REA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLO

PROGRAMA ACADMICO DE QUMICA

ESPECIALIDAD TECNOLOGIA AMBIENTAL
GRUPO
QU-301
MATERIA
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

TITULO
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS
DE LA MATRIZ AMBIENTAL: __________________
Suelo
ASESORA
Dr. ROSA RICO MATA
DATOS DE IDENTIFICACIN DE LOS ANALISTAS
Fecha de inicio del anlisis: 29 DE JUNIO DE 2015
Fecha de trmino: 10 DE JULIO DEL 2015
Nombre
MARTN DEL CAMPO ORTZ ISRAEL

Cargo
Responsable

GRIMALDO MNDEZ JESS ADIR

Administrador

PEDROZA LVAREZ JESS OMAR

Laboratorista 1

PREZ RAMREZ MIRIAM ALEJANDRA

Laboratorista 2

RAMREZ RAMREZ MIGUEL NGEL

Laboratorista 3

GENERACIN: 2014-2016

MICROBIOLOGA AMBIENTAL UTL

ASESORA:

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DATOS DEL SITIO EN ESTUDIO

1.- Breve descripcin del estatus ambiental del sitio de estudio:
En la presa desembocan todo tipo de desechos industriales y domsticos, el agua de dicha presa se conduce a travs de un
canal a cielo abierto, hacia las comunidades de Santa Rosa, Plan de Ayala y San Pedro del Monte y su destino final es para el
riego de alfalfa y lechuga, estas aguas estn fuertemente contaminadas qumica y bacteriolgicamente, al no sufrir ningn
tratamiento de remediacin.
Nombre
Ubicacin
Imagen de mapa satelital
/coordenadas GPS
Presa Blanca

SITIO DE
MUESTREO

Len Gto.
Coordenadas:
21 5'10.97"N
10142'35.19"O

2. Evidencia fotogrfica del sitio

Fecha: 11/06/15
Hora: 10:32 am

Fecha: 11/06/15
Hora: 10:34 am

DATOS DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR

1. Identificacin
Fecha y hora de toma de muestra:
Fecha y hora de siembra: 01/07/15 a
11/06/15 a las 12:02 pm
las 10:36 am
Punto de Muestreo (ubicacin /coordenadas GPS):
Tiempo de exposicin (aplica solo para muestra de aire)
21 5 40.97 N 121 42 39.98 O
Nombre del/ los analistas que tomaron la muestra:
Nombre del/ los analistas que sembr la muestra:
Diana Erndira Uribe Jurez
Diana Erndira Uribe Jurez
Matriz ambiental: Suelo

2.Parmetros Fisicoqumicos
Color: caf oscuro

Temperatura (oC) ambiental: 23.4 C

Olor: Tierra hmeda

Describir condiciones climatolgicas: Soleado

pH: 6.5

3. Evidencia fotogrfica del sitio de toma de muestra

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ASESORA:

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
1. Justificacin del proceso para la identificacin bacteriana
A partir de la aplicacin de una marcha bioqumica, es decir, en la identificacin de una bacteria, nos es
posible conocer sus procesos metablicos lo que nos permite obtener un amplio panorama de cmo muchos
microorganismos actan en las diferentes matrices ambientales como lo es el suelo, ya sea degradando
contaminantes o simplemente absorbindolos para que estos tengan un impacto menor al medio ambiente o no
causen daos a la salud pblica.
El proceso realizado para la identificacin de una bacteria en la matriz de suelo se realiz con la finalidad de
poner en prctica la realizacin de una marcha bioqumica que en funcin de la bacteria aislada tendra en los
distintos medios de cultivo un comportamiento especfico del cual es factible interpretar su metabolismo y
conocer su interaccin con el medio ambiente.
2. Dos medios de siembra (Nombre y Receta)
1. Agar Rojo y bilis violeta
(contenido por litro de preparacin)
Extracto de levadura- 3 g
Peptona- 7 g
Lactosa- 10 g
Mezcla de sales biliares- 1.5 g
Cloruro de sodio- 5 g
Agar- 15 g
Rojo neutro- 0.03 g
Cristal violeta- 0.002 g

2. Agar base sangre

(Contenido por litro de preparacin)
Infusin de musculo de corazn- 10 g
Peptona- 10 g
Cloruro de sodio- 5 g
Agar- 15 g

