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Manual de prcticas de
Bioqumica Clnica I
Elaborado por:
Prof. Martn Velzquez Gmez
Maestro en Ciencias en Salud Pblica
Especialista en Bioqumica Clnica y Medicina Transfusional
Vo. Bo por:
Mtro. Miguel ngel Rodrguez Feliciano
Coordinador de la FCQ. Extensin Ocozocoautla
CONTENIDO
INTRODUCCIN55555555555555555555555555..
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18
BIBLIOGRAFA555555555555555555555555555
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I. INTRODUCCIN
La base material de la vida est constituida por un conjunto complejo de interacciones y
transformaciones moleculares. La disciplina encargada del estudio de estos procesos es
la Bioqumica o Qumica Biolgica. Est, como cualquier otra disciplina en que se
estudien molculas, sus interacciones y transformaciones, requiere como antecedente
bsico la Qumica.
El laboratorio clnico es un ambiente dinmico que est continuamente cambiando para a
satisfacer las necesidades de salud pblica. El presente manual ser de mucha utilidad
como recurso informativo en la formacin de los alumnos en el rea de Bioqumica
Clnica. El aspecto valioso de la informacin es que tiene un enfoque actual de los
procesos habituales de laboratorio como la tendencia tecnolgica de la automatizacin, lo
que permite enfrentar el reto de manejar pruebas ms sensibles, especficas y efectivas
en el monitoreo de la salud y la enfermedad. Adems, la posibilidad de obtener resultados
a tiempo y el costo-beneficio que representa.
La Bioqumica Clnica es un campo multidisciplinario cuya finalidad es la aplicacin de la
Ciencia Qumica para contribuir a la resolucin de problemas de salud. La funcin del
laboratorio de Bioqumica Clnica es realizar anlisis, tanto cualitativos como cuantitativos,
en fluidos corporales como sangre, orina, lquido seminal, lquido cefalorraqudeo, etc.
Para que los resultados de dichos anlisis sean tiles a los mdicos en el diagnstico,
tratamiento y seguimiento de una enfermedad, stos debern realizarse bajo un estricto
control de calidad logrando niveles ptimos de precisin y exactitud, caractersticas
deseables en cualquier resultado de diagnstico.
Los nuevos mtodos analticos se desarrollan con el fin de mejorar la exactitud y la
precisin de los mtodos existentes, tambin tiene el propsito de permitir el manejo de
equipo automatizado, para reducir los costos de los reactivos o de la mano de obra, o
para medir un compuesto nuevo. En cualquier caso, se debe verificar experimentalmente
el rendimiento analtico en el laboratorio clnico mismo, aun si se cree que el mtodo
nuevo es una mejora con respecto a los mtodos anteriores. La extensin de los
experimentos y la interpretacin de los datos van a depender del propsito de la
evaluacin y de quien la realiza, pero el fundamento bsico y el diseo experimental son
similares en todas las evaluaciones.
El proceso de evaluar un mtodo es distinto del proceso rutinario para el control de
calidad, despus de haber sido introducido en la rutina diaria. El control de calidad
rutinario (diario) es un proceso establecido por medio del cual se detectan los incrementos
en los errores analticos de un mtodo con el fin de evitar la liberacin de datos
incorrectos de los pacientes. El control de calidad rutinario detecta los errores slo cuando
estos son superiores a los errores presentes registrados en el momento que se
establecieron los intervalos para los controles. El uso del control de calidad rutinario no le
permite al investigador determinar la magnitud de los errores inherentes del mtodo o de
decidir si son aceptables.
II. OBJETIVOS DEL LABORATORIO
Que el alumno sea capaz de realizar el anlisis de productos biolgicos incluyendo
una adecuada manipulacin de los especmenes, desde la toma y/o recepcin de
muestras hasta la entrega de resultados.
Que el alumno adquiera una formacin y preparacin en Bioqumica que le permita
afrontar los retos que encontrar en su vida profesional, ante el creciente nmero
de tcnicas que continuamente se estn desarrollando para la deteccin y
cuantificacin de metabolitos de inters en la medicina moderna.
Que el alumno adquiera los elementos formativos que le permitan desarrollar una
actitud y pensamientos crticos, y de independencia en el trabajo.
III. EVALUACIN DEL LABORATORIO
Acreditar el laboratorio corresponde al 20% de la calificacin total de la Asignatura de
Bioqumica Clnica I; la cual se desglosa de la siguiente manera:
Asistencia al laboratorio 5555555.
