Facultad de Ciencias de la Salud

Departamento de Ciencias Biolgicas

BIO 050-2014

Metabolismo y
Crecimiento Bacteriano

Facultad de Ciencias de la Salud

Departamento de Ciencias Biolgicas
BIO 050-2014

Metabolismo

Metabolismo y Necesidades energticas.

Nutrientes para
la sntesis

Productos de desecho

Anabolismo
Energa
(Biosntesis)
para biosntesis

Macromolculas y
otros componentes

Energa
para la movilidad,
Transporte
de nutrientes
Catabolismo

Productos qumicos, luz

(fuente de energa)

Metabolismo bacteriano.
Conjunto de reacciones bioqumicas que se realizan
al interior del organismo

Biodegradacin
Catabolismo
Generacin de energa

Anabolismo
Consumo de energa

Biosntesis

Rx. Catablicas:
Son reacciones
degradativas, proporcionan
energa.
Rx. Anablicas: Son
reacciones sintticas,
proporcionan componentes
estructurales.

Metabolismo bacteriano. Enzimas.

Catalizador
Sustancia que disminuye la energa de activacin de una reaccin qumica,
aumentando su velocidad de una reaccin qumica.
El catalizador no se ve alterado permanentemente durante la reaccin.
(se regenera al final del proceso o reaccin).

Las enzimas son protenas

catalticas (biocatalizadores) que
disminuyen la energa de
activacin requerida para que
ocurra una reaccin qumica.
Energa de activacin: energa
necesaria para juntar las
molculas reactantes (sustratos)
de la manera adecuada de modo
que alcancen el estado de
transicin.

H2O2

H2O2

H2O + O2

> aos

H2O + O2

< seg

Metabolismo bacteriano. Ciclo cataltico de las enzimas.

Etapas de una reaccin enzimtica:

1.
2.
3.
4.

Unin especfica a un sustrato

Ubicacin del sustrato en el sitio activo de la enzima (complejo E-S)
Generacin de productos
Regeneracin de la enzima

Vas enzimticas

Ejemplo: Ciclo cataltico de la Aldolasa

Metabolismo. Papel del ATP.

Metabolismo. Catabolismo.
Degradacin de molculas de hidratos de carbono para obtener
energa (sntesis de ATP).

Nutrientes Bacterianos:
Macronutrientes:
Son requeridos en gran cantidad
(Ej.: Carbono, Nitrgeno,Hidrgeno, Oxgeno, Fsforo, Azufre,
Potasio, Magnesio, Calcio, Sodio y Fierro)
Micronutrientes:
Son requeridos en pequea cantidad
(Ej.: Cromo, Cobalto, Cobre, Manganeso, Molibdeno, Nquel, Selenio,
Tungsteno, Vanadio y Zinc.)

Metabolismo. Nutrientes bacterianos.

Metabolismo. Catabolismo.

1.Gliclisis o gluclisis.

2.Ciclo de Krebs o cidos

tricarboxlicos (ATC).

3.Sistema de transporte
de electrones o
Fosforilacin Oxidativa.

Catabolismo. Glicolisis.
Visin general

Glucosa
Gliceraldehdo 3-fosfato

Piruvato

Catabolismo. Glicolisis.
Ecuacin general:

Balance energtico:
Gasto: 2 ATP
Produccin: 4 ATP + 2 NADH

2 ATP
2 NADH = 6 ATP

8 ATP

Respiracin anaerobia. Fermentacin del cido pirvico.

Glucosa

Gliclisis

cido Pirvico
(piruvato)

Fermentacin
anaerbica
Piruvato
lactato
deshidrogenasa

Respiracin
aerbica
Piruvato
piruvato
descarboxilasa

Acetaldehido
Lactato

alcohol
deshidrogenasa

Etanol

F. Lctica

Ciclo de Krebs

F. Alcohlica

Fosforilacin
oxidativa

CO2 + H2O

Respiracin anaerobia. Fermentacin alcohlica.

