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Las implicaciones de la hipe rmutacin somtica, en

la gene racin de la diversidad en la respuesta


inmunulgica
Jos A Garca
Coordinacin General de lnvestigacin, Universidad La Salle
<jgarc1a@c1.ulsa.mx>
RESUMEN
Se presenta un breve anlisis de las implicaciones del fenmeno de
hipermutacin somtica en los receptores linfoides inmunocompetentes. Se
destaca la implicacin de dicho fenmeno en el receptor de clulas T (TCR).
Palabras
clave:
hipermutacin
inmunocompetentes.

somtica,

receptores

linfoides

ABSTRACT
A brief analysis of lhe implications of somatic hypermutation phenomena in
the lymphoid immunocompe tent receptors is presented. The implication of
this event in the T-cell receptor (TCR) is emphasized .
Keywords. somatic hypermut alon, l ymphoid immunocompetent receptors.

INTRODUCCIN
Una de las propiedades ms importantes de la respuesta inmune consiste
en la gran diversi dad de molcula que pueden ser reconocidas por sus
receptores, especialmente por el anti cuerpo. Se puede considerar un
repertorio potencial de 109 clonas de linfocitos B especf cos que son
generados en la mdula sea de los vertebrados adultos.
La generacin de la diversidad se produce mediante dos mecanismos. El
primero ocurre en el proceso de diferenciacin de las clulas B y est dado
por el rearreglo de los genes varia bles (V), de diversidad (O) y de unin (J)
de la cadena pesada del anticuerpo, asicorno de los genes V y J de la
cadena ligera (1). En este pro ceso se genera la mayor parte del repertorio
de clulas B. El segundo es por la hipermutacin somtica .
Durante la ontogenia del linfocito B, las clulas inmaduras al encontrarse
con su antgeno son eliminadas por apoptosis. lo que disminuye el nmero
de clulas potencialmente autorreac tivas (2). Aqullas que superan este
proceso salen a circulacin para recorrer los diferentes rganos linfticos en
busca de su antgeno.
Cuando el receptor de clulas B (BCR) se encuentra con su antgeno, ocurre
el proceso de activacin y diferenciacin a clulas plasmticas. Si este
proceso se lleva a cabo en los centros germinales y adems interviene de

manera directa el linfocito T, entonces ocurre el proceso de hipermutacin


somtica. con lo que se aumenta el repertorio original (3). Dada la presencia
del antgeno en estas zonas, se favorece la proliferacin de las clonas con
mayor afnidad, por lo que la h1permutacin somtica est asociada a un
proceso de maduracin de la afnidad (4).
La participacin del linfocito T CD4+ en la hipermutacin somtica es dosis
dependiente y a travs de molculas de adhesin especfcas como el
ligando de C040 y el CD28 que interac tan en la clula B con CD40 y B7
respectiva mente (5). El proceso parece activarse en el estadio del
centroblasto para que posterior mente las clulas dendrticas foliculares
(FDCs) seleccionen a las clulas B en el estadio del centroc1to (6).

LOS CENTROS GERMINALES (GCs)


