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MEDIOS DE CULTIVO

Caldo Nutritivo - Caldo simple


Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de
microorganismos con escasos requerimientos nutricionales.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de
alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento
Medio no selectivo, contiene pluripeptona y extracto de carne que
constituyen la fuente de carbono y nitrgeno necesarios para el adecuado
desarrollo bacteriano.
Puede ser utilizado adems, como preenriquecimiento en la bsqueda de
Salmonella spp. a partir de alimentos, ya que permite recuperar clulas
daadas, diluir metabolitos txicos y sustancias inhibitorias.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Pluripeptona

5.0

Extracto de carne

3.0

Emplear 8 g de polvo por litro de


agua destilada. Si es necesario,
calentar hasta disolver. Distribuir
y esterilizar en autoclave a 118121C durante 15 minutos.

pH final: 6.9 0.2


Siembra
Por inoculacin directa de la muestra o del microorganismo en estudio.
Incubacin
En aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.
Resultados
Examinar los tubos para evaluar el crecimiento por turbiedad. Cuando sea
necesario, subcultivar en medios slidos apropiados y realizar la
identificacin bioqumica.
Microorganismos

Crecimiento

P. mirabilis ATCC 43071

Bueno

E. coli ATCC 25922

Bueno

S. aureus ATCC 25923

Bueno

S. epidermidis ATCC 14990

Bueno

S. typhimurium ATCC 14028

Bueno

P. aeruginosa ATCC 27853

Bueno

Caractersticas del medio


Medio preparado: mbar claro.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Agar Nutritivo Agar simple


Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de
microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos
nutritivos.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de
alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento
Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el
cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos
nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La
pluripeptona es la fuente de carbono y nitrgeno para el desarrollo
bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con
sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de
microorganismos exigentes.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Pluripeptona

5.0

Extracto de carne

3.0

Cloruro de sodio

8.0

Agar

15.0

Suspender 31 g de polvo por litro


de agua destilada. Mezclar y
dejar reposar 5 minutos. Calentar
suavemente agitando y hervir 1 o
2 minutos hasta su disolucin.
Distribuir y esterilizar a 121C
durante 15 minutos.

pH final: 7.3 0.2


Siembra
En superficie o por la tcnica de pour plate, segn el uso a que se destine.
Incubacin
En aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.
Resultados
a- Agar nutritivo:

Microorganismos

Crecimiento

P. mirabilis ATCC 43071

Bueno-excelente

E. coli ATCC 25922

Bueno-excelente

S. aureus ATCC 25923

Bueno-excelente

B. cereus ATCC 10876

Bueno-excelente

E. faecalis ATCC 29212

Bueno-excelente

P. aeruginosa ATCC 27853

Bueno-excelente

B -Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero:


Microorganismos

Crecimiento

Hemlisis

S. pyogenes ATCC 19615

Abundante

Beta

S. pneumoniae ATCC 6305

Abundante

Alfa

S. pneumoniae ATCC 49619

Abundante

Alfa

Caractersticas del medio


Medio preparado: mbar claro a medio ligeramente opalescente.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Sangre Agar Base: ENRIQUECIDO


Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos
microorganismos.
Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y cultivo
de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a
partir de una gran variedad de muestras, como para la observacin de
reacciones de hemlisis.
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para
preparar el medio agar chocolate.
Fundamento
La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto
valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos, an de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %,
aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar
hemlisis.

Frmula (en gramos por litro)


Infusin de msculo de corazn

375.0

Peptona

10.0

Cloruro de sodio

5.0

Agar

15.0

pH final: 7.3 0.2


Instrucciones
Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar 5
minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una suspensin
homognea. Calentar con agitacin frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar
20 minutos a 121C. Enfriar a 45-50C agregar sangre desfibrinada al 5%.
Homogeneizar y distribuir en placas.
Preparacin de la placa de Agar Sangre: aadir en forma asptica un 5% de
sangre estril desfibrinada a temperatura ambiente, el agar debe estar a
45C.
Preparacin de Agar Chocolate: despus de aadir la sangre y agitando
frecuentemente se mantiene el medio de cultivo a 80C por 10 minutos
hasta que adquiera un color pardo chocolatado.
Siembra
Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio
de cultivo.
Incubacin
El tiempo, temperatura y atmsfera de incubacin, dependern del
microorganismo que se quiera aislar.

