R.C.; FERGUNSON, L.D.; ALICE,
M.B. "Molecular beams of macroions". Journal of Chemical Phisics, 49 (1968)
2240.
EMBRAPA (EMPRESA BRASILEIRA PESQUISA AGROPECURIA). Disponvel em

<http://www.cnpgl.embrapa.br/panorama/conjuntura19.html>. Acesso em janeiro de
2011.
FAO (FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION OF THE UNITED NATIONS).

Disponvel em <http://www.fao.org>. Acesso em janeiro de 2011.
FDA (UNITED STATES FOOD AND DRUG ADMINISTRATION). Disponvel em

<http://www.fda.gov>. Acesso em janeiro de 2011.
FERNNDEZ-ALBA, A.R., Chromatographic - Mass Spectrometry Food Analysis for

Trace Determination of Pesticide Residues, Elsevier: Amsterdam (2005).
FVO
(FOOD
AND
VETERINARY
OFFICE).
Disponvel
<http://www.who.int/foodsafety/chem/en/>. Acesso em janeiro de 2011.
em
122
GARRIDO-FRENICH,
A.;
GONZALEZ-RODRIGUEZ,
I.;
ARREBOLA,
F.J.;
MARINEZ-VIDAL, J.L. Potentiality of Gas ChromatographyTriple Quadrupole Mass

Spectrometry in Vanguard and Rearguard Methods of Pesticide Residues in
Vegetables. Analytical Chemistry, 77 (2005) 4640.
GARRIDO-FRENICH, A.; MARTNEZ-VIDAL, J.L.; LPEZ-LPEZ, T.; CRTESAGUADO, S.; MARTNEZ-SALVADOR, I. Monitoring multi-class pesticide residues in
fresh fruits and vegetables by liquid chromatography with tandem mass
spectrometry. Journal of Chromatography A, 1048 (2004) 199.
GIHP (General Inspectorate for Health Protection). Analytical Methods for Pesticide
Residues in Foodstuffs, General Inspectorate for Health Protection, 6th ed., The
Hage, 1996.
GUANZIROLI, C.E. Agronegcio no Brasil: perspectivas e limitaes. Disponvel em

<http://www.uff.br/econ/download/tds/UFF_TD186.pdf>. Acesso em setembro de
2008.
HERNNDEZ-BORGES, J.; BORGES-MIQUEL, T. M.; RODRGUEZ-DELGADO, M.

A.; CIFUENTES, A. Sample treatments prior to capillary electrophoresismass
spectrometry. Journal of Chromatography A, 1153 (2007) 214.
HERNNDEZ-BORGES, J.; CABRERA, J.C.; RODRGUEZ-DELGADO; M.A,

HERNNDEZ-SUAREZ, E.M.; SACO, V.G. Analysis of pesticide residues in
bananas harvested in the Canary Islands (Spain). Food Chemistry, 113 (2009) 313.
HIEMSTRA, M.; KOK, A. Comprehensive multi-residue method for the target analysis
of pesticides in crops using liquid chromatographytandem mass spectrometry.
Journal of Chromatography A, 1154 (2007) 3.
HILL, A. R. C., REYNOLDS, S. L. Guidelines for in-house validation of analytical

methods for pesticide residues in food and animal feeds. The Analyst, 124 (1999)
953.
123
HUBER, L. Validation of analytical methods: review and strategy. LC-GC

International, 2 (1998) 96.
HYTYLINEN, T. On-line coupling of extraction with gas chromatography. Journal
of Chromatography A, 1186 (2008) 39.
IBGE (INSTITUTO BRASILEIRO DE GEOGRAFIA E ESTATSTICA). Disponvel em

<http://www.ibge.gov.br>. Acesso em janeiro de 2011.
ICH (INTERNATIONAL CONFERENCE ON HARMONISATION OF TECHNICAL

REQUIREMENTS FOR REGISTRATION OF PHARMACEUTICALS FOR HUMAN
USE). Disponvel em <http://www.ich.org/>. Acesso em janeiro de 2011.
INMETRO (INSTITUTO NACIONAL DE METROLOGIA, NORMALIZAO E

QUALIDADE INDUSTRIAL). Disponvel em <http://www.inmetro.gov.br>. Acesso em
janeiro de 2011.
INMETRO (INSTITUTO NACIONAL DE METROLOGIA, NORMALIZAO E

QUALIDADE INDUSTRIAL); Orientaes sobre Validao de Mtodos de Ensaios
Qumicos, DOQ-CGCRE-008, 2003.
IRIBARNE, J.V.; THOMSON, B.A. On the evaporation of small ions from charged
droplets. Journal of Chemical Phisics, 64 (1976) 2287.
ISI OF KNOWLEDGE. Disponvel em <http://www.isiknowledge.com>. Acesso em

fevereiro de 2011.
ISO (INTERNATIONAL STANDARD ORGANIZATION). General Requirements for

the Competence of Testing and Calibration Laboratories, ISO/EC 17025, 2005.
IUPAC (INTERNATIONAL UNION OF PURE AND APPLIED CHEMISTRY).

