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Eduardo L. Ramos, Susana Ravelo, Enrique Muoz, Carlos Prez

La trehalosa. Parte I: su presencia en la caa de azcar
ICIDCA. Sobre los Derivados de la Caa de Azcar, vol. XLIII, nm. 2, mayo-agosto, 2009, pp. 37-41,
Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa de Azcar
Cuba
Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=223120662006

ICIDCA. Sobre los Derivados de la Caa de

Azcar,
ISSN (Versin impresa): 0138-6204
revista@icidca.edu.cu
Instituto Cubano de Investigaciones de los
Derivados de la Caa de Azcar
Cuba

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Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto

Eduardo L. Ramos1, Susana Ravelo1, Enrique Muoz2 y Carlos Prez3

1. Instituto Cubano de Investigaciones Azucareras (ICINAZ), MINAZ
e.mail: ramguira@yahoo.com
2. Instituto FINLAY
3. Facultad de Qumica, Universidad de La Habana
RESUMEN
Varios de los problemas que se presentan al tratar de elevar la eficiencia industrial
durante la produccin de azcar, estn asociados fundamentalmente a la capacidad de
la caa para formar en sus jugos la sacarosa y sus monosacridos constituyentes. Se ha
determinado que luego del corte se acenta la formacin de azcares, como: la D-Xilosa,
la Lactosacarosa, las Kestosas, la Rafinosa y varios polisacridos, sustancias que impiden el desarrollo normal del cristal de sacarosa y disminuyen la calidad del azcar
comercial. Paradjicamente, hoy da se trata de aumentar el arsenal de componentes
(trehalosa) en los jugos de caa con el uso de la ingeniera gentica, para mejorar la
resistencia al estrs de la caa. Los resultados que se recogen en este trabajo demuestran
que la trehalosa es otro de los oligosacridos que se forma, de manera notable, en los
jugos de caa despus de la cosecha.
Palabras clave: trehalosa, caa de azcar, oligosacridos.
ABSTRACT
Some of the problems that have been observed when an increase of industrial efficiency
in cane sugar production, are frequently associated according to current knowledge to the
plant capacity of incorporate in it juices other sugars different than sucrose. It has been
determined that after cutting the synthesis of other sugar as D-xylose, lactosucrose, kestoses, raffinose and various polysaccharides, all of them substances that prevent the normal development of sucrose crystal and reduce the quality of commercial sugar. Present
day, paradoxically, the increase of the component stock in sugar cane (trehalose) is being
increased through genetic engineering to improve the stress resistance of sugarcane.
Notwithstanding, the results of present paper illustrate that trehalose is among the oligosaccharides that are noticeably synthetized by the plant after harvesting.
Key words: trehalose, sugar cane, oligosacharides.
ICIDCA No. 2, 2009

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INTRODUCCIN
La trehalosa, -D-glucopiranosil -Dglucopiransido, es un oligosacrido no
reductor constituido por dos unidades de
glucosa unidas por un enlace: (1 1). Es
particularmente estable al calentamiento y
al medio cido. Se ha aislado en ms de 80
especies, que incluyen plantas, algas, hongos, levaduras, bacterias, insectos, y otros
invertebrados (1). La treahalosa se sintetiza
en un proceso de dos etapas por las enzimas
trehalosa 6-fosfato sintasa (TPS), y trehalosa
6-fosfato fosfatasa (TPP), y es degradada por
la trehalasa (2).
En la actualidad, aun no se entiende a
cabalidad el proceso de regulacin de la
acumulacin de sacarosa en los organismos.
No obstante, se ha implicado en el proceso
de regulacin del flujo de carbono en bacterias, hongos y recientemente en las plantas,
a varios componentes del metabolismo de la
trehalosa. En general, se han propuesto distintas funciones de la presencia de trehalosa: a) como fuente de carbono, b) como
agente protector del estrs (sequas, salinidad del suelo y estrs oxidativo), y c) como
una molcula seal o reguladora del metabolismo y el crecimiento de la planta. A su
derivado fosfatado en posicin 6 se le adjudican propiedades reguladoras de la distribucin del carbono. Aunque la trehalosa,no
parece estar vinculada directamente a la
acumulacin de sacarosa, pueden estar asociados el 6-fosfato de trehalosa o las enzimas del metabolismo de la misma.
Recientemente, se han encontrado niveles de trehalosa en los entrenudos de cinco
variedades de caa de azcar, que varan
entre 10-4 y 10-3 mg/g de materia fresca, aunque estos son insuficientes para considerarla como fuente de carbono o como agente
protector del estrs (3).
Se ha tratado de incrementar el contenido de trehalosa en varias plantas como son
el arroz y la caa de azcar. Por ejemplo, en
el arroz transgnico (logrado expresando
genes de fusin de E. coli TPS y TPP) se acumula trehalosa hasta 1 mg/g de su peso fresco. En la caa se ha logrado recientemente
introducir el gen de la grifola frondosa trehalosa sintasa, la planta transgnica acumula hasta 8,805-12,863 mg/g de peso fresco
(7-10% de los slidos en el jugo), lo cual es
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notable si se compara con las cantidades