Resultados
Microorganismos

Crecimiento

Hemlisis

E. coli ATCC 25922

Abundante

--

S. aureus ATCC 25923

Abundante

Beta

S. pyogenes ATCC 19615

Abundante

Beta

S. pneumoniae ATCC 6305

Abundante

Alfa

S. pneumoniae ATCC 49619

Abundante

Alfa

Limitaciones
-Las reacciones hemolticas de muchos microorganismos son diferentes al
usar sangre de caballo respecto a la sangre de carnero, tal es el caso de

algunas cepas de estreptococos grupo D, que producen beta hemlisis en el


agar suplementado con sangre de caballo pero no en agar suplementado
con sangre de carnero, y son mal clasificados como Estreptococos Grupo A
al usar sangre de caballo.
Caractersticas del medio
Medio preparado: mbar.
Medio preparado con 5% de sangre de carnero: rojo cereza.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Agar Cerebro Corazn Infusin Agar enriquecido


Es un medio slido muy apropiado para el cultivo de bacterias y hongos,
incluyendo los de difcil desarrollo.
Fundamento
Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado
desarrollo microbiano. La infusin de cerebro de ternera, la infusin de
corazn vacuno y la peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y
vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico y el fosfato disdico otorga capacidad
buffer. El agar es el agente solidificante.
El agar cerebro corazn mantiene los mismos principios que el caldo para el
cultivo de estreptococos y otras bacterias exigentes. Con el agregado de
10% de sangre de caballo desfibrinada, fue utilizado para el crecimiento de
Histoplasma capsulatum y de hongos patgenos. Por tratarse de un medio
que contiene glucosa, no es un agar sangre apropiado para la observacin
de reacciones de hemlisis.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 40 g/ml de estreptomicina, se
utiliza este medio para el aislamiento de hongos patgenos.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Infusin de cerebro de
ternera

Disolver 52 g de polvo en un litro


de agua destilada. Calentar a
ebullicin hasta su disolucin
total. Esterilizar en autoclave
durante 15 minutos a 121C.

200.0

Infusin corazn vacuno 250.0


Peptona

10.0

Cloruro de sodio

5.0

Glucosa

2.0

Fosfato disdico

2.5

Agar

15.0

pH final: 7.4 0.2


Siembra
De acuerdo a los fines de empleo.
Incubacin
El tiempo, la temperatura y la atmsfera de incubacin, sern las ptimas y
dependern del microorganismo que se est investigando.

Resultados
Microorganismos

Crecimiento

Aspergillus niger

Bueno

Neisseria meningitidis

Bueno

Streptococcus pyogenes ATCC


19615

Bueno

Streptococcus pneumoniae ATCC


Bueno
49619
Caractersticas del medio
Medio preparado: mbar claro.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Infusin Cerebro Corazn Medio Liquido enriquecido


Medio lquido adecuado para el enriquecimiento y cultivo de bacterias
aerobias y anaerobias, de microorganismos exigentes como estreptococos,
neumococos y otros microorganismos de difcil desarrollo.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100 g/ml de amicacina, se utiliza
este medio para el cultivo de hongos patgenos.

Fundamento
Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado
desarrollo microbiano. La infusin de cerebro de ternera, la infusin de
corazn vacuno y la peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y
vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de

sodio mantiene el balance osmtico y el fosfato disdico otorga capacidad


buffer.
Los nutrientes de este caldo son muy apropiados para los hemocultivos, ya
que en esta infusin desarrollan todas las especies de estreptococos
excepto los tiol y piridoxal dependientes.
Los estafilococos que crecen en esta infusin suelen dar mejores reacciones
en la prueba de la coagulasa.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100 g/ml de amicacina, se inhibe
la flora bacteriana cuando se utiliza este medio para el cultivo de hongos
patgenos.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Infusin de cerebro de
ternera

Suspender 37 g del polvo en un


litro de agua destilada. Calentar a
ebullicin hasta disolver
completamente. Esterilizar en
autoclave a 121C durante 15
minutos. Los tubos que no se
usen inmediatamente debern
calentarse en un bao hirviendo
para la eliminacin del oxgeno
retenido. Enfriar rpidamente sin
agitar.

