Trizol

Anexo A: Mtodos de extraccin de RNA
Anexo A.1: Extraccin de RNA total con Trizol

(Invitrogen)
Anexo A.1.1 Extraccin:
1. Pulverizar 100mg de material vegetal con Nitrgeno lquido.
2. Homogenizar el material vegetal con 1ml de Trizol (Invitrogen) e incubar a
temperatura ambiente durante 5min.
3. Centrifugar durante 15min a 12000rpm a 4C y transferir la fase acuosa a un tubo
de reaccin nuevo.
4. Adicionar 0.2ml de cloroformo, agitar vigorosamente a incubar a temperatura
ambiente durante 3min.
5. Repetir paso 3.
Anexo A.1.2 Precipitacin de RNA:

1. Adicionar 0.5ml de isopropanol e incubar overnight a 4C.
2. Centrifugar durante 15min a 12000rpm a 4C y eliminar el sobrenadante.
3. Adicionar 1ml de etanol absoluto, agitar vigorosamente y centrifugar durante 5min
a 7500rpm a 4C, eliminar el sobrenadante.
4. Adicionar 1ml de etanol 70%, agitar vigorosamente y centrifugar durante 5min a
7500rpm a 4C, eliminar el sobrenadante.
120
Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

de diferentes rganos de Solanum tuberosum Grupo Phureja
5. Dejar secar el pellet de RNA y resuspender en 30l de agua DEPC.

6. Incubar durante 10min a 65C.
7. Almacenar los extractos a -20C hasta su procesamiento.
Anexo A.2: Extraccin de RNA total con CTAB (Lpez et

al., 2006)
Anexo A.2.1 Composicin de buffers:
-
Buffer de maceracin CTAB (Esterilizar por autoclavado)

2% CTAB
100mMTris-HCl, pH 8.0
20mM EDTA, pH 8.0
1.4M NaCl
1% Na2SO3
2% PVP-40
Buffer TE-SDS (Esterilizar por autoclavado)

10mM Tris-HCl, pH 8.0
1mM EDTA, pH 8.0
1% (p/v) SDS

1.
Pulverizar 150mg de material vegetal con Nitrgeno lquido.
2. Homogenizar el material vegetal con 1.5ml de buffer de maceracin CTAB e

incubar durante 10min a 65C.
3. Adicionar un volumen igual de cloroformo:isoamilalcohol (24:1 v/v) y centrifugar
durante 15min a 12000rpm a 4C. Transferir la fase acuosa a un tubo de reaccin
nuevo.
Anexo A. Mtodos de extraccin de RNA
121
Anexo A.2.3 Precipitacin:

1. Adicionar un volumen igual de LiCl 4M e incubar overnight a 4C.
3. Resuspender el pellet en 1ml de buffer TE-SDS.
4. Adicionar 100l NaCl 5M y 300l de isopropanol e incubar durante 30min a -20C.
6. Lavar el pellet fue lavado con 1ml de etanol absoluto, agitar vigorosamente,
centrifugar durante 5min a 7500rpm a 4C y eliminar el sobrenadante.
7. Adicionar 1ml de etanol 70%, agitar vigorosamente, centrifugar durante 5min a
7500rpm a 4C y eliminar el sobrenadante.
8. Dejar secar el pellet y resuspender con 30l de agua tratada con DEPC.
9. Almacenar los extractos a -20C hasta su procesamiento.
Anexo A.3: Extraccin de dsRNA con

fenol:cloroformo/Sephadex (Guzmn et al., 2006)
Anexo A.3.1 Composicin de buffers:
-
Buffer de extraccin (Esterilizar por autoclavado)

0.1M Tris-HCl, pH 8.0
2% SDS
2mM EDTA, pH 8.0
-
Buffer TE 1X (Se autoclava)

10mM Tris-HCl pH 8.0
1mM EDTA pH 8.0
Sephadex (Se esteriliza por autoclavado y se lava dos veces dejando decantar el
sephadex, removiendo la fase acuosa y reemplazndola por el mismo volumen
con buffer TE 1X. Se almacena a 4C hasta su uso).
122

5% Sephadex G-50
Preparacin en Buffer TE 1X

1. Se pulveriz 100mg de material vegetal.
2. Se homogeniz el material vegetal con 500l de buffer de extraccin, 500l de
fenol (saturado en Tris pH 8.0) y 500l de cloroformo, se agit fuertemente y se
incub durante 5min a 70C, llevar al hielo.
3. Se centrifug durante 5min a 12000rpm a 4C y se transfiri la fase acuosa a un
tubo de reaccin nuevo.
Anexo A.3.3 Purificacin con columnas de Sephadex:

1. Preparar las columnas plsticas colocando un tapn de algodn estril en la
punta.
2. Llenar las columnas con Sephadex teniendo cuidado de no hacer burbujas y se
centrifuga durante 4min a 900rpm (Este proceso se repite hasta que la columna
alcanza un volumen de 1ml).
3. Lavar las columnas dos veces con 150l de buffer TE 1X centrifugando entre
cada lavado (durante 4min a 900rpm).
4. Colocar tubos autosostenibles de 1.5ml (tubo colector) en la base de las
columnas de sephadex, y estos dentro de tubos falcon de 15ml.
5. Colocar 150l del sobrenadante recuperado en el ltimo paso de la fase de
extraccin y centrifugar durante 4min a 900rpm.
6. Descartar las columnas y recuperar los tubos colectores con el extracto de dsRNA
purificado.
7. Almacenar a -20C hasta su procesamiento.
Anexo A. Mtodos de extraccin de RNA
123
Anexo A.4: SV Total RNA Isolation System (Promega)

1. Adicionar 350l de buffer de dilucin de RNA, mezclar por inversin 3 - 4 veces .
Incubar en un bao mara a 70C durante 3min.
2. Centrifugar durante durante 10min a 12000rpm y transferir el sobrenadante a un
tubo nuevo.
3. Adicionar 200l de etanol al 95% y mezclar por pipeteo 3-4 veces. Transferir la
mezcla a una columna y se centrifugo a 12000rpm durante 1min.
4. Se descarta el fluido que pasa a travs de la columna (que queda en el tubo
colector) y adicionar 600l de Solucin de lavado de RNA. Centrifugar a
12000rpm durante 1min.
5. Descatar el fluido que pasa a travs de la columna (que queda en el tubo
colector); y adicionar directamente sobre la membrana una mezcla de 40l buffer
yellow core, 5l 0.09M de MnCl2 y 5l de DNasa (tenga cuidado de homogenizar
esta mezcla cuidadosamente, no hacer vrtex), hay que tener cuidado de que
esta mezcla haga contacto con toda la membrana.
6. Incubar durante 15min a 20-25C. Adicionar 200l de Solucin de parado de
DNasa a la membrana y centrifugar 12000rpm durante 1min.
7. Adicionar 600l de solucin de lavado de RNA y centrifugar a 12000rpm durante
1min.
8. Adicionar 250l de solucin de lavado de RNA y centrifugar a 12000rpm durante
2min.
9. Cambiar el tubo colector de 1.5ml y adicionar 100l de agua libre de nucleasas.
Centrifugar durante 1min a 12000rpm.
Almacenar a -20C hasta su procesamiento.
Anexo B: Cuantificacin de RNA

Anexo B.1: Cuantificacin de RNA utilizando el kit QuantiTTM RiboGreen Assay (Invitrogen)
1. Preparar la solucin de trabajo diluyendo el reactivo Quant-itTTM 1:200 en el buffer
Quant-iTTM. Tener en cuenta que se requieren 200l de solucin de trabajo por
cada muestra y para cada estndar.
2. Preparar los tubos de acuerdo a la siguiente tabla.
Tabla Anexo B - 1. Reaccin para la cuantificacin de RNA utilizando el kit Quant-iT
Assay
Estndar
Muestra
Volumen de solucin de trabajo
190l
180-199l
Volumen de estndar
10l
Volumen de muestra
1-20l
Volumen de reaccin
200l
200l
TM
RiboGreen
3. Agitar vigorosamente por vrtex durante 2-3 segundos. Incubar durante 2min a
temperatura ambiente.
4. Hacer las lecturas en el fluormetro QubitTM.
Anexo B.2: Cuantificacin de RNA por

espectrofotometra a 260nm
1. Encender 20min la lmpara de UV en el espectrofotmetro para su calentamiento.
2. Usar agua tratada con DEPC en una celda de cuarzo (no usar celda plstico
porque no transmite eficientemente la luz ultravioleta) y utilizarla como blanco de
referencia.
126

3. A 990l de agua tratada con DEPC 10l de extracto de RNA, mezclar y transferir
a la celda de cuarzo.
4. Leer la absorbancia a 260nm y a 280nm.
5. Calcular la concentracin de RNA teniendo en cuenta que 1OD260: 40g/ml
Calcular la relacin 260/280, los extractos de buena calidad tendrn una relacin superior
a 1.6, hay que tener en cuenta que un valor igual a 2 indica que el extracto de RNA es
puro..
Anexo C: Estimacin de la integridad de RNA

Anexo C.1 Gel de agarosa denaturante
Anexo C.1.1: Composicin de buffers
-
Buffer de carga adicionado con folmaldehido

95l de buffer de carga
5l de formaldehido al 37%
Mezcla para denaturar muestras de RNA

1l de extracto de RNA
3l de buffer de carga adicionado con folmaldehido
1l de agua destilada estril
Anexo C.1.2: Preparacin del gel de agarosa denaturante

1. Adicionar 1g de agarosa a 85ml de agua destilada estril y disolver la agarosa en
un microondas.
2. Adicionar 10ml de buffer MOPS 10X y una vez que se haya enfriado un poco
adicionar 4.5ml de solucin de formaldehido 37% y 0.5l de SYBRSafe, mezclar
bien y poner a gelificar en un molde para cmara electrofortica.
Anexo C.1.3: Denaturacin de RNA

1. En un tubo de reaccin prepare la mezcla descrita en la seccin de preparacin
de buffers y mezcle.
2. Calentar a 70C durante 10min y transferir rpidamente a hielo.
128

Anexo C.1.4: Cargar las muestras y correr la electroforesis

1. Coloque el gel previamente calentado en una cmara electrofortica horizontal y
sumrjala en buffer MOPS 1X.
2. Cargar las muestras de RNA previamente denaturadas en cada uno de los pozos
y correr la electroforesis durante 1h a 70V constantes.
3. Visualizar el gel utilizando luz UV en un digitalizador Gel Doc (BIO-RAD).
Anexo C.2: Determinacin de la intensidad de las bandas

para la estimacin de la integridad del RNA
Para la determinacin de la intensidad de las bandas en los geles denaturantes de
agarosa se hizo utilizando el programa ImageJ 1.37 (Rasband, 1997). Despus de
cargada la imagen en el programa el genera un pico por cada banda presente en un carril
(su altura y amplitud es proporcional a la intensidad de la banda) (
Figura Anexo C - 1) y para poder estimar la intensidad se calcula el rea bajo la curva.
Posteriormente con estos valores se estima la relacin entre la intensidad de la banda
28S y la intensidad de la banda 18S.
Figura Anexo C - 1. Imagen generada por ImageJ a partir de un carril de un gel

denaturante de agarosa de RNA.
Anexo D. Reacciones de Amplificacin

Anexo D.1: Primers y sondas
Tabla Anexo D - 1. Secuencias e informacin de primers y sondas utilizadas
Reaccin
RT-PCR
qPCR
Primer
Sonda
Primer
3
Primer
F2
Primer
PYVV-591-F
Primer
PYVV-670-R
Direccin
Reverse
Forward
Forward
Reverse
Sonda CP
(465:510)
Primer
COX F
Primer
COX R
Sonda COX
(533:580)
Forward
Reverse
Secuencia
5 AAG CTT CTA CTC AAT AGA
TCC TGC TA 3
5 CTC GAG GAT CCT CAT
GGA AAT CCG AT 3
5 CGG AGA TTA TGT CAA
TGG TTC GA 3
5 TTG CTG CAT TCT TGA ACA
GGT AA 3
5 6-FAM AAC CAA CAT TTC
TGA TGA TGA TTT GAC TGC
AA 3 BHQ1
5 CGT CGC ATT CCA GAT
TAT CCA 3
5 CAA CTA CGG ATA TAT
AAG AGC CAA AAC TG 3
5 HEX TGC TTA CGC TGG
ATG GAA TGC CCT 3 BHQ2
Gen
Tamao
esperado
Referencia
Protena
mayor de
la cpside
769 pb
Rodrguez et al.,
2009
Protena
mayor de
la cpside
79pb
Lpez et al.,
2006
*Citocromo
oxidasa
79pb
Los valores que estn dentro de los parntesis corresponden a las longitudes de excitacin y de
emisin de las sondas utilizadas en las reacciones de qPCR.
Anexo D.2: Retrotranscripcin

En un tubo de PCR se sirve 5l del molde y se incuba durante 10min a 72C.
Posteriormente se adiciona el mix de reaccin (Tabla Anexo D 2).
Tabla Anexo D - 2. Reaccin de retrotranscripcin
Casa
Concentracin
Comercial
Inicial
Buffer de reaccin
Epicentre
10X
dNTPs
Bioline
10mM
DTT
Epicentre
100mM
Primer 3
IDT DNA
10M
Agua tratada con DEPC
RNAse inhibitor
Fermentas
40U/l
MMLV HP
Epicentre
200U/l
RNA
20ng/l
Volumen final
Concentracin
Final
1X
1mM
10mM
0.4M
1.6U
8U
100ng/l
Volumen
(l)
1
1
1
0.4
1.52
0.04
0.04
5
10
130

La reaccin se incub durante una hora a 42C seguida de una denaturacin a 70C por
10min.
Anexo D.3: PCR

El cDNA obtenido en las reacciones de retrotranscripcin fue utilizado como molde en
PCR teniendo en cuenta la reaccin descrita en la siguiente tabla:
Tabla Anexo D - 3. Reaccin de PCR
Casa
Comercial
Buffer NH4
Bioline
MgCl2
Bioline
dNTPs
Bioline
Primer 3
IDT DNA
Primer F2
IDT DNA
Biolasa
Bioline
cDNA
Volumen final
Concentracin
Inicial
10X
50mM
10mM
10M
10M
Concentracin
Final
1X
2.5mM
0.4mM
0.4M
0.4M
5U/l
1U
Volumen
(l)
1
0.5
0.4
0.4
0.4
5.5
0.2
1.6
10
El perfil trmico de la reaccin fue el siguiente:

Tabla Anexo D - 4. Prfil trmico utilizado en PCR
Ciclos
Fase
Temperatura C
1
Denaturacin inicial
94
35
Denaturacin
94
Alineamiento
55
Extensin
72
1
Extensin final
72
Tiempo (min)
3
1
1
1
10
Anexo D.4: qPCR

El molde utilizado en las reacciones de PCR cuantitativa tambin fue el producto de la
retrotranscripcin.
Tabla Anexo D - 5. Reaccin de PCR en tiempo real
Casa
Concentracin
Comercial
Inicial
Buffer NH4
Bioline
10X
MgCl2
Bioline
50mM
dNTPs
Bioline
10mM
Primer Forward
IDT DNA
10M
Primer Reverse
IDT DNA
10M
Sonda
Biosearch
10M
Concentracin
Final
1X
5.5mM
0.5mM
0.3M
0.3M
0.24M
Volumen
(l)
1
1.21
0.55
0.33
0.33
0.165
5.5
131
Tabla Anexo D 5: Continuacin
Biolasa
Cdna
Volumen final
Casa
Comercial
Bioline
Concentracin
Inicial
5U/l
Concentracin
Final
1U
Volumen
(l)
0.22
2.2
11
El perfil trmico de esta reaccin se describe en la siguiente tabla

Tabla Anexo D - 6. Perfil trmico utilizado en las reacciones de PCR en tiempo real
Ciclos
Fase
Temperatura C
Tiempo
1
Denaturacin inicial
95
10min
Denaturacin
95
10s
45
Alineamiento
55
30s
Extensin
72
1s
Anexo E. Transcripcin in vitro

Se utiliz un plsmido pGEM-T (Promega) cuyo inserto corresponda al gen completo
de la protena mayor de la cpside donado por Patricia Rodrguez del Laboratorio de
Virus Vegetales del Instituto de Biotecnologa de la Universidad Nacional de Colombia.
Anexo E.1: Linearizacin del plsmido

