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MICROBIOLOGIA GENERAL

CURSO 2009
TEMA: Introduccin a la Microbiologa.
DOCENTE: Dra. Nora In
Bibliografa recomendada:
Brock Biologa de los Microorganismos de Madigan, Martiniko y Parke, 10a edicin
(PEARSON, Prentice Hall).
Bioqumica de Stryer, Berg y Tymoczko, 5ta edicin (Editorial Revert)
Microbiology de Prescott, Harley y Klein 7ma edicin (McGraw-Hill).
Sitio web recomendado: http://www.ugr.es/local/eianez

Microbiologa
Es el estudio de los microorganismos
Como ciencia bsica permite conocer los
procesos vitales en sistemas simples.
Como ciencia aplicada permite solucionar
problemas prcticos, por ej. en medicina,
agricultura, industria, etc.

Caractersticas de la clula
Las clulas microbianas son distintas a las
clulas de animales o de plantas.
Crecen, se multiplican, generan energa.
A diferencia de las clulas de animales o
de plantas, las clulas microbianas
pueden vivir en forma aislada de otras
clulas.

a y b: organismos pluricelulares, compuestos por muchos tejidos que forman rganos;


c y d: microorganismos. (c) bacterias rojas, (d) cianobacterias.

La microbiologa estudia
Las clulas vivas: como trabajan y como
existen en vida libre.
La diversidad de los microorganismos.
Como evolucionan.
Los distintos procesos que llevan a cabo.

La microbiologa es una ciencia


biolgica
Como ciencia bsica es la herramienta
mas simple para el estudio de procesos
vitales.
Como ciencia aplicada se puede utilizar
en distintos campos: para el estudio de la
produccin animal; fertilidad de la tierra;
enfermedades humanas, de animales y de
plantas; procesos biotecnolgicos o
Biotecnologa, etc.

Los microorganismos como clulas


Es la unidad fundamental de la vida.
Posee membrana celular y en algunos
casos pared.
En el citoplasma se encuentran sustancias
qumicas, estructuras subcelulares y una
regin nuclear o ncleo.
Las clulas contienen protenas, cidos
nucleicos, lpidos y polisacridos

Ancestro comn
Se piensa que todas las clulas provienen
de un ancestro comn o ancestro
universal que a lo largo de millones de
aos de evolucin ha dado lugar a la gran
diversidad observada hoy en da.

Localizacin de las macromolculas en la clula

a) Las protenas se encuentran en toda la clula formando parte de estructuras


celulares y de las enzimas. b) cidos nucleicos. El DNA (verde) se encuentra en el
nucleoide de las clulas procariticas y en el ncleo de las clulas eucariticas. El
RNA (naranja) se encuentra en el citoplasma (mRNA y tRNA) y en los ribosomas
(rRNA). (c) Los polisacridos (amarillo) se localizan en la pared celular y, en
ocasiones, en grnulos de reserva internos. (d) Los lpidos (azul) se localizan en la
membrana citoplasmtica, la pared celular y en grnulos de reserva.

Peso seco de una clula en


crecimiento de Escherichia coli
aproximadamente 2,8 x 10-13 g
Peso total (70 % agua) = 9,5 x 10-13 g
El 96% del peso seco de una clula es
debido a las macromolculas y, dentro
de estas , las protenas son las ms
abundantes. Las protenas se
encuentran por toda la clula y tienen
funciones estructurales y catalticas. Le
sigue el cido ribonucleico (RNA)
presente en los ribosomas (junto con
las protenas), RNA mensajero y de
transferencia.

10

Las clulas tienen estructura y


tamao definidos. Sufren cambios
continuamente sustituyendo cada
una de sus partes. Son unidades
dinmicas. Son sistemas abiertos
que cambian continuamente pero
que a la vez permanecen dentro de
ciertos lmites.

11

Caractersticas de una clula

Metabolismo
Reproduccin
Diferenciacin
Comunicacin
Movimiento
Evolucin

12

Caractersticas de los sistemas vivos

1- Metabolismo. Toman sustancias


qumicas del medio y las transforman,
conservan parte de la energa de dichas
sustancias de modo que las clulas
puedan usarla, y luego eliminan los
productos de desecho. La clula es por
lo tanto un sistema abierto.
2- Reproduccin. Poseen la capacidad
de autoduplicarse es decir dirigir una
serie de reacciones qumicas que
conducen a su propia sntesis.
Como resultado de los procesos
metablicos, una clula crece y se
divide para formar dos clulas.

13

3- Diferenciacin. Proceso por el cual


se forman nuevas sustancias o
estructuras. A menudo forma parte de
un ciclo de vida en el cual la clulas
forman
estructuras
especiales
relacionadas con la reproduccin, la
dispersin o la supervivencia.
4Comunicacin.
Las
clulas
responden a seales qumicas en su
medio ambiente, tales como las
producidas por otras clulas. Pueden
comunicarse por medio de pequeas
molculas (como la AHL o lactona de
homoserina acilada), que se difunden y
pasan entre clulas vecinas.
Existen vias regulatorias que responden
a densidad de poblacin o Quorum

sensing (percepcion en quorum).

14

5- Movimiento. Algunos organismos


vivos son capaces de moverse por
autopropulsin.
Hay
diferentes
mecanismos responsables de la
movilidad en el mundo microbiano.

6- Evolucin. A diferencia de las


estructuras inertes, las clulas pueden
evolucionar. A travs del proceso de
evolucin las clulas pueden cambiar
permanentemente sus caractersticas y
transmitir las nuevas propiedades a su
descendencia.

15

Las clulas como mquinas y como sistemas


codificados
- Como mquinas qumicas: llevan a cabo
transformaciones qumicas. Convierten energa de una
forma a otra, rompen molculas, construyen molculas.
Las fuerzas conductoras son las enzimas o
catalizadores que son protenas capaces de acelerar la
velocidad de reacciones qumicas especficas.
- Como sistemas codificados: son anlogos a las
computadoras, que guardan y procesan la informacin
gentica (DNA) que pasa finalmente a la descendencia
durante la reproduccin.
El enlace entre estos dos atributos es el crecimiento, el
cual debe estar coordinado y regulado para lograr que
una clula se reproduzca con fidelidad.

16

Las clulas como dispositivos de codificacin procesan la


informacin que se transmite a su descendencia o se
traduce de otra forma.
Funcin codificante:
transcripcin
DNA

traduccin
RNA

Protena

La clula es un depsito de informacin de secuencias de


protenas almacenadas en forma codificada. El cdigo es el
cdigo gentico almacenado en el DNA
DNA: secuencia de nucletidos.
Cada aminocido de una protena est codificada por una secuencia de
tres base o triplete. A pesar de la diferencia en la frecuencia del uso de
un determinado codn para codificar por un aminocido determinado, el
cdigo gentico, con unas pocas excepciones, es el mismo para todos
los organismos.

17

Sntesis de tres tipos de molculas informacionales


En todas las clulas los genes estn
compuestos
de
cido
desoxirribonucleico
(DNA).
La
informacin guardada en el DNA
codifica la secuencia de una protena,
y lo hace a travs de una molcula
intermediaria, el cido ribonucleico
(RNA). La transferencia de la
informacin al RNA se denomina
transcripcin, y la molcula de RNA
que lleva la informacin que codifica
una protena se denomina RNA
mensajero (mRNA). Algunas regiones
del DNA que se transcribe codifican
tambin para otros tipos de RNA, tales
como el RNA de transferencia (tRNA)
y RNA ribosmico (rRNA). Gen es
entonces un segmento de DNA que
codifica para una protena, un rRNA o
un tRNA.

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Traduccin. La secuencia especfica de aminocidos en cada


protena est determinada por una secuencia especfica de bases en
el mRNA. Existe una correspondencia lineal entre la secuencia de
bases de un gen y la secuencia de aminocidos de un polipptido. Se
necesitan tres bases del mRNA para codificar un solo aminocido y
cada uno de estos tripletes se denomina codn. Este cdigo gentico
se traduce a protena por medio de la maquinaria para la sntesis de
protenas. Este sistema consta de ribosomas (compuestos a su vez de
protenas y rRNA), tRNA y varias enzimas. La transferencia de
informacin de cido nucleico a protena es unidireccional; la
secuencia de la protena no indica la secuencia del cido nucleico.
Esta transferencia unidireccional de la informacin se conoce como
dogma central de la biologa porque es compartida por todas las
formas de vida de nuestro planeta.

19

El cdigo gentico consiste de 64 codones. Tres de esos codones son reservados para stops,
y uno (AUG) es reservado para iniciacin. Hay un solo codon (UGG) para el amino cido
triptofano. Para el resto de los amino cidos hay al menos 2, usualmente 4 y algunas veces 6.
Por ejemplo hay 6 codones (UUA, UUG, CUU, CUC, CUA y CUG) para el aminocido leucina.

20

Cdigo gentico y frecuencia de uso


en Escherichia coli y en humanos.
Los distintos codones que codifinan para un
mismo aminocidos no son usados por los
diferentes organismos con la misma
frecuencia. De los 4 codones para glicina,
GGA es usado 26% del tiempo por genes
estructurales humanos y aproximadamente
9% del tiempo para las protenas
codificadas por genes de la bacteria E. coli.
Lo mismo ocurre con el uso de los codones
stop.
Codon

Amino cido

Frecuencia de uso
E. coli

humanos

GGA

glicina

0,09

0,26

UGA

stop

0,30

0,61

UAG

stop

0,09

0,17

UAA

stop

0,62

0,22

21

REPASO
cidos nucleicos
DNA y RNA o cidos nucleicos son polinucletidos. Son
macromolculas formadas por monmeros llamados
nucletidos. Un nucletido se compone de tres unidades:
un azcar de 5 tomos de carbono, la ribosa (en el RNA) y la
desoxiribosa (en el DNA), una base nitrogenada y una
molcula de fosfato, PO43-.

22

Estructura bsica de un nucletido. Se muestra un ribonucletido en el


RNA. Los deoxiribonucletidos, en el DNA , tienen un tomo de H en
lugar de un grupo OH en el carbono 2. Tanto los desoxiribonucletidos
como los ribonucletidos tienen un grupo fosfato en la posicin 5.

23

Nucletidos
Las bases nitrogenadas presentes en los cidos nucleicos pertenecen a
dos clases. Las bases puricas, adenina y guanina, contienen dos anillos
heterocclicos fusionados (que contienen ms de un tipo de tomo),
mientras que las bases pirimidnicas, timina, citosina y uracilo, contienen
un nico anillo heterocclico de seis elementos (que tiene ms de una
clase de tomos). Mientras que la guanina, adenina y citosina se
encuentra tanto en el DNA como en el RNA, la timina se presenta (salvo
raras excepciones) slo en el DNA y el uracilo slo en el RNA. En un
nucletido, una base se une a una pentosa por enlace glicosdico entre el
tomo de C1 del azcar y el tomo de N1 (en bases pirimidnicas) o el N9
(en bases pricas). Una base unida al azcar, sin el fosfato se denomina
nuclesido. Por lo tanto, los nucletidos son nuclesidos que contienen
uno o ms grupos de fosfato.

24

Bases pirimidnicas y bases pricas

Estructura de las bases del DNA y del RNA. No se indica el uracilo (U),
pero su estructura es la misma que la de la timina, excepto que carece
del grupo metileno en el carbono 5. Para establecer la unin de la base
al carbono 1del azucar fosfato, las bases pirimidnicas lo hacen a
travs del N-1 del anillo y las bases pricas mediante el N-9 del anillo.