Disponvel em <http://goldbook.iupac.org/R05305.html>. Acesso em janeiro de 2011.
KOESUKWIWAT, U.; LEHOTAY, S.J.; MASTOVSKA, K.; DORWEILER, K.J.;

LEEPIPATPIBOON, N. Extension of the QuEChERS Method for Pesticide Residues
124
in Cereals to Flaxseeds, Peanuts, and Doughs. Journal of Agricultural and Food

Chemistry, 58 (2010) 5950.
KOESUKWIWAT,
U.;
SANGUANKAEW,
K.;
LEEPIPATPIBOON,
N.
Rapid
determination of phenoxy acid residues in rice by modified QuEChERS extraction

and liquid chromatographytandem mass spectrometry. Analytica Chimica Acta
626 (2008) 10.
KRIJGSMAN, W.; VAN DE KAMP, C. G.; Journal of Chromatography 171 (1976)

201.
LANAS, F.M., Validao de Mtodos Cromatogrficos de Anlise, 6 ed., So

Carlos, Editora RiMa, 2004.
LANAS, F.M.; Extrao em Fase Slida (SPE), 4 ed., So Carlos, Editora RiMa,
2004.
LANAS, F.M. A Cromatografia Lquida Moderna e a Espectrometria de Massas:

finalmente compatveis? Scientia Chromatographica, 1 (2009) 35.
LEANDRO, C.C.; FUSSELL, R.J.; KEELY, B.J. Determination of priority pesticides in

baby foods by gas chromatography tandem quadrupole mass spectrometry. Journal
of Chromatography A, 1085 (2005) 207.
LEHOTAY, S., Determination of Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile

Extraction and Partitioning with Magnesium Sulfate: Collaborative Study. Journal of
AOAC International, 90 (2007) 485.
LEHOTAY, S.J., HIEMSTRA, M., BODEGRAVEN, P., KOK , A. Validation of a Fast

and Easy Method for the Determination of Residues from 229 Pesticides in Fruits
and Vegetables Using Gas and Liquid Chromatography and Mass Spectrometric
Detection. Journal of AOAC International, 88 (2005a) 595.
125
LEHOTAY, S.J., in MARTINEZ VIDAL, J.L.; GARRIDO FRENICH, A. (Eds.),

Pesticide Protocols, Methods in Biotechnology Series 19, Humana Press, Totowa,
NJ, USA, 2006, p. 239.
LEHOTAY, S.J., IN: ZWEIGENBAUM, J. (Ed.), Pesticide Protocols, Methods in

Biotechnology Series, Humana Press, Totowa, NJ, USA, 2010b.
LEHOTAY, S.J., LIGHTFIELD, A.R., HARMAN-FETCHO, J.A., DONOGHUE, D.J.,

Analysis of Pesticide Residues in Eggs by Direct Sample Introduction/Gas
Chromatography/Tandem Mass Spectrometry. Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 49 (2001) 4589.
LEHOTAY, S.J., MASTOVSK, K., LIGHTFIELD, A.R. Use of Buffering and Other
Means to Improve Results of Problematic Pesticides in a Fast and Easy Method for
Residue Analysis of Fruits and Vegetables. Journal of AOAC International, 88
(2005b) 615.
LEHOTAY, S.J., MASTOVSKA, K., YUN, S.J. Evaluation of Two Fast and Easy
Methods for Pesticide Residue Analysis in Fatty Food Matrixes. Journal of AOAC
International 88 (2005) 630.
LEHOTAY, S.J; SON, K. A.; KWON, H.; KOESUKWIWAT, U.; FU, W.; MASTOVSKA,
K.; HOH, E.; LEEPIPATPIBOON, N.; Comparison of QuEChERS sample preparation
methods for the analysis of pesticide residues in fruits and vegetables. Journal
Chromatography A, 1217 (2010a) 2548.
LOURENO, J. C.: "Agronegcio brasileiro: projees de crescimeto e entraves de

infra-estrutura
logstica"
(2009).
Disponvel
em
<http://www.eumed.net/cursecon/ecolat/br/09/jcl.htm>. Acesso em janeiro de 2011.
LUKE, M.; FROBERG, J. E.; MASUMOTO, H.T. Extraction and clean up of

organochlorine, organophosphate, organonitrogen and hydrocarbon pesticides in
produce for determination by gasliquid chromatography. Journal of AOAC, 58
(1975) 1020.
126
LUKE, M.A.; DOOSE, G.M. A modication of the Luke multiresidue procedure for low
moisture, non fatty products. Bulletin of Environmental and Contamination
Toxicology, 30 (1983) 110.
MAJORS, R.E. QuEChERS - A New Sample Preparation Technique for Multiresidue