200.0

Infusin corazn vacuno 250.0


Peptona

10.0

Cloruro de sodio

5.0

Glucosa

2.0

Fosfato disdico

2.5

pH final: 7.4 0.2


Siembra
Por inoculacin directa de la muestra o del microorganismo en estudio.
Incubacin
El tiempo, la temperatura y la atmsfera de incubacin, sern las ptimas y
dependern del microorganismo que se est investigando.
Resultados
Examinar los tubos para evaluar el crecimiento por turbiedad. Cuando sea
necesario, subcultivar en medios slidos apropiados y realizar la
identificacin bioqumica.
Microorganismos

Crecimiento

Neisseria meningitidis

Bueno a excelente

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226

Bueno a excelente

Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno a excelente


Streptococcus pneumoniae ATCC
6305

Bueno a excelente

Control Negativo

Resultado

Medio sin inocular

Sin cambio

Caractersticas del medio


Medio preparado: mbar claro, sin precipitado.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Agar Manitol Salado Agar selectivo Staphylococcus


Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y
diferenciacin de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de
muestras clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales de
importancia sanitaria.
Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de
Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino,
etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin
salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando
el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los
estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona
roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin
exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la
coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la
fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato
de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta
concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora
acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y
fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del
medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no
fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan
como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias
rojas, rodeadas de una zona del mismo color o prpura.
Frmula (en gramos por litro)
Extracto de carne

1.0

Pluripeptona

10.0

Instrucciones
Suspender 111 g de polvo por
litro de agua destilada. Reposar 5
minutos y mezclar calentando a

d-Manitol

10.0

Cloruro de sodio

75.0

Agar

15.0

Rojo de fenol

0.025

pH final: 7.4 0.2

ebullicin durante 1 o 2 minutos.


Distribuir y esterilizar en
autoclave a 118-121C durante
15 minutos.

Siembra
Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra.
Incubacin
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin
durante 3 das a 32 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos

Crecimiento

Caractersticas de las
colonias

Staphylococcus aureus ATCC


Excelente
25923

Amarilla

Staphylococcus epidermidis
ATCC 14990

Roja

Bueno

Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido

Inhibido

Klebsiella pneumoniae ATCC


Inhibido
700603

Inhibido

Caractersticas del medio


Medio preparado: rojo
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Agar Mac Conkey Agar selectivo para Enterobacterias


Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil
desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias
que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas
las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para
el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la
mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que
inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto

produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en


las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias
incoloras.
Frmula (en gramos por litro)
Peptona

17.0

Pluripeptona

3.0

Lactosa

10.0

Mezcla de sales biliares 1.5


Cloruro de sodio

5.0

Agar

13.5

Rojo neutro

0.03

Cristal violeta

0.001

Instrucciones

Suspender 50 g del polvo por litro


de agua destilada. Reposar 5
minutos y mezclar hasta
uniformar. Calentar suavemente
y hervir 1 a 2 minutos hasta
disolver. Esterilizar en autoclave
a 121C durante 15 minutos.

pH final: 7.1 0.2


Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar
aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 C.
Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica
Resultados
Microorganismos

Colonias

Escherichia coli ATCC 25922

Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC


700603

Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC


14028

Incoloras,
transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022

Incoloras,
transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071

Incoloras,
transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Diminutas, incoloras,
opacas

Caractersticas del medio


Medio preparado: rojo prpura

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

TCBS Medio Agar Selectivo para Vibrio


Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio
parahemolyticus y otras especies de Vibrio a partir de heces, agua y
alimentos contaminados.
Tambin es conocido como Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa, o como
Agar Selectivo para Vibrios.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la
triptena aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. Es este, el medio
selectivo ms adecuado para el aislamiento de las especies de Vibrio, e
inhibidor para la mayora de las enterobacterias. Esta inhibicin se basa en
las altas concentraciones de tiosulfato y citrato, la presencia de bilis y un pH
fuertemente alcalino. La degradacin de la sacarosa es variable entre las
especies de Vibrio y las colonias son verdes para las cepas que no la utilizan
y amarillas para aquellas que producen cido a partir de este azcar. Esto
es debido al viraje del color de los indicadores de pH azul de timol y azul de
bromotimol, del color azul al amarillo en medio cido. Es importante tener
en cuenta, que la proporcin de sacarosa en el medio est equilibrada de
forma tal que no inhiba el crecimiento bacteriano por exceso de cido.
El cloruro de sodio favorece el crecimiento de microorganismos. El tiosulfato
de sodio aporta azufre y junto con el citrato frrico permiten la deteccin de
produccin de cido sulfhdrico.
Aumentando la concentracin de cloruro de sodio y disminuyendo la
temperatura de incubacin, pueden aislarse especies marinas sin
importancia sanitaria.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Extracto de levadura

5.0

Peptona de carne

5.0

Triptena

5.0

Citrato de sodio

10.0

Suspender 89 g del polvo en un


litro de agua destilada. Calentar
hasta ebullicin y hervir de 1 a 2
minutos. NO AUTOCLAVAR.
Distribuir en placas de Petri
estriles.