25

Componentes del trifosfato de


adenosina.
Los nucletidos, en especial el
trifosfato de adenosina o
adenosina trifosfaro (ATP) acta
como fuente de energa qumica
liberando, mediante la ruptura
de un enlace fosfato, suficiente
energa como para suministrar
la requerida para muchas
reacciones celulares.

26

Estructura parcial de
una molcula de DNA.
Las bases pueden ser
adenina, guanina, citosina o
timina.
El esqueleto de un cido
nucleico es un polmero en el
que alternan molculas de
azcar y de fosfato. Los
nucletidos
estn unidos
covalentemente por medio de
un fosfato entre el C 3 de un
azcar y el C 5de otro azcar
adyacente. Esta unin es un
enlace fosfodiester ya que
un mismo fosfato se une por
enlace ster a dos azcares
separados.

27

Estructura simplificada del DNA y del RNA donde solo se muestran


las bases nitrogenadas

b) En el DNA las 2 cadenas de DNA son complementarias en su


secuencia de bases y estn unidas por puentes de hidrgeno.
c) En el RNA se muestra en (i) solo la estructura primaria y en (ii) una
secuencia que permite una estructura secundaria.

28

Apareamiento especfico entre la


adenina (A) y la timina (T) y entre la
guanina (G) y la citosina (C)
mediante puentes de hidrgeno.
Estos dos pares de bases son los
tpicos de los DNA bicatenarios. Los
tomos que se encuentran en el
surco principal de la doble hlice y
que interactan con las protenas se
resaltan en rojo. Tambin se indican
los esqueletos de desoxirribosa
fosfato de las dos cadenas del DNA

29

El DNA sufre dos transformaciones principales:


transcripcin traduccin.

replicacin y

El aparato de traduccin es una maquinaria muy compleja y es el centro


mismo de la funcin celular. Es el atributo central y fundamental de la
clula. Con pequeas variaciones es prcticamente el mismo en todos
los organismos. Ha sido probablemente una adquisicin muy temprana
en la historia de la Tierra y se ha mantenido sin grandes variaciones
hasta ahora. Durante el crecimiento celular y divisin debe haber una
duplicacin del cdigo gentico. La fidelidad de la copia debe ser muy
alta. Los errores suelen dar mutaciones. En general son perjudiciales. En
raros casos son beneficiosas y dan una ventaja selectiva permitiendo, si
el medio ambiente es adecuado, una seleccin natural. Esto forma parte
del proceso de evolucin
Teora de Darwin: mutacin

seleccin

evolucin

30

La evolucin necesita reproduccin, variacin y presin selectiva


El proceso evolutivo. Hay varios principios bsicos comunes a los
sistemas en evolucin, tanto si son simples colecciones de
molculas como poblaciones de organismos en competicin.
1- La propiedad fundamental de los sistemas en evolucin es su
capacidad para replicarse o reproducirse. Sin su capacidad de
reproducirse, cada especie molecular que pueda aparecer est
condenada a su extincin, tan pronto las molculas individuales se
degraden. Las molculas capaces de replicarse seguirn
representadas en la poblacin, incluso si el tiempo de vida de cada
molcula individual sigue siendo corto.
2- El segundo principio fundamental de la evolucin es la variacin.
Los sistemas que se replican deben sufrir cambios. Si un sistema se
replica siempre perfectamente, la molcula replicada ser igual a
las molculas progenitoras y la evolucin no podr tener lugar.

31

3- El tercer principio bsico de la evolucin es la competicin. Las


molculas que se replican compiten entre s por los recursos
disponibles, tales como los precursores qumicos, y la competicin
permite que ocurra el proceso biolgico de la evolucin por la
seleccin natural. La variacin producir distintas poblaciones de
molculas. Algunas de las variantes que surjan pueden estar, por
casualidad, mejor adaptadas que las molculas progenitoras para
sobrevivir y replicarse en las condiciones predominantes. Las
condiciones predominantes ejercen una presin selectiva que
proporciona una ventaja a una de las variantes. Estas molculas que
son ms capaces de sobrevivir y replicarse, aumentarn en
concentracin relativa. Por tanto surgen nuevas molculas que son
ms capaces de replicarse en las condiciones de su entorno. El mismo
principio es vlido para los organismos actuales. Los organismos se
reproducen, presentan variaciones entre organismos individuales y
compiten por los recursos; las variantes con ventajas evolutivas se
reproducirn con ms xito.

32

El proceso molecular en clulas incluye


las replicacin de la informacin gentica
(que lleva a la divisin celular) y la
produccin de protenas a travs de los
procesos de transcripcin y traduccin

33

Fidelidad de la replicacin del DNA y fenmeno de mutacin


La parte de arriba de la figura muestra un evento de
replicacin normal; la parte de debajo de la figura
esquematiza la introduccin de una mutacin

34

Si la doble hlice de DNA se abre, puede


sintetizarse
una
nueva
cadena
complementaria de cada una de las cadenas
parentales. La replicacin del DNA es un
proceso semiconservativo por lo cual cada
una de las dobles hlices nuevas contiene una
cadena nueva y una vieja. La molcula de
DNA que es copiada para formar una
complementaria se llama molde. La nueva
molcula de DNA no est covalentemente
conectada con la vieja cadena de DNA.

35

El precursor de cada nucletido nuevo


en la cadena de DNA es un nucletido
5-trifosfato del cual se eliminan los dos
fosfatos terminales y el fosfato interno
se une covalentemente al OH 3 libre
de la ribosa de la cadena creciente.
Esta restriccin qumica impone que: la
replicacin del DNA siempre ocurre
desde el extremo 5 al hidroxilo del
extremo 3, unindose el fosfato 5 de
cada nucletido nuevo que se
incorpora al hidroxilo 3 del nucletido
aadido previamente. Las enzimas que
catalizan la adicin de nucletidos se
denominan DNA polimerasas. Todas
las DNA polimerasas sintetizan el
nuevo DNA en la direccin 53. No
se conoce ninguna polimerasa que
pueda iniciar una cadena. Todas estas
enzimas pueden nicamente aadir un
nucletido a un 3-OH preexistente.

36

Estructura del complejo RNA-DNA que se forma al iniciar la


sntesis del DNA.
Cuando la doble hlice se abre al comienzo de la replicacin, primero
acta una enzima que polimeriza RNA, lo que da como resultado la
sntesis de este RNA iniciador. Una enzima especfica que polimeriza
RNA, llamada primasa, participa en la sntesis del iniciador,
sintetizando un fragmento corto de RNA. En el extremo creciente de
este RNA iniciador, existe un grupo 3-OH al cual la DNA polimerasa
aade el primer desoxirribonucletido. Por lo tanto, la subsecuente
elongacin de la molcula se produce como DNA y no como RNA. De
esta manera la nueva molcula sintetizada tiene una estructura como la
representada en la figura. El iniciador puede ser eventualmente
eliminado.

37

Reproduccin de una clula. Para que una clula se reproduzca debe disponer
de un suministro adecuado de energa y de precursores para la sntesis de
nuevas macromolculas, el material gentico debe duplicarse para que durante la
divisin celular cada clula reciba una copia. Los genes deben expresarse
(mediante los procesos de transcripcin y traduccin) para formar las cantidades
requeridas de protenas y macromolculas necesarias para hacer la nueva clula.

38

Resumiendo
-Una clula no est en equilibrio con su entorno
- Es un sistema abierto que toma energa la cual utiliza en
parte para mantener su propia estructura.
-Si se destruye su estructura, la clula muere.
-La estructura celular es la base de la funcin celular.
-Las clulas se autoduplican. Las clulas reproducen las
clulas.
-Si la reproduccin es correcta se origina una clula viva.

39

El origen de la vida
La composicin qumica promedio de una clula viva es muy
distinta a la de la Tierra. Los elementos clave como por ej C,
H, O, N, P y S son mucho mas abundantes en los
organismos vivos que en la materia no viva como por
ejemplo la corteza de la tierra.
La clula es un sistema qumico selectivo compuesto
principalmente de C, H, O, N, P y S, (los elementos
principales de la vida).
Esto enfatiza la naturaleza especial y no al azar de una
clula viviente.

40

Diferencias qumicas entre un organismo vivo y la Tierra

41

Segn el famoso patlogo celular alemn


Rudolph Virchow: Omnis cellula e cellula que
quiere decir:
Toda clula proviene de una clula.
La pregunta es entonces De donde proviene la
primera clula?
Se piensa que proviene de una estructura procelular

42

En 1920 Oparin en la Unin Sovitica y Haldane en


Inglaterra sugirieron que hubo un perodo de evolucin
qumica prebitica antes de la aparicin de la primera clula
Accin de la luz UV
Rayos
Calor volcnico
Superficies inorgnicas
(catalizadores)
Concentracin por perodos
de congelamiento o ciclos de
desecacin

Diversos compuestos
orgnicos.
Polimerizacin de estos
caldos.
Catalizadores proteicos.
Confinamiento de un
sistema autocataltico en
una clula rodeada por una
membrana.
Evolucin desarrollando
vas biosintticas.

43

El planeta Tierra tiene aproximadamente 4.500 millones de aos. Hay


evidencias fsiles de que organismos que se asemejan morfolgicamente
a las bacterias modernas, existieron hace ya 3.500 millones de aos. A
partir de resultados de estudios programados y de descubrimientos
accidentales se ha podido construir una va evolutiva hipottica, pero
plausible, desde el mundo prebitico hasta el presente. Podemos
imaginar que distintas etapas llevaron a la aparicin de las especies
vivas modernas.
1ra etapa. Produccin inicial de algunas de las molculas claves de la
vida (cidos nucleicos, protenas, hidratos de carbono y lpidos) mediante
procesos no biolgicos.
2da etapa. Transicin de la bioqumica prebitica a sistemas capaces de
replicarse. Con el paso del tiempo estos sistemas se hicieron cada vez
ms complejos, permitiendo la formacin de las clulas vivas.
Bioqumica prebitica

sistemas capaces de replicarse

clula

44

3ra etapa. Evolucionaron los mecanismos para convertir la energa


de las fuentes qumicas y del Sol en formas que pudieran ser
utilizadas para dirigir las reacciones qumicas. Estos procesos de
conversin de energa estn interconectados con las vas para
sintetizar los componentes de los cidos nucleicos, las protenas y
otras sustancias clave, a partir de molculas ms sencillas. Con el
perfeccionamiento de los procesos de transformacin de la energa y
de las vas de biosntesis se desarrollaron una gran variedad de
organismos unicelulares.
4ta etapa. Evolucin de los mecanismos que permitan a las clulas
ajustar su bioqumica a entornos diferentes y, a menudo cambiantes.
Organismos con estas capacidades pudieron formar colonias
compuestas por grupos de clulas capaces de interaccionar y
algunos finalmente evolucionaron hacia organismos pluricelulares
complejos.
Organismos clulas capaces de interaccionar organismos complejos

45

Sealamos que la vida apareci aproximadamente 1000 millones de


aos despus de la formacin de la Tierra. Pero antes de que la vida
pudiese existir fue necesario que otro proceso fundamental tuviese
lugar. Esto es, la sntesis de molculas orgnicas, necesarias para los
sistemas vivos, a partir de molculas sencillas presentes en el entorno.
Muchos componentes de las macromolculas bioqumicas se
pueden producir en reacciones prebiticas sencillas.
Entre las distintas teoras que compiten para explicar las condiciones
del mundo prebitico, ninguna es totalmente satisfactoria o est libre de
interrogantes. Una teora sostiene que la primera atmsfera de la Tierra
era muy reductora, rica en metano, amonaco, agua, e hidrgeno y que
esta atmsfera estaba sometida a grandes cantidades de radiacin
solar y relmpagos. De momento supondremos que esas condiciones
fueron las de la Tierra prebitica.
Se pueden sintetizar molculas complejas en esas condiciones?