Inicialmente se seleccion la enzima Pst I que presenta un solo sitio de restriccin en el
plasmido de manera que el promotor T7 de la RNA polimerasa quedaba corriente arriba
del inserto para este pudiera ser transcribido (Anexo E-1). La reaccin de digestin se
describe en la siguiente tabla:
Figura Anexo E - 1. Sitio de reconocimiento de la enzima PstI en el panel superior, y en el panel

inferior esquema del plsmido linearizado
Tabla Anexo E - 1. Reaccin de digestin con la enzima Pst I
Casa
Concentracin
Comercial
Inicial
Buffer 10X
Promega
10X
Albumina de suero bovino
Promega
100X
Pst I
Promega
10U/l
Plsmido
20ng/l
Volumen final
La reaccin debe ser mezclada por pipeteo
Concentracin
Final
1X
1X
5U
100ng
Cantidad
(l)
3
0.3
0.5
21.2
2
30
134

Anexo E.2: Purificacin del plsmido linearizado

El plsmido linearizado se purific con el kit Wizard DNA Clean-Up System (Promega):
1. Disolver la resina Wizard Clean-Up calentndola durante 10min a 37C.
2. Enfriar la resina Wizard Clean-Up a 25-30C.
3. Adicionar 1ml de la resina Wizard Clean-Up en un tubo de 1.5ml y el DNA (el
volumen de DNA debe estar entre 50 y 500l) y mezclar por inversin.
4. Unir una jeringa de 3ml sin mbolo a una minicolumna y pipetear la mezcla
resina/DNA en el interior de la jeringa como se describe en la siguiente figura.
Coloque el mbolo y empuje cuidadosamente el contenido dentro de la
minicolumna.
Figura Anexo E - 2. Montaje de la jeringa con la columna del kit Wizard Clean-Up (Promega).
5. Quitar nuevamente el mbolo de la jeringa y adicionar dentro de la jeringa 2ml de

isopropanol 80%, vuelva a colocar el mbolo y empuje el contenido dentro de la
columna.
6. Quitar le jeringa y colocar la columna dentro de un tubo de 1.5ml. Centrifugar a
mxima velocidad durante 2min con el objetivo de secar la resina.
7. Transferir la columna a un nuevo tubo de 1.5ml y adicionar 50l de agua o buffer
TE precalentado a 65-70C y esperar por un minuto. Centrifugar la columna a
mxima velocidad durante 20s para eluir el DNA.
8. Quite la columna y descrtela, en eludo que queda en el tubo de 1.5ml sera el
DNA recuperado el cual se debe almacenar a -20C hasta su utilizacin.
135
Anexo E.3: Transcripcin in vitro

Tabla Anexo E - 2. Reaccin de retrotranscripcin
Casa
Comercial
DNA
rNTPs
Invitrogen
Buffer 5X
Promega
RNA polimerasa T7
Promega
RNAse inhibitor
Fermentas
DTT
Promega
Volumen final
Concentracin
Inicial
10mM
5X
20U/l
40U/l
100mM
Concentracin
Final
1g
0.5mM
1X
30U
50U
10mM
50l
La reaccin se incub durante 2h a 37C. La reaccin debe prepararse a temperatura

ambiente para evitar la precipitacin del DNA por la presencia de espermidina a bajas
temperaturas.
Anexo E.4: Purificacin de los transcritos

1. Adicionar 6.25l de LiCl 4M y 187.25l de etanol absoluto pre-enfriado.
2. Almacenar toda la noche a -20C..
3. Centrifugar a 13000g durante 5min a 4C.
4. Descartar el sobrenadante y lavar el pellet con etanol 70% enfriado en hielo.
5. Centrifugar a 13000g durante 5min a 4C
6. Descartar el sobrenadante y dejar secar el pellet.
7. Resuspender cuidadosamente con 30l de agua tratada con DEPC.
Anexo E.5: Tratamiento de los transcritos con DNasa I

Para la preparacin de la DNasa I se disuelve 5mg de la enzima en 1ml de NaCl 0.15M
estril. Los transcritos fueron tratados con DNasa I adicionando 20U de la enzima a 1g
de transcrito y se incuba a 37C durante 15 min, esto se repite dos veces. Posteriormente
los transcritos se almacenaron a -80C hasta su utilizacin.
Anexo F. Resultados artculo 1.

Anexo F.1: Determinacin del rendimiento de los
extractos de RNA
Tabla Anexo F - 1. Determinacin de la concentracin y clculo del rendimiento
Zona
rgano Extracto
Mtodo de
extraccin
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
E322
E340
E343
E346
E321
E349
E352
E355
E320
E331
E334
E337
E35
E36
E37
E38
E39
E40
E41
E42
E43
E44
E45
E46
E47
E48
E49
E50
E51
E52
E53
E54
E25
E26
E27
E28
E29
E30
E31
E32
E33
E34
Peso del
material
vegetal (mg)
49
32
59
34
52
52
53
55
39
38
43
55
150
150
150
150
150
150
150
150
150
150
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
Dilucin
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
ND
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
ND
1:10
1:10
1:10
ND
ND
1:10
1:10
1:10
1:100
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
Concentracin
de la dilucin
(ng/l)
Concentracin
del extracto
(ng/l)
150
115
150
121
110
103,5
104,2
94,2
86
86,8
91,1
105
42
67,9
47,5
43
39,6
53,1
440
61,1
98,9
51,5
98
86
77,8
630
82,7
86,3
98,6
1000
693
83,5
170
110
12,2
150
140
109,8
180
110
140
150
1500
1150
1500
1210
1100
1035
1042
942
860
868
911
1050
420
679
475
430
396
531
440
611
989
515
980
860
778
630
827
863
986
1000
693
835
1700
1100
1220
1500
1400
1098
1800
1100
1400
1500
Rendimiento
(ngRNA/mg de
material
vegetal)
918,37
1078,13
762,71
1067,65
634,62
597,12
589,81
513,82
661,54
685,26
635,58
572,73
84
135,8
95
86
79,2
106,2
88
122,2
197,8
103
294
258
233,4
189
248,1
258,90
295,80
300,00
207,90
250,50
510
330
366
450
420
329,4
540
330
420
450
138

Tabla Anexo F 1. Continuacin

Zona
rgano
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Mtodo de
Extracto
extraccin
E251
E252
E253
E254
E255
E256
E257
E258
E259
E260
E261
E262
E263
E264
E265
E266
E267
E268
E269
E270
E241
E242
E243
E244
E245
E246
E247
E248
E249
E250
E101
E102
E103
E104
E105
E106
E107
E108
E109
E110
E137
E138
E139
E140
E141
E142
E143
E144
E145
E146
E65
E66
E67
E68
E69
E70
E71
E72
E73
E74
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Peso del
Concentracin
material
Dilucin de la dilucin
vegetal
(ng/l)
(mg)
150
1:10
15,8
150
1:10
11
150
1:10
22,4
150
1:10
38,4
150
1:10
15,8
150
1:10
11
150
1:10
38,1
150
1:10
33,9
150
1:10
36,1
150
1:10
28,1
100
1:10
34
100
ND
52,3
100
1:10
24
100
1:5
62,4
100
ND
NA
100
ND
25,1
100
1:5
79,1
100
1:5
48,7
100
1:10
45,3
100
1:10
53
100
1:10
74,1
100
1:10
63,4
100
1:10
70
100
1:10
80
100
1:10
72
100
1:10
77,1
100
1:10
82
100
1:10
72,3
100
1:10
51,3
100
1:10
78,7
36
1:10
89
42
1:100
8,5
31
1:100
9,3
46
1:10
75
39
1:100
7,4
34
1:100
8,8
37
1:100
6,7
46
1:100
7,1
40
1:100
5,9
39
1:100
7,1
45
1:10
90
46
1:5
183
37
1:10
80
39
ND
568
32
1:10
61,5
41
1:10
65,8
40
1:10
93,3
39
1:10
98,8
37
1:10
85,2
42
1:10
89,7
35
1:10
96,7
32
1:10
91,1
40
1:5
220
43
1:10
100
36
1:5
205,4
32
1:100
10,6
37
1:10
94,9
43
1:10
130
39
1:10
130
32
1:10
110
Concentracin
del extracto
(ng/l)
158
110
224
384
158
110
381
339
361
281
340
261,5
240
312
NA
251
395,5
243,5
453
530
741
634
700
800
720
771
820
723
513
787
890
850
930
750
740
880
670
710
590
710
900
915
800
568
615
658
933
988
852
897
967
911
1100
1000
1027
1060
949
1300
1300
1100
Rendimiento
(ngRNA/mg de
material
vegetal)
31,60
22,00
44,80
76,80
31,60
22,00
76,20
67,80
72,20
56,20
102,00
78,45
72,00
93,60
NA
75,30
118,65
73,05
135,90
159,00
222,30
190,20
210,00
240,00
216,00
231,30
246,00
216,90
153,90
236,10
741,67
607,14
900,00
489,13
569,23
776,47
543,24
463,04
442,50
546,15
600,00
596,74
648,65
436,92
576,56
481,46
699,75
760,00
690,81
640,71
828,86
854,06
825,00
697,67
855,83
993,75
769,46
906,98
1000,00
1031,25
Anexo F. Resultados artculo 1. Evaluacin de tres mtodos de extraccin de

RNA para la deteccin por RT-PCR del Potato yellow vein virus (PYVV) a
partir de muestras de diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja
139

Zona
rgano
Extracto
Mtodo de
extraccin
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
E111
E112
E113
E114
E115
E116
E117
E118
E119
E120
E147
E148
E149
E150
E151
E152
E153
E154
E155
E156
E75
E76
E77
E78
E79
E80
E81
E82
E83
E84
E91
E92
E93
E94
E95
E96
E97
E98
E99
E100
E127
E128
E129
E130
E131
E132
E133
E134
E135
E136
E55
E56
E57
E58
E59
E60
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Peso del
material
vegetal (mg)
98
82
79
84
83
92
94
87
90
79
98
83
99
84
82
79
80
96
100
75
96
82
75
99
98
82
79
88
84
97
150
150
150
150
150
150
150
150
150
150
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
Dilucin
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:5
1:10
1:10
1:10
1:10
ND
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
ND
ND
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:5
1:5
1:5
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
1:10
Concentracin
de la dilucin
(ng/l)
59,2
69,6
55,2
87,2
58,3
67,3
130
76,3
88,7
61,1
75,1
700
75
74,2
63,9
57,4
77,8
57,4
819
649
85,3
98,8
92,9
90,6
65,1
81,3
82,6
100,2
79,5
98,5
61,7
60,8
44,3
34,5
27,7
41,3
65,2
67,9
52,3
35,2
45
47,1
51
63,3
50
60
79,8
83
104
43,9
99,3
85,3
76,2
62,5
69,6
63,5
Concentracin
del extracto
(ng/l)
592
696
552
872
583
673
650
763
887
611
751
700
750
742
639
574
778
574
819
649
853
988
929
906
651
813
826
1002
795
985
617
608
443
345
277
413
652
679
523
352
450
471
510
633
500
600
399
415
520
439
993
853
762
625
696
635
Rendimiento
(ngRNA/mg de
material
vegetal)
181,22
254,63
209,62
311,43
210,72
219,46
207,45
263,10
295,67
232,03
229,90
253,01
227,27
265,00
233,78
217,97
291,75
179,38
245,70
259,60
266,56
361,46
371,60
274,55
199,29
297,44
313,67
341,59
283,93
304,64
123,40
121,60
88,60
69,00
55,40
82,60
130,40
135,80
104,60
70,40
135,00
141,30
153,00
189,90
150,00
180,00
119,70
124,50
156,00
131,70
297,90
255,90
228,60
187,50
208,80
190,50
140


Zona
rgano
Area
Area
Area
Area
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Mtodo de
Extracto
extraccin
E61
E62
E63
E64
E294
E295
E296
E297
E298
E299
E300
E303
E304
E305
E306
E307
E275
E276
E277
E278
E279
E280
E281
E282
E283
E284
E285
E286
E287
E288
E290
E291
E292
E293
E301
E302
E183
E184
E185
E186
E187
E188
E189
E190
E191
E192
E203
E204
E205
E206
E207
E208
E209
E210
E211
E212
E163
E164
E165
E166
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Peso del
Concentracin
material
vegetal
(ng/l)
(mg)
100
1:10
75,6
100
1:10
85,5
100
1:10
58,1
100
1:10
71,2
83
1:10
75,7
79
1:10
90,1
63
1:10
86,3
100
1:10
76,2
95
1:10
69,4
91
1:10
79,2
83
1:100
8,9
88
1:100
7,4
76
1:100
6,2
81
1:100
4,9
98
1:10
90,5
100
1:10
96,4
79
1:10
45,6
76
1:10
66,4
92
1:10
71,7
83
1:10
60,4
76
1:10
61,3
81
1:10
44
100
1:10
72,1
94
1:10
40,1
97
1:10
68,8
86
1:10
50,7
71
1:10
100
89
1:10
86,2
100
1:10
81,8
83
1:10
81,7
94
1:10
92,6
99
1:10
110
100
1:10
130
94
1:10
71,7
92
1:10
130
84
1:10
98
150
1:10
50,1
150
1:10
60,1
150
1:10
69,6
150
1:10
97,9
150
1:10
56,3
150
1:10
68,1
150
1:10
53,5
150
1:10
86,2
150
1:10
84,6
150
1:10
91,4
100
1:10
58,7
100
1:10
76,1
100
1:10
53,7
100
1:10
52,8
100
1:5
100,3
100
1:10
48
100
1:10
50,5
100
1:10
55,7
100
1:10
43
100
1:10
59,8
100
1:10
58,9
100
1:10
56,3
100
1:10
89,7
100
1:5
91,20
Concentracin
del extracto
(ng/l)
756
855
581
712
757
901
863
762
694
792
890
740
620
490
905
964
456
664
717
604
613
440
721
401
688
507
1000
862
818
817
926
1100
1300
717
1300
980
501
601
696
979
563
681
535
862
846
914
587
761
537
528
501,5
480
505
557
430
598
589
563
897
456
Rendimiento
(ngRNA/mg de
material
vegetal)
226,80
256,50
174,30
213,60
273,61
342,15
410,95
228,60
219,16
261,10
321,69
252,27
244,74
181,48
277,04
289,20
173,16
262,11
233,80
218,31
241,97
162,96
216,30
127,98
212,78
176,86
422,54
290,56
245,40
295,30
295,53
333,33
390,00
228,83
423,91
350,00
100,20
120,20
139,20
195,80
112,60
136,20
107,00
172,40
169,20
182,80
176,10
228,30
161,10
158,40
150,45
144,00
151,50
167,10
129,00
179,40
176,70
168,90
269,10
136,80

Grupo Phureja
141

Zona
rgano
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Extracto
Mtodo de
extraccin
E168
E167
E169
E170
E171
E172
E193
E194
E195
E196
E197
E198
E199
E200
E201
E202
E213
E214
E215
E216
E217
E218
E219
E220
E221
E222
E173
E174
E175
E176
E177
E178
E179
E180
E181
E182
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Peso del
Concentracin
material
vegetal
(ng/l)
(mg)
100
1:10
43
100
1:10
69,3
100
1:5
100,5
100
1:5
92,6
100
1:10
44,2
100
1:5
93
150
1:10
73,7
150
1:10
64
150
1:10
74,9
150
1:10
75,5
150
ND
521
150
1:10
69,2
150
1:10
74,4
150
1:10
45,1
150
1:5
123,5
150
1:5
158,3
100
1:10
64,5
100
1:10
67,4
100
1:10
51,1
100
1:10
81,7
100
1:10
42
100
1:10
48
100
1:10
77,7
100
1:10
78,4
100
1:10
68,9
100
1:10
42
100
1:10
100
100
1:10
73,4
100
1:10
88,7
100
1:10
95,4
100
1:10
65,5
100
1:10
82,2
100
1:10
93,3
100
1:10
83
100
1:5
150
100
1:10
64,8
Concentracin
del extracto
(ng/l)
430
693
502,5
463
442
465
737
640
749
755
521
692
744
451
617,5
791,5
645
674
511
817
420
480
777
784
689
420
1000
734
887
954
655
822
933
830
750
648
Rendimiento
(ngRNA/mg de
material
vegetal)
129,00
207,90
150,75
138,90
132,60
139,50
147,40
128,00
149,80
151,00
104,20
138,40
148,80
90,20
123,50
158,30
193,50
202,20
153,30
245,10
126,00
144,00
233,10
235,20
206,70
126,00
300,00
220,20
266,10
286,20
196,50
246,60
279,90
249,00
225,00
194,40
ND: No diludo
Anexo F.2: Determinacin de la calidad de los extractos

de RNA y Resultados de RT-PCR
Tabla Anexo F - 2. Calculo de la relacin 260/280 para la determinacin de la calidad de los
extractos de RNA, y resultados de RT-PCR
Zona
Area
Area
Area
Area
Area
Area
rgano
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Extracto
E322
E340
E343
E346
E321
E349
Mtodo de
extraccin
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
OD
260nm
0,24
0,22
0,28
0,23
0,29
0,23
OD
280nm
0,14
0,13
0,16
0,13
0,16
0,14
260/280
1,68
1,60
1,74
1,73
1,84
1,71
RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
142


