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REAS DEL LABORATORIO DE CULTIVO DE TEJIDOS

Un laboratorio de cultivo de tejidos se puede dividir esquemticamente en


reas separadas para las diferentes funciones que se desarrollan en el. Sin
embargo, algunas de las funciones pueden desarrollarse en un mismo
ambiente.

a) reas del ncleo del laboratorio del cultivo de tejidos

1. rea de preparacin de medios de cultivo


Funcin: se utiliza principalmente para preparar los medios de cultivo, pero
debe proveer tambin un espacio para almacenar los materiales de vidrio y de
plstico y los reactivos qumicos. Este ambiente debe contar con mesas de
trabajo para la preparacin de los medios y para colocar las balanzas, el
medidor de pH, los platos calientes con agitacin, y otros elementos; tambin
debe incluir vitrinas, estanteras y espacio para el equipo de refrigeracin, y
para la incubadora o la cmara de crecimiento (o para ambas).
Material y equipo: refrigerador, balanzas, (macrobalanza y de precisin),
potencimetro, plancha elctrica con agitador magntico, frascos erlenmeyer
(125, 250 y 500 ml), botellas y material de vidrio o plstico.

2. rea de lavado y de esterilizacin: puede estar constituida por dos reas


conectadas entre s, o por un solo ambiente, y puede estar localizada dentro
del rea general de preparacin.
Funciones:
- El rea de lavado debe incluir por lo menos un lavadero grande con agua
caliente y agua fra y una fuente de agua de alto grado de pureza,
preferiblemente agua doblemente destilada; para el efecto se debe usar un
destilador de vidrio o de material no toxico y un desionizador de agua colocado

entre le destilador y el lavadero. Esta rea debe disponer de un espacio para


almacenar agua destilada en botellas de plstico; tambin debe proveer
basureros adecuados para el material vegetal, inorgnico y de vidrio que se
deseche.
- El rea de destilacin debe tener espacio para el autoclave vertical u
horizontal, el cual puede ser pequeo (olla de presin) o grande (de carga
frontal y de enfriamiento lento y rpido), segn sea el volumen del material
que se procese. Esta rea tambin debe incluir espacio para estufas, secadores
y un lavadero con agua caliente y fra.
Material y equipo: autoclave manual o automtico, destilador de vidrio,
gradillas para secado, bandejas de aluminio y de plsticos de varios tamaos,
recipientes de platico grandes, estufas para esterilizacin y secado.

3. rea de Transferencia
Funcin: en esta rea del laboratorio se realiza el trabajo de excisin,
inoculacin, y transferencia de los explantes a los medios de cultivo. Dado que
este trabajo demanda los ms altos niveles de limpieza ambiental, se
recomienda la instalacin de gabinetes de flujo horizontal o vertical de aire
filtrado bajo presin, o la construccin de cuartos de transferencia. Sin
embargo, ciertas operaciones de inoculacin, como la excisin y el cultivo de
pices y meristemos en tubos de ensayo de boca angosta, se pueden realizar
sobre una mesa limpia, ubicada en un lugar del laboratorio libre de corrientes
de aire y polvo.
Los gabinetes de flujo laminar deben ubicarse, en lo posible, en un lugar
alejado de las puertas y con un mnimo de corriente de aire, con el fin de
prolongar la vida til de los filtros.
Material y equipo: gabinete de flujo laminar, microscopio de diseccin con luz
incidente, e instrumentos de diseccin: cuchillas # 10 y # 11, mangos para

cuchillas, agujas de diseccin, pinzas, tijeras, navaja de afeitar. Tambin se


necesitan frascos con alcohol, mascaras, guantes, marcadores a prueba de
agua, bandejas, y tacho para basuras.

4. rea de incubacin
Funcin: los cultivos se incuban en un cuarto apropiado o en gabinetes o
cmaras de crecimiento; estas pueden ser ms eficientes en cuanto al control
ambiental, pero son ms costosas. El rea de incubacin o crecimiento in vitro
debe proporcionar un buen control de la temperatura (20-28 C), de la
iluminacin (variable, segn las necesidades: 1000 a 5000 lux) y de la
humedad relativa (70-80%).
En este cuarto de incubacin se instalan estanteras metlicas o de madera
para colocar los cultivos. Estas estanteras pueden tener dimensiones
variables: el ancho entre 0.3 m 1 m, el largo de acuerdo con el tamao del
cuarto, y la altura total de 1.8 a 2.2 m; la distancia entre peldaos es de 0.2 a .
5 m.
Esta rea debe incluir, adems, un espacio para cultivos en agitacin y para
cultivos estticos en la oscuridad.
Es necesario propiciar una buena distribucin del aire en este cuarto para
evitar zonas de recalentamiento por efecto de la luces. Cuando se utilizan
tubos fluorescentes, es conveniente sacar los balastros fuera de este cuarto.
La regulacin de la temperatura se puede logra por medio de aparatos de aire
acondicionado de pared o de un sistema central. En cualquier caso, es
necesario tomar precauciones para evitar el calentamiento excesivo,

instalando alarmas y controles para cortar l iluminacin cuando falle el aire


acondicionado.
Material y equipo: un cuarto con temperatura, iluminacin y humedad relativas
controladas; estanteras con iluminacin para los cultivos, bandejas,
termmetros de mxima y mnima, y gradillas para tubos de varios tamaos.

5. rea de observacin y examen (exanimacin): generalmente los


microscopios (estreo, compuesto, invertido y otros) se localizan tanto en el
rea de incubacin como en la de transferencia, pero opcionalmente pueden
estar en un rea separada.
Funcin: El objetivo de esta rea es realizar observaciones peridicas de los
cultivos, tanto en medios semislidos como en medios lquidos.
Material y equipo: microscopio estereoscpico, microscopio compuesto, lentes
de aumento, y elementos pticos complementarios.

b) reas consideradas, adems, para los laboratorios de investigacin


y desarrollo y los de produccin comercial
6. rea de crecimiento in vivo
Funcin: las plantas que se regeneran en el rea de incubacin se pueden
acondicionar o aclimatar y luego trasplantar en macetas, bandejas o camas
apropiadas. Esta operaciones se pueden llevar a cabo en tinglados, casas de
malla o invernaderos, dependiendo de la condiciones climticas del lugar
donde esta ubicado del laboratorio y de los requerimientos de aislamiento de
los materiales por razones fitosanitarias.
Material y equipo: macetas, suelo, bandejas, cmaras de alta humendad, entre
otros.

7. reas de cuarentena y de control fitosanitario: esta se incluye en


laboratorios con fines de produccin de materiales elites de sanidad
certificada. El rea de cuarentena debe estar separada del resto del laboratorio
pero cercana del rea de control fitosanitario.
En el rea de control fitosanitario se realizan las pruebas necesarias para
comprobar la sanidad de material vegetal, espacialmente causada por virus,
hongos y bacterias.
8. rea de oficina: se debe incluir aqu, el mobiliario de oficina como
escritorios, archivos y almacenamiento de datos, los libros de referencia y de
control del laboratorio, los catlogos y otros documentos. Tambin se coloca en
ella el equipo de clculo o computacin.

BIBLIOGRAFIA

http://webapp.ciat.cgiar.org/biotechnology/cultivo_tejidos/capitulo1.pdf
http://www.biblioteca.upibi.ipn.mx/Archivos/Material%20Didactico/Microbiolog
%C3%ADa%20ambiental/II.%20TecMic-Esterilizaci%C3%B3n.pdf
http://cv.udl.cat/cursos/76304/t2/t2.htm