Morfologa Colonial (Medio 1)

Las colonias en el agar Rojo bilis violeta se perciben del
color del medio, incoloras (Salmonella typhimurium,
Proteus mirabilis y Pseudomonas aeruginosas), aquellas
que fermentan la lactosa se aprecian rojizas de 1-2 mm
de dimetro con halo de precipitacin rojizo (Escherichia
coli y Klebsiella pneumoniae), Enterococcus faecalis se
observa en colonias rosadas, pequeas y puntiformes.
Su forma se aprecia redonda o irregular, la superficie es
convexa y con bordes redondeados.

Morfologa Colonial (Medio 2)

Las colonias de Pseudomona aeruginosa en el medio
agar base sangre se observan de forma circular o
irregular de color rosado, superficie convexa y borde
redondeado.
Otras
bacterias
que
crecen
satisfactoriamente en este agar son Escherichia coli y
Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes y
pneumoniae con caractersticas similares.

MICROBIOLOGA AMBIENTAL UTL

ASESORA:

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Imagen

Imagen

Colonias de Pseudomonas
aeruginosas
Colonias de Pseudomona
aeruginosa

3. Dos Medios selectivos de resiembra (Nombre y receta)

1. Agar Cetrimida
(Contenido por litro de preparacin)
Cloruro de magnesio- 1.4 g
Peptona de gelatina- 20 g
Cetrimida- 0.3 g
Glicerina 10 mL
Agar- 13.5 g

2. Agar E.M.B
(Contenido por litro de preparacin)
Peptona- 10 g
Lactosa- 5 g
Sacarosa- 5 g
Fosfato dipotsico- 2 g
Eosina- 0.4 g
Azul de metileno- 0.065 g
Agar- 13.5 g

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ASESORA:

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Morfologa Colonial (Medio 1)

Descripcin
Las colonias en el agar cetrimida (solo Pseudomonas
aeruginosa) se perciben de un color amarillo verdosoazulado, superficie convexa. Forma y bordes
redondeados.

Morfologa Colonial (Medio 2)

Descripcin
Las colonias observadas en este medio son negras
azuladas y de brillo metlico (Klebsiella y Escherichia
coli) si es que fermentan lactosa y/o sacarosa, si no lo
hacen son visibles incoloras (Proteus mirabilis,
Salmonella
typhimurium,
Shigella
flexneri,
Pseudomonas aeruginosa y Enterococcus faecalis).
Mientras que Candida albicans tienen caractersticas
rosadas puntiformes. Estas poseen caractersticas
peculiares como son superficie convexa, forma
irregular y bordes redondeados. Tambin presentan
un aspecto mucoide.

Imagen

Imagen

Colonias de Pseudomonas
aeruginosas

Colonias de Pseudomonas
aeroginosas

4. Procedimiento de Aislamiento
(describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)
Materiales/Reactivos/Medios de cultivo/ Equipo a utilizar
2 Cajas Petri
- Agua destilada
1 Isopo estril
Matraz Erlenmeyer de 250 mL
- Agar E.M.B
1 Asa bacteriolgica
-Agar rojo bilis
1 Esptula
violeta
1 Piceta
-Algodn
1 Charola de pesado
-Papel aluminio
1 Agitador
-Tijeras
1 Probeta de 100 mL
1 Mechero Bunsen

-1 Incubadora
- 1 Refrigerador
- 1 Autoclave
- 1 Balanza analtica
- 1 Campana de
flujo laminar

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ASESORA:

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Preparacin de medio de cultivo:

1. Tomar los medios de cultivo agar E.M.B y Rojo bilis violeta y leer las instrucciones de preparado que
se ubican en la etiqueta del frasco.
2. Realizar los clculos necesarios para la preparacin de los agares que en el caso del E.M.B (Eosina y
Azul de Metileno) por cada litro de preparacin sern 36 g de medio para el agar Rojo bilis violeta
pesar por cada litro de agua 41.5 g de medio.
3. Lavar y enjuagar el material a utilizar con agua destilada.
4. Pesar el medio necesario para dos cajas que son aproximadamente 1.44 g de EM.B y 1.66 g de Rojo
bilis violeta. Preparar los agares en un matraz Erlenmeyer agitando para disolver grumos.
5. Fabricar un tapn de algodn y gasa para el matraz as como una capucha de aluminio y colocarlo.
6. Etiquetar los medios y llevar a esterilizacin en autoclave a 121 C, durante 15 minutos (solo el agar
E.M.B).
7. Para el agar Rojo bilis violeta no es necesaria la esterilizacin por lo que es suficiente calentar con
agitacin frecuente durante un minuto y etiquetarlo.
8. Dejar enfriar el tiempo necesario y vaciar en cajas Petri en la campana de flujo laminar.
9. Etiquetar las cajas preparadas para su posterior identificacin.
10. Almacenar en refrigeracin hasta su uso.

Pasos para el aislamiento del microorganismos (siembra, seleccin de la colonia y resiembra):

1. Recolectar la muestra de suelo en cantidad y el recipiente adecuado, en un frasco de vidrio estril que
debe ser llenado tres cuartas partes aproximadamente y cerrar inmediatamente.
2. Realizar la siembra de suelo en una caja Petri con medio de cultivo Rojo bilis violeta utilizando un hisopo
estril.
Estriado simple para el aislamiento de microorganismos.

3. Colocar las cajas Petri con inoculadas de medio Rojo bilis violeta en la incubadora (muestra y blanco) a
una temperatura de entre 35 y 37 C durante 18-48 horas.
4. Observar el crecimiento y morfologa de los microorganismos y elegir la colonia que cumpla con las
caractersticas del microorganismo a aislar.
5. Esterilizar un asa bacteriolgica, tomar un poco de colonia y estriar el medio selectivo agar E.M.B,
esterilizar nuevamente el asa.
6. Cerrar la placa y colocarla nuevamente en la incubadora junto con el blanco durante un intervalo de 1848 horas.
7. Observar el crecimiento microbiano en la placa, llevar a refrigeracin para evitar ms crecimiento hasta
la realizacin de la marcha bioqumica y verificar en la bibliografa el microorganismo aislado.
MICROBIOLOGA AMBIENTAL UTL
ASESORA:

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5. Esquema del Perfil bioqumico (metablico )

para la identificacin del microorganismo seleccionado
Pruebas de identificacin

Bacterias

Gram positivas

Citrato +
Lactosa Sacarosa Glucosa Indol Catalasa +
H2S RM VP -

-Pseudomona
aeruginosa

Gram negativas

Mviles

Capsuladas

No capsuladas

RM +
VP +

-Salmonella
arizonae

Citrato +
Lactosa Sacarosa Glucosa +
Indol Catalasa +
H2S +
RM VP -

No mviles

No capsuladas

Citrato +
Lactosa Sacarosa Glucosa +
Indol Catalasa +
H2S +
RM +
VP -

Capsuladas

Citrato +
Lactosa Sacarosa Glucosa +
Indol - (+)
Catalasa +
H2S +
RM VP +

-Klebsiella
pseudomoniae

-Citrobacter
-Salmonella
gallinarum

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ASESORA:

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RESULTADOS DEL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN

1. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO DE LA MUESTRA (SIEMBRA)
AGAR E.M.B
AGAR E.M.B

2. MORFOLOGA COLONIAL OBSERVADA

Tipo de colonia 1: Descripcin

FOTO 1

Morfologa:
Forma: irregular
Superficie: Irregular
Color: rosado-aperlado
Borde: ondulado
Tipo de colonia 2: Descripcin

FOTO 2

Morfologa:
Forma: puntiforme
Superficie: papilada
Color: negro cromado
Borde: circular

Tipo de colonia 3: Descripcin

FOTO

Morfologa:
Forma: irregular
Superficie: convexa
Color: blanquecino
Borde: Rizoide

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ASESORA:

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3. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO PURO ( RESIEMBRA)

FOTO 1

FOTO 2

AGAR E.M.B

AGAR E.M.B

4. MORFOLOGIA COLONIAL OBSERVADA

FOTO 1
Descripcin

La primer fotografa se identificaron una serie de

bacterias con crecimiento mucoide y fue la placa de
la cual se tom la colonia para crear el cultivo puro.
En las que siguen se muestra el crecimiento obtenido
en la resiembra a partir de los cuales se realiz la
marcha bioqumica para la identificacin de la
bacteria.
FOTO 2

Dicho crecimiento tiene una morfologa mucoide

Elevacin:
Convexa
Margen:
Color rosado
Cambiando medio a color rosa claro.