En la pulpa blanca del bazo se pueden distinguir 3 regiones: la zona
marginal (MZ); la cubierta linfoide periarteriolar (PALS); y el folculo. La
primera representa el sitio de entrada de los lin focitos de la circulacin al
bazo y es tambin hogar de macrfagos especializados y una sub poblac1n
de linfocitos B lgMhilgDlo. En la PA LS encontramos ei rea de clulas T. que
adems es rica en clulas dendr ticas interdigitantes , un tipo de clula
presentadora de antgeno (APC). El folculo es el rea de clulas B de la
pulpa blanca que contiene adems FDCs que actan "atrapando" de manera
efciente al antgeno (7).
Los linfocitos B y T que se encuentran en cir culacin entran a la MZ para
luego ingresar a la PALS donde los linfocitos T permanecen, las clulas B
continan hacia el folculo. En ausen cia de estirnulacin antignica ambos
linfocitos regresan a circulacin probablemente a travs del seno marginal
(7).
En la presencia de antgeno el panorama anterior cambia de manera radical.
El antgeno se localiza inicialmente asociado a las clulas dendrticas
interdigitantes quienes presentan ste a las clulas T especfcas,
deteniendo su migracin e inducindolas a proliferar (8). Los linfocitos B
estimulados por el antgeno, migran hacia la PALS donde reciben la
cooperacin de clulas T y proliferan en consecuencia. La mayora de los
linfocitos B sufre un proceso de diferenciacin a clulas plasmticas produc
toras de anticuerpos de la clase lgM en princi pio, pero posteriormente
pueden hacer el switch a otro isotipo (lgG, lgE, lgA). Estas clulas tienen un
tiempo de vida media relativamente corto y mueren por apoptosis en
aproximada mente 2 semanas tras el estimulo antignico original. Algunas
clulas B y T especfcas migran hacia folculos adyacentes. donde el
antgeno se encuentra asociado a la membrana de las FDCs (9). Las clulas
B que migran hacia los folculos prolferan localmente para formar GCs.
Dentro de las molculas que intervienen en el fenmeno se encuentran los
factores de transcripcin OCA-B/Bob-1/0BF-1 (1O) y SPl-B (11): los
receptores para el complemento 1 y 2 (CD21/CD35) (12); as corno la
expresin de 1as protenas BCL--6 (13) y OX40 (14) .
El GC contiene inicialmente slo centroblas tos en divisin y posteriormente
presenta las caracteristicas zonas obscuras y luminosas que contienen a los
centroblastos y a los centrocitos (que no se dividen) respectivamente. La

zona luminosa es la regin del GC rica en la red de FDCs donde gran parte
de los complejos inmunes son "atrapados". Se piensa que la hipermutacin
somtica de los genes variables de las inmunoglobulinas ocurre en los
centro blastos lg- que subsecuentemente migran hacia la zona luminosa
donde re-expresan la inmunoglobulina de superfc ie (7).
En esta zona, aqullas clonas con sufciente afnidad por el antgeno
sobreviven. mientras que el resto muere por apoptos1s, aunque se ha
reportado, que algunas de estas ltimas clonas pueden ser rescatadas por
una nueva acti vacin de los genes RAG-1 y RAG-2, respon sables de la
recombinacin de los genes en la regin variable ( 15). Dada la alta
concentracin de clulas B en los GCs, se presenta el fen meno de
competencia por el antgeno que se encuentra en las FDCs, con lo que
aqullas clonas con mayor afnidad se vern favoreci das. Las clonas que
fueron seleccionadas positivamente, pueden reingresar a la zona obscura
para posteriores eventos de mutacin y seleccin, con lo que se va
mejorando la afnidad de la respL1esta Inmunolgica (Fig. 1).
CARAC1ERISTICAS DE LA HIPERMUTACIN SOMTICA EN CLULAS B
La hipermutacin somtica de los genes V(D)J del anticuerpo es activada en
las clulas B que se encuentran en los GCs, donde son introduci das
mutaciones puntuales y, en menor grado. inserciones y deleciones en una
regin de 1 a 2 kilopares de bases por abajo del sitio de inicio de la
transcripcin (16).

Figura 1 Seleccin positiva de clonas inmunocompetentes tras la


hipermutacn somtica del anticuer po. A: existe contacto con el anigeno
(va FDC) pero no hay cooperacin de T; con la consecuente apoptosis. B:

hay contacto tanto con el antgeno (via FDC) como con el ligando de CD40
(CD40-L) en la superficie del linfocito T; consecuentemente la clona se
activa y se generan clulas de memoria y clulas Plasmticas productoras
de anticuerpos . C y D. no se encuentra el antgeno en el GC o la afinidad
del receptor es muy baja; estas clonas se eliminan por apoptosis.