46

En los aos 50, Stanley Miller y Harold Urey elaboraron una


respuesta a esta pregunta. Hicieron saltar una descarga elctrica,
simulando relmpagos, a travs de una mezcla de metano,
amonaco, agua e hidrgeno. Asombrosamente, estos
experimentos dieron una mezcla de compuestos orgnicos muy
determinada, que inclua aminocidos y otras sustancias
fundamentales para la bioqumica.

H20 agua
NH3 amonaco

chispas elctricas
aminocidos

CH4 metano
H2

hidrgeno

47

El proceso produce los aminocidos glicina y alanina con un


rendimiento aproximado del 2% y pequeas cantidades de
cido glutmico y leucina.

48

El cido cianhdrico (HCN), otro componente probable de la


atmsfera primitiva, se condensa al exponerse al calor o a la luz
para producir adenina, una de las cuatro bases de los cidos
nucleicos. Otras molculas sencillas se combinan para formar el
resto de las bases. Una gran cantidad de azcares, incluyendo la
ribosa, se pueden formar a partir del formaldehido en
condiciones prebiticas.

49

Cul fue el origen de la informacin gentica?


Cmo se origin el cdigo gentico?, es decir la posibilidad de
almacenar informacin que pueda ser traducida en la formacin de
macromolculas.
Como un sistema primitivo de replicacin y expansin de la
informacin es probable que el RNA fuese la primera macromolcula
portadora de informacin combinando las funciones de catalizadores y
de moldes (templados) en la misma molcula. Recientemente Cech y
Altman, en forma independiente, descubrieron que ciertas molculas de
RNA podan ser catalizadores eficientes. A estos RNA catalizadores se
los denomin ribozimas. Las ribozimas cortan su propia cadena en
lugares especficos y pueden aumentar la longitud uniendo los
extremos generados en dichos cortes.
El descubrimiento de las ribozimas ha sugerido la posibilidad de que
las molculas de RNA catalticas pudieran haber desempeado
papeles esenciales en las etapas tempranas de la evolucin de la vida.

50

La capacidad cataltica de las molculas de RNA est relacionada con la


posibilidad de adoptar estructuras especficas y complejas. La ribozima
cabeza de martillo identificada por primera vez en un virus de plantas
induce la hidrlisis de molculas de RNA determinadas en lugares
especficos. La ribozima, que necesita Mg++ y otros iones para que
tenga lugar la hidrlisis, forma un complejo con la molcula de RNA
sustrato, que puede adoptar entonces, una conformacin reactiva.

51

Finalmente el almacenamiento de informacin habra


pasado a ser el DNA (compuesto mas estable y menos
verstil), mediante la transcripcin inversa, mientras que
la actividad cataltica habra sido asumida por las enzimas
proteicas (mas flexibles y eficaces).
No existe indicio alguno de cmo podra haber sido el
mecanismo elemental de traduccin previo al actual, en el
cual participan mas de 100 componentes.

52

Potencial gentico de una clula


Cuntos genes tiene una clula?
Escherichia coli tiene aproximadamente 4,6 millones de pares
de bases (4.600 kilobases). Si un gen en promedio tiene 1.1
kb, significa que la clula tiene aproximadamente 4.300
genes, si todo el DNA codificara para protenas. Pero no todo
el DNA codifica para protenas. Se estima que E. coli tiene
unos 3000 genes , de los cuales 1000-2000 son expresados
en algn momento particular. Las clulas eucariticas pueden
tener muchos mas. Por ej la clula humana tiene 1000 veces
mas DNA que la clula de E. coli y alrededor de 7 veces su
nmero de genes. La mayor parte del DNA en las clulas
eucariticas es no-codificante.

53

Cuntas protenas hay en una clula?


Una
nica
clula
de
Escherichia
coli
contiene
aproximadamente 1900 clases de protenas diferentes y un
total de 2,4 millones de molculas de protenas individuales,
algunas de ellas en gran nmero (mas de 100.000) y otras en
pequeo nmero (menos de 100). La clula tiene algunos
medios para controlar la expresin (transcripcin y traduccin)
de sus genes y debido a esto no todos los genes son
expresados en la misma extensin o al mismo tiempo. Tanto
las clulas procariotas como eucariotas controlan la expresin
de sus genes de modo que no todos ellos se expresan con la
misma frecuencia o al mismo tiempo.

54

Glosario
Cromosoma: elemento gentico que lleva genes esenciales para el
funcionamiento de la clula.
Citoplasma: contenido celular que se encuentra dentro de la membrana
citoplasmtica, excepto el ncleo (si existe).
Genoma: el conjunto de genes de un organismo.
Nucleoide: masa total del DNA que constituye el cromosoma de las
clulas procariticas.
Ncleo: una estructura rodeada por una membrana que contiene los
cromosomas en clulas eucariticas.
Plsmido: un elemento gentico extracromosmico que no es necesario
para el crecimiento.
Ribosoma: partcula citoplasmtica donde se realiza el proceso de la
sntesis de protenas.

55

Procariota: una clula que carece de un ncleo delimitado


por una membrana nuclear y de otros orgnulos.
Eucariota: una clula con un ncleo delimitado por una
membrana nuclear y que en general presenta otros
orgnulos, como las mitocondrias o los cloroplastos que
contiene su propio DNA (normalmente en disposicin
circular, como en Bacteria) y sus propios ribosomas. Los
organismos pertenecen al dominio Eukarya.
Filogenia: relaciones evolutivas entre organismos.
Dominio: el nivel mas elevado de la clasificacin biolgica
(Bacteria, Archaea y Eukarya)

56

Estructura celular y relacin estructura funcin


Todas las clulas tienen una barrera llamada membrana citoplasmtica
o celular que separa el interior del exterior de la clula. En el interior se
encuentra el citoplasma, donde se llevan a cabo las funciones de la
clula. Los principales componentes del citoplasma son: agua,
macromolculas (protenas y cidos nucleicos), ribosomas, pequeas
molculas orgnicas precursores de macromolculas y varios iones
inorgnicos. En los ribosomas se sintetizan las protenas. Estn
compuestos por cido ribonucleico (RNA) y protenas que interaccionan
con protenas solubles y con el RNA mensajero. La pared celular se
encuentra en el exterior, rodeando la membrana plasmtica, es
relativamente permeable y otorga rigidez estructural a las clulas. Los
vegetales y la mayora de los MOs poseen pared, la mayora de las clulas
animales carecen de ella pero tiene un citoesqueleto.

57

Clulas eucariotas y procariotas


Se pueden distinguir por un anlisis detallado de la
estructura celular interna. Las clulas eucariticas son
generalmente mas grandes y estructuralmente mas
complejas que las procariticas presentando estructuras
limitadas por membranas llamadas orgnulos. Los
orgnulos comprenden el ncleo, las mitocondrias y los
cloroplastos (presentes solo en las clulas fotosintticas).
Las mitocondrias y los cloroplastos desempean funciones
especficas en la generacin de energa, llevando a cabo la
respiracin y la fotosntesis, respectivamente.
Los microorganismos eucariticos comprenden las algas, los
hongos y los protozoos. Todos los metazoos (animales y
plantas) estn formados por clulas eucariticas.

58

Estructura interna de las clulas microbianas


a) Diagrama de un procariota
b) Diagrama de un eucariota

59

60

Maiting: apareamiento

61

Organizacin del DNA. Ncleo versus Nucleoide. Los


genomas presentan una organizacin diferente en clulas
procariotas y en clulas eucariotas. En procariotas, el DNA se
encuentra como una molcula larga de dos cadenas
formando el cromosoma bacteriano que se condensa para dar
una masa visible llamada nucleoide. En la mayora de los
procariotas el DNA es circular, y en general, poseen un
cromosoma nico que contiene una sola copia de cada gen,
por lo cual son genticamente haploides. Pueden tener
tambin pequeas cantidades de DNA extracromosmico,
llamados plsmidos que les confieren propiedades
particulares no esenciales y en general requeridas para la
supervivencia.

62

En eucariotas, el DNA se encuentra dentro del ncleo


organizado en cromosomas. El nmero de cromosomas
depende del organismo y a diferencia de los procariotas
contienen dos copias de cada gen, por lo tanto son diploides.
Saccharomices cerevisiae tiene 8 pares de cromosomas,
clulas humanas tiene 23 pares de cromosomas
Los cromosomas contienen, adems de DNA, protenas que
favorecen el plegamiento y el empaquetamiento del DNA, as
como protenas necesarias para la expresin gnica.
Durante la divisin celular el ncleo se divide (luego de
duplicarse el nmero de cromosomas) mediante el proceso
de mitosis originndose 2 clulas hijas idnticas.

63

Empaquetamiento de DNA alrededor de un ncleo de


histonas para formar un nucleosoma.
Los
nucleosomas
se
ordenan a lo largo de la
cadena
del
DNA
asemejando bolas en una
cuerda. Esta conformacin
es tpica del DNA en las
clulas eucariticas.

Histonas centrales

64

Caractersticas que diferencian a procariticas de los eucariticas


-Cromosoma circular nico (nucleoide), en lugar de un ncleo con
mltiples cromosomas.
-Ausencia de membrana nuclear y aparato mittico.
-Ausencia de histonas verdaderas, nucleosomas.
-Ausencia de intrones en los genes que codifican protenas y escasa
presencia de los mismos en los que codifican tRNA.
-La transcripcin se acopla con la traduccin. El extremo del mRNA no
est poliadenilado (excepto en arqueobacteria)
-mRNA generalmente polignico.
-El ribosoma es 70S en lugar de 80S; ligeras diferencias de forma,
longitud de molculas de rRNA y nmero de molculas proteicas.
-Pared celular con compuestos exclusivos (por ejemplo: cido.
Murmico, D-aminocidos, frecuentemente cido diaminopimlico,..).

65

-Ausencia de esteroides y fosfatidilcolina en la membrana.


-Ausencia de vesculas endocticas.
-Ausencia de retculo endoplsmico (aunque algunas bacterias
autotrficas pueden presentar algunas invaginaciones de la membrana
citoplasmtica).
-Ausencia de mitocondrias y otros orgnulos limitados por membranas
(con algunas excepciones).
-Ausencia de triglicridos (en algunos grupos el carbono se almacena en
forma de cido poli-beta-hidroxibutrico
-Movimiento por rotacin de flagelos
-Caractersticas metablicas exclusivas: fijacin de nitrgeno, respiracin
anaerbica (con aceptores de electrones distintos al oxgeno),
fotosntesis sin produccin de oxgeno.

