MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

2014 - 2015

Conceptos tericos iniciales

I
El mtodo cientfico

Prctica 1

Soluciones

46

05

Prctica 2

Regulacin del equilibrio cido-base despus de ejercicio

muscular intenso y de la ingestin de bicarbonato de sodio

53

El Sistema Internacional de Unidades (SI)

Matemticas para el laboratorio

08
12

Prctica 3

Cintica enzimtica. Efecto de la concentracin del

sustrato en la velocidad de la reaccin enzimtica

59

Notacin cientfica o exponencial

12

Prctica 4

Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de

los inhibidores de la cadena de transporte de electrones
de los desacoplantes.

64

El mtodo del factor unitario en los clculos

13

Prctica 5

Determinacin de glucosa en sangre total

68

Logaritmos

14

Prctica 6

Determinacin de colesterol y lipoprotenas plasmticas

74

Grficas
Algunos mtodos utilizados en bioqumica
Centrifugacin
Potenciometra
Electroforesis
Soluciones
Manejo de material biolgico

16
18
18
19
22
25
32

Prctica 7

Integracin metablica

84

Prctica 8

Examen General de Orina (EGO)

95

Prctica 9

Pipeteo

100

Prctica 10

Huella gnica

104

Medidas de seguridad

34

III

Apndice

111

Soluciones

112

Concentracin normal de electrolitos

112

Instrucciones para el uso del microscopio

Marca Leica

113

Instrucciones para la operacin del

fotocolormetro Klett-Summerson

115

Uso del Glucmetro

116

Uso del Accutrend

118

Valores de referencia

120

CONCEPTOS TERICOS INICIALES

EL MTODO CIENTFICO

Observacin
El mtodo cientfico se inicia con la observacin. Lo que no puede

La cultura no puede comprenderse sin hacer referencia al mtodo

cientfico. La ciencia no es un sector de la civilizacin que pueda

observarse, directa o indirectamente por medio de instrumentos o

de modificaciones de la conducta, no puede ser investigado por la

separarse del resto de ella, sino un esfuerzo creativo con su

ciencia.

propio sistema de valores que, poco a poco, ha llegado a formar

parte de los valores generales en la sociedad moderna.

La observacin debe ser repetida en forma independiente

por observadores diversos. Las observaciones nicas, que no se

La ciencia est basada en el mtodo cientfico; su

repiten ni actual ni potencialmente, no pueden ser objeto de

capacidad y limitaciones estn definidas por l y dondequiera que

el mtodo cientfico sea aplicable, puede haber ciencia.
El origen de la ciencia se pierde en el ms remoto

estudio cientfico.
Problema

pasado. Mucho antes de que existieran los registros histricos de

la humanidad, la magia primitiva dio origen tambin a la religin y,

Despus de que una observacin se hace y se repite, el segundo

tiempo del mtodo cientfico es plantear un problema; en otras

mucho antes, al arte. Ciencia, religin y arte difieren en mtodos,

palabras, se hacen preguntas sobre la observacin: Cmo es

pero coinciden en metas: comprender e interpretar al universo y

la interaccin de sus partes para promover el progreso material y

que los hechos ocurren de esta manera? Qu es lo que

determina su desarrollo, evolucin y trmino? Es en este punto

espiritual de la humanidad.

donde el cientfico difiere del hombre comn; ambos hacen

El objetivo de la ciencia es hacer teoras. Las teoras

observaciones pero slo el primero muestra curiosidad cientfica

sobre ellas.

cientficas explican los hechos y predicen con alto grado de

Plantear un problema es hacer preguntas, pero, hacer

probabilidad la ocurrencia de hechos similares.

La secuencia del mtodo cientfico es: observar, plantear

buenas preguntas al igual que hacer buenas observaciones es

un arte muy preciado. Para que tengan valor cientfico los

problemas, hacer hiptesis, experimentar y formular teoras.

problemas

Cada uno de los procesos del mtodo cientfico, tomado

aisladamente, forma parte de la actuacin cotidiana de todos los

comprobables por tcnicas apropiadas.

Las preguntas que se inician por cmo? o qu? se

deben

ser

significativos

tener

respuestas

utilizados

resuelven mejor, cientficamente, que las que comienzan con

sistemticamente, constituyen la ms poderosa herramienta que

ha diseado la humanidad para conocer y controlar a la

por qu?, pero los investigadores pueden formular los

problemas para que adopten la forma adecuada.

seres

humanos,

pero,

en

su

conjunto,

naturaleza.

Hiptesis

interpretacin es lo que separa al genio del aficionado a la

investigacin.

Una vez planteado un problema adecuado, el cientfico

procede al tercer tiempo del mtodo: formular una explicacin o

Teora

hiptesis. Por supuesto que un problema puede tener varias

explicaciones posibles, pero slo una de ellas es la verdadera.
Las respuestas casuales a un problema son generalmente

Las pruebas experimentales son la base del quinto peldao,

final del mtodo cientfico: la formulacin de una teora. Cuando

errneas; pero el cientfico con su intuicin, su experiencia y, a

una hiptesis se ha sostenido por pruebas convincentes,

veces por incidentes afortunados, acierta en la hiptesis. Esto se

sabe al emplear el cuarto tiempo del mtodo cientfico.

obtenidas
por
muchos
laboratorios
e
investigadores
independientes, se propone una teora que consiste en una
afirmacin con lmites mucho ms amplios que los experimentos

Experimentacin
El objetivo de la experimentacin es comprobar la validez de la

en que se basa y que expresa la creencia o probabilidad de que

sea valedera en cualquier combinacin de sujeto, tiempo y lugar
en donde se renan condiciones similares.

hiptesis. Si los experimentos demuestran que la hiptesis es

errnea, se hace una nueva y se la sujeta a comprobacin. El

Desde este punto de vista una buena teora permite hacer

procedimiento puede prolongarse por mucho tiempo al formular

predicciones. Las predicciones cientficas tienen siempre un

nuevas hiptesis y tratar de comprobarlas experimentalmente.

soporte experimental muy slido y aun cuando no afirman que un

hecho ocurrir con certidumbre, s plantean que tiene una gran

La situacin ideal en la experimentacin consiste en

reducir el problema a dos alternativas posibles que puedan
contestarse con claridad, afirmativa o negativamente; pero en

probabilidad de ocurrir.
Unas

pocas

teoras

han

probado

su

validez

tan

muchas ocasiones los resultados del experimento slo conducen

universalmente, y expresan tan alto grado de probabilidad, que se

a soluciones parciales.

las conoce con el nombre de leyes naturales. Por ejemplo,

ninguna excepcin se conoce al hecho de que una manzana

La experimentacin es la parte ms ardua del mtodo

desprendida de su rbol caer al suelo si no es sostenida de

cientfico. Cada experimento es un caso en s mismo; el

conocimiento anterior y la experiencia ayudan tcnicamente para

alguna manera. La ley de gravitacin se basa en esta

observacin.

decidir la forma en que una hiptesis puede ser comprobada

experimentalmente. La eleccin correcta del experimento y su
7

Las leyes naturales orientan la investigacin cientfica. Si en el

Un sistema de medidas preciso requiere unidades bien

anlisis de un hecho se elimina lo imposible, aquello que es

definidas. La Oficina Internacional de Pesas y Medidas revisa

contrario a las leyes naturales, lo que resta, aunque sea muy raro
y poco probable, debe ser la verdad. La verdad son los hechos

peridicamente el sistema para incorporar los adelantos

tecnolgicos y mejorar la exactitud y precisin de las medidas.

que nos rodean. Aunque acontecen sin cesar a nuestro

Se han hecho muchos esfuerzos para desarrollar un

alrededor, muy pocas personas y muy pocas veces se hace un

anlisis cientfico de ellas.

sistema de unidades universalmente aceptable. El producto de

estos esfuerzos es el Sistema Internacional de Unidades (cuya
abreviatura es SI en todos los idiomas). A partir del creciente

Ei se emplean las leyes naturales para marcar lo imposible,

con el resto posible se hacen nuevas hiptesis, se comprueban

intercambio de informacin cientfica este sistema ha sido

aceptado por toda la comunidad y en especial en medicina. El SI

por experimentos, se formulan nuevas teoras y se acumula el

es esencialmente una versin ampliada del sistema mtrico

conocimiento cientfico que ha permitido al hombre situarse en un

Universo observable que tiene un radio (r) de millares de millones

decimal.
El SI comprende tres tipos de unidades: las unidades de

de aos luz y que incluye un microcosmos tan pequeo que se

base, las unidades derivadas, las unidades suplementarias y una

20

expresa en rdenes de magnitud menores de 10

un dominio incuestionable sobre su ambiente.

m y adquirir

SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADES (SI)

Los resultados de todos los experimentos en que se basan las
teoras cientficas y las leyes naturales derivan de las mediciones
de objetos o de sus propiedades.

serie de prefijos que permiten tomar mltiplos y submltiplos

decimales de las unidades utilizadas.
Unidades de base
El

SI

consta

de

siete

unidades

bsicas

que

son

dimensionalmente independientes. Las unidades bsicas estn

anotadas en el cuadro I.1, junto con los smbolos que hay que
utilizar para indicar estas cantidades.

Medir es comparar magnitudes; toda medicin comprende un

nmero y una unidad. La unidad identifica la clase de dimensin y

Unidades SI derivadas

el nmero expresa las veces que la unidad est contenida en el

objeto o la propiedad medida. La medicin es un arte muy
refinado; en la actualidad emplea instrumentos muy complejos y

Al multiplicar una unidad de base por s misma o al asociar dos

o ms unidades de base por una simple multiplicacin o divisin,

alcanza una precisin extraordinaria.

se puede formar un amplio grupo de unidades llamadas SI

derivadas (cuadro I.2). Ejemplo: la unidad derivada de volumen

A cierto nmero de unidades SI derivadas se les ha dado

es el metro elevado al cubo, o metro cbico.

nombres especiales, en su mayor parte tomados de los hombres

La combinacin de unidades de base para formar las

de ciencia que han hecho contribuciones notables al

conocimiento del tema de estudio correspondiente (cuadro I.3).

unidades derivadas es una de las grandes ventajas del SI. En el

SI no es preciso memorizar factores de conversin; el factor a

Prefijos SI

que se recurre para formar las unidades derivadas es 1 (unidad),

Cuando las unidades SI derivadas resultan demasiado

cualidad que hace al SI coherente.

grandes o demasiado pequeas para determinados fines (sera

desproporcionado, por ejemplo, utilizar el metro cbico para

Cuadro I.1. Unidades bsicas del SI.

expresar el volumen de sangre del cuerpo humano), el SI

Magnitud
Longitud
Masa
Tiempo
Cantidad de
sustancia
Temperatura
termodinmica
Intensidad luminosa
Intensidad de
corriente elctrica

Nombre
metro
kilogramo
segundo
mol

Smbolo
m
kg
s
mol

kelvin

candela
ampere

cd
A

Volumen
Concentracin
de sustancia
Velocidad

Nombre
metro
cuadrado
metro
cbico
mol/metro
cbico
metro
por
segundo

Los prefijos SI se anteponen directamente al nombre de la

unidad, sin signo de puntuacin alguno (ejemplo: nanmetro y no
nano-metro).
El smbolo del prefijo se antepone tambin directamente al
smbolo de la unidad, sin espacios intermedios ni signos de

Cuadro I.2. Algunas unidades derivadas simples

Magnitud
Superficie

contiene una serie de prefijos que permiten formar mltiplos y

submltiplos decimales de las unidades SI (cuadro I.4).

puntuacin (ejemplo: mm, milmetros; nmol, nanomol que

9
equivale 10 moles).

Smbolo
2
m
m

mol/m
m/s

Cuadro I.3. Unidades SI derivadas con nombres especiales

Magnitud

Nombre

Smbolo

Definicin
2

Fuerza

Newton

Nm.

kgm/s

Presin

Pascal

Pa

N/m2

Trabajo;

Joule

Nm

energa;

Coulomb

A.s

15

10

12

10

10

9
6
3

10

elctrica;

10

cantidad de

10

electricidad
Watt

J/s

10
10

flujo

10

energtico
Tensin

18

10

10

calor

Potencia;

Factor

10

cantidad de

Carga

Cuadro I.4. Prefijos SI.

Volt

12
15
18

Prefijo

Smbolo

exa

Peta

Tera

Giga

Mega

Kilo

Mili

Micro

Nano

Pico

Femo

ato

W/A

elctrica;
potencial

Unidades no pertenecientes al SI

elctrico
Temperatura

Grado

Celsius

Celsius

K273,16

Ciertas unidades ajenas al SI son de uso tan frecuente que en

cierto modo forman parte de nuestra vida cotidiana y se acord
utilizarlas juntamente con el SI (cuadro I.5).
Algunas de estas unidades, en especial el litro y las unidades
de tiempo, son de gran importancia en las profesiones de la
salud. Conviene sealar que el litro es un nombre especial que se
da al submltiplo, decmetro cbico, de la unidad SI de volumen.

10

Cuadro I.5. Algunas unidades no pertenecientes al SI.

Magnitud

Unidad

Smbolo

Valor en
SI

Tiempo

minuto

min

60 s

hora

3 600 s

Da

86 400 s

Volumen

Litro

loL

10 m

Energa

calora

cal

4.185J

-3

La multiplicacin de las unidades se indica con un punto a

nivel o elevado (newton. metro=N.m) o un espacio (N m). La
divisin se puede indicar mediante una barra oblicua o por
exponentes negativos:
1/s = s

Reglas de escritura de smbolos y cifras.

Los smbolos de las unidades no toman la terminacin del
plural (ejemplo: dos mililitros se escribe 2 ml, y no 2 mls).
Los smbolos de las unidades jams van seguidos de un
punto, salvo si estn al final de una frase (ejemplo: 5 ml y no 5
ml.).

mol por metro cbico puede expresarse por:

3

mol/m o mol.m

El SI tiene muchas ventajas y algunas desventajas, pero se

reconoce la realidad del esfuerzo para implantarlo como una
forma de expresar los datos cientficos, comprensible para todos.
Se recomienda desechar las unidades que no pertenecen al SI a
la mayor brevedad posible, pero la realidad del uso de otras
unidades en textos y comunicaciones cientficas no se puede
negar. En este Manual las unidades SI se anotarn entre
parntesis cuando se juzgue conveniente.

Cuando se escriben cifras, la coma slo se puede utilizar para

indicar los decimales; las cifras deben agruparse en tros,
dispuestos a la derecha y a la izquierda de la coma, y separados
entre s por un pequeo espacio. Ejemplo:
forma correcta:
1 000 000
0,003 278
0.003 278
forma incorrecta: 1,000,000
0.003,278

Algunas recomendaciones para utilizar el SI en bioqumica

PARA EXPRESAR CONCENTRACIONES

La concentracin de sustancias cuya masa molecular se

conoce se expresa en forma de cantidad de sustancia, es decir,
en moles (o en submltiplos como el milimol o el nanomol) por
litro. Ejemplo:
11

cido rico en el suero o plasma:

Varones: 0.18 a 0.53 mmol/l.
Mujeres: 0.15 a 0.45 mmol/l.
Colesterol en el suero o plasma: 3.9 a 7.2 mmol/l.
Glucosa en el suero o plasma: 3.6 a 6.1 mmol/l.
Vitamina A en el suero: 0.53 a 2.1 mol/l.

logaritmo negativo de la actividad de los iones hidrgeno (pH = +

log H ), esta actividad puede determinarse potenciomtricamente

con la ayuda de un pH-metro.

Actividad enzimtica. La unidad SI de actividad cataltica es

mol por segundo: mol/s (tambin llamado katal, smbolo: kat) y

La concentracin en forma de cantidad de sustancia no

corresponde a la cantidad de sustrato transformado por segundo

debe ser denominada concentracin molar o molaridad, ni

utilizar el smbolo M en vez de mol/l (como tampoco mM, nM,

como resultado de la catlisis. La velocidad medida es

proporcional a la cantidad de enzima presente.
La actividad tambin puede ser expresada en trminos de
unidades (smbolo: U). Por definicin, una unidad es igual a la
concentracin de enzima necesaria para la formacin de un
micromol de producto por minuto (mol/min). La actividad
especfica de una enzima se define como la concentracin de
producto que se forma por 1 miligramo de enzima por minuto.

etctera, en vez de mmol/l, nmol/l, etctera).

La concentracin de sustancias cuya masa molecular se
desconoce o es dudosa se expresa en kg/l, g/l, mg/l, etctera.
Ejemplo:
Protena srica total: 60 a 80 g/l.
Albmina srica: 33 a 55 g/l.
Globulina srica: 20 a 36 g/l.
Fibringeno en el plasma: 2 a 6 g/l.
Hormona antidiurtica en plasma: 2 a 12 pg/ml

MATEMTICAS PARA EL LABORATORIO

Notacin cientfica o exponencial

Concentracin de sustancias en tejidos. Se expresa en

unidades de masa (si no se conoce la masa molecular) o en
moles (si se conoce la masa molecular) por kilogramo de tejido
seco o hmedo. Ejemplo:
g/kg, mg/kg o mol/kg, mmol/kg, etctera.
No se recomienda expresarla en unidades de volumen, es
decir en mg/ml, g/l, etctera.
Concentracin de iones hidrgeno. La concentracin de
hidrogeniones en los lquidos biolgicos se expresa en nmol/l, as
como en unidades de pH. El valor del pH se define como el

Cuando se expresan cantidades muy grandes o muy

pequeas, como es el caso frecuente en bioqumica, la dificultad
de escribir y manipular muchos ceros se evita con el uso de la
notacin exponencial o cientfica.
En la notacin exponencial todo nmero puede expresarse como
una potencia entera de 10, o como un producto de dos nmeros,
uno de los cuales es una potencia entera de 10. Ejemplo: el
nmero de Avogadro seiscientos dos sextillones se escribe:
602 000 000 000 000 000 000 000
12

y en la notacin exponencial como una cantidad decimal

23
multiplicada por 10 elevada a la potencia apropiada = 6.02 x 10 .
Como ejercicio, examine las cantidades siguientes:
2

200 = 2 x 10 x 10 = 2 x 10
2
205 = 2.05 x 10
5
205 000 = 2.05 x 10
1
0.205 = 2.05 x 10
4
0.000 205 = 2.05 x 10
7
0.000 000 1= 1/10 000 000 = 1 x 10

significativas

como

mximo;

205 = 2.05 x 10 = 2 lugares

Para fracciones decimales menores de la unidad se separa la
primera cifra distinta de cero despus de la coma decimal y se
cuentan los lugares hacia la izquierda hasta la coma decimal,
incluso la cifra separada y el nmero es el exponente negativo:

exponentes

se

suman

algebraicamente para multiplicar, se restan para dividir, se

multiplican por una potencia deseada para tener el exponente de
la misma y para encontrar races se divide el exponente entre el
ndice de la raz. Ejemplos:
6

6 x 10 por 3 x 10 = 18 x 10 = 1.8 x 10
6+3

ya que 6 x 3 = 18 y 10
6

= 10

6 x 10 entre 3 x 10 = 2 x 10
63

ya que 6/3 = 2 y 10
El exponente de la base 10 para nmeros mayores de la
unidad es el nmero de lugares desde la coma o punto decimal
separada de la primera cifra significativa:

los

= 10

10

Para la adicin y la sustraccin usando notacin cientfica,

primero se escribe cada cantidad con el mismo exponente n.
Luego se realiza la operacin deseada entre los valores N1 y N2,
donde N1 y N2 son los nmeros obtenidos con el mismo
exponente; estos ltimos permanecen iguales. Ejemplo:
2

(5.1 x 10 ) + (3.4 x 10 ) = (0.51 x 10 ) + (3.4 x 10 ) = 3.91 x 10

El mtodo del factor unitario en los Clculos

0.000 205 = 0.000 205

El procedimiento que se utilizar para resolver problemas que
del 2 a la coma decimal son 4 lugares; por lo tanto, es :
4

2.05 x 10 .
Las operaciones de multiplicar y dividir, elevar a potencias o
extraer races se facilitan manipulando los exponentes segn
reglas muy sencillas. La porcin decimal no exponencial se opera

incluyan conversin de unidades se denomina mtodo del factor

unitario. Esta tcnica se basa en las propiedades del nmero 1,
es decir
:
Cualquier nmero al ser multiplicado por uno, sigue siendo el
mismo nmero (1 x 5 = 5).

en forma ordinaria, lo que reduce el manejo a tres cifras

13

 El nmero 1 puede ser escrito como el cociente de cualquier

3. Multiplicar la cantidad dada por ese factor. En esta

multiplicacin,

nmero dividido por si mismo (3/3 6/6).

cancelan como si fueran nmeros.

Se puede tomar cualquier ecuacin y dividirla por uno de los

miembros para obtener una razn igual al nmero 1.
Por ejemplo, dada la ecuacin:

las unidades idnticas se multiplican o

-5

Ejemplo: Cuntos l hay en 0.00005 L (5 x 10 L)?

0 minuto = 60 segundos, obtener la razn igual al nmero 1.

-6

1) 1 l = 10 L 1 L = 10 l
1 minuto

1 minuto

60 segundos
1 minuto
6

10 l

2)
1=

60 segundos
1 minuto

1=

1 minuto

1L

60 segundos
-5

3) 5 x 10

L x= 5 x 10

[-5+ 6]

= 5 x 10 l = 50l.

Estas razones o factores que son equivalentes al nmero 1 se

conocen como factores unitarios, factores de conversin o
coeficientes de conversin.

En este mtodo las unidades se acarrean en todo el

proceso del clculo, por lo tanto si la ecuacin se establece en
forma correcta, todas las unidades se cancelan excepto la

El recproco de cualquier factor unitario es tambin un factor

unitario.

deseada.
Logaritmos

En ambos casos el numerador y el denominador describen la

misma cantidad, por lo que se puede efectuar conversiones entre

El logaritmo de un nmero es el exponente o potencia de una

diferentes unidades que miden la misma cantidad.

base determinada que se requiere para obtener el nmero. Si el

El mtodo del factor unitario consiste en:

nmero a elevado a la potencia n (a ) es igual al nmero N,

entonces n es el logaritmo de base a del nmero N. Es decir:

1. Tomar una relacin entre unidades y expresarla en forma de

una ecuacin,
2. Luego expresar la relacin en forma de una fraccin (llamada
factor de conversin) y, por ltimo;

si a = N entonces n = loga de N
La base a puede ser cualquier nmero; en la prctica mdica
se usa como base el nmero 10 y los logaritmos resultantes se

14

conocen como logaritmos comunes o de Briggs. Su smbolo es:

log o log.10
Los logaritmos son indispensables para manejar los datos
bioqumicos; constan de dos partes que se separan por una coma

-2.6990 cologaritmo
La caracterstica indica la posicin del punto decimal en la cifra
representada por la mantisa y se determina por inspeccin del
nmero.

o punto decimal; a la izquierda, la caracterstica corresponde al

orden de magnitud y puede ser positiva o negativa segn sea la

Para un nmero mayor que 1, la caracterstica es uno menos

cantidad mayor o menor de la unidad. El exponente de la base 10

que el nmero de cifras antes del punto decimal; as: la

para nmeros mayores de la unidad es siempre positivo. Cuando

es negativo se indica con el signo menos arriba del nmero que

caracterstica de 100 es 2 porque el nmero cien tiene 3 dgitos a

la izquierda del punto decimal. Para un nmero menor que 1, la

la representa:

caracterstica es numricamente uno ms que el nmero de

0.001 = 10

-3

caracterstica 3

1 000 = 10

-3

caracterstica 3

ceros que siguen al punto decimal; as: la caracterstica de 0.000

000 1 es 7 con signo negativo.

A la derecha, la mantisa es la fraccin decimal de exponente

Para encontrar el logaritmo de un nmero, por ejemplo: 0.000

809, se busca en la tabla las dos primeras cifras distintas de cero

que corresponde a los dgitos que ocupan el orden de magnitud;

de izquierda a derecha (80) en la primera columna vertical de las

se obtiene de tablas o de calculadoras electrnicas y siempre

tiene valor positivo:

tablas se sigue la horizontal correspondiente hasta la columna 9,

que es el otro nmero, en donde se lee 9 079, que es la mantisa

0.3010

log = 0,3010 esto es 10

=2

requerida. La mantisa para 809, 8.09, 0.0809, etctera; es la

misma (9 079), pero difiere la caracterstica. As:

Cuando la caracterstica y la mantisa son de diferente signo (+

o ) se opera con el cologaritmo que se obtiene por la suma
algebraica de la mantisa positiva con la caracterstica negativa es
un nmero todo negativo, ver el siguiente ejemplo:
Log 0.002 = 3.3010 = -2.6990

Log 0.000 809 = 4.9079 = -3.0921

Si el nmero del cual se requiere el logaritmo tiene cuatro
cifras, la cuarta se busca en la misma columna horizontal en la
parte de la tabla que dice partes proporcionales y debe
agregarse a la mantisa como diez milsimos.

3.000
+0.3010
15

Por ejemplo, para el nmero 8 091:

El logaritmo de la potencia n de un nmero es igual a "n"

veces el logaritmo del nmero:

Mantisa para 809 = 9 079

parte proporcional para 1 = 1
0.9079
+ 0.0001
0.9080; log 8091 = 3.9080

log a = 3 x log a

Grficas
"Una figura equivale a mil datos en una tabla numrica" y as

El antilogaritmo es el nmero que corresponde a un logaritmo

como se construye un modelo para visualizar un conjunto

complejo de hechos, se utiliza una grfica para presentar los

dado. Para encontrarlo se busca la mantisa en la tabla de

datos experimentales en tal forma que fcilmente se asimilen y

antilogaritmos, se determina el nmero a que corresponde y se

fija la posicin del punto decimal segn la caracterstica. Por

aprecien sus relaciones cuantitativas.

ejemplo el antilogaritmo de 1.6747 es 47.29: la caracterstica es 1

Se llama grfica a la representacin esquemtica de las

(hay dos dgitos a la izquierda del punto decimal) y la mantisa es

0.6747, que se buscara en la tabla de logaritmos donde se

variaciones que sufren las distintas magnitudes que intervienen

en los fenmenos fsicos, qumicos, biolgicos, sociales o de

hallara que corresponde a 4 729.

cualquier otra ndole. Tiene por objeto mostrar rpida e

Los estudiantes deben familiarizarse con el uso de logaritmos

intuitivamente
comparadas.

la

relacin

que

guardan

las

magnitudes

en las operaciones comunes.

El logaritmo del producto de dos nmeros es igual a la suma

Entre las diferentes clases de grficas que existen las ms

importantes son:

de sus logaritmos:
log a x b = log a + log b

Grfica poligonal. Consiste en expresar las variaciones de un

fenmeno continuo por medio de puntos y de representar la
marcha de dicho fenmeno por medio de una lnea que une esos

El logaritmo del cociente de dos nmeros es igual al logaritmo

del dividendo menos el logaritmo del divisor:
log a/b = log a log b

puntos.
Para elaborar una grfica poligonal se trazan en un papel, de
preferencia milimtrico, dos rectas perpendiculares entre s que

16

se corten en cero. En cada una de ellas se representar una de

Barras verticales. Las magnitudes se representan por medio

las magnitudes que se van a relacionar. El punto cero (0) se

de rectngulos, barras de base igual que descansan en el eje de

llama origen y la rectas son los ejes; 0X es el eje X y 0Y es el eje

Y. Para referirse al eje X generalmente se dice: eje horizontal o

las abscisas y cuya altura es proporcional a la intensidad del

fenmeno y se mide en el eje de las ordenadas.

eje de las abscisas (variable independiente) y para el eje Y: eje

vertical o eje de las ordenadas (variable dependiente).
Los ejes dividen su propio plano en cuatro regiones llamadas

Barras horizontales. Las barras descansan sus bases en el eje

de las ordenadas y el fenmeno se mide en el eje de las
abscisas.

cuadrantes que se numeran I, II, III y IV. En el laboratorio

utilizamos habitualmente slo el primer cuadrante (figura I.1).

Grfica de sectores circulares. Para hacer una grfica de este

Las distancias a la derecha de 0, a lo largo del eje X, se

tipo hay que tener en cuenta que el crculo debe tener el total de

consideran como positivas y las de la izquierda como negativas.