FOTO 3

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ASESORA:

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5. EVIDENCIA FOTOGRFICA DEL RESULTADO DEL PERFIL BIOQUMICO

1.

Nombre de la
prueba

Medio de cultivo
utilizado

Resultado
obtenido
(positivo/negati
vo)

Tincin de
Gram

Ninguno

Negativo (-)

Evidencia fotogrfica

Aumento: ____100x____
Fundamento de la prueba
El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas (tanto Gram positivas como Gram
negativas) a travs de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro
de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales estn presente para solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que el
cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El I2 entra en las clulas y forma un
complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que en la misma es soluble el
complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos s lo
hacen. Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es
un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram
negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen violetas.
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, an despus de tratarlos con un decolorante, y el color no se
modifica al aadir ste; otros pierden con facilidad el primer tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se
califican de Gram positivos, y los que pierden la primera coloracin y retienen la segunda, de gramnegativos.
Basndonos pues, en la reaccin Gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos. Los
colorantes de p-rosanilina son los que mejores resultados dan en la coloracin Gram. Los representantes ms usados
de este grupo son violeta de metilo y violeta cristal o de genciana. En realidad, violeta de metilo es el nombre atribuido
al compuesto tetrametil-p-rosanilina.
El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el nmero de grupos metilo en la molcula; por
consiguiente, de los tres grupos, el tono ms oscuro es la hexametil-p-rosanilina, (violeta cristal), y el tinte ms ligero,
la tetrametil-p-rosanilina (violeta de metilo). Los nombres violeta de metilo 3R, 2R, R, B, 2B, 3B, etc., se refieren al
nmero de grupos metilo contenidos. La letra R indica matices rojos, y la letra B, tonos azules. El violeta de cristal
contiene seis grupos metilo, y se considera como el mejor colorante primario para teir por el mtodo de Gram.

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ASESORA:

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2.

Tincin
de
cpsula (
con tinta
china)

Ninguno

Positivo (+)

Aumento: ____100x____
Fundamento de la prueba

Es la prueba que determina si la bacteria tiene capsula la cual es una capa rgida organizada en matriz impermeable
que excluye colorantes como la tinta china. En cambio, la capa de material extracelular que se deforma con facilidad,
es incapaz de excluir partculas y no tiene un lmite definido.
En esta prueba se puede ver si la bacteria cuenta con cpsula la cual no permite que la tinta china penetre en la
bacteria lo cual se observa como un fondo negro (tinta) y una diferenciacin de las bacterias.

3. Citrato

Agar citrato de
Simmons

Positivo (+)

Fundamento de la prueba

En su formulacin contiene una mezcla de sales en la cual, el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. No
posee azcares ni tampoco inhibidores del crecimiento bacteriano. Un microorganismo que es capaz de utilizar
el citrato como nica fuente de carbono, utiliza tambin las sales de amonio como su nica fuente de nitrgeno.
Debido a la utilizacin de sales de amonio, se libera amoniaco, que alcaliniza el medio, y esto produce un viraje
del indicador azul de bromo timol del color verde al color azul.
Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio:
pH bsico: Citrato ------> CO2 + cido frmico + 2 cido actico
pH cido: 2 Piruvato -----> acetato + CO2 + lactato
2 Piruvato -----> acetona + 2CO2

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ASESORA:

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Muestra de cultivo

4. Catalasa

Ninguno.

control -

Positivo (+)

Fundamento de la prueba

La catalasa es una enzima perteneciente a la categora de las oxidorreductasas que cataliza la descomposicin
del perxido de hidrgeno en oxgeno y agua. Lo cual produce un desprendimiento de burbujas.
La reaccin que sucede es la siguiente:
2 H2O2 2H2 + 2 O2
Esta enzima se encuentra en algunas bacterias o cocos y se es posible identificar su presencia aplicado esta prueba.

