Revista de Cincias

Farmacuticas
Bsica e Aplicada

Rev Cinc Farm Bsica Apl., 2009;30(3):263-271

ISSN 1808-4532

Journal of Basic and Applied Pharmaceutical Sciences

Desenvolvimento de emulses leo de oliva/gua:

avaliao da estabilidade fsica
Frange, R.C.C1; Garcia, M.T.J.1*
1

Laboratrio de Tecnologia Farmacutica - Faculdade de Farmcia - Universidade de Uberaba - UNIUBE.

Recebido 03/02/2009 / Aceito 08/02/2010

RESUMO
Emulses leo de oliva/gua, na presena de agentes
emulsionantes no-inicos, foram avaliadas quanto
estabilidade fsica. Assim, prepararam-se emulses
fazendo uso de diferentes emulsionantes, sendo
um hidroflico e o outro lipoflico, nas diferentes
propores. s emulses mais estveis, adicionaram-se
agentes auxiliares da emulsificao, visando otimizar a
estabilidade; e estudos de estabilidade foram conduzidos,
submetendo as amostras em condies e perodos
diversos de armazenamento. Para caracterizao
da estabilidade, as amostras foram examinadas
macroscopicamente e submetidas s anlises de pH,
centrifugao, viscosidade, potencial zeta e distribuio
de tamanho de partcula. Os resultados demonstraram
que as emulses leo de oliva/gua no apresentaram
alterao, ou seja mantiveram-se estveis, quanto
s propriedades organolpticas, bem como fsicoqumicas, quando armazenadas temperatura
ambiente e protegidas da luz. Das emulses obtidas,
as que apresentaram maior estabilidade provm da
associao de agentes emulsionantes que resultaram
em equilbrio hidroflico-lipoflico (EHL) equivalente a
12. As emulses provenientes da associao de agentes
emulsionantes que possuem cadeias de cidos graxos
insaturados similares ao leo de oliva produziram
estabilidade mxima, demonstrando que a similaridade
estrutural entre os componentes da fase oleosa e os
agentes emulsionantes essencial para a estabilidade
da emulso.
Palavras-chave: Emulso O/A. Estabilidade. leo de
Oliva. EHL. Emulsionante no-inico.
INTRODUO
As emulses so disperses de duas fases lquidas
imiscveis entre si, usualmente gua e leo, estabilizadas
pela presena de agentes emulsivos, localizados na interface
leo/gua.

Autor correspondente: Maria Teresa Junqueira Garcia - Laboratrio de Tecnologia

Farmacutica - Faculdade de Farmcia - Universidade de Uberaba UNIUBE
Av. Nen Sabino, n 1801, Bairro Universitrio - CEP: 38055-550 - Uberaba
Minas Gerais - Brasil - e-mail:mtjgarcia@yahoo.com