Similarmente, hacia arriba de 0, a lo largo del eje Y, se miden las
distancias positivas y hacia abajo de 0 las negativas.

las magnitudes que se van a representar.

Los sectores circulares son proporcionales a las magnitudes

Despus se trazan los puntos cuyas distancias a uno de los

que representan; magnitud que se mide en grados de

circunferencia. Para determinar el nmero de grados que deben

ejes sean proporcionales a la magnitud que se va a representar y,

tener dichas partes se plantearn una serie de reglas de tres para

finalmente, al unir estos puntos por medio de segmentos de recta,

se tiene la grfica poligonal.

cada una de ellas en las cuales se consideran: como 100% a la

suma total de las magnitudes que se quieren graficar,

Nota: por lo general, es mejor que la curva llene una parte

considerable de la pgina. Muy bien puede usarse la misma

para obtener en cada caso el porcentaje correspondiente; una

vez obtenido ste, se pasar a grados, considerando 360o como
100% y procediendo entonces a hacer la grfica.

unidad de medida sobre los dos ejes, pero a menudo los valores
tienen un campo de variabilidad muy amplio, lo cual hace
necesario usar diferente escala para cada uno de los ejes.
Diagrama en barras. Cuando se quieren expresar simples
comparaciones de medidas entre s o para representar un
fenmeno discontinuo se emplean las barras, que pueden ser
horizontales o verticales.
17

En el sistema mtrico decimal, la unidad de f es la dina, la de

m es el gramo y la de r es el centmetro. Ejemplo: si se coloca un
gramo de agua en un tubo de centrfuga y se rota a 2 000 rpm
(revoluciones por minuto) a una distancia radial de 16 cm, la
fuerza es:
2

f = 0.01096 x 2000 x 1 x 16 = 701 440 dinas

Si transformamos las dinas a peso, entonces el gramo de agua

tiene peso porque es atrado al centro de la Tierra de acuerdo
con la ley de la gravitacin y es atrado en estado normal, con
980 dinas de fuerza. Si usamos, por lo tanto, peso en vez de
dinas como la unidad de nuestro problema tendremos:
ALGUNOS MTODOS UTILIZADOS EN BIOQUMICA

f = 0.01096 x n mr = 717 g
980

Centrifugacin
Un mtodo muy til en el laboratorio para separar sustancias
de diferente densidad suspendidas en un lquido es la
centrifugacin; en ella, la accin de la fuerza centrfuga (fuerza
necesaria para desplazar hacia afuera un determinado peso en
direccin radial) da como resultado que las partculas ms
pesadas se sedimenten ms rpido que las partculas ligeras.

o sea, interpretando la frmula, la fuerza de contencin para

sostener la unidad masa (el gramo) e impedir que se vaya del
centro de rotacin es la fuerza que la gravedad ejerca sobre 716
g o, dicho de otra manera, el gramo a esa velocidad pesa en el
fondo del tubo de la centrfuga 716 gramos comparado con el
tubo en reposo o 716 veces la fuerza de la gravedad (g).
La centrifugacin y ultracentrifugacin son operaciones que se

La fuerza centrfuga depende de la cantidad de materia

(m) que se desplaza hacia afuera cuando est rotando a una
velocidad por minuto de (n) veces a una distancia radial (r) y se
expresa por la frmula:

basan en el principio anterior y que permiten separar los

componentes de una mezcla.
Las centrfugas ordinarias operan a rotaciones menores de

f (en dinas) = 0.01096 n m r

10 000 revoluciones por minuto (rpm). Las condiciones que

limitan esta velocidad son la resistencia de la parte de la
18

centrfuga que sostiene el rotor (brazo), la friccin con el aire y el

very high density) con Sf de 0 a 10, 10 a 400 y las muy densas

calentamiento.

que no flotan y tienen una densidad mayor de 1.

Las

ultracentrfugas

operan

en

cmaras

refrigeradas,

evacuadas de aire, y el rotor no gira sostenido por un brazo sino

impulsado por chorros de aceite o aire comprimido que se aplica
a una porcin externa del rotor sostenido por una pared muy
gruesa de una cmara cilndrica de rotacin. Se alcanzan
velocidades de 20 000 a

70 000 rpm.

El peligro del mal uso de la centrfuga deriva de la enorme fuerza

que alcanza en el radio de rotacin y el peso de las sustancias
colocadas en el campo gravitacional del aparato.

Se debe tener cuidado con los siguientes puntos:

1.

Los tubos en las centrfugas debern colocarse por pares

para que no haya diferencia de peso en un lado de la centrfuga.

La sedimentacin en la ultracentrfuga se expresa en unidades
Svedberg (smbolo: S) y se aplica a la comparacin prctica de
tamaos moleculares que no slo dependen de la masa de las
molculas implicadas sino tambin de su forma. Es importante
considerar que los valores de Svedberg no son aditivos, es decir,
dos partculas 5S no crean una partcula 10S. Sin embargo, hay
una correspondencia tosca que para las protenas esfricas es
de:

Enfrente de un tubo de un peso determinado debe estar otro, en

la misma posicin, con el mismo peso. El descuido de esta regla
implica un desnivel que, a las velocidades y fuerzas sealadas,
puede romper los tubos y daar el aparato. Para balancear por
pares los tubos lo mejor es usar una balanza de dos brazos y
ajustar el peso hasta que sea idntico.
2. Para no forzar el motor arrnquese gradualmente la centrfuga
hasta alcanzar la velocidad requerida.
3. Nunca se frene una centrfuga; djese parar por su propia
inercia; el no hacer esto conduce a que se agite el contenido
de los tubos y se eche a perder el trabajo.

2 S = 10 kdal
4 S = 50 kdal
8 S = 160 kdal
16 S = 400 kdal

4. No alzar las tapas de la centrfuga cuando est en

movimiento.
5. Ante cualquier dificultad o duda consulte al profesor.
13

La unidad Svedberg es igual a 10 segundos; no pertenece al

SI y puede suplirse por 0,1 picosegundo (ps) o 100 femtosegundo
(fs). En las molculas menos densas que el medio de
suspensin, como las lipoprotenas, el desplazamiento es hacia la
superficie y se expresa en Svedberg de flotacin (Sf) y permite la
clasificacin en: LDL, HDL y VHDL (low density, high density y

Potenciometra
Muchas de las reacciones que se realizan en las clulas son
reacciones de oxidacin y de reduccin, es decir, en las que se
transfieren electrones.
19

KCl). Cuando los dos electrolitos se conectan por un alambre

La electroqumica estudia las reacciones qumicas en las que

metlico, ocurre un flujo de electrones del electrodo de cinc al

hay transferencia de uno o ms electrones.

La oxidacin es la prdida o liberacin de electrones y la

electrodo de cobre, el cual puede ser medido por medio de un

voltmetro. Cuando el cinc cede los electrones se convierte en ion

molcula que los cede se denomina agente reductor.

soluble, mientras que el cobre disuelto, al aceptar los electrones,

La reduccin es la ganancia de electrones y la molcula que

se convierte en cobre metlico que se deposita en el electrodo. El

puente salino cierra el circuito elctrico entre las dos soluciones.

los acepta se denomina agente oxidante.

Cuando se oxida un agente reductor, se transforma en su

El hecho de que fluya una corriente elctrica del polo positivo

(nodo, que en este caso es el electrodo de cinc) al polo negativo

forma oxidada y como la reaccin es reversible las formas

(ctodo, que en este caso es el electrodo de cobre), significa que

oxidada y reducida del compuesto constituyen un par conjugado

llamado par redox o par de oxidorreduccin.

hay una diferencia de potencial entre los electrodos denominada

fuerza electromotriz (fem) de la celda. Dado que el potencial de
un electrodo est relacionado con la magnitud de cargas positivas

El proceso de oxidacin siempre va acompaado del proceso

de reduccin ya que los electrones que cede una molcula

existentes, la diferencia de potencial compara las cargas relativas

existentes en dos puntos. Se denomina potencial de electrodo (E)

reductora son aceptados por una molcula oxidante, lo cual

a la diferencia de potencial respecto a un electrodo de referencia

constituye las reacciones de oxidorreduccin o reacciones redox.

arbitrario y depende de la concentracin de las molculas en la

solucin y de la temperatura.

La determinacin cuantitativa de la concentracin de las

molculas oxidantes y reductoras en una solucin es el objeto de
estudio de la potenciometra. En esta tcnica se determina el

En general, el potencial de los electrodos se mide con

referencia al electrodo de hidrgeno al que se le ha asignado.

potencial elctrico generado por la transferencia de electrones en

En general, el potencial de los electrodos se mide con referencia

una reaccin redox en la cual estn involucradas las molculas a

estudiar. Este potencial se mide en una celda electroqumica. La

al electrodo de hidrgeno al que se le ha asignado

arbitrariamente un potencial de cero a 25o C a una concentracin

celda ms comn es la de Daniell (Fig. I.2), en la que en dos

compartimientos separados que contienen ZnSO4 y CuSO4 se

de 1 mmol/L y una presin del gas de una atmsfera. Sin

colocan cinc y cobre metlico, respectivamente; las dos

embargo, en la prctica es inconveniente porque se trata de un

electrodo gaseoso.

soluciones se conectan por un puente salino (un tubo que

contiene agar embebido en una solucin de un electrolito como el
20

aplicaciones prcticas ms importantes de la potenciometra es la

determinacin del pH.
Dentro del electrodo de vidrio hay un alambre de plata con un
extremo sumergido en una solucin de HCl 0.1M. El bulbo de la
+

parte inferior es de un vidrio especial, permeable a los iones H .

La superficie interior de esta membrana de vidrio est en contacto
con la solucin de HCl y la exterior con la solucin cuyo pH se
quiere determinar. En las dos superficies la membrana de vidrio
absorbe agua y forma una capa de gel a travs de la cual
difunden los iones hidrgeno y desplazan a otros iones de la
Fig. 1.2 Celda de Daniell
Es por ello, que se usan otros electrodos de referencia, como
el de calomel, en el cual el sistema de medicin es mercurio y
cloruro mercuroso. En el caso de este electrodo, como sucede
con todos los pares redox, debe calibrarse con respecto al
electrodo de hidrgeno.
Los pares redox de inters para el bioqumico incluyen a
menudo al ion hidrgeno como reactivo o como producto, por lo
que tales sistemas estn en funcin del pH del medio.
Hay diferentes tipos de electrodos: los metlicos (como los de
la celda de Daniell), los metlicos-sal insoluble (como el de
plata/cloruro de plata), los gaseosos (como el de hidrgeno, que
se adsorbe sobre platino), los electrodos selectivos de iones (que
pueden ser para aniones o para cationes) y los de vidrio (que son
+
electrodos selectivos de iones, especiales para determinar H ).
Estos ltimos son los ms utilizados ya que una de las

estructura del vidrio (como sodio) y esto provoca el

establecimiento de un potencial. En una solucin amortiguadora

que contenga Cl se sumerge un electrodo de Ag/AgCl. Cuando

el electrodo se coloca en una solucin cuyo pH es diferente al de
la solucin amortiguadora, aparece una diferencia de potencial
entre los dos extremos, lo cual es una medida de la diferencia de
los dos valores de pH.
La determinacin ms precisa del pH se realiza en un pHmetro que consiste, fundamentalmente, en un potencimetro
diseado para emplearse con un sistema de electrodo de vidrio.
Como una unidad de pH corresponde a 59 milivoltios a 25 C, el
mismo medidor se puede usar con dos escalas para hacer
lecturas en mv o en pH. El electrodo de vidrio consiste en una
membrana de vidrio situada al final de un tubo de vidrio o plstico
de paredes ms gruesas. En el tubo se encuentra cido
clorhdrico diluido saturado de cloruro de plata y un hilo de plata
que conecta a la terminal del voltmetro con un electrodo de
referencia. El pH se determina midiendo la diferencia de potencial
a travs de la membrana de vidrio que separa la solucin a la
21

cual se quiere determinar el pH, de la solucin de referencia cuya

Electroforesis

concentracin de hidrogeniones se conoce.

El esquema del circuito de un potencimetro tpico se

Una partcula coloidal o un ion provistos de carga elctrica

emigran hacia el nodo o el ctodo bajo la influencia de un

encuentra en la figura I.3. La sensibilidad del medidor se puede

campo elctrico externo. Si las partculas de una mezcla tienen

ajustar para cambios de acuerdo a la temperatura (botn de

control de temperatura). Con el botn de calibracin a cero se

diferentes velocidades de desplazamiento, puede aprovecharse

esta propiedad para separarlas. El empleo de fuerzas elctricas

introduce un voltaje lateral en el circuito que permite que la

para lograr esta separacin se llama electroforesis y depende

lectura corresponda al pH de la solucin reguladora tipo. Los

medidores de pH se construyen de tal manera que el cero de la

fundamentalmente de la carga y no de la masa molar de las

partculas cargadas. Esta tcnica se ha empleado en la

escala del potencimetro corresponda a un pH de 7. El medidor

separacin de protenas, pptidos, nucletidos, cidos orgnicos

se calibra antes de usarlo, primero

con una solucin reguladora de pH 7, ajustando el cero para que

y porfirinas, entre otros compuestos. Es importante considerar

que en el caso de una protena su carga depende del pH del

d la lectura exacta; se lava el electrodo con agua destilada o

medio, por lo que es posible emplear la tcnica para determinar el

desionizada y se calibra con una segunda solucin reguladora de

pH 4 10; se ajusta nuevamente el medidor, ahora con el control

punto isoelctrico de la misma.

de temperatura, para que d la lectura exacta; luego se determina

el pH de la solucin problema.

Si se aplica un campo elctrico a travs de una solucin, la

fuerza que acta sobre las molculas cargadas de soluto
depende de la carga elctrica (e); del nmero de cargas en la
molcula

(z),

y de

la

fuerza

del campo

elctrico (E).

Inmediatamente despus de poner a funcionar el campo, las

partculas cargadas se aceleran hasta que alcanzan un equilibrio,
o sea, cuando la carga electrosttica queda equilibrada por la
fuerza de friccin que ejerce el medio disolvente; entonces, se
mueven a una velocidad constante. La velocidad por unidad de
campo elctrico se denomina movilidad electrofortica. Dado que
la friccin depende del tamao de la partcula y de la viscosidad
del medio en que se mueve, la facilidad con la que se mueve una
partcula cargada depende directamente de su

carga e

inversamente de su tamao y de la viscosidad del medio.

22

Existen dos tipos de electroforesis: la frontal y la zonal.

Electroforesis frontal o en medio lquido. Es el mtodo clsico
de Tiselius en el que la separacin de los componentes de una
mezcla se realiza en varios frentes o lmites que se traslapan a lo
largo del procedimiento. El movimiento de los frentes se realiza
en un canal vertical y la densidad de la solucin por debajo del
frente debe ser mayor que la de arriba, ya que en caso contrario
el sistema de frentes se destruira. En el mtodo, la solucin a
separar se coloca encima del medio amortiguador conductor. La
tcnica es difcil y costosa, aunque puede presentar la ventaja de
que se evitan las interacciones de los solutos con cualquier
superficie y se

eliminan as los efectos adsorbentes

distancia de migracin es directamente proporcional al voltaje

aplicado y al tiempo. Los solutos migran a travs del solvente que
baa un soporte slido. Este soporte puede ser de diversa
naturaleza y cada uno presenta algunas ventajas y desventajas
en su uso. Los soportes ms comunes son papel, acetato de
celulosa, almidn, agar, agarosa y poliacrilamida. Dado que en el
caso de los geles es posible un manejo del tamao del tamizado
para lograr una mxima eficiencia en la separacin, este mtodo
es el ms usado en bioqumica.
En la tcnica hay que cuidar algunos aspectos que pueden
afectar la separacin como: la seleccin adecuada del soporte,
del amortiguador, vigilar la temperatura de la cmara, la
intensidad del campo elctrico, el tiempo, etctera.

y
Electroforesis en papel y en acetato de celulosa. La

desnaturalizantes. Adems, puede operarse en medios acuosos,

a baja temperatura y bajo condiciones favorables de pH y fuerza

electroforesis en papel fue el primer mtodo de separacin en

inica.

zonas en un campo elctrico. Es una tcnica sencilla y rpida,

que requiere pequeas cantidades de muestra y que es

Electroforesis zonal. Uno de los problemas que presenta la

tcnica anterior es la necesidad de estabilizar las zonas de soluto
contra la conveccin gravitacional y la difusin. Esto origin el
empleo de otra tcnica de electroforesis: la electroforesis zonal.
En ella, el empleo de gradientes de densidad, slidos porosos o
fibrosos y geles permite resolver el problema de la difusin y de la
conveccin gravitacional.

especialmente til en las electroforesis de alto voltaje para

En este tipo de electroforesis la mezcla de solutos a separar se

aplica como una mancha o una banda delgada en un punto del
canal electrofortico. Los solutos migran con distintas velocidades
(de acuerdo a su movilidad) y se separan en zonas discretas. La

separar molculas de bajo peso molecular como aminocidos,

pptidos, oligonucletidos y otros compuestos orgnicos con
grupos

cargados.

Ha

sido

muy

utilizada

en

el

mapeo

bidimensional de protenas (huella gnica), para identificar

diferencias entre protenas similares, probar que una protena es
producto de otra de mayor tamao, etctera.
Dado que el papel tiene una alta actividad endosmtica*, lo
que causa algunos problemas en la electroforesis, ha sido
sustituido por el acetato de celulosa, que tiene una estructura

23

microporosa uniforme, actividad endosmtica baja y en el que la

adsorcin de las protenas ha sido eliminada.
En los aparatos en que se realizan estas tcnicas el soporte se
humedece al sumergirlo en el amortiguador y colocarlo de tal

La electroforesis en agarosa ha permitido el estudio de las

molculas del DNA, cuyo tamao impide que puedan penetrar en
los geles de poliacrilamida, pero que penetran fcilmente en
6
geles de agarosa a 0.2%, si tienen un peso hasta de 150 x 10 , o
6

a 0.8% si pesan hasta 50 x 10 .

manera que se establezca el contacto con las soluciones en que

estn los electrodos. Los aparatos se tapan para evitar la

Es posible separar molculas de DNA que difieren slo 1% de

evaporacin y para mantener una atmsfera hmeda dentro del

peso molecular segn sea la concentracin de la agarosa. Para

aparato.
Electroforesis en geles de agar y agarosa. El agar es una

detectar las bandas, se sumerge el gel en una solucin de

bromuro de etidio el cual se pega al DNA y fluoresce cuando se

mezcla de polisacridos que se obtiene de ciertas especies de

excita con luz ultravioleta. El peso molecular se determina por la

algas marinas. Est constituido de dos componentes principales:

uno lineal o agarosa y uno ramificado y muy cido llamado agar o

distancia de migracin. Tambin se han usado estos geles de

agarosa para la obtencin de mapas de restriccin, los que

pectina. El agar y la agarosa son solubles en soluciones acuosas

a 100oC y solidifican a temperatura ambiente; forman geles de

permiten ver diferencias entre dos molculas de DNA, localizar

buena firmeza cuando se usan a una concentracin de 0.5 a 2%.

mutaciones, detectar recombinaciones de fagos, aislar

fragmentos de DNA deseados, distinguir entre el DNA lineal,

Su estructura se mantiene por numerosos puentes de hidrgeno

circular o superenrollado.

entre cadenas adyacentes de polisacridos. El gel de agarosa

ofrece ciertas ventajas sobre otros soportes; posee una porosidad

Electroforesis en geles de poliacrilamida. Los geles de

elevada y uniforme, lo que favorece la migracin regular de las

poliacrilamida son geles totalmente sintticos que han sustituido a

sustancias cargadas, lo cual se traduce en una mayor resolucin.

los geles de almidn en el estudio rutinario de protenas por

mtodos electroforticos. Esto ha sido posible gracias a la gran

Para realizar la electroforesis en estos medios se prepara el

facilidad con que puede variarse segn el contenido total del

gel sobre una superficie de vidrio. Una vez solidificado el gel, se

hacen pocillos en l para aplicar en ellos la muestra. Se lleva a

monmero y su grado de entrecruzamiento. Dada su capacidad

de filtrador molecular, se ha empleado para separar compuestos

cabo, o se "corre", la electroforesis y, al final, se fija la

con base en su peso molecular para lo que se usa lauril sulfato

preparacin, se tie y se seca. La tcnica se ha usado en

combinacin con la inmunodifusin en el anlisis inmunolgico de

de sodio (SDS) con el objeto de evitar las diferencias individuales

en las cargas de las protenas.

protenas y en la cuantificacin de protenas inmunoprecipitables.

24

Los amortiguadores que se usan pueden ser continuos (en los

pesos moleculares en la electroforesis bidimensional como

que se utiliza el mismo amortiguador en los tanques de los

mtodo de anlisis de protenas.

electrodos y los sistemas electroforticos) y discontinuos, en los

que hay dos tipos de geles: el de separacin, o de poro cerrado,

*Nota: Cuando se aplica un potencial elctrico a un lquido

contenido en un soporte no conductor el lquido se mover hacia

en el cual se resuelven los componentes de una mezcla (aqu es

uno u otro electrodo, en favor o en contra del movimiento

importante el uso del amortiguador adecuado) y el gel

concentrador, o de poro abierto, que sirve para concentrar la

electrofortico, alterando la movilidad electrofortica de las

partculas cargadas. Este fenmeno se conoce como

muestra. A los geles se les puede incorporar sustancias

endosmosis. Si el soporte est cargado, induce la orientacin de

disociantes como la urea y el SDS sin que sean afectados.

Tambin pueden emplearse agentes reductores como el 2

las cargas con signo opuesto en el lquido, lo que ocasionar al

aplicar la corriente elctrica que ocurra un flujo del lquido dentro

mercaptoetanol o ditiotreitol para romper los puentes disulfuro de

del canal electrofortico. Este fenmeno es lo que se conoce

las protenas.

como actividad endosmtica y puede causar problemas en las

separaciones electroforticas.

Las

dos

aplicaciones

principales

de

la

electroforesis

discontinua son la determinacin de la pureza de protenas y el

anlisis de los componentes de una mezcla. La electroforesis en

SOLUCIONES

gel de poliacrilamida en presencia de SDS tambin se ha

Una solucin es una mezcla homognea de por lo menos dos

empleado en la determinacin de los pesos moleculares de

protenas.

componentes: una fase dispersa, que es el soluto (sustancia que

se disuelve), y una dispersora que constituye el solvente o
disolvente (la sustancia

que

disuelve al soluto)

y que,

Electroenfoque. Si se coloca una protena en un gradiente de

pH sujeto a un campo elctrico, se mover hasta alcanzar su

generalmente, se encuentra en mayor proporcin. Las soluciones

ms utilizadas en bioqumica son las que tienen agua como

punto isoelctrico, donde permanecer sin moverse. Esta tcnica

solvente.

es lo que se conoce como electroenfoque. Para formar un

gradiente estable y continuo de pH se usan anfolitos sintticos de

La solubilidad de un soluto en un solvente depende de la

una gran variedad de pesos moleculares y rangos de pH. Cuando

naturaleza de stos, de la temperatura y, en el caso de un gas,

se establece el campo elctrico, los anfolitos migran y generan el

gradiente de pH segn sus propios puntos isoelctricos. Esta

de la presin. La solubilidad generalmente est dada en gramos

de soluto por 100 g de solvente.

tcnica ha sido utilizada en combinacin con la separacin por

25

Se llaman soluciones diluidas las que contienen una

llaman

Solucin porcentual p/p. Solucin al 10% de NaCl contiene 10

soluciones concentradas las que contienen una gran cantidad de

soluto. Slo son posibles soluciones concentradas cuando el

g de la sal por 100 g de solucin. El peso/peso porcentual

expresa el nmero de gramos del soluto en 100 gramos de la

soluto es muy soluble.

solucin final.

proporcin

relativamente

pequea

de

soluto;

se

Una solucin saturada contiene la cantidad de soluto disuelto

%p/p = g de soluto x 100

necesaria para la existencia de un equilibrio entre las molculas

100 g de solucin

disueltas y las molculas en exceso que no estn disueltas. Esta

solucin se forma por medio de una vigorosa agitacin con

Solucin porcentual p/v. Solucin de NaCl a 10% p/v: 10 g de

exceso de soluto. Existe una solucin sobresaturada cuando en

NaCl en 100 ml de solucin. Esto expresa el nmero de gramos

la solucin hay presente ms soluto que en una solucin

saturada. Para prepararla se forma una solucin saturada a

de soluto en 100 ml de la solucin final. En bioqumica, si no se

especifica otra situacin, las soluciones porcentuales deben

temperatura elevada y se enfra cuidadosamente para evitar la

entenderse como p/v.

cristalizacin. Las soluciones sobresaturadas son inestables y

con facilidad se convierten en soluciones saturadas.
Las mencionadas soluciones son poco precisas y no indican,
de manera cuantitativa, el soluto ni el solvente; los mtodos
cuantitativos ms comunes, que sirven para expresar

la

concentracin (la medida numrica de la cantidad relativa de

soluto en la solucin) de las soluciones, son las porcentuales, las
molares y las normales.
Soluciones porcentuales

En las soluciones porcentuales no se toma en cuenta el peso

frmula del soluto. En este tipo de soluciones se debe especificar
si la relacin es peso a peso (p/p), peso a volumen (p/v) o
volumen a volumen (v/v). Ejemplos:

%p/p = g de soluto

x 100

100 ml de solucin
Solucin porcentual v/v. Se utiliza cuando el soluto y el
solvente son lquidos. El v/v indica el nmero de volmenes de
soluto por 100 volmenes de solucin. Solucin de etanol a 30%
v/v: 30 ml de ste en 100 ml de solucin. Esto quiere decir que
por cada 100 ml de solucin, 30 ml corresponden al soluto y el
resto, hasta completar 100 ml, al agua destilada o al solvente
empleado.
%v/v = volumen de soluto

x 100

100 volmenes de solucin

Es importante insistir que los trminos porcentuales expresan
siempre una relacin, es decir, podemos variar los volmenes
26

siempre y cuando no perdamos dicha relacin. Por ejemplo, si

Resultado: necesitamos 10.41 ml de alcohol de 96% y completar

nos pidieran preparar 50 ml de una solucin de alcohol etlico a

con agua destilada hasta un volumen final de 50 ml.

20%, seguiramos el siguiente planteamiento:

Soluciones molares

100 ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro

50 ml de sol. tienen x ml de alcohol puro

Una solucin molar se define como el nmero de moles de

soluto en un litro de solucin:

X = 20 x 50 x 10

M= No. de moles

100
Resultado: necesitamos 10 ml de alcohol puro y completar un

litro de solucin

volumen de 50 ml.

donde un mol es igual al peso atmico o molecular expresado en

El alcohol etlico comn es de 96% de pureza (v/v). Por lo

tanto, si no contamos con alcohol puro y quisiramos preparar

gramos (tomo gramo o molcula gramo). Un mol contiene el

23
nmero de Avogadro (6.023x10 ) de partculas, tomos o

una solucin de alcohol a 20%, seguiramos el siguiente

molculas.

planteamiento:

Si un mol de una sustancia se disuelve en agua hasta un

100 ml de sol. tienen 96 ml de alcohol puro

volumen de un litro, se obtiene una solucin 1 molar (1M).

X ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro

Por ejemplo, si quisiramos preparar una solucin 1 molar de
X= 20 x 100 = ml de solucin
96
Resultado: necesitamos 20.83 ml de solucin de alcohol

NaCl, tendramos que considerar, primero, su peso molecular

(Na: 23 + Cl: 35.5 = 58.5) y este valor en gramos disolverlo en
agua, hasta completar un litro.

a 96% y completar un volumen de 100 ml.

Si tan slo queremos 50 ml de esta nueva solucin,
entonces:
100 ml de sol. de alcohol a 20% tienen 20.83 ml de alcohol a
96%
50 ml de sol. de alcohol a 20% tienen X ml de alcohol a 96%
X= 50 x 20.83 = 10.41ml

Ahora bien, si nos piden preparar 400 ml de una solucin

0.5 M de NaCl: cuntos gramos de NaCl deben pesarse?
1. Sabemos que un mol de NaCl es de 58.5 g.
2. Haremos el siguiente planteamiento:
Una sol. 1M tiene 58.5g de NaCl.
Una sol. 0.5M tiene X g de NaCl.

