- DETERMINACIN DE FSFORO

Introduccin
El fsforo es un macro mineral, es decir es un mineral que se encuentra
en cantidad abundante dentro del organismo. La mayor parte del fsforo presente
en el organismo se encuentra formando parte de los huesos y dientes en
compaa del calcio. Debido a la ntima relacin que existe entre calcio y fsforo,
en la mayor parte de las especies domsticas se requiere conservar una relacin
ptima entre ambos minerales a fin de evitar problemas. Otra funcin importante
que desempea el fsforo, es en el metabolismo de la energa, dado que
molculas como el ATP y otras semejantes contienen fsforo dentro de su
molcula. La biodisponibilidad del fsforo es un factor significativo en aspectos
nutricionales, debido a que existen ingredientes que aportan un nivel de fsforo
alto, pero la cantidad del mismo que est disponible para absorberse y usarse
puede ser baja debido a diversos factores, uno de ellos puede ser la presencia
de fitatos, elementos presentes en algunas plantas, los cuales fijan al fsforo
Fundamento
El fsforo presente en forma de fosfatos en los alimentos, reacciona con
el reactivo llamado molibdato de amonio y metavanadato de amonio lo cual origina
un compuesto de color amarillo denominado fosfomolibdovanadato de amonio. La
cantidad de compuesto formada es directamente proporcional a la cantidad de
fsforo presente en la muestra. La medicin de la cantidad de
fosfomolibdovanadato formado se mide en un espectrofotmetro calibrado a una
longitud de onda de 400 nanmetros.
Objetivo
El alumno cuantificar por el mtodo de espectrofotmetro de luz visible la
cantidad de fsforo presente en un alimento completo, un ingrediente o un
suplemento usado en alimentacin animal para conocer el porcentaje de este
mineral que se haya presente en la muestra.
Equipo y materiales requeridos
Mufla elctrica.
Crisol de porcelana

Embudo de vidrio
Varilla de vidrio
Probeta 100 ml.
Vasos de precipitados 250 ml (2)
Matraz volumtrico de 100 ml.
Matraz volumtrico de 200 ml
Matraz volumtrico de 50 ml
Pipeta volumtrica 10 ml.
Espectrofotmetro de luz normal.
Cubetas para espectrofotmetro
Papel filtro Whatman No.40
Reactivos
Solucin de cido clorhdrico en agua 1 3.
Acido ntrico concentrado.
Solucin molibdovanadato de amonio.
Solucin patrn de fsforo (1 mg/ml.).
Procedimiento.
1.-Pese con exactitud aproximadamente 2 g. de muestra en un crisol e incine en la
mufla a 550 a 600C de 4 a 6 horas.
2.-Enfre el crisol con las cenizas en un desecador (por 20-30 minutos).
3.-Lave las cenizas del crisol con un total de 40 ml. de solucin de cido
clorhdrico 1:3, (lave 2 veces usando 2 porciones de 10ml del cido cada vez, y
lave una tercera vez usando los restantes 20 ml). Vacie el contenido de los
lavados en un vaso de precipitados de 250 ml, agregar de 6-8 gotas de cido
ntrico concentrado y calentar hasta ebullicin.
4.-Transfiera el contenido del vaso de precipitados a un matraz volumtrico de 100
ml, lave los residuos del vaso 3 veces con agua destilada (usando 15 ml cada vez)
depositando los lavados en el matraz volumtrico.
5.-Afore el matraz volumtrico hasta 100 ml usando agua destilada. Deje enfriar y
en caso de que sea necesario vuelva a aforarlo con agua destilada.
6.-Filtre el contenido del matraz de 100 ml. a un matraz de 200 ml., utilice un
embudo de vidrio sobre el cual se haya colocado un papel filtro Whatman No.40.
Afore con agua destilada y agite para homogenizar perfectamente el contenido.

7.-De la solucin anterior tome 10 ml. con una pipeta volumtrica y transfiralos a
un matraz volumtrico de 50 ml.
8.-Agregue 10 ml. de la solucin de molibdovanadato de amonio; afore el matraz
con agua destilada y espere 10 minutos antes de efectuar la lectura.
9.-Lea en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 400 nm. ya sea en % de
transmitancia o en densidad ptica.
10.-Anote la lectura obtenida
11.-Use la grfica de papel milimtrico elaborada por su instructor utilice la lectura
del paso 8 para determinar a que concentracin de fsforo (en miligramos)
equivale dicha lectura.
Clculos
% de Fsforo = miligramos de fsforo X aforo final X 100
Alcuota X peso de muestra (en miligramos)
Notas para los clculos:
Los miligramos de fsforo se obtienen de la grfica a que hace referencia el paso
11.
El aforo final se refiere al ltimo volumen al cual se realiz la dilucin del material
original (o sea que representa el volumen especificado segn el paso 7 de la
prctica).
La alcuota hace referencia a la porcin de la dilucin que se tom para realizar
la determinacin final (en este caso son los 10 ml del paso 8).
NOTAS ADICIONALES:
Preparacion del tubo "blanco"
Sirve para calibrar o ajustar el espectrofotmetro a 100% de transmitancia o
a cero de absorbancia, es necesario preparar una solucin que contenga todos
los reactivos empleados en los tubos de prueba, en las mismas cantidades, pero
sin la presencia de fsforo; en lugar de muestra, se agregarn 10 ml. de agua
destilada.
Preparacion de la curva patrn

1.

Preparacin de la solucin estandar de fsforo. Se disuelven

8.74
gramos de KH2PO4 en agua, y se diluye a 1 litro con agua
destilada (1 ml=2 mg de fsforo). Luego se diluyen 50 ml de la solucin
anterior a un litro de agua (1 ml=0.1miligramos de fsforo).

2.

En matraces aforados de 50 ml. previamente identificados se aaden

alcuotas de una solucin patrn de fsforo, de tal manera que los matraces
del 1 al 9 contengan de 0 a 8 mg. de fsforo (en incrementos de 1 en 1
miligramos), y de 1 y 1.5 mg/ml de fsforo para los 2 ltimos matraces.

3.

Tome las lecturas de la transmitancia para una muestra procedente de cada matraz, usando el
espectrofmetro a 400 nm.

4.

Se grafican los resultados en papel milimtrico, de tal forma que la

grfica elaborada relacione los mg de fsforo/ml con la densidad ptica o
bien con el % de transmitancia.

Cuestionario
1.-Con excepcin de la vaca lechera y la gallina ponedora, cul es la relacin
calcio-fsforo ms apropiada en los animales domsticos?.
2.-Explique en qu consiste el hiperparatiroidismo nutricional secundario y que lo
puede ocasionar.
3.-Mencione las medidas nutricionales que se deben de tomar en cuenta para
prevenir la aparicin del hiperparatiroidismo nutricional secundario.
4.-Explique que funcin realiza la fitasa una enzima cuya venta se esta
promoviendo para emplearse como un aditivo de los alimentos para animales.

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