Os agentes emulsivos, com propriedade de diminuir

a tenso interfacial entre o leo e a gua, tm papel
fundamental na estabilizao de emulses. Entretanto estes
compostos no conseguem diminuir a tenso interfacial a
ponto de contrariar totalmente a energia livre de superfcie
provocada pelo aumento da rea interfacial. Desta forma as
emulses so sistemas termodinamicamente instveis e, no
desenvolvimento tecnolgico, procura-se utilizar de meios
que possam retardar pelo maior tempo possvel a separao
das fases (Oliveira et al., 2004).
Presume-se que a estabilidade destas preparaes
depende do tipo de agente emulsionante utilizado e das
caractersticas fsicas da pelcula interfacial formada. Esta
pelcula deve ser rgida e compacta (Prista et al., 1995),
possuir certo grau de elasticidade superficial e no deve
romper-se quando pressionada pelas gotculas, mas ao
romper-se, deve ser capaz de formar-se rapidamente
(Gennaro, 1999), impedindo a aproximao e conseqente
juno da fase dispersa.
Por vezes, um nico emulsionante capaz de
originar o tipo de emulso desejada, no entanto, emulses
mais estveis so preparadas quando se utilizam misturas
de emulsionantes, sendo um para a formao de emulses
O/A e outro para a formao de emulses A/O (Prista et
al., 1995; Gullapalli & Sheth,1999). Postulam-se que os
agentes emulsivos hidroflicos e lipoflicos alinham-se um
ao lado do outro, conferindo maior rigidez e resistncia
ao filme emulsivo, atravs de pontes de hidrognio (Fox,
1986).
De acordo com Schulman & Cockbain (1940),
esses agentes emulsionantes so capazes de formar entre
si complexos interfaciais na superfcie dos glbulos
dispersos. Esses complexos promovem a formao e
a estabilizao da emulso porque diminuem a tenso
interfacial mais acentuadamente do que quando se emprega
um s agente emulsionante, alm de originarem uma
pelcula compacta, mas flexvel, na interface. Se o filme
interfacial for eletricamente carregado, foras repulsivas,
em consequncia da formao da dupla camada eltrica,
contribuiro para estabilidade do sistema (Aulton, 2005).
Para Gullapalli & Sheth (1997;1999), a estabilidade
das emulses O/A pode ser obtida pela otimizao da
mistura de emulsificantes hidroflicos e lipoflicos.
Segundo os autores, a similaridade estrutural dos agentes
emulsificantes com a fase dispersa essencial para a
estabilidade da emulso; e a estabilidade pode ser favorecida
pelo complexo formado entre o agente de viscosidade

Emulses leo de oliva/gua: estabilidade

hidroflico e tensoativo hidroflico e pela interao do

tensoativo hidroflico com a fase oleosa.
Por outro lado, as emulses instveis se manifestam
das seguintes formas (Silva & Soares, 1996): floculao,
onde as gotculas se agregam em aglomerados frouxos,
dentro da emulso, conservando sua identidade individual,
mas cada aglomerado comporta-se fisicamente como uma
unidade nica; coalescncia que caracterizada por uma
larga distribuio de tamanho das gotculas, resultando na
separao de fases de forma visvel ao olho nu; creaming
onde a fase dispersa, conforme sua densidade relativa
fase contnua, sobe at superfcie ou desce at o fundo
da emulso, formando uma camada de emulso mais
concentrada (Lieberman et al., 1988; 1989; Aulton, 2005);
amadurecimento de Ostwald, onde as partculas maiores
crescem de tamanho devido dissoluo das partculas
menores (Welin-Berger & Bergensthl, 2000).
medida que as emulses se tornam instveis,
suas caractersticas fsico-qumicas variam. Assim, para
verificar tais variaes pode-se determinar o valor do
pH, viscosidade, a distribuio de tamanho de partcula,
potencial zeta, entre outros (Brasil, 2004).
Logo, o presente trabalho tem por objetivo
avaliar a estabilidade fsica de emulses leo de oliva/
gua, empregando a associao de diferentes agentes
emulsionantes no-inicos, nas diferentes propores.
MATERIAIS E MTODOS
MATERIAIS
leo de Oliva (Pharmaspecial) - ndice de acidez
1%, Monoleato de Polioxietilenossorbitano (Tween 80,
EHL= 15)(Synth), lcool Cetoestearlico Etoxilado 20OE
(EHL=15,4) (Pharmaspecial) , lcool Olelico Etoxilado
3OE (EHL= 6,6) (Becto Research Chemical), lcool
Laurlico Etoxilado 2OE (EHL=6,2) (Chemistry), Glicerina
(Galena), Metilparabeno (Pharmaspecial), Propilparabeno
(Pharmaspecial), Carbopol 940 (Galena), Natrosol 250
HHR (Pharmaspecial), Butil Hidroxi Tolueno BHT
(Pharmaspecial), Soluo de NaOH 20% (p/v) (Nuclear).

