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ACTIVIDAD CATALITICA DE LA CATALASA

EFECTO DEL TIEMPO DE REACCION Y CONCENTRACION DE ENZIMA


Edwin Peralta

Estudiantes de ingeniera agroindustrial


Universidad de los llanos
OBJETIVOS

Determinar la actividad enzimtica de la catalasa sobre el perxido de


hidrogeno.

Observar el efecto del tiempo de Rx en la actividad cataltica.

DATOS Y RESULTADOS
Molaridad de permanganato de potasio (KMnO 4): 0.005 M
Molaridad del perxido de hidrogeno (H 2O2): 0.05 M
Ecuacin balanceada:

5H2O2

2KMnO4

3H2SO4

K2SO4

2MnSO4

+H2O

5O2

TABLA N 1. Evaluacin del efecto de la concentracin de enzima


REACTIVO (ml)

TUBO A

TUBO B

TUBO C

TUBO D

Buffer fosfato

10.2

10

9.5

8.5

H2O2 en buffer

Enzima

0.3

0.5

1.0

2.0

Tiempo (min)

H2SO4 6N

Vol. KMnO4 gastado

32.0

31.2

17.1

7.8

mol de H2O2 iniciales

100

100

100

100

mol de H2O2
residuales

400

390

212

97

mol de H2O2
descompuestas

300

290

112

1000

580

112

1.5

mol de H2O2
descompuestas/min/m
l de enzima

TABLA N 2. Clculos para la evaluacin del efecto de la concentracin de la


enzima
mol de H2O2
INICIALES

Volumen de buffer X MolaridadH 2O 2=milimoles

2 ml X 0.05 M H 2O 2=0.1 mMol


0.1 mMolX 1000=100 Mol
TUBO A

Volumen total X Molaridad KMnO 4=milimoles

32 ml X 0.005 M KMnO 4=0.16 mMol KMnO 4

0.16 mMol KMnO 4

5 mMol H 2 O2
=0.4 mMol H 2 O2
2 mMol KMnO 4

0.4 mMol H 2 O2 X 1000=400 Mol H 2 O2

TUBO B
Volumen total X Molaridad KMnO 4=milimoles

31.2 ml X 0.005 M KMnO 4=0.156 mMol KMnO 4

0.156 mMol KMnO 4


mol de H2O2
residuales

5 mMol H 2 O2
=0.39 mMol H 2O 2
2 mMol KMnO 4

0.39 mMol H 2O 2 X 1000=390 Mol H 2 O2

TUBO C
17.1 ml X 0.005 M KMnO 4=0.085 mMol KMnO 4

0.085 mMol KMnO 4

5 mMol H 2 O2
=0.212mMol H 2 O2
2 mMol KMnO 4

0.212 mMol H 2O 2 X 1000=212 Mol


TUBO D
7.8 ml X 0.005 M KMnO 4=0.039 mMol KMnO 4

0.039 mMol KMnO 4

5 mMol H 2 O2
=0.097 mMol H 2O 2
2 mMol KMnO 4

0.097 mMol H 2 O2 X 1000=97 Mol H 2O 2

TUBO A
100 Moles400 Moles=300 MolesH 2O 2

mol de H2O2

TUBO B
100 Moles390 Moles=290 MolesH 2 O2

descompuestas

TUBO C
100 Moles212 Moles=112 MolesH 2 O2
Moles inicialesMoles residuales=Moles descompuestas
TUBO D
100 Moles97 Moles=3 MolesH 2O 2
TUBO A
300 MolesH 2O 2
=300 MolesH 2O 2
1 minuto
mol de H2O2
descompuestas/min/ml de
enzima