66

Por muchos aos se pens que los organismos procariticos carecan


de un citoesqueleto que le permitiera tener un nivel de organizacin
citoplasmtica similar a los organismos eucarioticos. Recientemente
se han identificado los tres elementos del citoesqueleto de eucariotes
(microfilamentos, filamentos intermedios y microtubulos) en Bacteria y
uno de ellos en Archaea. Los elementos del citoesqueleto de Bacteria
son similares estructuralmente a su contraparte en eucariotas y tienen
funciones similares: los mismos participan en la divisin celular,
localizan protenas en ciertos sitios de la clula y determinan la forma
de la misma.

67

MreB (la contraparte en clulas


eucariticas es la actina). Se
observa en muchas bacterias en
forma de bastn. En Bacillus
subtilis es llamada Mbl. MreB
forma filamentos en espiral
alrededor del interior de la clula
determinando la forma de la
misma y ayuda a mover
cromosomas a polos opuestos
de la misma.

68

Mb corresponde a megapares de bases. Todos los genomas procariticos indicados han sido
secuenciados. Todos los organismos del listado son unicelulares

69

a) Micrografa de clulas de bacterias


b) Seccin longitudinal de una clula bacteriana vista con
microscopio electrnico.
c) Interpretacin artstica en 3 dimensiones de una bacteria
Gram negativa.

70

Micrografa electrnica de una seccin de una clula del


dominio Bacteria.

Helicobacterium modesticaldum
La clula mide 1x3 m. El rea
clara representa el nucleoide,
regin de la clula que contiene
el DNA. Corte longitudinal.

71

72

Micrografa electrnica de una clula de Saccharomyces


cerevisiae (Dominio Eukarya). La clula mide 8 m de
dimetro
Ncleo
Membrana
citoplasmtica

Pared celular

Membrana interna

Mitocondria

73

Estructura interna de clulas microbianas


Pared celular

citoplasma

Mitocondria

d
Nucleolo

Procariote a) diagrama y b) microscopa electrnica

Ncleo

Eucariote c) diagrama y d) microscopa electrnica

74

Los virus
-no son clulas
-No son sistemas abiertos dinmicos
-Son estructuras estticas y muy estables
-Incapaz de cambiar o reponer estructuras
por si mismos
-Necesitan de la maquinaria de la clula
para replicarse y para sintetizar sus
protenas
-No tienen metabolismo propio
-No tienen aparato de traduccin
-Son mucho ms pequeos que las clulas

75

Tamao de los virus y estructura


a) Partculas de adenovirus (tamao 100 nm de dimetro)
b) Tamao de una partcula de virus y comparacin con bacterias y
clulas animales

76

Clasificacin de los organismos:


-Se clasificaron primero como animales o plantas pero luego
aparecieron los microorganismos.
-Se descubri luego que todos los organismos vivos se podan dividir en
dos tipos celulares distintos (procariotes y eucariotes) con base en
diferencias fundamentales en la estructura celular.
Todos los animales y plantas son eucariotes, como lo son tres grupos
importantes de microorganismos: algas, hongos y protozoos.

77

Relacin evolutiva entre organismos

Relacin estructural no necesariamente


implica relacin evolutiva. Hoy en da se
utiliza un mtodo que compara la estructura
del RNA ribosomal como una medida de las
relaciones filogenticas o evolutivas. De estos
estudios surgen tres linages celulares
evolutivamente distintos, dos de los cuales
son procariotes en estructura y uno es
eucariote. A estos grupos se les dio el
nombre de Bacteria, Archaea y Eukarya.
Todos estos grupos se piensa que vienen de
un ancestro comn o ancestro universal.

78

Los procariotas comprenden las Bacteria y las Archaea.


Bacteria y Archaea comparten estructura celular, pero se
diferencian mucho por su historia evolutiva o filogenia.
Por estudios de evolucin molecular en procariotas,
especficamente las relaciones filogenticas deducidas luego
de comparar las secuencias de macromolculas esenciales,
en especial los RNAs ribosmicos, se lleg a la conclusin
que Archaea y Bacteria no estn relacionadas
evolutivamente. Mas an, las especies de Archaea estn ms
relacionadas con los eucariotas que con las especies del
dominio Bacteria. Este hecho ha sido ratificado por estudios
comparativos realizados con otras macromolculas de
especies de los tres dominios. Por lo tanto, la diversificacin
evolutiva, a partir del ancestro comn fue en dos direcciones,
hacia Bacteria y hacia otra cosa que finalmente se diversific
dando origen a los dominios Archaea y Eukarya.

79

rbol filogentico de la vida construido a partir de la comparacin de las


secuencias del RNA ribosmico. El rbol est formado por tres dominios
de organismos: Bacteria y Archaea, que presentas clulas procariticas, y
Eukarya (clulas eucariticas). El grupo en rosa son macroorganismos, el
resto de los organismos son microorganismos. Como todas las clulas de
los animales y plantas son eucariticas, se deduce que los
microorganismos eucariticos fueron los precursores de los organismos
pluricelulares.

80

Secuenciacin del gen de RNA ribosmico y filogenia

a) Se rompen la clulas; b) se aisla el gen que codifica el RNA ribosmico y


se amplifica el nmero de copias por la tcnica de PCR (reaccin en cadena
de la polimerasa); c) el gen es secuenciado; d) las secuencias obtenidas se
alinean por computadora; Un programa informtico realiza comparaciones
por pares y genera un rbol (e) que refleja las diferencias en la secuencia del
RNA ribosmico del organismo analizado. Si en el anlisis se usa una
muestra natural, los genes del RNA ribosmico aislados de los diferentes
organismos de una muestra deben ser clonados antes de ser amplificados y
secuenciados.

81

Micrografas electrnicas de secciones de clulas pertenecientes


a cada uno de los tres dominios de organismos: a) Bacteria, b)
Archaea y c) Eukarya.

82

estructura
Los organismos se definen por estudios de

composicin gentica
comportamiento

Los microbilogos usan el sistema de nomenclatura binomial


desarrollado por Linneo para plantas y animales.
Serie de organismos relacionados se le da un nombre o gnero dentro
de este gnero se separan las distintas especies u organismos de
diferente tipo. Por ej. Escherichia coli, Brucella abortus, Brucella
melitensis, Brucella suis, Agrobacterium tumefaciens, Agrobacterium
rhizogenes, Bacillus anthracis, Bacillus subtilis, Sinorhizobium meliloti,
etc. En general, los nombres derivan del latn o griego latinizado que
describen alguna propiedad tpica de la especie y se escriben en letras
itlicas o cursivas. Por ej. Se han descripto ms de 100 especies
diferentes del gnero Bacillus, tales como Bacillus (B.) subtilis, B.
cereus y B. tearothermophilus. Estos nombres especficos significan
fino, ceroso y amante del calor. En general describen las
caractersticas morfolgicas, fisiolgicas o ecolgicas importantes de c/u

83

Los microorganismos y sus ambientes naturales


Poblacin: grupo de clulas relacionadas.
Hbitat: ambiente natural en el que vive una poblacin.
Ecologa: estudio de los organismos en sus ambientes naturales.
Comunidades: conjuntos de poblaciones que viven juntas en un mismo
hbitat.
Ecosistema: es el conjunto de los organismos y de los componentes
fsicos y qumicos del medio.
Interacciones entre poblaciones

beneficiosas
perjudiciales

Los MOs tambin interaccionan con el medio ambiente de su hbitat y


pueden modificarlo.
La comunidad en un hbitat determinado est definida en gran parte por
las caractersticas fsicas y qumicas de ese medio. Estas caractersticas
pueden cambiar con el tiempo debido al metabolismo propio de los
organismos. Los MOs son parte importante de los ecosistemas.

84

Con el tiempo un ecosistema microbiano puede cambiar


gradualmente, tanto desde el punto de vista fsico como
qumico. El oxgeno es un buen ejemplo. El O2 es un
nutriente vital para algunos MOs mientras que es venenoso
para otros. La actividad de MOs aerbicos al consumir en
algunos casos el oxgeno puede cambiar el hbitat a
condiciones anxicas y permitir de este modo el desarrollo
de otros organismos anaerbicos que no lo podan hacer en
un primer momento.

85

Ejemplos de comunidades microbianas


a) Micrografa de una comunidad bacteriana
que se
desarrolla en las profundidades de un lago pequeo. Se
muestran clulas de varios tamaos.
b) Comunidad microbiana en una muestra de sedimentos
de aguas residuales. La muestra se ti con una serie de
colorantes, cada uno de ellos tie un grupo bacteriano
diferente.

86

La importancia de la vida microbiana


-Nmero total de clulas microbianas en la
(procariotas) es aproximadamente 5x1030 clulas.

Tierra

-Cantidad total de C presente aproximadamente igual al de


todas las plantas de la tierra (biomasa).
Contenido de N y P, 10 veces mayor que la de toda la
biomasa vegetal.
Implica que las clulas procariticas constituyen la mayor
porcin de biomasa sobre la Tierra y son la reserva de
nutrientes esenciales para la vida.
La mayor parte de las clulas procariticas se encuentra bajo
la superficie en los ambientes ocenicos y terrestres.

87

El impacto de los microorganismo sobre el hombre


Hay que conocer como trabajan los MOs para disear
metodologas tendientes a aumentar los beneficios y disminuir
los efectos perjudiciales .
Aunque muchos slo consideran a los MOs en el contexto de
las enfermedades infecciosas, en realidad slo unos cuantos
causan enfermedades. Los MOs afectan muchos aspectos de
nuestras vidas, adems de ser los agentes etiolgicos de
enfermedades.
Microorganismos y agricultura. Nuestros sistemas de
agricultura dependen en general de las actividades
microbianas como es el caso de las leguminosas que
viven en estrecha asociacin con bacterias especficas que
forman estructuras llamadas ndulos en sus races donde
fijan el N2 atmosfrico el cual es utilizado por las plantas para
crecer.
88

Los microorganismos (MOs) son tambin esenciales en el


proceso digestivo de los rumiantes, como las vacas y las
ovejas. En el rgano especial llamado rumen las bacterias
realizan el proceso digestivo.
Los MOs desempean funciones crticas en el reciclado de
elementos importantes para la nutricin vegetal, en
particular del carbono, nitrgeno y azufre. En el suelo y el
agua los MOs convierten estos elementos en formas
asimilables por las plantas.
Los MOs tambin son causantes de enfermedades en
plantas y en animales.

89

Microorganismos y alimentacin
Los productos agrcolas o los animales deben llegar a los
consumidores con calidad sanitaria, de all la importancia de
los MOs en la industria alimentaria. El deterioro de
alimentos por la actividad de los MOs ocasiona enormes
prdidas econmicas. Las industrias de enlatado,
congelado y desecado de alimentos tiene por finalidad
evitar esto. Tambin es importante las enfermedades que
pueden ser transmitidas a travs de los alimentos.
Algunos alimentos requieren para su preparacin la
actividad de determinados MOs. Este es el caso de los
productos lcteos que se manufacturan, como el queso, el
yogurt o la manteca. Los alimentos de panadera se
elaboran usando levaduras al igual que algunas bebidas
alcohlicas.

