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Fenoles y derivados

por HPLC - SPE


Sarno, Miguel1 - Delfino, Mario2
1.Laboratorio Central de Aguas de Corrientes S.A.
2.Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura - UNNE.
Campus Universitario - Av. Libertad 5600 - (3400) Corrientes - Argentina.
E-mail: mdelfino@exa.unne.edu.ar

INTRODUCCION

El inters en determinar el contenido de fenoles que se vierten a las aguas de los ros se explica no solamente por
los efectos negativos que pueden ejercer sobre los organismos acuticos, sino adems y fundamentalmente por
sus incidencias sobre las aguas destinadas al consumo de la poblacin .
En la provincia de Corrientes no existe hasta hoy una tecnologa aplicada al anlisis de los fenoles y derivados en
muestras de agua que permita un monitoreo continuado de forma de tomar una accin para su limpieza.
Habitualmente, se analiza el contenido en fenoles de acuerdo al mtodo espectrofotomtrico estandarizado por la
Unin Europea, llamado 4-AAP por el compuesto en el que se basa (4-Aminoantipirina), siendo que esta
metodologa no alcanza los lmites establecidos por las regulaciones internacionales. La cromatografa en fase
gaseosa posibilita su anlisis, sin embargo requiere de etapas previas de limpieza y enriquecimiento de la
muestra, todo lo cual implica un gasto ambiental elevado.
Dado que el Laboratorio Central de Aguas de Corrientes S.A. cuenta con un cromatgrafo lquido de ltima
generacin, se ha fijado como objetivo disear un mtodo cromatogrfico rpido y estandarizado para realizar el
control y monitoreo de este importante grupo de contaminantes de aguas naturales, de bebida, domsticas y de
desechos industriales, que cumpla con las exigencias regulatorias internacionales.
Para ello, se ha operado con estndares certificados de una mezcla de derivados fenlicos (clorados y nitrados),
establecindose las condiciones de preconcentracin por SPE (Extraccin en Fase Slida) y de anlisis por
HPLC optimizadas.
Asimismo, se han analizado en esta primer etapa muestras de aguas naturales (sin tratar) captadas por las
principales Plantas Potabilizadoras que la empresa Aguas de Corrientes S.A. dispone sobre el curso de los ros
Paran y Uruguay, como as tambin muestras de lquidos cloacales de la Ciudad de Corrientes.

EXPERIMENTAL

Extraccin y conservacin de muestras:


Las muestras se recogen en frascos de vidrio pre-lavados con metanol y acetona en la secuencia indicada y
acidifican a un pH 2.0 por el agregado de cido clorhdrico. Se almacenan por un mximo de 2 das a 4 C
estabilizndola por el agregado de 0.2 ml de solucin de tiosulfato de sodio por cada 100 ml de la muestra.
Drogas y Reactivos:
- Todos los solventes usados son Grado HPLC
- Cloruro de sodio anhidro p.a.
- Fosfato cido de potasio grado p.a.
- Acido sulfrico grado p.a.
- Solucin de tiosulfato de sodio 50g/L.
- Estndar Certificado de mezcla de fenoles (Phenols Mixture HP 8500-6083), compuesta por los siguientes
compuestos: fenol.; o-cresol; 2,4-diclorofenol; 2-metil-4,6-dinitrofenol; 2-nitrofenol; 4-nitrofenol;
pentaclorofenol; 4-cloro-3-metilfenol y 2,4,6-triclorofenol.
Pretratamiento de las muestras:
- Se utilizaron columnas SPE RP-18 (500 mg) LiChrolut, MERCK N 1.02023.0001