Zona
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
rgano
Extracto
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
E352
E355
E320
E331
E334
E337
E35
E36
E37
E38
E39
E40
E41
E42
E43
E44
E45
E46
E47
E48
E49
E50
E51
E52
E53
E54
E25
E26
E27
E28
E29
E30
E31
E32
E33
E34
E251
E252
E253
E254
E255
E256
E257
E258
E259
E260
E261
E262
E263
E264
E265
E266
E267
E268
E269
E270
E241
E242
Mtodo de
Extraccin
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
OD
260nm
0,20
0,26
0,35
0,30
0,24
0,31
0,11
0,13
0,16
0,15
0,16
0,15
0,11
0,13
0,18
0,18
0,14
0,26
0,32
0,34
0,29
0,28
0,18
0,16
0,24
0,18
0,86
0,97
0,86
0,85
0,44
0,32
0,34
0,32
0,30
0,40
0,13
0,12
0,08
0,13
0,06
0,06
0,09
0,14
0,09
0,15
0,10
0,15
0,08
0,13
0,11
0,15
0,07
0,13
0,10
0,05
0,10
0,10
OD
280nm
0,11
0,14
0,19
0,17
0,13
0,16
0,08
0,09
0,10
0,09
0,09
0,09
0,07
0,10
0,11
0,10
0,09
0,16
0,18
0,18
0,17
0,17
0,11
0,10
0,15
0,12
0,44
0,53
0,43
0,44
0,26
0,18
0,17
0,16
0,16
0,21
0,07
0,07
0,04
0,07
0,04
0,04
0,05
0,07
0,05
0,08
0,06
0,09
0,05
0,07
0,06
0,08
0,04
0,07
0,06
0,03
0,05
0,05
260/280
1,76
1,80
1,85
1,81
1,80
1,88
1,52
1,56
1,65
1,71
1,83
1,67
1,50
1,34
1,66
1,76
1,59
1,69
1,78
1,85
1,70
1,65
1,67
1,66
1,60
1,52
1,98
1,81
1,99
1,94
1,70
1,77
1,95
1,95
1,87
1,89
1,74
1,75
1,88
1,79
1,63
1,69
1,92
1,86
1,84
1,87
1,82
1,77
1,71
1,85
1,80
1,85
1,74
1,83
1,65
1,80
1,96
1,76
RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo

Grupo Phureja
Zona
rgano
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Peciolo
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Pednculo floral
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Extracto
E243
E244
E245
E246
E247
E248
E249
E250
E101
E102
E103
E104
E105
E106
E107
E108
E109
E110
E137
E138
E139
E140
E141
E142
E143
E144
E145
E146
E65
E66
E67
E68
E69
E70
E71
E72
E73
E74
E111
E112
E113
E114
E115
E116
E117
E118
E119
E120
E147
E148
E149
E150
E151
E152
E153
E154
E155
E156
Mtodo de
extraccin
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
OD
OD
260nm 280nm
0,08
0,07
0,08
0,07
0,09
0,08
0,08
0,14
0,23
0,21
0,22
0,23
0,22
0,11
0,12
0,13
0,18
0,16
0,26
0,26
0,22
0,19
0,17
0,25
0,14
0,27
0,21
0,16
0,24
0,27
0,30
0,24
0,27
0,25
0,28
0,27
0,25
0,31
0,26
0,31
0,26
0,21
0,20
0,11
0,15
0,27
0,29
0,23
0,19
0,09
0,12
0,14
0,07
0,11
0,13
0,11
0,11
0,09
0,04
0,04
0,04
0,04
0,05
0,04
0,04
0,07
0,14
0,13
0,12
0,14
0,13
0,06
0,07
0,07
0,10
0,09
0,16
0,14
0,15
0,11
0,12
0,14
0,09
0,15
0,14
0,09
0,13
0,13
0,17
0,13
0,15
0,13
0,16
0,15
0,14
0,16
0,15
0,17
0,16
0,12
0,12
0,06
0,09
0,15
0,17
0,12
0,12
0,05
0,06
0,08
0,04
0,06
0,08
0,06
0,05
0,05
260/280
RT-PCR
1,88
1,72
1,88
1,88
1,88
1,95
2,00
1,97
1,66
1,61
1,76
1,67
1,63
1,74
1,74
1,78
1,93
1,79
1,69
1,82
1,43
1,71
1,45
1,75
1,63
1,78
1,48
1,76
1,80
2,02
1,84
1,91
1,88
1,95
1,82
1,77
1,79
1,88
1,77
1,85
1,66
1,81
1,68
1,82
1,73
1,77
1,76
1,88
1,58
1,85
1,85
1,79
1,74
1,86
1,68
1,81
1,98
1,80
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
143
144


Zona
rgano
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Ptalo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Tallo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Extracto
Mtodo de
extraccin
E75
E76
E77
E84
E78
E79
E80
E81
E82
E83
E91
E92
E93
E94
E95
E96
E97
E98
E99
E100
E127
E128
E129
E130
E131
E132
E133
E134
E135
E136
E55
E56
E57
E58
E59
E60
E61
E62
E63
E64
E294
E295
E296
E297
E298
E299
E300
E303
E304
E305
E306
E307
E275
E276
E277
E278
E279
E280
E281
E282
E283
E284
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
OD
OD
260nm 280nm
0,10
0,08
0,07
0,07
0,20
0,09
0,12
0,07
0,16
0,05
0,19
0,14
0,20
0,19
0,17
0,12
0,11
0,12
0,22
0,27
0,17
0,12
0,15
0,20
0,21
0,21
0,19
0,25
0,21
0,19
0,11
0,14
0,15
0,10
0,15
0,21
0,18
0,16
0,24
0,21
0,23
0,27
0,21
0,05
0,44
0,58
0,13
1,37
0,70
0,57
0,14
0,44
0,26
0,20
0,34
0,05
0,24
0,13
0,14
0,35
0,27
0,19
0,05
0,05
0,04
0,04
0,10
0,05
0,06
0,04
0,09
0,03
0,12
0,09
0,14
0,11
0,09
0,07
0,06
0,07
0,12
0,14
0,12
0,08
0,08
0,14
0,12
0,12
0,14
0,14
0,14
0,12
0,06
0,07
0,08
0,05
0,08
0,10
0,10
0,08
0,12
0,11
0,14
0,15
0,13
0,03
0,25
0,34
0,08
0,79
0,39
0,31
0,08
0,25
0,14
0,12
0,20
0,03
0,15
0,08
0,09
0,20
0,18
0,10
260/280
RT-PCR
1,85
1,78
1,73
1,74
2,00
1,89
1,91
1,71
1,84
1,74
1,62
1,69
1,51
1,70
1,84
1,70
1,69
1,72
1,77
1,85
1,42
1,60
1,79
1,43
1,70
1,67
1,39
1,78
1,57
1,58
1,84
2,03
1,90
1,85
1,93
2,05
1,84
1,98
1,92
1,90
1,68
1,73
1,66
1,56
1,76
1,71
1,69
1,73
1,78
1,84
1,72
1,80
1,82
1,63
1,74
1,87
1,68
1,69
1,63
1,73
1,52
1,89
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo

Grupo Phureja
Zona
rgano
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Brote tubrculo
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Extracto
Mtodo de
extraccin
E285
E286
E287
E288
E290
E291
E301
E292
E293
E302
E183
E184
E185
E186
E187
E188
E189
E190
E191
E192
E203
E204
E205
E206
E207
E208
E209
E210
E211
E212
E163
E164
E165
E166
E167
E168
E169
E170
E171
E172
E193
E194
E195
E196
E197
E198
E199
E200
E201
E202
E213
E214
E215
E216
E217
E218
E219
E220
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
OD
OD
260nm 280nm
0,31
0,26
0,27
0,29
0,40
0,46
0,55
0,29
0,60
0,04
0,07
0,26
0,23
0,24
0,21
0,20
0,18
0,11
0,23
0,23
0,20
0,02
0,05
0,08
0,20
0,05
0,08
0,28
0,09
0,07
0,17
0,11
0,12
0,05
0,14
0,11
0,12
0,13
0,31
0,27
0,12
0,14
0,11
0,19
0,14
0,11
0,09
0,12
0,12
0,13
0,11
0,20
0,10
0,04
0,20
0,13
0,28
0,05
0,18
0,14
0,14
0,15
0,22
0,25
0,29
0,16
0,32
0,02
0,04
0,15
0,14
0,14
0,12
0,11
0,10
0,06
0,14
0,12
0,13
0,01
0,03
0,04
0,12
0,03
0,04
0,15
0,05
0,04
0,09
0,06
0,07
0,03
0,08
0,06
0,07
0,07
0,17
0,15
0,07
0,08
0,06
0,10
0,08
0,07
0,05
0,08
0,07
0,08
0,07
0,11
0,06
0,03
0,11
0,08
0,17
0,03
260/280
RT-PCR
1,70
1,86
1,91
1,93
1,80
1,85
1,89
1,88
1,85
1,87
1,76
1,74
1,67
1,69
1,72
1,85
1,78
1,73
1,69
1,86
1,61
1,88
1,96
1,90
1,67
1,84
1,92
1,88
1,73
1,69
1,88
1,78
1,80
1,79
1,78
1,86
1,78
1,82
1,85
1,80
1,65
1,77
1,75
1,85
1,72
1,67
1,75
1,63
1,67
1,76
1,63
1,79
1,65
1,76
1,80
1,72
1,68
1,71
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
145
146


Zona
rgano
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Extracto
Mtodo de
extraccin
E221
E222
E173
E174
E175
E176
E177
E178
E179
E180
E181
E182
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
OD
OD
260nm 280nm
0,08
0,11
0,24
0,12
0,12
0,13
0,27
0,25
0,12
0,14
0,14
0,19
260/280
RT-PCR
1,61
1,69
1,80
1,67
1,74
2,00
1,85
1,77
1,80
1,89
1,65
1,82
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
0,05
0,06
0,13
0,07
0,07
0,06
0,15
0,14
0,07
0,07
0,08
0,11
Anexo F.3: Determinacin de la integridad de los

extractos de RNA
Tabla Anexo F - 3 Determinacin de la integridad de los extractos de RNA
Zona
rgano Extracto
Mtodo de Intensidad Intensidad

28S/18S
extraccin
28S
18S
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Area
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Antera
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
Foliolo
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
E322
E340
E343
E346
E321
E349
E352
E355
E320
E331
E334
E337
E35
E36
E37
E38
E39
E40
E41
E42
E43
E44
E45
E46
E47
E48
E49
E50
E51
E52
E53
E54
E25
E26
E27
E28
E29
E30
E31
3698541
3964210
4956213
4213658
3698742
2365874
5843216
4326874
4563213
3694852
5231497
1265987
3471430
5325449
3277087
3016510
2939439
3928459
2065409
3171894
4918217
2578024
855648
2849083
6956347
5999205
5207447
NA
6913326
1647012
4149690
5231941
6152430
6972874
5358439
5292439
7336459
6847167
5962430
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Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Radical
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Primaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Raz Secundaria
Extracto

28S/18S
extraccin
28S
18S
E212
E163
E164
E165
E167
E168
E169
E170
E171
E172
E193
E194
E195
E196
E197
E198
E199
E200
E201
E202
E213
E214
E215
E216
E217
E218
E219
E220
E221
E222
E173
E174
E175
E176
E177
E178
E179
E180
E181
E182
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
CTAB
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Sephadex
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
3656983
1240631
1983740
951317
1188225
1729335
2081920
NA
1243125
1286648
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
4932146
4708296
NA
2794882
2041983
5558167
4827752
4783267
2506782
2132125
NA
NA
NA
NA
NA
NA
3450066
2177782
3725238
NA
2037761
833598
1159660
600092
850660
967669
1349983
NA
842782
933740
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
5165681
5164581
NA
2754497
2225569
6115622
4226874
3507125
2699702
2444196
NA
NA
NA
NA
NA
NA
4803974
2576439
3774832
NA
1,79
1,49
1,71
1,59
1,40
1,79
1,54
NA
1,48
1,38
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
0,95
0,91
NA
1,01
0,92
0,91
1,14
1,36
0,93
0,87
NA
NA
NA
NA
NA
NA
0,72
0,85
0,99
NA
NA: no asignado debido a que la muestra estaba con cierto grado de degradacin y por
lo tanto no pudo determinarse la intensidad del RNA 28 y/o 18S.

Grupo Phureja
151
Anexo F.5: Resmen de resultados

Tabla Anexo F - 4 Resumen de los resultados de PCR, rendimiento, calidad e integridad en cada
uno de los rganos evaluados
rgano
Extraccin
Antera
Foliolo
Peciolo
Pednculo
floral
Ptalo
Tallo
Brote de
Tubrculo
Raz
Primaria
Raz
Secundaria
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
CTAB
Sephadex
Trizol
PCR
Rendimiento
Error
estndar
583,84
25,32
638,78
24,24
956,71
74,25
109,72
11,30
253,56
11,70
414,54
23,88
50,12
7,09
100,88
9,84
216,27
8,64
607,86
47,56
613,16
31,14
876,29
33,86
238,53
13,21
240,34
9,63
301,47
15,98
98,18
9,11
148,11
7,23
224,04
11,94
275,17
17,63
202,62
13,03
327,54
21,77
143,56
10,83
164,54
8,52
165,02
13,95
133,96
7,07
186,51
14,50
246,39
11,70
Promedio
4/4
4/4
4/4
9/10
8/10
9/10
7/10
8/10
10/10
10/10
9/10
10/10
7/10
8/10
10/10
10/10
9/10
8/10
9/12
7/10
8/10
8/10
9/10
9/10
8/10
8/10
7/10
%CV
Promedio
8,67
7,59
15,52
32,57
14,59
18,22
44,74
30,83
12,63
24,74
16,06
12,22
17,51
12,67
16,77
29,34
15,44
16,85
22,19
20,33
21,02
23,85
16,37
26,73
16,69
24,58
15,01
1,69
1,78
1,83
1,62
1,67
1,89
1,80
1,78
1,89
1,73
1,65
1,86
1,77
1,80
1,82
1,71
1,59
1,92
1,72
1,72
1,85
1,75
1,81
1,81
1,72
1,70
1,80
Calidad
Error
estndar
0,031
0,029
0,018
0,045
0,030
0,031
0,029
0,021
0,029
0,029
0,046
0,025
0,022
0,035
0,030
0,031
0,047
0,023
0,021
0,037
0,020
0,021
0,039
0,011
0,021
0,020
0,033
%CV
3,64
3,25
2,00
8,84
5,71
5,16
5,13
3,67
4,83
5,37
8,76
4,24
3,95
6,12
5,20
5,83
9,25
3,81
4,24
6,71
3,45
3,82
6,77
2,00
3,89
3,79
5,77
Integridad
Error
estndar
1,56
0.13
1,63
0.07
1,66
0.04
1,37
0.03
1,59
0.05
1,74
0.03
1,41
0.05
1,67
0.03
1,75
0.04
2,02
0.03
1,77
0.10
1,69
0.03
1,38
0.05
1,41
0.04
1,52
0.06
1,54
0.04
1,43
0.06
1,82
0.03
1,44
0.03
1,63
0.06
1,82
0.03
1,54
0.04
1,52
0.07
1,55
0.05
NA
1,00
0.05
0,85
0.04
Promedio
NA
%CV
8,67
7,59
15,52
32,57
14,59
18,22
44,74
30,83
12,63
24,74
16,06
12,22
17,51
12,67
16,77
29,34
15,44
16,85
22,19
20,33
21,02
23,85
16,37
26,73
NA
24,58
15,01
Anexo F.6: Resultados anlisis estadsticos

