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DE ENSAYOS
Cdigo 6014-P
Versin 01/2011
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Cdigo 6014-P
OBJETIVO
ALCANCE
RESPONSABILIDAD.
El Jefe de Laboratorios, es responsable del diseo y desarrollo del Plan integral de Validacin
para los mtodos de ensayos que se requieran. Tambin deber realizar el seguimiento y definir
conjuntamente con los Jefes de Seccin y/o Supervisores el equipo de trabajo y sus
responsabilidades.
El Jefe de Seccin y/o Supervisor, es el responsable de cumplir con el desarrollo del plan de
validacin y de proponer el personal con la competencia tcnica necesaria que participar.
TERMINOS Y DEFINICIONES:
Validacin de mtodo. Es un proceso mediante el cual se define requisitos analticos, que
aseguran que el mtodo de ensayo bajo ciertas consideraciones ha desarrollado capacidades
consistentes con la aplicacin requerida.
4.2
4.3
4.4
4.5
Veracidad. Grado de concordancia existente entre el valor medio obtenido de una gran
de resultados y un valor aceptado como referencia.
serie
4.6
Elaborado: Y. Morales
Revisado: D. Snchez
Aprobado: G. Reyes
E.Terrones
J. Camero
Fecha: 2011-01-25
Fecha: 2011-01-29
Fecha: 2011-01-31
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4.7
4.8
4.9
es
la precisin entre
4.14 Lmite de Cuantificacin. Es la concentracin mnima que puede determinarse con un nivel
aceptable de exactitud y bajo condiciones indicadas de la prueba.
Los lmites de cuantificacin son las caractersticas de funcionamiento que definen la capacidad de
un proceso de medicin qumica para cuantificar adecuadamente un analito.
4.15 Rango. Es el intervalo entre la ms alta y ms baja concentracin (cantidades) del analito en la
muestra, para la cual se ha demostrado que el mtodo analtico tiene un nivel apropiado de
precisin, veracidad y linealidad.
4.16 Robustez o solidez. Es la medida de la resistencia de un mtodo al cambio de respuesta
cuando se introducen pequeas variaciones en el procedimiento.
La robustez de un procedimiento analtico es una medida de su capacidad de no ser afectado por
pequeas, pero deliberadas variaciones en parmetros del mtodo y proporciona una indicacin de
su confiabilidad durante su normal uso.
4.17 Selectividad / Especificidad. Propiedad del mtodo para dar resultados exclusivamente del
compuesto que se desea detectar y cuantificar.
Algunos autores lo consideran trminos diferentes indicando que la selectividad es la capacidad de
detectar simultneamente o separadamente por ejemplo, sustancias qumicas diferentes presentes
en una misma muestra y la especificidad como la capacidad de detectar el analito sin interferencia
de otros compuestos.
Es el grado por el cual un mtodo puede determinar un analito particular dentro de una mezcla
compleja, sin ser interferido por otros componentes de la mezcla.
La capacidad de un mtodo para determinar exactamente y especficamente el analito de inters en
la presencia de otros componentes en una matriz de la muestra bajo condiciones indicadas de la
prueba.
4.18 Sensibilidad. Es el cambio en la respuesta de un instrumento de medida dividido por el cambio
correspondiente en el estmulo
Nota: El estmulo puede por ejemplo, ser la cantidad del mensurando presente. La sensibilidad
puede depender del valor del estmulo de medida, puede tambin ser aplicada al mtodo analtico
en su totalidad, considerando otros factores tales como el efecto de la concentracin medida.
4.19 Incertidumbre. Parmetro asociado al resultado de una medicin que caracteriza la dispersin
de los valores que pudieran ser razonablemente atribuidos a la magnitud a medir.
4.20 Nivel de confianza. La probabilidad de que el valor del mensurando permanezca dentro de la
amplitud del rango de incertidumbre.
4.21 (X) Falso positivo. Se (X) denomina desviacin positiva cuando el mtodo a validar
proporciona un resultado positivo y el mtodo de referencia d un resultado negativo. La
desviacin (X) positiva tambin es conocida como falso positivo.
4.22 (X)Falso negativo. Se (X) denomina desviacin negativa cuando el mtodo a validar
proporciona un resultado negativo y el mtodo de referencia d un resultado positivo. La
desviacin (X) negativa tambin es conocida como falso negativo.
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5.
DESARROLLO
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El Jefe de (X) Laboratorio y/o Jefe de Seccin elabora el Plan de Validacin, ste debe
contener lo siguiente:
Objetivo
Alcance
Consideraciones generales
Mtodo usado
Documentos de referencia
Principio del mtodo.
Flujograma del mtodo
Equipo de trabajo
PROCESO DE VALIDACIN
Parmetros considerados para la validacin (sustentacin)
Desarrollo de los parmetros
Como se determin
Criterios de decisin
1.