100
27

Soluciones normales

X= 0.5 x 58.5 = 29.25 g de NaCl

100
3. De acuerdo con la definicin de solucin molar, los 29.25 g de
NaCl los consideramos en un litro de solucin, pero como nos
piden preparar 400 ml haremos el siguiente planteamiento:

Son las que contienen el peso equivalente de una sustancia en

gramos por litro de solucin:

En 1000 ml de sol. hay: 29.25g de NaCl

En 400 ml de sol. hay: X g de NaCl

N = peso equivalente
litro de solucin

X= 400 x 29.25 = 11.7 g de NaCl

1000

donde el peso equivalente de una sustancia es el nmero de

unidades de esta sustancia que puede combinarse con una

Resultado: necesitamos 11.7 g de NaCl y disolverlo hasta

completar un volumen de 400 ml

unidad de hidrgeno:

Peso equivalente = peso molecular

En este ejemplo, cmo podemos ver, hemos multiplicado la
molaridad del problema (0.5 mol/L) por el peso molecular de NaCl
(58.5

g)

por

el

volumen

del

V x PM x M = gramos de la sustancia
1000
En donde:
V=
Volumen del problema en ml.
PM =

Peso molecular de la sustancia en g.

M=

Molaridad del problema.

n = nmero de hidrgenos sustituibles.

pro-

blema (400 ml). Posteriormente dividiremos entre 1 litro (1 000

ml). Para simplificar el procedimiento podemos aplicar la
siguiente frmula:

Ejemplo: el peso equivalente de un cido se calcula dividiendo

el peso molecular entre el nmero de tomos de hidrgeno
sustituibles en la molcula. El cido sulfrico (H2SO4), de peso
molecular 98, tiene dos tomos de hidrgeno sustituibles en cada
molcula; por lo tanto, su peso equivalente es: 98/2 = 49.
El peso equivalente de un hidrxido se calcula dividiendo el

peso molecular entre el nmero de grupos hidroxilo (OH ) de la

molcula. El hidrxido de aluminio Al (OH)3 contiene tres grupos

OH por molcula; su peso molecular es de 78; por lo tanto, su

peso equivalente es 78/3 = 26.

28

El peso equivalente de una sal se calcula dividiendo el peso

Resultado: necesitamos 1.67 g de CaCl2 para preparar

molecular entre la valencia total de los cationes (cargas positivas)

300 ml de una solucin 0.1 N.

que contenga la frmula. La valencia del sodio es 1, y el sulfato

de sodio Na2SO4 (peso molecular 144) tiene dos iones de sodio

Soluciones osmolares

en cada molcula; por lo tanto, el peso equivalente del sulfato de

sodio ser 144/2 = 72.
El peso equivalente de un oxidante (reductor) se calcula
dividiendo el peso molecular entre el nmero de electrones
ganados (o perdidos) que puedan aportar por molcula.
Recordemos la frmula utilizada para calcular la cantidad de
sustancia necesaria para preparar cualquier cantidad de una
solucin determinada:
Para calcular la cantidad de una sustancia que se necesita pesar
para preparar un volumen determinado de una solucin de
cualquier normalidad, se aplica una frmula semejante:
V x Eq x N = gramos de la sustancia

El fenmeno de la smosis se presenta cuando una solucin

est separada de su solvente por una membrana semipermeable.
La smosis es la difusin de solvente a travs de la membrana
desde la parte de menor a la de mayor concentracin. La presin
osmtica es la presin que debe aplicarse sobre la solucin de
mayor concentracin a fin de impedir el paso del solvente
(smosis) a travs de la membrana.
Las membranas biolgicas tienen permeabilidades distintas y
se dice que son semipermeables, es decir, que son permeables
de forma selectiva para las molculas del solvente o pequeas
molculas, pero no permiten el paso libre de todas las molculas
disueltas.

1000
Ejemplo: preparar una solucin 0.1 N de cloruro de calcio
(CaCl2) para obtener un volumen de 300 ml:
V =

300 ml

N =
Eq =

0.1
peso molecular del CaCl2 111/2 = 55.5

Sustituyendo= 300 ml x 55.5 g x 0.01 N= 1.67

1000

Las mediciones cuantitativas demuestran que la presin

osmtica es proporcional a la concentracin molar (para
sustancias no disociables) del soluto, por lo que una solucin
osmolar es aquella que contiene un mol de la sustancia en
gramos en un litro de solucin; el osmol es una medida del
nmero total de partculas en solucin. La concentracin
expresada en osmol por litro se llama osmolaridad; el osmol por
kilogramo de disolvente se denomina osmolalidad; en las
soluciones muy diluidas, como son las del cuerpo humano, las
dos medidas son tan cercanas que con gran frecuencia se utilizan
indistintamente.
29

La presin osmtica depende del nmero de partculas y no de

Soluciones isotnicas

su carga, ni de su masa; la misma fuerza osmtica es ejercida

por una molcula grande, como una protena, con peso molecular
de varios miles y muchas cargas, como por una molcula de
+

Las soluciones isotnicas con respecto unas a otras ejercen la

misma presin osmtica; es decir, contienen la misma

glucosa o un ion de Na o de Cl . As para determinar el efecto

concentracin de partculas osmticamente activas. Cuando se

osmtico de una solucin hay que sumar los efectos de todas las
partculas
incapaces
de
atravesar
la
membrana

habla
de
soluciones
isotnicas
en
el laboratorio, suele tratarse de las que tienen la misma presin

independientemente de su peso molecular.

osmtica que el plasma sanguneo, que es aproximadamente de

Por ejemplo: el cloruro de sodio en solucin acuosa se disocia

+

casi completamente en iones sodio (Na ) y cloruro (Cl ). Por lo

tanto, cada molcula da origen a dos partculas osmticamente
activas, y una solucin osmolar contiene media molcula gramo
(peso molecular expresado en gramos) por litro, o sea:
1 osm/l = 58.5/2 = 29.25 g/l tambin
1 mol de NaCl = 2 osm/l
En cambio, la glucosa en solucin no se disocia y para
esta sustancia la solucin osmolar contiene un mol en gramos por
litro:
1 mol de glucosa = 180 g/l = 1 osm/l
La mayora de los lquidos corporales tiene una presin
osmtica que concuerda con la de una solucin de cloruro de
sodio a 0.9 % y se dice que esta solucin es isosmtica con los
lquidos fisiolgicos.

0.3 osmolar (300 miliosmoles). Las soluciones fisiolgicas de

concentracin menor a 300 mosm/l se llaman hipotnicas;
cuando su concentracin es mayor de 300 mosm/l se denominan
hipertnicas.
Una solucin es isotnica con respecto a una clula viva
cuando no ocurre ganancia ni prdida neta de agua en la clula,
ni se produce ningn otro cambio en sta cuando entra en
contacto con la solucin.
El trmino isotnico, que significa: igualdad de tono, se emplea
en medicina como sinnimo de isosmtico; pero los trminos
isotnico y tonicidad slo deben emplearse en relacin con un
lquido fisiolgico. Por ejemplo, una solucin de cido brico que
es isosmtica con la sangre y el lquido lagrimal, slo es isotnica
con el lquido lagrimal, ya que esta solucin ocasiona hemlisis
de los eritrocitos porque las molculas de cido brico atraviesan
libremente la membrana eritrocitaria a cualquier concentracin.
En consecuencia, isotonicidad connota compatibilidad fisiolgica,
mientras que isoosmoticidad, no necesariamente. En otras
palabras, la tonicidad es una fraccin de la presin osmtica total
de la solucin; por tanto, la tonicidad de una solucin no se puede

30

predecir nicamente por su composicin ya que intervienen

tambin las propiedades distintivas de la membrana limitante.
Clculo y expresin de diluciones

Ejemplo: hacer una dilucin seriada 1:2, 1:4, 1:8, etctera, a un

volumen final de 1 ml.
Paso 1: a 0.5 ml de la solucin a diluir, aadirle 0.5 ml del
diluyente y etiquetarlo como tubo 1 (dilucin 1:2, volumen 1 ml).

La dilucin consiste en preparar una solucin menos

concentrada a partir de una solucin inicial ms concentrada. Las
diluciones se expresan usualmente como una razn matemtica,
como 1:10. Esto significa una unidad de solucin original diluida a
un volumen final de 10, esto es, 1 volumen de solucin original
con 9 volmenes de solvente (volumen final = 10).
Para calcular la concentracin de la solucin diluida se
multiplica la concentracin de la solucin original por la dilucin
expresada como fraccin.
Ejemplo: una solucin de 300 mg/100 ml se diluye en la
razn 1:10. La concentracin de la solucin final es:
300 x 1/10 = 30 mg /100 ml.
Si se hace ms de una dilucin, a partir de una misma
solucin, la concentracin de la solucin final se obtiene al
multiplicar la concentracin original por el producto de las
diluciones. Ejemplo: la solucin anterior se diluye a su vez en la
razn 1:100. La concentracin de la solucin ser: 300 x 1/10 x
1/100 = 0.3 mg/100 ml.
La dilucin y redilucin sistemticas de una solucin se llaman
diluciones seriadas. Para encontrar la concentracin en un tubo
dado de la serie, se multiplica la dilucin en ese tubo por cada
una de las diluciones precedentes, incluida la del tubo original.

Paso 2: transferir a otro tubo 0.5 ml de la dilucin anterior

y agregarle 0.5 ml de diluyente (dilucin 1:2). La dilucin final
obtenida se calcula al multiplicar la dilucin del tubo 1 (o anterior)
con la nueva dilucin (1/2 x 1/2), igual a 1:4. Los pasos siguientes
se hacen igual que para el paso 2. En el siguiente cuadro se
muestra un resumen de lo anterior.

Tubo

Dilucin

1. 0.5 ml(1)
= 0.5 ml (1) = 1:2(4)
0.5 ml (1) + 0.5 ml (2)
1 ml (3)
2. 0.5 ml(5)

= 0.5 ml (1) = 1:4 (4)

0.5 ml (5) + 0.5 ml (2)

1 ml (3)

es decir:

1/2 x 1/2

= 1:4

3.

1/4 x 1/2

= 1:8

4.

1/8 x 1/2

= 1:16

5.

1/16 x 1/2

= 1:32

(1) Volumen de la solucin original a diluir.

(2) Volumen del agua necesaria para la dilucin.
(3) Volumen final.
(4) Dilucin obtenida.
(5) Volumen de la solucin diluida 1:2 (o anterior).

31

MANEJO DE MATERIAL BIOLGICO

Se le llama material biolgico al conjunto de seres vivos o sus
productos utilizado en el desarrollo del trabajo en el laboratorio.
La utilidad e importancia de este material es muy grande ya que
muchos fenmenos de los seres vivos slo pueden estudiarse en
ellos mismos, por ejemplo, la experimentacin de nuevos
frmacos o los mecanismos que se presentan en entidades
patolgicas y la produccin de las mismas en forma experimental.
Del correcto manejo depender en gran parte el xito de la
experimentacin y la veracidad de los resultados obtenidos. A
continuacin se darn algunas generalidades sobre el manejo del
material biolgico utilizado en las prcticas de este Manual.
Animales

aguja de la jeringa formando un ngulo de 10 con la pared

abdominal en el cuadrante inferior izquierdo, ligeramente a la
izquierda de la lnea media; es importante mantener el ngulo de
la aguja porque, si ste se abre, la aguja puede llegar a la vejiga
o al intestino. Para tener la seguridad de estar en la cavidad
peritoneal, hay que jalar el mbolo de la jeringa para que se haga
el vaco; si el vaco no se hace y, por el contrario, se extrae
lquido, es probable que se haya puncionado la vejiga.
Para la extraccin de vsceras, como el hgado, es necesario
sacrificar al animal, lo cual se logra fcilmente y con menor
sufrimiento para la rata anestesindola o descerebrndola, o
sea, seccionando la mdula espinal a nivel del cuello mediante un
golpe certero en este lugar contra el borde de una mesa.
Despus se prosigue a la extraccin de la vscera y se abre la
pared abdominal con unas tijeras o bistur.

El animal utilizado ms comnmente en el laboratorio de

bioqumica es la rata. Para su correcto manejo es importante la
forma cmo se sujeta, lo cual se har con firmeza, pero a la vez,
en forma suave para no lesionarla; no debe demostrrsele miedo
o repugnancia para evitar que se ponga nerviosa e intranquila, lo
que puede ocasionar que muerda.
La palma de la mano se coloca sobre el dorso del animal; la
cabeza de ste entre el dedo pulgar y el dedo ndice; de esta
manera se logra su inmovilidad y es posible levantar el animal y
moverlo de lugar.
Muchas veces es necesaria la inyeccin intraperitoneal de
alguna sustancia, para lo cual se sostendr al animal con una
mano, como se indic antes, mientras con la otra se introduce la

Extraccin de sangre para anlisis

El profesor a cargo del grupo deber estar presente en el
momento de la extraccin; de lo contrario, por ningn motivo, el
alumno podr hacerla por su cuenta.
Procedimiento para obtener una muestra de sangre venosa:
1. Para que un alumno sea considerado como voluntario
debern tomarse en cuenta algunos antecedentes como: no
padecer o haber padecido hepatitis o alguna otra enfermedad
infectocontagiosa; no tener problemas de coagulacin y no ser
muy aprensivo. El donador (de preferencia con las venas
visibles), estar sentado con el brazo sobre la mesa.

32

2. Con una ligadura elstica, aplicar un torniquete en el brazo

6. Mantener la presin por un momento o hasta que se haya

por encima del sitio de la puncin (esto causa congestin

detenido el sangrado. Cubrir la puncin con una cinta

venosa y evita el retorno de la sangre). El uso prolongado del

torniquete causa estasis de la sangre y hemoconcentracin. Si

adhesiva.
7. Retirar la aguja de la jeringa en el contenedor de

las venas no se hacen prominentes, pedir al donador que

punzocortantes y vaciar lo ms pronto posible la muestra de

cierre y abra la mano varias veces. Escoger una vena fija y de

buen calibre, localizarla y palparla con el dedo para sentir su

sangre en un tubo de centrfuga procurando deslizar la sangre

suavemente por la pared del tubo (si es que no se utiliz el

consistencia y trayectoria; antes de puncionar, asegurarse de

sistema Vacutainer).

que la jeringa no contenga aire y que el mbolo se deslice

suavemente. Las dimensiones de la aguja y la jeringa
dependen de la cantidad de sangre que se necesita as como
del tamao e integridad de la vena que se usa. Tambin se
puede usar el sistema Vacutainer que consiste en un tubo al
vaco, un mango y una aguja recolectora de muestras
mltiples.
3. Limpiar minuciosamente la zona con una torunda humedecida
con alcohol de 70 y dejar secar espontneamente. Sujetar la
piel con el pulgar izquierdo; puncionar primero la piel y luego
penetrar la vena con el bisel de la aguja hacia arriba siguiendo
el trayecto de la vena.
4. Despus que se ha entrado a la vena, la sangre llenar los
tubos vacos del sistema Vacutainer. Si se usa jeringa, se
necesita una ligera succin con sta para obtener la muestra
(por lo general, aparece una gota de sangre en la base de la
aguja). Una succin excesiva puede causar colapso de la
vena. Tirar del mbolo de la jeringa hasta que se haya
extrado la cantidad de sangre deseada.
5. Soltar la ligadura antes de extraer la aguja con un movimiento
rpido y uniforme mientras que se ejerce una presin sobre la
herida con una torunda.

Alerta clnica
Si es difcil detener el sangrado de la puncin, elevar la zona y
aplicar una cubierta que presione. Los hematomas se pueden
evitar:
Usando una buena tcnica.
Aflojando el torniquete antes de retirar la aguja.
Aplicando la presin suficiente sobre el sitio de puncin
despus de completar el procedimiento.
La sangre obtenida puede tratarse de diferentes maneras
segn el empleo que se le vaya a dar.
Para obtener suero. La sangre se recibe en un tubo de ensayo
o de centrfuga seco y se deja coagular a temperatura ambiente o
en una estufa o bao de agua a 37 C. Si se va a trabajar
inmediatamente con el suero, separar con un aplicador de
madera el cogulo y centrifugar el resto del tubo. Si se desea la
separacin espontnea del suero, se deja a temperatura
ambiente por unas horas para que el cogulo se retraiga. Debe
evitarse que el suero se mezcle con porciones de cogulo; si esto
sucede, es necesario centrifugar y volver a separar el suero con
una pipeta Pasteur.
33

clasificacin, manejo y disposicin final de estas sustancias, lo

Para obtener plasma. Hay que evitar la coagulacin por medio

cual nos permite identificar los peligros y disminuir los riesgos.

de un anticoagulante (heparina, citrato de sodio o EDTA) en el

tubo que recibe la sangre.

Manejo de materiales peligrosos y/o biolgico infecciosos

Mezclar suavemente por inversin. Centrifugar a 2 500 rpm

durante 5 minutos y extraer enseguida el plasma sobrenadante
con una pipeta Pasteur; pasarlo a otro tubo.

La sangre, el plasma o el suero y todos los recipientes que los

contengan deben considerarse como material potencialmente
infectante, por lo que (torundas, agujas, tubos, etctera) debern
depositarse, de acuerdo a su clasificacin, en envases que
tengan impreso el smbolo de riesgo biolgico y entregarse a la
coordinacin del laboratorio para su desinfeccin y desecho.

Precauciones generales: Se refieren a las medidas para

minimizar la difusin de enfermedades transmisibles,
especialmente hepatitis B o SIDA y para evitar incendios,
cortaduras o exposiciones simples, de corta duracin o
accidentales a sustancias qumicas peligrosas.

1. Manejar cualquier lquido corporal, sangre, plasma, suero,

orina,

tejido,

cadver

cultivo

como

potencialmente

infeccioso. Todas las sustancias qumicas proporcionadas,

equipos y materiales del laboratorio debern ser utilizados con
el mximo cuidado, atendiendo a las indicaciones de
peligrosidad y cuidados especficos, segn el caso.

MEDIDAS DE SEGURIDAD
Durante el desarrollo del curso de bioqumica, en el laboratorio
se pueden llegar a utilizar sustancias o muestras biolgicas que,
en ocasiones representan riesgos potenciales a la salud, debido a
que pueden ser: corrosivas, reactivas, explosivas, txicas,
inflamables o biolgico infecciosas.

2. Se debe conocer los smbolos y los cdigos de color sobre las

precauciones y los peligros en el laboratorio. Asegurarse de
conocer la localizacin de extinguidores, del botiqun y de las
salidas de emergencia.
3. Usar bata en el laboratorio, la cual deber estar cerrada
durante todo el tiempo que se permanezca en el laboratorio.
4. Lavar las manos y usar guantes. Los guantes deben usarse

Aunque los laboratorios se consideran en general lugares de

para efectuar punciones vasculares y para manipular sangre,

trabajo seguros, esto es as slo cuando conocemos y seguimos

lquidos corporales, cultivos de microorganismos, sustancias o

superficies contaminadas. Despus del uso de cualquier

las normas de seguridad existentes en la materia acerca de la

material biolgico, se procede al lavado de manos con los

34

guantes puestos. Despus de quitarse los guantes debemos

lquidos en ebullicin o material de reaccin hacia el vecino, o

lavarnos nuevamente las manos.

a s mismo, ya que puede proyectarse el contenido; para las

5. Todos los materiales desechables y no desechables se deben

descontaminar en una solucin 1:10 de hipoclorito de sodio de
4 a 7 % de concentracin, durante ms de 20 minutos antes
de ser desechados.
6. Los elementos punzocortantes deben desecharse en
recipientes especiales destinados para ello, los cuales deben
estar etiquetados con la leyenda que indique "Peligro,
residuos punzocortantes biolgico-infecciosos" y marcados
con el smbolo universal de riesgo biolgico. Nunca
reencapuchar las agujas
7. Limpiar las superficies potencialmente contaminadas con
hipoclorito de sodio al 1%, con alcohol al 70% o con agua
oxigenada.
8. Todas las sustancias qumicas son potencialmente txicas y
peligrosas, por lo que se deber:
a) Conocer las propiedades (venenosas, custicas o corrosivas)
y el uso correcto de las mismas.
b) Nunca probar, as como tampoco inhalar, directamente las

sustancias que no tienen un efecto pronunciado sobre la piel,

pero cuya ingestin es peligrosa, evitar la contaminacin de
alimentos, cigarros o manos que despus se llevarn a la
boca o con las que se tocarn alimentos (nunca ingerir
alimentos en el laboratorio). Por ltimo, nunca pipetear con la
boca, especialmente los cidos fuertes, productos custicos,
oxidantes fuertes y compuestos venenosos.
9. Seguir las indicaciones del profesor y del personal a cargo del
rea de prcticas. Es una regla de laboratorio que todos los
accidentes personales, por triviales que sean, se comuniquen
inmediatamente al profesor. Nunca realizar actividades
experimentales sin la supervisin del responsable del grupo.
10. Manejar adecuadamente los residuos peligrosos derivados de
las prcticas, identifique su nivel de riesgo y el mecanismo
para su desecho. Queda prohibido desechar sustancias a la
tarja o por cualquier otro medio, sin autorizacin del
responsable del grupo. Las hojas de seguridad
correspondientes incluyen qu hacer en caso de accidentes y
la forma correcta de desechar los residuos.

sustancias. Para determinar el olor se acerca la tapa del

frasco cuidadosamente a la nariz, o bien, si se trata de

11. Indicaciones generales para evitar incendios o explosiones al

sustancias voltiles o vapores acercar stos con la mano a la

(alcohol, ter, cloroformo, acetona, tolueno, xilol, etctera) se

utilizan en todos los laboratorios, por lo que se recomiendan

nariz.
c) Evitar el contacto de sustancias con la piel, especialmente la
cara; usar bata y guantes para proteger la ropa y el cuerpo;
nunca dirigir un tubo de ensayo o la boca de un matraz con

utilizar solventes inflamables. Los solventes inflamables

las siguientes precauciones:

a) No fumar en el interior del laboratorio.

35

b) No utilizar la llama del mechero sin cerciorarse de que no hay

cerca

lquidos

inflamables.

No

mantener

el

mechero

encendido cuando est fuera de uso.

presin en un punto ms arriba la herida o antes de ella (no

mantener la presin por ms de 5 minutos).
10. Casi siempre, los choques elctricos en el laboratorio son de

c) Si se vierten accidentalmente sobre las mesas, secar de

poca importancia; las precauciones de seguridad se deducen

inmediato con un trapo hmedo y enjuagar ste en el chorro

de agua, exprimindolo.

de la naturaleza del peligro. Nunca tocar un aparato elctrico

con las manos hmedas o cuando se est parado sobre un

d) Nunca calentar un lquido orgnico sobre una flama. Para

calentar, usar bao de agua o parrilla elctrica.
En caso de incendio debe hacerse lo siguiente: para un
incendio pequeo en un vaso, un matraz, etctera, ste se
cubrir con un recipiente mayor o se ahogar el fuego con un
trapo mojado o se combatir con un extinguidor.

Cuando el fuego sea de un solvente derramado sobre la

mesa o el piso, se utilizar un extinguidor de bixido de carbono.

piso hmedo. Siempre apagar y desconectar los aparatos

antes de cualquier manipulacin.
Pictogramas de seguridad
En las etiquetas de productos qumicos de uso en el
laboratorio adems de la identificacin del contenido, calidad y
lmite de pureza de lo que contiene, podemos encontrar
pictogramas
(smbolos
internacionalmente aceptados
y
reconocidos) que indican los riesgos principales. Los pictogramas
de seguridad son:

Si el fuego no puede vencerse de inmediato, se evacuar el

laboratorio y se avisar al departamento contra incendios de la
institucin.
12. Los accidentes ms frecuentes que ocurren en el laboratorio
son las lesiones debidas a cortes, laceraciones, etctera, por

RIESGO BIOLGICO

cristalera rota.
En caso de heridas pequeas dejar que sangre unos
segundos; tener cuidado de no dejar partculas de vidrio en la
herida y aplicar un desinfectante.
Las heridas de mayor importancia deben ser atendidas
por un mdico. Mientras tanto, evitar el sangrado aplicando

Todo aquello que pueda contener bacterias, virus u otros

microorganismos con capacidad de infeccin o cuando contiene
toxinas producidas por microorganismos que causen efectos
nocivos a los seres vivos. Ejemplo: jeringas, sangre.

36

Medidas de prevencin: evitar el contacto con los ojos, la piel y

las vas respiratorias. Utilizar elementos de proteccin personal.

combustibles

inflamables

avivan

la

reaccin

pudiendo

desarrollar reacciones violentas. Ejemplo: nitrito de sodio,

hiposulfito de sodio.

E = EXPLOSIVO

Medidas de prevencin: mantener alejadas de las sustancias

combustibles o inflamables, ya que pueden favorecer los
incendios y dificultar su extincin.

Es toda sustancia slida o lquida o mezcla de sustancias

que pueden desprender gases a una temperatura, presin y
velocidad tales que pueden detonar, producir violentas

Xn = NOCIVO

deflagraciones, o explotar al exponerse al calor cuando estn

parcialmente confinadas. Ejemplo: azida de plomo, fluoruro de
carbono.
Medidas de prevencin: almacenarlas alejadas de otros
productos, evitar todo choque, friccin y mantener alejadas de
fuentes de calor, chispas o fuego.

Sustancias de menor toxicidad pero pueden causar daos a la

salud. Tambin se incluyen aquellas mezclas o preparados que
tienen alguna sustancia que puede ser txica pero que se
encuentra a una baja concentracin en la mezcla.

Xi = IRRITANTE
O = OXIDANTE

Sustancias que pueden causar irritacin a la piel, mucosas, o

los ojos, por contacto inmediato, prolongado o repetido, pudiendo

Sustancias capaces de aportar oxgeno cuando reaccionan

con otra sustancia, por lo que cuando entran en contacto con

tambin provocar inflamacin. Ejemplo:

hipoclorito de sodio, aminoantipirina.

cloroformo,

SDS,

37

Medidas de prevencin: evitar el contacto con los ojos, la piel y

las vas respiratorias. Utilizar elementos de proteccin personal.

Medidas de prevencin: evitar que los derrames alcancen los

desages, tratar los residuos en condiciones ambientalmente
adecuadas.

F+ = EXTREMADAMENTE INFLAMABLE
Sustancias cuyo punto de ignicin es menor de 0C y su punto de
ebullicin mximo de 35C.

T+ = ALTAMENTE TXICO, T TXICO

F = INFLAMABLE

Sustancias que pueden causar dao en forma aguda o crnica

Sustancias lquidas cuyo punto de ignicin es menor a 40C.

Ejemplo: etanol, tolueno, ter dietlico.
Medidas de prevencin: mantener alejado de fuentes de
calor,

de

ignicin

eventuales

chispas,

de

materiales

combustibles y oxidantes.

a la salud o causar la muerte si son inhaladas, ingeridas o se

absorben por la piel, an en pequeas cantidades. Ejemplo: azida
de sodio, dinitrofenol, bromuro de etidio.
Medidas de prevencin: evitar todo contacto directo. Utilizar
elementos de proteccin personal. Emplear estrictas medidas de
higiene personal y del ambiente del laboratorio.

N = NOCIVO PARA EL MEDIO AMBIENTE

Aquellas sustancias o preparados que cuando son liberados al

C = CORROSIVO

medio ambiente pueden presentar un efecto inmediato o diferido,

Sustancias capaces de atacar y destruir los tejidos orgnicos si

poniendo en peligro a alguna especie. Ejemplo: tiourea, otoluidina.

entran en contacto con ellos o bien atacar ciertos metales o

materiales. Ejemplo: hidrxido de sodio, cido clorhdrico, cido
actico.

38

Medidas de prevencin: evitar el contacto con los ojos, la piel y

las vas respiratorias. Utilizar elementos de proteccin personal.
Identificacin sobre los riesgos especficos y los consejos
de prudencia

tener en cuenta en el almacenamiento y en caso de emergencias,

de derrames o salpicaduras.
La informacin se presenta por medio de una estructura
espacial en forma de rombo principal, dividido a su vez en otros
cuatro.

