GUIA DE LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA

Programa de Biologia
Martha Lily Ocampo
Maryeimy Varon Lopez
PRACTICA 8. IDENTIFICACIN DE HONGOS
Introduccin
Los hongos son de mayor complejidad que las bacterias y de mayor tamao. Estos eucariotas no poseen
pigmentos fotosintticos, por esta razn, no pueden aprovechar las sales minerales del terreno para
fabricar su propia materia orgnica mediante la fotosntesis como hacen las plantas (auttrofas) y por ello
se dice que son organismos hetertrofos. As, estos dependen de nutrientes orgnicos disueltos por
sistemas enzimticos especficos, que son absorbidos a travs de su pared celular y membrana
plasmtica.
Los hongos se desarrollan y toleran concentraciones de acidez elevadas, requieren de humedad para su
desarrollo la cual la obtienen de la atmosfera y del medio. Son colonizadores de diferentes sustratos por
lo que juegan un papel importante en la descomposicin de la materia orgnica convirtindola en
sustancias simples y asimilables por los seres vivos.
Este grupo de organismo se dividen en dos, los unicelulares como las levaduras y los pluricelulares como
lo hongos filamentosos. Las levaduras se reproducen de forma asexual por gemacin, son de forma
esfrica, alargada u oval y pueden exhibir diferentes colores como blanco, rosado y rojo; con frecuencia
se encuentran formando una cubierta pulverulenta fina sobre frutos y hojas.
Los hongos filamentosos poseen una estructura caracterstica llamada hifa, la cual tiene diferentes partes
en su interior (Figura 1) estas, forman el talo y el conjunto de hifas ramificadas forma el micelio. El
principal mecanismo de reproduccin asexual de los hongos es por la fragmentacin de hifas vegetativas
o por la produccin de esporas en conidiforos y esporangiforos, formados en hifas areas, llamadas
reproductivas.

Figura 1. Imagen ampliada de la parte interna de la levadura e hifa (septada y aseptada)

Los hongos tienen diferentes tipos de hbitats, como son:
A. Saprfitos o saprobios, es decir, que se nutren a partir de la descomposicin de la materia
orgnica muerta o inerte. Dependiendo de la especie de hongo podremos encontrar especies
terrestres pratcolas (en prados o pastos), o forestales (suelo de bosques), ligncolas (sobre madera),
fimcolas (sobre excrementos o estircol), o sobre sustratos de lo ms diverso (hojas, pias, frutos,
etc.). Ejemplos de esta asociacin son:
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
B. Parsitos, que sern los 4 hongos que viven a expensas de otros seres vivos, animales, vegetales u
otros hongos. Ejemplo: Armillaria mellea, parsita de diversas especies de rboles. Dependiendo de
las situaciones algunos hongos saprfitos pueden actuar como parsitos o viceversa. Ejemplos de
esta asociacin son:

________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
C. Simbiontes, que se asocian a otros seres vivos sacando provecho de esta asociacin ambas partes.
La simbiosis ms frecuente la desarrollan el micelio de los hongos con las races de las plantas,
denominndose a esta simbiosis Micorriza. Ejemplos de esta asociacin son:
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
Los hongos se pueden clasificar en 8 filos de acuerdo con la presencia de estructuras de reproduccin,
tales filos son:
Microsporidia,
Blastocladiomycota,
Zygomyota,
Neocallismatigomycota,
Chytrhiddomycota,
Glomeromycota, Basidiomycota y Ascomycota (Raven, 2011). Los cuales presentan diferentes
caractersticas indicadas en la tabla 1.

Filo
Microsporidia

Caractersticas

Ejemplos

Grafico

Blastocladiomycota

Zygomyota

Neocallismatigomycota

Chytrhidomycota

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Glomeromycota

Basidiomycota

Ascomycota

No obstante, existen otros criterios no menos importantes como tamao del cuerpo reproductor,
estructuras de produccin de esporas asexuales y caractersticas de las hifas que permite dividirlos de
forma general en micromicetos y macromicetos.
MICROMICETOS

Algunos ejemplos de micromicetos son:

Levadura

Fusarium

Alternaria

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Penicillium

Mucor

Aspergillius

MACROMICETOS (macro = grande, visible; miceto = hongo), son aquellos que son capaces de formar
estructuras visibles y con forma definida con funcin esporfera (produccin de esporas) denominadas
carpforos, cuerpos fructferos o, popularmente, setas) que constan de hifas que conforman el micelio. El
micelio, generalmente no puede observarse (est inmerso en la tierra, madera, residuos, etc.), crece
lenta y continuamente y cuando las condiciones ambientales y nutricionales son adecuadas, dar lugar a
un carpforo o cuerpo fructfero o seta que primero ser como una pequea bola o huevo denominada
primordio y que al crecer formar una seta adulta que producir esporas. La seta, al igual que el micelio,
est constituida por hifas, aunque compactadas dando lugar a formas y colores caractersticos de cada
especie que podemos ver, por lo que el estudio de estos hongos se realiza en base al estudio de estos
carpforos (Figura 2). Los macromicetos constan de dos partes aparentemente bien diferenciadas: una
difusa, subterrnea y vegetativa, que se denomina micelio, y otra visible, de aparicin espordica y con
funcin reproductora que es el carpforo o seta

Figura 2. Macromiceto, incluyendo partes de diferentes gnero.