Tiosulfato de sodio

10.0

Bilis de buey

8.0

Sacarosa

20.0

Cloruro de sodio

10.0

Citrato frrico

1.0

Azul de bromotimol

0.04

Azul de timol

0.04

Agar

15.0

pH final: 8.6 0.2


Siembra
1-Materiales clnicos:
a-materia fecal: suspender 1 gramo de heces o el contenido del hisopo en
10 ml de Agua Peptonada Alcalina (B02-159-05, B02-159-06) e incubar de 6
a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.
b-materiales provenientes de infecciones extraintestinales: no es necesario
realizar enriquecimiento previo en Agua Peptonada Alcalina.
2-Agua: Filtrar de 1 a 10 litros (el volumen deseado) de agua con membrana
de 0.22.Colocar la membrana en un recipiente conteniendo Agua
Peptonada Alcalina e incubar de 6 a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.
3-Alimentos: Licuar 25 g de la muestra con 225 ml de Agua Peptonada
Alcalina (B02-159-05, B02-159-06) e incubar de de 6 a 8 horas a 35-37C,
en aerobiosis.
En todos los casos sembrar una alcuota del caldo de enriquecimiento en la
superficie de una placa de TCBS, por estriado, para el aislamiento de
colonias.
Incubacin
En aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37C.
Resultados
Microorganismo

Crecimiento

Caractersticas de las
colonias

Vibrio cholerae

Bueno

Amarillas de 2-3 mm de
dimetro, de borde
traslcido

V. parahaemolyticus

Bueno

Centro verde azulado,


borde traslcido

V. alginolyticus

Bueno

Amarillas grandes

Aeromonas spp.

Inhibido

--

E. coli

Inhibido

--

Caractersticas del medio


Medio preparado: verde azulado.
Almacenamiento

Medio deshidratado: a 10-35 C.


Medio preparado: a 2-8 C.

Agar Salmonella Shigella Medio selectivo


Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de
algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros
materiales en los cuales se sospeche su presencia.
Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que
inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayora de los
coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de
cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de
desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH,
obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa,
crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro
negro debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la
muestra en Selenito caldo (B02-120-05).
Frmula (en gramos por litro)
Pluripeptona

5.0

Extracto de carne

5.0

Lactosa

10.0

Mezcla de sales biliares 8.5


Citrato de sodio

8.5

Tiosulfato de sodio

8.5

Citrato frrico

1.0

Agar

13.5

Verde brillante

0.0003
3

Rojo neutro

0.025

Instrucciones

Suspender 60 g del polvo por litro


de agua destilada. Reposar 5
minutos y mezclar hasta
homogeneizar. Calentar a
ebullicin durante 2 o 3 minutos.
NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.
Enfriar a 45-50C y distribuir unos
20 ml por placa. Secar la
superficie del medio unos
minutos en la estufa.

pH final: 7.0 0.2


Siembra
Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.

Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de


agar E.M.B. (B02-101-05) o de agar Mac Conkey (B02-114-05).
Incubacin
Durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos

Colonias

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Transparentes, centro negro

Shigella flexneri

Incoloras

Shigella sonnei

Incoloras

Proteus mirabilis ATCC 43071

Transparentes, centro negro

Escherichia coli ATCC 25922

Rosadas a rojas

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Rosadas cremosas y mucosas

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Incoloras, de muy escaso


crecimiento

Caractersticas del medio


Medio preparado: rojo naranja.
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.

Medio Tioglicolato USP Con Indicador


Medio de cultivo preparado de acuerdo con la Farmacopea Norteamericana
para el control de esterilidad de productos biolgicos y farmacuticos.
Adems es utilizado para cultivar microorganismos anaerobios,
microaerfilos y aerobios, y tambin para detectar la presencia bacteriana
en materiales normalmente estriles.
Fundamento
Este medio de cultivo tiene una composicin bastante similar a la del medio
Tioglicolato sin indicador. Permite el desarrollo de una amplia variedad de
microorganismos, incluidos los nutricionalmente exigentes y se observa que
las bacterias estrictamente aerobias, crecen en la parte superior, mientras
que las anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen en las
profundidades del medio. La presencia de grupos -SH- (aportados por
cistena, tioglicolato, glutatin, etc.) en medios de cultivos con digestos
proteicos facilita el aislamiento de diversas bacterias anaerobias. El
tioglicolato de sodio disminuye el potencial redox del medio de cultivo y
neutraliza el efecto antibacteriano de conservadores mercuriales. La
resazurina acta como un indicador de la xido-reduccin, que es de color
rosado fucsia en presencia de oxgeno y la glucosa facilita el desarrollo

microbiano al brindar una buena fuente de energa. La presencia de una


baja cantidad de agar, retarda la dispersin de CO 2 y O2.
Frmula (en gramos por litro)
Triptena