300 MolesH 2O 2
MolesH 2O 2
=1000
0.3 ml enzima
ml enzima
TUBO B

290 MolesH 2O 2
=290 MolesH 2 O2
1 minuto
290 MolesH 2O 2
MolesH 2O 2
=580
0.5 ml enzima
ml enzima
TUBO C

112 MolesH 2O 2
=112 MolesH 2 O2
1 minuto
112 MolesH 2O 2
MolesH 2O 2
=112
1.0 ml enzima
ml enzima
TUBO D

3 MolesH 2O 2
=3 MolesH 2 O2
1 minuto

3 MolesH 2O 2
MolesH 2O 2
=1.5
2.0 ml enzima
ml enzima

TABLA N 2. Evaluacin del tiempo de reaccin


REACTIVO (ml)

TUBO A

TUBO B

TUBO C

TUBO D

TUBO E

Buffer fosfato

10

10

10

10

10

H2O2 en buffer

Enzima

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

Tiempo (min)

H2SO4 6N

Vol. KMnO4 gastado

12.2

10.0

7.0

10.3

12.9

mol de H2O2
iniciales

100

100

100

100

100

mol de H2O2
residuales

150

125

87

127

160

mol de H2O2
descompuestas

50

25

13

27

60

mol de H2O2
descompuestas/mi
n/ml de enzima

50

13

13.5

20

TABLA N 2. Clculos para evaluacin del tiempo de reaccin


mol de H2O2
INICIALES

Volumen de buffer X MolaridadH 2O 2=milimoles


2 ml X 0.05 M H 2O 2=0.1 mMol

0.1 mMolX 1000=100 Mol


TUBO A

Volumen total X Molaridad KMnO 4=milimoles


12.2 ml X 0.005 M KMnO 4=0.06 mMol KMnO 4

0.06 mMol KMnO 4

5 mMol H 2 O2
=0.15 mMol H 2O 2
2 mMol KMnO 4

0.15 mMol H 2O 2 X 1000=150 Mol H 2 O2

TUBO B
Volumen total X Molaridad KMnO 4=milimoles

10 ml X 0.005 M KMnO 4=0.05 mMol KMnO 4

0.05 mMol KMnO 4


mol de H2O2
residuales

5 mMol H 2 O2
=0.125 mMol H 2 O 2
2 mMol KMnO 4

0.125 mMol H 2O 2 X 1000=125 Mol H 2 O2

TUBO C

7 ml X 0.005 M KMnO 4=0.035 mMol KMnO 4

0.035 mMol KMnO 4

5 mMol H 2 O2
=0.087 mMol H 2O 2
2 mMol KMnO 4

0.087 mMol H 2 O2 X 1000=87 Mol

TUBO D
10.3 ml X 0.005 M KMnO 4=0.051 mMol KMnO 4

0.051 mMol KMnO 4

5 mMol H 2O 2
=0.127 mMol H 2 O 2
2mMol KMnO 4

0.127 mMol H 2 O2 X 1000=127 Mol H 2 O 2


TUBO E
12.9 ml X 0.005 M KMnO 4=0.064 mMol KMnO 4

0.064 mMol KMnO 4

5 mMol H 2 O 2
=0.16 mMol H 2 O2
2 mMol KMnO 4

0.16 mMol H 2 O2 X 1000=160 Mol H 2 O2

TUBO A
100 Moles150 Moles=50 MolesH 2 O2

mol de H2O2

TUBO B
100 Moles125 Moles=25 MolesH 2 O2

descompuestas

TUBO C

Moles inicialesMoles residuales=Moles descompuestas


100 Moles87 Moles=13 MolesH 2O 2

TUBO D
100 Moles127 Moles=27 MolesH 2 O 2

TUBO E
100 Moles160 Moles=60 MolesH 2 O2
TUBO A
50 MolesH 2O 2
=0 MolesH 2 O2
0 minuto
mol de H2O2
descompuestas/min/ml de
enzima