5. Fermentacin
de glucosa

Triple Sugar
Iron Agar (T.S.I)

Negativo (-)

Fundamento de la prueba

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo
bacteriano. La glucosa es un hidrato de carbono fermentable, partiendo de la glucosa producida por la
degradacin de la sacarosa, a esta reaccin se le conoce como glucolisis. Se agrega un indicador de pH (rojo fenol)
y cloruro de sodio, el cual mantiene el balance osmtico. El agar es el agente solidificante. Por fermentacin de
azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo
en medio cido.
C6H12O6 (glucosa)+ 2 Pi + 2ATP+ 2NAD+2 cido Pirvico+ 2ATP +2NADH+ 2H+

6. Fermentacin

de lactosa.

Triple Sugar
Iron Agar (T.S.I)

Negativo (-)

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ASESORA:

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Fundamento de la prueba

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la Pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo
bacteriano. La lactosa es un hidrato de carbono fermentable, partiendo del cido pirvico producido por la
fermentacin de glucosa, dando como producto final cido lctico. Se agrega un indicador de pH (rojo fenol) y
cloruro de sodio, el cual mantiene el balance osmtico. El agar es el agente solidificaste. Por fermentacin de
azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo
en medio cido.
cido Pirvico+ NADH+ H+ cido lctico+ NAD+

7. Fermentacin

de sacarosa

Triple Sugar Iron

Agar (T.S.I)

Negativo(-)

Fundamento de la prueba

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo
bacteriano. La sacarosa es un hidrato de carbono fermentable y asimilado por la enzima sacarasa la cual con una
adicin de agua se degrada en glucosa y fructuosa. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio
mantiene el balance osmtico. El agar es el agente solidificante. Por fermentacin de azcares, se producen
cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido.
Sacarosa (C12H22O11)+ H2O Glucosa (C6H12O6)+ Fructosa (C6C12O6)

8. cido
sulfhdrico

Agar SIM
Triple Sugar Iron
Agar (T.S.I)

Negativo(-)

Fundamento de la prueba

En el medio de cultivo, el tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el
sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y
producen sulfuro de hierro, de color negro. El agar es el agente solidificante. El tiosulfato de sodio se reduce a
sulfuro de hidrgeno que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de
color negro.
La protelisis de las protenas en aminocidos individuales, algunas especies bacterianas son capaces de liberar
azufre enzimticamente de los diferentes aminocidos que las contienen, produciendo el gas cido sulfhdrico
(SH2). La peptona, cistena y tiosulfato, todos son fuentes de azufre, pero las diferentes especies utilizan distintos
compuestos o aminocidos que contienen azufre para producir SH2. La enzima responsable de esta actividad es
la cisteinasa.
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ASESORA:

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El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato frrico de amonio para producir un precipitado negro
insoluble, sulfuro ferroso.
Bacteria (medio cido) + tiosulfato de sodio gas SH2
SH2 + iones frricos sulfuro ferroso (pp. Negro)

9. Indol
Agar SIM

Negativo (-)

Fundamento de la prueba

El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos
principales: indol, escatol e indolactico. Diversas enzimas intracelulares que intervienen en ste proceso reciben
el nombre de triptofanasa, lo que implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la produccin del indol.
El principal intermediario en la degradacin del triptfano es el cido indolprvico.
La degradacin del triptfano libera indol, cido pirvico, amoniaco y energa. El cido pirvico puede ser
nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucoltico o entrar en el ciclo de Krebs para liberar CO2 y H2O y
una gran produccin de energa.
Triptfano + indolpirvico ----> Indol + cido pirvico + amoniaco + energa

10.

Movilidad

Agar SIM

Positivo (+)

Fundamento de la prueba

Determina si un organismo es mvil o inmvil. Las bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos, que se
encuentran principalmente entre los bacilos; sin embargo algunas formas de cocos son inmviles.
Las bacterias mviles pueden contener un solo flagelo o muchos; adems su localizacin vara con su especie
bacteriana y las condiciones de cultivo.
A veces, las bacterias con movilidad producen variantes no mviles que parecen ser estables y raramente se
revierten en formas mviles. Los organismos no mviles carecen de flagelos.
El agar es el agente solidificante y a esta concentracin le otorga al medio la propiedad de ser semislido,
condicin necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento
que difunde ms all de la lnea de siembra del microorganismo en estudio.