Analysis of Pesticides in Foods and Agricultural Samples (2007). Disponvel em
<http://chromatographyonline.findanalytichem.com/lcgc/article/articleDetail.jsp?id=42
9505>. Acesso em janeiro de 2011.
MAJORS,
R.E.
The
QuEChERS
Revolution
(2010).
Disponvel
em
<http://chromatographyonline.findanalytichem.com/lcgc/GC/The-QuEChERSRevolution/ArticleStandard/Article/detail/704028>. Acesso em janeiro de 2011.
MAPA (MINISTRIO DA AGRICULTURA PECURIA E ABASTECIMENTO).

Disponvel em <http://www.agricultura.gov.br>. Acesso em janeiro de 2011.
MARTNEZ-GALERA,
M.;
GIL-GARCIA,
M.D.;
SANTIAGO-VALVERDE,
R.
Determination of photoirradiated high polar benzoylureas in tomato by HPLC with

luminol chemiluminescence detection. Talanta, 76 (2008) 815.
MARTINEZ-VIDAL, J. L.; ARREBOLA, F. J.; MATEU-SANCHEZ, M. Application to

routine analysis of a method to determine multiclass pesticide residues in fresh
vegetables
by
gas
chromatography/tandem
mass
spectrometry.
Rapid
Communications in Mass Spectrometry, 16 ( 2002) 1106.
MARTINEZ-VIDAL, J.L.; ARREBOLA-LIBANAS, F.J., GONZALEZ-RODRIGUEZ,

M.J.; GARRIDO-FRENICH, A.; FERNNDEZ-MORENO, J.L. Validation of a gas
chromatography/triple quadrupole mass spectrometry based method for the
quantification of pesticides in food commodities. Rapid Communications in Mass
Spectrometry, 20 (2006) 365.
MASTOVSKA, K.; DORWEILER, K.J.; LEHOTAY, S.J.; WEGSCHEID, J.S.,

SZPYLKA, K.A. Pesticide Multiresidue Analysis in Cereal Grains Using Modified
127
QuEChERS Method Combined with Automated Direct Sample Introduction GCTOFMS and UPLC-MS/MS Techniques. Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 58 (2010) 5959.
MATOVSK, K.; LEHOTAY, S.J. Determination of photoirradiated high polar
benzoylureas
in
tomato
by
HPLC
with
luminol
chemiluminescence
detection. Journal of Chromatography A, 1040 (2004) 259.
MENDIOLA, J. A.; HERRERO, M.; CIFUENTES, A.; IBAEZ, E. Use of compressed

fluids for sample preparation: Food applications. Journal of Chromatography A,
1152 (2007) 234.
MERCER, G. E. Determination of 112 Halogenated Pesticides Using Gas

Chromatography/Mass Spectrometry with Selected Ion Monitoring. Journal of AOAC
International, 88 (2005) 1452.
MILLS, P.A; ONLEY, J.H.; GUITHER, R.A. Rapid method for chlorinated pesticide
residues in non fatty foods. Journal of AOAC, 50 (1963) 430.
NEZ, O., MOYANO, E., GALCERAN, M. T., LCMS/MS analysis of organic toxics
in food. Trends in Analytical Chemistry, 24 (2005) 683.
OLIVEIRA, L.M.; SARANTPOULOS, C.I.G.L.; CUNHA, D.G.; MOREIRA, C.Q.;

LEMOS, A.B. Diagnstico da qualidade tecnolgica de embalagens plsticas
barreira a gasesutilizadas para preservao de produtos crneos. Relatrio final
FAPESP, processo2000/09565-0. Campinas, CETEA ITAL, p. 61, 2003.
PAY P., ANASTASSIADES, M.; MACK D., SIGALOVA I.; TASDELEN, B., OLIVA,
J.; BARBA, A.; Analysis of pesticide residues using the Quick Easy Cheap Effective
Rugged and Safe (QuEChERS) pesticide multiresidue method in combination with
gas and liquid chromatography and tandem mass spectrometric detection.
Analytical and Bioanalytical Chemistry, 389 (2007) 1697.
PIZZUTTI, I.R.; KOK, A.; ZANELLA, R.; ADAIME, M.B.; HIEMSTRA, M.; WICKERT,
C.; PRESTES, O.D. Method validation for the analysis of 169 pesticides in soya
128
grain, without clean up, by liquid chromatographytandem mass spectrometry using

