FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA EDUCACIN

DEPARTAMENTO DE QUIMICA
BIORGNICA

PRCTICA 5: PRUEBAS GENERALES PARA CARBOHIDRATOS

1. INTRODUCCION
Los carbohidratos contienen en su composicin qumica los grupos funcionales hidroxilo -OH
con propiedad de alcohol, y el carbonilo C=O que les da propiedades de aldehdos o cetonas,
por lo que se les conoce como aldosas o cetosas. Su unidad bsica son los monosacridos que
contienen distinto nmero de tomos de carbono en su cadena. El grupo carbonilo libre
presente en monosacridos y algunos disacridos, es muy reactivo. La presencia de este grupo
se emplea para diferenciar los que lo tienen libre, que tienen propiedad reductora y los que no
lo tienen libre obtenindose carbohidratos no reductores. Existen varias pruebas para
caracterizar a los carbohidratos especficos dependiendo de las propiedades fisicoqumicas de
los mismos. Algunas de ellas permiten identificar a los que son reductores, otras a los que no
son reductores, otras a cualquier carbohidrato independiente de su poder reductor. Para tener
idea de la sensibilidad de los distintos mtodos deben probarse soluciones de concentraciones
de 1-10 g/L. Se utilizan mezclas problemas comestibles tales como jugos de frutas, panela,
miel, etc.

2. OBJETIVO
Reconocer la presencia o ausencia de carbohidrato en una muestra a travs de la ejecucin de
reacciones caractersticas de ellos.

3. CONSULTAS PRELIMINARES
3.1 Cmo se clasifican los carbohidratos de acuerdo al nmero de molculas que contengan?
3.2 Qu tipos de enlace unen a los monosacridos entre s ?
3.3 Cundo un monosacrido es reductor y cuando no?
3.4 Investigue las coloraciones y aspectos de las soluciones cuando dan positiva las pruebas
de Molisch, Seliwanoff, Bial, Benedict y Lugol ?
3.5 Dibuje la estructura de los carbohidratos usados en la prctica.
3.6 Consultar las fichas de seguridad de los reactivos a manipular en la prctica.

4.

MATERIALES
MATERIALES

5.

CANTIDAD

Pipetas graduadas de 5 mL

Pipeta graduada de 1 mL

Vasos de precipitado de 250 mL

Vaso de precipitado de 100 mL

Varilla de vidrio

Tubos de ensayo

20

Gradilla

Pinza de madera

Goteros

Propipeta

Termmetro

Frasco lavador

Trpode

Mechero

Malla de asbesto

REACTIVOS
SUSTANCIAS

CANTIDAD

Glucosa, Galactosa, Fructosa, Ribosa, Lactosa, Sacarosa 2%

100 mL c/u

Almidn 2%

5 mL

Jugo de fruta recin preparado (de color claro)

10 mL

Agua destilada

250 mL

Reactivo de Molisch (-naftol en alcohol + H 2 SO 4 concentrado)

10 mL

Reactivo de Bial (orcinol + HCI concentrado)

30 mL

Reactivo de Barfoed (acetato de cobre + CH 3 COOH glacial)

80 mL

Reactivo de Benedict (CuSO 4 , Na 2 CO 3 , tartrato de sodio)

100 mL

Reactivo de Seliwanoff (resorcinol + HCl)

80 mL

Solucin de lugol (0.01 M de I 2 + 0.12 M de Kl)

10 mL

6. EQUIPOS
EQUIPOS

CANTIDAD

Plancha de calentamiento

Vortex (agitador mecnico)