Las MICORRIZAS: este trmino se emplea para describir la asociacin existente entre determinados
hongos del suelo y las races de las platas terrestres. Su significado literal es hongo-raz y
etimolgicamente, la palabra se ha formado del trmino griego mykos (hongo) y del vocablo latino
Rhiza (raz).
Clasificacin de las micorrizas
Se pueden distinguir tres grupos fundamentales segn la estructura de la micorriza formada:

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Ectomicorrizas
Se
caracterizan
porque
desarrollan una espesa capa de
micelio sobre la zona cortical de
las races absorbentes de la
planta las hifas del hongo no
penetran en el interior de las
clulas de la raz, si no que se
ubican sobre y entre las
separaciones de stas. Se
pueden observar a simple vista.

Endomicorrizas
Los hongos que las producen se
caracterizan
por
colonizar
intracelularmente el crtex radical
o sea que no hay manto externo
que pueda verse a simple vista.
Las
hifas
se
introducen
inicialmente entre las clulas de
la raz, pero luego penetran en el
interior de stas, formando
vesculas
alimenticias
y
arbsculos. Por ello este grupo
se las conoce tambin como
micorrizas vesculoarbusculares
(MVA) los cuales constituyen la
simbiosis ms extendida sobre el
planeta.

Ectoendomicorrizas
Presentan
caractersticas
intermedias
entre
las
Ectomicorrizas
y
las
Endomicorrizas, pues presentan
manto
externo,
como
las
ectomicorrizas, pero tambin
penetran en el interior de las
clulas, como las endomicorrizas
y no existen vesculas ni
arbsculos. Este grupo se
presenta tanto en Basidiomycota
como Ascomycota y son ms
abundantes en angiospermas
que en gimnospermas. Su
distribucin es restringida.

Figura 3. Diferencias entre endo y ectomicorriza. Extrado de http://www.asturnatura.com/

Objetivos:

Adquirir destrezas en el montaje de diferentes metodologas para la manipulacin y aislamiento e

de los hongos
Identificar las morfologas macro y microscpicas de los hongos, diferenciando las estructuras
que los componen.
Determinar las diferentes clases de hogos teniendo en cuenta caractersticas morfolgicas y
reproductivas.

Metodologa
1. Siembra de hongos invertida y por puncin en PDA
Para esta metodologa se requiere que todo el material este esterilizado. Se procede a separar una parte
del micelio del hongo con un asa de siembra o palillo, previamente esterilizada en la flama del mechero.

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Se debe abrir la caja de Petri que contiene medio Papa Dextrosa Agar (PDA) sostenindola boca abajo.
Luego de esto, se realizan 4 punciones una alejada de la otra. Se incuban las cajas de Petri en forma
invertida, envueltas en vinipel o parafilm, a 28-30 C durante 3-5 das.
Observaciones

Figura 4. Mtodo, siembra de hongo por puncin

2. Montaje de la impronta de hongos (cinta adhesiva)

Se debe colocar una gota de azul de lactofenol en el centro de un portaobjetos limpio. Luego se procede
a cortar una tira de 4-5 cm de cinta adhesiva transparente; con pinzas de diseccin doblar la cinta en U
con el adhesivo hacia afuera. Abrir la caja Petri cerca del mechero y presionar suavemente la cinta
adhesiva sobre la periferia de la colonia. Despus, se debe colocar suavemente la cinta con la muestra
sobre la gota de azul de lactofenol, evitando la formacin de burbujas para no alterar las estructuras. La
cinta puede funcionar como cubreobjetos o encima puede colocarse de nuevo otro cubreobjetos para
mantener la muestra por ms tiempo, dejar reposar durante 3-5 minutos y hacer observaciones en el
microscopio.
Observaciones

Figura 5. Montaje de hongos en cinta adhesiva

3. Tcnica de Microcultivo
Esta tcnica consiste en colocar dentro de una caja de petri palillos de madera estriles y sobre ellas una
lmina portaobjetos. Estos palillos evitan el contacto del portaobjeto con el fondo de la caja.
Cortar cuadros aproximadamente 1cm2 y 3 mm de espesor de medio de cultivo que puede ser PDA, OGY
o Saboraud con un bistur estril y caliente. Se debe colocar el cuadro de medio en el portaobjetos que
est sobre un par de palillos en una caja de Petri (previamente esterilizada).

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Tomar con el asa l inoculo del hongo previamente seleccionado. Ms tarde se debe inocular por
picadura en cada uno de los lados del cuadro de agar y posteriormente, colocar sobre el agar un
cubreobjeto y presionar ligeramente para que se adhiera al medio. Luego se debe adicionar agua en la
caja Petri humedeciendo el papel filtro que se encuentra en el fondo de ella y que proporcionara una
atmosfera hmeda. Finalmente, Incubar la caja a 28 C durante 48 h.
Observaciones

Figura 6. Metodologa microcultivo.

