UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

TECNOLOGA ENZIMTICA

EVALUACIN DE LA
CAPACIDAD
DEGRADADORA DE
ALMIDN POR
MICROORGANISMOS DEL
SUELO
PRESENTADO POR:
Angie Loza Caldern
Fanny Sucaticona Vilca
Anas Illanes Quispe
Liseth Alvarez Valdez
DOCENTE:
Juan Jos Pauro Roque

NDICE GENERAL

RESUMEN........................................................................................................................................5
ABSTRACT.......................................................................................................................................5
I.

INTRODUCCIN..................................................................................................................6

II.

MATERIALES Y MTODOS................................................................................................7
MATERIALES........................................................................................... 7

2.1
2.1.1

De laboratorio....................................................................................... 7

2.1.2

De campo............................................................................................ 7

2.1.3

De escritorio........................................................................................ 7

Lapicero.................................................................................................... 7

Cuaderno de apuntes..................................................................................... 7

Regla........................................................................................................ 7

Lpiz........................................................................................................ 7

2.2

MTODOLOGA........................................................................................ 7

III.

RESULTADOS.....................................................................................................................10

IV.

DISCUSIN.........................................................................................................................11

V.

CONCLUSIONES................................................................................................................12

VI.

RECOMENDACIONES......................................................................................................12

VII.

REFERENCIA BIBLIOGRFICA......................................................................................12

NDICE DE CUADROS

Cuadro 1. Observacin de enzimas................................................................................ 7

Cuadro 2. Reaccion de Michaeles Menten.......................................................................7

NDICE DE FIGURAS

Figura 1. Medicin de la vista...................................................................................... 8

RESUMEN
Se analiz la produccin enzimtica de microorganismos del suelo aislados en
agar maz utilizando el lugol como como indicador de la presencia de amilasas.
Como fuente de almidn se utiliz la maicena disuelta en agar agar para
observarse luego del cultivo por puntos el crecimiento de colonias que por
medio de la formacin de una halo alrededor evidenciaba la presencia de
microorganismos degradadores de amilasas.
Palabras clave:

ABSTRACT
Key words:

I.

INTRODUCCIN

El alimento es parte del ecosistema microbiano y es uno de los factores ms importantes que
determinan la comunidad que se desarrolla sobre l (1). Dentro del sustrato, los carbohidratos
desempean un papel determinante (2). La modificacin del sustrato tambin implica cambiar la
naturaleza de los nutrientes que utilizan los microorganismos. En el engranaje del metabolismo
celular, los microorganismos liberan al medio parte de su batera enzimtica para utilizar los
sustratos disponibles (3). Entre las exoenzimas que se liberan se encuentran las amilasas (4).Estas
desempean un papel fundamental en la utilizacin del almidn como fuente energtica (5).
Las enzimas son protenas que actan como aceleradores de las reacciones qumicas, de sntesis y
degradacin de compuestos, stas se encuentran en todos los seres vivos y son piezas esenciales en
su funcionamiento. Desde hace unas dcadas se dispone de enzimas relativamente puras extradas
industrialmente de bacterias, hongos, plantas y animales, con una gran variedad de actividades
(6).Las amilasas son enzimas que catalizan las reacciones hidrolticas del almidn, dando origen a
diversos productos que poseen una gran relevancia para algunas operaciones y procesos
industriales. Las amilasas son comnmente halladas en animales y plantas; sin embargo, para fines
industriales, las ms utilizadas son aquellas de origen bacteriano o fngico. Las amilasas poseen una
gran importancia en la produccin de alimentos y de biocombustibles. Tambin presentan gran
utilidad en la industria textil. Se han utilizados amilasas para la obtencin de jarabes fructosados. La
produccin de dichas enzimas se ha hecho a partir de Bacillus sp .Por lo an se siguen buscando
microorganismos especficos que reporten mejores rendimientos para optimizar los procesos
industriales (7)
La flora microbiana en el suelo, puede tener su origen en el suelo, aire, agua, en el medio ambiente
del almacn o en la fase de manipulacin y elaboracin. Los microorganismos presentes en la
harina de maz son relativamente escasos, pero una vez que ha sido hidratada se crean condiciones
de actividad acuosa favorables para el crecimiento de bacterias, mohos y levaduras. Esto determina
un proceso ms complejo para obtener energa, el cual est definido por los microorganismos
amilolticos. (8). Por lo tanto los objetivos de la presente investigacin fueron: Aislar e identificar
microorganismos productores de amilasas a partir de una muestra de tierra hmeda en Agar papa, y
evaluar la capacidad degradadora de almidn a travs de la formacin de los halos generados por
efecto de las amilasas que poseen estos microrganismos.

II.

MATERIALES Y MTODOS

II.1 MATERIALES
II.1.1

II.1.2

II.1.3

De laboratorio
- Incubadora
- Balanza
- Estufa
- Caldo nutritivo
- Agua destilada
- Placas Petri
- Mechero
- Tubos de ensayo
- Asa de siembra
- Autoclave
De campo
- Muestra de tierra
- Extracto de papa
- Extracto de maz
De escritorio
- Lapicero
- Cuaderno de apuntes
- Regla
- Lpiz

II.2 MTODOLOGA
1. Se utiliz almidn extrado de 400g de papa, rebanados y cocidos en 20ml de agua
destilada.
2. Se pes 0,56g/L de agar agar.