2.
3.
CRITERIOS DE REVALIDACIN.
Se realizar revalidaciones de mtodos de ensayos en los siguientes casos:
3.1
Transcurrido 3 aos de la validacin 3.2
Cuando se autoriza a un nuevo analista.
Para estos casos se verificar los parmetros de veracidad y Precisin.
3.3
5.2
El Jefe de Laboratorios, conjuntamente con el Jefe de Seccin y/o Supervisor designan el equipo
de trabajo y las responsabilidades de estos, establecen los plazos y entregan el plan para su
aplicacin.
5.3
5.4
El Jefe de Laboratorios conjuntamente con el Jefe de Seccin y/o Supervisor, determinan los
parmetros que deben considerarse segn el tipo de mtodo a validar (ver anexo).
5.5
El Jefe de Seccin y/o Supervisor. Entregar la muestra junto con el mtodo a validar, al (los)
Analista para que realice los ensayos, indicando a los participantes que las muestras deben ser
trabajadas, para recopilar un total de por lo menos (X) 30 datos.
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5.6
Si se trata de un mtodo donde no se puede realizar recuperacin, comparacin con otro mtodo
de referencia o no se cuenta con material de referencia certificado, la muestra ser enviada a un
laboratorio externo para que realice el ensayo. Solicitando se reporte los ensayos parciales y el
promedio.
5.7
El Jefe de Seccin y/o Supervisor, recopila la informacin entregada por los analistas, el
laboratorio externo y procede en coordinacin con los Analistas designados, a realizar la
evaluacin estadstica de los datos.
6.
6.1
DETERMINACION DE LA VERACIDAD.
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(%)Recuperacin
100
=C1C3C2
Criterios de aceptacin.
El mtodo tendr recuperacin aceptable si el porcentaje de la recuperacin se encuentra
dentro de los rangos indicados en la Tabla N 3.
En los ensayos microbiolgicos, el nmero de UFC inoculado a la matriz ser
transformado a logaritmo en base 10 y comparado con el valor promedio de los
resultados obtenidos al realizar el ensayo , transformados a log (base10), mediante una
prueba estadstica (prueba T, Wilcoxon, etc.). El mtodo tendr recuperacin aceptable s
el valor estadstico p-value es mayor que el nivel de significancia (alfa = 0.05).
6.1.2 Mediante Comparacin con otros mtodos de anlisis.
Verificacin
Si existe un mtodo de referencia, podemos comparar los resultados obtenidos de las muestras
analizadas por ambos mtodos.
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Zi = x i
Criterio de Aceptacin.
Si los puntajes Z-Score son menores o iguales ( en valor absoluto ) a 2 , concluiremos que los
resultados obtenidos en el interlaboratorio son veraces.
6.1.4 Mediante Material de Referencia Certificado:
Verificacin
Si se cuenta con una muestra o material de referencia certificado, se necesitar cuando menos
10 repeticiones de anlisis de dicha muestra o material para poder verificar la veracidad de la
metodologa.
Criterio de Aceptacin. Pueden ser usados:
El porcentaje de recuperacin o la Prueba t con un 95% de confianza. En el caso de datos no
paramtricos aplicar el Test de Wilcoxon al 95% de confianza.
6.1.5 Mediante Pruebas de comparacin con otro Laboratorio Verificacin.
La veracidad de los resultados se verificarn comparando el promedio de los resultados
parciales del otro laboratorio, con la data obtenida en el nuestro.
Criterios de Aceptacin.
Utilizando el estadstico t student al 95% de confianza. Para el caso de datos no paramtricos
aplicar el Test Wilcoxon al 95% de confianza.
6.1.6 Mediante uso de controles positivos y negativos.
Verificacin
Si se cuenta con controles o material de referencia certificado, se necesitar cuando menos 10
repeticiones de anlisis de dicho material para poder verificar la veracidad de la metodologa.
Verificacin
Se calcula de la siguiente manera:
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RSD =
100% R
RSD =210.5log(Concentracin)
X * 0,01
X * 0,00001
X * 0,000001
X * 0,00000001
ug/Kg
X * 0,000000001
a)
b)
c)
d)
e)
a)
b)
6.4
Verificacin
Preparar soluciones estndar segn lo indicado en cada mtodo para elaborar la curva de
calibracin (mnimo 3 curvas independientes) para evaluar los estimadores de regresin
(Coeficiente de regresin lineal, Pendiente e Intercepto de las tres curvas en conjunto) en un
intervalo de confianza dado (95%).
Tambin se puede preparar muestras enriquecidas a distintos niveles de concentracin mnimo 3
niveles con 3 rplicas independientes para evaluar los estimadores de regresin (Coeficiente de
regresin lineal, Pendiente e Intercepto de las tres curvas en conjunto ) en un intervalo de
confianza dado (95%) y observar el efecto de matriz.