90

Microorganismos, energa y medio ambiente


Los MOs desempean funciones clave en lo que respecta a
la energa. La mayor parte del gas natural (metano) es un
producto bacteriano, derivado de las actividades de las
bacterias metanognicas. Los MOs fottrofos pueden utilizar
la luz como fuente de energa para la formacin de biomasa,
es decir la energa acumulada en forma de organismos vivos.
La biomasa microbiana y los desechos, como la basura
domstica, los excedentes de cosechas y los residuos
animales, se pueden convertir en biocombustibles, como el
metano y el etanol, por las actividades degradativas de los
MOs. Los MOs tambin pueden ayudar para eliminar la
polucin originada por las actividades humanas, un proceso
que se denomina biorremediacin. Este rea est en pleno
desarrollo en la actualidad.

91

Los microorganismos y el futuro


El uso de MOs genticamente modificados para poder
sintetizar productos especficos de alto valor comercial dio
origen a la Biotecnologa. La biotecnologa depende en
gran medida de la ingeniera gentica, una disciplina que
trata de la manipulacin artificial de genes y de sus
productos. Tambin se pueden hacer genes completamente
artificiales. Una vez que se tiene el gen por sntesis o por
seleccin a partir de una fuente natural, el mismo se puede
insertar en un MO y se puede expresar all originando el
producto gnico deseado. Este es el caso de la insulina
humana, hormona que se encuentra en cantidades
anormalmente bajas en sujetos con diabetes. Esta hormona
se prepara hoy en da a partir del gen de la insulina humana
expresado en un MO.

92

Influencia de los microorganismos en las actividades humanas

93

94

Los microorganismos como agentes etiolgicos de


enfermedades
Se estudi la frecuencia de las diez causas de muerte mas
usuales en USA en el ao 1900 y en el ao 2000 (Datos del
Centro Nacional de Estadsticas de la salud de USA ). En el
ao 1900 las enfermedades infecciosas eran las principales
causas de muerte en USA. Hoy en da son las minoritarias.
Sin embargo los MOs pueden ser an un riesgo importante
para la supervivencia por ej. en pacientes inmunodeprimidos
o con SIDA. An hoy las enfermedades microbianas
constituyen la principal causa de muerte en los pases
subdesarrollados. La viruela se erradic, pero an continua
la malaria, tuberculosis, clera, enfermedad del sueo,
sndromes diarreicos severos, etc.).
Viruela. Virus; malaria. Plasmodium (parasito); tuberculosis. Mycobacterium
tuberculosis (bacteria); colera. Vibrio cholerae (bacteria); enfermedad del sueo.
Trypanosoma brucei (protozooario).

95

Frecuencia de las 10 causas mas importantes de muertes en los EEUU

96

Conocimiento de los procesos de


infeccin

Control de

Mejora de las prcticas sanitarias

enfermedades
Infecciosas

Descubrimiento y uso de nuevos


agentes antimicrobianos

97

FIN
1ra Parte

98

Races histricas de la Microbiologa


Se sospechaba que haba criaturas demasiado pequeas
para ser percibidas a simple vista. El desarrollo del
microscopio permiti verlas.
-1664 Robert Hooke describi los cuerpos fructferos de
mohos.
-1684 Antonie van Leeuwenhoek dise un microscopio de
lente simple y fue capaz de ver microorganismos tan
pequeos como los procariotas. Lo comunic en la Royal
Society of London.
En las figuras siguientes se muestran el microscopio utilizado
por Robert Hooke, el microscopio diseado por Leeuwenhoek
y dibujos de algunos organismos observados por ambos.

99

Fotografa de una copia del microscopio de Leeuwenhoek

100

Replica en bronce del microscopio de Leeuwenhoek. Se muestra tambin como se


sostiene el mismo.

101

Dibujos de van
Leeuwenhoek de
bacterias publicados
en 1684 a las que
llam animlculos.
podemos reconocer
varios tipos
morfolgicos de
bacterias comunes. A,
C, F y G formas
bacilares; E formas
esfricas o cocos; H
grupos de cocos.

102

103

Dibujo que representa un moho azul


creciendo sobre la superficie de un
trozo de cuero.
Microscopio utilizado por
Robert Hooke

104

Recin en el siglo XIX se cont con una amplia distribucin de


microscopios mejorados.
La microbiologa como ciencia se desarroll a fines del siglo
XIX con el desarrollo del microscopio y de tcnicas bsicas de
laboratorio para el estudio de microorganismos.
-Microscopios mejorados
-Distintas tcnicas de tincin de microorganismos
-Esterilizacin
-Cultivos de enriquecimiento o cultivos selectivos
-Medios slidos con gel o agar
-Cajas de Petri
-Tapones de algodn

105

Preguntas bsicas que se deban contestar


1) Se da la generacin espontnea? Es decir los
organismos vivos se pueden generar de materia
inorgnica.
2) Se saba que las enfermedades infecciosas se
transmitan de un individuo a otro, pero no se conocan
los mecanismos de esa transmisin.
Las preguntas fueron contestadas por el qumico francs
Louis Pasteur (1822-1895) y por el fundador de la
microbiologa mdica Robert Koch (1843-1910)
respectivamente.

106

El botnico Ferdinand Cohn (1828-1898) fund la


bacteriologa (el estudio de las bacterias). Descubri las
endosporas estudiando el gnero Bacillus.
Cohn describi el ciclo de vida completo de Bacillus
clula vegetativa

endospora

clula vegetativa

Descubri que por ebullicin solo moran las clulas


vegetativas. Cohn aport las bases experimentales para un
esquema de clasificacin de bacterias y fund una revista
cientfica importante. Ide mtodos simples para evitar la
contaminacin de medios de cultivo estriles, como el uso de
matraces y algodn para cerrar los tubos. Estos mtodos
fueron utilizados posteriormente por Koch permitindole aislar
y caracterizar varias bacterias causantes de enfermedades.

107

Pasteur y el fin de la generacin espontnea


Comida fresca
A

se deja a la

la comida

de donde vienen

intemperie

se pudre

los MOs

Observacin microscpica
En A no se observan MOs
En B se observan MOs
Se originan espontneamente
Sustancia inanimada
2 hiptesis

clula viva

Provienen de semillas o grmenes que entran


a los alimentos provenientes del aire
(hiptesis apoyada por Pasteur)

108

Pasteur demostr primero que existen en el aire estructuras


muy similares a las encontradas en las sustancias putrefactas.
Concluy que los microorganismos se originan a partir de MOs
presentes en el aire. Postul que dichas clulas en suspensin
se depositaban constantemente sobre todos los objetos. Si
esto era correcto, entonces no debera estropearse un
alimento tratado de tal modo que todos los organismos que lo
contaminaran fueran destruidos. Pasteur emple calor para
eliminar los contaminantes.
Tom un matraz de vidrio con los nutrientes, lo sell, lo calent
a ebullicin y observ que nunca se descompona el medio de
cultivo. Los defensores de la generacin espontnea criticaron
el experimento argumentando que haca falta aire fresco y que
el aire caliente se modificaba. Pasteur entonces modific el
experimento utilizando un matraz de vidrio de cuello de cisne.

109

Experimento de Pasteur con matraces de cuello de


cisne
Esterilizacin del contenido del matraz.

110

Si el matraz se mantiene en posicin vertical no hay


crecimiento microbiano

111

Si los microorganismos atrapados en el cuello alcanzan el


lquido estril, crecen rpidamente.

Los principios de Pasteur se utilizaron en el envasado y


conservacin de alimentos.
Pasteur desarroll vacunas para enfermedades como
el carbunco, el clera aviar y la rabia (1880-1890).
Carbunco (Antrax), Bacillus anthracis; colera aviar, bacilo; rabia, virus).

112

Koch y la teora microbiana de las enfermedades


infecciosas.
Siglo XIX
Se pensaba que una persona enferma A transmita algo
contagio
persona sana B persona B enferma.
Se sospechaba que los MOs podran ser los responsables
de enfermedades, pero faltaban las pruebas definitivas.
MOs

causa o efecto de las enfermedades?

113

La teora microbiana de las enfermedades infecciosas fue


probada por el mdico Robert Koch (1843-1910).
Koch estudi el carbunco, enfermedad causada por la
bacteria Bacillus anthracis formadora de endoesporas.
Sus estudios dieron origen a los postulados de Koch que
demostraron que un tipo concreto de MO es el agente
etiolgico de una enfermedad especfica.
Por estudios cuidadosos de microscopa demostr que:
1- La bacteria B. anthracis estaba presente en la sangre de
todos los animales enfermos y no as en los sanos, pero la
mera asociacin de la bacteria con la enfermedad no
demostraba que la bacteria fuera la causa de la enfermedad,
por el contrario, podra ser un efecto de la enfermedad.

114

Koch demostr que la enfermedad poda ser transmitida de un animal


enfermo a uno sano inyectando una pequea cantidad de sangre. Esto lo
poda repetir en otro ratn y as sucesivamente. En todos los casos poda
demostrar por microscopa en muestras de sangre de los animales
enfermos la presencia de las bacterias formadoras de esporas
caractersticas.
Koch pudo adems cultivar el MO fuera del animal en caldos nutritivos e
incluso luego de numerosas resiembras o transferencias de cultivo, la
bacteria poda causar an la enfermedad cuando se reinoculaba a un
animal. Es decir, la bacteria procedente de un animal enfermo y la
mantenida en cultivo inducan los mismos sntomas de enfermedad tras
su inoculacin.
Basndose en ste y en otros experimentos, Koch formul los siguientes
criterios, conocidos en la actualidad como postulados de Koch para
demostrar que un tipo concreto de MO es el agente etiolgico de una
enfermedad.

115

Postulados de Koch
1- El organismo debe estar siempre en los animales que
sufren la enfermedad y no en individuos sanos.
2- El organismo debe cultivarse en cultivo axnico o puro
fuera del cuerpo del animal.
3- Cuando dicho MO se inocula a un animal susceptible, debe
iniciar en l los sntomas caractersticos de la enfermedad.
4- El organismo debe aislarse nuevamente de estos animales
experimentales y cultivarse nuevamente en el laboratorio, tras
lo cual debe mostrar las mismas propiedades que el MO
original.
Los postulados se resumen en la siguiente figura. Usando
estos postulados como gua otros investigadores revelaron la
causa de muchas enfermedades importantes para el hombre
y para los animales.

116

117

Medios slidos, la placa de Petri y los cultivos puros


Koch fue el primero que cultiv bacterias en medios de cultivo
slidos. Emple gelatina como agente solidificante de diversos
caldos nutritivos que usaba para cultivar bacterias patgenas.
Fue reemplazado mas tarde por el agar (polisacrido derivado
de algas rojas) que es mas verstil y permite utilizar
temperaturas mas elevadas de incubacin. El primer uso del
agar como agente solidificante se debe a Walter Hesse. La
tcnica utilizando agar fue adoptada por Koch para sus
estudios clsicos sobre el aislamiento de la bacteria
Mycobacterium tuberculosis, agente etiolgico de la
tuberculosis.
En 1887 Richard Petri public un trabajo corto describiendo
una modificacin de las tcnicas de lminas horizontales de
Koch. La mejora de Petri result ser enormemente til.

118

Las ventajas de las cajas de Petri:


-Fcilmente almacenadas y esterilizadas independientemente
del medio.
- Luego de aadir el medio fundido a la mas pequea de las
dos tapaderas circulares, la de mayor tamao poda usarse
como tapa para evitar contaminaciones.
-Las colonias que se formaban en la superficie del agar
quedaban expuestas al aire y podan ser fcilmente
manipuladas para su estudio.
Las cajas de Petri ya sea de vidrio o de plstico son utilizadas
en la actualidad y constituyen una de las principales
herramientas en los laboratorios de microbiologa, junto con
los microscopios, las tcnicas de tincin, los medios de
enriquecimiento, los tapones de algodn, los cultivos
axnicos, etc.