Frases "R" stas advierten

acerca del riesgo ms comn

asignado a esa sustancia qumica, por medio de la enumeracin

El rombo azul a la izquierda identifica el riesgo para la salud. El

de riesgos especficos en frases cortas que son adaptables a las

distintas sustancias.

rombo rojo en la parte superior indica el riesgo por inflamabilidad.

Las frases "S" brindan los consejos de prudencia o las

medidas de prevencin ms importantes relacionadas con el

o inestabilidad. El rombo blanco en la parte inferior indica riesgos

especiales tales como: W reactivo al agua, COR corrosivo, AIR

riesgo asignado a esa sustancia qumica y que permitirn su

reactivo al aire, OXY oxidante. Ejemplo:

El rombo amarillo a la derecha seala el riesgo por reactividad

manipulacin y almacenamiento en forma segura. En algunos

casos se mencionan combinaciones de frases R o de frases S,
cuando dos o ms riesgos tienen relacin entre s (cuadro I.6).
El smbolo de la N.F.P.A. (National Fire Protection

Association)

C
o
n

El smbolo de la N.F.P.A. es un sistema de identificacin de

riesgos de un producto qumico, en tres categoras principales:
"salud", "inflamabilidad" y "reactividad" indicando el grado de
cido clorhdrico

severidad por medio de una escala numrica desde (4) que indica
el riesgo mayor, (3) riesgo severo, (2) riesgo moderado, (1) riesgo
menor, hasta (0) que representa ausencia de riesgo.
Este smbolo es til para alertar acerca del riesgo de ese
producto y, a su vez, puede ayudar a determinar los cuidados a

Hojas de seguridad
Cada prctica cuenta con las hojas de seguridad para cada
reactivo o sustancia que se utilice en el laboratorio.

39

Las hojas de seguridad proveen informacin sobre (cuadro I.7,

pg. 100):
Los componentes de un producto, su reactividad, las medidas
precautorias principales o las advertencias ms importantes.
Los elementos de proteccin personal que se recomienda
emplear en la manipulacin.
Las vas de ingreso y los rganos blanco.
Las medidas por derrame accidental y de primeros auxilios.
La informacin toxicolgica.
Las recomendaciones para su almacenamiento.
Las condiciones para la disposicin de los residuos.

Residuos especiales CRETI: son aquellos residuos que

constituyen un peligro para la salud por sus caractersticas
agresivas tales como: Corrosividad, Reactividad, Explosividad,
Toxicidad e Inflamabilidad Es importante no olvidar que, la
mezcla

de

residuos

municipales

con

residuos

biolgico

infecciosos hace que se consideren en su totalidad como

biolgico infecciosos, mientras que la mezcla de residuos
biolgico infecciosos con peligrosos CRETI se deben consideran
como peligrosos CRETI.
Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho.

Clasificacin de los residuos

Los residuos que se generan en laboratorios de instituciones

de enseanza o investigacin as como en hospitales y clnicas
contienen residuos no peligrosos o municipales, residuos
biolgicos infecciosos y residuos especiales.
Residuos peligrosos biolgico infecciosos (RPBI): es todo
aquello que ha entrado en contacto con pacientes o animales,
sus muestras biolgicas y/o cepas de microorganismos, se
clasifican en: sangre, cultivos, patolgicos (tejidos, rganos,
partes y fluidos corporales, etctera), no anatmicos (gasas,
algodones, jeringas, etctera) y punzocortantes (lancetas, agujas,
pipetas Pasteur, etctera).

Los residuos RPBI deben ser envasados de acuerdo con sus

caractersticas fsicas y biolgico infecciosas conforme la norma
oficial mexicana 087-ECOL-95 (cuadro I.8).
Es importante destacar que todos los envases tengan
impreso el smbolo universal de riesgo biolgico y leyendas que
indiquen la peligrosidad de los residuos y el tipo de residuos que
contienen.
Los contenedores para punzocortantes deben de ser:
De color rojo.
De paredes rgidas.
De polipropileno.
Resistentes a fracturas y prdida del contenido al caerse.
Destruibles por mtodos fisicoqumicos.
Esterilizables y con tapa, la que puede tener o no separador de

Residuos municipales: son aquellos que no representan

peligro para la salud y sus caractersticas son similares a los
residuos domsticos comunes.

agujas.
Precauciones: depositar los RPBI, de acuerdo a su
clasificacin, inmediatamente despus de su generacin.
40

en la hoja de seguridad. Las hojas de seguridad sern

No compactar los residuos durante el envasado y no mezclar

proporcionadas para cada prctica en el laboratorio.

residuos de diferente clasificacin.

De manera general, los envases destinados a los residuos
Una vez identificados, separados y envasados correctamente

CRETI deben ser de cristal de color mbar, con capacidad de uno

los residuos peligrosos, el personal responsable del laboratorio se

encargar de su recoleccin, tratamiento y disposicin final as

a cuatro litros, latas de aluminio para solventes (capacidad

mxima de 20 litros) y, en algunos casos recipientes de plstico,

como

desinfeccin,

siempre y cuando las caractersticas fisicoqumicas de la

esterilizacin y limpieza del material y equipo utilizado en el

laboratorio.

sustancia a envasar lo permita. Cada residuo debe envasarse en

forma individual y colocar en el frasco respectivo el pictograma de

de

las

medidas

necesarias

para

la

seguridad correspondiente.
De manera general, los envases destinados a los residuos
CRETI deben ser de cristal de color mbar, con capacidad de uno
a cuatro litros, latas de aluminio para solventes (capacidad
mxima de 20 litros) y, en algunos casos recipientes de plstico,
siempre y cuando las caractersticas fisicoqumicas de la
sustancia a envasar lo permita. Cada residuo debe envasarse en
forma individual y colocar en el frasco respectivo el pictograma de
seguridad correspondiente.
Manejo de residuos CRETI
El manejo, consistente en la separacin, envasado y
almacenamiento de cada uno de los reactivos peligrosos CRETI
utilizados en las prcticas deber realizarse de acuerdo a cada
reactivo en cuestin segn lo indicado en las hojas de seguridad.
El manejo de accidentes, tales como derrames, ingestin o
salpicaduras, as como la aplicacin de primeros auxilios debern
de realizarse de acuerdo al reactivo en cuestin segn lo indicado
41

Frases R
R7

Puede provocar

Frases S
S3

Combinacin de frases

Conservar en sitio fresco

R 20/21

incendios
R 23

Txico por

por la piel
S 20

No comer ni beber durante la manipulacin

R 39/25

inhalacin
R 36

Irrita los ojos

Nocivo por inhlacin y contacto

Txico: peligro de efectos

irreversibles graves por ingestin

S 29

No tirar los residuos por los desages

S 3/7

Mantenga el contenedor bien

cerrado y en un lugar fresco

R 45

Puede ser

S 37

Llevar guantes de proteccin adeacuados

S 36/37/39

cancergeno

Utilice ropa protectora adecuada

guantes y proteccin facil o gafas

Cuadro I.6 Ejemplos de frases S y R

TIPO DE RESIDUO

ESTADO FSICO

ENVASADO

COLOR

Slido
Lquido

Bolsa de plstico
Recipiente hermtico

Rojo

Slidos
Lquidos

Bolsa de plstico
Recipiente hermtico

Rojo

Residuos no anatmicos

Slidos
Lquidos

Bolsa de plstico
Recipiente hermtico

Rojo

Patolgicos

Slidos
Lquidos

Bolsa de plstico
Recipiente hermtico

Amarillo

Slidos

Recipientes rgidos

Rojo

Sangre

Cultivos
y
cepas
agentes infecciosos

Objetos punzocortantes
usados y sin usar

de

Cuadro I.7 Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho.

42

cido clorhdrico
Identificacin
Frmula qumica: HCl
Apariencia y olor: solucin de color ligeramente amarillo o incolora
con olor caracterstico muy penetrante.
Marcaje liqudo corrosivo
Sinnimos: cido muritico, cloruro de hidrgeno.
Generalidades
Est presente en el sistema digestivo de muchos mamiferos y una deficiencia
de ste provoca problemas en la digestin; un exceso provoca lceras
gastricas. La disolucin acuosa grado reactivo contiene aproximadamente
38% de HCl.
Propiedades fsica y qumicas
PM: 36.46
Solubilidad: soluble en agua
pH de disoluciones acuosas: 0.1 (1.0N), 4.0(0.001N).
Reacciona con la mayora de los metales desprendiendo hidrgeno.
Con agentes oxidantes como perxido de hidrogeno genera cloro, el cual es
muy peligroso.
Niveles de toxicidad.
DL50 (oral en conejos): 900 mg/Kg, inhalacin en ratas): 3124 ppm/1 h.
CLMo (concentracin letal minima publicada): (inhalacin en humanos) 1300
ppm/30 min; 3000ppm/5 min.
Riesgos
Produce gas inflamable cuando se encuentra en contacto con metales. Se
generan v apores txicos e irritantes de cloruro de hidrgeno cuando se
calienta.
Inhalacin: elgas causa dificultad para respirar, tos, inflamacin y ulceracin
de nariz, trquea y laringe. Exposiciones severas causan espasmo de la
laringe y edema en los pulmones.
Contaco con los ojos y piel: es un irritante severo de ojos y piel, puede causar
quemaduras serias, dermatitis, reducir la visin o, incluso, la prdida total de
sta.
Ingestin: produce corrosin de las membranas mucosas de la boca, esfago
y estmago, causa nusea, vmito, disfagia, sed intensa y diarrea

Primeros auxilios
Ojos: lavar inmediatamente con agua corriente durante 15 mi nutos.
Piel: quitar ropa y zapatos contaminados, lavar inmediatamente la zona
daada con abundante agua.
Inhalacin: mover a la persona al aire fresco; si se dificulta la respiracin
proporcionar oxigeno y mantenerlo caliente y en reposo, no dar a ingerir
nada.
Ingestin: no provocar vmito y dar a beber agua continuamente, por
ejemplo, una cucharada cada 10 minutos o dar a beber leche de
magnesia.
En todos los casos de exposicin, el afectado debe ser transportado al
hospital tan pronto como sea posible.
Manejo y almacenamiento
Peligro: corrosivo y venenoMantngase en envase de vidrio, en lugares
secos, bien ventilados, alejados de materiales oxidantes y fuentes de
ignicin o calor.
Tratamiento en caso de accidente
Control de fuego: en caso de accidente utilizar CO2, polvo qumico seco
o arena seca. Los extinguidotes de fuego se eligen dependiendo de los
alrededores, ya que el HCl no arde.
Fugas y derrames: ventilar el rea y protegerse con el equipo de
seguridad necesario. Cubrir el derrame con bicarbonato de sodio o una
mezcla de 50:50 de hidroxido de calcio y cal sodada, mezclar
cuidadosamente. Mantener el materil lejos de fuentes de agua y drenajes
hasta no ser neutralizado como se indic anteriormente.
Desechos
Neutralizar las soluciones concentradas de cido clorhdrico con
carbonato de calcio o cal y diluir con agua cuidadosamente. La disolucin
resultante puede verterse al drenaje, con abundante agua. En caso de
soluciones diluidas,

Cuadro I.8 Hoja de seguridad para el cido Clorhdrico

43

PRCTICAS DE LABORATORIO

44

45

Prctica 1

Soluciones
Tiempo de la prctica: 3 horas
Objetivos
Que el alumno:
1. Identifique la existencia de soluciones en los sistemas
biolgicos.
2. Explique los clculos y procedimientos para preparar
soluciones porcentuales, molares y normales, as como las
diferentes diluciones de stas.
3. Que conozca y reconozca algunas de las soluciones
utilizadas en medicina (solucin isotnica, Ringer, Darrow y
Hartman).
Responda a las siguientes preguntas:
1.- Qu es una solucin?
2.- Cuntas clases de soluciones existen?
3.- Qu significan los siguientes trminos: mol, solucin
molar y solucin normal?
4.- Qu significan: v/v, p/v, p/p y ppm?
5.- Cules son los tipos de soluciones que existen in vivo?
Mencionar ejemplos.
6.- Qu es una solucin isotnica?
7.- Qu es una solucin osmolar?

8.- Cmo se calcula la osmolaridad de una solucin?

9.- Qu les pasa a los eritrocitos cuando se ponen en
contacto con soluciones salinas de diferente osmolaridad?
10.- Qu se entiende por dilucin y dilucin seriada de las
soluciones?

INTRODUCCION
Las soluciones son mezclas homogneas de dos o ms
sustancias. La sustancia que se disuelve se llama soluto (la cual se
encuentra en menor cantidad) y el medio en que se disuelve es el
solvente o disolvente (de mayor cantidad). En el ser humano los
solutos se conforman de electrolitos (Na +, K +, Cl-, Ca2+) y de otras
molculas de mayor peso molecular (glucosa, urea, protenas). El
solvente ms importante es el agua siendo el 60% del peso corporal
total. Estos componentes se distribuyen en dos compartimientos
principales, como se muestra en la figura 1.
El cuerpo se mantiene en un equilibrio hdrico, esto significa
que cada uno de los compartimientos tiene las cantidades necesarias
de agua y solutos. Sin embargo cabe recordar que el intercambio de
agua y solutos es continuo entre los compartimientos, a travs de la

46

filtracin, la osmosis y otros procesos fsicos; el volumen del lquido

en cada compartimiento permanece casi constante sin que se pierda
el equilibrio hidroelectroltico.

Figura 2.Se tienen dos soluciones una de menor osmolaridad(A) y una segunda de mayor
osmolaridad (B) separadas por una membrana semipermeable en la cual solo la atraviesan cierta
molculas( ej., electrolitos y agua) los cuales van a permitir que en ambos compartimientos tengan las
misma osmolaridad,

Figura1. Distribucin del agua corporal en el ser humano. El agua corporal total es el 60%, que equivale
a 42 L. El liquido intracelular (LIC) 28L (40% del peso corporal) el liquido extracelular(LEC) 14L (20 %
peso corporal ) del LEC el plasma es 2.8L ( 4% del LEC) y el liquido intersticial 11.2L ( 16% del LEC)

La osmolaridad del plasma sanguneo es de 290-310

mOsm/Ly se puede medir con un osmmetro o calcularse
emplendose la siguiente frmula:

La smosis constituye el medio primario para el

desplazamiento del agua entre el lquido intracelular y el intersticial, y
la concentracin de solutos en ellos determina la direccin en la cual
el agua se va a desplazar.
La osmolaridad de las soluciones refleja la concentracin de
los diferentes solutos disueltos en su disolvente; definiendo
osmolaridad como el nmero de miliosmoles de soluto por
kilogramo de agua.

El nmero 2 de la ecuacin es para tener en cuenta la

ionizacin del sodio y los aniones negativos que lo acompaan. El
nmero 18 es la conversin de la glucosa de mg/dl a miliosmoles ya
que 100 mg /dl de glucosa equivale a 1 miliosmol y un miliosmol de
urea a 28 mg/dl. No obstante el nitrgeno ureico atraviesa la
membrana celular y se podra calcular la osmolaridad efectiva:

47

Para mantener o restablecer el equilibrio hdrico y electroltico de

un individuo, se necesitan determinadas soluciones las cuales se han de
calcular y preparar con precisin, estn van desde el simple suministro
de agua y sal (deshidratacin o quemadura mayor a 2 grado), hasta la
correccin de posibles deficiencias de otros iones, por ejemplo, potasio o
bien aporte de aminocidos o caloras en forma de solucin glucosada
(paciente en terapia intensiva o falla orgnica mltiple). Algunas de estas
soluciones suponen un soporte de lcali para tratar estados de acidosis o
alcalosis. Para poder realizar un clculo adecuado de las soluciones que
necesita se debe considerar los siguientes aspectos:
1.- Existe compartimientos celulares (intracelular y extracelular) y que
en los que se lleva a cabo el intercambio entre ellos para mantener un
equilibrio (homeostasis) integral. Figura 2.

COMPLEXION
Delgado
Promedio
Obeso

AGUA CORPORAL TOTAL (%)

LACTANTE
HOMBRE
80
65
70
60
65
55

Tabla 1. Porcentaje de agua corporal total por gnero y complexin

MUJER
55
50
45

Figura 2. Homeostasis de los lquidos corporales. La ingestin est fluida por la disponibilidad de lquidos
y alimentos, la sed, el hambre. Las velocidades de respiracin y evaporacin y el volumen de orina
influyen en la prdida de agua. El organismo ajusta el volumen de la eliminacin urinaria para compensar
las variaciones de otros tipos de prdida de agua y las variaciones de la ingestin.

2.-El agua corporal total (TBW) depende del porcentaje de masa

muscular y del tejido graso como se muestra en la siguiente tabla.
As es que en un masculino de complexin promedio de 70 kg de
peso:
TBW = (peso Kg) (% agua corporal total)
TBW= (70Kg) (0.60)=42 litros

48

Si 42 litros se tiene de agua corporal total y el volumen de lquido

extracelular corresponde al 40%:
42 litros-------100% del agua corporal total
x----------- 40% del LEC
x=16.8 litros de LEC
3.- En cada compartimiento los electrolitos se distribuyen de manera
diferente esto se debe a su permeabilidad a travs de las membranas
celulares, la presencia de transportadores y canales que su
movimiento. El nmero de solutos determina la distribucin del agua
y la osmolaridad de la solucin. Por ejemplo en el lquido extracelular
(LEC) el sodio representa 90% de las partculas osmoticamente
activas por lo cual si hay cambios en la concentracin del sodio
cambiara la osmolaridad por el movimiento del solvente.
4.- Necesidades de mantenimiento: para que se metabolice una
calora se necesita 1 ml de agua, por lo que las necesidades
calricas y por lo tanto de agua, son proporcionales al peso corporal.
0 a 10 Kg 100 cal/Kg
11 a 20 Kg: 50 cal / Kg adicionadas por cada Kg despus de los 10 Kg
Ms de 20 kg: 20 cal/Kg adicionales por cada Kg despus de los 20 Kg

Entonces las necesidades diarias de agua se calcularan as:

1 a 10 Kg: 100ml/Kg/da (4 ml /Kg/h)
11 a 20 Kg: 1000 ml + 50 ml/Kg/da (2 ml /Kg/hora)
>20 Kg: 1500 ml + 20 ml /Kg /da (1ml /Kg/h adicional)
5.- Existen factores que modifican las necesidades basales de agua
como:

a) Fiebre: por cada grado centgrado que aumente de la

temperatura basal se incrementa 12% las necesidades de
agua.
b) En estados hipometablicos como en el estado de coma las
necesidades de agua disminuyen en 20%.
6. La osmolaridad de los compartimientos depende de los electrolitos
ms abundantes disueltos. La osmolaridad extracelular depende de
la [Na+] y la osmolaridad intracelular de la [K+]; por lo que es
necesario mantener requerimientos basales siendo los siguientes:
2mEq/Kg/da

3mEq/Kg/da
Figura 3. Requerimientos basales.

Con estos conceptos podramos concluir:

Un individuo en ayuno el cual pesa 6 Kg se requiere
Necesidades diarias de lquido:
6 Kg x 100ml/Kg/da= 600 ml por da
Necesidades de sodio
3 mEq /Kg/ da x 6 Kg de peso = 18 mEq/ L
Necesidades de potasio:
2 mEq/Kg/ da x 6 Kg de peso= 12 mEq /L

49

Por lo que con estos datos es mas facil poder decidir que solucion se
ocupara.
Material
Por equipo:
4 vasos de precipitado de 10 ml
1 pipeta de 1.0 ml
1 pipeta de 5.0 ml
1 pipeta de 10.0 ml
Gradilla con 9 tubos de ensayo
Eritrocitos humanos lavados en solucin salina isotnica
Solucin de azul de metileno al 1.0%
Cloruro de sodio en cristales (NaCl)
Balanza granataria
1 Portaobjetos y 3 cubreobjetos

3. A partir de la solucin1, preparar 25 ml a 0.9% (solucin 2)

y 50 ml a 0.045% (solucin 3).
4. De las 3 soluciones preparadas tomar una gota de cada una
y por separado colocarlas en un porta-objetos, adicionar una
gota de sangre colocar un cubre-objetos y observarlas al
microscopio, para valorar el efecto de las soluciones sobre el
eritrocitos, como se muestra en la figura 4.

Por grupo:
1 Microscopio marca Leica.
Procedimiento
1. Hacer los clculos correspondientes para comprobar que la
solucin a 0.9% de NaCl es isotnica con respecto al plasma
(ver pag. 30). Considerar que:
a) El cloruro de sodio se disocia en solucin acuosa en los
iones sodio y cloruro, por lo que la concentracin inica se
duplica (1 mmol/l = 2 mosm/l).
b) La presin osmtica normal del plasma es de 290-310
mosm/l.

Figura 4. Distribucin del las gotas en porta-objetos.

6. Hacer la dilucin y redilucin (dilucin seriada) de la

solucin de azul de metileno como se muestra en el siguiente
cuadro:

2. Preparar 20 ml de una solucin de NaCl a 4.5% (etiquetar

como solucin 1).

50

DILUCIN SERIADA DE AZUL DE METILENO

Tubo H2O (ml) Sol de azul de
metileno 1%
1
2
0.5 ml*
2
2
3
2
4
2
5
2
6
2
-

Volumen de
transferencia
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml

2.- Preparar 150 ml de una solucin de NaCl al 35%.

3.- Prepara 250 ml de una solucin de NaOH al 20%.
4.- Prepara 500 ml de etanol al 40% (a partir de etanol a
96%).
5.-Preparar 300 ml de una solucin 0.1M de NaOH
6.-Preparar 400 ml de una solucin de histidina al 0.03M PM =
209.6 g

*Nota: para mezclar al hacer las diluciones se debe

succionar y soplar con cuidado la pipeta en cada tubo
varias veces antes de transferir la dilucin al siguiente
tubo.

7.- Cuantos mEq hay en una molcula de NaOH

Resultados

Referencias
1. Villazn SA, Crdenas CO,Villazn DO, Sierra UA. Fluidos y
electrlitos. Mxico: JGH Editores; 2000.

1. Expresar en forma ordenada los clculos efectuados para

cada uno de los ejercicios.
2. Deducir el movimiento o no del solvente cuando se ponen
en contacto eritrocitos con soluciones hipo, hiper e
isoosmticas.
3. Calcular la dilucin y la concentracin de azul de metileno
en cada uno de los seis tubos de la dilucin seriada (ver
pg.31). Asegrese que la coloracin obtenida disminuya
gradualmente conforme avanza la dilucin.
Problemas adicionales.
1.- Preparar 60 ml de una solucin isotnica.

8.- Cuantos mEq hay en una molcula de CaCl2

2. Pea-Daz A, Arroyo BA, Gmez PA, Tapia IR, Gmez EC.

Bioqumica. Undcima reimpresin de la 2a. ed. Mxico:
Editorial Limusa; 2004.
3. Laguna J, Pia E. Bioqumica de Laguna. 5a.ed. Mxico:
Editorial El Manual Moderno; 2002: p. 41-56.
4. Holum JR. Fundamentos de qumica general, orgnica y
bioqumica para ciencias de la salud. Mxico: Editorial Limusa
Wiley; 2001.
5. Farias GM. Qumica clnica. Dcima edicin Mxico:
Editorial El Manual Moderno; 1999.

51

6. Bloomfield MM. Qumica de los organismos vivos. Mxico:

Editorial Limusa; 1997.
7. Lieberman Allan. D. Marks. Bioqumica Bsica de Marks, un
enfoque clnico. 4 edicin Espaa. Lippincott Williams and
Wilkins 2013 Pgina 116 y 120.
8. Mota Hernndez Felipe; Velsquez Jones Luis. Trastornos
clnicos de agua y electrlitos. Vol. 1. pag. 04. Mc Graw Hill. 2004.

52

Prctica 2

Regulacin del equilibrio cido-base despus del ejercicio

muscular intenso y de la ingestin de bicarbonato de sodio
Tiempo de prctica: 3 horas
Objetivos
1. Al finalizar la prctica, el alumno constatar las actividades
reguladoras del pulmn y el rin para mantener el equilibrio
cido-base en condiciones que tienden a romperlo.
2. Mediante la determinacin del pH observar la variacin de
la concentracin de hidrogeniones en la orina de un individuo
que ha realizado ejercicio muscular intenso.
3. Relacionar los resultados obtenidos con los cambios
metablicos originados por el ejercicio muscular intenso.

5. Qu sistemas amortiguadores participan directamente en

la regulacin del pH sanguneo?
6. Cules son los sistemas extrasanguneos que tienden a
mantener el pH extracelular?
Escriba la ecuacin de Henderson y Hasselbalch aplicada al

sistema HCO3 /H2CO3 y, con base en ella, conteste la

siguiente pregunta:
Cmo participan el aparato respiratorio y el rin en el
control del pH sanguneo?

Conteste las siguientes preguntas:

INTRODUCCIN
1. Por qu es importante que se mantenga constante, dentro
de ciertos lmites, el pH en el organismo?
+
2. Cules son las fuentes de iones H en el organismo?
3. Cules son los sistemas reguladores que facilitan la
+
eliminacin del H producido en el organismo con el fin de
mantener constante el pH sanguneo?
4. Cules son las reacciones de formacin del cido
carbnico (H2CO3) a partir de CO2 y H2O, y de su disociacin
para formar el ion bicarbonato? Escrbalas.

Dentro de los mecanismos de regulacin de que

dispone el organismo para mantener la integridad fisiolgica,
aquellos involucrados en la homeostasis del pH en los fluidos
extracelulares desempean un papel crucial para la
supervivencia del individuo. En este sentido cabe sealar que,
como resultado de la oxidacin de los alimentos, un humano
adulto promedio produce alrededor de 20 moles de CO2 al
da, Al difundir a la sangre, gran parte de dicho gas se
combina con al agua en el interior de los eritrocitos,

53

produciendo cido carbnico (H2CO3), reaccin que es

seguida por la disociacin del H2CO3 para producir el anin
bicarbonato HCO3- y un in hidrgeno (H+). Dado el carcter de
cido dbil del H2CO3, la fraccin disociada del mismo es
pequea; sin embargo, considerando la gran cantidad de CO2
que produce el organismo, la acidificacin de los fluidos
extracelulares sera importante en ausencia de mecanismos
reguladores. En el hombre, la intervencin de los pulmones y
los riones evita que ocurra tal acidificacin manteniendo en
un nivel constante la concentracin de H+ y, por consiguiente,
del pH.
Para entender el papel que juegan ambos rganos en
la homeostasis del equilibrio cido-base, debe tenerse
presente que el sistema del cido carbnico implica la
participacin de un componente gaseoso o voltil (el CO2) y
dos componentes no voltiles (el HCO3- y el H+). En la sangre,
el equilibrio entre dichos componentes determina el valor del
pH sanguneo, que puede evaluarse mediante la bien
conocida ecuacin de Henderson-Hasselbach. En el individuo
normal, dicho valor flucta en un promedio 7.4, siendo la
sangre venosa enriquecida en CO2 ligeramente ms cida en
relacin con la sangre arterial. Ahora bien, ya que a
temperatura ambiente el CO2 existe en estado gaseoso, la
cantidad de CO2 disuelto en la sangre depender de la presin
parcial (PCO2) ejercida por el mismo a nivel de los alvolos
pulmonares. En el humano, la magnitud de dicha PCO2 es de
aproximadamente 40 mmHg lo que se traduce en una
concentracin de CO2 sanguneo de aproximadamente 25
mmHg; este ltimo valor incluye no solo el CO2 como tal, sino

tambin el bicarbonato y el cido carbnico. Considerando el

pH sanguneo normal y el pKa del sistema bicarbonato-cido
carbnico. Es precisamente la PCO2 la que es controlada por
los pulmones, ya que durante el proceso de la exhalacin se
elimina CO2, manteniendo constante la PCO2 en los alvolos y
evitando as que aumente el nivel de CO2, disuelto en la
sangre. Todo proceso o patologa que se manifieste en una
alteracin en la frecuencia y/o profundidad del proceso de
inhalacin -exhalacin, dar como resultado una alteracin de
la PCO2 alveolar aumentndola o disminuyndola, con la
siguiente modificacin del nivel de CO2 disuelto en sangre y,
por consiguiente, del pH.
Por lo que respecta a los riones, su participacin en el
mantenimiento de un pH extracelular constante se da a travs
de dos mecanismos: la excrecin de equivalentes cidos (H+)
hacia la orina y la regulacin de la cantidad de HCO3reabsorbido hacia la sangre desde el filtrado glomerular. A
diferencia del intercambio gaseoso en los pulmones, los
mecanismos de regulacin renal son de largo plazo, por lo que
su efecto ser manifiesto en cuestin de horas. Su importancia
se enfatiza en situaciones patolgicas donde se altera el
intercambio de gases pulmonar (es decir, en la acidosis y
alcalosis respiratorias), en cuyo caso es necesario aumentar o
disminuir la tasa de reabsorcin del HCO3- , o bien en estados
fisiolgicos que producen cantidades importantes de cidos
orgnicos (por ejemplo, en la diabetes no controlada o durante
el ejercicio intenso) donde se incrementa la excrecin de H+ .
Gran parte de este ltimo aparece en la orina acomplejado
con el amoniaco en forma de in amonio (NH4+) o asociado

54

con el fosfato en forma de fosfato monobsico de sodio

(NaH2PO4), representando este ltimo la llamada acidez
titulable. En general, el pH de la orina ser un reflejo de la
produccin de cidos no voltiles por el organismo. El
resultado final de los mecanismos fisiolgicos que participan
en el mantenimiento del equilibrio cido-base es el de
mantener el pH extracelular en un rango compatible con el
funcionamiento adecuado del organismo.
.