15.0

Extracto de levadura

5.0

Glucosa

5.5

Cloruro de sodio

2.5

Tioglicolato de sodio

0.5

Agar

0.75

L-cistina

0.5

Resazurina

0.001

Instrucciones
Suspender 29,5 g del medio
deshidratado en un litro de agua
destilada. Calentar y agitar con
frecuencia hasta disolucin total.
Distribuir en recipientes
adecuados y esterilizar a 121C
durante 15 minutos. Enfriar y
guardar a temperatura ambiente
protegido de la luz. Si el medio
preparado presenta ms de un
30% de oxidacin volver a
calentar para eliminar el oxgeno
absorbido.

pH final: 7.1 0.2


Siembra
Consultar bibliografa de referencia (por ejemplo: Farmacopea Nacional
Argentina 7 Edicin y USP XXVII).
Incubacin
El tiempo, temperatura y condiciones de incubacin dependern del
microorganismo que se quiera recuperar.
Resultados
Microorganismos

Crecimiento

Streptococcus pyogenes ATCC 19615

Bueno

Clostridium perfringens

Bueno

S. aureus ATCC 25923

Bueno

Bacteroides fragilis ATCC 25285

Bueno

Caractersticas del medio


Medio preparado: mbar claro ligeramente opalescente.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Caldo Tetrationato - Enriquecimiento


Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella
spp. a partir de heces, orina, alimentos y otros materiales de importancia
sanitaria.
Fundamento
El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios
para el desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe
metabolitos txicos.
La selectividad est dada por la presencia de tiosulfato de sodio,
tetrationato (generado en el medio por el agregado de la solucin iodoiodurada) y sales biliares, los cuales permiten el desarrollo de bacterias que
contienen la enzima tetrationato reductasa, como ser la Salmonella spp. e
inhiben el desarrollo de la flora acompaante.
Para evitar la proliferacin de especies de Proteus spp., se recomienda
agregar 40 mg/l de Novobiocina, antes de la solucin iodada
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Peptona

5.0

Sales biliares

1.0

Carbonato de calcio

10.0

Tiosulfato de sodio

30.0

pH final: 8.4 0.2


Solucin iodo iodurada
Iodo

6.0

Ioduro de potasio

5.0

Agua

20.0

Suspender 46 g del polvo en 1 litro de


agua destilada. Mezclar
vigorosamente y llevar a ebullicin.
Enfriar a 45C o menos. Agregar 20
ml de solucin iodurada. Mezclar y
distribuir 10 ml por tubo, en tubos
estriles. No debe calentarse luego
de agregar la solucin iodada. El
medio base puede mantenerse a
4C , dura varios meses, pero una vez
agregada la solucin iodada debe
usarse en el mismo da.

Siembra
Puede realizarse la siembra partiendo de un caldo de preenriquecimiento o
en forma directa conservando la proporcin 1:10.
Incubacin
Durante 12-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis
Resultados
Microorganismos

Crecimiento

Salmonella typhi

Escaso

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Bueno-excelente

Salmonella enteritidis ATCC 13076

Bueno-excelente

Escherichia coli ATCC 25922

Escaso

Caractersticas del medio


Medio preparado: suspensin blanco lechosa.
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Caldo Selenito - Enriquecimiento


Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella spp. a partir de
materiales clnicos, especialmente heces.
Fundamento
Este caldo selectivo favorece el crecimiento de Salmonella spp.
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el
adecuado desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable, el selenito de sodio inhibe la flora Gram positiva y la mayora
de la flora entrica excepto Salmonella spp. durante las primeras 8-12 horas
de incubacin.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Peptona

5.0

Lactosa

4.0

Fosfato de sodio

10.0

Selenito de sodio

4.0

Suspender 23 g del polvo en un


litro de agua destilada. Mezclar
bien y calentar ligeramente hasta
su disolucin completa. Evite el
calentamiento excesivo.
No esterilizar en autoclave.
Distribuir en tubos estriles un
volumen no menor a 5 ml. Se
recomienda guardar en heladera
si no se usa de inmediato.