119

Transferencia asptica (A) y Mtodo para hacer una extensin en placa


para obtener cultivos axnicos o puros (B). Colonias de Micrococcus
luteus cultivadas en placas de agar sangre.

120

121

122

Variaciones en la morfologia de una colonia vista a simple vista

123

Koch observ que sobre el medio slido expuesto a


contaminantes se desarrollaban colonias con formas
diferentes (diferan en color, forma, tamao u otros
caracteres) y que tales colonias se podan perpetuar y
diferenciar entre s por sus caractersticas particulares. Las
clulas de diferentes colonias diferan microscpicamente y
a menudo tambin en sus temperaturas ptimas de
crecimiento o en sus requerimientos nutricionales. Koch
seal que toda bacteria que mantenga las
caractersticas que la diferencian de otras, cuando se
cultivan en el mismo medio y bajo las mismas
condiciones, debera ser designada como especie,
variedad, forma o cualquier otra designacin
adecuada. Los trabajos de Koch permitieron que la
microbiologa fuera aceptada como una ciencia biolgica
independiente.

124

Koch y la tuberculosis. El mayor logro de Koch en la


bacteriologa mdica est relacionado con la tuberculosis.
Para aislar el agente causante de la enfermedad Koch
emple todos los mtodos que se haban desarrollado
previamente: microscopa, tincin de tejidos, aislamiento en
cultivo puro e inoculacin en animales. Dise un mtodo de
tincin en muestras de tejido usando azul de metileno
alcalino y un segundo colorante (marrn de Bismark) que
tea solo el tejido. El mtodo de Koch fue el precursor del
mtodo de Ziehl-Nielsen usado hoy para teir bacterias
cido-alcohol
resistentes
como
el
Mycobacterium
tuberculosis. Para la obtencin de cultivos de M. tuberculosis
se utiliz suero de sangre coagulada. Koch pudo obtener
cultivos de este MO a partir de diversas fuentes de origen
humano y de animales. Con el MO aislado pudo demostrar
que era el causante de la tuberculosis. Koch recibi el Premio
Nobel de fisiologa y medicina en 1905.

125

Dibujos de Koch de clulas de


Mycobacterium tuberculosis
a) Seccin transversal de un tubrculo en
tejido pulmonar. Las clulas de
Mycobacterium tuberculosis se tien en
azul mientras que las del tejido
pulmonar se tien en marrn.
b) Clulas de M. tuberculosis en esputo de
paciente tuberculoso
c) Crecimiento en cultivo puro de M.
tuberculosis en placa de vidrio con
suero sanguneo coagulado.
d) Se tom una colonia de la placa anterior
y se observ al microscopio a 700
aumentos.
Las
clulas
aparecen
formando largas cuerdas.

126

Fotografa coloreada a mano de colonias formadas sobre agar, realizada


por Walter Hesse, colaborador de Robert Koch. Las colonias
corresponden a hongos (mohos) y bacterias que se obtuvieron en
estudios iniciados por Hessen sobre el contenido microbiolgico del aire
de Berln, Alemania en 1882.

127

128

129

Diversidad microbiana
El holands Martinus Beijerinck y el ruso Sergei
Winogradsky fueron microbilogos pioneros en el estudio de
las bacterias del suelo y del agua y se destacaron por sus
importantes contribuciones al conocimiento de la diversidad
microbiana.
Beijerinck: formulacin de cultivos de enriquecimiento o
cultivos selectivos para aislar microorganismos especficos
relacionados fisiolgicamente a partir de muestras naturales.
Beijerinck aisl los primeros cultivos puros de muchos
MOs del suelo y del agua (bacterias aerobias fijadoras de
N2 como el Azotobacter, reductoras del SO4=, oxidantes del
azufre, bacterias fijadoras de N2 en los ndulos radiculares,
especies de Lactobacillus, algas verdes, etc).

130

Dibujo realizado por la hermana de Beijerinck mostrando clulas de


Azotobacter chroococcum, bacteria aerobia fijadora de N2. Este
dibujo era usado para dar clases en una poca en que no existan
transparencias, diapositivas y caones de proyeccin con computadora

Azotobacter vinelandii: a) clulas


vegetativas b) cistos

131

Beijerinck describi los principios bsicos de la virologa.


En sus estudios sobre la enfermedad del mosaico en el
tabaco puso de manifiesto, mediante el uso de tcnicas de
filtracin selectiva, que el agente infeccioso (un virus) no era
una bacteria y que se incorporaba a las clulas de la planta y
necesitaba que sta estuviera viva para reproducirse.
Winogradsky logr aislar por primera vez varias bacterias
importantes del suelo, en particular las implicadas en los
ciclos del nitrgeno y del azufre, por ej. Las bacterias
nitrificantes (oxidacin de NH3 a NO3-), bacterias oxidantes
del azufre. Postul el concepto de quimiolitotrofa, es decir,
la oxidacin de compuestos inorgnicos acoplada a la
liberacin de energa utilizable. Demostr que las bacterias
nitrificantes obtenan su carbono del CO2 del aire, es decir
que eran auttrofos.

132

Dibujos coloreados a mano de clulas de bacterias fotosintticas rojas


del azufre incluidas en la monografa Microbiology du Sol, de Sergei
Winogradsky.
Se muestran clulas del gnero Chromatium, como C. kenii (Fig. 3 y 4)
y de C. vinosum (Fig 5-8).

Micrografa de campo claro de


bacterias
rojas
del
azufre
Chromatium okenii

133

FIN
2da Parte

134

135

136

137

138

139

140

141

142

143

FIN

144

Subdisciplinas ms importantes de la microbiologa.


Microbiologa mdica e inmunologa
Microbiologa agrcola

Citologa

Microbiologa industrial

Bioqumica microbiana

Microbiologa acutica

Gentica bacteriana

Ecologa microbiana

Biologa molecular

Sistemtica bacteriana

Bacterilogos (virus)

Fisiologa bacteriana

Biotecnologa

145

Desarrollo de las subdisciplinas ms importantes de la


microbiologa.
Desarrollo rpido de la microbiologa Bsica y aplicada
1- Trabajos de Koch expansin de la microbiologa mdica
y de la inmunologa (en la primera parte del siglo)
-Descubrimiento de muchas bacterias patgenas nuevas.
-Establecimiento de los principios por los cuales estos
patgenos infectan el cuerpo y se hacen resistentes a sus
defensas.
2-Avances prcticos en el campo de la microbiologa agrcola
-Impulsores fueron Beijerinck y Winogradsky
-Comprensin de los procesos microbianos en el suelo. Son
beneficiosos o perjudiciales para el crecimiento de las plantas.

146

3- Se abri el uso de los MOs para la obtencin de


productos industriales (sntesis de antibiticos, etc) y dio
origen a la microbiologa industrial luego de la segunda
guerra mundial.
4- Microbiologa acutica. Tratamiento de aguas residuales,
suministro de agua potable para uso humano.
5- Ecologa microbiana. Biodiversidad, actividades de los
MOs en su hbitat.
Los conocimientos de los principios bsicos de la funcin
microbiana permiti descubrir y clasificar muchas clase de
MOs nuevos dando origen a la extensin de la
6-Sistemtica bacteriana.

147

7- Fisiologa microbiana. Estudio de los nutrientes que


requieren los MOs y productos que se originan.
8- Citologa. Conocimiento de la estructura fsica y qumica de
los MOs.
9- Bioqumica. Metabolismo , enzimas y reacciones que llevan
a cabo los MOs.
10- Gentica bacteriana. Herencia, variacin gentica,
intercambio gentico. Conocimiento del DNA, RNA, sntesis de
protenas.
11- Bacterifagos. Estudio de los virus. Analoga con la
transferencia gentica.
12- Biotecnologa
13- Anlisis genmico. Relaciones evolutivas.
14- Microbiologa industrial.

148

FIN

149

Opciones metablicas para la obtencin de energa

150

Diversidad fisiolgica de los microorganismos


Energa y carbono
Todas las clulas requieren energa, la cual se puede obtener
de tres modos: a partir de compuestos orgnicos, a partir de
compuestos inorgnicos o a partir de la luz.
La oxidacin de compuestos orgnicos o inorgnicos produce
adenosina
trifosfato
(ATP)
en
los
organismos
quimiotrficos, mientras que la conversin de energa solar
en energa qumica (tambin en forma de ATP) se produce
por los organismos fototrficos. Los MOs aerobios son los
que pueden obtener energa del compuesto en presencia de
oxgeno. Otros obtienen energa en ausencia de oxgeno
(anaerobios). Otros utilizan los compuestos orgnicos tanto
en presencia como en ausencia de oxgeno.

151

Los organismos que obtienen energa a partir de compuestos


orgnicos se los llama quimioorganotrofos y los que lo
hacen a partir de compuestos inorgnicos se llaman
quimiolitotrofos y al metabolismo empleado quimiolitotrofa.
Este tipo de metabolismo energtico se encuentra solo en
procariotas y est ampliamente distribuido tanto en especies
de Bacteria como de Archaea. El rango de compuestos
inorgnicos que se pueden utilizar es amplio, sin embargo un
determinado procariota suele especializarse en la utilizacin
de uno o de un grupo de compuestos inorgnicos
relacionados. Esta cualidad le da la ventaja de no competir
con los organismos quimioorganotrfos y poder utilizar
adems productos de desecho de estos ltimos como el H2 y
el H2S. Los MOs fototrficos contienen pigmentos
fuertemente coloreados que les permiten usar la luz como
fuente de energa.

152

No existe competencia de los organismos fototrficos con


los quimiotrfos por la energa luminosa.
Fuente de carbono
Todas las clulas requieren carbono como nutriente
principal. Las clulas microbianas son heterotrficas si
requieren uno o ms compuestos orgnicos como fuente
de carbono, o auttrofas si la fuente de carbono es el CO2.
Los quimioorganotrofos son tambin hetertrofos. Por el
contrario, muchos quimiolitotrofos y prcticamente todos
los fottrofos son auttrofos. Los auttrofos se denominan
tambin productores primarios porque sintetizan materia
orgnica a partir de CO2, tanto para su propio beneficio
como para el de los quimioorganototrofos. Estos ltimos se
alimentan directamente de los productores primarios o
viven a expensas de los productos que ellos excretan.

153

Resumen:
Todas las clulas necesitan fuentes de energa y de carbono.
Organismo

Fuente de energa

fottrofo

Luz

quimiolittrofo

Compuestos
inorgnicos

quimioorganotrofo Compuestos
orgnicos

154

Organismo

Fuente de carbono

fottrofo

Prcticamente todos
utilizan CO2 como fuente
de C, (auttrofos).

quimiolittrofo

En la mayora de los
casos utilizan CO2 como
fuente de C. Pueden ser
auttrofos o hetertrofos.

quimioorganotrofos

Utilizan compuestos
orgnicos como fuente
de C. Son hetertrofos.