7. PROCEDIMIENTO
7.1 Prueba de Molisch: El cido sulfrico concentrado hidroliza el enlace glucosdico y forma
monosacridos que pueden ser deshidratados formndose furfural e hidroximetilfurfural, ellos
se combinan despus con la -naftol originando un complejo que puede ser de color purpura,
morado, rojo violeta.
Montaje de trabajo: Aadir 1 ml de cada una de las soluciones de carbohidrato seleccionadas a
tubos de ensayo rotulados y agregar 5 gotas del reactivo de Molisch a cada tubo, agitar la
solucin. Aada cuidadosamente por las paredes del tubo 0.5 mL de cido sulfrico
concentrado, de tal forma que el cido forme una capa por debajo de la solucin de
carbohidrato, no mezclar. Observe cuidadosamente la aparicin de color en la interface de los
lquidos.
7.2 Prueba de Seliwanoff: las cetosas se deshidratan ms rpidamente que las aldosas dando
furfural e hidroximetilfurfural, que se condensan con resorcinol para formar un complejo que
segn la concentracin puede ser rosado cereza; por lo tanto debe de evitarse un
calentamiento prolongado de la muestra que se estudia.
Montaje de trabajo: Aadir 1 ml de solucin de Seliwanoff a 1 ml de solucin de carbohidrato en
tubos de ensayos rotulados; mezclar la solucin y colocar los tubos en un bao de mara
hirviendo por 5 minutos; observar la aparicin de color rosado cereza, si se prolonga el
calentamiento las aldohexosas tambin dan positiva la prueba con el mismo color; las pentosas
dan (+) con un color verde. Por qu la sacarosa da (+)?
7.3 Prueba de Bial o de orcinol: Cuando se calientan pentosas con cido clorhdrico
concentrado se forma furfural que se condensa con el orcinol en presencia de iones frricos y
se obtiene un complejo de color verde azulado o verde oliva. El calentamiento prolongado de
algunas hexosas forma hidroximetilfurfural que con el orcinol da un complejo de color amarillo
oscuro.
Montaje de trabajo: aadir 1 ml de reactivo de Bial y 1 ml de la solucin de carbohidrato, en
tubos de ensayo debidamente rotulados se mezcla la solucin y se deja en un bao mara hasta
que ella comience a hervir. Dejar enfriar los tubos y adicionar 3 mL de agua y mezclar. Aadir 1
mL de alcohol butlico o 1-butanol, mezclar fuertemente, dejar reposar y examinar la
concentracin de color que se da en la parte superior en la franja de alcohol butlico.
7.4 Prueba para determinar azucares reductores. Reaccin de Benedict: Los carbohidratos
que son reductores reaccionan con una solucin CuSO 4 , en un medio alcalino permitiendo que
se forme el xido cuproso Cu 2 O de color amarillo rojizo. Los diferentes colores que pueden
aparecer se deben al tamao de las partculas formadas.
Montaje de trabajo: A 2 ml del reactivo de Benedict aadir 1 ml de solucin de carbohidrato en
tubos de ensayo debidamente rotulados; mezclar y calentar la solucin en un bao de agua
hirviendo durante 5 minutos. Observar el cambio y formacin de color de las soluciones.

7.5 Prueba de yodo para polisacridos. Reactivo de lugol: El yodo forma complejos
coloreados de adsorcin con algunos polisacridos; el almidn da un color azul con yodo,
mientras que el glucgeno y el almidn parcialmente hidrolizado (dextrinas grandes) reaccionan
dando una coloracin parda rojiza.
Montaje de trabajo: Aadir 3 gotas de lugol a 1 mL de solucin de carbohidrato (cuando el
carbohidrato sea el almidn, se debe de mezclar bien esta solucin, antes de usar) en tubos de
ensayo rotulados, mezclar bien las soluciones. Preparar un blanco con agua destilada ms el
lugol. Observar los cambios de color.

8. OBSERVACIONES, CLCULOS Y RESULTADOS.

En la tabla 1 coloque el signo + para prueba positiva o el signo para prueba negativa para
cada una de los diferentes experimentos realizados en los tubos de ensayo. Cuando realice el
informe, coloree cada crculo con los colores observados en cada prueba.

TABLA 1. Registro de pruebas colorimtricas para la identificacin de carbohidratos.

CARBOHIDRATO
Almidn
Lactosa
Sacarosa
Glucosa
Galactosa
Ribosa
Fructosa
Blanco
Muestra problema

OBSERVACIONES:

Molisch

Seliwanoff

Bial

Benedict

Lugol

9. preguntas complementarias.
9.1 Cmo reacciona el lugol (yodo) con el almidn para producir el color azul caracterstico?
9.2 Cul es la reaccin qumica que se da con el reactivo de Benedict para una prueba
positiva?
9.3 Por qu la fructosa da positiva la prueba con el reactivo de Benedict, el cual es especfico
para azucares reductores?
9.4 Qu carbohidratos se pueden identificar con la prueba de Molisch?
9.5 Por qu se dice que la lactosa tiene un grupo aldehdo potencial?
9.6 Por qu el glucgeno y el almidn dan resultados negativos como azucares reductores?

10. RECUPERACIN, DESACTIVACIN Y/O ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE LOS

RESIDUOS QUIMICOS.
10.1 RECUPERACIN.
No aplica.

10.2 DESACTIVACIN.
No aplica.

10.3 ALMACENAMIENTO TEMPORAL.

Los residuos generados en el procedimiento 7.1 deben depositarse en el recipiente para cidos
y bases, los generados en 7.2 y 7.5 en el recipiente de hidrocarburos no halogenados, los del
7.3 en el recipiente para solventes orgnicos y los residuos de las pruebas 7.4 y 7.6 deben
depositarse en el recipiente de agroqumica.

11. BIBLIOGRAFIA

LOZANO. J.A. Y TULEDA . J. "Prcticas de Bioqumica 1era. Ed. Sntesis, S. A Madrid.

1989 ISBN 84 -7738 -027 -9.
PLUMMER. D. T. Bioqumica Practica 2da. Ed. Mc Graw -Hill Latinoamericana, Bogot,
1981. ISBN: 968 -451 -054 -3 .