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ASESORA:

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11. Voges
MR-VP
proskauer
(Fermentacin
alcohlica)

Negativo (-)

Fundamento de la prueba
Determina la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, la acetona a partir de la
fermentacin de glucosa.
La reaccin de VP se basa en la deteccin de acetona como producto final neutro derivado del metabolismo de
la glucosa. Esta es metabolizada en cido pirvico, intermediario clave en la gluclisis. A partir del cido pirvico,
una bacteria puede seguir muchas vas. La produccin de acetona (precursor de la produccin de 2,3-butanediol)
es uno de los ciclos para la degradacin de la glucosa en las bacterias.
KOH
condensacin
Alfa-naftol (catalizador) + Acetona -------------> Diacetilo + Ncleo de guanidina ----------------------> Color rojo
rosado
O2 oxidado

12. Rojo de
MR-VP
metilo
(fermentacin
de la glucosa

Negativo (-)

Fundamento de la prueba

Permite comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales
cidos de la fermentacin de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. Es una prueba
cualitativa de la produccin de cido (determinacin de pH). Las bacterias que principalmente siguen la va de
fermentacin de cidos mixtos (La fermentacin cido mixta produce cido actico, etanol, H 2, CO2 y
proporciones diferentes de cido lctico o frmico segn las especies. Es un tipo de fermentacin que llevan a
cabo las enterobacterias. En esta ruta de fermentacin se produce ATP adems de la reoxidacin del NADH+H+)
a menudo producen suficiente cido para mantener un pH menor de 4.4.
La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH para determinar la concentracin de
iones hidrgeno presentes cuando un organismo fermenta glucosa. Las bacterias RM positivas producen cidos
estables manteniendo una alta concentracin de iones hidrgeno hasta alcanzar cierta concentracin y entonces
cesa toda actividad.
Los organismos RM negativo tambin producen cidos pero tienen una menor concentracin de iones hidrgeno
porque hay una reversin hacia la neutralidad debida a la nueva degradacin de los cidos orgnicos en
carbonatos.
Ocurre la fermentacin de la glucosa, mediante la glucolisis que es la ruta metablica mediante la que se degrada
la glucosa hasta dos molculas de piruvato, a la vez que se produce energa en forma de ATP y de NADH.
C15H15N3O2 + fermentacin del carbohidrato ----> cidos orgnicos (viraje a rojo en el medio)

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ASESORA:

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IDENTIFICACIN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL

EN LA MATRIZ DE ESTUDIO: Suelo
1.- Nombre cientfico del o los microorganismo identificado de acuerdo a los resultados
del perfil bioqumico planteado ( genero y especie)
Pseudomona aeruginosa y Salmonella presuntivamente arizonae
2. Taxonoma del o los microorganismo identificados
Al realizar nuestra marcha bioquimica usada para determinar microorganismos presentes en una muestra de
suelo recolectado en presa blanca, sembrada en el agar E.M.B, encontramos el desarrollo de dos posibles
microorganismos: Salmonella presuntivamente arizonae y Pseudomona aeruginosa, basndonos en las
morfologas de las colonias crecidas en nuestro medio, despus de realizar una amplia investigacin y nuestras
pruebas bioqumicas se logr determinar que el microorganismo que se desarroll en el agar E.M.B es
Pseudomona aeruginosa la morfologa de las colonias desarrolladas en el medio contienen las caractersticas de
las colonias de la Pseudomona aeruginosa , en un principio se crey que el microorganismo detectado con las
pruebas bioqumicas realizadas en este documento era Salmonella presuntivamente arizonae pero al investigar
las condiciones en las que puede sobrevivir y/o desarrollarse nos dimos cuenta que esta bacteria no es
termotolerante, la muestra de suelo recolectada duro aproximadamente 15 das en refrigeracin, por lo tanto
se descart pues esta no puede sobrevivir a estas temperaturas, en cambio la bacteria Pseudomona aeruginosa
si resiste a las temperaturas a las que se refrigero la muestra la cual fue a 4C ya que esta es termotolerante,
tambin se investig en cuales matrices se puede desarrollar la Pseudomona aeruginosa y esta se desarrolla
satisfactoriamente en la matriz de suelo por lo tanto podemos concluir que el microorganismo encontrado en la
muestra de suelo recolectada en presa blanca es Pseudomona aeruginosa ya que cumple por completo su perfil
bioqumico as como su morfologa desarrollada en el medio EM.B. En base a las pruebas que se realizaron en
el presente documento.
Cabe mencionar que al realizar pruebas bioqumicas adicionales como la prueba de oxidasa, prueba de
dihidralasa, prueba de la descarboxilasa ( lisina, ornitina, arginina) la fermentacin de manitol y fermentacin
de maltosa nos ayudaran a confirmar nuestra identificacin de Pseudomona aeruginosa.
Adems la bacteria Salmonella presuntivamente arizonae no cuenta con capsula por lo que hubiramos tenido
que descartar pruebas irrevocables como el H2S, RM y el VP las cuales se puede asegurar que se realizaron
correctamente y los medios de cultivos son completamente tiles.