Anexo F.6.1: Comparaciones entre mtodos de extraccin de
RNA por rgano
Tabla Anexo F - 5. Valores de p obtenidos en prueba Mann-Whitney para la comparacin entre
mtodos de extraccin por rgano.
rgano
Prueba Mann-Whitney
Parmetros comparados
Rendimiento
Mtodo
Antera
Calidad
Mtodo
Integridad
Mtodo
Valor p
Mtodos comparados
Sephadex-CTAB
0.000711 Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
0.011 Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
0.755
valor p
0,7010264
0,0009156
0,0027170
0,0941158
0,0090194
0,3258475
152

Tabla Anexo F-6. Continuacin

rgano
Brote de
tubrculo
Foliolo
Prueba Mann-Whitney
Parmetros comparados
Valor p
Rendimiento
Mtodo
0.000205
Calidad
Mtodo
Integridad
Mtodo
1.75 10-6
Calidad
Mtodo
3.56 10-5
Integridad
Mtodo
7.28 10-7
Rendimiento
Mtodo
Calidad
Mtodo
Peciolo
Integridad
Mtodo
Rendimiento
Mtodo
Calidad
Mtodo
Pednculo
Floral
Integridad
Mtodo
Rendimiento
Mtodo
Rendimiento
Mtodo
Ptalo
Raz
Primaria
0.00154
Calidad
Mtodo
Integridad
Mtodo
Rendimiento
Mtodo
Calidad
Mtodo
Integridad
Mtodo
2.72 10-12
0.0178
0.000158
6.95 10-13
0.000611
0.00195
2.45 10-5
0.0028
0.548
0.312
0.325
0.17
0.93
Mtodos comparados
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
valor p
0,0187325
0,1087207
0,0001344
0,9988813
0,0034524
0,0045768
0,0067316
0,000001
0,0110551
4,80 10-6
0,000001
7,00 10-7
0,5805576
0,0000491
0,0007113
0,0007894
0,0000005
0,0304453
0,0010441
0,0000001
0,0000001
0,9156402
0,0555763
0,0228316
0,004441
0,0001792
0,5976829
0,9947033
0,0000957
0,0001243
0,24347
0,0276686
0,0004413
0,0434081
0,001603
0,6882554
0,994872
0,0062191
0,0078979

Grupo Phureja
153
Tabla Anexo F-6. Continuacin

Prueba Mann-Whitney
rgano
Raz
Secundaria
Tallo
Parmetros
comparados
Valor p
Rendimiento
Mtodo
1.05 10-6
Calidad
Mtodo
0.0311
Integridad
Mtodo
0.18
Rendimiento
Mtodo
3.7 10-9
Calidad
Mtodo
1.43 10-6
Integridad
Mtodo
1.9 10-5
Mtodos comparados
valor p
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
0,0088044
0,0000006
0,0028451
0,8710521
0,0992489
0,0345162
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
Sephadex-CTAB
Trizol-CTAB
Trizol-Sephadex
0,0029340
0,0000000
0,0000188
0,0662481
0,0004981
0,0000010
0,2566870
0,0009981
0,0000195
Las celdas que estn sombreadas corresponden a comparaciones en las que se present un valor
de p >0.05 por lo tanto se omiti la evaluacin por la prueba de Mann-Whitney
Anexo F.6.2: Efecto del rgano, el mtodo de extraccin y la

interaccin del rgano con el mtodo de extraccin en el
rendimiento, calidad e integridad
Tabla Anexo F - 6. Valores de p de prueba de Kruskall-Wallis para la evaluacin del efecto del
rgano, mtodo de extraccin y la interaccin del rgano y mtodo de extraccin
Valores de p
Parmetro
rgano
Mtodo
Interaccin rgano - Mtodo
-16
-16
-15
Rendimiento
< 2.6 10
< 2.6 10
1.65 10
-16
-5
Calidad
0.0408
< 2.6 10
1.35 10
-16
-10
-12
Integridad
< 2.6 10
2.82 10
2.42 10
Anexo G. Resultados artculo 2.

Anexo G.1: Determinacin del nmero de copias del gen
CP de PYVV
Tabla Anexo G- 1. Determinacin del nmero de copias del gen CP de PYVV y resultados de RTPCR en muestras de S. tuberosum Grupo Phureja en diferentes rganos de plantas infectadas
Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
rgano Extracto Ct (COX) Ct(CP) Copias CP

Tallo
T208
16,76 24,45
1,12 107
Tallo
T209
16,97 23,65
1,96 107
Tallo
T210
16,76 23,00
3,11 107
Peciolo
T211
16,77 23,42
2,31 107
Peciolo
T212
15,49 23,45
2,26 107
Peciolo
T213
15,30 23,50
2,19 107
Peciolo
T214
16,47 24,57
1,03 107
Peciolo
T215
15,70 23,12
2,86 107
Peciolo
T216
15,89 22,35
4,90 107
Peciolo
T217
16,83 21,58
8,42 107
Peciolo
T218
15,48 22,24
5,31 107
Peciolo
T219
16,58 22,50
4,43 107
Peciolo
T220
16,53 23,72
1,87 107
Peciolo
T221
16,98 23,12
2,86 107
Peciolo
T222
16,62 23,99
1,55 107
Peciolo
T223
16,89 22,20
5,45 107
Peciolo
T224
15,94 21,59
8,36 107
Peciolo
T225
16,35 22,19
5,50 107
Peciolo
T226
15,53 23,86
1,69 107
Peciolo
T227
16,88 23,99
1,55 107
Peciolo
T228
16,70 22,16
5,61 107
Peciolo
T229
16,57 22,17
5,59 107
Peciolo
T230
16,80 23,99
1,55 107
Peciolo
T231
15,83 22,20
5,45 107
Peciolo
T232
15,87 22,86
3,42 107
Peciolo
T233
16,31 23,11
2,87 107
Peciolo
T234
15,89 22,88
3,37 107
Foliolo
T235
15,85 23,11
2,87 107
Foliolo
T236
15,46 21,55
8,65 107
Foliolo
T237
15,44 21,64
8,11 107
Foliolo
T238
16,71 23,10
2,90 107
Foliolo
T239
15,81 21,41
9,50 107
Foliolo
T240
16,60 21,64
8,11 107
Foliolo
T241
16,73 24,19
1,34 107
Foliolo
T242
15,67 24,19
1,34 107
Foliolo
T243
15,93 21,64
8,11 107
Foliolo
T244
16,32 22,15
5,66 107
Foliolo
T245
15,72 22,88
3,37 107
Foliolo
T246
15,75 24,19
1,34 107
Foliolo
T247
15,79 22,11
5,80 107
Foliolo
T248
15,60 22,88
3,37 107
Foliolo
T249
15,82 22,59
4,16 107
Foliolo
T250
16,99 24,19
1,34 107
RT-PCR
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
156

Tabla Anexo G 1. Continuacin

Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
rgano
Extracto Ct (COX) Ct(CP) Copias CP
Foliolo
T251
16,39 21,90
6,73 107
Foliolo
T252
16,73 22,97
3,17 107
Foliolo
T253
16,36 22,88
3,37 107
Foliolo
T254
15,99 22,88
3,37 107
Foliolo
T255
16,48 22,58
4,18 107
Foliolo
T256
16,42 23,08
2,93 107
Foliolo
T257
16,94 22,92
3,28 107
Foliolo
T258
15,45 21,99
6,32 107
Raz primaria
T259
16,60 22,92
3,28 107
Raz primaria
T260
16,73 22,02
6,19 107
Raz secundaria
T261
15,67 23,48
2,21 107
Raz secundaria
T262
15,93 24,24
1,30 107
Raz secundaria
T263
16,32 22,97
3,18 107
Raz secundaria
T264
15,72 21,57
8,52 107
Raz secundaria
T265
15,75 21,80
7,25 107
Raz secundaria
T266
15,79 23,59
2,05 107
Raz secundaria
T267
15,60 22,13
5,74 107
Tallo
T119
16,63 21,46
9,17 107
Tallo
T120
16,34 22,28
5,17 107
Tallo
T121
16,64 20,65
1,62 108
Tallo
T122
16,22 20,65
1,63 108
Tallo
T123
15,49 20,47
1,84 108
Tallo
T124
15,37 19,76
3,04 108
Tallo
T125
16,86 20,28
2,11 108
Peciolo
T126
16,73 21,45
9,24 107
Peciolo
T127
15,68 21,36
9,86 107
Peciolo
T128
15,32 20,27
2,12 108
Peciolo
T129
15,64 19,59
3,42 108
Peciolo
T130
15,73 19,51
3,64 108
Peciolo
T131
15,41 18,91
5,55 108
Peciolo
T132
15,53 21,38
9,69 107
Peciolo
T133
15,40 20,44
1,88 108
Peciolo
T134
15,83 21,35
9,96 107
Peciolo
T135
15,64 19,55
3,53 108
Peciolo
T136
15,78 19,14
4,72 108
Peciolo
T137
16,42 20,73
1,54 108
Peciolo
T138
16,27 19,20
4,52 108
Peciolo
T139
16.00 19,84
2,88 108
Peciolo
T140
15,52 19,02
5,13 108
Peciolo
T141
16,97 21,57
8,51 107
Peciolo
T142
15,39 20,63
1,65 108
Peciolo
T143
15,69 19,02
5,13 108
Peciolo
T144
15,64 20,32
2,05 108
Peciolo
T145
15,49 20,40
1,94 108
Peciolo
T146
15,85 18,68
6,50 108
Peciolo
T147
16,36 21,63
8,14 107
Peciolo
T148
15,48 18,68
6,50 108
Peciolo
T149
15,76 19,22
4,45 108
Peciolo
T150
15,57 18,68
6,50 108
Peciolo
T151
15,91 18,61
6,85 108
Peciolo
T152
16,60 19,09
4,87 108
Foliolo
T153
15,34 21,48
9,09 107
Foliolo
T154
15,99 19,26
4,33 108
Foliolo
T155
16,37 17,67
1,33 109
Foliolo
T156
15,30 18,56
7,08 108
Foliolo
T157
15,51 18,53
7,21 108
Foliolo
T158
15,60 20,73
1,54 108
Foliolo
T159
15,26 17,10
1,98 109
Foliolo
T160
15,85 20,73
1,54 108
Foliolo
T161
16,92 18,41
7,85 108
Foliolo
T162
16,36 20,73
1,54 108
Foliolo
T163
15,83 18,65
6,63 108
RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Anexo G. Resultados artculo 2. PCR en tiempo real para la deteccin y

cuantificacin del gen de la protena mayor de la cpside del Potato yellow
vein virus (PYVV) en diferentes rganos de plantas de Solanum tuberosum
Grupo Phureja infectadas con el virus
Sintomatologa
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Moderada
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
rgano
Foliolo
T164
15,42 17,45
1,55 109
Foliolo
T165
15,91 18,53
7,21 108
Foliolo
T166
15,67 18,62
6,79 108
Foliolo
T167
15,31 18,37
8,11 108
Foliolo
T168
16,35 17,95
1,09 109
Foliolo
T169
15,81 17,34
1,67 109
Foliolo
T170
15,56 17,55
1,44 109
Foliolo
T171
15,89 21,48
9,09 107
Foliolo
T172
15,61 19,30
4,21 108
Foliolo
T173
15,41 17,67
1,33 109
Foliolo
T174
15,41 17,72
1,28 109
Foliolo
T175
15,77 19,57
3,48 108
Foliolo
T176
16,35 19,57
3,48 108
Foliolo
T177
16,71 18,48
7,51 108
Foliolo
T178
15,38 17,51
1,48 109
Foliolo
T179
15,76 17,42
1,58 109
Pednculo floral
T180
15,66 18,21
9,04 108
Pednculo floral
T181
15,57 17,50
1,49 109
Pednculo floral
T182
15,89 17,71
1,29 109
Pednculo floral
T183
15,49 18,32
8,37 108
Pednculo floral
T184
15,30 18,25
8,83 108
Pednculo floral
T185
16,62 18,37
8,11 108
Ptalo
T186
15,56 18,30
8,48 108
Ptalo
T187
16,56 18,66
6,62 108
Ptalo
T188
16,40 19,93
2,69 108
Ptalo
T189
15,64 19,21
4,47 108
Ptalo
T190
15,99 18,97
5,29 108
Ptalo
T191
16,25 20,58
1,71 108
Antera
T192
15,67 22,05
6,06 107
Antera
T193
16,33 22,04
6,13 107
Antera
T194
16,45 21,92
6,65 107
Antera
T195
15,68 22,50
4,42 107
Antera
T196
16,73 22,78
3,63 107
Antera
16,58 24,57
1,03 107
T197
Raz primaria
15,62
21,80
7,23 107
T198
Raz primaria
16,48 20,78
1,48 108
T199
Raz primaria
16,39 21,44
9,31 107
T200
Raz primaria
16,38 21,55
8,65 107
T201
Raz primaria
16,32 20,16
2,29 108
T202
Raz primaria
16,73 21,57
8,52 107
T203
Raz secundaria
15,39 21,27
1,05 108
T204
Raz secundaria
15,46 21,05
1,23 108
T205
Raz secundaria
16,66 21,92
6,65 107
T206
Raz secundaria
16,28 21,82
7,13 107
T207
T1
Tallo
16,40 20,75
1,51 108
T2
Tallo
16,50 17,06
2,03 109
T3
Tallo
15,58 18,39
8,01 108
T4
Tallo
15,70 19,17
4,60 108
T5
Tallo
15,92 18,24
8,87 108
T6
Tallo
15,57 18,51
7,35 108
T7
Tallo
15,53 17,55
1,44 109
T8
Tallo
15,55 17,72
1,28 109
T9
Tallo
15,60 18,50
7,39 108
T10
Tallo
15,74 19,12
4,77 108
Peciolo
T11
15,53 16,95
2,20 109
Peciolo
T12
15,52 18,62
6,78 108
Peciolo
T13
16,59 18,25
8,82 108
Peciolo
T14
16,32 16,58
2,86 109
RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
157
158


Sintomatologa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
rgano Extracto Ct (COX) Ct(CP) Copias CP

Peciolo
T15
15,45 18,51
7,31 108
Peciolo
T16
16,36 18,44
7,69 108
Peciolo
T17
15,26 16,59
2,84 109
Peciolo
T18
15,56 18,34
8,28 108
Peciolo
T19
15,88 18,73
6,30 108
Peciolo
T20
16,27 17,14
1,93 109
Peciolo
T21
15,65 18,47
7,56 108
Peciolo
T22
15,93 18,35
8,20 108
Peciolo
T23
15,84 18,48
7,47 108
Peciolo
T24
15,71 17,96
1,08 109
Peciolo
T25
15,80 17,40
1,60 109
Peciolo
T26
15,43 17,05
2,05 109
Peciolo
T27
15,59 18,07
9,97 108
Peciolo
T28
15,74 18,56
7,08 108
Peciolo
T29
15,83 18,30
8,49 108
Peciolo
T30
15,80 18,38
8,03 108
Peciolo
T31
15,64 17,57
1,42 109
Peciolo
T32
15,92 21,27
1,05 108
Peciolo
T33
15,64 19,03
5,08 108
Peciolo
T34
15,43 17,95
1,09 109
Peciolo
T35
16,25 18,90
5,58 108
Peciolo
T36
15,81 16,71
2,60 109
Peciolo
T37
15,50 17,27
1,76 109
Peciolo
T38
15,27 19,00
5,19 108
Peciolo
T39
15,50 18,23
8,94 108
Peciolo
T40
15,94 17,13
1,94 109
Peciolo
T41
15,26 16,29
3,50 109
Peciolo
T42
15,37 17,73
1,27 109
Peciolo
T43
15,47 21,42
9.42 107
Peciolo
T44
15,40 17,49
1,50 109
Peciolo
T45
15,47 21,36
9,81 107
Peciolo
T46
15,43 20,16
2,30 108
Peciolo
T47
15,58 21,08
1,20 108
Peciolo
T48
15,89 19,28
4,28 108
Peciolo
T49
16,26 20,27
2,12 108
Foliolo
T50
16,42 18,32
8,40 108
Foliolo
T51
15,30 18,56
7,08 108
Foliolo
T52
15,34 16,17
3,80 109
Foliolo
T53
16,77 18,44
7,69 108
Foliolo
T54
15,84 18,44
7,69 108
Foliolo
T55
15,89 17,55
1,44 109
Foliolo
T56
15,59 18,34
8,27 108
Foliolo
T57
15,49 18,80
5,96 108
Foliolo
T58
15,33 16,62
2,77 109
Foliolo
T59
15,76 18,51
7,35 108
Foliolo
T60
15,47 17,28
1,75 109
Foliolo
T61
15,80 18,55
7,12 108
Foliolo
T62
15,19 17,14
1,92 109
Foliolo
T63
16,86 18,38
8,06 108
Foliolo
T64
15,33 18,20
9,11 108
Foliolo
T65
16,29 18,28
8,60 108
Foliolo
T66
15,40 18,54
7,16 108
Foliolo
T67
15,56 18,00
1,05 109
Foliolo
T68
15,70 18,11
9,71 108
Foliolo
T69
15,65 17,42
1,58 109
Foliolo
T70
15,31 17,28
1,75 109
Foliolo
T71
15,84 18,50
7,41 108
Foliolo
T72
15,55 18,65
6,63 108
Foliolo
T73
15,54 18,15
9,44 108
Foliolo
T74
15,34 16,48
3,06 109
Foliolo
T75
15,55 19,09
4,89 108
Foliolo
T76
15,79 17,78
1,23 109
RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Negativo