155

Tolerancia a condiciones ambientales extremas


Los microorganismos, en particular los procariotas tienen la
capacidad de poder vivir en hbitat caracterizados por uno o
ms parmetros extremos en las condiciones ambientales,
por ej aguas termales a ebullicin, en el hielo, en aguas de
elevada salinidad, y en suelos y aguas que tienen un pH
inferior a 0 o tan alto como 12. En ocasiones no es que sean
meramente tolerantes a esas condiciones extremas, sino que
realmente las requieren para crecer. Estos procariotas se
denominan extremfilos. En los hbitat que presentan
condiciones extremas, los procariotas son siempre
mayoritarios.

156

El microorganismo citado en cada categora es el que tiene el rcord actual en cuanto a


requerir una condicin extrema particular para crecer.
Picrophilus oshimae tambin es un termfilo, con crecimiento ptimo a 60oC.
Natronobacterium gregoryi es un halfilo extremo, con crecimiento ptimo a NaCl 20%.
La cepa MT41 an no tiene nombre oficial de gnero ni especie y tambin es un
psicrfilo, crece mejor por debajo de 10oC.

157

FIN

158

La Tierra primitiva y el origen de la vida


Se cree que la tierra tiene una edad de 4600 millones de aos; la
primera evidencia de vida microbiana se observa en rocas de 3860
millones de aos. La Tierra primitiva era anxica y mucho mas caliente
que en la actualidad. Los primeros compuestos bioqumicos se formaron
por sntesis abitica y esto estableci las bases para el origen de la
vida. Si bien no conocemos como era el primer organismo capaz de
autorreplicarse, a partir de lo que sabemos de las formas microbianas
actuales podemos afirmar que las entidades autorreplicativas ms
simples necesitaban un mecanismo para obtener energa y alguna
forma de herencia para hacer copias de si mismas. Podra extrapolarse
desde el presente hacia el pasado y postular que los organismos
primitivos se parecan a las clulas modernas, aunque con muy pocos
genes con limitadas capacidades para la transcripcin y la traduccin.
Tras el descubrimiento de que ciertos tipos de cido ribonucleico (RNA)
son catalticos, muchos cientficos actuales creen que las formas de
vida ms primitivas carecan totalmente de DNA, contenan tan slo
unas cuantas, si es que alguna, protena, y consistan principalmente de
RNA; era la edad de la vida del RNA, donde el RNA era tanto agente
catalizador como el cdigo gentico.

159

La vida con RNA. Las molculas de RNA habran funcionado con el fin
exclusivo de replicarse a s mismas y, probablemente, habran llevado a
cabo un nmero mnimo de reacciones catalticas necesarias para esta
finalidad. Estudios derivados de varias ribozimas catalticas de RNA han
demostrado que pueden catalizar varias reacciones, tales como la
sntesis de nucletidos. As, un perodo de vida con RNA podra haber
precedido a la vida celular. Estas formas de vida con RNA podran haber
evolucionado hacia las primeras formas de vida celulares, cuando el
RNA autorreplicativo quedara encerrado en vesculas de lipoprotena.
Estas estructuras parecidas a las clulas podran haber surgido
mediante la agregacin espontnea de molculas de lpidos y de
protenas para formar estructuras membranosas en cuyo interior
quedaron atrapados los RNA y otros precursores de biomolculas clave.
Esta etapa pudo haber ocurrido un sinnmero de veces en la Tierra
primitiva para volver a extinguirse, pero finalmente, los constituyentes
apropiados y las circunstancias adecuadas coincidieron y surgi un
organismo celular primitivo. Aunque careca de DNA y procesaba tan
slo protenas producidas abiticamente, esta forma de vida celular se
asemejara en otros aspectos a una clula moderna. A medida que estas
formas de vida se extendan, la seleccin natural las conducira hacia su
posterior desarrollo evolutivo.

160

Escenificacin hipottica de la evolucin de las formas de vida celulares a partir


de las formas de vida con RNA. Los RNAs autorreplicativos podran haber
llegado a ser entidades celulares mediante su integracin estable en vesculas
de lipoprotena. Con el tiempo, las protenas reemplazaron las funciones
catalticas del RNA y el DNA reemplaz sus funciones de codificacin

161

Las protenas muestran un grado de especificidad cataltica mucho mayor


que el que poseen los RNAs catalticos. A medida que los organismos
primitivos se hicieron bioqumicamente mas complejos, se produjo una
presin evolutiva hacia la utilizacin de las protenas como principales
agentes biocatalticos.
La clula moderna: DNA RNA Protena
El establecimiento del DNA como genoma de la clula pudo ser una
consecuencia de la presin evolutiva hacia una mayor eficacia y fidelidad
en la replicacin de la informacin gentica (las DNA polimerasa son mas
precisas que las RNA polimerasas). Adems, al guardar toda la
informacin gentica en un lugar en la clula y procesar solamente la que
se necesita bajo unas determinadas condiciones (al regular la expresin
gnica), las clulas habran ahorrado energa, lo que incrementara su
adecuacin competitiva. De alguna manera, en los estadios tempranos de
la evolucin microbiana, el sistema tripartito DNA-RNA-protena qued
fijado en las formas de vida celulares como la mejor solucin al
procesamiento de la informacin biolgica. A juzgar por las clulas
actuales, este sistema fue un xito evolutivo: todas las clulas conocidas
contienen estos tres tipos de macromolculas.

162

Metabolismo de los organismos primitivos


La vida es un proceso altamente ordenado y requiere de energa para
mantener su estructura. Para satisfacer los requerimientos energticos
los microorganismos primitivos slo podan recurrir a mecanismos
generadores de energa que tienen lugar en condiciones anxicas ya que
hasta la aparicin de las cianobacterias, el oxgeno molecular no exista
en cantidades significativas en la Tierra. Una simple reaccin qumica en
la que participa el ion ferroso (abundante en la Tierra primitiva) pudo
haber sido un proceso primitivo de obtencin de energa utilizado por los
primeros organismos.
La reaccin FeS + H2S FeS2 + H2 Go=-42kj / reaccin se produce
exotrmicamente con liberacin de energa. Esta reaccin tambin
produce H2, y se ha propuesto que este H2 pudo haber sido utilizado por
las clulas primitivas para originar una fuerza motriz de protones a travs
de una membrana, de la que una ATPasa primitiva podra haber extrado
energa qumicamente til como ATP. Con H2 como el donor de
electrones, se requiere su aceptor , que bien podra haber sido azufre
elemental, So. Esta sencilla reaccin acoplada habra requerido pocas
enzimas y podra haber constituido un suministro ilimitado de energa en
tanto existiera FeS accesible.

163

Esquema de un hipottico sistema generador de energa de las clulas


primitivas. La formacin de piritas conduce a la produccin de H2 y la
reduccin de So, los cuales alimentan una ATPasa primitiva. Ntese que
el SH2 tiene una funcin cataltica. Los sustratos netos seran FeS y So.

164

Es sorprendente que muchas Archeae hipertermfilas (que son los


organismos actuales ms cercanos a los organismos primitivos de la
Tierra) pueden llevar a cabo este tipo de reaccin.
Los organismos primitivos pudieron haber obtenido carbono de varias
fuentes, tales como carbono orgnico de sntesis abitica e incluso CO2 ,
un gas que era abundante en la Tierra primitiva. La utilizacin de CO2
continu evolucionando hacia la autotrofa, el proceso en el cual el
dixido de carbono se convierte en todos los componentes orgnicos de
la clula. La hiptesis de una autotrofa primitiva se sustenta en los
proyectos de secuenciacin de genomas microbianos, donde se ha
puesto de manifiesto que la autotrofa se produce en un nmero de
hipertermfilos que contienen un genoma pequeo que se ramifican
cerca de la raz del rbol evolutivo de la vida.

165

Oxigenacin de la atmsfera
La evolucin de la fotosntesis oxignica en las cianobacterias constituye
un hito en la historia de la Tierra. Estos organismos aparecieron
probablemente hace 3000 millones de aos, pero el O2 que produjeron
no se acumul en la atmsfera debido a la gran cantidad de sustancias
reductoras (como el FeS) todava presentes que reaccionaban
espontneamente con el O2 para formar H2O. Es altamente probable que
las cianobacterias evolucionaran a partir de prottrofos oxignicos
mediante el desarrollo de un fotosistema que pudiera utilizar el H2O
como un donante de electrones para la reduccin fotosinttica del CO2,
liberando O2 como subproducto (CO2 + H2O CH2O + O2). La evolucin
de la fotosntesis oxignica tuvo enormes consecuencias sobre el
ambiente de la Tierra ya que, a medida que se acumul el O2, la
atmsfera cambi de anoxignica a oxignica. Al existir abundancia de
O2 como aceptor de electrones pudieron evolucionar los organismos
aerbicos. Estos organismos eran capaces de obtener ms energa de la
oxidacin de compuestos orgnicos que los anaerbicos, lo que permiti
alcanzar densidades de poblaciones ms altas e increment las
posibilidades de evolucin de nuevos organismos y esquemas
metablicos.

166

Existe buena evidencia , procedente del registro fsil, de que cuando la


atmsfera de la Tierra se hizo oxidante, la velocidad de la evolucin se
increment enormemente, lo que condujo a la aparicin de
microorganismos eucariticos con orgnulos, y, a partir de ellos, a la
rpida diversificacin de los metazoos (organismos pluricelulares) y,
finalmente, a la aparicin de plantas y animales superiores. Otra
consecuencia importante de la aparicin del O2 fue la formacin de ozono
(O3), una sustancia que suministra una barrera que impide a la intensa
radiacin ultravioleta del Sol alcanzar la Tierra. Cuando el O2 se somete
a radiacin UV de onda corta se convierte en O3, el cual absorbe
fuertemente hasta longitudes de onda de 300 nm. Hasta que se form el
escudo de O3, la evolucin pudo haber continuado en lugares protegidos
de la radiacin directa del Sol, como los ocanos o debajo de las rocas,
ya que la intensa radiacin UV habra causado dao letal al DNA. Sin
embargo, despus de la produccin fotosinttica de O2 y el posterior
desarrollo de la capa de O3, los organismos pudieron expandirse por la
superficie de la Tierra, permitiendo la aparicin de una mayor diversidad
de organismos vivos. A continuacin se muestra un resumen de etapas
que pudieron producirse en la evolucin biolgica y en la oxigenacin de
la Tierra.

167

Principales acontecimientos de la
evolucin biolgica. La posicin de
los estadios de la escala temporal
son aproximados. Ntese como la
oxigenacin de la atmsfera,
debida al metabolismo de las
cianobacterias, fue un proceso
gradual a lo largo de un perodo de
unos 2000 millones de aos.
Ntese tambin que durante la
mayor parte de la historia de la
Tierra, solo existieron formas de
vida microbiana. Aunque no existe
un registro microfsil, la prueba
microqumica de las clulas
eucariticas se remonta a 2700
millones de aos.

168

Resumen
Las primeras formas de vida pueden haber sido RNA
autorreplicativos. Los primeros organismos celulares
probablemente emplearon una estrategia simple para la
obtencin de la energa. El metabolismo primitivo fue
anaerobio y posiblemente quimiolitotrfico, explotando las
abundantes fuentes de FeS y H2S presentes. La
fotosntesis oxignica condujo al desarrollo de un ambiente
xico y a una gran explosin evolutiva.