5. Extraccin de Hongos Formadores de Micorriza Arbuscular HFMA.

Se debe colectar de 100 a 300g de suelo el cual debe llevarse en un tamiz de 600 m encima de otro de
75 m y este a su vez encima de uno de 45 m con flujo de agua constante. Luego de este procedimiento,
se debe colectar lo que queda en el ltimo tamiz en tubos falcn de 50 ml y se debe adicionar sacarosa al
75% teniendo especial cuidado de no homogenizar la muestra, despus se centrifuga a 3500 rpm durante
cinco minutos. Se retira la interfase y se lava con agua destilada en un tamiz de 45 m hasta retirar la
sacarosa. El producto final se observa al estereoscopio colocando una gota en una caja de petri (ver
figura 6). Si se quieren observar las esporas con mayor detenimiento en el microscopio es necesario
realizar la tincin con PVGL+MEZLER.

Figura 6. Metodologa para extraccin de HFMA.

40

Hongos Macromicetos
A los hongos escogidos para la caracterizacin debe realizrseles un registro fotogrfico antes de la
recoleccin, con la finalidad de tener las imgenes de los especmenes en fresco y ver su hbitat natural,
adems de conservar algunas de sus caractersticas morfolgicas. Posteriormente se extraen del
sustrato sobre el cual crecen, utilizando una navaja o cuchillo; los cuerpos fructferos se envuelven en
papel encerado y se colocaron dentro de una canasta, procurando colocar abajo los ms pesados y los
ms ligeros, arriba.
Para poder llegar a una clasificacin debe ayudarse con libros de micologa, pginas de internet y
artculos cientficos, claves taxonmicas, en estos encontrara que las caractersticas macroscpicas ms
sobresalientes de un macromiceto son:
El pleo, que es la parte superior del cuerpo del hongo, en la que se encuentra la porcin frtil llamada
himenforo y que presenta variaciones morfolgicas; este posee diversas formas los cual nos permite
reconocer hongos de diferentes grupos taxonmicos. Margen del pleo: Esta caracterstica consiste en las
diferentes formas en las que se puede presentar la orilla del pleo.
El pie denominado estpite, que sostiene al pleo. Hay una gran variedad de formas con y sin estpite
El anillo, que se presenta como una estructura adherida al estpite en el grupo de los agaricales, es un
fragmento del velo que cubre al himenforo en desarrollo. Cabe mencionar que no en todas las especies
de macromicetos se encuentran todas estas partes, pero es importante conocerlas en su totalidad para
poder identificar otras caractersticas ms especficas.
Hbito de crecimiento: Se refiere a la forma de crecer de los hongos en el sustrato: solitario, si crece
aisladamente; gregario, si crece uno cerca de otro; cespitoso, si crecen en grupos muy juntos, pero nacen
de forma independiente, y connato, si crecen unidos desde el estpite.
Tipo de unin con el sustrato Los hay estipitados y ssiles. En estos ltimos, el pleo se encuentra unido
directamente al sustrato. Tambin encontramos otras variantes como resupinado, efuso-reflejado e
imbricado.
Color de las partes El color es una de las caractersticas que ms vara ya que responde a la madurez del
hongo, a la humedad del ambiente y a la cantidad de luz que haya en el momento de la recoleccin.
Ornamentacin Hace referencia a dos partes del cuerpo del hongo: la superficie del pleo y la superficie
del estpite, en caso de presentarse. La ornamentacin puede ir desde la ausencia total de cualquier
estructura, lo que se denomina glabro, hasta la presencia de pequeas granulaciones, fibras, escamas o
estructuras semejantes a pelos.
De acuerdo con estas caractersticas, identifique mnimo 2 setas del rea de colecta.

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Metodologa.
1. Sintetizar la Metodologa en un diagrama de flujo.

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Resultados
1.Siembra de hongos invertida y
por puncin en PDA

Imagen

Posible MO y su uso

2.Montaje de la Impronta de
hongos (cinta adhesiva)

3.Tcnica de Microcultivo

3. Extraccin
de
Formadores
de
Arbuscular HFMA.

Hongos
Micorriza

5. Macromiceto

Macromiceto

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Discusin: Una pgina aproximadamente. Adicionalmente, responda el cuestionario de la pgina

siguiente.

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Cuestionario
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Cul es la importancia ecolgica de hongos, lquenes y micorrizas?

Qu medidas sugerira usted para impedir que el pan adquiera moho?
Mencione brevemente tres enfermedades micticas importantes en las plantas y tres en humanos.
Describa la manifestacin clnica que puede presentarse por exposicin a Aspergillus.
Defina dimorfismo y de ejemplos.
Proponga un rea de inters particular donde aplique los mohos, levaduras o setas para
solucionar problemas ambientales.

Conclusiones.

Bibliografa

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