0 MolesH 2O 2
MolesH 2 O2
=0
0.5 ml enzima
ml enzima
TUBO B

25 MolesH 2O 2
=25 MolesH 2 O2
1 minuto
25 MolesH 2O 2
MolesH 2O 2
=50
0.5 ml enzima
ml enzima
TUBO C

13 MolesH 2O 2
=6.5 MolesH 2 O2
2 minuto
6.5 MolesH 2O 2
MolesH 2O 2
=13
0.5 ml enzima
ml enzima
TUBO D

27 MolesH 2O 2
=6.75 MolesH 2 O2
4 minuto

6.75 MolesH 2O 2
MolesH 2O 2
=13.5
0.5 ml enzima
ml enzima
TUBO E

60 MolesH 2O 2
=10 MolesH 2 O2
6 minuto
10 MolesH 2O 2
MolesH 2O 2
=20
0.5 ml enzima
ml enzima

GRAFICAS
GRAFICA 1. Concentracin de la enzima vs actividad enzimtica

CONCENTRACION DE LA ENZIMA
1200
1000
800

Concentracion de la enzima
vs Actividad enzimtica

600

Actividad enzimatica

Exponential (Concentracion
de la enzima vs Actividad
enzimtica)

400
200
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Concentracion de la enzima

GRAFICA 2. Evaluacin del tiempo de reaccin

Reaccion de la enzima respecto al tiempo


60
50

Reaccion de la enzima
respecto al tiempo

40
Reaccion de la enzima

30

Moving average (Reaccion


de la enzima respecto al
tiempo)

20
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7
Tiempo

DISCUSION DE RESULTADOS

La grafica N 1 refleja que a menor concentracin de la enzima hay mayor


actividad de la catalasa. A su vez est muy relacionado esta el tiempo de la
reaccin en el cual los resultados indican que a tiempo cero no ocurre ninguna
actividad cataltica (grafica N 2) y de ah en adelante a mayor tiempo mayor
actividad enzimtica, aunque en la grafica es evidente que en el tiempo intermedio
la actividad vuelve a bajar pero luego vuelve a una tendencia ascendente.
Estos altibajos vistos en la grafica N 2 pueden tener su origen en errores al
momento de realizar la prctica de laboratorio o en la realizacin de los clculos
para determinar la actividad enzimtica.
La concentracin de la enzima es un factor que interviene en la funcin de la
misma, es decir, en su actividad enzimtica o velocidad de la reaccin, resultando
en un efecto directo, de modo que, mientras ms concentracin de enzima haya,
mayor ser la velocidad de la reaccin enzimtica, esto se observ en el proceso
de titulacin con KMnO3 que entre ms mililitros de enzima ms rpido se
ejecutaba la reaccin; esto en pocas palabras la catalasa acelera la velocidad de
H 2 O2
la reaccin ms de un milln de veces en la eliminacin del
.

CONCLUSIONES
La prctica llevada a cabo en el laboratorio, para calcular la actividad
cataltica de la catalasa respecto al tiempo y a la concentracin, fue de tipo
cualitativo y cuantitativo, en el cual se usa el patrn permanganato de
potasio para hallar la concentracin de perxido de hidrogeno en la sangre.
A mayor concentracin de la catalasa menor concentracin de perxido de
hidrogeno ya que esta enzima lo oxida y lo reduce a agua y oxigeno.

A mayor concentracin del sustrato, a una concentracin fija de la enzima


se obtiene la velocidad mxima. Despus de que se alcanza esta velocidad,
un aumento en la concentracin del sustrato no tiene efecto en la velocidad
de la reaccin.

BIBLIOGRAFIA

SKOOG, Douglas. Qumica analtica. cuarta edicin. Universidad de


Stanford. McGraw-Hill/ interamericana de Espaa, S.A. 1988.

Winn (h.), Allen, Janda, Koneman, Procop, Schreckenberger, Woods.


Koneman Diagnostico microbiolgico. Ed Medica Panamericana).
Philip Nelson. Fisica biolgica, Energia, Informacion, Vida. Ed. Reverte.
Alberts, Bray, Hopkin, Johnson, Lewis, Raff, Roberts, Walter. Introduccion a
la Biologia Celular. Segunda Edicion. Ed Medica Panamericana.