positive and negative electrospray ionization. Journal of Chromatography A, 1142
(2007) 123.
PASCHOAL J.A.R.; RATH, S.; AIROLDI, F.P.S.; REYES, F.G.R. Validao de
mtodos cromatogrficos para a determinao de resduos de medicamentos
veterinrios em alimentos. Qumica Nova, 31 (2008) 1190.
PONCHIO, L. A.; GOMES, A. L.; PAZ, E. Perspectivas de consumo de leite no
Brasil.
Disponvel
em
<http://www.cepea.esalq.usp.br/pdf/artigo_leite_04.pdf>.
Acesso em janeiro de 2011.

PRESTES, O.D.; Friggi, C.A.; Adaime, M,B.; Zanella, R. QuEChERS - Um mtodo
moderno de preparo de amostra para determinao multirresduo de pesticidas em
alimentos por mtodos cromatogrficos acoplados espectrometria de massas.
Qumica Nova, 32 (2009) 1620.
PRIMER, A. Food Safety Applications in Mass Spectrometry, Agilent Technologies,
USA, 2004.
RIBANI M.; BOTTOLI C.B.G.; COLLINS, C.H.; JARDIM, I.C.S.F.; E. MELO, L.F.C.
Validao em mtodos cromatogrficos e eletroforticos. Qumica Nova, 27 (2004)
771.
ROMERO-GONZALEZ, R.; PASTOR-MONTORO, E.; MARTNEZ-VIDAL, J.L.;
GARRIDO-FRENICH, A. Application of hollow fiber supported liquid membrane
extraction to the simultaneous determination of pesticide residues in vegetables by
liquid chromatography/mass spectrometry. Rapid Communications in Mass
Spectrometry 20 (2006) 2701.
SAITO, Y; KODAMA S.; MATSUNAGA, A.; YAMAMOTO, A. Multiresidue
Determination of Pesticides in Agricultural Products by Gas Chromatography/Mass
Spectrometry with Large Volume Injection. Journal of AOAC International, 87
(2004) 1356.
129
SANCO (EUROPEAN COMMISSION), Quality Control Procedures for Pesticide

Residues Analysis, 3 Edio, Documento N SANCO/10476/2003, 5 de Fevereiro
2004, Bruxelas, Blgica. 2010
SCHENCK, F.J.; BROWN, A.N.; PODHORNIAK, L.V.; PARKER A.; RELIFORD M.;
WONG, J.W. A Rapid Multiresidue Method for Determination of Pesticides in Fruits
and Vegetables by Using Acetonitrile Extraction/Partitioning and Solid-Phase
Extraction Column Cleanup. Journal of AOAC International, 91 (2008) 422.
SHIMELIS, O.; YANG, Y; STERNERSON, K;. KANEKO, T.; YE, M. Evaluation of a

solid-phase extraction dual-layer carbon/primary secondary amine for clean-up of
fatty acid matrix components from food extracts in multiresidue pesticide analysis. J.
Chromatography A, 1165 (2007) 18.
SPISSO, B. F.; NOBREGA, A. W.; MARQUES, M. A. S. Resduos e contaminantes
qumicos em alimentos de origem animal no Brasil: histrico, legislao e atuao da
vigilncia sanitria e demais sistemas regulatrios. Cincia & Sade Coletiva, 14
(2009) 2091.
STAN, H.J. Pesticide residue analysis in foodstuffs applying capillary gas
chromatography with mass spectrometric detection: State-of-the-art use of modified
DFG-multimethod
S19
and
automated
data
evaluation. Journal
of
Chromatography A, 892 (2000) 347.
STOLKER, A.M.; BRINKMAN, U.A.Th. Analytical strategies for residue analysis of

veterinary drugs and growth-promoting agents in food-producing animals - a review.
Journal of Chromatography A,1067 (2005) 15.
STORHERR, R.W.; OTT, P.; WATTS, R.R. A general method for organophosphorus
pesticide residues in non fatty foods. Journal of AOAC, 54 (1971) 513.
UENO E.; OSHIMA, H., SAITO, I., MATSUMOTO, H., YOSHIMURA, Y.;
NAKAZAWA, H. Multiresidue Analysis of Pesticides in Vegetables and Fruits by Gas
Chromatography/Mass Spectrometry after Gel Permeation Chromatography and
130
Graphitized Carbon Column Cleanup. Journal of AOAC International, 87 (2004)

1003.
WARDENCKI, W.; MICHULEC, M., CURYO, J., Int. J. Food Sci.Technol., 39 (2004)
703.
WHO
(WORLD
HEALTH
ORGANIZATION).
Disponvel
em
<http://www.who.int/foodsafety/en/>. Acesso em janeiro de 2011.
ZOCCAL, R.; CARNEIRO, A. V. Uma anlise conjuntural da produo de leite

brasileira. Disponvel em <http://www.cileite.com.br/artigos/artigo.php?id=1>. Acesso
em janeiro de 2011.