55

Figura 5 Equilibrio cido base. Los pulmones, los riones y los eritrocitos contribuyen a mantener el equilibrio acido base. Los pulmones controlan el intercambio gaseoso con el aire atmosfrico. El dixido de carbono que
se genera en los tejidos, se transporta en el plasma como bicarbonato; la hemoglobina (Hb) del eritrocito contribuye tambin al trasporte del CO2. La hemoglobina amortigua el ion hidrgeno derivado del cido carbnico.
Los riones reabsorben el bicarbonato en los tbulos distales, donde hay una secrecin neta del ion hidrogeno

56

Material
Anlisis de resultados

Vasos de precipitado.
Orina.
Potencimetro.
Frasco para muestra.

Una vez obtenido el valor del pH para cada una de las 5

muestras de orina, trazar una grfica de pH contra tiempo;
interpretar los resultados y discutirlos en grupo.
Objetivos (Segunda parte)

Mtodo
Un alumno por equipo desayunar o comer
normalmente (evitar ingestin de jugos cidos, bebidas
alcohlicas); despus har lo que se indica a continuacin.
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes de la clase prctica.
Vaciar la vejiga y descartar esa orina.
2. Tomar 250 ml de agua inmediatamente antes de la clase
prctica.
3. Ingerir 250 ml de agua.
4. Recolectar aproximadamente 25 ml de orina en el frasco
para muestra
5. Realizar ejercicio muscular intenso, como subir y bajar
varias veces las escaleras de tres o cuatro pisos u otro
ejercicio sugerido por el profesor.
6. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, como en el
inciso 3, hasta completar por lo menos cinco muestras.
7. A cada muestra se le determinar el pH inmediatamente
despus de haber sido obtenida ya que con el tiempo el pH
tiende a aumentar debido a la prdida de dixido de carbono
y a que el crecimiento bacteriano produce amoniaco a partir
de la urea.

1. El alumno constatar el papel del rin en el

mantenimiento del equilibrio cido-base en una situacin de
alcalosis metablica provocada por la ingestin de
bicarbonato de sodio.
2. Mediante la medicin del pH, observar la variacin de la
concentracin de hidrogeniones en la orina de un individuo
que ha ingerido una carga de bicarbonato de sodio.
Material
Vasos de precipitados
Orina.
Solucin de bicarbonato de sodio al 3%.
Potencimetro.
Mtodo
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes de la clase prctica.
Vaciar la vejiga y descartar esa orina.
2. Tomar 250 ml de agua inmediatamente antes de la clase
prctica.
3. Recolectar aproximadamente 25 ml de orina en el frasco
para muestra
4. Ingerir 250 ml de agua con 7.5 g de bicarbonato de sodio.
5. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, hasta
completar por lo menos 5 muestras.
6. A cada muestra se le determinar el pH inmediatamente
despus de haber sido obtenida.
57

Anlisis de resultados
Una vez obtenido el valor del pH para cada una de las cinco
muestras de orina, trazar una grfica de pH contra tiempo;
interpretar los resultados y discutirlos en grupo.
Referencias
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones
clnicas. 4a. ed. Barcelona: Editorial Reverte; 2004.
2. Montgomery R. Bioqumica: casos y texto. 6a. ed. Editorial
Harcourt-Brace; 1998: cap.4.
3. Baynes W. Jhon PhD. Bioqumica mdica. 3 ed. Editoral
ELSEVIER; 2011 cap 24.
4. Villazn SA, Crdenas CO, Villazn DO, Sierra UA
Fluidos y electrlitos. Mxico: JGH Editores; 2000.

58

Prctica 3

Cintica enzimtica.
Efecto de la concentracin del sustrato
sobre la velocidad de reaccin enzimtica
Tiempo de prctica: 2 horas
Objetivo
El alumno:
1. Explicar el efecto de la concentracin de sustrato sobre
la velocidad de una reaccin enzimtica.
2. Calcular por mtodos grficos la velocidad mxima y la
constante de Michaelis de una reaccin enzimtica.
3. Conocer los diferentes tipos de inhibidores que existen y
estudiar su efecto sobre la Km y V mx.

5. Cules son las enzimas cuya determinacin tiene valor

diagnstico?
Hiptesis
Si la velocidad de una reaccin enzimtica es
proporcional a la concentracin del sustrato; cuando la
concentracin del sustrato es muy alta, por lo tanto la enzima
se satura y alcanza su velocidad mxima.
La enzima que sirve de modelo en esta prctica es la
glucosa oxidasa acoplada a la peroxidasa.
INTRODUCCIN

Para lograr los objetivos de esta prctica contestar las

siguientes preguntas:
1. Qu es la velocidad de una reaccin enzimtica?
2. Cmo se define la constante de Michaelis (Km) de una
reaccin enzimtica?
3. Cmo se define la velocidad mxima (Vmx) de una
reaccin?
4. Para qu le sirve a un mdico la determinacin de la
actividad de algunas enzimas?

Las enzimas son las protenas ms notables de la

naturaleza; sin ellas, la vida como la conocemos no sera
posible. Las enzimas son catalizadores, esto es, aceleran la
velocidad de las reacciones sobre las que actan sin
consumirse en el proceso. El poder cataltico de las enzimas
es mucho mayor que el de los catalizadores inorgnicos,
algunas de ellas estn limitadas solo por la velocidad con
que colisionan con sus sustratos; son catalizadores
59

perfectos.
Aunque las reacciones que ocurren en la clula son
termodinmicamente favorables, la velocidad a la cual
transcurren la mayora de ellas es extremadamente lenta; sin
la presencia de las enzimas, las reacciones necesarias para
sostener la vida ocurriran a una velocidad incompatible con
sta. Adems de su enorme poder cataltico, las enzimas son
altamente especficas por sus sustratos y tienen la capacidad
de regular su velocidad en respuesta a las concentraciones
de sustrato y la presencia de inhibidores, activadores,
reguladores alostricos, etc. As pues, las enzimas
desempean un papel central en los procesos biolgicos,
son las responsables de degradar y sintetizar las molculas
que nos forman y de extraer, transformar y utilizar toda la
energa relacionada con estos procesos. Por ltimo, las
enzimas son las responsables de regular y coordinar todas
las reacciones que ocurren en un organismo para lograr el
delicado balance que representa la vida.
El primer modelo matemtico que explic de manera
general la cintica de las enzimas no alostricas, donde la
velocidad de la reaccin se incrementa hiperblicamente
conforme aumenta la concentracin de sustrato, fue
propuesto en 1913 por Leonor Michaelis y Maud Menten a
partir de los trabajos previos de Victor Henri y Archibald Hill.
Este modelo postula la idea central de que la enzima y el
sustrato libres establecen un equilibrio rpido con el complejo
enzima-sustrato; en un segundo paso ms lento, este
complejo se rompe liberando el producto y regenerando la
enzima libre. La ecuacin de Michelis-Menten explica la

relacin entre la velocidad de la reaccin catalizada por una

enzima y la concentracin de sustrato a travs de los dos
parmetros de la ecuacin, Vmax y Km. La ecuacin de
Michaelis-Menten puede ser re-arreglada matemticamente
para obtener su forma lineal, permitiendo determinar de
manera sencilla los parmetros cinticos de una enzima a
travs del grafico de Lineweaver-Burk. Este mismo grfico
permite inspeccionar rpida y visualmente las diferentes
formas de inhibicin enzimtica.
El estudio de las enzimas es de suma importancia
dentro de las ciencias mdicas; las enzimas estn implicadas
en el origen, diagnostico y tratamiento de una gran cantidad
de patologas y es claro que en el futuro, su preponderancia
ser cada vez mayor. Por ejemplo, la deficiencia de algunas
enzimas, como las proteasas de la coagulacin en la
hemofilia, es causa de enfermedades hereditarias. La
presencia anormal de algunas enzimas en el torrente
sanguneo ayuda a diagnosticar el dao especfico de
tejidos, este es el caso de la amilasa y lipasa en las
patologas pancreticas y las transaminasas en las
enfermedades hepticas. Las enzimas son tambin el blanco
de varios frmacos: la aspirina inhibe a la ciclooxigenasa, el
omeprazol a la ATPasa de protones y el captopril a la enzima
convertidora de angiotensina; estas inhibiciones redundan en
un efecto teraputico. La capacidad de producir enzimas
recombinantes
abri
la
posibilidad
de
utilizarlas
rutinariamente con fines teraputicos, tal es el caso de la
estreptocinasa para la terapia fibrinoltica en el infarto agudo
al miocardio. Es claro que todas estas aplicaciones no seran
posibles sin la previa y profunda comprensin de la
60

estructura y funcin de estas fascinantes molculas.

Fundamento
El mtodo se basa en el hecho de que la glucosa, en
presencia del oxgeno del aire y con la participacin de la
glucosa oxidasa, se oxida hasta cido glucnico. El perxido
de hidrgeno que se forma en el curso del proceso se
descompone mediante la peroxidasa. El oxgeno atmico
que se desprende en esta ltima reaccin se combina con un
cromgeno que se colorea al oxidarse. La intensidad de la
coloracin del cromgeno oxidado es proporcional a la
concentracin de glucosa.

La peroxidasa cataliza la transferencia de oxgeno del

perxido a un aceptor que es cromgeno como la
ortotoluidina, la ortodianisidina, la 2,2-azino-bis (3etilbencentiazolin-6-sulfnico) o la 4-amino-antipirina (y fenol)
que se colorean al oxidarse.
La reaccin se expresa:

La glucosa oxidasa (-D-glucosa:oxgeno xidorreductasa,

EC1.1.2.4) tiene un peso molecular de 160 000. Existe en
forma dimrica y contiene dos moles de FAD+ como grupo
prosttico por mol de enzima. La glucosa oxidasa es
altamente especfica, hecho que ha permitido su empleo
para el anlisis cuantitativo de glucosa. La reaccin consiste
de dos pasos:
-gluconolactona +

Glucosa + glucosa oxidasa-FAD

glucosa oxidasa-FADH2
Glucosa oxidasa-FADH2 + O2

glucosa oxidasa-FAD + H2O2

La 4-gluconolactona se hidrata espontneamente dando

cido glucnico. La reaccin global se expresa:
Glucosa oxidasa
Glucosa + O2

Figura 6 Diagrama que muestra los niveles de energa de los sustratos a medida que estos progresan
a la formacin de productos en ausencia de la enzima. Los sustratos deben pasar a travs de un
estado de transicin de alta energa durante la reaccin. Aunque ocurre una prdida favorable de
energa durante la reaccin, la velocidad de la reaccin es enlentecida por la barrera de energa para
formar el estado de transicin. La barrera de energa se refiere a la energa de activacin.

Acido glucnico + H2O2

61

Material y reactivos
2. Preparar la siguiente serie de tubos (tabla 1).
2 Gradillas con 8 tubos de ensaye cada una.
1 Pipeta de 5 ml.
2 Pipetas de 1 ml.
Fotocolormetro con filtro azul.
Solucin estndar de glucosa 40 mmol/l y una dilucin 1:10
de sta para los tubos 2, 3 y 4.
2 frascos con solucin de enzimas: 41.6 Uml1 de glucosa
oxidasa, 4.6 Uml1 de peroxidasa, ortodianisidina 0.21
mmol/l.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l como inhibidor.
Gotero con HCl.

H2O
(ml)
1.0
0.9
0.75
0.5
0.9
0.75
0.5
0.0

Solucin de
glucosa (ml)
0.0
dil 1:10
0.1
dil 1:10
0.25
dil 1:10
0.5
0.1
0.25
0.5
1.0

*
4.- Agitar cada tubo e incubar a temperatura ambiente y de
inmediato detener la reaccin agregando 3 gotas de HCl
concentrado. Considerar un intervalo de 30 segundos para
cada tubo al agregar el HCl.

*NOTA: El tiempo de incubacin para la reaccin

enzimtica se indicara al inicio de la prctica
Mtodo II (sin inhibidor)

Tabla 1. Preparacin de tubos

Tubo
No.
1
2
3
4
5
6
7
8

3.- Considerar un intervalo de 30 segundos para cada tubo al

agregar la enzima.

Solucin de
enzimas (ml)
3
3
3
3
3
3
3
3

Mtodo I (con azida de sodio)

1. Preincubar 20 minutos la solucin de enzimas con 0.5 ml
del inhibidor.

1.- Preparar nuevamente una serie de tubos como lo indica

la tabla 1.
2.- Considerar un intervalo de 30 segundos para cada tubo al
agregar la enzima.
3.- Agitar cada tubo e incubar1 a temperatura ambiente y de
inmediato detener la reaccin agregando 3 gotas de HCl
concentrado. Considerar un intervalo de 30 segundos para
cada tubo al agregar el HCl.
Leer ambas series de tubos en el fotocolormetro; utilizar
como blanco el tubo 1. Todos los tubos en la gradilla son
tubos Klett.
Resultados (cuadro 5.2)
62

1. Clculo de la concentracin inicial de sustrato en cada

tubo; tomar en cuenta que la solucin de glucosa contiene 40
molas ml1.
2. La velocidad ser igual a las unidades Klett por tiempo de
incubacin (min-1)
3. Con los datos obtenidos completar el cuadro 5.2 y hacer
las dos grficas en papel milimtrico.
4. Hacer una segunda grfica con los valores de 1/v vs 1/[S].
5. Calcular el valor de la velocidad mxima (Vmx) y de la
constante de Michaelis (Km) con y sin inhibidor.
6. Determinar el tipo de inhibidor de acuerdo con las grficas
del punto anterior.
7. Analizar si los resultados obtenidos estn de acuerdo con
la hiptesis planteada.

Tubo

Concentracin de
sustrato molas de
-1
glucosa ml
ABCISAS (X)

Velocidad de la
reaccin unidades
Klett/min
ORDENADAS (Y)

Velocidad de la
reaccin con el
inhibidor
unidades Klett/
min

1
2
3
4
5
6
7
8
Cuadro 5.2 Resultados

63

Prctica 4

Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de los

inhibidores de la cadena de transporte de electrones y de los
desacoplantes.
Tiempo de prctica: 2 horas
Objetivos
1. Que el alumno relacione el consumo de glucosa con los
cambios de pH producidos por las levaduras.
2. Que el alumno describa las vas por las cuales la glucosa
genera los cambios de pH.
3. Que el alumno interprete el efecto de los inhibidores y los
desacoplantes sobre la salida de protones.
Responda a las siguientes preguntas:
1. Cules son las fuentes de carbono que usa la levadura?
2. Cules son las vas metablicas que catabolizan a los
carbohidratos?
3. En qu consisten la gluclisis y la fosforilacin oxidativa?
4. Cules son los productos finales del catabolismo de los
carbohidratos en las levaduras?

5. Cules son los inhibidores de la cadena respiratoria de

los sitios I, II y III? Describa su efecto sobre el consumo de
O2 y la sntesis del ATP.
6. Cul es el mecanismo por medio del cual los
protonforos desacoplan la fosforilacin oxidativa? Describa
su efecto sobre el consumo de O2 y la sntesis del ATP.
INTRODUCCION
Las levaduras Saccharomyces cerevisiae son organismos
unicelulares que se dividen por gemacin. En comn con
otras clulas eucariontes, las levaduras tienen un ncleo -en
donde reside la informacin gentica de la clula-,
mitocondrias -en donde se lleva a cabo la sntesis de ATP- y
un retculo endoplsmico y aparato de Golgi que se encargan
de la sntesis de protenas cuya localizacin final es la
membrana plasmtica o el exterior.
A nivel de la membrana plasmtica, las levaduras tienen
una ATPasa de H+ que acopla la hidrlisis del ATP con el
bombeo de protones hacia afuera de la clula. Esta protena
es semejante desde un punto de vista estructural y funcional
a la ATPasa de Na+/K+ de las clulas animales y, al igual que
la bomba de sodio/potasio, se inhibe con concentraciones
micromolares de vanadato. Como resultado de la actividad
64

de la ATPasa de H+ en la levadura, se genera un gradiente

electroqumico de protones que se utiliza para impulsar el
transporte de nutrientes al interior de la clula, proceso
catalizado
por
sistemas
de
transporte
llamados
simportadores o uniportadores. Para darse una idea de la
importancia de esta enzima en la economa celular y en la
energizacin de la membrana celular, basta decir que la
ATPasa de H+ consume hasta un 25 % del ATP que se
sintetiza en la clula.
+

Adems de esta ATPasa de H de la membrana

plasmtica, las levaduras tienen otra bomba de protones en
la membrana interna de las mitocondrias, la ATP sintasa, que
se encarga de la sntesis del ATP. En contraste con la
enzima de membrana plasmtica, el flujo de protones a
travs de la ATP sintasa induce la sntesis de ATP. Uno de
los inhibidores ms efectivos de esta enzima es la
oligomicina.
As, se puede proponer uno de los muchos ciclos en los
que interviene el ATP en la levadura: por un lado, el ATP se
sintetiza en la mitocondria por medio de la ATP sintasa, y a
+
nivel de la membrana plasmtica, la ATPasa de H lo
hidroliza para bombear protones al exterior de la clula. El
factor comn en ambos casos es un flujo de protones a
travs de la membrana.
Hiptesis
Si las levaduras consumen glucosa, se observar una
disminucin progresiva de su concentracin en el medio de
cultivo con el tiempo y cambios en el pH extracelular.

Material
Tres vasos de precipitado de 100 ml.
Pipetas de 5 y 10 ml.
Potencimetro.
Piceta para enjuagar el electrodo del potencimetro.
Levadura (Saccharomyces cerevisiae) 200 mg/ml.
Solucin de glucosa (10%) para una concentracin final de
1%.
Solucin de dinitrofenol 40 mmol/l en etanol.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l.
Agua destilada.
Mtodo
Experimento 1 (control)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos
veces ms con intervalos de 3 minutos para obtener la lnea
basal.
3. Adicionar 5 ml de glucosa a 10 %, agitar y medir el pH.
4. Determinar el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y
luego cada 10 minutos 2 veces ms.
EXPERIMENTO 2 (DINITROFENOL)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.2 ml de la solucin
de dinitrofenol 40 mmol/l, concentracin final de 200 mol/l.
3. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos
veces ms con intervalos de 3 minutos para obtener la lnea
basal.
65

4. Esperar 5 minutos.
5. Adicionar 5 ml de glucosa a 10 %, agitar y medir el pH.
6. Determinar el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y
luego cada 10 minutos 2 veces ms.
EXPERIMENTO 3 (AZIDA)

mmol/l. Agitar con cuidado.

3. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos
veces ms con intervalos de 3 minutos para obtener la lnea
basal.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
6. Registrar sus datos en la tabla.

1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.

2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.5 ml de la solucin
de azida de sodio 400 mmol/l, concentracin final de 5
Glucosa

ADP + Pi

Glucosa

H
ATP

ADP
ATP

Etanol
+

H H

pH

Tiempo
(min)
0
5
10
15
20
30
40

Glucosa
Dinitrofenol

Azida de
sodio

NAD NADH ADP + Pi

ATP
Acetaldehdo
Mitocondria

ADP

66

ADP

Anlisis de resultados

1. Hacer una grfica de cada uno de los experimentos;

utilizar los valores de las lecturas de pH contra tiempo.
2. Analizar el significado de los cambios de pH en el
experimento control, con dinitrofenol como desacoplante y
con azida de sodio.
3. Hacer una relacin de las vas que producen estos
cambios; tomar en cuenta que las levaduras poseen una
ATPasa de protones en la membrana mitocondrial que se
encarga de sintetizar ATP y que tienen otra ATPasa de
protones en la membrana plasmtica cuya funcin es similar
+
+
a la bomba de Na /K en las clulas de los mamferos (ver
fig.7.1).

Referencias
1. Pea A. Studies on the mechanism of K+ transport in
yeast. Arch Biochem Biophys. 1975; 167:397-409.
+

2. Pardo JP. La ATPasa de H de la membrana plasmtica

de los hongos. Mensaje Bioqumico. 1990; 13: 119-172.

67

Prctica 5

Determinacin de glucosa en sangre total

Tiempo de la prctica: 3 horas

Objetivos
1. Que el estudiante comprenda el metabolismo de la glucosa
en sujetos sanos en diferentes condiciones.
2. Que el estudiante corrobore los cambios de glucosa e
insulina durante la ingesta de alimentos.
3. Que el alumno sea capaz de interpretar y relacionar las
mismas condiciones en ayuno.
4. Que el alumno sea capaz de ver las curvas de ndice
glicmico de diferentes monosacridos.
Introduccin
En el estado de postabsorcin (ayuno) de los
individuos normales, la relacin insulina/glucagn sangunea
es baja, haciendo que el glucgeno muscular y heptico sea
degradado como una fuente de glucosa. Un ayuno adicional
resulta en la degradacin de las protenas a aminocidos en el
msculo esqueltico, y en la liplisis de los triacilglicroles a

cidos grasos en el tejido adiposo. El aminocido alanina y el

glicerol son usados para sintetizar glucosa por medio de la
gluconeognesis estimulada por glucagn. Adems, los cidos
grasos libres pueden ser usados como combustible por el
corazn, los msculos esquelticos y el hgado.
Algunos minutos despus de la ingesta de una comida,
los niveles de insulina sangunea aumentan. La glucosa y los
aminocidos de la dieta tales como la leucina, isoleucina y
lisina, son estimulantes potentes de las clulas beta del
pncreas haciendo que stas segreguen insulina. La mayor
parte de las clulas perifricas responden al aumento de la
glucosa sangunea con un aumento rpido del transporte de la
glucosa dentro de las clulas. De esta manera, los niveles de
glucosa sangunea aumentan solamente de un 20% a un 40%
en
los
individuos
no-diabticos.
Sin
embargo,
aproximadamente el 80% de la entrada de glucosa no es
insulino dependiente, ya que el cerebro, los glbulos rojos, el
hgado y los intestinos no requieren de insulina para la entrada
creciente de glucosa cuando est presente glucosa sangunea
elevada. El msculo es el tejido dependiente de insulina ms
importante. Los niveles crecientes de insulina y glucosa
sanguneas inhiben la liplisis as como a aproximadamente el
60% de la liberacin normal de glucosa heptica.

68

Las concentraciones de glucosa en los nios menores

de 5 aos de edad son aproximadamente del 10 al 15% ms
800 mg/l (1.11 a 4.44 mmol/l), aun cuando las concentraciones
de baja que los niveles encontrados en los adultos. Los recin
nacidos muestran concentraciones de glucosa desde 200 a
800 mg/l (1.11 a 4.44 mmol/l), aun cuando las concentraciones
de glucosa sangunea en los infantes prematuros son
menores. Las concentraciones de glucosa en los adultos
saludables varan entre 700 a 1050 mg/l (3.9 a 5.8 mmol/l).
Las concentraciones de glucosa del lquido cefalorraqudeo
son aproximadamente del 40% al 80% de aquellos valores
encontrados en el suero o en el plasma. Las concentraciones
de glucosa en el suero son aproximadamente 15% ms altas
que las concentraciones de glucosa en la sangre total. Debe
tomarse en cuenta que las concentraciones totales en la
sangre varan con el hematocrito. La glucosa sangunea total
se aproxima muy marcadamente a la glucosa plasmtica
cuando el hematocrito es bajo. La diferencia del 15% entre la
glucosa sangunea total y la glucosa plasmtica descrita arriba
es para un valor del hematocrito de aproximadamente el 45%

Transportador
GLUT 1

Distribuidor

Propiedades

Eritrocitos, barrera hematoenceflica,

Ingreso basal de glucosa.

placenta, retina,

Km 1.6 mM.

rin y cerebro.
GLUT 2

Hgado, pncreas

Transportador

e intestino delgado

glucosa,

de

galactosa

fructosa.
Sensor de glucosa en
pncreas.
Km de 15 mM o ms.
GLUT 3

Cerebro, placenta,
hgado, rin
y corazn.

Ingreso
basal
de
glucosa.
KM 2 mM.
Transportador
de
glucosa y galactosa.

GLUT 4

Tejido adiposo,
corazn y msculo esqueltico.

Dependiente
insulina.
Km de 5 mM.

GLUT 5

Yeyuno, espermatozoides, rin,

cerebro.

Transportador de
fructosa.

de

69

Figura 8. CONTROL HORMONAL DE LA HOMEOSTASIS DE LA GLUCOSA. La concentracin de glucosa plasmtica refleja el equilibrio entre la accin hipoglucemiante (disminucin de la glucosa) de la insulina y la accin
hipergluceminate (aumento de glucosa) de las hormonas antiinsulinicas. En el cuadro inferior se muestra el patrn diario de secrecin de insulina y del glucagn y el patrn diario de secrecin de la insulina y del glucagn y el patrn
correspondiente de la concentracin plasmtica de glucosa. La concentracin de glucosa se mantiene dentro de unos mrgenes relativamente estrechos durante el da.

70

Determinacin de glucosa.
Requisito para la prctica: ayuno de 6-8 horas

1.-Lave sus manos y limpie con una

torunda de algodn con alcohol la zona
donde se realizar la puncin.

Podr participar un integrante por equipo, de manera que

en todo el grupo se puedan trabajar las diferentes
condiciones.
Glucmetros One Touch Ultra
Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa Oxidasa (Aspergillus
nger)].
Lancetas estriles.
Recipiente para material punzo cortante.
Recipiente para material biolgico infeccioso
Jabn para manos.
Torundas de algodn con alcohol.

2. -Aplique un suave masaje a la punta de

su dedo que le ayudar a obtener una gota
de sangre adecuada. No exprima en
exceso el rea de puncin.

Sujetos con diferentes ingesta de carbohidratos:

a).-15 gramos de glucosa.1er Equipo
b).-15 gramos de sacarosa. 2 Equipo
c).-15 gramos de cereal. 3er Equipo

3.- Acerque y mantenga la gota de sangre

en el canal estrecho del borde superior de
la tira reactiva.

Mtodo.
Determinacin de glucosa.
1.-A cada uno de los sujetos se les determinar la
concentracin de glucosa en sangre total por medio de un
glucmetro en los siguientes tiempos:
0 minutos (antes de ingerir la carga de los diferentes
monosacridos).
30 minutos, 60 minutos y 90 minutos, despus de de ingerir
los alimentos.
Para realizar la determinacin de glucosa en sangre total
seguir los siguientes pasos:

4.- a) Muestra adecuada

b) Muestra insuficiente

a)

b)

71

5.- Inserte la tira reactiva en el puerto de

anlisis, con el extremo de las barras de
contacto de primero y mirando hacia
arriba. Empjela hasta que no avance
ms.