Alcohol
deshidrogenasa

2 Etanol

Fermentacin
anaerbica

La fermentacin alcohlica es ampliamente usada en la

fabricacin de alimentos como vino, cerveza, pan.

Respiracin anaerobia. Fermentacin lctica.

Fermentacin
anaerbica

Fermentacin usada
por los lactobacilos
(Bacillus lactis):
Utilizan la lactosa
(azcar de la leche).

Lactato
deshidrogenasa
2 x Lactato

El lactato acumulado baja el pH, lo que hace que las protenas de la

leche precipiten en el proceso de fabricacin del queso.

Catabolismo. Ciclo de Krebs.

2 Piruvato

2 Acetil- CoA + 2 NADH

Balance energtico:
Produccin: 8 NADH + 2 FADH2 + 2 GTP

2 GTP 2 ATP
8 NADH = 24 ATP
2 FADH2 = 4 ATP

30 ATP

Catabolismo. Fosforilacin oxidativa.

Cadena Transportadora de electrones.

1 Glucosa = 38 ATP
Rendimiento energtico final:
Gliclisis = 8 ATP
Ciclo de Krebs = 30 ATP

Respiracin Aerbica y Anaerbica.

E. coli es capaz de
realizar ambos tipos
de respiracin,
dependiendo si esta
creciendo en
presencia o ausencia
de oxgeno.

Respiracin aerbica

Respiracin anaerbica

Respiracin Aerbica. Formas txicas del oxgeno.

Los radicales libres de O2 se generan durante el metabolismo normal de las

bacterias en la respiracin aerbica.
Los radicales superxido (O2-) e hidroxilo (HO) reaccionan rpidamente
oxidando diversas macromolculas orgnicas como lpidos, protenas y
cidos nucleicos.
Esta oxidacin provoca la destruccin de estructuras biolgicas, como
membranas, complejos multiproteicos, DNA, etc.

Formas txicas del oxgeno. Enzimas detoxificantes.

La presencia de enzimas
capaces de degradar los
derivados txicos del O2 le
permite a un determinado
microorganismo utilizar esta
molcula como aceptor final
de electrones durante el
proceso de la respiracin
aerbica.

Catalasa (-) Catalasa (+)

Prueba de la presencia de catalasa:

Colonia suspendida en agua oxigenada
(30%)
( 2H2O2 2H2O + O2 )

Metabolismo. Identificacin bacteriana.

Cultivo puro

Morfologa de colonia y de tincin de Gram

Propiedades
Bioqumicas
Fermentacin de glucosa
Utilizacin de citrato
Produccin de H2S
etc.

Propiedades
Antignicas
Reacciones serolgicas
Anticuerpos especficos

Caractersticas
de crecimiento
Temperatura
Aerobiosis
Anaerobiosis
etc.

Clasificacin bacteriana. Segn tolerancia al oxgeno.

Anaerobias estrictas: Carecen de SOD, catalasa y peroxidasa
por lo que el O2 es muy txico para ellas. No soportan
presiones de O2 > al 0,5%.
Ej. Clostridium haemolyticum.
Anaerobias moderadas: Soportan presiones de O2 de 2 - 8%.
Pueden estar expuestas al aire por 60-90 minutos sin perder
viabilidad.
Ej. Bacteroides fragilis.
Anaerobias aerotolerantes: Poseen algn nivel de enzimas
detoxificantes.
Ej. Lactobacillus spp., Leuconostoc spp.

Clasificacin bacteriana. Segn tolerancia al oxgeno.

Microaeroflicas: Sobreviven a presiones de O2 menores

a la atmosfrica (<21%). Son capnoflicas (requieren CO2).
Ej. Campylobacter spp.
Anaerobias facultativas: Pueden realizar metabolismo
anaerobio o aerobio dependiendo del ambiente.
Ej. Escherichia coli y otras enterobacterias.
Aerobias estrictas: Slo crecen en presencia de O2.
Ej. Pseudomonas sp.

Clasificacin bacteriana. Segn fuente de energa.