159

Sintomatologa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
Severa
rgano
Foliolo
T77
15,84 19,23
4,42 108
Foliolo
T78
15,47 17,52
1,47 109
Foliolo
T79
15,75 18,03
1,03 109
Foliolo
T80
15,82 17,93
1,10 109
Foliolo
T81
15,70 17,52
1,47 109
Foliolo
T82
16,31 19,76
3,05 108
Foliolo
T83
15,96 21,19
1,11 108
Foliolo
T84
15,59 21,05
1,23 108
Foliolo
T85
15,70 16,26
3,57 109
Raz primaria
T86
15,67 20,14
2,32 108
Raz primaria
T87
15,95 19,59
3,43 108
Raz primaria
T88
16,49 21,19
1,11 108
Raz primaria
T89
15,48 20,59
1,70 108
Raz primaria
T90
16,29 20,42
1,91 108
Raz primaria
T91
15,87 19,11
4,82 108
Raz primaria
T92
15,72 19,38
3,97 108
Raz primaria
T93
15,86 21,20
1,10 108
Raz primaria
T94
15,73 20,49
1,82 108
Raz secundaria
T95
15,35 20,62
1,66 108
Raz secundaria
T96
16,38 19,08
4,91 108
Raz secundaria
T97
15,58 19,24
4,39 108
Raz secundaria
T98
15,45 18,93
5,45 108
Raz secundaria
T99
15,70 21,51
8,89 107
Raz secundaria
T100
15,96 21,34
9,97 107
Raz secundaria
T101
15,44 21,42
9,44 107
Raz secundaria
T102
15,93 19,31
4,19 108
Raz secundaria
T103
15,97 19,75
3,06 108
Raz secundaria
T104
15,4 20,29
2,09 108
Raz secundaria
T105
15,97 21,40
9,62 107
Raz secundaria
T106
15,68 21,57
8,53 107
Raz secundaria
T107
15,85 20,38
1,96 108
Raz secundaria
T108
15,33 21,40
9,62 107
Raz secundaria
T109
15,71 19,80
2,95 108
Raz secundaria
T110
16,78 20,65
1,63 108
Raz secundaria
T111
16,25 21,58
8,46 107
Raz secundaria
T112
15,69 21,58
8,45 107
Pednculo floral
T113
15,89 20,21
2,22 108
Pednculo floral
T114
15,85 18,84
5,80 108
Ptalo
T115
15,46 19,43
3,83 108
Ptalo
T116
15,44 20,39
1,95 108
Antera
T117
16,71 21,64
8,11 107
Antera
T118
15,81 22,26
5,24 107
RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Anexo G.2: Resumen de resultados

Tabla Anexo G- 2. Resumen de los resultados de PCR en tiempo real para la estimacin del
nmero de copias del gen CP
Sintomatologa
No
Sintomtico
rgano
RTPCR
Tallo
Peciolo
Foliolo
Raz Primaria
Raz Secundaria
3
24
24
2
7
0/3
1/24
20/24
2/2
5/7
Citocromo oxidasa
Ct
Desviacin
Promedio
estndar
16,83
16,26
16,12
16,67
15,83
0,12
0,53
0,50
0,09
0,24
%CV
Promedio
0,72
3,27
3,08
0,55
1,52
23,70
22,95
22,70
22,47
22,82
Gen de la protena mayor de la cpside de PYVV

Ct
Nmero de copias
Desviacin
Desviacin
%CV
Promedio
estndar
estndar
0,73
0,83
0,88
0,64
1,01
3,06
3,62
3,88
2,84
4,44
2,06
3,77
4,56
4,74
4,32
107
107
7
10
107
107
9,99
2,11
2,54
2,06
2,84
106
107
7
10
107
107
%CV
27,95
11,41
11,40
30,73
24,81
160

Tabla Anexo G - 2. Continuacin

Sintomatologa
Moderada
Severa
rgano
Tallo
Peciolo
Foliolo
Pednculo floral
Ptalo
Antera
Raz primaria
Raz secundaria
Tallo
Peciolo
Foliolo
Pednculo floral
Ptalo
Antera
Raz primaria
Raz secundaria
7
27
27
6
6
6
6
4
10
39
36
2
2
2
9
18
RTPCR
6/7
27/27
25/27
6/6
6/6
6/6
6/6
8/2
38/39
33/36
9/9
15/18
2/2
2/2
2/2
Citocromo oxidasa
Ct
Desviacin
Promedio
estndar
16,22
15,84
15,80
15,76
16,07
16,24
16,32
15,95
15,81
15,72
15,72
15,87
15,45
16,26
15,90
15,80
0,58
0,44
0,45
0,47
0,41
0,46
0,37
0,62
0,36
0,33
0,39
0,03
0,01
0,64
1,58
1,16
%CV
Promedio
3,58
2,78
2,84
2,96
2,54
2,82
2,28
3,91
2,26
2,11
2,49
0,18
0,09
3,91
4,72
6,18
20,79
19,94
18,75
18,06
19,28
22,64
21,22
21,51
18,50
18,39
18,17
19,53
19,91
21,95
20,23
20,55
Gen de la protena mayor de la cpside de PYVV

Ct
Nmero de copias
Desviacin
Desviacin
%CV
Promedio
estndar
estndar
0,83
1,04
1,30
1,67
0,84
1,00
0,62
0,42
1,03
1,34
1,08
0,96
0,68
0,44
0,75
0,98
3,99
5,20
6,95
9,25
4,37
4,41
2,92
1,97
5,57
7,26
5,96
4,94
3,40
2,00
3,71
4,76
1,67 10
3,37 108
8
8,43 10
1,04 109
8
4,88 10
4,65 107
8
1,19 10
9,15 107
8
9,00 10
9
1,12 10
9
1,20 10
8
4,01 10
8
2,89 10
6,68E+07
8
2,46 10
2,20 108
8,16
2,05
5,55
1,04
2,50
2,12
6,00
2,71
5,49
8,43
8,78
2,53
1,33
2,03
1,31
1,57
10
108
8
10
108
8
10
107
7
10
107
8
10
8
10
8
10
8
10
8
10
7
10
8
10
108
Anexo G.3: Resultados anlisis estadsticos

Anexo G.3.1: Comparacin para evaluar el efecto del nmero de
copias en RT-PCR
Mann Whitney rank sum test
data: COPIAS and PCR
U = 36.1969, df = 7, p-value = 0.0123
Anexo G.3.2: Comparacin para evaluar la acumulacin de PYVV

en plantas con diferente grado de intensidad de la
expresin de sntomas
-
Prueba de Mann Whitney
Mann Whitney rank sum test

data: COPIAS and CATEGORIA
U = 33.1436, df = 7, p-value = 1.49e-15
%CV
18,50
11,71
12,68
4,10
20,90
18,56
20,58
14,83
19,28
12,07
12,24
44,64
32,53
21,50
17,75
16,83

161
Anexo G.3.3: Comparacin para evaluar diferencias en el nmero

de copias entre plantas con diferente grado de intensidad
de expresin de sntomas
Tabla Anexo G- 3. Valores de p de la prueba Mann Whitney para evaluar las diferencias en carga
viral entre plantas con diferentes grado de intensidad de sntomas
No sintomtica
Sintomatologa Moderada
Sintomatologa Severa
No sintomtica
0.0022992
0.0000007
0.1207959
-
Anexo G.3.4: Comparaciones entre rganos por planta

Tabla Anexo G- 4. Valores de p prueba Mann Whitney para la evaluar si se presentaba
diferencias en la carga viral en rganos dentro de una planta
Sintomatologa
Valor de p
No sintomtica
0.136
-7
8.9 10
0.103
Tabla Anexo G- 5. Valores de p del contraste entre los rganos de la planta con sintomatologa
moderada. Las celdas en negrilla corresponden a las parejas que presentaron diferencias
estadsticamente significativas (p<0.05)
Foliolo
Peciolo
Pednculo floral
Ptalo
Raz Primaria
Raz Secundaria
Tallo
Antera
7.4 10-5
5.6 10-6
0.00013
0.00885
0.78000
0.65000
0.00312
Foliolo
Peciolo
Pednculo floral
Ptalo
Raz Primaria
Raz Secundaria
0.90321
1.00000
0.75350
0.00045
0.00369
0.05235
0.00081
1.00000
1.00000
0.04231
1.00000
0.22517
0.00053
0.00200
0.00070
1.00000
0.00063
0.00501
1.00000
1.00000
1.00000
.Tabla Anexo G- 6. Valores de p del contraste entre los rganos de la planta con sintomatologa
severa. Las celdas en negrilla corresponden a las parejas que presentaron diferencias
estadsticamente significativas (p<0.05)
Foliolo
Peciolo
Pednculo floral
Ptalo
Raz Primaria
Raz Secundaria
Tallo
Antera
0.0038896
0.0048073
0.0099978
0.0099998
0.0099998
0.8110348
0.0099999
Foliolo
Peciolo
Pednculo floral
Ptalo
Raz Primaria
Raz Secundaria
0.9997866
0.7980644
0.6690065
0.1378152
0.2158231
0.9453644
0.8686979
0.7586575
0.3047982
0.0733825
0.9894701
0.0099999
0.0029999
0.0003999
0.9861907
1.0000000
1.0000000
0.9570846
1.0000000
0.5062931
0.2572929
Anexo H. Resultados artculo 3.

Anexo H.1: Determinacin del nmero de copias del gen
CP de PYVV en muestras de brote de tubrculo.
Tabla Anexo H - 1: Determinacin del nmero de copias del gen CP de PYVV y resultados de
RT-PCR en muestras de S. tuberosum Grupo Phureja en muestras de brote de tubrculo
Sintomatologa
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Planta
P1
Tubrculo
T1
T2
T3
T4
T1
T2
T3
T4
T5
T6
T1
P2
T2
T3
T1
T2
T3
T4
P3
T5
T6
T7
T8
T9
T10
Brote
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B7
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B2
B3
B4
B1
B2
B3
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1
Extracto
Q302
Q303
Q304
Q305
Q306
Q307
Q308
Q309
Q310
Q311
Q312
Q313
Q314
Q315
Q316
Q317
Q318
Q319
Q320
Q321
Q322
Q323
Q324
Q325
Q326
Q327
Q328
Q329
Q330
Q331
Q332
Q333
Q334
Q335
Q336
Q337
Q338
Q339
Q340
Q341
Q342
Q343
Q344
Ct(COX)
16,40
16,50
15,58
15,70
15,92
15,57
15,53
15,55
15,60
15,74
15,53
15,52
16,59
16,32
15,45
16,36
15,26
15,56
15,88
16,27
15,65
15,93
15,84
15,71
15,80
15,43
15,59
15,74
15,83
15,80
15,64
15,92
15,64
15,43
16,25
15,81
15,50
15,27
15,50
15,94
15,26
15,37
15,47
Ct(CP)
24,67
24,53
24,46
24,55
22,40
22,79
24,75
24,76
24,41
24,77
24,87
24,91
24,46
24,72
NA
22,92
24,71
24,49
23,4
24,79
24,75
24,78
24,16
24,86
22,74
24,41
23,11
24,27
23,91
24,74
23,99
23,71
23,47
23,15
23,17
24,61
24,16
23,09
22,67
24,91
24,63
23,63
24,91
Copias CP
9,59 106
1,06 107
1,11 107
1,04 107
4,74 107
3,59 107
9,08 106
9,02 106
1,15 107
8,96 106
8,31 106
8,08 106
1,11 107
9,26 106
NA
3,29 107
9,29 106
1,09 107
2,35 107
8,84 106
9,08 106
8,88 106
1,37 107
8,40 106
3,73 107
1,15 107
2,87 107
1,27 107
1,64 107
9,13 106
1,55 107
1,88 107
2,23 107
2,80 107
2,75 107
1,00 107
1,37 107
2,92 107
3,91 107
8,09 106
9,89 106
2,00 107
8,09 106
RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
164

Tabla Anexo H-1. Continuacin

Sintomatologa
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Planta
P3
Tubrculo
T11
T12
T1
T2
T3
P4
T4
T5
T6
T7
T8
T9
T10
T11
T12
T1
P5
T2
T3
T4
T5
T6
P6
T1
T1
T2
T3
T4
T5
P7
T6
T7
T8
Brote
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B2
B3
B4
B5
Extracto
Q345
Q346
Q347
Q348
Q349
Q350
Q351
Q352
Q353
Q354
Q355
Q356
Q357
Q358
Q359
Q360
Q361
Q362
Q363
Q364
Q365
Q366
Q367
Q368
Q369
Q370
Q371
Q372
Q373
Q374
Q375
Q376
Q377
Q378
Q379
Q380
Q381
Q382
Q383
Q384
Q385
Q386
Q387
Q388
Q389
Q390
Q391
Q392
Q393
Q394
Q395
Q396
Q397
Q398
Q399
Q400
Q401
Q402
Q403
Q404
Q405
Q406
Ct(COX)
15,40
15,47
15,43
15,58
15,89
16,26
16,42
15,30
15,34
16,77
15,84
15,89
15,59
15,49
15,33
15,76
15,47
15,80
15,19
16,86
15,33
16,29
15,40
15,56
15,70
15,65
15,31
15,84
15,55
15,54
15,34
15,55
15,79
15,84
15,47
15,75
15,82
15,70
16,31
15,96
15,59
15,70
15,67
15,95
16,49
15,48
16,29
15,87
15,72
15,86
15,73
15,35
16,38
15,58
15,45
15,70
15,96
15,44
15,93
15,97
15,40
15,97
Ct(CP)
24,67
24,92
24,86
24,62
24,72
24,96
24,46
22,69
23,60
25,09
25,29
25,06
21,86
25,27
25,68
26,18
26,04
24,96
26,34
26,32
25,97
27,24
25,84
24,92
25,17
23,57
25,03
25,62
23,56
25,05
24,44
22,62
22,76
23,94
24,61
22,75
24,79
24,79
24,63
24,94
24,79
24,84
24,81
24,47
25,13
24,83
23,58
25,25
25,04
22,46
24,85
24,27
24,09
25,02
24,58
24,69
25,43
24,76
25,12
25,13
25,23
25,60
Copias CP
9,59 106
8,06 106
8,39 106
9,96 106
9,26 106
7,81 106
1,11 107
3,87 107
2,04 107
7,13 106
6,19 106
7,30 106
6,93 107
6,27 106
4,72 106
3,31 106
3,66 106
7,80 106
2,96 106
2,99 106
3,85 106
1,57 106
4,21 106
8,02 106
6,75 106
2,08 107
7,46 106
4,92 106
2,10 107
7,35 106
1,13 107
4,06 107
3,68 107
1,60 107
9,97 106
3,71 107
8,84 106
8,84 106
9,87 106
7,95 106
8,84 106
8,50 106
8,70 106
1,10 107
6,92 106
8,59 106
2,06 107
6,36 106
7,39 106
4,55 107
8,42 106
1,27 107
1,44 107
7,50 106
1,02 107
9,44 106
5,60 106
8,98 106
6,97 106
6,92 106
6,45 106
4,97 106
RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Anexo H. Resultados artculo 3. Evaluacin de la distribucin del Potato

yellow vein virus (PYVV) en brotes tubrculos de Solanum tumerosum Grupo
Phureja utilizando cuantificacin absoluta por la tcnica de PCR en tiempo
real (qPCR) con Sondas TaqMan.
165