169

FIN

170

Orgnulos y eucariotas: endosimbiosis


Cmo surgi la clula eucaritica actual con su estructura interna
caracterstica: el ncleo rodeado por una unidad de membrana y los
orgnulos (por ejemplo las mitocondrias y los cloroplastos)?
Origen del ncleo.
Las clulas eucariticas primitivas eran estructuralmente simples y
carecan de mitocondrias, cloroplastos y ncleo rodeado por membrana. A
medida que las clulas en la lnea eucaritica de descendencia se
hicieron mayores, aparecieron el ncleo y el aparato mittico, a la vez que
el DNA, se fraccion en unidades discretas (cromosomas). Los
cromosomas pueden haber surgido para asegurar la replicacin y la
particin ordenada del DNA a medida que los genomas primitivos se
hicieron mas grandes, hasta llegar a un punto en el que su replicacin en
forma de una nica molcula (como en procariotas) no era viable. El
desarrollo del ncleo eucaritico tambin facilit la aparicin de los
enormes genomas que necesitaban los eucariotas microbianos de mayor
tamao (y mucho ms tarde los organismos pluricelulares), e hizo posible
la recombinacin de genomas mediante la reproduccin sexual.

171

No existe una razn obvia por la que los organismos primitivos


necesitaran orgnulos tales como las mitocondrias y los cloroplastos, los
cuales aparecieron probablemente ms tarde. En realidad, incluso
actualmente, se conocen microorganismos eucariticos que carecen de
mitocondrias y cloroplastos, lo que indica que estos orgnulos no son
esenciales para la funcin de la clula eucaritica.

Endosimbiosis. Existen pruebas concluyentes a favor de la teora


de que la clula eucaritica moderna (con orgnulos) evolucion en
etapas
mediante
la
incorporacin
estable
de
simbiontes
quimioorganotrficos y fototrficos del dominio Bacteria. Esta teora,
llamada teora endosimbitica de la evolucin eucaritica, postula que
una bacteria aerbica estableci su residencia estable dentro del
citoplasma de un eucariote primitivo y le suministr energa, a cambio de
un ambiente protegido y un aporte constante de nutrientes. Este
simbionte fue el precursor de la mitocondria moderna. De igual manera,
la adquisicin, por endosimbiosis de un fottrofo oxignico habra
conferido propiedades fotosintticas a un eucariota primitivo, de manera
que ya nunca dependera de compuestos orgnicos para el suministro
de energa. El endosimbionte fototrfico fue el precursor del cloroplasto.

172

Algunas clulas eucariticas nunca incorporaron endosimbiontes, o si lo


hicieron, luego por alguna razn lo perdieron.
Pruebas que respaldan la teora de la endosimbiosis.
-Las mitocondrias como los cloroplastos contienen ribosomas que son
claramente de tipo procaritico.
-Los ribosomas de estos orgnulos poseen secuencias del RNA
ribosmico caractersticas de determinadas Bacteria, y su funcin es
inhibida por los mismos antibiticos que afectan la funcin del ribosoma
de Bacteria de vida libre.
-las mitocondrias y los cloroplastos tambin contienen una pequea
cantidad de DNA dispuesto en una forma circular covalentemente
cerrada, tpica de procariotas.

173

Origen de los eucariotas actuales por


endosimbiosis.
Ntese
que
los
orgnulos se originan a partir de
Bacteria y no de Archeae. Es poco
probable que la endosimbiosis fuera un
acontecimiento nico y probablemente
ocurriera en varios tipos celulares de la
lnea nuclear. Ntese como algunos
procariotas
primitivos
nunca
experimentaron endosimbiosis, o bien,
perdieron
sus
simbiontes,
pero
mantuvieron las propiedades bsicas de
las clulas eucariticas. El incremento
en el tamao de las clulas en la lnea
nuclear, condujo a la evolucin de
genomas
de
mayor
tamao
y
probablemente tambin a la evolucin
del ncleo permitiendo la replicacin
ordenada y la reparticin de dichos
genomas.

174

Revisin de conceptos
El ncleo eucaritico y el aparato mittico surgieron
probablemente como una necesidad para asegurar la
particin ordenada del DNA en los organismos con
genomas grandes. Las mitocondrias y los cloroplastos,
los principales orgnulos productores de energa de los
eucariotas, surgieron por asociacin simbitica de
procariotas del dominio Bacteria en el interior de clulas
eucariticas, en proceso llamado endosimbiosis.
Evolucin biolgica y escala del tiempo. Los
metazoos han dejado un registro fsil considerable y muy
diverso que permite un buen conocimiento de la
evolucin biolgica desde su aparicin. Sin embargo, en
las 5/6 partes de la historia de la Tierra se desarrollaron
los procariotas de los cuales no se tiene un buen
conocimiento evolutivo a travs de registros fsiles. Esto
cambi con la utilizacin de mtodos moleculares.
175

Relaciones evolutivas entre los microorganismos


Filogenia de los microorganismos deducida de los estudios
moleculares de los cidos nucleicos. Comparacin de
secuencias del RNA estructural de los ribosomas.
Cronmetros evolutivos
Se ha demostrado convincentemente que la distancia
evolutiva entre dos organismos puede determinarse por las
diferencias en la secuencia de aminocidos o nucletidos de
macromolculas homlogas aisladas de cada una de ellas.
Esto se debe a que el nmero de diferencias en la secuencia
de macromolculas es proporcional al nmero de cambios
mutacionales estables fijados en el DNA que codifica esa
molcula en ambos organismos. La evolucin se produce a
medida que las mutaciones quedan fijadas en las diferentes
poblaciones, siendo la biodiversidad el resultado final.

176

Eleccin del cronmetro evolutivo


-La molcula debe estar distribuida universalmente en el
grupo elegido para el estudio.
-Debe ser funcionalmente homloga en cada organismo, o
sea, tener idntica funcin.
- Las molculas deben poder ser alineadas en forma
apropiada a fin de identificar regiones tanto con homologa
como con variaciones de secuencia.
-- La secuencia de la molcula elegida debera cambiar con
una velocidad proporcional a la distancia filogentica que se
va a determinar. Y, de hecho, cuanto mayor sea la distancia
filogentica a determinar, menor ser la velocidad de
cambio de la molcula; demasiado cambio tiende a enturbiar
el registro evolutivo.

177

Se han evaluado muchas molculas como cronmetros moleculares


y con ellas se han realizado estudios de comparacin de secuencias
a fin de generar rboles filogenticos. Estas molculas son: varios
citocromos, protenas de hierro y azufre tales como las ferredoxinas,
y genes de otras protenas y de los RNAs ribosmicos. Sin embargo,
los genes que codifican los RNAs ribosmicos, componentes clave
del sistema de traduccin; la ATPasa, complejo enzimtico de
membrana que puede sintetizar e hidrolizar ATP; y la RecA, protena
requerida para la recombinacin gentica, son los que han
proporcionado la informacin gentica ms significativa sobre los
microorganismos. Todas estas molculas
eran probablemente
esenciales incluso para las clulas ms primitivas y as , la variacin
de la secuencia en los genes que las codifican, nos permiten
profundizar en el registro evolutivo.

178

RNAs ribosmicos como cronmetros evolutivos


Debido a la probable antigedad de la maquinaria sintetizadora de
protenas, los RNAs ribosmicos son molculas excelentes para
poder discernir las relaciones evolutivas entre seres vivos. Los RNAs
ribosmicos son funcionalmente constantes, estn universalmente
distribuidos y su secuencia est moderadamente bien conservada a
travs de amplias distancias filogenticas. Tambin, dado el elevado
nmero de diferentes secuencias posibles de molculas grandes,
tales como los RNAs ribosmicos, la similitud de dos secuencias
indica alguna relacin filogentica. Sin embargo, es el grado de
semejanza de las secuencias de RNA ribosmico de dos organismos
lo que indica su parentesco evolutivo relativo. A partir del anlisis
comparativo de secuencias , se pueden construir las genealogas
moleculares que conducen a los rboles filogenticos. Estos muestran
la posicin evolutiva ms probable existente entre los organismos.
Recordemos que hay 3 molculas de RNA ribosmico, que en
procariotas tienen 5S, 16S y 23S. Los rRNAs bacterianos 16S y 23S
contienen varias regiones de secuencia altamente conservada que
resulta til para obtener alineamientos de secuencia apropiados.

179

Tienen tambin la variabilidad de secuencia suficiente en otras regiones


de la molcula para servir como excelentes cronmetros filogenticos.
En eucariotas se secuencia el homlogo del rRNA 16S, es decir, el
rRNA 18S de los ribosomas 80S. Hay base de datos en Internet que
contienen ms de 24.000 secuencias de RNAs alineadas (16.000
secuencias de 16S alineadas y 8.000 secuencias de 18S alineadas).

180

RNA ribosmico
a) Micrografa electrnica de
ribosomas 70S de E. coli.
b) Partes del ribosoma; 5S,
16S y 23S.
c) Estructura primaria y
secundaria del rRNA
ribosomal 16S de E. coli
(Bacteria). En general el
rRNA 16S de Archeae es
similar en cuanto a
estructura secundaria, pero
presenta numerosas
diferencias en cuanto a
estructura primaria. La
molcula correspondiente en
eucariotas es el rRNA18S
presente en los ribosomas
citoplasmticos.

181

FIN

182

Comparacin de la transferencia de
informacin gentica en procariotas
y eucariotas.
(a) Procariotas. Una nica molcula de RNA
contiene a menudo ms de una regin
codificadora
(tal
mRNA
se
llama
policistrnico). (b) Eucariotas. Las regiones
no codificantes (intrones) se eliminan del
transcripto primario antes de la traduccin.
Los mRNA de los eucariotas son casi
siempre monocistrnicos. Los dos tipos
celulares no estn dibujados a escala.

183

PCR. La reaccin en cadena de la polimerasa puede


multiplicar molculas de DNA hasta miles de millones de
veces proporcionando grandes cantidades de genes para
su clonacin, secuenciacin o mutagnesis. La PCR hace
uso de la DNA polimerasa que copia molculas de DNA. La
tcnica de PCR requiere que se conozca la secuencia
nucleotdica de una regin del gen deseado para poder
disear oligonucletidos iniciadores cortos o primers,
complementarios de secuencias presentes en el gen o
genes de inters. Las etapas de amplificacin son las
siguientes: 1- En un sintetizador de nucletidos se fabrican
los dos oligonucletidos iniciadores que flanquean al gen
diana, y se aaden en un gran exceso al gen diana
desnaturalizado por calor. 2- Cuando se ha enfriado la
mezcla, el exceso de iniciadores relativos al DNA diana
asegura que la mayor parte de las cadenas diana hibriden
con iniciadores y no entre s. 3- La DNA polimerasa alarga
los iniciadores usando las bandas diana como moldes. 4Despus de un perodo de incubacin adecuado, se
calienta de nuevo la mezcla para separar las cadenas.
Luego se enfra la mezcla para permitir que los iniciadores
se hibriden con las regiones complementarias del DNA
recin sintetizado, y se repite el proceso.

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As, cada ciclo de PCR implica las siguientes etapas:


1- desnaturalizacin por calor del DNA bicatenario diana.
2- enfriamiento para permitir el acople de iniciadores
especficos con el DNA diana
3- extensin de los iniciadores por la DNA polimerasa.
Los productos de la extensin de un iniciador pueden servir
de molde para el otro iniciador en el siguiente ciclo. Cada
ciclo de PCR duplica literalmente el contenido original de
DNA diana. En la prctica suelen hacerse unos 20 o 30
ciclos, logrndose as incrementar la secuencia diana entre
106 y109 veces.

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