PRCTICA N 3

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

I.
II.

OBJETIVOS
Aprender a preparar medios de cultivo ms comunes.
Diferenciar los diferentes tipos de medios de cultivo.
FUNDAMENTO

Est basada en preparar sustancias nutritivas que sirven como medios de

cultivo para promover el crecimiento de los microorganismos; donde la
mayora de estos medios de cultivo contienen distintas sustancias orgnicas
e inorgnicas que proveen elementos necesarios para el desarrollo del
microorganismo.
III.

MARCO TERICO
III.1.

MEDIOS DE CULTIVO:

Es el material alimenticio donde crecen los microorganismos. Para que las

bacterias crezcan adecuadamente este medio de cultivo debe reunir una
serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin
de oxigeno adecuados, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad;
debe estar excento de todo microorganismo contaminante. (Gua
prctica).
Un medio de cultivo es una solucin acuosa (bien como tal, o bien
incorporado a un coloide en estado de gel) en las que estn presentes todas
las sustancias necesarias para el crecimiento y multiplicacin de los
microorganismos en el laboratorio; con el objetivo de aislar las diferentes
especies bacterianas u hongos, para luego proceder a su identificacin y
llevar a cabo unos estudios complementarios (Mendo, 2003).
Un medio de cultivo adecuado es aquel que contenga los elementos
nutricios esenciales en concentraciones adecuadas, la cantidad necesaria
de sal y el adecuado volumen de agua, se encuentra excento de sustancias
inhibidoras del organismo que se va a cultivar, tenga la consistencia
deseada, la reaccin (pH) conveniente para el metabolismo del cultivo, y ser
estril (Mendo, 2003).
Cultivo: es el crecimiento de los microorganismos.
El Extracto de levadura se obtiene por extraccin acuosa de levadura de
cerveza autolizada. Merced a su elevado contenido en vitamina B, ofrece
antecede excelentes condiciones de crecimiento para una serie de
microorganismos.
Bajo la denominacin de peptonas se comprenden las sustancias de origen
proteico que a partir del estado coloidal de las protenas nativas, se han
transformado, por escisin de estas ltimas, en fragmentos fcilmente
hidrosolubles y ya no coagulables las peptonas constituyen mezclas de

pptidos que, que segn la protena de origen y la enzima utilizada,

presentan las sustancias basales ms importantes de los medios de cultivo.

III.2.

INGREDIENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

La base de muchos medios de cultivo es la infusin de extractos de carne y

peptona a la que se aadirn otros nutrientes; cualquiera que sea el grupo
de microorganismos que se quiera cultivar, el medio de cultivo de incluir:
-

Agar
Peptonas
Extractos
Sistemas amortiguadores
Sales inorgnicas
Vitaminas
Indicadores de pH.
III.3.

TIPOS DE MEDIO DE CULTIVO:

1. POR SU COMPOSICIN QUMICA:

a. Medios de cultivos empricos
- Caldo nutritivo
- Agar nutritivo
b. Medios de cultivos sintticos (medios deshidratados)
- Agar citrato de simmons
- Caldo malonato
- Medios para la determinacin de vitaminas
2. POR SU CONSISTENCIA
a. Medios lquidos
b. Medios slidos
c. Medios semi-slidos
3. POR SU USO:
a. Medios bsicos
- El agar tripticasa de soya (TSA)
b.
c.
d.
e.

Medios
Medios
Medios
Medios

enriquecidos
selectivos
diferenciales
especiales

IV.

PARTE EXPERIMENTAL
-

IV.1.
MATERIALES Y REACTIVOS
Esptula
Papel Kraft
Balones
Probetas de 100mL, 250mL y 500mL
Matraces de250mL
Extracto de carne
Peptona
Lactosa

IV.2.
EQUIPOS
Autoclave
Balanza mecnica
IV.3.

PROCEDIMIENTO
IV.3.1. Ingredientes para la preparacin del caldo
lactosado

Extracto de levadura
Peptona
Lactosa
Agua

3g
5g
5g
1000mL

IV.3.2. Pasos para la preparacin del caldo

lactosado
o
o
o

o
o
o
o
o

Preparar en 2 balones de 1L, en cada una 500mL de caldo

Pesar los ingredientes para cada baln (previamente
estandarizado los pesos para ambos balones).
Disolver en cada baln aadiendo cierta cantidad de agua
destilada, disolver completamente si se peg por las paredes
del baln hasta completar lo 50mL previamente medidos con la
probeta.
Distribuir el caldo en 5 matraces (4 con 180mL y 1 con 90mL).
Taponar los matraces con algodn no absorbente.
Cubrir la boca del matraz con papel Kraft previamente
taponado con algodn.
Esterilizar en autoclave a 121 C de 10min-15min.
Dejar descender la temperatura, para luego acondicionarlo
estril para su posterior uso.