Sintomatologa
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
Sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
Planta
Tubrculo
T1
T2
P8
T3
T4
T5
P9
T1
T2
T1
T2
P10
T3
T4
T5
T6
T7
T1
T2
T3
P11
T4
T5
T6
T7
T8
T1
T2
T3
T4
T5
T6
T7
T8
P12
T9
T10
T11
P13
T12
T13
T14
T15
T16
T17
T18
T1
Brote
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B2
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B2
B3
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
Extracto
Q407
Q408
Q409
Q410
Q411
Q412
Q413
Q414
Q415
Q1
Q2
Q3
Q4
Q5
Q6
Q7
Q8
Q9
Q10
Q11
Q12
Q13
Q14
Q15
Q16
Q17
Q18
Q19
Q20
Q21
Q22
Q23
Q24
Q25
Q26
Q27
Q28
Q29
Q30
Q31
Q32
Q33
Q34
Q35
Q36
Q37
Q38
Q39
Q40
Q41
Q42
Q43
Q44
Q45
Q46
Q47
Q48
Q49
Q50
Ct(COX)
15,68
15,85
15,33
15,71
16,78
16,25
15,69
15,89
15,85
15,46
15,44
16,71
15,81
16,76
16,97
16,76
16,77
15,49
15,3
16,47
15,7
15,89
16,83
15,48
16,58
16,53
16,98
16,62
16,89
15,94
16,35
15,53
16,88
16,7
16,57
16,8
15,83
15,87
16,31
15,89
15,85
15,46
15,44
16,71
15,81
16,6
16,73
15,67
15,93
16,32
15,72
15,75
15,79
15,6
15,82
16,99
16,39
16,73
16,36
Ct(CP)
25,13
24,27
23,09
23,13
23,13
22,44
24,62
25,13
25,17
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
26,10
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,00
28,19
28,37
28,17
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,30
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
Copias CP
6,92 106
1,27 107
2,92 107
2,84 107
2,84 107
4,61 107
9,91 106
6,92 106
6,73 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
3,50 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
9,22 105
8,06 105
7,07 105
8,17 105
NA
NA
NA
NA
NA
NA
7,43 105
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
RT-PCR
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
166


Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
Planta
Tubrculo
P13
T2
T1
T2
T3
P14
T4
T5
T6
T7
T1
T2
T3
P15
T4
T1
T2
T3
P16
T4
T5
P17
T6
T7
T1
T2
T3
T4
T5
T6
T1
T2
P18
T3
T4
T5
Brote
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B2
B1
Extracto
Q51
Q52
Q53
Q54
Q55
Q56
Q57
Q58
Q59
Q60
Q61
Q62
Q63
Q64
Q65
Q66
Q67
Q68
Q69
Q70
Q71
Q72
Q73
Q74
Q75
Q76
Q77
Q78
Q79
Q80
Q81
Q82
Q83
Q84
Q85
Q86
Q87
Q88
Q89
Q90
Q91
Q92
Q93
Q94
Q95
Q96
Q97
Q98
Q99
Q100
Q101
Q102
Q103
Q104
Q105
Q106
Q107
Q108
Q109
Q110
Q111
Q112
Q113
Ct(COX)
15,99
16,48
16,42
16,94
15,45
16,6
16,73
15,67
15,93
16,32
15,72
15,75
15,79
15,60
16,63
16,34
16,64
16,22
15,49
15,37
16,86
16,73
15,68
15,32
15,64
15,73
15,41
15,53
15,40
15,83
15,64
15,78
16,42
16,27
16,00
15,52
16,97
15,39
15,69
15,64
15,49
15,85
16,36
15,48
15,76
15,57
15,91
16,60
15,34
15,99
16,37
15,30
15,51
15,60
15,26
15,85
16,92
16,36
15,83
15,42
15,91
15,67
15,31
Ct(CP)
27,71
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
26,04
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,21
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,29
28,38
27,43
28,22
28,11
NA
NA
NA
NA
Copias CP
1,13 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
3,66 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
7,95 105
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
7,50 105
7,04 105
1,37 106
7,89 105
8,50 105
NA
NA
NA
NA
RT-PCR
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo

167

Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
Planta
Tubrculo
P18
T6
P19
P20
T1
T2
T3
T4
T5
T1
T2
T3
T4
T1
T2
T3
P21
T4
T5
T6
T1
T2
T3
P22
T4
T5
T6
T7
T8
T1
T2
T3
P23
T4
T5
T6
T7
T1
P24
T2
T3
T4
T5
T6
T7
T8
Brote
B1
B2
B3
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B1
B1
Extracto
Q114
Q115
Q116
Q117
Q118
Q119
Q120
Q121
Q122
Q123
Q124
Q125
Q126
Q127
Q128
Q129
Q130
Q131
Q132
Q133
Q134
Q135
Q136
Q137
Q138
Q139
Q140
Q141
Q142
Q143
Q144
Q145
Q146
Q147
Q148
Q149
Q150
Q151
Q152
Q153
Q154
Q155
Q156
Q157
Q158
Q159
Q160
Q161
Q162
Q163
Q164
Q165
Q166
Q167
Q168
Q169
Q170
Q171
Q172
Ct(COX)
16,35
15,81
15,56
15,89
15,61
15,41
15,41
15,77
16,35
16,71
15,38
15,76
15,66
15,57
15,89
15,49
15,30
16,62
15,56
16,56
16,40
15,64
15,99
16,25
15,67
16,33
16,45
15,68
16,73
16,58
15,62
16,48
16,39
16,38
16,32
16,73
15,39
15,46
16,66
16,28
16,40
16,50
15,58
15,70
15,92
15,57
15,53
15,55
15,60
15,74
15,53
15,52
16,59
16,32
15,45
16,36
15,26
15,56
15,88
Ct(CP)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,12
NA
NA
26,60
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,21
NA
NA
NA
NA
27,33
NA
NA
28,15
NA
NA
NA
NA
NA
28,07
NA
NA
NA
NA
28,12
NA
NA
NA
NA
NA
26,60
Copias CP
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
8,43 105
NA
NA
2,47 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
7,93 105
NA
NA
NA
NA
1,47 106
NA
NA
8,25 105
NA
NA
NA
NA
NA
8,75 105
NA
NA
NA
NA
8,46 105
NA
NA
NA
NA
NA
2,46 106
RT-PCR
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
168


Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
Planta
P24
P25
Tubrculo
T9
T10
T1
T2
T3
T4
T5
T1
T2
P26
T3
T4
T5
T6
T1
T2
T3
P27
T4
T5
T6
T7
T8
T1
T2
T3
T4
T6
P28
T7
T8
T9
T10
T11
T12
P29
T13
T14
T15
T16
T17
T1
Brote
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1
B1
B1
Extracto
Q173
Q174
Q175
Q176
Q177
Q178
Q179
Q180
Q181
Q182
Q183
Q184
Q185
Q186
Q187
Q188
Q189
Q190
Q191
Q192
Q193
Q194
Q195
Q196
Q197
Q198
Q199
Q200
Q201
Q202
Q203
Q204
Q205
Q206
Q207
Q208
Q209
Q210
Q211
Q212
Q213
Q214
Q215
Q216
Q217
Q218
Q219
Q220
Q221
Q222
Q223
Q224
Q225
Q226
Q227
Q228
Q229
Q230
Q231
Q232
Q233
Q234
Q235
Ct(COX)
16,27
15,65
15,93
15,84
15,71
15,80
15,43
15,59
15,74
15,83
15,80
15,64
15,92
15,64
15,43
16,25
15,81
15,50
15,27
15,50
15,94
15,26
15,37
15,47
15,40
15,47
15,43
15,58
15,89
16,26
16,42
15,30
15,34
16,77
15,84
15,89
15,59
15,49
15,33
15,76
15,47
15,80
15,19
16,86
15,33
16,29
15,40
15,56
15,70
15,65
15,31
15,84
15,55
15,54
15,34
15,55
15,79
15,84
15,47
15,75
15,82
15,70
16,31
Ct(CP)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
Copias CP
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
RT-PCR
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo

169

Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
Planta
Tubrculo
T2
T3
P29
T4
T5
T6
T7
T8
T9
T10
T11
T1
P30
T2
T3
T4
T1
P31
P32
T2
T1
T2
T1
P33
T2
T4
P35
T1
T1
T2
T3
T1
P36
T2
T3
T4
T5
Brote
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B1
B1
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B1
B2
B1
B2
B1
B1
B2
B1
B2
B3
B4
B1
B1
B1
B1
Extracto
Q236
Q237
Q238
Q239
Q240
Q241
Q242
Q243
Q244
Q245
Q246
Q247
Q248
Q249
Q250
Q251
Q252
Q253
Q254
Q255
Q256
Q257
Q258
Q259
Q260
Q261
Q262
Q263
Q264
Q265
Q266
Q267
Q268
Q269
Q270
Q271
Q272
Q273
Q274
Q275
Q276
Q277
Q278
Q279
Q280
Q281
Q282
Q283
Q284
Q285
Q286
Q287
Q288
Q289
Q290
Q291
Q292
Q293
Q294
Ct(COX)
15,96
15,59
15,7
15,67
15,95
16,49
15,48
16,29
15,87
15,72
15,86
15,73
15,35
16,38
15,58
15,45
15,70
15,96
15,44
15,93
15,97
15,40
15,97
15,68
15,85
15,33
15,71
16,78
16,25
15,69
15,89
15,85
15,46
15,44
16,71
15,81
16,76
16,97
16,76
16,77
15,49
15,30
16,47
15,70
15,89
16,83
15,48
16,58
16,53
16,98
16,62
16,89
15,94
16,35
15,53
16,88
16,70
16,57
16,80
Ct(CP)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
28,00
NA
28,26
NA
NA
NA
27,19
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
27,96
NA
28,15
NA
27,44
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
Copias CP
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
9,17 105
NA
7,63 105
NA
NA
NA
1,62 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
9,44 105
NA
8,24 105
NA
1,36 106
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
RT-PCR
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
170


Sintomatologa
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
No sintomtica
Planta
P37
P38
Tubrculo
T1
T1
T2
Brote
B1
B2
B1
B2
B3
B4
B5
Extracto
Q295
Q296
Q297
Q298
Q299
Q300
Q301
Ct(COX)
15,83
15,87
16,31
15,89
15,85
15,46
15,44
Ct(CP)
NA
NA
NA
26,44
NA
NA
NA
Copias CP
NA
NA
NA
2,76 106
NA
NA
NA
RT-PCR
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
NA corresponde a muestras que resultaron negativas.
Anexo H.2: Resumen de resultados

Tabla Anexo H - 2: Resmen de resultados obtenidos en la estimacin del nmero de copias gen
de la protena mayor de la cpside de PYVV en muestras de brotes de tubrculo
No sintomtica Sintomtica
n
301
114
Promedio
15.95
15.76
Ct(COX)
Desviacin estndar
0.49
0.36
%CV
3.06
2.27
Promedio
27.73
24.45
Ct(CP)
Desviacin estndar
0.72
0.97
%CV
2.58
3.95
6
7
1.29 10
1.43 10
Nmero de Promedio
5
7
copias del Desviacin estndar
8.44 10
1.18 10
gen CP
%CV
3.78
7.70
Anexo I. Presentaciones en congresos

Anexo I.1: Resmen presentacin en el IV Simposio
Nacional de Virologa. Red Colombiana de Virologa.
Medelln, Colombia. 2011.
Ttulo: Cuantificacin absoluta del Potato yellow vein virus (PYVV) en brotes de
tubrculos de Solanum tumerosum Grupo Phureja utilizando la tcnica de PCR en tiempo
Autores: Anngie Katherine Hernndez Guzmn1, Liliana Franco-Lara2 y Mara Mnica
Guzmn Barney1.3.
Correspondencia: mmguzmanb@unal.edu.co
Instituciones: Universidad Nacional de Colombia, Sede Bogot 1. Universidad Militar
Nueva Granada 2. Coordinadora Laboratorio de Virus Vegetales Instituto de
Biotecnologa-UNAL3
Resumen estructurado:
Introduccin: Potato yellow vein virus (PYVV) es un virus de la familia Closteroviridae y
del gnero Crinivirus, su genoma es ssRNA(+) y tripartito. Es transmitido por Trialurodes
vaporariorum y tubrculos, en la actualidad se encuentra en Colombia y pases vecinos
(Per, Ecuador y Venezuela). La sintomatologa producida es amarillamiento foliar y
reduccin en la produccin.
Objetivo General: Detectar PYVV en muestras de brotes de tubrculos de plantas de S.
tuberosum Grupo Phureja (sintomticas y no sintomticas) por la tcnica de qPCR
utilizando la qumica de sondas TaqMan.
Metodologa: Se evaluaron 417 muestras de brotes de tubrculo, 114 brotes provenan
de plantas sintomticas (S) para PYVV (52 tubrculos/8 plantas) y 303 de plantas no
sintomticas (NS) (184 tubrculos/31 plantas), se evaluaron de uno a siete brotes por
cada tubrculo. A cada muestra se le hizo extraccin de RNA con fenol/cloroformo Sephadex G-50. Los brotes fueron evaluados por RT-PCR amplificando el gen de la
protena mayor de la cpside (CP) y de acuerdo a estos resultados se clasificaron en
cuatro categoras: brotes RTPCR negativo provenientes de plantas NS (B-NS: 301
brotes), brotes RTPCR negativos provenientes de plantas S (B-S: 1 brote), brotes RT
PCR positivo provenientes de plantas NS (B+NS: 2 brotes) y brotes RTPCR positivos
provenientes de plantas S (B+S: 113 brotes). Posteriormente, se analizaron por qPCR
con sondas TaqMan utilizando iniciadores para el gen CP y como control interno un gen
172

de expresin constitutiva de la planta (citocromo oxidasa). Para determinar la carga viral

se hizo una curva estndar utilizando diferentes concentraciones de transcritos del gen
CP. Finalmente se analizaron las diferencias en las cargas virales entre las cuatro
categoras, entre los tubrculos provenientes de una misma planta y entre los brotes
provenientes de un mismo tubrculo, utilizando ANOVA seguida de una prueba de t con
ajuste de Tukey (Software R).
Resultados y Conclusiones: Por RT-PCR el 98% de los brotes provenientes de plantas S
fueron positivos (113 brotes), solamente el 1% de los brotes provenientes de plantas NS
(2 brotes) fueron positivos por RT-PCR. Por qPCR los rangos de carga viral estuvieron
entre 3.46X102 y 6.01X108, observndose que los brotes provenientes de plantas NS
presentaron menor carga viral con respecto a los provenientes de plantas S (log nmero
de copias en brotes provenientes de plantas NS= 2.690.67, log nmero de copias en
brotes provenientes de plantas S= 6.021.76). Las diferencias entre los brotes de las
categoras B-NS, B+NS y B-S fueron estadsticamente significativas con respecto a las
cargas virales en los brotes de la categora B+S (p=2.4X107). De las muestras analizadas
el 3.6% de los brotes RT-PCR negativo que provenan de plantas no sintomticas (11
brotes) pudieron ser detectados como positivos por qPCR, las cargas virales de estas
muestras estaba entre 3.42X102 - 6.51X104, lo que demuestra que esta tcnica es ms
sensible para determinar la presencia de plantas NS, que tienen el virus aunque en bajo
nmero de copias. Tambin se evalu las diferencias en la carga viral de tubrculos de
una misma planta y en brotes de un mismo tubrculo; en ambos casos las diferencias no
fueron estadsticamente significativas (p>0.05), lo que sugiere que las cargas virales
entre tubrculos de una misma planta y entre brotes de un mismo tubrculo son
similares; este punto sigue siendo tema de investigacin por el grupo del laboratorio de
virus vegetales del IBUN-UNAL.
Palabras Claves: Potato yellow vein virus (PYVV), Solanum tuberosum Grupo Phureja,
PCR en tiempo real (qPCR), Tubrculos, Sondas Taqman, Cuantificacin Absoluta.
Nombre del expositor: Anngie Hernndez
Modalidad de presentacin: Poster
rea temtica: Virologa vegetal.
Anexo I. Presentaciones en Congresos
Anexo I.2: Resumenes de presentacines en el XXV

Congreso de la Asociacin Latinoamericana de la
Papa ALAP, Uberlandia, Brasil, 2012
173
174

Anexo I. Presentaciones en Congresos
175
176

Bibliografa
Agindotan, B., Shiel, P. and Berger, P. 2007. Simultaneous detection of potato viruses, PLRV,
PVA, PVX and PVY from dormant potato tubers by TaqMan real-time RT PCR. Journal of
Virological Methods 142: 1 9.
Agronet. 2005. La cadena de la papa en Colombia.
[http://www.agronet.gov.co/www/docs_agronet/2005112163731_caracterizacion_papa.pdf]
Alba, V. 1950. Viropatgenos. Memorias de la Conferencia Latinoamericana de Especialistas en
Papa (Bogot, Colombia) pp. 52 58.
Alba, V. 1952. El amarillamiento de las venas de la papa, una enfermedad causada por un virus.
Tesis. Universidad Nacional de Colombia. Medelln pp 41.
th
Amersham Biosciences, 2002. Gel filtration: Principles and methods. 6 edition. Handbook.
Amersham Biosciences, Uppsala, Sweden.
Applied Biosystems. 2009. TaqMan vs. SYBR green chemistries.