prcticamente indetectables, en la caa no
transgnica (4). La caa transgnica obtenida, mostr alta resistencia a la sequa, sin
alterar sus ndices fisiolgicos. No obstante,
se desconoce la razn del aumento de tolerancia de estas lneas transgnicas en las
que se logra una mayor presencia del disacrido.
Hoy conocemos que la caa, luego del
corte aumenta su capacidad de formacin
de diversos oligosacridos, esta tendencia
se expresa por el nivel de oligosacridos
en sus jugos, Azcares que Impurifican a
la Sacarosa (AISo), en el momento de su
madurez o corte. Normalmente el nivel de
AISo en las variedades de caa oscila alrededor de 1% p/p de los slidos en el jugo.
Valores mayores, que pueden alcanzar el
10% de los slidos indican una tendencia
especial de la variedad de caa a "autodegradarse" o a formar diferentes oligosacridos a partir de la sacarosa (hasta un 20%
de los slidos). Estos azcares, en general,
resultan perjudiciales (5,6) para el proceso de fabricacin de azcar. No obstante,
al estudiarse la influencia de los oligosacridos de la caa sobre el hbito del cristal de sacarosa, se observ que el componente aislado (con volumen de elusin
correspondiente a la trehalosa) no alteraba prcticamente el hbito del cristal de
sacarosa (7).
Sin embargo, la posibilidad de que la
caa forme trehalosa luego del corte en
cantidades apreciables, como un mecanismo de respuesta al estrs durante la etapa
de siembra y retoo, resulta atrayente tanto
desde el punto de vista fisiolgico como
industrial, ya que en el segundo caso
incorporara un constituyente interesante
en las mezclas de oligosacridos producidos a partir de la caa, por las propiedades
beneficiosas que este azcar agrega a los
alimentos (8). La trehalosa al ingerirse se
hidroliza a glucosa, adsorbindose en el
intestino delgado. Este azcar protege y
preserva las estructuras de las clulas en
los alimentos y ayuda en el proceso de congelacin y masticado de muchos productos
alimenticios, ya que asiste en el mantenimiento de la textura deseada de los alimentos. Es tambin estable al calor y no
participa en la reaccin Maillard.
ICIDCA No.2, 2009

MATERIALES Y MTODOS
Los experimentos se realizaron en general usando caas frescas de 11 variedades
que mostraban una alta tendencia a la autodegradacin luego del corte, las que fueron
detectadas entre 76 variedades estudiadas
(5), de ellas 9 mostraban la fraccin cromatogrfica donde poda aparecer la trehalosa.
Vase la tabla 1.
En esta primera parte del trabajo se presentan los estudios exploratorios usando la
variedad Ja 60-5. Las caas se cortaron
manualmente en los campos aledaos al
central Pablo Noriega, provincia Habana,
las que se desfibraron y prensaron inmediatamente. Los jugos obtenidos se dejaron
reposar durante 48 h en presencia de un
desinfectante apropiado y seguidamente se
clarificaron por alcalizacin a pH 8,5, calentamiento por 2 minutos a ebullicin y sedimentacin. Los jugos clarificados se concentraron hasta un sirope de 50 Bx.
Tabla 1. Variedades de caa que
resultaron ms autodegradables
Variedad
C128-83
J64-11
C88-523
C227-59
TY-8628
C636-70
C1616-75
C86-12
J60-5
C132-81
C90-317

AIS0 (% slidos)
8,42
8,12
7,10
6,87
6,20
5,62
5,24
2,62
2,5
3,32/ No trehalosa
ni 6 -Kestosa
5,02/ No trehalosa
ni 6 -Kestosa

Para determinar la concentracin de oligosacridos en las muestras se emple la

columna siguiendo la metodologa ya reportada (9). La separacin y cuantificacin de
los oligosacridos presentes en los jugos y
siropes se realiz empleando dos gradientes
alcohlicos lineales diferentes: (A1) de 90 a
40% y (A2) de 90 a 70% en 500 cm3, usando una velocidad de flujo de 4 cm3/min. El
segundo gradiente se emple cuando la
variedad de caa produca la 6-Kestosa. La
columna permiti la separacin del oligosacrido estudiado en repetidas corridas aplicando diluciones alcohlicas (alcohol al
85%) de los siropes, las que contenan alrededor de 20 mg de oligosacridos. Las fracciones que correspondan a la trehalosa se
unieron y concentraron hasta un sirope que
se disolvi en metanol seco y se dej cristalizar en una desecadora sobre cloruro de
calcio, obtenindose un producto cristalino.
En todos los casos se emple el mtodo
de antrona sulfrico para la deteccin y
estimacin de la concentracin de los oligosacridos.
La hidrlisis del oligosacrido aislado se
realiz en dos condiciones: 1) parcial: HCl
0,4 N, 65 C, 30 minutos o enzimticamente
con invertasa a 30 C y pH 5,2; (2) total: HCl
2N, 100 C, 3 h.
El poder reductor del oligosacrido se
determin utilizando soluciones de 1-2 mg
en 1 cm3 de agua destilada de los diferentes
oligosacridos. A las soluciones se aadi
0,1 cm3 de las soluciones A y B de Felling,
preparadas segn la metodologa para la
determinacin de reductores y el mtodo
analtico de Eynon Lane. La mezcla se
calent en un bao hirviente por tres minutos. La aparicin de un color rojo indica la
presencia de un oligosacrido reductor
Separaciones por HPLC