Figura 1. Pesado de agar agar.

3. Se pes 1,05g/L de agar agar y se diluy en 20 ml de agua destilada.

Figura 2. Disolucin de agar.

4. Se lo llevaron a la autoclave todos los materiales que sern utilizados para el cultivo.

Figura 3. Materiales listos para la esterilizacin en autoclave.

5. Se procedi con la disolucin de tierra 1g por 10 ml de agua destilada.

Figura 4. Dilucin de la muestra de suelo.

6. Una vez esterilizados los materiales en la autoclave, se procedi a verter el agar papa en placas
Petri.

Figura 5. Vertido de agar papa en placas Petri.

7. Ya gelificado el agar papa en las placas Petri, se empez con la respectiva siembra utilizando para
ello una placa control y otras dos para el cultivo.

Figura 7. Cultivo de muestra de suelo en agar maz.

III.

RESULTADOS

En la evaluacin del crecimiento de las bacterias degradadoras del almidn se obtuvo los
siguientes resultados:
En la evaluacin de las bacterias del suelo sembradas en un medio de cultivo de agar papa
despus de ser incubadas a 37C durante una semana, se observ la capacidad hidroltica
sobre el almidn. Esta se determin empleando una solucin de yodo (lugol), que fue
vertida sobre las placas, demostrndose as la presencia de la enzima amilasa por la
formacin de halos claros que no se coloreaban con este reactivo, esto claramente nos
indicaba que estas bacterias si presentaban la capacidad de degradar el almidn. Esta
capacidad tambin se evidenci con la comparacin con la placa control, la cual contena
agar papa mas no la siembra con microorganismos del suelo y presentaba una coloracin
completa con el lugol debido a su carencia de estos microorgaismos (Figura ).
En la figura N se puede observar la formacin de halo producido sobre el agar papa, el
cual indica que estas bacterias presentan enzimas amilasas degradadoras de almidn.

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Figura 1. A. Placa control sin presencia de halos. B y C. Los crculos rojos muestran la
formacin de halos por degradacin de almidn, se evidencian de color claro alrededor de
las colonias bacterianas.
IV.DISCUSIN
En esta prctica se determin que si existen bacterias con la capacidad de producir enzimas
amilasas, segn Peate no todas las bacterias sintetizan enzimas.
Los microorganismos requieren de ciertos y especficos nutrientes para la produccin de enzimas y
estas desempean un papel fundamental en la utilizacin del almidn como fuente energtica y
nutricional para estos microorganismos. (5)
Bacillus subtilis es un microorganismo productor de amilasas a partir de almidones de papa, yuca y
arroz. (9)
Se realizaron estudios sobre el rendimiento de la actividad de amilasa de Thermoactinomyces
thalpophillus encontrando actividad en sustratos agrcolas como arroz, yuca, cebada, sorgo, papa y
gelatinizado de papa. (10)
V. CONCLUSIONES
Aislar e identificar microorganismos productores de amilasas a partir de una muestra de tierra
hmeda en Agar papa, y evidenciar la capacidad degradadora de almidn a travs de la
formacin de los halos generados por efecto de las amilasas que poseen estos microrganismos.
- Se observ el crecimiento de microorganismos productores de amilasas en Agar papa.
- No se logr identificar a estos microorganismos productores de amilasas.
- Se logr evidenciar la capacidad degradadora de almidn por microorganismos del suelo
por medio de la formacin de halos alrededor de las colonias bacterianas.
VI.RECOMENDACIONES
- Para el proceso de cultivo es necesario cerciorarse de que los medios de cultivo no hayan
sobrepasado su fecha de vencimiento.
VII.

REFERENCIA BIBLIOGRFICA

1. Ecology of Bateria. Hungate, R.E. 1962, The Bacteria The Physiology of Growth, pg. Vol. IV.
Chapter 3. p. 95.
2. Volatile Fatty Acid Production in Quantitative Aspects of Ruminant Digestion and Metabolism.
France, J. & Siddons, R.C. 1993, pg. p. 107.
3. Las biotecnologas: desafos y promesas. Sasson, A. 1984, pg. p. 191.
4. An overview of the microbial -amylase family. Reddy, N.S., Nimmagadda, A. & Sambasiva,
K.R.S. 2004., pg. 182.

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5. Advances in microbial amylases. Pandey, A., Nigam, P., Soccol, C.R., Soccol, V.T., Singh, D. &
Mohan, R. 2000. 2000, pg. 31:135.
6. Peate, M. Produccin de enzimas a partir de microorganismos. enzimamicro. [En lnea] 2008.
http://enzimamicro.blogspot.com/.
7. CASTRO, C., y otros, y otros. Obtencin de amilasas fngicas a partir de Aspergillus sp.
aislado de semillas de lentejas. . [En lnea] 2008. http://www.utadeo.edu.co/es.
8. Microbiologa Moderna de los Alimentos. Jay. 2000.
9. R. Grebeshoba, L. Prieto, S. Miranda, N. Moreno, D. Flechas. Biosntesis de amilasa
estracelular a partir de cepas de Bacillus subtilis. Colombia : s.n.
10. Okolo, col. 1993.
11. Vargas, S. Seleccin y evaluacin de bacterias del gnero Bacillus productoras de amilasas en
cultivo sumergido. UNMSM. Lima - Per : s.n., 2012. pg. 157, Tesis de licenciatura.

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