[www3.appliedbiosystems.com/.../cms_052221.png].
Arciniegas, N. 2003. Tcnicas de diagnstico y evaluacin de resistencia al virus del
amarillamiento de las nervaduras de la papa (PYVV) en accesiones de la coleccin central
colombiana. Tesis M.Sc. Fitopatologa. Universidad Nacional de Colombia, Sede Bogot. Facultad
de Ciencias Agrarias.
Arciniegas, N., Guzmn, M. y ustez, C. 2003. Metodologa de evaluacin de resistencia al virus
del amarillamiento de las venas de la papa (PYVV) en genotipos de la coleccin central
colombiana de Solanum Phureja. Memorias XXIV Congreso de la Asociacin Colombiana de
Fitopatologa ASCOLFI.
Ardila, N. y Luis, R. 2009. Produccin de papa criolla. [http://www.agriculturasensitiva.com].
Barlow, J., Mathias, A., Williamson, R., and Gammack, D. 1963. A simple method for
the quantitative isolation of undegraded high molecular weight ribonucleic acid.
Biochemical Biophysic Research Communications 13: 61 - 66
Barragn, C. y Guzmn C. 2012. Deteccion molecular de PYVV en el vector natural Trialeurodes
vaporariorum.
Basky, Z. and Almasi, A., 2004. Differences in aphid transmissibility and translocation between
N
O
PVY and PVY isolates. Journal of Pest Science 78: 67 75.
Boonham, N., Walsh, K., Mumford, R. and. Barker, I. 2000. Use of multiplex real-time PCR
(TaqMan) for the detection of potato viruses. OEPP/EPPO Bulletin 30: 427 430.
178

Buritic, P. 1971. Estudios de transmisin del amarillamiento de las venas de la papa. Informe
Anual Programa de Fitopatologa ICA (Bogot-Colombia) 111 - 113.
Bustin, S. 2002. Quantification of mRNA using real-time reverse transcription PCR (RT PCR):
Trends and problems. Journal of Molecular Endocrinology 29: 23 39.
CEVIPAPA, sin ao. Centro de desarrollo tecnolgico de la cadena agroalimentaria de la papa.
[http://www.cevipapa.org.co/publicaciones/publicaciones.php].
Chang, S., Puryear, J. and Caimey J. 1993. A simple and efficient method for isolating
RNA from pine trees. Plant Molecular Biology Reporter 11: 113 116.
Chomczynski, P. 1993 A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA
and proteins from cell and tissue samples. Biotechniques 15: 532 537.
Chuquillanqui, H. y Mller, G. 2002. Transmisin del virus del amarillamiento de las venas de la
papa en variedades y clones de Solanum tuberosum L. Centro Internacional de la Papa (CIP).
Memorias de la Convencin Nacional Entomolgica. Lima, Per.
CIP. 2003. Virus del amarillamiento de las venas (PYVV). [www.senasa.gob.pe].
Claros, M. and Canovas, S. 1998. Rapid high quality RNA preparation from pine seedlings. Plant
Molecular Biology Reporter 16: 9 18.
Cohen, A., Henneberry, T. and Chu, C. 1996. Microstructure of feeding in nymphal Bemisia
argentifolii in cotton and cantaloupe. Entomologia experimentalis et applicata 78: 135 142.
Conde, M., Nedel, F., Campos, V., Smith, A., Nr, J., Demarco, F. and Tarquinio, S. 2012.
Odontoblast RNA stability in different temperature-based protocols for tooth storage. International
Endodontic Journal 45(3): 266 272.
Cubillos, A., Rodrguez, P. y Guzmn, M. 2010. Deteccin de variantes del Potato yellow vein
virus (PYVV) por polimorfismo conformacional del gen de la protena de la cpside en aislados de
campo de Solanum Spp. de Colombia. XXIV Congreso de la Asociacin Latinoamericana de la
Papa ALAP. Cusco - Per.
Daz M., Pulgarn J. y Saldarriaga A. 1990. Relaciones insecto-patgeno en el problema del
amarillamiento de las venas de la papa. Revista Colombiana de Entomologa 16: 3 - 14.
Dorak, T. 2006. Real Time PCR. Bios advanced methods. New York. pp 39 61.
Eliasco, E., Livieratos, I., Mller, G., Guzmn, M., Salazar, L. and Coutts, R. 2006. Sequences
of defective RNAs associated with Potato yellow vein virus. Archives of Virology 151: 201 204.
Estrada, N. 2000. La biodiversidad en el mejoramiento gentico de la papa. CIP-IPGRI-PRACIPAIBTA-PROINPA-SDC-CID. La Paz - Bolivia.
FAOSTAT; 2010. Production. [http://faostat.fao.org].
Feng, J., Zeng, R. and Chen J. 2008. Accurate and efficient data processing for quantitative realtime PCR using a tripartite plant virus as a model. BioTechniques 44: 901 - 912.
Bibliografa
179
Fox, A., Evans, F. and Browning, I. 2005. Direct tuber testing for Potato Y potyvirus by
real-time RT-PCR and ELISA: reliable options for post-harvest testing? EPPO Bulletin 35:
93 97.
Franco-Lara, L., Rodrguez, D. and Guzmn, M. 2009. Determination of the prevalence of Potato
yellow vein virus in crops of Solanum phureja by symptom detection and molecular methods.
Memorias de APS Annual Meeting, Portland, Oregon.
Froissart, R., Doumayrou, J., Vuillaume, F., Alizon, S. and Michalakis, Y. 2010. The virulence transmission trade off in vector-borne plant viruses: A review of (non-)existing studies.
Philosophical Transactions the Royal Society 365: 1907 1918.
Fronhoffs, S., Totzke, G., Stier, S., Wernert, N., Rothe, M., Brning, T., Koch, B., Sachinidis,
A., Vetter, H., Ko, Y. 2002. A method for the rapid construction of cRNA standard curves in
quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction. Molecular and Cellular.
Probes 16: 99 110.
Gamarra, H. 2002. Transmisin del virus del amarillamiento de las venas de la papa en
variedades y/o clones de Solanum tuberosum Linneo, 1753. Universidad Ricardo Palma. Facultad
de Ciencias Biolgicas. Lima, Per.
Garca-Cano, E., Resende, R, Fernndez-Muoz, R. and Moriones, E. 2006. Synergistic
interaction between Tomato chlorosis virus and Tomato spotted wilt virus results in breakdown of
resistance in tomato. Phytopathology 96: 1263 1269.
Gosalvez, B., Navarro, J., Lorca, A., Botella, F., Snchez-Pina, M. and Pallas, V., 2003.
Detection of Melon necrotic spot virus in water samples and melon plants by molecular methods.
Journal of Virological Methods: 113, 87 93.
Guzmn, M., Arciniegas, N. y Nstez, C. 2003. Metodologa de evaluacin de resistencia al virus
del amarillamiento de las venas de la papa (PYVV) en genotipos de la coleccin central
colombiana de Solanum phureja. Ponencia en el XXXXIV CONGRESO ASCOLFI. Bogot Colombia
Guzmn, M., Ruiz, E., Arciniegas, N. and Coutts, R. 2006. Occurrence and variability of Potato
yellow vein virus in three departments of Colombia. Journal of Phytopathology 154: 748 750.
Guzmn, M., Rodrguez, P. and Franco-Lara, L. 2008. Molecular diagnosis of Potato yellow vein
virus (PYVV) in tubers of Solanum phureja (egg yolk) in samples from Colombia. Ponencia en
International Congress of Virology I: IUMS XIV. Turqua.
Guzmn, M., Franco-Lara, L. and Rodrguez, P. 2009. Molecular detection of Potato yellow vein
virus (PYVV) in leaves and shoot-tubers of Solanum phureja from Colombia. Phytopathology.
Abstracts of the VI International Scientific Seminar on Plant Health 99, S189.
Guzmn, M. y Rodrguez, P. 2010. Susceptibilidad de Solanum phureja (Juz. et Buk.) al virus del
amarillamiento de las venas. Agronoma Colombiana 28: 219 224.
Guzmn, M., Romn, V., Franco, L. y Rodrguez, P. 2010. Evaluacin serolgica de cuatro virus
en accesiones colombianas de papa (Solanum spp.). Revista Colombiana de Agronoma 28(2)
225 234.
Guzmn, M., Franco, L., Rodrguez, D., Vargas, L, y Fierro, J. 2011. Disminucin de la
produccin de papa criolla (Solanum phureja) Juz et Buk (cultivar Colombia) infectada con Potato
yellow vein virus estimada en un modelo de campo en Cundinamarca. Memorias del XXX
180

Congreso Colombiano y XIV Latinoamericano de Fitopatologa. Memorias del XXX Congreso

Colombiano y XIV Latinoamericano de Fitopatologa.
Guzmn, M., Hernndez, A. and Franco-Lara, L. 2012. Guzman, M., Hernndez, A. and Franco,
L. Tracking of foliar symptoms caused by Potato yellow vein virus (PYVV) in generations of
Solanum phureja (Juz et Buk) cultivar Criolla Colombia (papa criolla). American Journal of Potato
Research.
Heid, C., Stevens, J., Livak, K. and Williams, M. 1996. Real time quantitative PCR. Genome
Methods 6: 986 994.
Hernndez, A., Franco, L. y Guzmn, M. 2010. Deteccin del Potato yellow vein virus (PYVV) en
brotes de tubrculo de plantas de Solanum tuberosum Grupo Phureja de Colombia por PCR en
tiempo real (qPCR). XXIV Congreso de la asociacin latinoamericana de la papa. Cusco, Per
Hoover, R. 2001. Composition, molecular structure, and physicochemical properties of tuber and
root starches: a review. Carbohydrate polymers 45: 253 - 267
Huamn, S. and Spooner, D. 2002. Reclassification of landrace populations of cultivated potatoes
(Solanum Sect Petota). American Journal of Botany 89: 947 965.
Hutton, E. and Brock, R. 1953. Reactions and field resistance of some potato varieties and
hybrids to potato leafroll virus. Australian Journal of Agricultural Research 4: 256 - 263.
Hull, R. 2002. Matthews Plant Virology. Cuarta Edicin. Elsevier Academic Press, California.
John, M. 1992 An efficient method for isolation of RNA and DNA from plants containing
polyphenolics. Nucleic Acids Research 20: 2381.
Johnson, D., Walker, G. and Creamer, R. 2002. Stylet penetration behavior resulting in
inoculation of a semipersitently trasmitted closterovirus by the whitefly Bemisia argentifolii.
Entomologia Experimentalis et Applicata 102: 115 123.
Kansal, R., Kubar, K., Verma, I., Niwas Gupta, R., Kumar Gupta, V. and Ram Koundal, K.
2008. Improved and convenient method of RNA isolation from polyphenol and polysaccharide rich
plant tissues. Indian Journal of Experimental Biology 47: 842 845.
Karasev, A. 2000. Genetic diversity and evolution of closteroviruses. Annual Review of
Phytopathology 38: 293 324.
Karjeija, R., Kreuze, J., Gibson, R. and Valkonen, J. 2000. Synergistic interactions of a
Potyvirus and a Phloem-Limited Crinivirus in Sweet Potato Plants. Virology 269: 26 - 36.
Kiefer, E., Werener, H. and Dieter E. 2000. A simple and efficient protocol for isolation of
functional RNA from plant tissues rich in secondary metabolites. Plant Molecular Biology Reporter
18: 33 39.
Kim, S. and Hamada, T. 2005. Rapid and reliable method of extracting DNA and RNA from
sweetpotato , Ipomoea batatas (L). Lam. Biotecnhnology Letters 27: 1841 1847.
Klerk, M., Leone, G., Verbeek, M., van den Heuvel, J. and Schoen, C. 2001. Development of a
multiplex AmpliDet RNA for the simultaneous detection of Potato leafroll virus and Potato virus Y in
potato tubers. Journal of Virological Methods 93: 115 125.
Bibliografa
181
Kogovek, P., Kladnik, A., Mlakar, J., Tuek nidari, M., Dermastia, M., Ravnikar, M. and
Pompe-Novak, M. 2011. Distribution of Potato viru Y in potato plants, organs, tissues, and cells.
Phytopathology 101(11): 1292 - 1300
Kokkinos, C. and Clark, C. 2006. Real-time PCR assays for detection and quantification of
sweetpotato viruses. Plant Disease 90, 783 - 788.
Leisner, S. and Howell, S. 1993. Long distance movement of viruses in plants. Trends in
Microbiology 1: 314 317.
Liu, J., Goh, C., Loh, C., Liu, P. and Pua E. 1998. A method for isolation of total RNA from fruit
tissues of banana. Plant Molecular Biology Reporter 16: 1 6.
Livieratos, I., Mller, G., Salazar, L. and Coutts, R. 2002. Identification and sequence analysis of
Potato yellow vein virus cpside protein minor gene. Virus Genes 25(3): 317 322.
Livieratos, I., Eliasco, E., Mller, G., Olsthoorn, R., Salazar, L., Pleij, C. and Coutts, R. 2004.
Analysis of the RNA of Potato yellow vein virus: Evidence for a tripartite genome and conserved 3terminal structures among members of the genus Crinivirus. Journal of General Virology 85: 2065
2075.
Lomeli,H., Tyagi, S., Pritchard, C., Lizardi, P. and Kramer,F. 1989. Quantitative assays based
on the use of replicatable hybridization probes.Clinical Chemistry: 35, 1826 1831.
Lpez, R., Asencio, C., Guzmn, M. and Boonham, N. 2006. Development of real-time and
conventional RT-PCR assays for the detection of Potato yellow vein virus (PYVV). Journal of
Lovisolo, O., Hull, R. and Rsler, O. 2003. Coevolution of viruses with hosts and vectors ans
possible paleontology. Advances in virus research 62: 325 379.
MacFarlane, S. and Popovich, A. 2000. Efficient expression of foreign proteins in roots from
tobravirus vectors. Virology 267: 29 35.
Mackay, I., Arden, K. and Nitsche, A. 2002. Real time PCR in Virology. Nucleic Acids Research
30: 1292 1305.
MADR. 2011. rea, Produccin y Rendimiento de papa en Colombia.
[http://www.sioc.gov.co/AREAPRODUCCION/AreaProduccion17.pdf]
Makkouk, K. and Kumari, S. 2006. Molecular Diagnosis of Plant Viruses. Arabian Journal of
Plant Protection 24: 135 138.
Martelli, G., Agranovsky, A., Bar-Joseph, M., Boscia, D., Candresse, T., Coutts, R., Dolja, V.,
Falk, B., Gonsalves, D., Jelkmann, W., Karasev, A., Minafra, A., Namba, S., Vetten, H., Wisler,
G. and Yoshikawa, N. 2002. The family Closteroviridae revised. Archives of Virology 147: 2039
2044.
Maruthi, M, Hillocks, R., Mtunda, K., Raya, M. Muhanna, M., Kiozia, H., Rekha, A., Colvin, J
and Thresh, J. 2005. Transmission of Cassava brown streak virus by Bemisia tabaci (Gennadius)
Journal of Phytopathology 153: 307 - 312.
Matthews,J. and Kricka,L. 1988. Analytical strategies for the use of DNA probes.
Analytical Biochemistry: 169, 1 25.
182