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ASESORA:

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A continuacin se presentan las tablas comparativas de los perfiles analizados y el que se obtuvo en nuestro
estudio:
Prueba
Bioqumica

Citrato
F. Lactosa
F. Glucosa
F. Sacarosa
Indol
Catalasa
H2s
R.M
VP
Capsula
Tincin de Gram
Movilidad

Perfil
Bioqumico
Salmonella
arizonae
(+)
( -)
(+)
(-)
(-)
(+)
(+)
(+)
(+)
(-)
(-)
(+)

Perfil Bioqumico
Pseudomona
aeruginosa
(+)
( -)
(-)
(-)
(-)
(+)
(-)
(-)
(-)
(+)
(-)
(+)

Perfil
Bioqumico del
microrganismo
a identificar
(+)
(-)
(-)
(-)
(-)
(+)
(-)
(-)
(-)
(+)
(-)
(+)

En la siguiente tabla se presenta la taxonoma de la bacteria identificada:

Bacteria:
Pseudomona aeruginosa
Reino:
Bacteria
Filo:
Proteobacteria
Clase:
Gamma
Proteobacteria
Orden:
Pseudomonadales
Familia:
Pseudomonadaceae
Gnero:
Pseudomonas

2.

Caractersticas generales

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Pseudomona aeruginosa es una bacteria Gram-negativa perteneciente a la rama de las proteobacterias, misma
a la que pertenecen las enterobacterias. La P. aeruginosa se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza.
Se puede aislar de muestras de suelo, aguas prstinas y contaminadas, as como de plantas y animales. Esta
bacteria es capaz de utilizar una enorme variedad de compuestos orgnicos como sustrato para crecer, capacidad
que le permite colonizar nichos en los que son escasos los nutrimentos que otros organismos pueden asimilar.
Se ha reportado el aislamiento de P. aeruginosa de ambientes tan inhspitos como son el combustible de avin,
soluciones de clorhexidina y el jabn.
4. Ciclo(s) biogeoqumicos en el(los) que intervienen
Ciclo del carbono y del nitrgeno
5. La funcin que juegan en la transformacin de la materia orgnica a travs
de los ciclos biogeoqumicos
El metabolismo de la Pseudomona aeruginosa puede ser aerobio en el que se usa como aceptor de electrones
al O2 o anaerobio en el que algunos usan NO. Presenta una versatilidad metablica muy grande que se traduce
en su capacidad de utilizar como fuente de carbono substratos muy variados.
La Pseudomona aeruginosa es capaz de llevar a cabo procesos de desnitrificacin (NO3-, NO2-, N2) con lo que
se empobrecen los suelos de nitrgeno utilizable desde el punto de vista agrcola. Este proceso de reduccin del
nitrgeno (que acta como aceptor de electrones en un proceso de respiracin anaerobia) se denomina
reduccin disimilara del nitrgeno.
La versatilidad metablica de la Pseudomona aeruginosa se debe a la presencia de un gran nmero de plsmidos
que contienen operones inducibles para la sntesis de enzimas especficas que permitan catabolizar los
compuestos presentes en el medio. Esto confiere una importancia grande a las bacterias del
gnero Pseudomonas como digestores aerobios de materiales animales y vegetales, lo que contribuye al reciclaje
biolgico de materia orgnica. Las especies de Pseudomonas son utilizadas en birreactores ya que degradan la
materia orgnica y la utilizan como fuente de energa, tambin tienen una importante participacin en la
depuracin de metales pesados ya que al no ser especies exigentes nutrimentalmente tienen la capacidad de
asimilar dichos metales reduciendo su grado de toxicidad o bien degradndolos a un grado en el que ya no se
consideren peligrosos.
cita:
Campos, Vctor, Valenzuela, Cristian, Alcorta, Marcela, Escalante, Guisella, & Mondaca, Mara A. (2007).
AISLAMIENTO DE BACTERIAS RESISTENTES A ARSENICO DESDE MUESTRAS DE ROCAS VOLCANICAS DE LA
QUEBRADA CAMARONES, REGION PARINACOTA: CHILE. Gayana (Concepcin), 71(2), 150-155. Recuperado en 15
de
agosto
de
2015,
de
http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S071765382007000200003&lng=es&tlng=es. 10.4067/S0717-65382007000200003.
Referencias:
-Anderson, G.,Williams, J. & Hille, R. 1992. The purification and characterization of arsenite oxidase
from Alcaligenes faecalis: a molybdenum containing hydroxylase. J. Biol. Chem. 267: 23674-23682
-Cai, J., Salmon, K. & Dubow, M.1998. A chromosomal ars operon homologe ofPseudomonas aeruginosa confers
increased resistance to arsenic and antimony in Escherichia coli. Microbiol. 144:2705-2713.