1. Quimiotrficas o
Quimiosintticas:
Son aquellas que obtienen
su energa a partir de
reacciones qumicas

E. coli (Enterobacteria)

2. Fototrficas o
Fotosintticas:
Son aquellas que
obtienen su energa
captndola de la luz solar

Oscillatoria (Cianobacteria)

Clasificacin bacteriana. Segn fuente de energa.

1. Quimiotrficas o Quimiosintticas:
a) Quimioorganotrficas

Quimioorgano...Sustancia qumica orgnica

(trophos: alimento)

Obtienen su energa a travs de la utilizacin

de sustancias qumicas orgnicas

Clasificacin bacteriana. Segn fuente de energa.

1. Quimiotrficas o Quimiosintticas:
b) Quimiolitotrficas

Quimiolito...Sustancia qumica inorgnica

(lithos: piedra; trophos: alimento)

Obtienen su energa a travs de la utilizacin

de sustancias qumicas inorgnicas

Metabolismo Quimiolitotrfico.

Oxidacin del Fe2+ por el acidfilo Acidithiobacillus ferrooxidans

Clasificacin bacteriana. Segn fuente de energa.

2. Fotosintticas o Fototrficas:

Membrana plasmtica de una cianobacteria fotosinttica.

La luz solar aporta la energa requerida para el proceso de transferencia
de electrones en la membrana, generndose un gradiente de protones
que se acopla a la sntesis de ATP.

Resumen Catabolismo.
Obtencin de Energa
Gliclisis
Ciclo de Krebs
Sistema de transporte de electrones

Fermentaciones:
lctica
alcohlica

Tolerancia al O2
Anaerobios estrictas
Anaerobios moderadas
Anaerobios aerotolerantes Microaerfilos
Anaerobios facultativas
Aerobios estrictas

Fuente de Energa
Quimiotrficos
Fototrficos

Quimiotrficos:
Quimioorganotrficos
Quniolitotrficos

Resumen Catabolismo.

Metabolismo. Anabolismo.
Sntesis de componentes estructurales (Biosntesis de
macromolculas).

Segn su fuente de carbono, las bacterias se clasifican en:

Hetertrofas:
Obtienen el carbono a partir de molculas ms complejas.
Ej.: hidratos de carbono, aminocidos, lpidos.

Auttrofas:
Obtienen el carbono a partir de molculas simples. Ej.:
CO2, CH4, N2, Na2SO4, etc.

La gran mayora de las bacterias de inters clnico son hetertrofas

Metabolismo. Anabolismo.

Los microorganismos son la base de todas las cadenas alimenticias

Anabolismo. Fijacin de molculas simples.

Fijacin de Carbono (CO2)
Ciclo de Calvin: Es realizado por todas las bacterias fototrficas.

Fijacin de 3 molculas de CO2 (una

por cada vuelta del ciclo)
Produccin de 1 molcula de
gliceraldehdo 3 fosfato que abandona
el ciclo para producir glucosa.

Anabolismo. Fijacin de molculas simples.

Fijacin de Fsforo (P)
Fotofosforilacin: Formacin de ATP desde ADP y Pi durante la fotosntesis.
Fosforilacin Oxidativa: Formacin de ATP desde ADP y Pi durante la cadena
transportadora de electrones.
Fosforilacin a Nivel de Sustrato: Ej. Durante la gliclisis

Gliceraldehido-3-P + Pi + NAD+

1,3-Bisfosfoglicerato + NADH + H+

Anabolismo. Fijacin de molculas simples.

Fijacin de Azufre (S)

SO42H2S + Serina

ATP

H2S
Cistena + H2O

Anabolismo. Fijacin de molculas simples.

Fijacin de Nitrgeno (N)
Desnitrificacin
NO3- + H+ + NADH

NO2- + NAD+ + H2O

Nitrificacin- desnitrificacin-fijacin del nitrgeno

NO2-

NH3

Desnitrificacin-fijacin del nitrgeno

N2

NH3

NH3 + c. glutmico
ATP
Glutamina
Reacciones de Oxidacin
Reacciones de Reduccin

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Crecimiento Bacteriano

Divisin Bacteriana. Fisin Binaria.