Mtodos cromatogrficos de separacin

Columnas abiertas de hidroxiapatita esfrica (HYDROMAG).
Se utiliz la hidroxiapatita esfrica con
un tamao de partcula de 50-60 micras. El
material disperso en alcohol al 85% se
emple en la preparacin de una columna
semi-preparativa 2,5 x 12 cm (capacidad
mxima de 30 mg de oligosacridos).
ICIDCA No. 2, 2009

a) Cromatografa de Interaccin Hidroflica:

Se us una columna de Lichrosorb NH2,
10, 4*250 mm, empleando como eluyente mezclas de Acetonitrilo-agua al 85%
para la separacin de los monosacridos y
de 80% para la separacin de mono, di y
trisacridos.
b) Fase inversa: Se us una columna
Ultropack TSK ODS 120 T, 10 , de
dimensiones de 7*300 mm, se utiliz agua
como eluyente.
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En las separaciones por ambas

columnas se emple como detector un
Refractmetro Diferencial KNAUER.

Tabla 2. Separacin cromatogrfica de diferentes

oligosacridos

Estudio por resonancia magntica

nuclear
El espectro de RMN-13C fue determinado en un equipo Brker ACF-250 a
una frecuencia de 62,89 MHz en agua
deuterada a 300 K y con acetona como
referencia interna (31,55 ppm respecto
a TMS)

Tiempos de retencin (min.)

Oligosacridos Mtodos
Mtodo
Mtodo
A1/A2
B
C
Sacarosa
10
11
13
Isomaltosa
23
13
11.5
Melibiosa
Rafinosa
Trehalosa
1 Kestosa
Neo-Kestosa
6 Kestosa

DISCUSIN
Al estudiar la naturaleza de los azcares formados por la caa de azcar
luego del corte y la incidencia de los
mismos en la produccin de azcar, se pudo
determinar que los ms perjudiciales resultaban ser la Lactosacarosa y un monosacrido conocido como D-Xilosa. Ambos azcares producen grandes deformaciones en el
hbito del cristal de sacarosa y un aumento
sensible de prdida de azcar por escapes
de microcristales, alargados por su eje "c", a
travs de las telas de las centrfugas.
Adicionalmente, se pudo determinar la presencia de otros dos oligosacridos menos
relacionados con los problemas industriales
en nuestro pas, conocidos como 1-Kestosa

Oligo 1

52
60
21,5/40
70

16,5
23
14,5
19

45
23/92
Oligosacrido aislado
22/40

14,5

11
16
11,5
17,5
11,5

y la Rafinosa. No obstante, segn las separaciones cromatogrficas realizadas en la

columna de HYDROMAG, se pudo constatar que en los jugos de la caa fresca, los
azcares crudos y las mieles, generalmente
aparecen como mayoritarios 5 azcares
(AIS) de bajo peso molecular (ver figura 1),
aunque algunas variedades forman las otras
dos Kestosas, (ver tabla 2).
Este quinto componente ms frecuente,
que no mostraba ejercer un efecto sensible
sobre la morfologa del cristal de sacarosa,
cobra inters por: a) su aparicin frecuente

Figura 1. Oligosacridos presentes en los jugos de caa

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ICIDCA No. 2, 2009

luego del corte de la caa y b) su probable

vinculacin con los mecanismos de respuesta al estrs de la caa luego del corte, durante la siembra y el retoo. El oligosacrido aislado a partir de la primera variedad estudiada, la J60-5, coincide con la trehalosa segn
los tiempos de elusin obtenidos por los tres
mtodos usados. No pudindose hidrolizar el
oligosacrido en condiciones suaves (no aparecen monosacridos), (ver tabla 2), no resulta reductor y se obtiene solamente glucosa en
condiciones drsticas de hidrlisis. Adems,
su espectro de RMN 13C coincide con el de
este disacrido, ver tabla 3. En el espectro 1H
se observa la seal caracterstica de la presencia de los protones anomricos en 5,182
ppm con una J= 3,6 Mz.

Tabla 3. Anlisis del espectro de RMN

oligosacrido
exp/ppm

L/ppm

94,4
73,8
73,4
72,3
70,9
61,8

94,0
73,5
73
72
70,6
61,5

13

C del

Asignacin
-Trehalosa
C-1
C-3
C-5
C-2
C-4
C-6

CONCLUSIONES
El quinto componente aislado del jugo
autodegradado (sin la accin de los microorganismos) de la variedad de caa Ja60-5 se ha
identificado como el disacrido trehalosa: D-glucopiranosil -D-glucopiransido.
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ICIDCA No. 2, 2009

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