polioxietilenossorbitano (Tween 80)/lcool cetoestearlico

20OE; monooleato de polioxietilenossorbitano (Tween
80)/lcool laurlico etoxilado 2OE; lcool cetoestearlico
etoxilado 20OE/lcool laurlico etoxilado 2OE), misturados
em propores variveis, de modo a originarem valores
definidos, mas escalonados de EHL; 10g de leo de oliva e
gua at completar 100g (Prista et al., 1996).
As emulses foram preparadas aquecendo
separadamente a fase aquosa e oleosa em banho-maria
(Tecnal TE 057) 70C. Aps o aquecimento, a fase
aquosa foi vertida na fase oleosa, e o sistema foi mantido
sob agitao a 15000 rpm (Ultra-TurraxT25) por cinco
minutos. Aps agitao, as emulses foram envasadas e
acondicionadas em temperatura ambiente.
Decorridas 24 horas, procedeu-se ao exame de
todas as emulses, tomando-se como ponto de referncia
aquela que apresentou-se mais estvel, isto , que no tinha
aspecto grumoso nem separao de fases e com alto ndice
de cremeao. Segundo Krishna et al., 1998, a estabilidade
pode ser mensurada pelo porcentual de cremeao.
O ndice de cremeao foi determinado pela
seguinte equao: C = 100 x (Vs/Vt), onde Vt corresponde
ao volume total da amostra; Vs corresponde ao volume da
fase emulsionada. De acordo com a equao, quanto maior
o valor de C, maior a estabilidade do sistema.
Preparao das emulses
As emulses em estudo foram feitas empregando
leo de oliva (10% p/p), BHT (0,1% p/p) como antioxidante,
lcool olelico etoxilado 3EO (1,8% p/p) e Tween 80 (3,2%
p/p) como emulsionantes, Carbopol 940 (0,4% p/p) e
hidroxietilcelulose (0,2% p/p) como agentes de viscosidade
e promotores da estabilidade, metilparabeno (0,18%
p/p) e propilparabeno 0,02% (p/p) como conservantes
microbiolgicos. As emulses foram preparadas
aquecendo-se as fases separadamente temperatura no
superior a 70C. Na fase aquosa solubilizou-se a glicerina,
metilparabeno, Tween 80. Dipersou-se ainda nesta fase o
Hidroxietilcelulose e o Carbopol 940, seguido do ajuste do
pH (pH 5,5) com 0,5 mL de uma soluo de NaOH 20%
p/v. A este sistema verteu-se a fase oleosa, submetendo-o
agitao a 15000 rpm (Ultra-Turrax T25) por 5 minutos.

MTODOS

Estudo de estabilidade das emulses

Determinao do Equilbrio-Hidroflico-Lipoflico
(EHL) do leo de oliva

O estudo de estabilidade foi baseado no mtodo

proposto no Guia de Estabilidade sugerido pela Agncia
Nacional de Vigilncia Sanitria (Brasil, 2004), onde
as amostras devem ser armazenadas em condies que
acelerem mudanas passveis de ocorrer, permitindo,
assim, obter informaes sobre a estabilidade do produto
em menor tempo possvel.

Para o presente estudo, empregaram-se tensoativos

com cadeias graxas e EHLs (Tween 80, EHL= 15; lcool
Cetoestearlico Etoxilado 20 OE, EHL=15,4; lcool
Olelico Etoxilado 3OE, EHL= 6,6; lcool Laurlico
Etoxilado 2OE , EHL=6,2) distintos. Para a associao
de tensoativos, teve-se como critrio a polaridade dos
mesmos, empregando um com caractersticas hidroflicas
e outro com caractersticas lipoflicas.
Para determinar o EHL do leo de oliva, preparouse com ele uma srie de emulses contendo 5g de um par
de emulsionantes (monooleato de polioxietilenossorbitano
(Tween 80)/ lcool Olelico Etoxilado 3OE; monooleato de
264

Estabilidade preliminar das emulses

As amostras (triplicatas) foram acondicionadas em
frascos plsticos com tampa, a fim de garantir boa vedao.
O volume total do frasco no foi completado para permitir
possveis trocas gasosas. A durao do estudo foi de 15 dias.
As amostras foram submetidas ao aquecimento em estufa
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Emulses leo de oliva/gua: estabilidade