Se requiere coordinacin espacial
y temporal (secuencial) en la
sntesis de macromolculas:
DNA
Protenas
Hidratos de Carbono
Lpidos
Reflejado
(poblacionalmente) por
un aumento en el
nmero de organismos
presentes.

Divisin Bacteriana. Fisin Binaria.

1. La bacteria duplica su
Cromosoma
2. Luego la clula aumenta en
tamao
3. Se inicia la divisin de la clula
y la formacin del tabique que
separa las clulas hijas
4. Resultado: dos clulas idnticas
o clonales

Divisin Bacteriana. Definiciones.

Crecimiento: Aumento del nmero de individuos (M.O.) en una
poblacin.
(Implica un aumento de la biomasa del M.O.)
Velocidad de crecimiento: Crecimiento de un M.O. por unidad de
tiempo.

Tiempo de generacin (g): Tiempo requerido para que se formen

dos clulas hijas a partir de una clula parental. Es el tiempo
necesario para que la poblacin bacteriana se duplique.
(Implica la duplicacin de todos
los componente estructurales de la
clula)

Divisin Bacteriana. Crecimiento Exponencial.

Crecimiento Logartmico (Progresin Geomtrica)
20

21

22

23

24

Divisin Bacteriana. Crecimiento Exponencial.

Divisin Bacteriana. Curva de Crecimiento.

Fase lag: Crecimiento lento (etapa de acondicionamiento ambiental)

Fase exponencial o logartmica: Crecimiento bacteriano a mxima
capacidad
Fase estacionaria: Detencin del crecimiento, no del metabolismo
(estrs, hambruna)
Fase de decaimiento: Muerte celular (agotamiento del cultivo)

Medicin del Crecimiento Bacteriano.

1.- Recuento total de clulas:
Conteo directo bajo el microscopio usando una muestra (diluida) de
cultivo bacteriano y una cmara de recuento calibrada (Petroff-Hausser).

Este mtodo no discrimina la viabilidad de las bacterias en la muestra.

Medicin del Crecimiento Bacteriano.

14 clulas
FD 1.250.000
Recuento total:
14XFD
17.500.000

Medicin del Crecimiento Bacteriano.

1.- Recuento total de clulas
DESVENTAJAS

No permite distinguir clulas muertas de las vivas.

Las clulas pequeas son difciles de ver al microscopio.
Se requiere tiempo y habilidad para conseguir precisin por este
mtodo.
Se requiere un microscopio de contraste de fases cuando la muestra
no est teida.
No es un mtodo recomendable cuando la suspensin de clulas
est muy diluida.

Medicin del Crecimiento Bacteriano.

2.- Recuento de clulas

viables:
2.1.- Dilucin seriada de la muestra
en medio o buffer estril y siembra
(plaqueo) sobre medio slido.

Medicin del Crecimiento Bacteriano.

2.- Recuento de clulas

viables:
2.2.- Dilucin de la muestra y
siembra (plaqueo) de la muestra
incluida en el medio slido.

Medicin del Crecimiento Bacteriano.

Medicin del Crecimiento Bacteriano.

2.- Recuento de clulas viables (vivas)
VENTAJAS

En condiciones adecuadas, es sensible

El uso de medio selectivos y diferenciales permite contar bacterias
especficas
DESVENTAJAS

El nmero de colonias no depende slo del tamao del inculo,

tambin depende de:
Medio de cultivo
Condiciones de incubacin
Tiempo de incubacin
Colonias pequeas pueden ser ignorada
No siempre las colonias son del mismo tamao: Las colonias
pequeas pueden ser ignoradas.

Medicin del Crecimiento Bacteriano.

3.- Medicin espectrofotomtrica, fotomtrica o
turbidimtrica de un cultivo bacteriano lquido.

Medicin del Crecimiento Bacteriano.