Informe de prctica 555555555.
Examen de laboratorio (prctica) 555.
1
Buenas prcticas de laboratorio 555...
20%
30%
30%
20%
Total444. 100%
El informe o reporte de prcticas deber contener lo siguiente:
Ttulo de la prctica
Nombre completo y grupo del alumno (a)
Introduccin
Objetivo
Material y mtodo utilizado; describiendo el texto en tiempo pasado.
Resultados obtenidos
Conclusiones
Cuestionario resuelto
Bibliografa consultada
1
Las buenas prcticas de laboratorio son los principios bsicos que se desarrollan para que los estudios se
conduzcan con una buena planeacin, con la ejecucin apropiada y con documentacin completa; adems se
apegan a un conjunto de normas y actividades relacionadas entre s, destinadas a garantizar que los
resultados analticos producidos cumplen con la exactitud, trazabilidad, seguridad, precisin y documentacin.
Nota: Utilizar letra Arial nmero 12 con interlineado de 1.15 y justificado todos
los mrgenes, entregar hojas engrapadas, no engargolar ni usar carpetas o folder,
sin
portada.
IV.PRACTICA 1: EXAMEN GENERAL DE ORINA
Desde el punto de vista del laboratorio clnico una de las pruebas ms solicitadas de
manera rutinaria es el examen general de orina (EGO), en el cual se realiza el anlisis
qumico (pH, glucosa, urobilingeno, etc.), anlisis fsico (color, aspecto) y de manera
conjunta el anlisis microscpico del sedimento urinario (SU) en busca de elementos
formes (eritrocitos, leucocitos, bacterias, cilindros, etc.). Si bien es una prueba
considerada) de rutina es de suma importancia su adecuada interpretacin ya que nos
proporciona datos sumamente importantes.
El anlisis del SU es una de las pruebas de laboratorio ms solicitada para el estudio y/o
valoracin de pacientes con padecimientos renales. De manera general, las
enfermedades renales y de las vas urinarias representan un problema de salud pblica
importante y su diagnstico tardo afecta la calidad de vida del paciente, llegando en los
casos ms severos a incapacidad y/o muerte.
a) Objetivo particular
El alumno describir y determinar los parmetros macroscpicos, fisicoqumicos y
microscpicos de la orina, logrando interpretar y explicar las alteraciones patolgicas
relacionadas con los resultados que se obtienen.
b) Materiales
Muestra de orina recin emitida (mximo 2 horas de recoleccin)
Tiras reactivas para urianlisis
Centrifuga clnica de 1000 a 4000 RPM
Microscopio ptico
Portaobjetos 24 x 55 mm
Cubreobjetos 24 x 24 mm
Micropipeta volumen variable de 5 a 50 uL y 100 a 1000 uL
Puntas amarillas (nuevas o recicladas)
Colorante Sternheimer-Malbin
Tubos de ensaye 13 x 100 mm (plstico o vidrio)
Tapones de hule para tubos de ensaye
Gradilla metlica o plstica
Aplicadores de madera
Sanitas o servilletas
c) Mtodo
Identificar correctamente la muestra de orina anotando en el frasco nombre
completo del paciente, fecha de recoleccin, edad, sexo, nmero de folio y
diagnstico (si se dispone)
Mezclar la muestra por inversin del frasco por 5 veces y depositar en un tubo de
ensaye de 13 x 100 mm aproximadamente 7 mL de orina.
Colocar el tapn de hule y mezclar nuevamente por inversin el tubo de 3 a 5
veces. Observar a contra luz el color y el aspecto de la orina. Anotar los resultados
en el formato de informe.
Colocar el tubo en la gradilla, quitar el tapn, extraer una tira reactiva del frasco
(tapar inmediatamente el frasco contenedor de las tiras), sumergir verticalmente la
tira reactiva dentro de la orina por un tiempo de 5 a 7 segundos, retirar y colocar la
tira sobre una sanita o servilleta para eliminar el exceso de muestra.
Apegarse a los tiempos de reaccin descritos en el inserto del fabricante de las
tiras reactivas.
Anotar resultados de los parmetros fisicoqumicos en el formato de informe.
Colocar el tapn de hule nuevamente al tubo de ensaye que contiene la muestra y
centrifugar a 2500 RPM por 5 minutos.