500mL

500mL
Medir vol.
De H2O

Extracto de
levadura
Peptona
Lactosa

Pesar los
ingredientes
Ingrediente
s
+
H2Od

Diluir

Distribuir

500m

180m

180m

90m
L

180m

Taponar
Cubrir con papel
Kraft

Autoclavar

Enfriar

Conservar

4 C

IV.4.
RESULTADOS
o Luego del tiempo de autoclavado el color del caldo sali menos
intenso vari de un naranja oscuro a un naranja claro.
o El extracto de levadura no tena una consistencia fina sino que
haban captado humedad y se encontraba en forma de grumos
grandes.
V.
-

VI.

CONCLUSIONES
Aprend a preparar un medio de cultivo que es el caldo lactosado
Se esteriliz los medios de cultivo a una temperatura de 121 C en un
tiempo de 10min-15min.
Luego del tiempo de esterilizado se dej descender la temperatura
del autoclave abriendo poco a poco la llave de este para que la
presin del vapor y de la atmosfera se equilibren.
Se sacaron del autoclave a los medios de cultivos ya esterilizados y
se dej al medio ambiente durante 2 das (sbado y domingo) y el
lunes se coloc a refrigerarlo a una temperatura de 4 C.
DISCUSIONES
Segn E. Merck manual de microbiologa. Nos dice: El extracto
de levadura es un polvo fino, amarillo-parduzco, de olor
caracterstico. Es soluble en agua, dando una solucin clara, pardoamarillenta el extracto de levadura se aade a los medios de
cultivo a concentraciones, casi siempre de unos 3 gramos por litro.
En nuestro laboratorio el extracto de levadura estaba vencido y
no se encontr en forma de polvo fino sino que este haba
captado humedad y se encontraba formando grumos
pegajosos; pero si se agreg los 3g por litro.
Segn E. Merck manual de microbiologa. Nos dice: Modo de
actuar: la fermentacin de la lactosa se comprueba por la formacin
de gas obtenida. El gas liberado se recoge en forma de burbujas en
tubitos de DURHAM.
En nuestra prctica al disolver el extracto de levadura este
tuvo la propiedad de formar pequeas burbujas la cual no
intervinieron en nada a la hora de distribuir en los matraces.
Segn E. Merck manual de microbiologa. Nos dice:
Preparacin, su distribucin en tubos, se colocan tubitos de DURHAM
en los mismos. Se esteriliza en autoclave durante 15 minutos a 121
C, siendo necesario que se alcance la temperatura de esterilizacin
antes de transcurrir 30min. Inmediatamente despus de la
esterilizacin se enfran los tubos con la mayor rapidez posible.
En nuestra practica lleg a la temperatura de 121 C en el
tiempo de aproximadamente a los 45 min, en nuestro caso en
la distribucin del medio de cultivo se hizo en matraces en la
cual no se coloc tubitos de DURHAM.

Segn E. Merck manual de microbiologa. Nos dice: Para la

preparacin de medios de cultivo debe emplearse agua recin
destilada o desmineralizada, de reaccin neutra, y, dentro de lo
posible, pobre en grmenes, lo cual ha de controlarse siempre. A una
cantidad de agua aproximadamente igual a la mitad de la necesaria,
se aade la cantidad prescrita de medio de cultivo disecado se hace
una suspensin homognea agitando detenidamente y se aade a
una continuacin la cantidad restante de agua. Al mismo tiempo,
deben arrastrarse e incorporarse las partes de material que pudieran
haber quedado adheridas a las paredes del recipiente.
En la disolucin de los ingredientes para el medio de cultivo de
realizo en 2 balones de 1L en cada una se prepar 500mL de
caldo esto para poder homogenizar correctamente los
ingredientes, en cada una me mezcl con una cierta cantidad
de agua destilada para luego al final diluir con un mayor xito,
para que no quede ningn ingrediente que no se haya disuelto.
Segn E. Merck manual de microbiologa. Nos dice: Para la
mayora de los medios de cultivo lo ms conveniente es su
almacenamiento a baja temperatura. Otros, como los medios de
cultivo que contienen tioglicolato, se conservan a temperatura
ambiente. Siempre deben ser conservados, adems, protegidos
contra la luz.
En nuestra prctica luego de esterilizar los medios de cultivo se
dejaron al medio ambiente durante 2 das y al tercer da recin
pas a refrigerarse a una temperatura de 4 C.
Segn E. Merck manual de microbiologa. Nos dice:
<<Caldo>>, medio de cultivo fluido, libre de agar, que contiene
productos crnicos y o proteicos (peptonas, extractos).
En nuestra prctica preparamos el caldo lactosado que
contena extracto de levadura, peptona y lactosa.
Segn Mendo, M. (2003). Medios de cultivo en microbiologa.
Nos dice: De igual manera el pH o la reaccin del medio de cultivo es
extremadamente importante para el crecimiento de microorganismos.
En nuestra prctica no se midi el pH del caldo lactosado, ya
que no se contaba con los materiales necesarios para poder
hacer las correcciones previas de pH antes de autoclavar.

VII.

BIBLIOGRAFA

E. Merck manual de microbiologa. Alemania

Mendo, M. (2003). Medios de cultivo en microbiologa. EDICIONES

laborales SRL. (Per).