3.- Medicin espectrofotomtrica
VENTAJAS
Esta tcnica no distorsiona a las muestras

Generalmente muy precisas

Fcil, rpido y barato

DESVENTAJAS

No discrimina entre clulas vivas y muertas

El crecimiento celular es una estimacin de la biomasa

A elevadas concentraciones celulares (alta turbidez) se pierde

precisin

Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Temperatura.

Consecuencias moleculares de la temperatura en el crecimiento bacteriano

Las reacciones
enzimticas ocurren a la
mxima velocidad
posible.
Las reacciones enzimticas van
aumentando su velocidad de reaccin.

Congelacin de la membrana; el
transporte es tan lento que no
hay crecimiento.

Desnaturacin de
protenas; colapso de la
membrana citoplasmtica;
lisis trmica.

Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Temperatura.

Psicrfilos: Temperatura ptima baja (<1 a 15C)

Mesfilos: Temperatura ptima en rango medio (25 a 42C)
Termfilos: Temperatura ptima alta (50 a 70C)

Hiper termfilos: Temperatura ptima muy alta (80 a >100C)

Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Temperatura.

Hipertermfilos

Aguas termales del

Parque Nacional Yellowstone

Thermus aquaticus
Extremfilo, de la familia arquea.
T ptima de crecimiento
70C
Fuente de la enzima Taq
Polimerasa (PCR)

Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Salinidad.

No halfilos: No toleran ni siquiera concentraciones moderadas de sal.

Halotolerantes: Toleran concentraciones moderadas de sal
Halfilos: Leves (1 a 6% NaCl) y Moderados (6 a 15% NaCl).
Halfilos extremos: 15 a 30% NaCl.

Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Salinidad.

Lago poblado por

Halobacterium salinarum

Halobacterium salinarum
Necesita 12 a 15% de NaCl en el
medio para crecer.
Mar: 3% NaCl
Sangre: 0,85% NaCl

Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Acidez (pH).

Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Acidez (pH).

Acidithiobacillus ferrooxidans
En medio altamente cido (en H2SO4
concentrado, pH 1) es capaz de
oxidar minerales de cobre insolubles
como CuFeS2 (calcopirita), Cu2S
(chalcocita), CuS (covelita) y Cu5FeS4
(bornita), produciendo CuSO4
(soluble)

Mina de cobre de Chuquicamata,

Regin de Antofagasta, Chile

Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Oxgeno.

Grupo

Relacin con el O2

Metabolismo

Ejemplo

Requerido

Respiracin aerbica

M. luteus

No requerido (Mejor con O2)

Respiracin, fermentacin

Requerido (Bajos niveles)

Respiracin aerbica

S. volutans

No requerido (Peor con O2)

Fermentacin

S. pyogenes

Aerobios
Estrictos
Facultativos
Microaeroflicos

E. coli

Anaerobios
Aerotolerantes
Estrictos

Daina o Letal

Respiracin, fermentacin

P. gingivalis

Resazurina
(Indicador de
presencia de oxgeno)
(a) Aerbica
(b) Anaerbica
(c) Facultativa
(d) Microaeroflica
(e) Anaerobia aerotolerante

Factores que afectan el crecimiento Bacteriano. Oxgeno.

Jarra Anaerbica (GasPack)
Diseada para el
crecimiento de bacterias
anaerbicas.
Mecanismo hermtico,
posee un catalizador
qumico que consume todo
el oxgeno dentro del
recipiente.
Cmara Anaerbica

Medios de Cultivo. Condiciones de los Medios de Cultivos.

Esterilidad

Tener todos los nutrientes esenciales (agua, fuente de nitrgeno, fuente

de carbono, sales minerales, micronutrientes, vitaminas, etc.)

Cumplir con requisitos fsicos: temperatura (37C), pH neutro (7.0 - 7.2 ),

condicin atmosfrica (10% CO2)

Estar protegidos del medio ambiente (Evitar su contaminacin con

microbiota ambiental y/o comensal)

Medios de Cultivo. Esterilizacin.

Autoclave

Medios de Cultivo. Esterilizacin.