6.- Hasta que la ventana de confirmacin

este completamente llena de sangre, antes
que el medidor comience la cuenta
regresiva.

7.-Lectura: el resultado de la prueba de glucosa de su sangre

aparecer despus de que el medidor cuente en forma

Anotar el resultado en la taba correspondiente.

8.-Es importante desechar con mucho cuidado la lanceta
usada luego de cada uso, con el fin de evitar que se
produzcan lesiones accidentales con las puntas de la lancetas.
Para el desecho de las lancetas siga los siguientes pasos:

Deposite la lanceta en un recipiente para material

punzo cortante.

Deseche las tiras reactivas en una bolsa para material

biolgico-infeccioso junto con las torundas de algodn
empleadas en la prctica.

Con los datos obtenidos completar el cuadro y hacer

una grfica de todas las variantes en papel milimtrico.

Nombre:
Edad:
Tiempo en (min.)

Sexo:
[Glucosa mg/dl]

0
30
60
90

Referencias
1. Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Qumica Clnica. Teora,
anlisis y correlacin. 3 Edicin. Ed. Pesce Kaplan
Publicaciones, Captulos: 32.

72

2. NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-015-SSA2-1994, Para

la prevencin, tratamiento y control de la diabetes mellitus en
la atencin primaria. Listado de Normas Oficiales Mexicanas
de la Secretara de Salud.
3. MODIFICACIN a la Norma Oficial Mexicana NOM-015SSA2-1994, Para la prevencin, tratamiento y control de la
diabetes. Listado de Normas Oficiales Mexicanas de la
Secretara de Salud.

4. Manual para el manejo de las insulinas 2001. 2 Edicin.

Subsecretara de Prevencin y Proteccin de la Salud. Centro
Nacional de Vigilancia Epidemiolgica
SSA. Mxico.
5. BaynesW Jhon, Dominiczak.(2011)Bioqumica mdica 3 E
dicin ELSEVIER MOSBY,
Espaa. Captulo 21.

73

Prctica 6

Determinacin de colesterol y lipoprotenas plasmticas

Tiempo de prctica: 2 horas
Objetivos
1.Recordar la estructura de los diferentes lpidos circulantes y sus
funciones.
2.Describir las diferentes fuentes de colesterol, su funcin y la
dinmica del colesterol plasmtico.
3.Investigar el papel del colesterol y otros lpidos en el desarrollo
de la aterosclerosis.
4.Describir la composicin y la funcin de las lipoprotenas.
5.Describir los principios analticos para la determinacin del
colesterol total, colesterol de HDL y de LDL, apolipoprotenas y
triacilgliceroles plasmticos.
6.Calcular la concentracin de colesterol de VLDL y de LDL a
partir de las concentraciones de colesterol total, de colesterol de
HDL y triacilgliceroles.
INTRODUCCIN
Los dos lpidos de la sangre con un mximo inters en el
diagnstico clnico son el colesterol y los triacilgliceroles (TAG);
ambos se transportan en las lipoprotenas, que son partculas
globulares de alto peso molecular con un ncleo formado por
lpidos hidrofbicos -TAG y steres de colesterol-, los cuales
aportan la mayor parte de la masa de la partcula, y por una sola

capa superficial de molculas de fosfolpidos, colesterol y

protenas o polipptidos que rodean al ncleo y estabilizan la
partcula para que permanezca en solucin dentro del plasma. Las
lipoprotenas principales que circulan en el plasma humano son
los quilomicrones, las lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL),
las lipoprotenas de baja densidad (LDL) y las lipoprotenas de alta
densidad (HDL).
El colesterol es esencial para el crecimiento y la viabilidad
de las clulas de los organismos superiores; sin embargo, los
altos niveles de colesterol srico son considerados como un
importante factor de riesgo de enfermedad y muerte porque
contribuyen a la formacin de placas aterosclerticas. El colesterol
se transporta en la sangre por tres diferentes lipoprotenas: LDL,
HDL y VLDL. Los estudios epidemiolgicos han establecido con
claridad que mientras mayor sea el valor del colesterol-LDL mayor
ser el riesgo de enfermedad cardiaca aterosclertica; por el
contrario, mientras mayor sea la concentracin del colesterol-HDL
menor ser el riesgo de enfermedad cardiaca coronaria. En otras
palabras, las cifras elevadas de LDL son atergenas, en tanto que
las de HDL son protectoras, por lo que el clculo del cociente
colesterol-HDL/colesterol-LDL que es normalmente de 0.34
0.11 constituye un ndice de aterogenicidad.

74

En general, se cree que las lipoprotenas que contienen

apoB 100 son potencialmente atergenas.

ALTERACIONES DE LAS LIPOPROTENAS

PLASMTICAS Y ATEROGNESIS
Desde el punto de vista clnico se ha atribuido a
determinadas lipoprotenas el papel de factores esenciales
directos en el desarrollo o en la prevencin de ciertas
enfermedades, principalmente de tipo vascular. Las anomalas en
el transporte de lpidos ocurren bsicamente en los sitios de
produccin o en los de utilizacin de las lipoprotenas del plasma y
provocan varios tipos de hipo e hiperlipoproteinemias disminucin
o elevacin de los niveles plasmticos de lipoprotenas.
El anlisis de las lipoprotenas plasmticas tiene valor
diagnstico, ya que permite el reconocimiento de defectos
primarios -hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia familiares,
deficiencia familiar de lipoprotena lipasa o apoprotena CII,
etctera- y es de gran valor para describir la alteracin lipoproteica
subyacente a otro trastorno clnico, como la diabetes, la obesidad,
la hepatitis, el hipotiroidismo, el consumo de alcohol, el uso de
anticonceptivos orales.
Cabe destacar que la mayor parte de las hiperlipoproteinemias, aquellas que consisten en una elevacin de la
concentracin de colesterol de LDL, de VLDL y de Lp(a),
conllevan un alto riesgo de producir accidentes cardio y
cerebrovasculares, necrosis o prdida de la funcin en las
extremidades, lo cual se debe a que el colesterol es el agente
causal de la aterosclerosis subyacente en dichos padecimientos.
De ah el inters actual por el diagnstico temprano y el
tratamiento de estas hiperlipoproteinemias.

Se desconoce el mecanismo exacto por el cual la

hipercolesterolemia conduce a la aterosclerosis. Sin embargo, se
cree que al alterarse la relacin colesterol/fosfolpido que lleva
consigo un incremento en la viscosidad y maleabilidad de las
membranas se inducen cambios en el endotelio y en los
monocitos con un aumento en su migracin y adherencia
probablemente la primera anomala celular de la aterognesis.
Segn la hiptesis de respuesta a la lesin, la ms
aceptada sobre la patognesis de la aterosclerosis, cualquier
lesin en el endotelio o msculo liso de la pared vascular que
puede ser causada por la hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia,
el estrs mecnico de la hipertensin arterial, agresiones qumicas
como el tabaquismo, etctera altera la relacin existente entre el
endotelio vascular, las clulas del msculo liso, los monocitos, los
macrfagos, las plaquetas y los componentes de la sangre
circulante, en particular los lpidos, y genera una respuesta
inflamatoria fibroproliferativa, con la participacin de un gran
nmero de factores de crecimiento, citocinas y molculas
vasorreguladoras, que dan origen a las placas aterosclerticas.
Por otro lado, se ha observado que las partculas LDL
oxidadas por los macrfagos lo cual ocurre normalmente causan
lesin al endotelio, lo que puede ser, de manera particular,
atergeno. La formacin de anticuerpos contra LDL oxidadas
tambin puede ser importante en la formacin de la placa. Por
tanto, hay un inters clnico cada vez mayor en la funcin de los
antioxidantes, como las vitaminas C, E y el -caroteno. Los
estrgenos tambin pueden actuar como antioxidantes en la
prevencin de aterosclerosis. Inclusive, se ha visto que las
lipoprotenas HDL tienen efectos antioxidantes in vitro.
Tradicionalmente, las anomalas de los lpidos sanguneos
se han valorado con un examen global de colesterol y TAG. En la
actualidad estos datos son insuficientes para valorar
75

correctamente una hiperlipemia, por lo que se deben investigar

tambin las diferentes fracciones lipoproteicas.
FUNDAMENTO DE LAS DETERMINACIONES
La evaluacin de pacientes en los que se sospecha alguna
alteracin en los lpidos plasmticos puede incluir la medicin de
colesterol total y TAG y de una o ms lipoprotenas. Adems, la
cuantificacin de Lp(a), apoAI y apoB, o la actividad de la
lipoprotena lipasa u otras enzimas, est siendo ampliamente
valorada para incluirla como procedimiento clnico de rutina.
Determinacin del colesterol total. El colesterol total es igual
a la suma del colesterol contenido en las tres lipoprotenas que lo
transportan:

Determinacin de triacilgliceroles. El mtodo utilizado se

basa en la hidrlisis de los TAG por una lipasa y la determinacin
del glicerol liberado en la reaccin. Para ello, el glicerol es
fosforilado por la glicerol cinasa formando glicerol-3-fosfato, el
cual se oxida por la glicerolfosfato oxidasa a dihidroxiacetona
fosfato generando en la reaccin perxido de hidrgeno. La
peroxidasa cataliza la transferencia de oxgeno del perxido a un
aceptor que es cromgeno, como la 4-aminoantipirina (4-AAP) y el
3,5-dicloro-2-hidroxibencensulfonato (DHBS), que se colorean al
oxidarse. La absorbencia del cromgeno oxidado a 520 nm es
proporcional a la concentracin de TAG.
La reaccin completa se expresa:

Adems, el colesterol existe en el organismo en dos

fracciones: una en estado libre y otra esterificado 60 a 75%, por
lo que, para la determinacin del colesterol total, se utiliza una
serie de reacciones enzimticas en donde, en una primera
reaccin, los steres se hidrolizan dejando libre el grupo 3-OH del
colesterol. En la segunda reaccin este grupo se oxida y se
obtiene, como un producto, el perxido de hidrgeno, el cual, por
efecto de la peroxidasa, transfiere uno de sus oxgenos a un
aceptor cromgeno. La absorbencia del cromgeno 4benzoquinona-monoimino-fenazona) se determina a 520 nm y es
proporcional a la concentracin de colesterol. La reaccin global
es la siguiente:

Determinacin de colesterol-HDL. Por regla general, el

anlisis de las lipoprotenas del plasma requiere, primero, la
separacin de las clases de lipoprotenas y, segundo, la medicin
de la lipoprotena o del componente lipoproteico de inters.
La determinacin es relativamente simple si se precipitan
todas las lipoprotenas que contienen apoB100 VLDL, IDL, LDL y
76

Lp(a) a excepcin de las HDL con un polianin, generalmente

glucosaminoglicanos con carga negativa heparina, dextran o
fosfotungsteno y un catin bivalentepor lo comn, Mn2+ o Mg2+
y se determina el colesterol-HDL que queda en solucin por el
mtodo descrito para el colesterol total.
La relacin colesterol total/colesterol-HDL se considera
como un indicador de riesgo coronario. Normalmente esta relacin
es menor de cinco; mientras menor sea el valor, mejor ser el
pronstico para el paciente.
Determinacin de colesterol-VLDL. En general, la
concentracin de TAG en el plasma sanguneo proporciona un
parmetro excelente de la concentracin de las lipoprotenas ricas
en TAG como las VLDL. Esta apreciacin parte de que en
condiciones normales de ayuno no se encuentran quilomicrones
en el plasma y la proporcin TAG/colesterol de la VLDL es
invariable de 5:1 en mg/dl o de 2.2:1 en mmol/l, de tal modo
que la cuantificacin de la concentracin de TAG es suficiente
para calcular la concentracin de la VLDL con un porcentaje de
error pequeo en la estimacin. Si la concentracin de colesterolVLDL es la quinta parte de la concentracin de TAG cuando sta
se expresa en mg/dl, entonces:

o si las concentraciones se expresan en mmol/l:

Esta frmula no es apropiada para muestras con una

concentracin de TAG mayor a 400 mg/dl (10.390 mmol/l) o en
muestras que tengan quilomicrones.

Determinacin del colesterol LDL. Aproximadamente las dos

terceras partes del colesterol plasmtico total son transportadas
en las LDL de tal manera que, la concentracin de este lpido
proporciona una medida bastante precisa del nivel de LDL en la
mayora de las personas. Por ello es posible estimar con bastante
exactitud, en casi todos los casos, la concentracin de LDL sobre
la base del conocimiento de la concentracin de VLDL (estimada
por los TAG) y la del colesterol total. No obstante, para estimar
con mayor exactitud la concentracin de LDL debe cuantificarse la
concentracin de colesterol de las HDL, lo cual es relativamente
simple. Las LDL se estiman como sigue:

Si se determina la concentracin de lpidos en moles en

lugar de en peso y se sustituye el valor estimado de VLDL a partir
de la concentracin de TAG, la frmula equivalente se transforma
en la expresin descrita por Fridewald (1972):

Otra forma sencilla de determinacin indirecta del

colesterol-LDL es el mtodo del polivinilsulfato (PVS). El PVS
provoca la precipitacin de las LDL y deja en el sobrenadante las
VLDL y las HDL. El valor del colesterol-LDL se calcula restando al
valor del colesterol total (colesterol en VLDL, LDL y HDL) el valor
del colesterol en el sobrenadante de la precipitacin (colesterol en
VLDL y HDL).

La determinacin de LDL se puede hacer directamente

mediante procesos inmunoqumicos que requieren una especial
destreza y un equipamiento especfico, por lo que resulta de difcil
77

adaptacin a fines acadmicos. La tcnica consiste en hacer

reaccionar esferas de ltex revestidas con anticuerpos contra
apolipoprotenas de las LDL. Estas partculas se separan del resto
y se determina el colesterol.
Quilomicrones. Cuando existen quilomicrones pueden ser
detectados si se deja el tubo de ensayo que contiene el plasma
sanguneo en el refrigerador durante una noche. Los
quilomicrones de mayor tamao, pero no las VLDL, se ubicarn
en la superficie del tubo formando una capa cremosa que puede
detectarse visualmente. La presencia de quilomicrones en el
plasma en ayunas se considera anormal.

Determinacin de apoAI y apoB. La determinacin de

apolipoprotenas, particularmente la apoA y la apoB, es un dato
complementario para la cuantificacin de otros componentes
lipoproteicos y ayuda a evaluar si un individuo tiene un riesgo
aumentado de cardiopata coronaria, sobre todo en los estados
hiperlipidmicos donde hay un aumento de TAG en los
quilomicrones o en las VLDL, y cuando las LDL y HDL contienen
menos cantidad de steres de colesterol y ms TAG en su ncleo
debido al intercambio de los componentes de stos entre las
lipoprotenas. En tales circunstancias, la cuantificacin de las
apoprotenas proporciona clculos ms seguros y tiles de la
concentracin de partculas lipoproteicas.

Determinacin de Lp(a). La Lp(a) se determina directamente

por mtodos inmunoqumicos al igual que las LDL y, como ya se
dijo, su concentracin constituye un factor independiente de riesgo
coronario. Normalmente la Lp(a) se precipita junto con las
lipoprotenas que contienen apoB, por lo que la medicin del
colesterol de la LDL incluye la contribucin de colesterol de la
Lp(a).

78

Figura 9. Metabolismo de lpidos.

Colesterol

Acido Biliar

79

La mayora de los mtodos de cuantificacin, todos los cuales

requieren un equipamiento especial, se basan en la identificacin
inmunolgica de las apolipoprotenas. La tcnica ms usada es el
inmunoanlisis ligado a enzimas y de fluorescencia (ELIHDL)

Material
Gradilla con 6 tubos de ensayo.
Pipetas de 5 y 10 ml.
Pipetas automticas
Puntas para pipetas automticas
Solucin de enzimas para colesterol: amortiguador Tris 100
mmol/l, pH 7.7; MgCl2 50 mmol/l, 4-amino-antipirina 1 mmol/l,
fenol 6 mmol/l; colesterol esterasa 160 U/l, colesterol oxidasa
100 U/l y peroxidasa 2 000 U/l.
Patrn de colesterol de 200 mg/dl (5.17 mmol/l) para colesterol
total.
Solucin de enzimas para TAG: amortiguador Tris 100 mmol/l,
pH 6.7, ATP 0.7 mmol/l, MgCl2 4 mmol/l, 4-aminoantipirina 0.4
mmol/l, 3,5-dicloro-2-hidroxibencen-sulfonato 0.8 mmol/l, lipasa
1000 U/l; glicerol cinasa 1000 U/l, glicerol fosfato oxidasa
4000U/l y peroxidasa 2000 U/l.
Patrn de TAG (triolena) de 200 mg/dl (2.8 mmol/l)
Reactivo precipitante para HDL: sulfato de dextrn 10g/l, MgCl2
0.5 mol/l.
Espectrofotmetro a 520

Mtodo
Determinar colesterol total, TAG y colesterol-HDL como se
describe a continuacin:
1.- A un tubo eppendorf que ya contiene 20 l de la solucin
precipitante de VLDL y LDL para determinacin de colesterolHDL; agregarle 50 l ml de plasma; mezclar perfectamente y
dejar reposar 10 minutos. Centrifugar 10 minutos a 3 000 rpm. El
sobrenadante libre de lipoprotenas, excepto HDL que contina
siendo soluble, ser utilizado para determinar el colesterol.
2.-.Para la determinacin de colesterol total y colesterol-HDL
preparar la siguiente serie de tubos:

Preparacin de los tubos (volumen en ml)

Tubo
Estndar de
colesterol
Plasma
Sobrenadante con
HDL

10 l

10 l

20 l

Agregar a todos los tubos 1 ml de solucin de enzimas para

colesterol. Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 10
min.

80

1 ml de solucin de enzimas para colesterol

Preparacin de los tubos (volumen en ml).

Tubo
Estndar de TAG
Plasma

1
10 l
-

2
10 l

Agregar a todos los tubos 1 ml de solucin de enzimas para TAG.

1 ml de solucin de enzimas para TAG

10 l
Estn
dar de
colesterol

10 l
Plasma

20 l
Sobrenadante con
HDL

4.-Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro a 520 nm;

calibrar a cero con el blanco.
Para determinar los TAG preparar la siguiente serie de tubos:

10 l Estndar de
TAG

10 l Plasma

Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 10 min.

5. Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro a 520 nm;
calibrar a cero con el blanco.

81

Resultados
1. De acuerdo al estndar de colesterol, calcular la concentracin
de colesterol correspondiente a los tubos 2 y 3 (tubos que
contienen el plasma y el sobrenadante) de la siguiente manera:

Referencias
1. Allain CA, Poon LS, Chan CSG, Richmond W, Fu PC.
Enzymatic determination of total serum cholesterol. Clin Chem.
1974; 20: 470-475.
2. Montgomery R. Bioqumica. Casos y texto. 6a.ed. Barcelona:
Editorial Harcourt-Brace; 1998: 332-389.

Cs = Concentracin del estndar en mg/dl o mmol/l.

As = Absorbancia del estndar.
Ap = Absorbancia del problema.

3. Pennachio D. Lineamientos para la deteccin

hipercolesterolemia. Atencin Mdica. 1997; 10/2: 30-43.

2.-Calcular la concentracin de TAG de la siguiente manera:

4.

Cs = Concentracin del estndar en mg/dl o mmol/l.

As = Absorbencia del estndar.
Ap = Absorbencia del problema
3.-Compare sus resultados con los valores normales del
colesterol total, del colesterol-HDL y de los triacilglicridos en el
plasma.
4.-Calcular la concentracin de colesterol VLDL por la frmula:

5.-Calcular la concentracin de colesterol LDL a partir de las

concentraciones de colesterol total, HDL y VLDL.
6.-Estimar el cociente colesterol-HDL/colesterol-LDL
y de
colesterol total/colesterol-HDL (ndices aterognicos).
7.-Analizar el significado de los datos obtenidos y hacer un
informe de los resultados y de las conclusiones que de stos se
deriven.

de

Alba Zayas EL, Pereira RG, Aguilar BA. Lipoprotena

(a):estructura, metabolismo, gentica y mecanismos
patognicos. Rev Cubana Invest Biomed. 2003; 22(1): 32-40.

5. Masa-aki K, Rader JD. Gene therapy for lipid disorders. Curr

Control Trials Cardiovasc Med. 2000; 1:120-127.
6. Russet G.W. Dextran sulfate-Mg2+ precipitation procedure for
quantitation of HDL cholesterol. Clin Chem. 1982; 28(6): 137988.
7. Samaniego V, Lpez D. Lpidos. Sinopsis del informe del
panel de expertos sobre niveles de colesterol sanguneo en
nios y adolescentes. Aterosclerosis. 1999; 2(1): 22-24.
8. Vogel AA. Coronary risk factors, endothelial function, and
atherosclerosis. Clin Cardiol. 1997; 20:426-432.
9. Velzquez CA. Papel de las especies reactivas del oxgeno en
la arterioesclerosis. IATREIA. 2000; 13 (3) Septiembre.
10. Mohammed HM, Frohlich J. Effects of dietary phytosterols on
cholesterol metabolism and atherosclerosis: clinical and
82

experimental evidence. Am J Med. 1999; 107: 588-592

83

Prctica 7

Integracin Metablica
Tiempo de prctica: 3 horas

componentes
metablicos.

Objetivos

Aproximadamente del 40 al 45% de nuestra ingesta

calrica proviene del consumo diario de carbohidratos
complejos los cuales al ser digeridos dan lugar a los diferentes
monosacridos entre los que se encuentra la glucosa, la cul
se distribuye por la sangre a las clulas para poder captar la
glucosa, siendo la principal fuente de energa. Algunos tipos
celulares son dependientes de la liberacin de insulina por el
pncreas como es el caso de las clulas musculares. Si la
insulina no funciona adecuadamente, la glucosa se queda en
el flujo sanguneo causando elevacin de los niveles de
glucosa en la sangre y a esto se le denomina hiperglucemia;
una de las enfermedades que se caracteriza por la
hiperglucemia en sus primeras etapas es la diabetes mellitus.
La diabetes mellitus est caracterizada por una hiperglucemia
resultante de defectos en la secrecin de insulina, en la accin
de la insulina o en ambas. La hiperglucemia crnica de la
diabetes est asociada a lesiones, disfuncin y fallo de varios
rganos, especialmente de los ojos, los riones, el corazn y
los vasos sanguneos.

1.-Que el alumno pueda integrar las vas metablicas de los

carbohidratos, de los lpidos y protenas en (condiciones
normales) en un paciente sano.
2.-Que el alumno reconozca los sitios denominados
encrucijadas metablicas y las enzimas de las vas
reguladoras.
3.-Que el alumno pueda correlacionar el papel que tienen las
hormonas en la regulacin de las vas.
4.-Que el alumno sea capaz de analizar los datos de las
pruebas clnicas en un sujeto normal.
5.-Que el alumno relacione que vas se encuentran alteradas
en un paciente diabtico.
INTRODUCICON
Los alimentos que ingerimos deben estar constituidos
por los 6 componentes bsicos que son protenas,
carbohidratos, lpidos, vitaminas, minerales y agua, la cantidad
que se requiere ingerir de cada uno de los componentes vara
de acuerdo a la constitucin y la actividad fsica que se realiza,
tanto la falta como en el exceso de consumo de alguno de los

bsicos

conlleva

diversos

trastornos

Varios procesos patognicos estn implicados en el

desarrollo de la diabetes. Estos van desde una destruccin
autoinmunolgica de las clulas del pncreas, con la
consiguiente deficiencia de insulina, hasta anormalidades, en

84

las que el pncreas no produce suficiente insulina o la que

produce no es eficiente. La accin deficiente de la insulina en
los tejidos diana es la responsable del metabolismo anmalo
de los carbohidratos de carbono, grasas y protenas en la
diabetes.
La accin deficiente de la insulina ocasiona una
respuesta inadecuada en uno o ms puntos de la compleja
trama metablica en la que esta hormona tiene papel
regulatorio.
Frecuentemente coexisten en el mismo paciente una
inadecuada secrecin de insulina as como defectos de la
accin de sta, en la actualidad no se sabe si una de estas
anormalidades es la consecuencia o la causa de la otra. En
cualquier caso, el resultado es la hiperglucemia.
La gran mayora de los casos de diabetes pueden
incluirse en dos amplias categoras etiopatognicas. En el
primer caso (diabetes de tipo I) la causa es una deficiencia
absoluta en la secrecin de insulina. Los individuos con alto
riesgo de desarrollar este tipo de diabetes pueden ser a
menudo identificados mediante evidencias serolgicas de un
proceso autoinmune que se produce en los islotes
pancreticos y tambin mediante marcadores genticos. En la
segunda categora (diabetes de tipo II), mucho ms
prevalente, la causa es una combinacin de una resistencia a
la accin de la insulina y de una inadecuada respuesta
secretora compensadora. La diabetes tipo II se caracteriza por
estar presente muchos aos antes de ser detectada una
hiperglucemia sin sntomas clnicos (sed, prdida de peso),

pero suficiente para ocasionar cambios patolgicos y

funcionales sobre los rganos blanco. Durante este perodo
asintomtico, es posible demostrar trastornos en el
metabolismo de los carbohidratos midiendo la glucosa
plasmtica en ayunas o despus de una sobrecarga de
glucosa por va oral.
El exceso en la ingesta de carbohidratos no solamente
mantiene la reserva de energa en forma de glucgeno sino
que tambin el exceso de carbohidratos es convertido en
triacilgliceroles. En el hgado los triacilgliceroles se sintetizan a
partir de acil CoA y glicerol 3-fosfato siendo empaquetados
con apoprotenas y en lipoprotenas de muy baja densidad
(VLDL), secretados al torrente sanguneo siendo almacenados
en tejido adiposo. Para su consumo los triacilgliceroles son
hidrolizados a glicerol y cidos grasos. En la dieta es
importante la presencia de lpidos ya que son precursores de
diferentes componentes de la clula como los fosfolpidos, uno
de los lpidos que tiene una gran importancia en la clula es el
colesterol, ya que proporciona rigidez a las membranas
celulares y es precursor de las sales biliares as como de
hormonas esteroideas. El colesterol se puede obtener por la
alimentacin y por sntesis del propio organismo, siendo las
clulas hepticas y las suprarrenales las de mayor sntesis.
Para llevar a cabo la sntesis de colesterol se requiere la
presencia de acetil-CoA el cual proviene de la degradacin de
glucosa, cidos grasos y aminocidos por lo cual se denomina
a la acetil-CoA la encrucijada metablica.
El colesterol es insoluble en agua por lo que
transportado en la sangre por tres lipoprotenas que son de

85

muy baja densidad (VLDL), de baja densidad (LDL) y las de

alta densidad (HDL). Los niveles normales de colesterol total
en sangre en un adulto son de < 200 mg/dl y cuando estos
valores se ven aumentados se asocian a la formacin de
placas aterosclerticas que pueden ocluir los vasos
sanguneos y como consecuencia provocar infarto al
miocardio y alteraciones cardiovasculares.

Otro de los componentes del metabolismo nitrogenado

son los nucletidos. Las purinas y las pirimidinas, que son
esenciales para la sntesis de nucletidos y cidos nuclecos.
Los nucletidos son precursores del DNA y el RNA, as
como tambin forman parte de la estructura de muchas
coenzimas adems de ser componentes del metabolismo
energtico.

La cuantificacin de las LDL representa un papel clave

en la esclerosis coronaria ya que concentraciones elevadas
indican desarrollo de la aterosclerosis.

La degradacin de las purinas no genera energa y el

producto de la degradacin del anillo purnico es el cido
rico, que se elimina por la orina, tiene una solubilidad limitada
por lo que su exceso da como resultado la formacin de
cristales en regiones del organismo como pueden ser los
dedos gordos del pie, trastorno que se conoce como gota.

En el caso de las HDL al disminuir su concentracin

aumenta el riesgo de desarrollar aterosclerosis.
Las protenas constituyen la fuente primaria del
metabolismo del nitrgeno en el organismo.
Los aminocidos producto de la digestin de las
protenas que se consumen en los alimentos, son utilizados
para la sntesis de protenas y de compuestos nitrogenados o
se puede oxidar para producir energa.
El hgado es el rgano principal en donde se realiza la
oxidacin de los aminocidos. El nitrgeno de los aminocidos
forma amoniaco el cual es toxico para el organismo. El
amoniaco y los grupos amino se convierten en urea en el
hgado, que no es toxica y se elimina fcilmente por la orina ya
que es hidrosoluble.