Tese Osmar

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA

CENTRO DE CINCIAS NATURAIS E EXATAS

MTODO RPIDO PARA A DETERMINAO SIMULTNEA DE

Osmar Damian Prestes

Santa Maria - RS, Brasil

MTODO RPIDO PARA A DETERMINAO SIMULTNEA DE

Osmar Damian Prestes

Tese apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Qumica, rea

Orientador: Prof. Dr. Renato Zanella

Santa Maria - RS, Brasil

Universidade Federal de Santa Maria

A Comisso Examinadora, abaixo assinada,

MTODO RPIDO PARA A DETERMINAO SIMULTNEA DE RESDUOS DE

como requisito parcial para a obteno do grau de Doutor em Qumica

Nossa vida um caminho cheio de incertezas,

todos os demais familiares e amigos, e a cada um que de alguma forma

Palavras-chave: QuEChERS, LC-MS/MS, agrotxicos, medicamentos veterinrios

Representao das etapas das principais verses do mtodo

Representao esquemtica do ensaio 1 (mtodo QuEChERS

medicamentos veterinrios em amostras de origem animal.......

Representao esquemtica do ensaio 2 (mtodo QuEChERS

medicamentos veterinrios em amostras de origem animal.......

Representao esquemtica do ensaio 3 (mtodo QuEChERS

Cromatogramas totais obtidos por LC-MS/MS a apartir de

modificado, em B) carne, C) fgado, D) rim, E) leite e F) ovo.....

Cromatograma obtido por LC-MS/MS modo MRM, para uma

Representao da praticidade de operao do mtodo

Representao do mtodo QuEChERS modificado utilizado

Percentual de agrotxicos e medicamentos veterinrios em

120%, >120%, aps ensaios de fortificao e recuperao

Percentual de agrotxicos e medicamentos veterinrios em

Percentual de agrotxicos e medicamentos veterinrios em

Percentual de agrotxicos e medicamentos veterinrios em

Percentual de agrotxicos e medicamentos veterinrios em

Estrutura dos compostos cidos analisados............................... 102

Ordem cronolgica dos principais mtodos de anlise de

Informaes dos padres analticos slidos de agrotxicos e

Gradiente utilizado para eluio dos compostos............................ 61

Condies empregadas no sistema cromatogrfico LC-MS/MS..

Agrotxicos e medicamentos veterinrios quantificados por LC-

MS/MS modo ESI (+/-) e modo de aquisio MRM, tempo de

Percentual de compostos que apresentaram recuperaes

Coeficientes de determinao (r2) das curvas analticas, obtidos

Percentuais de recuperao e RSD para a repetitividade do

Percentuais de recuperao e RSD para a repetitividade do

Percentuais de recuperao e RSD para a repetitividade do

Percentuais de recuperao e RSD para a repetitividade do

Percentuais de recuperao e RSD para a repetitividade do

intermediria do mtodo QuEChERS modificado.........................

Avaliao do efeito matriz percentual dos agrotxicos e

LISTA DE ABREVIATURAS E SMBOLOS

SANCO - Directorate General for Health and Consumer Affairs

UFSM Universidade Federal de Santa Maria

2.1 A importncia do agronegcio para o Brasil...................................... 21

2.1.2 O setor do leite bovino no Brasil..........................................................

2.1.3 A avicultura no Brasil............................................................................

2.6.1.1 Mtodo QuEChERS original.............................................................. 36

2.6.1.3. Versatilidade e praticidade do mtodo QuEChERS.........................

2.6.1.4. Limitaes do mtodo QuEChERS..................................................

2.7 Tcnicas cromatogrficas para a determinao de agrotxicos e

2.7.1 Cromatografia Gasosa acoplada Espectrometria de Massas..........

2.7.2 Cromatografia Lquida acoplada Espectrometria de Massas...........

2.7.2.1 Fontes de ionizao utilizadas no acoplamento LC-MS.................... 45

2.7.2.1.2 Ionizao qumica a presso atmosfrica......................................