Filtracin

Radiacin

Medios de Cultivo.
Cmo se observa desarrollo bacteriano en los medios de cultivo?
En medio lquido.
Enturbiamiento
Aparicin de grumos
Formacin de un velo o pelcula en la superficie

En medio slido.
Formacin de colonias

Colonia: Multiplicacin de una bacteria que forma una masa

visible a ojo desnudo

Medios de Cultivo.
Cul es la utilidad de los medios de cultivo?

Aislamiento de bacterias a partir de una muestra (agua, secreciones, aire,

alimentos, muestras clnicas).

Obtencin de cultivos puros, para el estudio de propiedades fisiolgicas e

identificacin.

Conservacin de cepas.

Evaluacin de antibiticos.

Pruebas de esterilidad.

Fabricacin de sueros, vacunas, etc.

Medios de Cultivo. Clasificacin.

1.- Segn su estado fsico.

Medio slido
(agar 1,5%)

Medio semi slido

(agar 0,8%)

Medio lquido

Medios de Cultivo. Clasificacin.

2.- Segn su presentacin.

Medio de cultivo en tubo

Medio de cultivo en placa

Medios de Cultivo. Clasificacin.

3.- Segn su contenido de nutrientes.
Medios definidos (qumicamente):
Contienen cantidades precisas y bien formuladas de diversos
componentes inorgnicos y orgnicos. Renen los requerimientos
nutricionales para el desarrollo de un determinado microorganismo.
Medios complejos (indefinidos):
No poseen una formulacin
precisa. Se preparan en base a infusiones
de digeridos proteicos (carne, soya,
casena, extracto de levadura). La mayora
de estos medios se venden deshidratados,
lo que facilita su preparacin.

Medios de Cultivo. Clasificacin.

4.- Segn su utilidad.
1.- Corriente (bsicos):
Contienen slo los elementos nutritivos esenciales. Ej.: caldo Luria (medio
lquido) y agar corriente (medio slido).

Medios de Cultivo. Clasificacin.

4.- Segn su utilidad.
2.- Especiales:
Mejorados o enriquecidos: Son medios corrientes adicionados de
sustancias de alto valor nutritivo (sangre, suero, vitaminas, extractos de
levaduras), que permiten el desarrollo de bacterias ms exigentes. Ej.: Agar
sangre (medio slido), agar chocolate (medio slido).
Medios selectivos: Contienen sustancias inhibidoras para
determinadas bacterias. Ej.: Agar SS para Salmonella y Shigella, Thayer
Martin para N. gonorrhoeae y Agar MacConkey para Gram (-).
Medios diferenciales: Permiten establecer si una bacteria
desarrolla una determinada funcin metablica que la diferencia de otras
bacterias. Ej.: Citrato de Simmons, TSI, MIO, LIA, Caldo urea.

Medios de Cultivo. Clasificacin.

Enriquecidos

Agar Chocolate con

Agar Sangre con

Haemophilus influenzae

Staphylococcus epidermidis

Medios de Cultivo. Clasificacin.

Enriquecido y diferencial: Agar Sangre.

-hemlisis: Parcial
(se observa halo verdoso)

-hemlisis: Total
(se observa halo transparente)

-hemlisis: No produce hemlisis

Medios de Cultivo. Clasificacin.

Selectivo y diferencial: Agar Mc Conkey.

E. coli
Gram (-), lac+

S. Typhimurium
Gram (-), lac-

S. aureus
Gram (+)

Selectivo: Selecciona lo que crece, en ste caso slo Gram (-) debido a la
presencia de cristal violeta y sales biliares.

Diferencial: Dentro de lo que crece, marca diferencias. En este caso los que
utilizan lactosa como fuente de carbono (lac+) de los que no (lac-)

Medios de Cultivo. Clasificacin.

Selectivo y diferencial: Agar Manitol Salado.
En ste medio slo crecen
Staphylococcus.
Es selectivo por su alta
concentracin de sal.
Diferencia segn la capacidad
de utilizar manitol

S. aureus Gram +
Utiliza manitol

S. epidermidis Gram +
No utiliza manitol