Pasado el tiempo de centrifugacin, realizar lo siguiente:
Orinas transparentes, decantar todo el tubo eliminando la mayor parte de
sobrenadante
Orinas ligeramente turbias, extraer 500 uL de sobrenadante con una pipeta,
eliminar el resto por decantacin y depositar nuevamente los 500 uL de
sobrenadante extrado y mezclar.
Orinas turbias, lo mismo que el anterior pero con 1000 uL
Colocar 5 uL de colorante Sternheimer-Malbin sobre el portaobjetos y aadir 50 uL
de sedimento urinario.
Mezclar con un aplicador de madera con movimientos circulares hasta mezclar el
colorante con la muestra.
Agregar un cubreobjetos y observar al microscopio. Primero enfocar el campo con
el objetivo 10x y observar rpidamente en busca de cilindros o cilindroides,
despus enfocar con el objetivo 40x.
Observar toda la muestra y reportar lo observado clasificando de la siguiente
forma:
Clulas epiteliales en uretrales o escamosas, uroteliales o de transicin y
renales o tubulares,
Elementos formes en eritrocitos, leucocitos, piocitos (leucocitos reactivos o
destellantes),
Bacterias (cocoides o bacilares),
0.725
x (peso-kg)
0.425
] x 0.0072
SC
Lmites de decisin:
Creatinina en sangre:
Creatinina en orina:
Depuracin de creatinina:
10
10
a) Objetivo particular
El alumno realizar y valorar la utilidad del perfil coprolgico para apreciar la capacidad
digestiva del intestino.
b) Materiales
Muestra de heces fecales
Microscopio ptico
Aplicadores de madera
Portaobjetos
Cubreobjetos
Tubos de ensaye de 13 x 75 mm
Pipeta graduada de 3 o 5 mL
Encendedor o cerillos
Reactivo para sangre oculta en heces (SOH)
Formalina al 10%
Reactivo de Benedict
Solucin salina 0.9%
Solucin yodo lugol 30%
Agua destilada o tridestilada
Gradilla metlica o plstica
Torundas con alcohol
Sanitas o servilletas
Guantes
Cubreboca
c) Mtodo
Observar las caractersticas fsicas de la muestra: olor, color, consistencias, etc.
Con ayuda de un aplicador de madera colocar una pequea fraccin en una de las
ventanas de la tarjeta para SOH
Agregar una gota de activador y luego de 5 minutos agregar una gota de
revelador. Observar la reaccin
Colocar 1 mL de reactivo de Bennedict en un tubo de 13x100 mm, agregar una
pequea porcin de muestra y mezclar.
Calentar el tubo hasta ebullicin teniendo cuidado de no exceder el calentamiento
del vidrio para evitar rupturas. Observar la reaccin
Colocar 1.5 o 2 mL de formalina al 10% en un tubo de 13x100 mm
Con aplicador colocar una fraccin (lo que logre adherirse a la punta del aplicador)
en el tubo que contiene formalina
Mezclar bien y obtener una gota de la mezcla y colocarlo sobre un portaobjetos y
cubrirlo con un cubreobjeto
BIBLIOGRAFA
1. Velzquez Monroy ML y Ordorica Vargas MA, Fundamentos de Qumica, 2004,
Consultado en: http://www.bioquimica.dogsleep.net/Teoria/Fundamentos.pdf
2. Ruiz Reyes G., Fundamentos e interpretacin clnica de los exmenes de
laboratorio, Editorial Mdica Panamericana, 1 Edicin, Mxico 2004
3. Terrs Speziale AM, Patologa Clnica: Ciencia y tecnologa, Editorial Merk, 1.
Edicin, Mxico, 1993
4. Velzquez Salgado Rosalinda, Manual de Bioqumica UNAM, Mxico 2009,
consultar
pgina
web:
http://www.facmed.unam.mx/fm/pa/2010/practicas/practicas_bioquimica.pdf
5. MLVM, MAOV e IV, Bioqumica mdica IPN, Mxico 2014, Consultar pgina web:
http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Manual.pdf
6. Revista del laboratorio clnico ISSN 1888-4008, Consultar pgina web:
http://www.elsevier.es/es-revista-laboratorio-clinico-282
7. Revista Acta de bioqumica clnica Latinoamrica ISSN 0325-2957, Consultar
pgina web: http://www.redalyc.org/revista.oa?id=535
8. Gmez Corvera A y Col., Manual de Bioqumica Clnica, Universidad Autnoma
de Zacatecas, Mxico 2010