Equipamiento:
- Cromatgrafo Lquido, marca HP, Modelo 1100, equipado bomba cuaternaria y detector UV-visible de onda
variable.
Condiciones Cromatogrficas:
Columna: ODS Hypersil; 5 m.- 125 x 4 mm ( HP 79926 OD 564)
Fase Mvil:
A= solucin acuosa de fosfato monopotsico 0.005 M, pH = 2.5 con H2SO4 ; B = Metanol
Gradiente: 0,0 min...45%B; 6.0 min... 45%B; 15.0 min..... 90%B; 18 min.... 90%B
Caudal:
1.5 ml/min.
Temperatura de la Columna: 50 C
Volumen de Inyeccin:
10l
Deteccin:
UV. (0.0 min... 210nm; 8.0 min... 289nm; 12.0 min... 303nm)
Tcnica
En 25 mL de muestra filtrada se disolvieron 2 g de cloruro de sodio y se procedi a la extraccin de los
derivados fenlicos por la columna SPE RP-18 (500 mg), previo ajuste del pH a 2.0 con HCl 1N y elucin con
1.0 mL de metanol. Se tomaron 10l del eluato y se inyectaron directamente al cromatgrafo. Para la
presentacin de los resultados se utiliz la herramienta grfica de manipulacin de seales que ofrece el software
del equipo.
Idnticas consideraciones se replicaron para tres concentraciones distintas de los estn-dares, con los cuales se
realiz la curva de calibrado. Los anlisis de las muestras se realizaron por triplicado.

RESULTADOS Y CONCLUSIONES

El mtodo aplicado resuelve adecuadamente los compuestos fenlicos tratados con una reproducibilidad probada
de los tiempos de retencin menores al 1%, y menores del 3% en la cuantificacin de las areas.
Se estableci una curva de calibrado para cada compuesto, de forma que los resultados de los anlisis de las
muestras incluyan las concentraciones finales de los derivados fenlicos encontrados.
Los lmites de deteccin (0,3 ppb) y de cuantificacin (1,5 ppb) alcanzados por este procedimiento son
decididamente menores a los niveles mximos exigidos por las agencias internacionales de regulacin de calidad
de aguas.
De los resultados de los anlisis de distintas muestras tomadas en la provincia de Coirrientes (Argentina) durante
los meses de marzo-abril de 2001 se infiere la presencia de diferentes compuestos fenlicos en cantidades
relativas, segn puede observarse en la Tabla 1:

Muestra

Crudo Cloacal.Capital
Crudo Cloacal apind
Natural de Ctes. Cap.
Natural de. Ctes. Cap.
Natural de. Goya
Natural de Esquina
Natural de Sto.Tom
Natural de P. Libres
Natural de Mte Caseros

232
542
156
206
120
59
442
411
186

809
3100
---1205
7442
1943
4605
33630
3455

Tabla 1
3
365
322
10
47
30
25
107
166
163

46
10
9.0
---------17
---9.4

------2.1
22
---8.4
84
---37

---5.4
5.0
---------------102

---5.9
6.8
------------14
----

----------------------------

---6.2
92
------21
31
21
34

Referencias: Las concentraciones estn expresadas en ppb; (1) representa al fenol, (2) al cresol, (3) al 4-cloro-3metilfenol, (4) al 2,4diclorofenol, (5) al 2,4,6,-triclorofenol, (6) al pentaclorofenol, (7) al 2-nitrofenol, (8) al 4,
nitrofenol, (9) al 2-metil-4,6-dinitrofenol.
En la provincia de Corrientes es la industria de la madera la principal fuente de contaminacin de compuestos
fenlicos. La aplicabilidad de este mtodo analtico brindar importantes servicios en el monitoreo y control de
la presencia de derivados fenlicos en sus ros, arroyos y dems fuentes de provisin de agua.

BIBLIOGRAFIA

Mtodos Normalizados para anlisis de aguas potables y residuales. APHA-AWWA-WPCF. Ed. Diaz de
Santos. 1992.

Rainer Schuster et al. Determination and Identification of Polychlorophenols in Waste Water. (HPLC)
Application Note.

A.G. Hsgen et al. Selective HPLC analysis of phenols in river water HP Application Note. 1990.