Los valores elevados de cido rico se presentan en:

ingestin de alimentos ricos en nucleoprotenas, insuficiencia
renal, azoemias prerrenales.
Otro de los componentes del metabolismo nitrogenado es la
creatinina que en el msculo en su forma fosorilada sirve
como almacn de alta energa y se transforma con facilidad en
ATP por la enzima creatina fosfocinasa. La creatina fosfato es
inestable y se cicla espontneamente forma la creatinina que
se elimina en la orina. La produccin de creatinina es
proporcional a la masa muscular corporal. La cantidad de
creatinina que se elimina diariamente puede utilizarse como
indicador de la normalidad de la funcin renal.

86

Figura 10. Figura que explica las diferentes vas de manera general y como estas se convergen.

87

MATERIALES
Determinacin de glucosa
Glucmetros One Touch Ultra.
Tiras reactivas One Touch Ultra
[Glucosa oxidasa (Aspergillus nger)].
Lancetas estriles
Recipiente para material punzo cortante.
Recipiente para material biolgico-infeccioso.
Jabn para manos.
Torundas de algodn con alcohol.
Determinacin de colesterol y triacilgliceroles.
Dichas determinaciones solo se realizaran al tiempo 0 y
a los 120 minutos.
Accutrend Roche para determinacin de colesterol y
triacilgliceroles.
Tiras reactivas para determinacin de colesterol.
Tiras reactivas para determinacin de triacilgliceroles.
Lancetas estriles
Las determinaciones de urea, creatinina y cido rico, se
realizaran en orina.
Las muestras de orina se realizaran solo al tiempo 0 y a
los 120 minutos.
Nota: La muestra de orina del tiempo 0 es a la que se le
realizar el EGO

La muestra de orina deber ser del alumno a quien se

le haya determinado glucosa, colesterol y triacilgliceroles para
poder discutir todos los valores en conjunto y poder enlazar en
un mismo individuo el efecto que tiene la dieta sobre el
metabolismo.
Determinacin de urea
Pipetas automticas (10 a 200l)
Puntas para micropipetas
Propipetas.
Reactivo para determinacin de urea.
Estndar de urea (50 mg/dl).
Espectrofotmetro.
Celdas.
Agua destilada.
Determinacin de cido rico
Pipetas de 5 ml.
Gradilla con 2 tubos de ensaye
Reactivo para cido rico
Estndar de cido rico (6 mg/dl)
Determinacin de creatinina
Reactivo para determinacin de creatinina
Estndar de creatinina (2 mg/dl).
Espectrofotmetro.
Celdas.
METODO

88

Determinacin de glucosa
Podr participar un integrante por equipo, de manera que en
todo el grupo se puedan trabajar las diferentes condiciones.

3.-Acerque y mantenga la gota de sangre en el canal estrecho

del borde superior de la tira reactiva.

1.-Dos sujetos, uno de los cuales consumir una dieta rica en

carbohidratos y el otro una dieta rica en protenas.
2.-A cada uno de los sujetos se les determinar la
concentracin de glucosa en sangre total por medio de un
glucmetro en los siguientes tiempos:
0 minutos (antes de ingerir los alimentos).
30 minutos, 60 minutos y 120 minutos, despus de ingerir
los alimentos.
Para realizar la determinacin de glucosa en sangre total
seguir los siguientes pasos:
1.- Lave sus manos y limpie con una
torunda de algodn con alcohol la zona
donde se realizar la puncin.

2.- Aplique un suave masaje a la punta de

su dedo que le ayudar a obtener una
gota de sangre adecuada No exprima en
exceso el rea de puncin.

4 a) Muestra adecuada
b) Muestra insuficiente

5.- Inserte la tira reactiva en el puerto de

anlisis, con el extremo de las barras de
contacto de primero y mirando hacia
arriba. Empjela hasta que no avance
ms.

6.- Hasta que la ventana de confirmacin este completamente

llena de sangre, antes que el medidor comience la cuenta
regresiva.
7.-Lectura el resultado de la prueba de
glucosa de su sangre aparecer
despus de que el medidor cuente en
forma regresiva de 5 a 1.

89

Anotar el resultado en la tabla correspondiente

Determinacin de colesterol y triacilgliceroles
8.-Es importante desechar con mucho cuidado la lanceta
usada luego de cada uso, con el fin de evitar que se
produzcan lesiones accidentales con las puntas de la
lancetas, colquelas en un recipiente para material punzo
cortante.
9- Deseche las tiras reactivas en una bolsa para material
biolgico-infeccioso junto con las torundas de algodn
empleadas en la prctica.
10.-Con los datos obtenidos completar el cuadro 10.1 y hacer
una grfica de todas las variantes en papel milimtrico.
Cuadro 7.1 Resultados
Fecha:_________________
Nombre:
Edad:
Tiempo
(min.)
0
30
60
120

Sexo:
[Glucosa mg/dl]

1.-Lavarse las manos cuidadosamente

esto es con la finalidad de retirar residuos
de crema o grasa en las manos para evitar
determinaciones errneas principalmente
cuando se realiza la determinacin de
triacilgliceroles.

2.- Con la ayuda de unas pinzas extraer una tira reactiva del
envase y taparlo inmediatamente para evitar que las tiras se
sequen.

3.-Con la tapa cerrada inserte en la

ranura, en la direccin indicada por la
flecha, la tira reactiva con el cuadrado
amarillo hacia arriba hasta que encaje y
deje verse la marca TG o CHOL impresa
en la tira reactiva.

4.-Frote y masajee la yema del dedo para

facilitar la extraccin y aplicacin de la
sangre.

90

5.-Con la lanceta introduzca para hacer la puncin y realice la

toma de muestra.

NOTA: Tener cuidado al realizar la determinacin, ya que

solo cuentan con una tira reactiva para cada prueba.

6.-Aplicar directamente la gota de sangre

a la tira reactiva

8.-Anote la lectura
Determinacin de urea en orina
La urea presente en la muestra reacciona con el o-ftaldehdo
en medio cido originando un complejo coloreado puede
identificarse espectrofotomtricamente.

7.-Abrir la tapa y colocar la tira reactiva

con la muestra de sangre
La urea es estable 5 das a 2-8 C.
1.-Para la determinacin de urea en orina, tomar la muestra
como se esquematiza en el cuadro.

8.-Bajar la tapa

9.-Realice la lectura de la concentracin de colesterol y

triacilgliceroles segn sea el caso.

Tubo
Muestra
Estndar
Solucin reactiva
para urea

1
10 l
-1 ml

2
-10 l
1 ml

La determinacin se realiza en tubos de ensaye

Estndar de urea (50 mg/dl).
Mezclar e incubar 20 minutos a temperatura ambiente.

91

1ml
Sol reactiva para urea

Determinacin de creatinina en orina

1.-Para la determinacin de creatinina en orina, tomar la
muestra como se esquematiza en el cuadro.
Celda
Orina
Estndar
Solucin reactiva
de creatinina

10 l
Muestra

1
100 l
1 ml

2
100 l
1 ml

10
Estandar
1ml
Sol
reactiva
para
urea

100 l
orina

TUBO 1

1ml sol.
Reactiva de
creatinina

100 l Estndar

TUBO 2
CELDA1

Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro frente a

blanco de reactivos a 520 mn.
El resultado se obtiene en mg/dl

1ml sol.
Reactiva de
creatinina

CELDA2

Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro frente a

blanco de reactivos a 492 mn.

92

A Muestra X [Estndar] = [Creatinina]

A Estndar

El resultado se obtiene en mg/dl.

Estndar de creatinina (2 mg/dl).

El resultado se obtiene en mg/dl.

La determinacin se realiza directamente en las celdas con la
finalidad de tomar la lectura de las absorbancias exactamente
a los 30 (A1) y a los 90 (A2) segundos.
Mezclar y poner en marcha el cronmetro, anotar las
absorbancias a los 30 (A1) y a los 90 (A2) segundos.
Leer frente blanco de reactivos en el espectrofotmetro a
492 nm.
1ml
sol.

Determinacin de cido rico en orina

1.-Para la determinacin de cido rico en orina, tomar la
muestra como se esquematiza en el cuadro.
Tubo
Orina
Estndar
Solucin reactiva
de cido rico

1
100 l
1 ml

2
100 l
1 ml

React
iva
de
1ml sol. Reactiva de
cido rico

100 l orina

cido rico

100 l Estndar

La determinacin se realiza en tubos de ensaye.

Estndar de cido rico (6 mg/dl)Mezclar e incubar 10 minutos
a temperatura ambiente. Leer la absorbancia (A) en el
espectrofotmetro frente a blanco de reactivos a 520 mn.
Clculo de la concentracin de cido rico.
A Muestra X [Estndar] = [cido rico]

TUBO 1

TUBO 2

Calcular el incremento de la absorbancia A = A2 A1.

Con las diferencias de absorbancias anotadas A, aplicar la
siguiente ecuacin:

Estndar

El resultado se obtiene en mg/dl.

Referencias
1. Koolman J, Roehm KH (2004). Bioqumica Texto y Atlas: 3
Edicin, Ed. Mdica Panamericana, pp.: 158, 308-310.

93

2. Smith, C; Marks, A. D. & Lieberman, M. (2005). Marks

Basic Madical Biochemestry. 2a Edicin. Ed. Lippincott
Williams & Wilkins. Pag. 24-26.
3. Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Qumica Clnica. Teora,
anlisis y correlacin. 3 Edicin. Ed. Pesce Kaplan
Publicaciones, Captulo: 32.
4. NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-015-SSA2-1994, Para
la prevencin, tratamiento y control de la diabetes mellitus en
la atencin primaria. Listado de Normas Oficiales Mexicanas
de la Secretara de Salud.

5. MODIFICACIN a la Norma Oficial Mexicana NOM-015SSA2-1994, Para la prevencin, tratamiento y control de la

diabetes. Listado de Normas Oficiales Mexicanas de la
Secretara de Salud.
6. Manual para el manejo de las insulinas 2001. 2 Edicin.
Subsecretara de Prevencin y Proteccin de la Salud. Centro
Nacional de Vigilancia Epidemiolgica. SSA. Mxico.
7. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-030-SSA2-1999, Para
la
prevencin,
tratamiento
y
control
de
la
hipertensin arterial. Listado de Normas Oficiales Mexicanas
de
la
Secretara
de
Salud.

94

Prctica 8
Examen general de orina (EGO)
Objetivos
1.-Que el estudiante sea capaz de interpretar o analizar los
resultados de un examen general de orina (EGO).
2.-Que el estudiante sea capaz de correlacionar los resultados
del examen general de orina (EGO) en un sujeto sano.

En una tira reactiva se llevan a cabo las siguientes

determinaciones:
Urobilingeno, glucosa, cuerpos cetnicos, bilirrubina,
protenas, nitritos, leucocitos, indicios de sangre, pH y densidad.

3.- Que el estudiante conozca la utilidad del empleo de las tiras

reactivas para un diagnstico presuntivo de las diversas
patologas.

La realizacin del Examen General de Orina (EGO),

proporciona informacin que puede ser til en el diagnstico
diferencial de enfermedades que se pueden presentar no solo a
nivel renal, sino tambin a nivel heptico, la diabetes as como la
preeclampsia.

INTRODUCICION

Examen Fsico

Los riones excretan de 0.5 a 10 l aproximadamente de

orina al da, siendo 0.5 l el mnimo necesario para eliminar los
productos del metabolismo, en condiciones fisiolgicas normales
la orina no presenta glucosa, as como tampoco aminocidos y
pueden presentarse mayores cantidades de aminocidos debido
a diversas fisiopatologas el rin permite la salida de diferentes
compuestos como protenas.

El examen comprende la evaluacin de color, olor,

volumen y densidad.
Color: el color normal de la orina es amarilla y transparente, la
presencia de otros colores sugieren una patologa.

El anlisis de orina se puede llevar a cabo con tiras

reactivas, stas contienen los reactivos y las enzimas en un
soporte de plstico que al interaccionar con la orina se
desencadena una reaccin que se manifiesta con un producto
coloreado.

95

A continuacin se presentan una serie de colores que

puede presentar la orina y su posible causa
Color

Posible causa

Plido

Orina diluida

Obscuro

Fosfatos,

uratos,

leucocituria,

oxalatos,

bacteriruria,

contaminacin fecal.
Blanquecino

Leucocituria, lipiduria y quiluria

Amarillo-naranja

Orina

concentrada

la

presencia de bilirrubina
Amarillo verdoso

Presencia

de

bilirrubina-

biliverdina
Rojizo

Hemoglobina,

eritrocituria,

mioglobinuria,

porfiria,

contaminacin

menstrual,

as

como ingestin de betabel o

tratamiento con rifampicina
Caf-negruzco

Metahemoglobina y melanina

El olor de la orina en condiciones normales es

caracterstico, sin embargo algunos padecimientos pueden
alterarlo
Olor amoniacal
Olor a rancio
Olor a ratn
Jarabe de arce
Olor a pies

Infeccin urinaria
Tirosinemia
Fenilcetonuria
Enfermedad de jarabe de arce
Acidemia glutrica

El volumen de la orina solo es influido por la ingesta de

agua. Un adulto puede presentar un volumen urinario de 600 a
2,000 ml al da, sin embargo algunas patologas pueden
aumentar el volumen de orina como es el caso de la diabetes,
tambin la diuresis osmtica, por el contrario en algunos casos el
volumen de excrecin puede ser menor y esto como
consecuencia de la obstruccin del tracto urinario o la
disminucin del volumen plasmtico.
Gravedad o densidad especfica: Indica la cantidad relativa de
solutos que contiene un volumen definido de orina, del 70 al 80 %
de estos solutos corresponde a la urea.
Electrolitos como el sodio, cloro, urea, fosfatos y sulfatos
intervienen de manera importante en la densidad de la orina.
El examen qumico comprende: pH, protenas, glucosa,
cetonas, hematuria, bilirrubina, urobilingeno, nitritos y
leucocitos.
pH: Riones y pulmones trabajan de manera equilibrada
para mantener un equilibrio cido-base en todos los lquidos
corporales.
La orina es normalmente cida, los valores de pH oscilan
entre 4.5 a 8.5

96

Alteraciones del pH urinario

Disminucin en el pH

Aumento en el pH

Acidosis metablicas

Ingestin de bicarbonato

Dietas ricas en protenas

Utilizacin de acetozolamida

Cetoacidosis diabtica

Neomicina kanamicina

Alcalosis hipokalmica

Kanamicina

Protenas: Las protenas circulantes acceden a las

clulas renales y no deben de excretarse ms de 150 mg de
protena en la orina de 24 horas, de esta cantidad
aproximadamente la tercera parte es albmina y el resto se
refiere a , y -globulinas.

Glucosa: Se presentan cantidades detectables de glucosa en

la orina, cuando los valores de glucosa srica se encuentran por
arriba de los 180 mg/dl, debido a que superan la capacidad de
reabsorcin tubular.
Cetonas: La presencia de cuerpos cetnicos como el acetato
y el hidroxibutirato productos del metabolismo de cidos grasos,
refieren algn defecto en la utilizacin de los carbohidratos de la
dieta, por lo que se asocia a diabetes mellitus descontrolada.
Sangre: La tira reactiva positiva ndica tres posibilidades

Hematuria: La presencia de clulas sanguneas en orina

y puede presentarse en traumatismos de los rganos
urinarios,
lesiones
neoplsicas,
hemofilia,
glomerulopatas,
clculos,
lupus
eritematoso
generalizado, as como en padecimientos hematolgicos y
pacientes que utilizan anticoagulantes.

Mioglobinuria: Indica la presencia de mioglobina en orina

y es una protena que se libera de las clulas musculares
y la patologa asociada es el dao muscular severo que
puede ser causado por convulsiones, ejercicio
prolongado, shock elctrico.

Hemoglobinuria: Es secundaria a crisis hemolticas de

cualquier etiologa

La protena de Tamm-Horsfall (uromucoide) se investiga

para confirmar si el sitio de sangrado se localiza a nivel renal.
La presencia en la orina de un exceso de albmina es un
indicador de lesin glomerular o tubular.
Por la cantidad de protena excretada se puede clasificar en:
Proteinuria leve: menos de 1 gr/da
Proteinuria moderada: entre 1 y 4 gr/ da
Proteinuria grave: mayor de 4 gr por da
Patologas que presentan proteinuria

Glomerulonefritis
Enfermedad renal poliqustica
Fiebre
Diabetes mellitus

Lupus eritematoso generalizado

Sndrome nefrtico
Intoxicacin con mercurio, opiceos
Obstruccin crnica de las vas urinarias
Trombosis de la vena renal

Bilirrubina: Una reaccin positiva indica enfermedades

hepticas. La presencia de trazas refiere realizar una
investigacin con enzimas hepticas.

97

Este metabolito proviene de la hemoglobina de los eritrocitos que

son destruidos en el sistema retculo endotelial distribuido en
todo el organismo, la Hb es transportada al hgado donde se lleva
a cabo su conjugacin, misma que le permite ser filtrada a travs
del glomrulo renal. Por el contrario la bilirrubina no conjugada o
indirecta no es capaz de pasar a la orina.

Leucocitos y bacteriuria: Se aceptan 5 clulas por

campo y cuando esta cifra es superada se sugiere infeccin, la
presencia de leucocitos en orina, se denomina piuria.
Las tiras reactivas detectan a estas clulas por la presencia de
esterasas producidas por los neutrfilos. La leucocituria es muy
valiosa para detectar infeccin.

Urobilingeno: ste deriva principalmente de la

bilirrubina transformada por accin de bacterias intestinales,
parte del urobilingeno es excretada por las heces y una mnima
fraccin es removida por el hgado, llevado al rin para ser
excretada y finalmente dar color a la orina.

Material

Se encuentra en la orina cuando hay un aumento de

bilirrubina no conjugada en sangre, por ejemplo en anemias
hemolticas.
Alteraciones del urobilingeno y la bilirrubina
Color

Urobilingeno

Normal

Enfermedad

Enfermeda

Enfermedad

hemoltica

d heptica

obstructiva

Incremen

Incremen

Bajo

tado

tado

ausente

Negativa

Positiva

Vaso con tapa para la muestra de orina

Muestra de orina
Tira reactiva para examen general de orina
Recipiente para desechos biolgicos
Mtodo
1.-Para la toma de muestra: El alumno deber recolectar del
chorro intermedio de la orina y deber ser la primera orina de la
maana
2.-Una vez obtenida la muestra, observar el color y la claridad de
la muestra.

3.-Tomar con una pinza la tira reactiva.

4.-Poner en contacto la tira reactiva con la orina evitando el
exceso de la misma. Leer los resultados de acuerdo con la
etiqueta de colores del frasco.
5.-Anotar los datos en la tabla de resultados.

Nitritos: Su presencia en orina sugiere la posibilidad de

infeccin urinaria, incluso en pacientes asintomticos. El cido
ascrbico puede dar resultados falsos negativos y esto no indica
ausencia de infeccin, ya que algunos grmenes no producen
nitritos. La enzima reductasa bacteriana metaboliza los nitratos
urinarios en nitritos, lo que indica presencia de bacterias.

NOTA: Debido a los horarios en que se realizan las prcticas

y considerando que en la prctica de integracin se requiere
de una muestra de orina, la determinacin de EGO se
realizara en dicha prctica con la muestra del tiempo cero,
sin olvidar las condiciones en que debe ser tomada la
muestra, sin embargo por fines prcticos no se podr
cumplir con este requisito para todos los grupos.

urinario
Bilirrubina
urinaria

Negativa

Positiva

negativa

98

Referencias
1. Diana Nicoll; Stephen McPhee; Michael Pignone. Manual de
pruebas diagnosticas. Manual Moderno. 4. Edicin.
2. Jacques Wallch. Interpretacin clnica de las preubas de
laboratorio. Masson. 4. Edicin
3. G. Ruz reyes; A. Ruz Argelles Fundamentos de
interpretacin clnica de los examenes de laboratorio., 2010,
Editorial Panamericana. 2. Edicin.
4. John W Baynes y Marek H Dominiczak. Bioqumica Mdica.
Elsevier Mosby. 3 Edicin.

99

Prueba

Valores de

Resultados

referencia
Densidad

1.016 a 1.0035

pH

4.5 a 8.5

Sangre

Ausencia

Leucocitos

Ausencia

(esterasa)
Nitritos

Ausencia

Protena

Ausencia

Bilirrubina

Ausencia

Glucosa

Ausencia

Cuerpo

Ausencia

cetnicos
Urobilingeno

Ausencia

Tabla de resultados

100

Prctica 9
Pipeteo
Tiempo de prctica: 1 hora

MATERIAL
Objetivos
1. Que el estudiante adquiera la habilidad de pipetear
cantidades de volmenes pequeos, del orden de microlitros
(l).
2. Que el estudiante adquiera la destreza para colocar la
muestra en los pozos del gel de agarosa.
3. Que el estudiante considere la importancia de seguir
correctamente la metodologa para obtener los resultados
deseados.
JUSTIFICACIN
Para realizar la prctica de pipeteo es importante que
los alumnos consideren las cantidades de volmenes que van
a manejar, por lo que la siguiente prctica les proporcionar
un ensayo previo de la original, con la idea de tomen en
cuenta pequeos detalles que pueden modificar el resultado
deseado.

- Tubo verde con 10 l de DNA de la escena del crimen

- Tubo azul con 10 l DNA del sospechoso 1
- Tubo naranja con 10 l DNA del sospechoso 2
- Tubo violeta con 10 l DNA del sospechoso 3
- Tubo rojo con 10 l DNA del sospechoso 4
- Tubo amarillo con10 l DNA del sospechoso 5
- Mezcla de enzimas de restriccin EcoRI/Pstl, 1800 U,
con 80 l
- Marcador de DNA de fago lambda digerido con Hind III
0.2g /l, 12 l.
- Geles de agarosa al 1.0%.
- Amortiguador de electroforesis TAE (Tris-Acetato-EDTA).
Tris-base 39 mM, cido actico glacial 18 mM, EDTA 10 mM.
- Gradillas para microtubos.
- Recipiente para teir geles.
- Pipeta automtica de 10-100 l.
- Puntas para pipetas automticas.
- Marcador indeleble.
- Cmara horizontal de electroforesis.
- Microcentrfuga

NOTA: Todo el material que se proporcione ser una

simulacin del original.

PROCEDIMIENTO
1.-Se le proporcionar a cada equipo una gradilla con cada
uno de los tubos conteniendo los 10 l de la muestra.

101

Rotular cada uno de los microtubos de la siguiente forma:

Verde
Azul
Naranja
Violeta
Rojo
Amarillo

EC= Escena del crimen

S1= Sospechoso 1
S2=Sospechoso 2
S3=Sospechoso 3
S4=Sospechoso 4
S5=Sospechoso 5

EC

S1

S2

S3

S4

S5

2.-Observar cuidadosamente que los 10 l de la muestra se

encuentren en el fondo del tubo, si se encuentra dispersa en la
paredes del mismo, con la ayuda de una centrfuga, dar un pulso
para que todo el lquido quede en el fondo del tubo.

4.-Tapar los tubos y mezclar los componentes golpeando

suavemente los tubos con el dedo, posterior a la agitacin,
proceder como lo indica el punto 2.

Golpear con el dedo

Microcentrfuga
3.-Pipetear 10 l de la mezcla de enzimas en el fondo de cada
tubo. Tener cuidado de cambiar la punta para cada muestra,
para evitar contaminacin.

5.-Colocar los tubos en una gradilla e incubar a 37 C por 45

minutos.
Nota: en este caso no se realizar pero si considerarlo
para la prctica original, ya que en este caso es solo una
simulacin

102

negro (-) y que la base del gel est del lado del electrodo rojo
(+).

(-)

(+)
6.-Utilizando una pipeta diferente para cada muestra, aadir
10 l del amortiguador de carga en cada tubo. Cerrar los tubos
y mezclar los componentes golpeando suavemente con los
dedos y repetir lo indicado en el punto 2.

8.-Utilizando una punta de pipeta diferente para cada muestra,

cargar el gel de la siguiente manera:
Pozo 1: Marcador de peso molecular (PM)
Pozo 2: Sin muestra
Pozo 3: Verde
EC= Escena del crimen
Pozo 4 : Azul
S1= Sospechoso 1
Pozo 5: Naranja
S2=Sospechoso 2
Pozo 6: Violeta
S3=Sospechoso 3
Pozo 7: Rojo
S4=Sospechoso 4
Pozo 8: Amarillo
S5=Sospechoso 5

7.-Colocar un gel de agarosa en la cmara de electroforesis.

Llenar la cmara con buffer de corrida hasta cubrir el gel,
compruebe que los pozos del gel estn del lado del electrodo

Nota: En el momento de depositar la muestra en el pozo,

tomar la micropipeta de manera normal (con la mano derecha)
y apoyar con la mano izquierda la punta de la micropipeta para
obtener mayor equilibrio, introducir la punta de la micropipeta
en el pozo de forma que no se rompa el gel, ya que de esta
manera el pozo se quedara vaco.

103

Otra indicacin es que cuando la punta de la micropipeta se

encuentre en el pozo irla subiendo poco a poco y al mismo
tiempo dejar caer la muestra lentamente para que el espacio
que ocupa la punta no obstruya el espacio del pozo y la
muestra no salga del mismo. Tratar de no contaminar los
pozos con las otras muestras a la hora de cargar el gel.

Hasta este paso se considera la simulacin de la prctica con

el objetivo de obtener los siguientes resultados

PM

EC

S1

S2

S3

S4

S5

Nota: Considerar que el patrn puede ser modificado.

Referencias
1. Biotechnology Explorer DNA Fingerprinting Kit
Instruction Manual BIORAD.