pH final: 7.0 0.2


Siembra
-Materia fecal: a un tubo con 10-15 ml de caldo selenito, agregar 1-2 ml de
una suspensin de materia fecal.
-Tejido infectado: macerar 1-2 g de tejido en 10-15 ml de caldo selenito,
usando una varilla estril.
-Orina: a un tubo con unos 5 ml de caldo selenito doble concentracin,
agregar igual volumen de orina.
Incubacin
A 35-37 C, durante 16-24 horas, en aerobiosis.
Luego, subcultivar en medios selectivos: Salmonella Shigella Agar (B02-138-

05/06), Hektoen Entrico Agar (B02-110-05/06), Verde Brillante Agar (B02124-05/06), Mac Conkey Agar (B02-114-05/06).
Resultados
Microorganismos

Crecimiento

Salmonella enteritidis ATCC 13076

Bueno

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Bueno

Escherichia coli ATCC 25922

Regular-Escaso

Proteus mirabilis ATCC 43071

Regular-Escaso

Limitaciones
-Se aconseja usar el medio el mismo da de la preparacin.
-No incubar el medio de cultivo sembrado por mas de 24 horas, debido a
que el efecto inhibitorio del selenito disminuye luego de las primeras 6-12
horas de incubacin, y adems porque no es favorable para la mayora de
las cepas de Salmonella, que pueden no recuperarse.
-La nica ventaja de incubar durante 48 horas es el incremento de la
recuperacin de Salmonella pullorum.
Caractersticas del medio
Medio preparado: mbar claro, traslcido.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

TSI Agar - Diferencial


Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias,
en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de
cido sulfhdrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los
nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y
glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es
el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de
hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+ , los cuales se combinan con el
cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de
fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por
medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio
cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que
reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de
hierro de color negro.

Frmula (en gramos por litro)


Extracto de carne

3.0

Pluripeptona

20.0

Cloruro de sodio

5.0

Lactosa

10.0

Sacarosa

10.0

Glucosa

1.0

Sulfato de hierro y
amonio

0.2

Tiosulfato de sodio

0.2

Rojo de fenol

0.025

Agar

13.0

Instrucciones

Suspender 62,5 g del polvo por


litro de agua destilada. Mezclar
bien y calentar con agitacin
frecuente, hervir 1 o 2 minutos
hasta disolucin total. Llenar
hasta la tercera parte de los
tubos de ensayo. Esterilizar a
121C por 15 minutos. Enfriar en
pico de flauta profundo.

pH final: 7.3 0.2


Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo
sobre la superficie del medio.
Incubacin
A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo
solamente fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo
fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido
sulfhdrico.
Microorganismo

Pico/Fondo

Produccin de gas

Produccin
decido
sulfhdrico

E. coli ATCC 25922

A/A

K. pneumoniae ATCC
700603

A/A

P. mirabilis ATCC 43071 K/A

S. typhimurium ATCC
14028

K/A

S. enteritidis ATCC
13076

K/A

S. flexneri ATCC 12022 K/A

P. aeruginosa ATCC
27853

K/K

A: cido
K: alcalino

Caractersticas del medio


Medio preparado: rojo
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Simmons Citrato Agar


Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la
capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de
nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos
componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de
fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El
cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el
indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo
es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato
como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de
nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de
citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El
desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este
ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que,
al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y
bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de
la produccin de citrato permeasa.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Citrato de sodio

Suspender 24,2 g del medio

2.0

Cloruro de sodio

5.0

Fosfato dipotsico

1.0

Fosfato monoamnico

1.0

Sulfato de magnesio

0.2

Azul de bromotimol

0.08

Agar

15.0

deshidratado por litro de agua


destilada. Dejar reposar 5
minutos y mezclar calentando a
ebullicin durante 1 o 2 minutos.
Distribuir en tubos y esterilizar en
autoclave a 121C durante 15
minutos. Enfriar en posicin
inclinada.

pH final: 6.9 0.2


Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inculo
ligero , usando una ansa sin arrastrar el agar.
Incubacin
A 35-37 C, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 das de incubacin.
Resultados
-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay
desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.
Microorganismo

Citrato permeasa

Color del medio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Positivo

Azul

S. typhimurium ATCC 14028

Positivo

Azul

E. coli ATCC 25922

Negativo

Verde

S. flexneri ATCC 12022

Negativo

Verde

Limitaciones
-Si se usa un inculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar
el color del pico del verde al amarillo-amarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede
afectar la visualizacin azul de un resultado positivo.
-Inculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.
-Cuando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a partir del mismo
cultivo, se debe esterilizar la aguja de inoculacin antes de inocular la
prueba del citrato o sino inocularla primero. Cualquier arrastre de materia
orgnica puede originar resultados falsos positivos.
Caractersticas del medio
Medio preparado: verde.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Lisina Hierro Agar.


Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente
Salmonella spp., basado en la decarboxilacin / desaminacin de la lisina y
en la produccin de cido sulfhdrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los
nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de
las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el
tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico.
El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo
a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.
Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que
alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La
decarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es
necesario que la glucosa sea previamente fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son
fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio
de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de
color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.
La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento
del medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de
Morganella, desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico,
el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color
rojizo en la superficie del medio.
Frmula (en gramos por litro)
Peptona de gelatina

5.0

Extracto de levadura

3.0

Glucosa

1.0

Lisina

10.0

Citrato de hierro y
amonio
Tiosulfato de sodio

0.5
0.04

Prpura de bromocresol 0.02

Instrucciones
Suspender 35 g del medio
deshidratado en un litro de agua
destilada. Dejar embeber unos 15
minutos. Calentar
cuidadosamente, agitando con
frecuencia y hervir durante un
minuto hasta la disolucin
completa. Distribuir y esterilizar a
121C durante 15 minutos.
Enfriar en pico de flauta dejando
un fondo vertical apto para la
puncin.

Agar

15.0

pH final: 6.7 0.2


Siembra
Por puncin profunda con aguja de inoculacin.
Incubacin
En aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 C.
Resultados
1- Decarboxilacin de la lisina:
-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
2-Desaminacin de la lisina:
Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus,
Providencia y alguna cepas de Morganella spp.
3-Produccin de cido sulfhdrico:
-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del
pico y fondo)
Microorganismos

Color en el pico de Color en la base Ennegrecimient


flauta
del tubo
del medio

Proteus mirabilis ATCC 43071

Rojo

Amarillo

Negativo

Salmonella typhimurium ATCC


14028

Prpura

Prpura

Positivo

Salmonella enteritidis ATCC 13076 Prpura

Prpura

Positivo

Providencia spp.

Rojo

Amarillo

Negativo

Citrobacter freundii

Prpura

Amarillo

Positivo

Morganella spp.*

Rojo

Amarillo

Negativo

Edwarsiella spp.

Prpura

Prpura

Positivo

Klebsiella pneumoniae ATCC


700603

Prpura

Prpura

Negativo

Escherichia coli ATCC 25922

Prpura

Prpura

Negativo

*Algunas especies de Morganella spp., pueden desaminar la lisina.


Caractersticas del medio
Medio preparado: color violeta.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

SIM Medio - Diferencial


Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de
indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.
Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.
Fundamento
El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y
particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias
para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas
triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de
Kovacs o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas
mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen
alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas
productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado
negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se
mantenga a un pH mayor a 7.2.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Triptena

20.0

Peptona

6.1

Sulfato de hierro y
amonio

0.2

Tiosulfato de sodio

0.2

Agar

3.5

Suspender 30 g del polvo por litro


de agua destilada. Mezclar hasta
disolver; calentar agitando y
hervir durante un minuto.
Distribuir unos 4 ml en tubos de
hemlisis y esterilizar en
autoclave a 121C durante 15
minutos. Solidificar en posicin
vertical.

pH final: 7.3 0.2


Siembra
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin
profunda con aguja de inoculacin recta (no usar ansa con anillo). Se debe
inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de
profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la
siembra se realice en lnea recta.
Incubacin
Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.
Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de
Erlich.
Resultados

Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la
lnea de siembra.
Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de
siembra.
Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en
todo el medio.
Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.
Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo
de Kovacs o de Erlich.
Cepas indol negativas: sin cambio de color.
Microorganismo

Movilidad

Indol

Produccin
de cido
sulfhdrico

E. coli ATCC 25922

K. pneumoniae ATCC
700603

P. mirabilis ATCC 43071 +

S. typhimurium ATCC
14028

S. enteritidis ATCC
13076

S. flexneri ATCC 12022 -

Limitaciones
-En las bacterias aerobias estrictas, que slo crecen en superficie, la
movilidad puede ser difcil de observar.
-Algunas bacterias productoras de melanina como M. morganii, pueden dar
un color parduzco, que no debe confundirse con el color negro debido a la
produccin de cido sulfhdrico.
Caractersticas del medio
Medio preparado: mbar.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Christensen Medio (Urea Agar Base).


Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad
uresica.
Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus
spp., otras enterobacterias y estafilococos.

