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Mtodos alternativos

Para que um mtodo de teste de toxicidade de cosmticos seja tido


como alternativo experimentao em animais, preciso que ele atenda a, no
mnimo, um dos trs Rs (Reduction, Refinement e Replacement) propostos por
Russel e Burch em seu livro The Principles of Humane Experimental
Technique, de 1959 que foi a primeira grande prublicao interessada pela
questo tica do uso de animais cientificamente. Reduzir significa diminuir o
nmero de animais usados nas pesquisas sem prejudicar os resultados por
nmero insuficiente de cobais. Refinar significa modificar as tcnicas de
experimentao para que se reduzam o nmero de animais usados e/ou a dor
e o estresse que esses possam sentir durante as experincias. O uso correto
de analgsicos e anestesias e abordagens menos invasivas so exemplos de
refinamento. O terceiro R, melhor traduzido para substituio, prev a
substituio do uso de animais por estudos alternativos que cheguem a
resultados satisfatrios essa a forma mais difcil de ser atingida, porm a
que previne totalmente o uso de animais. Esse captulo se extende sobre
mtodos alternativos que atendam substituio dos animais nos estudos de
toxicidade.
Para que uma substncia seja dada como segura, ela precisa passar por
uma srie de testes como toxicidade aguda, irritao e corroo drmica e
ocular, sensibilizao e absoro drmica, toxicidade repetida (crnica),
genotoxicidade (toxicidade de mutao) e cancerogenicidade. A principal
alternativa ao teste desses riscos em animais a tcnica in vitro, que utilizam
clulas, tecidos ou rgos como receptores das substncias. Esse mtodo,
apesar de ser muito confivel em seus resultados, muito restritivo, o que
demanda testes diversos para cada um dos riscos para se descobrir a
toxicidade total de uma substncia h de ser feita uma bateria de testes, e no
poucos testes porm mais abrangentes como em animais.
Testes de toxicidade aguda buscam determinar a quantidade letal de
uma substncia, por via oral, drmica ou inalatria. Esse estudo em animais
causava dor e sofrimento e morriam aproximadamente 50% das cobaias aps
a administrao de apeas uma dose. A alternativa atual mais aceta atravs
de testes de citotoxicidade em diferentes linhas celulares e se medindo

diferentes parmetros de toxicidade como o contedo de protenas produzidas


por uma clula aps a receber a substncia. Tambm, tem se desenvolvido
diversos softwares e mtodos in silico baseados na anlise estatstica relao
entre a atividade qumica e estrutura de compostos.
Os ensaios de irritao ocular seguem o mtodo de Draize (de meados
dos anos 40), que consiste em aplicar a substncia diretamente na crnea de
coelhos (animal eleito para o teste) e verificar o grau de leso que causa na
crnea, iris e no tecido conjuntivo. Esse teste, alm de ser agressivo e causar a
efeitos irreversveis nos animais, tem resultados muito subjetivos e pouco
relacionados com o efeito em humanos. Existem algumas alternativas ao uso
de animais como aplicar a substncia em crneas extradas de bovinos e
coelhos (no retiradas em vida), na membrana corioalantide de ovos de
galinha e em tecido humano reconstitudo e na observao da mudana da
funo celular em microfisimetro de silicone.
O ensaio de irritao drmica tambm se baseia no mtodo de Draizer,
aplicao da substncia na pele de coelhos e verificao do grau de leso
que tambm tem resultados muito subjetivos. Mtodos alternativos so o uso
de pele humana reconstituda e kits comerciais que imitam a pele humana
como Episkin, Epiderm, SkinEthic e Irritection que aps receberem substncias
irritantes demonstram alterao na matriz por diferena de cor (alguns at
especificam se houve alterao na derme, epiderme, tecidos mais internos).
O risco de sensibilizao um dos mais adversos dos cosmticos, logo
tratado como um dos mais importantes. O mtodo tradicional envolve o uso
de ratos que tem a substncia injetada intradermicamente diversas vezes
durante quase um ms. Esse mtodo necessita de diversas cobaias mas tem
resultados mais objetivos. Alguns estudos alternativos j foram desenvolvidos
como a aplicao em protenas que contm lisina e cistena, se a substncia
reagir porque ele sensibilizante.
Estudos de absoro drmica buscam identificar a margem de
segurana de uma substncia entendendo o quanto essa pode passar ao
sangue em condies normais de uso. O mtodo atual usa pele humana, que
colocada em uma cmara com compartimentos separados, em um fica a
epiderme e no outro o produto aplicado. A partir da passagem da substncia
de um para outro se calcula a taxa de absoro.

Estudos de toxidade repetida (crnica) buscam identificar os riscos da


exposio contnua na vida dos animais por longos perodos (mais de um ms).
Atualmente, no existem mtodos alternativos aos in vivo aceitos, porm h
grande pesquisa para que se encontrem sadas como em clulas de fgado e
rim e o estabelecimento de um sistema baseado na deteo de biomarcadores
neurotxicos.
Para se identificar a toxicidade na reproduo de substncias in vitro
necessria uma bateria de testes. Alguns deles so colocar embries de ratos
em um ambiente com a substncia e ver como reagem e o cultivo primrio de
clulas neuronais e dos membros de embries de rato, observar o crescimento,
a migrao e a segregao deles aps a aplicao da substncia pode indicar
toxicidade.
Uma substncia cancerigena se, ao ser inalada, ingerida, exposta
sobre a pele ou injetada, induz tumores (benignos ou malignos). O mtodo in
vivo utiliza animais trangnicos para reduzir o tempo de apario de tumores. A
alternativa in vitro encontrada foi a utilizao de linhas celulares de embries
de hamsters srios e de obtidas da prstata.