104

Prctica 10

Huella gnica
Tiempo de prctica: 3 hora

Objetivos
1. Que el estudiante conozca la aplicacin de las tcnicas de
DNA recombinante.
2. Que el estudiante sea capaz de analizar e interpretar los
datos generados a partir de una prueba de huella gnica.
3. El alumno adquirir la capacidad de manejar muestras para
anlisis de cidos nucleicos.
4. El alumno desarrollar destreza en la interpretacin de
resultados de metodologas bsicas de anlisis molecular.
FUNDAMENTO
El DNA es un polmero lineal formado por
desoxirribonucletidos que contienen a las bases nitrogenadas
adenina, guanina, citosina, timidina. La interaccin de las
bases nitrogenadas por puentes de hidrgeno permite la
formacin de la doble cadena de DNA. Cada grupo fosfato
est unido al carbono 5 de una subunidad de azcar y al
carbono 3 de la subunidad de azcar del nucletido contiguo.
Las cadenas se mantienen unidas por puentes de hidrgeno
entre las bases. Las cuales son completamente lineales.
En la molcula de DNA que reside la informacin gentica de
un organismo, especficamente en la secuencia de los
nucletidos, de tal manera que cada tres bases forman un
codn que corresponde a su vez a uno de los 22 aminocidos,

teniendo un total de 64 codones posibles, los cuales

conforman el cdigo gentico. En el DNA se encuentran dos
tipos de secuencia, la que es capaz de se leda para dar
origen a una protena lo que permite que una clula u
organismo crezca o desarrolle tambin la no codificante una
que codifica para las funciones celulares y otra no codificante,
que participa en la regulacin de su expresin.
Algunas de las secuencias de nucletidos no
codificantes se caracterizan por ser cortas, estn alineadas en
tndem y se repiten miles de veces de manera constante a lo
largo del DNA. Un ejemplo de esta secuencia puede ser la
siguiente.
ATTCGGTATTCGGTATTCGGT.
A
estas
secuencias se les denomina STR por sus siglas en ingls
(Short Tandem Repeat). El genoma eucaritico contiene
muchas de estas secuencias de DNA, y se ha visto que el
nmero de unidades repetidas presenta diferencias de
individuo a individuo que con las huellas digitales. En el caso
de gemelos idnticos estas secuencias son idnticas. Estas
regiones pueden ser aisladas del DNA con enzimas de
restriccin apropiadas y separadas de acuerdo a su longitud
mediante electroforesis en gel. Cuando se completa el
proceso de separacin el resultado se parece a un cdigo de
barras de un envase de supermercado. Este cdigo de barras
de DNA ha permitido esclarecer algunos hechos criminales y
pruebas de paternidad, a la cual se denomina tcnica de
Huella gnica

105

Es muy frecuente que en la escena de un crimen se

encuentren, en pequeas cantidades muestras de naturaleza
biolgica a partir de las cuales se puede extraer el DNA como
son la sangre, la saliva, la piel, el msculo, el cabello, el
semen, los dientes y el hueso, entre otros.
Un mtodo que permite tomar una pequea cantidad
de DNA y en pocas horas sintetizar millones de copias de una
porcin, es el mtodo de amplificacin conocido como PCR
(reaccin en cadena de la polimerasa), el cual se desarrollo
por K. Mullis (1990), En este mtodo se requiere conocer la
secuencia de nucletidos de los extremos del fragmento que
se desea amplificar. Estas secuencias se usan para disear
desoxioligonucletidos sintticos de DNA complementarios a
cada uno de estos extremos de la cadena de la doble hlice.
La muestra de DNA se coloca en una solucin que contiene
una
DNA
polimerasa,
grandes
cantidades
de
desoxinucletidos y los desoxioligonucletidos sintetizados
previamente. El mtodo se basa en la repeticin cclica de tres
reacciones sucesivas: en la primera reaccin, la solucin se
calienta para que el molde de DNA se separe en sus dos
cadenas. En la segunda reaccin, la temperatura se reduce
para permitir que los desoxioligonucletidos se apareen por
complementariedad de bases con el DNA molde y en la
tercera reaccin, la DNA polimerasa cataliza la sntesis
simultnea de las dos cadenas a partir de cada
desoxioligonucletido que acta como cebador. Al cabo del
primer ciclo de tres reacciones, el fragmento de DNA elegido
se ha duplicado y por lo tanto, la cantidad de DNA molde
disponible para el segundo ciclo es doble, lo mismo ocurre
cada ciclo de duplicacin.

La obtencin de mltiples copias requiere 20 a 40

veces la repeticin de los ciclos. El xito de esta tcnica radica
en el uso de una DNA polimerasa termoestable, que no se
desnaturaliza por los repetidos ciclos de calentamiento. Esta
enzima se aisl originalmente de la bacteria termfila Thermus
aquaticus.
La base de la tcnica conocida como huella gnica se
basa en las diferencias individuales de estas secuencias. Esto,
generalmente se trata de cambios en un solo par de bases
pertenecientes a diferentes individuos, que se presentan una
vez cada 500 a 1,000 pares de bases, como promedio.
Referencias
1. Curtis, H; Barnes, N; Biologa. Sexta edicin. Editorial
Mdica Panamericana.
2. Lewin, B; Genes VI. Editorial Oxford.
Nelson, D; Cox, M; Lehninger. Principios de Bioqumica.
Tercera edicin. Ediciones Omega.
3. Yuri Sivolap, Ph.D., G. Krivda, Ph.D., N. Kozhuhova., S.
Chebotar., and Mark Benecke, PH.D. A Homicide in the
Ukraine. DNA-based identification of a Boiled, Skeletozined,
and Varnished Human Skull, and of Bone Fragments Found in
a Fireplace. The American journal of Forensic Medicine and
Pathology. 22 (4): 412-414 ,2001.
4. Lennie Pineda Bernal. El anlisis de DNA para pruebas de
paternidad e identificacin forense.
Acta Cientfica
Venezolana. 50: 24-28, 1999.

106

5. Andra Carla de Souza Ges, Dayse Aparecida da Silva,

Cristiane Santana Domingues, Joo Marreiro Sobrinho, Elizeu
Fagundes de Carvalho. Identification of a criminal by DNA
typing in a rape case in Rio de Janeiro, Brazil. So Paulo
Medical Journal. Revista Paulista de Medicina. 120 (3): 77-80,
2002.
6. Centre for Genetics Education. Genetic Testing and
Screening II Forensic and Other Applications. Directory of
Genetics Support Groups, Services and Information. Genetics.
235-239, 2004-2005.
7. Jeffreys Alec Genetic Fingerprinting Naure Medicine Vol
11(10).1035-1039. 2005.
8. Mullis K.B the Unusual Origen of the Polymerase Chain
Reaction Science Am. 262 (4) 56-65. 1990.

107

SESIN 1 DE LABORATORIO PARA LA PRCTICA DE

HUELLA GNICA
ESCENA DEL CRIMEN
El crimen se lleva a cabo en la calle Lago Manitoba No.
520, Col. Ampliacin Granada, Delegacin Miguel Hidalgo, en
el sof de la sala se encuentra el cuerpo de la duea de la
casa, una mujer de 42 aos de edad. El cadver presenta
signos de estrangulamiento pero sin marcas de sogas o
cinturones; tampoco se encuentran huellas digitales en su
cuello. La vctima presenta una lesin defensiva en el brazo
derecho con arma punzo cortante. En el sof se observan
varias manchas de sangre, algunas de ellas secas. Las ms
abundantes todava estn frescas. Se ignora si la sangre
pertenece a la vctima o a sus agresores.
El laboratorio forense se encarga de recopilar la
informacin de la escena dando a conocer los siguientes
aspectos: el cuerpo de la vctima se descubri 20 minutos
despus del asesinato. Presentaba con un golpe en la cabeza,
presenta seales de forcejeo en su brazo y debajo de las uas
se encuentran depositados restos de piel, sangre, y de
cabellos. Algunos de ellos presentan folculos. Todo seala
que la vctima forceje con su o sus agresores.
En el lugar tambin se hall un florero con restos de sangre, la
cual no se sabe si corresponde a la de la vctima o a los
agresores. En un extremo del sof se encuentra una pieza
dental y, debido a que la vctima conserva su dentadura
completa, es probable que el diente sea del victimario. En el
brazo izquierdo, la victima presenta varias mordidas, algunas
con sangre coagulada y otras con restos de saliva mezclados
con sangre
.
En el interior de la casa faltan algunas piezas de valor,
lo que sugiere que el mvil fu el robo.

La polica cuenta con varios sospechosos, entre los que se

encuentra el esposo, con el cual la vctima tuvo una discusin
la noche anterior. Se desconoce el tema de la discusin y el
paradero el esposo. Otros sospechosos son los dos
repartidores del gas que una hora antes haban proporcionado
el servicio. Uno de ellos tiene problemas con la dentadura y
aclara que se encuentra en tratamiento dental, ya que ha
presentado sangrado y prdida de algunas piezas dentales.
Los otros sospechosos son los dos empleados de la casa, el
jardinero que tiene una antigedad de 4 aos y presenta una
lesin en el brazo que confiesa se hizo arreglando el jardn y
la cocinera quien tiene slo 3 meses laborando en la casa.
Con esta evidencia se compara el DNA de cada sospechoso
para encontrar al culpable o culpables del crimen, por lo que
debe determinar si las muestras de sangre, cabellos, pieza
dental y saliva sirven para estudiar el DNA y establecer las
caractersticas que permiten utilizar alguna o todas las
muestras para el estudio.
Cada equipo debe escoger alguna de las evidencias
previamente descritas y justificar su eleccin.
Para realizar la comparacin entre el DNA encontrado
en la escena con el DNA de los sospechosos deben contarse
con muestras proporcionadas por los mismos. Mencione de
dnde obtendra dicho material. En el caso del esposo debe
tenerse en cuenta que no se conoce su paradero, por lo cual
la muestra debe ser extrada de algn objeto de uso personal;
defina cul sera ste y justifique la eleccin del mismo.

108

SESION 2 DE LABORATORIO PARA LA PRCTICA

HUELLA GNICA
MATERIAL
- DNA de la escena del crimen con amortiguador.
- DNA del sospechoso 1 con amortiguador.
- DNA del sospechoso 2 con amortiguador.
- DNA del sospechoso 3 con amortiguador.
- DNA del sospechoso 4 con Amortiguador.
- DNA del sospechoso 5 con amortiguador.
- Mezcla de enzimas de restriccin EcoRI/Pstl, 1800 U.
- Agua estril, 2.5 ml.
- Marcador de DNA de fago lambda digerido con Hind III
0.2g /l, 100 l.
1.- 23,130 pb
2.9,416 pb
3.6,557 pb
4.4,361 pb
5.2,322 pb
6.2,027 pb
- Colorante de DNA (Biorad biosafe).
- Microtubos de colores.
- Microtubos blancos.
- Geles de agarosa al 1.0%.
- Amortiguador de electroforesis TAE (Tris-Acetato-EDTA).
Tris-base 39 mM, cido actico glacial 18 mM, EDTA 10 mM.
- Gradillas para microtubos.
- Recipiente para teir geles.
- Pipeta automtica de 10-100 l.
- Puntas para pipetas automticas.
- Marcador indeleble.
- Fuente de poder.
- Cmara horizontal de electroforesis.
- Parrilla para bao mara.
- Vaso de precipitado de 300 ml.
- Recipiente con hielo.
- Microcentrfuga

PROCEDIMIENTO
1.- Cada uno de los tubos ependorf de colores que se les
proporcionen ya contienen los 10 l de la muestra:
a) Tubo verde (muestra de la escena)
b) Tubo azul (sospechoso 1)
c) Tubo naranja (sospechoso 2)
d) Tubo violeta (sospechoso 3)
e) Tubo rojo (sospechoso 4)
f) Tubo amarillo (sospechoso 5)
2.-Colocar los tubos marcados en la gradilla.
3.-Adicionar 10 l de la mezcla de enzimas de restriccin a
cada uno de los tubos que contienen la muestra de DNA. Se
debe tener cuidado de no contaminar la mezcla de enzimas,
por lo cual se sugiere el empleo de una punta nueva por cada
tubo.
Muestras
de DNA

Muestra de
escena
Sospechoso
azul
Sospechoso
naranja
Sospechoso
violeta
Sospechoso
rojo
Sospechoso
amarillo

la

10 l

Enzimas de
restriccin
EcoRI
y
PstI
10 l

Volumen total
de
la
reaccin

10 l

10 l

20 l

10 l

10 l

20 l

10 l

10 l

20 l

10 l

10 l

20 l

10 l

10 l

20 l

20 l

109

4.-Cierre los microtubos y mezcle la muestra golpeando

suavemente los tubos con los dedos. Si se cuenta con una
microcentrifuga aplique un pulso de 2 segundos para
asegurarse que toda la muestra se quede en el fondo del tubo
ependorf, permitiendo que se mezcle adecuadamente y se
lleve a cabo la reaccin.
5.-Coloque los tubos en la gradilla e incbelos a 37C por 45
minutos.
6.-Transcurrido el tiempo de incubacin, adicione 10 l del
amortiguador de carga a cada tubo tpelos y agtelos
suavemente con los dedos.
7.-Coloque en la cmara de electroforesis el gel de agarosa,
teniendo cuidado que los pozos se encuentren orientados
hacia el ctodo [polo negativo (terminal negra)].
8.-Adicione 275 ml del amortiguador de corrida o lo que se
requiera para que se cubran los pozos.
9.-Coloque las muestras en el gel empleando una punta nueva
para cada muestra, las cuales se depositan de izquierda a
derecha amortiguador en el siguiente orden:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)

Carril 1: marcador de peso molecular, HindIII,10 l

Carril 2: escena del crimen verde, 10 l
Carril 3: sospechoso 1 azul
, 10 l
Carril 4: sospechoso 2 naranja, 10 l
Carril 5: sospechoso 3 violeta, 10 l
Carril 6: sospechoso 4 rojo,
10 l
Carril 7: sospechoso 5 amarillo, 10 l

10.-Cierre la cmara de electroforesis y asegrese que

concuerden las terminales rojo con rojo y negro con negro.
Conecte la cmara a la fuente de poder, manteniendo la
orientacin de las terminales.

11.-Encienda la fuente de poder. Ajuste el voltaje a 120 V y

realice la electroforesis por 40 60 minutos.
12.-Detenga la electroforesis cuando la muestra llegue a una
distancia aproximada de 2 cm del final del gel. Apague la
fuente de poder, remueva la tapa y retire cuidadosamente el
gel.
13.-Coloque en una charola 120 ml de la solucin teidora
100X y el gel, asegurndose que se encuentre sumergido en
la solucin. Tia los geles por 2 minutos y recupere el
colorante en envase original.
14.- Despus se deben colocar los geles en una charola que
contenga 500700 ml de agua limpia y caliente (40-55C),
agite suavemente el gel por aproximadamente 10 segundos y
retire el agua, realizar los lavados que sean necesarios con
agua limpia hasta la aparicin de las bandas de DNA y hacer
la comparacin de las muestras.
Referencias
1. Biotechnology Explorer DNA Fingerprinting Kit
Instruction Manual BIORAD.
Cortar en pequeas
piezas con enzimas
de restriccin
DNA total
de
una
persona

-ve

Fragmentos
de DNA en el
gel

Ms
grandes

Ms
pequeas
+ve

Fragmentos separados y
transferidos a membrana
de nylon

110

APENDICE

111

SOLUCIONES
Para el tratamiento de los pacientes en la clnica se utilizan
bsicamente 2 familias o grupos de soluciones: cristaloides y
coloides. En el grupo de cristaloides se encuentran soluciones
con base en dextrosa, soluciones con base en el contenido de
cloruro de sodio y otros lquidos incluyendo Lactato de Ringer. La
concentracin de electrolitos, tonicidad y osmolaridad pueden
variar segn cada formulacin (Tabla 1). En la familia de los
coloides se encuentran la albumina, almidones, dextranes y
gelatinas .

concentracin individual de cada in, las condiciones prximas a la

normalidad fisiolgica.
Concentracin normal de electrlitos
Plasma
Electrlito
Cationes
Sodio
Potasio
Calcio
Magnesio
Aniones
Cloro
Bicarbonato
Fosfato
Sulfato
cidos
orgnicos
Protenas

mg/dl

meq/l

Lquido
intersricial
meq/l

326.0
16.0
10.0
2.5

142.0
4.0
2.5
1.5

144.0
4.0
2.5
1.5

362.0
60.0
3.5
1.5
15.0

103.0
25.0
2.0
1.0
5.0

114.0
30.0
2.0
1.0
5.0

7000.0

14.0

0.0

Tabla 1. Composicin de soluciones parenterales comerciales

Pero no solamente el manejo de soluciones se encuentra dentro

de la clnica sino que en el laboratorio, el trabajo con rganos
aislados tambin exige la preparacin de un medio artificial
(solucin fisiolgica) que rena en el aspecto osmtico y en la

112

INSTRUCCIONES
PARA
EL
MICROSCOPIO MARCA LEICA

USO

DEL

1. Nunca use un adaptador entre el cable y la fuente de

alimentacin.
2. Use siempre el microscopio sobre una superficie dura y
estable.
3. Conecte el cable de alimentacin del microscopio a una
toma de corriente con conexin a tierra. Se suministra un
cable de tres terminales con toma a tierra.
4. Encienda el microscopio girando el interruptor de control
de la iluminacin situado en la parte inferior izquierda del
instrumento.
5. Coloque el interruptor de control de la iluminacin en el
nivel ms bajo. El control de iluminacin le permite ajustar
la intensidad de luz.
6. Abra completamente el diafragma de apertura del
condensador girando el anillo hacia el extremo derecho.
7. Usando el botn de enfoque del condensador, suba el
condensador hasta el extremo superior de su
desplazamiento. Iluminacin critica
nicamente: si el
desplazamiento del condensador es excesivo, limtelo con
el tornillo situado debajo de la platina hasta que la lente
superior del condensador se encuentre debajo de la
superficie de la platina.

9. Gire el revlver hasta situar el objetivo 4X en la posicin

de trabajo. (pg. 50)
10. Suba la platina girando
el mando de enfoque
macromtrico
hasta que observe la preparacin y,
finalmente, enfoque la muestra con precisin utilizando el
mando de enfoque micromtrico.
11. Ajuste los tubos oculares a la distancia de los ojos.
12. Al trmino del uso del microscopio retirar la muestra de
la platina.
13. Bajar la platina hasta el tope y regresarla a su posicin
original si es necesario.
14. Colocar el revolver de los objetivos de manera que el
objetivo de 4X sea el que quede en direccin de la lmpara.
15. Desconectar el equipo y enrollar el cable.
16. Limpiar la platina y oculares con un pao humedecido
con metanol o con un limpia cristal comercial.
17. Colocar al microscopio la funda contra el polvo para
mantenerlo en buenas condiciones fsicas y mecnicas.

8. Coloque la preparacin de la muestra con la muestra en

la platina.

113

Partes del microscopio:

1) Oculares.
2)Revolver con 4 objetivos 4X, 10X, 40X y 100X.
3) Platina.
4) Diafragma.
5) Lmpara.
6) Tornillo de la platina para desplazar la muestra.
7) Interruptor de control de la iluminacin.
8) Tornillo macromtrico.
9) Tornillo micromtrico.

4
8

114

Instrucciones para la operacin del fotocolormetro

Klett-Summerson
1. Antes de encender el fotocolormetro cercirese que el
filtro (F) est en su sitio. La luz sin el filtro puede daar
la fotocelda.
2. Asegrese que la aguja indicadora (C) est en cero. En
caso contrario, ajstese a cero con la perilla (D) que slo
debe usarse cuando la lmpara del colormetro est
apagada.
3. Ajuste la escala del potencimetro (B) a cero usando la
perilla (A).
4. Ponga una cubeta limpia llena con el blanco de reactivos
en el hueco del instrumento en tal forma que la marca
del tubo (ej. Pyrex) se site directamente al frente. Es
una buena prctica limpiar la superficie externa de la
cubeta con un pauelo desechable antes de cada
lectura. Slo deben usarse tubos seleccionados como
"cubetas" para las determinaciones.
5 Por medio de la perilla (G) ajuste la lectura del
galvanmetro a cero; esto es, la aguja (C) debe coincidir
con el trazo central y, al mismo tiempo, con la escala (B)
en cero.
6. Para leer las soluciones problema retire el blanco y
ponga en el hueco del instrumento la cubeta con la
solucin problema. La aguja (C) se desviar de su
posicin en la lnea de cero; por medio de la perilla (A)
grese la escala (B) hasta que la aguja (C) sea llevada
exactamente a cero. La lectura de la escala (B) se anota
y corresponde a la lectura del problema; lase
nicamente hasta la marca ms prxima. Cualquier

intento de apreciar mayor exactitud es innecesario, pues

la construccin del instrumento no proporciona una
precisin mayor.
7. Contine con la lectura de otros problemas y, de vez en
cuando, compruebe el cero con el blanco.

115

Lancetas
USO DE GLUCOMETRO
Partes del glucmetro

Paso 1.
Inserte una tira reactiva en
el puerto de anlisis, con
las barras de contacto de
primero y mirando hacia
arriba.
Introdzcala
firmemente
hasta que no avance ms.
El medidor se encender y
aparecern
brevemente
todos los segmentos de la
pantalla. Luego aparecer
el nmero de cdigo,
seguido por el smbolo y
mg/dL.

116

Paso 2. Aplique la muestra.

Obtenga una gota de
sangre utilizando el
dispositivo de puncin. La
muestra de sangre debe
tener al menos un microlitro
(1 l) de volumen (gota de
sangre en tamao real)
para llenar la ventana de
confirmacin.

Mantenga la gota de
sangre en el borde superior
de la tira reactiva hasta que
la ventana de
confirmacin
est
completamente llena de
sangre, antes de que el
medidor
comience
la
cuenta regresiva. Si la
ventana de confirmacin no
se hubiera llenado por
completo antes de que el
medidor
comience
la
cuenta regresiva, no aada
ms sangre a la tira

reactiva; deseche la tira y

comience de nuevo la
prueba
Paso 3
El resultado de la prueba
de glucosa de su sangre
aparecer despus de que
el medidor cuente en forma
regresiva de 5 a 1.

MENSAJES ESPECIALES
Si el resultado de su
prueba es inferior a 20
mg/dL, aparecer lo (Bajo)
en la pantalla del medidor.
Esta
condicin
podra
indicar una hipoglucemia
grave.
Aunque
este
mensaje podra deberse a
un error de la prueba

117

Si el resultado de su
prueba es superior a 600
mg/dL, aparecer
h1 (Alto) en la pantalla del
medidor.
Esto podra indicar una
hiperglucemia grave (alto
contenido de glucosa en
sangre).

Es importante desechar con mucho cuidado la lanceta

usada luego de cada uso, con el fin de evitar que se
produzcan lesiones accidentales con las puntas de las
lancetas. Las tiras reactivas y las lancetas usadas
posiblemente se consideren en su rea como un
desecho de riesgo biolgico.

USO DEL ACCUTREND

PASO 1. Coloque el
instrumento sobre
una superficie plana y sin
vibraciones, a continuacin
encindalo presionando el
botn.
PASO 2. Asegrese de que
la pantalla est iluminada.

PASO 3.
Con la tapa
cerrada, introduzca la tira
de codificacin, hasta el
tope y luego retrela de
inmediato.
PASO 4. Si la codificacin se ha realizado correctamente,
el
instrumento emitir un breve pitido. Si se ha producido
un error, repita el proceso transcurridos unos
segundos.
PASO 5. Extraiga una tira
reactiva del tubo y cirrelo
de inmediato para evitar
que el desecante pierda su
efecto.

118

PASO 6. Sujete la tira reactiva segn se indica e

introdzcala a hasta el tope. Si la tira se ha introducido
correctamente, el
instrumento emitir dos pitidos.
PASO 7. Abra la tapa de la
cmara de medicin.

PASO 8. Utilice el dispositivo de puncin, para obtener una

muestra de sangre del dedo o del lbulo de la oreja
PASO 9. Para la aplicacin
de la muestra
de
sangre
en
el
instrumento:
Aplique la gota de sangre
directamente en la zona de
aplicacin amarilla de la tira
reactiva, la zona amarilla
debe
quedar
completamente
cubierta.
NO toque la zona de
aplicacin con el dedo.
NO aplicar una segunda
gota. La sangre debe
aplicarse en un espacio de
15
segundos
tras la
puncin para evitar un
resultado incorrecto debido
al inicio de la coagulacin.

PASO 10. Para la

aplicacin de la muestra de
sangre fuera del
instrumento:
Extraiga la tira reactiva y
deje la tapa abierta. Aplique
la
sangre directamente desde
el lugar de la puncin.
NO toque la zona de
aplicacin con la piel.
PASO 11. Vuelva a
introducir la tira reactiva en
el instrumento y cierre la
tapa.

119

VALORES DE REFERENCIA

Microalbuminuria

Glucosa

Fibringeno

Urea
Creatinina
Depuracin de
Creatinina

cido rico

Protenas totales

Albmina
Bilirrubina

Globulina
Mucoprotenas

70 -105
mg/dL
6 - 20
mg/dL
0,7 - 1,5
mg/dL
Hombres
97 - 137
mL/min/1,73m2
Mujeres
88 - 128
mL/min/1,73m2
Hombres
3,4 - 7,0
mg/dL
Orina
250 - 750
mg/24 h
LCR
6,6 - 8,7
mg/dL
Orina 28 15 - 45
141 mg/24H mg/dL
1,0 - 15,0
mg/dL
3,5 - 5,5
mg/dL
Total
0,32 - 1,08
mg/100 mL
Conjugada
0,10 - 0,50
mg/100 mL
No
0,08 - 0,72
conjugada
mg/100 mL
1,46 - 2,54
mg/dL
1,9 - 4,9

mg/dL
Negativo

Saturacin de trasferrina
Fijacin del hierro
Colesterol
HDL

Hombres
Mujeres

LDL
Triglicridos
Lpidos totales
Fosfolpidos
Fructosamina
Hb Glicosilada Total

Total

Hb Glicosilada A1C

A1C

ELECTROLITOS

PACIENTE
S

Calcio inico
Calcio

Orina

180 - 350
mg%
20 - 50
%
250 - 410
g/dL
140 - 200
mg/dL
55
mg/dL
65
mg/dL
130
mg/dL
80 - 150
mg/dL
400 - 800
mg/dL
150 - 200
mg/dL
Hasta 285
mol/L
5,3 - 9,0
%
4-5
%
RANGOS
UNIDADES
4,0 - 5,4
mg/dL
8,8 - 11,0

120

Hierro srico
Sodio

Orina
Sangre

Potasio

Sangre

Cloro

Orina

Fsforo

Nios
Adultos
Orina

Amilasa
Lipasa
Fosfatasa cida total

Hombres
Mujeres

Fosfatasa cida
prosttica
Fosfatasa alcalina

Adultos
Nios

mg/dL
60 - 180
mg/24 h
250 -460
g/dL
40 - 220
mg/24 h
136 -145
mEq/L
3,6 - 5,5
mmol/L
98 - 107
mmol/L
110 - 250
mg/24 h
3,0 - 7,0
mg/dL
2,5 - 4,8
mg/dL
340 - 1000
mg/24 h
Hasta 95
U/L
10 -150
U/L
Hasta 6,50
U/L
Hasta 5,50
U/L
Hasta 2,6
U/L
98 - 279
U/L
151 - 471

U/L
10 - 34
U/L

TGO, transaminasa
glutmico-oxalactica
(Sinn: AST, aspartato
aminotransferasa)
TGP, transaminasa
glutmico-pirvica
(Sinn.: ALT, alanino
aminotransferasa)
Colinesterasa
Deshidrogenasa lctica
DHL
CPK

5 - 59
U/L

Hombres
Mujeres

Gamma GT
Aldolasa

1000 - 4000
U/L
210 - 420
U/L
24 - 195
U/L
24 - 170
U/L
0 - 51
Ul/L
Hasta 5,7
U/L

121

Colaboradores

INTRODUCCIN
AL
DE LABORATORIO

MANUAL

DE

PRCTICAS

Alicia Cea Bonilla (potenciometra y electroforesis).

Rebeca Miln Chvez (gota).
Celia Virginia Snchez Meza.

ELABORACIN O REVISIN DE LAS PRCTICAS

DE LABORATORIO
1. Soluciones. Celia Virginia Snchez Meza y Rebeca Miln Chvez.
2. Regulacin del equilibrio cido-base despus de ejercicio muscular
intenso y de la ingestin de bicarbonato de sodio. Concepcin
Gonzlez Lpez, Celia Virginia Snchez Meza y Juan Luis Rendn
Gmez.
3. Cintica enzimtica. Efecto de la concentracin del sustrato en la
velocidad de la reaccin enzimtica. Celia Virginia Snchez Meza,
Rebeca Miln Chvez y Jess Antonio Oria Hernndez.
4. Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de los
inhibidores de la cadena de transporte de electrones y de los
desacoplantes. Juan Pablo Pardo Vzquez y Federico Martnez
Montes.

5. Determinacin de glucosa en sangre total. Rebeca Miln Chvez y

Eugenia Flores Robles.
6. Determinacin de colesterol y lipoprotenas. Celia Virginia Snchez
Meza y Rebeca Miln Chvez.
7. Integracin Metablica. Rebeca Miln Chvez y Eugenia Flores
Robles.
8. Examen General de Orina (EGO). Rebeca Miln Chvez y Eugenia
Flores Robles.
9. Pipeteo. Rebeca Miln Chvez y Eugenia Flores Robles.
10. Huella gnica. Rebeca Miln Chvez y Eugenia Flores Robles.
La revisin y la actualizacin de los Objetivos del curso se realiz en
colaboracin con el proyecto: Mejoramiento de la Enseanza de la
Bioqumica y Biologa Molecular (EN-206603) del Programa de Apoyo a
Proyectos Institucionales para el Mejoramiento de la Enseanza
(PAPIME), siendo el responsable del proyecto el doctor Federico
Martnez Montes con base en esto se realizaron actualizaciones en las
prcticas.
Correccin y cuidado de la edicin: Dr. Juan Pablo Pardo Vzquez,
Dra. Rebeca Milln Chvez y Q.F.B. Eugenia Flores Robles

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