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6. Conclusin parcial sobre las interacciones bacterianas en la matriz estudiada y la importancia de la

microbiologa en el rea ambiental
En conclusin podemos decir que la matriz de suelo est constituida por un sistema muy complejo ya que
este alberga una gran riqueza de microorganismos, los cuales establecen relaciones muy variadas y
contribuyen a conformar las caractersticas propias del suelo, participan en los ciclos del carbono, nitrgeno,
oxgeno, azufre, fsforo, hierro y otros metales; estos microorganismos aportan a la fertilidad del suelo y a la
degradacin de compuestos xenobiticos. Adems, el crecimiento de las plantas est condicionado por una
amplia gama de microorganismos que viven en el suelo, alrededor de las races vegetales. La bacteria
identificada en las muestras de suelo recolectadas de presa blanca ubicada en Len Guanajuato corresponde a
Pseudomona aeruginosa la cual es capaz de precipitar metales pesados y radionclidos como lo son carbonatos
e hidrxidos mediante un mecanismo de resistencia codificado en plsmidos, se sabe que es uno de los pocos
organismos capaces de degradar alcanos de cadena ramificada que produce biosurfactantes que son tiles para
la limpieza de suelos contaminados con hidrocarburos y que produce enzimas, como la lipasa, con distintas
aplicaciones potenciales. La Pseudomona aeruginosa interviene ampliamente en el ciclo del nitrgeno pues es
un desnitrificaste que transforma biolgicamente el nitrato en gas nitrgeno, xido ntrico y xido nitroso.
Tambin participa en el ciclo del carbono ya que tienen la capacidad de degradar a los hidrocarburos presentes
en el suelo.
La bacteria Pseudomona aeruginosa se logr detectar despus de realizar todas las pruebas bioqumicas
presentes en el documento su perfil encaja perfectamente y se tiene la seguridad de que las pruebas se
realizaron correctamente ya que se incluyeron controles de calidad en cada prueba realizada garantizando la
esterilidad inicial de nuestros procedimientos y evitando la contaminacin de estos en todo momento antes de
ser inoculados, por este motivo se descart la posible presencia de Salmonella presuntivamente arizonae,
esta no resiste climas tan extremos en comparacin a la Pseudomona aeruginosa y por qu aunque es comn
encontrar al gnero Salmonella en muestras de suelo, ya que esta se encuentra en las heces fecales de los
animales y presa blanca es un desage de aguas residuales . Tambin se descart debido a que no cumpli
con el perfil que se obtuvo despus de realizar las pruebas bioqumicas, pero como se mencion anteriormente
la muestra de suelo duro alrededor de 15 en refrigeracin por lo tanto la posible presencia de esta bacteria es
muy poca en comparacin de Pseudomona aeruginosa ya que esta si logra sobrevivir en condiciones extremas
de temperaturas.

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