Medina, V., Tian, T., Wierzchos, J. and Falk, B. 1998. Specific inclusion bodies are associated
with replication of Lettuce infectious yellows virus RNAs in Nicotiana benthamiana protoplasts.
Journal of General Virology 79: 2325 2329.
Medina, V., Rodrigo, G., Tian, T., Jurez, M., Dolja, V., Achon, M. and Falk, B. 2003.
Comparative cytopathology of crinivirus infections in different plant host. Annals of Applied Biology
143: 99 110.
Mehle, N., Kova, M., Petrovi, N., Pompe-Novak, M., Baebler, ., Krei-Stres, H., Gruden, K.,
NTN
and Ravnikar, M. 2004. Spread of potato virus Y
in potato cultivars (Solanum tuberosum L.)
with different levels of sensitivity. Physiology and. Moleculal. Plant Pathology. 64: 293 - 300.
Meisel, L., Fonseca, B., Gonzalez, S., Baezayates, R., Cambiazo, V., Campos, R.,
Gonzalez, M., Orelana, A., Retamales, J. and Silva H. 2005. A rapid and efficient method for
purifying high quality total RNA from peaches (prunus persica) for functional genomics analyses.
Biological Research 38: 83 - 88.
Mller, G., Canessa, G., Tenorio, J., Chuquillanqui, C. and Salazar, L. 2004. Emerging and reemerging virus diseases of potato in the andean region. Abstracts of oral presentations and poster
th
presentations; 12 EAPR Virology Section Meeting Rennes, France.
Mullis, K. and Faloona,F. 1987. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerasecatalysed chain reaction. Methods Enzymology:155, 335 350.
OEPP/EPPO. 1979. Data sheets on quarantine organisms No. 29, Potato vein yellowing virus.
Bulletin OEPP/EPPO Bulletin 9 (2).
[http://www.eppo.org/QUARANTINE/virus/Potato_yellow_vein_virus/PYVV00_ds.pdf].
OEPP/EPPO. 2006. Distribution maps of quarantine pests for Europe
[http://www.eppo.org/QUARANTINE/virus/Potato_yellow_vein_virus/PYVV00_map.htm].
Oerke, E. and Dehne, H. 2004. Safeguarding production Losses in major crops and the role of
crop protection. Crop protection 23: 275 285
Offei, S., Arciniegas, N., Mller, G., Guzmn, M., Salazar, L. and Coutts, R. 2004. Molecular
variation of Potato yellow vein virus isolates. Archives of Virology 149: 821 827.
Osman, F., Leutenegger, C., Golino, D. and Rowhani, A. 2008. Comparison of low-density
arrays, RT-PCR and real-time TaqMan RT-PCR in detection of grapevine viruses. Journal of
Papin, J., Vahrson, W. and Dittmer, D. 2004. SYBR Green-based Real-Time quantitative PCR
assay for detection of west nile virus circumvents false-negative results due to strain variability.
Journal of Clinical Microbiology 42: 1511 1518.
Pfaffl, M. 2008. Gene-Quantification. [http://www.genequantification.de/].
PPIS, 2009. Plant pest and diseases. [http://www.ppiseng.moag.gov.il/ppiseng/].
R Development Core Team. 2008. R: A language and environment for statistical computing. R
Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria. ISBN 3-900051-07-0,
[http://www.R-project.org]
Rasband, W. 1997. Image J v1.37. National Institutes of Health, USA. [http://rsb.info.nih.gov/ij/]
Bibliografa
183
Rodrguez, P., Guzmn, M. y Romn, V. 2008. Detecting the Potato yellow vein virus (PYVV) by
molecular methods and inclusion bodies in Solanum phureja. Ponencia III Congreso Colombiano
de Biotecnologa.
Rodrguez, P., Chves, G., Franco, L. and Guzmn, M. 2009. Low molecular variability of Potato
yellow vein virus (PYVV) isolated from Solanum phureja and Solanum phureja in Colombia.
Ponencia en Joint Meeting of the Florida Phytopathological Society and the American
Phytopathological Society Caribbean Division. Florida.
Roossinck, M. 1997. Mechanisms of plant virus evolution. Annual Review of Phytopathology 35:
1953 1965.
Rubio, L., Yeh, H., Tian, T. and Falk, B. 2000. A heterogeneous population of defective RNAs is
associated with Lettuce infectious yellows virus. Virology 271: 205 212.
Rubio, L., Tian, T., Yeh, H., Livieratos, Y. and Falk, B. 2002. De novo generation of Lettuce
infectious yellows virus defective RNAs in protoplasts. Molecular Plant Pathology 5: 321 327.
Rubio, J. and Zapata, O. Isolation of total RNA from tissues rich in polyphenols and
polysaccharides of mangrove plants. Electronic Journal of Biotechnology 14(5).
Ruiz Ruiz, S., Moreno, P., Guerri, J. and Ambrs, S. 2007. A real time RT PCR assay for
detection and absolute quantitation of Citrus tristeza virus in different plant tissues. Journal of
Ruiz-Ruiz, S., Moreno, P., Guerri, J. and Ambrs, S. 2009. Discrimination between mild and
severe Citrus tristeza virus isolates with a rapid and highly specific real-time reverse transcriptionpolymerase chain reaction method using TaqMan LNA probes. Phytopathology 99: 307 - 315.
Rutledge, R. and Cot, C. 2003. Mathematics of quantitative kinetic PCR and the application of
standard curves. Nucleic Acids Research. 31: e93.
Salazar, L., Mller, G., Querci, M., Zapata, J. and Owens, R. 2000. Potato yellow vein virus. Its
host range, distribution in South America and identification as a crinivirus transmitted by
Trialeurodes vaporariorum. Annals of Applied Biology 137: 007 019.
Salazar, L. 2006. Emerging and re-emerging potato diseases in the Andes. Potato Research 49:
43 47.
Sambrook, J., Fritsch, E., Maniatis, T. 1989. Molecular cloning: A laboratory manual. Cold
Spring Harbor Laboratory Press. New York.
Snchez-Navarro, J., Caizares, M., cano, E. and Palls, V. 2007. Plant tissue distribution and
chemical inactivation of six Carnation viruses. Crop Protection 26: 1049 1054.
Schmitt, C., Mueller, A., Mooney, A., Brown, D. and MacFarlane, S. 1998. Immunological
detection and mutational analysis of the RNA2-encoded nematode transmission proteins of Pea
early browning virus. Journal of General Virology 79: 1281 1288.
Sern, K., Haenni, A. 1996. Vascular movement of plant viruses. Molecular Plant-Microbe
Interactions 9(6): 435 442.
Silva, M., Wellink, J., Goldbach, R. and Lent, J. 2002. Phloem loading and unloading of Cowpea
mosaic virus in Vigna unguiculata. Journal of General Virology 83: 1493 1504.
184

Silvestre, R., Villamil, A., Guzmn, M., Cuellar, W. and Kreuze, J. 2012. Genetic diversity of
PVY isolates infecting Solanum spp. In the Andes by siRNA sequencing. Memorias del XXv
Congreso de la Asociacin Latinoamericana de la Papa.
Simon, A. and Bujarski, J. 1994 RNARNA recombination and evolution in virus-infected plants.
Annual Review of Phytopahology 32: 337 376.
Singh, M. and Singh, R. 1996. Factors affecting detection of PVY in dormant tubers by reverse
transcription polymerase chain and nucleic acid spot hybridization. Journal of Virological. Methods
60: 47 57.
Singh, M. and Singh, R. 1998. Specific detection of potato virus A in dormant tubers by reversetranscription polymerase chain reaction. Plant Disease. 82: 230 - 234.
Solomon-Blackburn, R., Nikan, J. and Barker, H.. 2008. Mechanism of strong resistance to
Potato leafroll virus infection in a clone of potato (Solanum tuberosum). Annals of Applied Biology
152: 339 347.
Spooner, D., Nez, J., Trujillo, G., Herrera, M., Guzmn, F. and Ghislain, M. 2007. Extensive
simple sequence repeat genotyping of potato landraces supports a major reevaluation of their
gene pool structure and classification. Proceedings of the National Academy of the United States
of America 104: 19398 19403.
Staub, U., Polivka, K. and Gross, H. 1995. Two rapid microscale procedures for isolation of total
RNA from leaves rich in polyphenols and polysaccharides: Application for sensitive detection of
grapevine viroids. Journal of Virological Methods 52: 209 218.
St-Pierre, B., Bertrand, C., Camirand, A., Cappadocia, M. and Brisson, N. 1996. The starch
phosphorylase gene is subjected to different modes of regulation in stach-containing tissues of
potato. Plant Molecular Biology 30(6): 1087 1098.
Taliansky, M., Mayo, M. and Barker, H. 2003. Potato leafroll virus: a classic pathogen shows
some new tricks. Molecular Plant Pathology 4: 81 - 89.
Tamayo, P. y Navarro, N. 1984. Aumenta la incidencia del virus del amarillamiento de venas de la
papa en Antioquia. ASCOLFI INFORMA (Bogot). 19, 40 42.
Thygesen, P., Dry, I., Robinson, S. 1995. Polyphenol oxidase in potato: a multigene family that
exhibits differential expression patterns. Plant Physiology 109: 525 531.
Tian, T., Rubio, L., Yeh, H., Crawford, B. and Falk, B. 1999. Lettuce infectious yellows virus: in
vitro acquisition analysis using partially purified virions and the whitefly Bemisia tabaci. Journal of
General Virolology 80: 1111 - 1117.
Tzanetakis, I., Postman, J. and Martin, R. 2005. A member of the Closteroviridae from mint with
similarities to all three genera of the family. Plant Disease 89: 654 658.
Untiveros, M., Fuentes, S. and.Salazar, L. 2007. Synergistic Interaction of Sweet potato chlorotic
stunt virus (Crinivirus) with Carla-, Cucumo-, Ipomo-, and Potyviruses Infecting Sweet Potato. Plant
Disease 91: 669 - 676.
USDA APHIS. 2000. Regulated plant pest list.
[http://www.aphis.usda.gov/import_export/plants/plant_imports/downloads/RegulatedPestList.pdf].
Bibliografa
185
Van Hoof, H. 1980. Aphid vectors of potato virus Y. Netherlands Journal of Plant Pathology 86:
159 162.
Vargas, A., Rodrguez, L. y Oliveros, O. 2010. Respuesta de genotipos de Solanum phureja
Grupo Phureja a la infeccin con Potato yellow vein virus (PYVV). XXIV Congreso de la
Asociacin Latinoamericana de la Papa ALAP. Cusco - Per.
Vargas, L., Fierro, J., Hernndez, A., Franco-Lara, L. y Guzmn, M, 2010b. Efecto de la
infeccin con PYVV (Potato yellow vein virus) en la produccin de Solanum tuberosum Grupo
Phureja en una muestra de campo en la sabana de Bogot. XXIV Congreso de la Asociacin
Latinoamericana de la Papa ALAP. Cusco - Per.
Vega, J. 1970. Transmisin, purificacin y caracterizacin del agente causal del amarillamiento de
las venas en papa. Tesis M.Sc. Universidad Nacional de Colombia e Instituto Colombiano
Agropecuario (ICA). Bogot, Colombia.
Velazco, R. 2005. Marcadores moleculares y la extraccin de ADN. Revista Biotecnologa en el
Sector Agropecuario y Agroindustrial 3: 14 - 18.
Wacker, M. and Godard, M. 2005. Analysis of one-step and two-step real time RT-PCR using
SuperScript III. Journal of Biomolecular Techniques 16(3): 266 271.
Wege, C. and Siegmund, D. 2007. Synergism of a DNA and an RNA virus: Enhanced tissue
infiltration of the begomovirus Abutilon mosaic virus (AbMV) mediated by Cucumber mosaic virus
(CMV). Virology 357: 10 - 28.
Wei, T., Lu, G. and Clover, R. 2009. A multiplex RT-PCR for the detection of Potato yellow vein
virus, Tobacco rattle virus and Tomato infectious chlorosis virus in potato with a plant internal
amplification control. Plant Pathology 58: 203 209.
Wilson, R. and Jones, R. 1992. Resistance to phloem transport of Potato leafroll virus in potato
plants. Journal of General Virology 73: 3219-3224.
Yuan, J., Reed, A., Chen, F. and Stewart, C. 2006. Statistical analysis of real time PCR data.
BMC Bioinformatics 7(85).
Zapata, J., Saldarriaga. A. y Salazar, L. 2004. El amarillamiento de venas de la papa.
Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria y Ministerio de Agricultura y Desarrollo
Rural. Boletn Tcnico 21. Rionegro (Antioquia).

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Anexo A: Mtodos de extraccin de RNA

Anexo A.1: Extraccin de RNA total con Trizol

Anexo A.1.2 Precipitacin de RNA:

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

5. Dejar secar el pellet de RNA y resuspender en 30l de agua DEPC.

Anexo A.2: Extraccin de RNA total con CTAB (Lpez et

Buffer de maceracin CTAB (Esterilizar por autoclavado)

Buffer TE-SDS (Esterilizar por autoclavado)

Anexo A.2.2 Extraccin:

Pulverizar 150mg de material vegetal con Nitrgeno lquido.

2. Homogenizar el material vegetal con 1.5ml de buffer de maceracin CTAB e

Anexo A. Mtodos de extraccin de RNA

Anexo A.2.3 Precipitacin:

Anexo A.3: Extraccin de dsRNA con

Buffer de extraccin (Esterilizar por autoclavado)

Buffer TE 1X (Se autoclava)

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

Anexo A.3.2 Extraccin:

Anexo A.3.3 Purificacin con columnas de Sephadex:

Anexo A. Mtodos de extraccin de RNA

Anexo A.4: SV Total RNA Isolation System (Promega)

Anexo B: Cuantificacin de RNA

Anexo B.2: Cuantificacin de RNA por

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

Anexo C: Estimacin de la integridad de RNA

Buffer de carga adicionado con folmaldehido

Mezcla para denaturar muestras de RNA

Anexo C.1.2: Preparacin del gel de agarosa denaturante

Anexo C.1.3: Denaturacin de RNA

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

Anexo C.1.4: Cargar las muestras y correr la electroforesis

Anexo C.2: Determinacin de la intensidad de las bandas

Figura Anexo C - 1. Imagen generada por ImageJ a partir de un carril de un gel

Anexo D. Reacciones de Amplificacin

Anexo D.2: Retrotranscripcin

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

Anexo D.3: PCR

El perfil trmico de la reaccin fue el siguiente:

Anexo D.4: qPCR

Anexo D. Reacciones de Amplificacin

Tabla Anexo D 5: Continuacin

El perfil trmico de esta reaccin se describe en la siguiente tabla

Anexo E. Transcripcin in vitro

Anexo E.1: Linearizacin del plsmido

Figura Anexo E - 1. Sitio de reconocimiento de la enzima PstI en el panel superior, y en el panel

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

Anexo E.2: Purificacin del plsmido linearizado

5. Quitar nuevamente el mbolo de la jeringa y adicionar dentro de la jeringa 2ml de

Anexo D. Reacciones de Amplificacin

Anexo E.3: Transcripcin in vitro

La reaccin se incub durante 2h a 37C. La reaccin debe prepararse a temperatura

Anexo E.4: Purificacin de los transcritos

Anexo E.5: Tratamiento de los transcritos con DNasa I

Anexo F. Resultados artculo 1.

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

Tabla Anexo F 1. Continuacin

Anexo F. Resultados artculo 1. Evaluacin de tres mtodos de extraccin de

Tabla Anexo F 1. Continuacin

Deteccin y cuantificacin del Potato yellow vein virus (PYVV) en aislamientos

Tabla Anexo F 1. Continuacin

Anexo F. Resultados artculo 1. Evaluacin de tres mtodos de extraccin de

Tabla Anexo F 1. Continuacin

Anexo F.2: Determinacin de la calidad de los extractos