Fundamento
En el medio de cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para
el desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico, y el rojo de fenol es el indicador de pH.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa
liberando amonaco y dixido de carbono. Estos productos alcalinizan el
medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo. En este medio, la
fermentacin de la glucosa activa la enzima ureasa, acelerando la velocidad
del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan lentamente la urea,
como especies de Enterobacter o Klebsiella.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Triptena

1.0

Glucosa

1.0

Cloruro de sodio

5.0

Fosfato monopotsico

2.0

Rojo de fenol

0.012

Agar

15.0

Suspender 24 g de polvo en 950


ml de agua destilada. Dejar
reposar 2 minutos. Esterilizar en
autoclave a 121C durante 15
minutos. Enfriar a 50C y agregar
50 ml de una solucin de urea al
40% previamente esterilizada por
filtracin o cloroformo. Fraccionar
en tubos de hemlisis y solidificar
en pico de flauta con fondo
profundo.

pH final: 6.8 0.2


Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, estriar la superficie del pico de
flauta. Algunos microorganismos pueden requerir mayor tiempo de
incubacin.
Se recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color.
Incubacin
En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 C.

Resultados
Microorganismo

Actividad uresica

Color del medio

Proteus mirabilis ATCC


43071

Positiva

Rojo-Rosado

K. pneumoniae ATCC
700603

Positiva dbil

Rojo-Rosado

Escherichia coli ATCC


25922

Negativa

Amarillo

S. flexneri ATCC 12022

Negativa

Amarillo

S. typhimurium ATCC
14028

Negativa

Amarillo

Limitaciones
-Bacterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser Klebsiella,
Enterobacter y Citrobacter, viran al color rojo-rosado de todo el medio de
cultivo luego de varios das de incubacin.
-No calentar o sobrecalentar el medio de cultivo porque la urea se
descompone facilmente.
Caractersticas del medio
Medio preparado: amarillo

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

MR-VP Medio Medio diferencial


Medio utilizado para la realizacin del ensayo de Rojo de Metilo y Voges
Proskauer.
Es particularmente til para la clasificacin de enterobacterias.
Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para
el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a travs de
distintas vas metablicas. Segn la va utilizada, se originarn productos
finales cidos (cido lctico, cido actico, cido frmico), o productos
finales neutros (acetil metil carbinol).
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podra ser reconocida por la
adicin de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de
productos cidos, y por la adicin de alfa naftol e hidrxido de potasio para
evidenciar la presencia de productos finales neutros.
Voges y Proskauer, describieron una coloracin rojiza que apareca despus
de adicionar hidrxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos
en medio con glucosa. Esta coloracin se debe a la oxidacin del acetilmetil
carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para dar un
color rojo.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Pluripeptona

7.0

Glucosa

5.0

Fosfato dipotsico

5.0

Suspender 17 g del polvo por litro


de agua destilada. Calentar
suavemente agitando hasta
disolver. Distribuir y esterilizar en
autoclave a 118-121C durante

15 minutos.

pH final: 6.9 0.2

Siembra
Por inoculacin directa, a partir del cultivo en estudio.
Incubacin
En aerobiosis, a 35-37C por 3 das.
Revelado de pruebas bioqumicas
a-Prueba del rojo de metilo:
Aadir unas gotas de una solucin de rojo de metilo al 0.04%, observar el
color del medio.
b-Prueba del Voges Proskauer:
Aadir 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etlico absoluto y 0.2 ml de
hidrxido de potasio al 40% a 2.5 ml de cultivo. Agitar vigorosamente el
tubo, y dejar a temperatura ambiente durante 10-15 minutos. Observar el
color de la superficie del medio.
Resultados
1-Prueba del rojo de metilo:
Positivo: color rojo.
Negativo: color amarillo.
2-Prueba de Voges Proskauer:
Positivo: desarrollo de un color rojo en pocos minutos despus de una
completa agitacin del tubo.
Negativo: ausencia de color rojo.
Microorganismo

Crecimiento

RM

VP

E. coli ATCC 25922

Bueno

K. pneumoniae ATCC
700603

Bueno

P. mirabilis ATCC 43071 Bueno

S. typhimurium ATCC
14028

Bueno

Citrobacter freundii

Bueno

Enterobacter aerogenes Bueno

Limitaciones
En algunas cepas positivas para la prueba VP, pueden no desarrollar el color
rojo en la superficie mediante el revelado por la metodologa descripta

anteriormente. En estos casos, se recomienda calentar el medio de cultivo


para favorecer el desarrollo de color rojo.

Caractersticas del medio


Medio preparado: mbar claro, transparente sin precipitado.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

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