Graficar la respuesta de la medicin, contra la concentracin del analito. Se verifican datos con
comportamiento atpico mediante mediciones adicionales.
Realizar un anlisis de varianza de la regresin lineal
Calcular y graficar los residuos (valor real de la concentracin el calculado por la ecuacin de
regresin para cada valor de X)
Criterios de aceptacin
Se confirma linealidad si se cumplen los siguientes criterios:
Que el Coeficiente de correlacin lineal (r ) debe ser mayor a 0,999
Nota: Para ensayos por HPLC el Coeficiente de correlacin debe ser mayor a
0,99(11) y para ensayos de absorcin atmica mayor a 0.995(14)
El Anlisis de varianza de la regresin lineal debe demostrar:
paso del intercepto por cero.
La pendiente sea igual a 1.
En un intervalo de confianza dado (95%).
c) Distribucin aleatoria de los residuos (Tendencias sistemticas son indicativas de no
linealidad).
DETERMINACION DE LA ROBUSTEZ
Se realizaran pequeas modificaciones a los puntos crticos identificados en el mtodo, pudiendo ser
las variaciones las siguientes :
Verificacin
= (Y bl + 3 Sbl ) / b
b)
Limite de Cuantificacin.
LDC = 3* LDM
LDC = 5* LDM (18)
6.5.4
UTILIZANDO BLANCO DE LA MUESTRA CON ADICIN DE LA MENOR
CONCENTRACIN ACEPTABLE DEL ANALITO (19)
a) Limite de deteccin del instrumento (LDI).
Se preparan 7 soluciones de blancos fortificados con la adicin de menor concentracin
aceptable de analito segn el procedimiento del mtodo analtico. Una vez preparadas las
soluciones se llevan acabo las mediciones de cada una y posteriormente se calcula la
desviacin estndar del grupo de datos.
Entonces:
Donde:
LDI = 0 + ts
b)
c)
Limite de Cuantificacin.
LC = 10 x s
Donde:
s= Desviacin estndar de las rplicas del anlisis
6.5.5
8. REFERENCIAS
Se hace referencia a los procedimientos e instructivos.
de
mtodos
de
ensayos.
Resolucin
CRT
APHA, AWWA,WPC. Standard Methods for the examination of water and wastewater 21
st.2005
AOAC Peer Verified methods Program. Manual on policies and procedures. Arlington, VA, Nov
1993.
Introduccin a HPLC. Aplicacin y Prctica. Por Oscar Alberto Quattrocchi Sara Abelaida de
Andrizzi Ral Felipe Laba.
Estadstica para Qumica Analtica. 2da Ed. 1993 por J.C. Miller.
NTP ISO 5725-2 : 1999. Exactitud ( Veracidad y precisin de los mtodos y resultados de
medicin ). Parte 2 : Mtodod bsico para la determinacoin de la repetibilidad y la
reproducibilidad de un mtodo de medicin normalizado. 1. Ed
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 21st.2005. 3020 B. Quality
Control Practices 2. Calibration. pg. 3-4.
PARAMETROS
ANALITICOS
CATEGORIA II
CATEGORIA
I
CUANTITATIVO
ENSAYOS
DE LMITE
CATEGORIA III
Aproximacin
Si
Si
Precisin
Si
Si
No
Si
Especificidad
Si
Si
Si
No
No
Si
Lmite de
cuantificacin
No
Si
No
Linealidad
Si
Si
No
Rango
Si
Si
Robustez
Si
Si
Lmite de
deteccin
Si
Si
PARAMETROS
CUALITATIVO
Exactitud
DETERMINACION
DE CONTENIDOS
X
ANALISIS
DE TRAZAS
X
ANALISIS
FISICOQUIMICOS
X
Precisin
Linealidad
Selectividad
Lmite de Deteccin
Lmite de Cuantificacin
Robustez
X
X
Nota: Los mtodos gravimtricos y volumtricos (entre los que se encuentran algunos mtodos analticos
importantes como materia seca, ceniza, grasa y nitrgeno Kjelhahl) no requieren la evaluacin de la Linealidad.
(Procedimiento NMKL N4 (1996) Validacin de Mtodos de Anlisis Qumicos pg. 16 de 21) documento
traducido.
TABLA DE RECUPERACION PARA DIFERENTES CONCENTRACIONES.
TABLA N 3
Concentraciones
100 %
10 %
1%
0.1 %
100 ppm
10 ppm
1 ppm
100 ppb
10 ppb
1 ppb
Promedios de Recuperacin
%
98-102
98-102
97-103
95-105
90-107
80-110
80-110
80-110
60-115
40-120
Ejemplo:
Si la concentracin se encuentra entre 1000 ppm y 100 ppm, el laboratorio deber obtener el rango de
recuperacin entre 90 y 107 %.