La caracterstica ms sobresaliente de la hi permutacin somtica. es


precisamente el rango tan alto de mutacin que se presenta, y que se
estima que puede alcanzar hasta una mutacin puntual por cada 1000 bp
por generacin celu lar, la cual supera en varios rdenes de magni tud a ta
mutacin espontnea (3). Casi todas las mutaciones encontradas son por
sustitucin. con muy pocas inserciones o deleciones de nucletidos. Existe
evidencia de que slo una de las cadenas del ONA sufre el proceso, lo que
descarta la posibihdad de atribuir el fenmeno a la accin de la DMA
polimerasa (3).
En el proceso de la hipermutacin somtica. se ha reportado una mayor
frecuencia de mutacin en ciertas regiones llamadas hot spots, las cuales se
encuentran concentradas en las regiones hipervariables (CDRs) ms que en
las regiones del armazn (framework). La presencia de hot spots parece
estar dada por los codones de serina AGY (donde Y = ?) en las regiones
hpervariables
(17).
HlPERMUTACIN SOMTICA EN EL RECEP TOR DE CLULAS T (TCR)
El fenmeno de la hipermutacin somtica se ha considerado por aos que
slo ocurre en los ge nes variables del anticuerpo. En uno de los pri meros
intentos por tratar de observar este pro ceso en el TCR se transfectaron
clulas B con un transgn del TCR bajo el control del amplif cador de la
cadena pesada de las inmunoglobu linas (18). En este modelo no se
reportaron mutaciones en las regiones variables del TCR,a pesar de que los
anticuerpos s la llevaron a cabo.
La hipermutacin somtica en el TCR se report por primera vez en las
cadenas alfa de un receptor murino (19). En estos experimentos no se
encontr hipermutacin somtica en la cadenas beta y tanto la frecuencia
como la na turaleza de las sustituciones de las mutaciones
de las cadenas alfa fueron simHarns al caso del anticuerpo. Este grupo
report evidencia directa de que una pequea poblacin de clulas T
antgeno-especfcas que son reclutadas de centros germinales del bazo,
adquieren muta ciones en las regiones que codifcan para los genes
variables de la cadena a del TCR (Va), pero no en las cadenas b. Aseveraron
que las mutaciones locus-especifcas encontradas alcanzan frecuencias
comparables con los exones de VH de inmunoglobulnas mutadas
recuperadas del mismo sitio y que presentan una substitucin de bases
similar y polaridad en las cadenas del DNA. Linfocitos T que presen tan
mutaciones idnticas aparecen en mltiples GCs, lo que posiblemente
implique que algunas clulas que llevan TCRs mutados puedan recir cular a
travs delsistema linftico.

Posteriormente se reportaron mutaciones en la cadena beta de otro receptor


murino, aunque no se reportaron estos cambios como hiper mutacin
somtica (20). Cabe notar que el grado de mutacin en este caso no fue del
mismo grado que el reportado por el grupo de Kelsoe (19), donde la
frecuencia de hipermuta ciones puede deberse al hecho de que las clu las
T fueron aisladas de los centros germinales (GC) donde se sabe que ocurre
este fenmeno en el caso del anticuerpo.
Ms recientemente se report la presencia de hipermutacin somtica en la
cadena beta 3 (Vb3) del TCR en muestras de bazo microdisec cionado de
pacientes seropositivos para el virus de la inmunodefciencia humana (HIV)
(21). En dichas muestras se encontr que tanto la fre cuencia de
mutaciones como de la naturaleza de las sustituciones era similar al caso
del anticuerpo. Este representa el primer reporte del fenmeno en humanos,
ya que articulas anterio res slo haban estudiado receptores murinos.
IMPLICACIONES DE LA HIPERMUTACIN SOMATICA
La hipermutacin somtica genera nuevas especifcida des en el repertorio
de la respuesta inmunolgica. Como consecuencia de este fenmeno.
pueden producirse clonas potencial mente autorreactivas. En el caso de las
clulas
B. las clonas autorreactivas son eliminadas dada su susceptibilidad elevada
a las seales de apoptosis que no pueden ser revertidas debido tanto a la
ausencia de antgeno especf co en la superfcie de las FDCs, como de la
falta de cooperacin con las clulas T (Figura 1).
En el caso de las clulas T el mecanismo de hipermutacn somtica ha sido
descrito recien temente, por lo que se difculta su interpre tacin. Es posible
que este fenmeno tambin
genere clonas potencialmente autorreactivas. que en principio tendran que
ser eliminadas va apoptosis. Sin embargo, permanece la posibili dad de que
se generen clonas autorreactivas de clulas 8 y T de manera simultnea (es
decir, para el mismo antgeno) y que esta especifci dad se encuentre
representada dentro de las molculas presentadas por las FDCs. En este
ltimo caso quedaria latente el desarrollo de una enfermedad autonmune.
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