50 2C, ao resfriamento em refrigeradores -5 2C,

ciclos alternados de resfriamento e aquecimento (ciclos de
24 horas 50 2C, e 24 horas -5 2C), exposio a
luz solar e temperatura ambiente sob ao abrigo da luz. As
amostras foram analisadas no tempo de 24 horas e aos 7 e
15 dias, quanto s caractersticas organolpticas (aspecto,
cor e odor), ao pH, viscosidade, bem como separao de
fase por centrifugao.
Estabilidade acelerada das emulses
As amostras foram acondicionadas nas condies
descritas anteriormente. A durao do estudo foi de 90
dias. As amostras (triplicadas) foram submetidas ao
aquecimento em estufa 50 2C, ao resfriamento em
refrigeradores -5 2C, temperatura ambiente sob ao
abrigo da luz. As amostras foram analisadas no tempo de
24 horas e aos 15, 60 e 90 dias. Os parmetros avaliados
foram: caractersticas organolpticas (aspecto, cor e odor),
separao de fase por centrifugao, pH, viscosidade,
distribuio de tamanho de partcula e potencial zeta.
Ensaios Organolpticos
Observaram-se visualmente as caractersticas
das amostras, verificando se ocorreram modificaes
macroscpicas, tais como: separao de fase, formao de
grumos, precipitados; bem como a cor e o odor em relao
ao padro estabelecido.
Ensaios Fsico-Qumicos
Centrifugao
Em tubo de ensaio cnico graduado para centrfuga
(Fanem LtdaMod. 206 R, Excelsa BABY II440 watts) foi
adicionado 1,0g de cada amostra, pesado em balana semianaltica (Gehaka, Mod. BG 4000) e submetido ao ciclo
de 3500 rpm (863g) durante trinta minutos temperatura
ambiente.

necessrio para que no houvesse incorporao de ar na

amostra. O spindlle foi incorporado amostra de modo
a evitar a formao de bolhas de ar em contato com a
superfcie do mesmo, para no ocasionar erros na leitura.
As leituras foram realizadas nas velocidades de rotaes
de 0,3; 0,6; 1,5; 3,0; 6,0; 12,0; 30,0 e 60,0 rpm de modo
crescente e decrescente temperatura de 25 1C. Os
resultados correspondem mdia de trs leituras com os
respectivos desvios padro.
Determinao do potencial zeta
O potencial zeta foi determinado pela mensurao
da mobilidade eletrofortica da partcula dispersa em
um campo eltrico. Cem miligramas das amostras em
estudo foram diludos em 5 mL de gua de deionizada,
homogeneizados at completa disperso e submetidos
anlise para a determinao do potencial zeta (Malvern
Nano ZS). Os resultados correspondem mdia de trs
leituras com os respectivos desvios padro.
Anlise da distribuio de tamanho de partcula
A distribuio de tamanho de partcula foi
determinada pela tcnica de diperso de luz laser, em que
cem miligramas das amostras em estudo foram diludos em
5 mL de gua de deionizada, homogeneizados at completa
disperso e submetidos anlise para a determinao da
distribuio do tamanho de partculas (Beckman Coulter
LS 13/320). Os resultados correspondem mdia de trs
leituras.
Anlise Estatstica
Os resultados dos ensaios de estabilidade foram
submetidos ao teste estatstico ANOVA Post test: Tukey.
As anlises estatsticas foram realizadas com o programa
GraphPad Instat, Version 3.01, 32 bit for Win95/NT.
RESULTADOS

Determinao de pH

Determinao do EHL

A determinao do pH foi baseada no mtodo

proposto por Borghetti & Knorst (2006), utilizandose de amostras diludas em gua destilada (1:10 p/v),
homogeneizadas e submetidas leitura, temperatura de
25C 1, em peagmetro (Micronal - modelo B 474),
previamente calibrado com solues de pH 7,0 e 4,0. Os
resultados correspondem a mdia de trs determinaes
com os respectivos desvios padro.

Os EHLs e os respectivos ndices de cremeao das

emulses leo de oliva/gua na presena dos tensoativos
lcool olelico etoxilado/Tween 80 encontram-se na
Tabela 1.

Determinao da viscosidade

IC 87% 96% 96% 96% 98% 83% 81% 80%

EHL = Equilbrio hidroflico-lipoflico

A viscosidade foi determinada utilizando-se

o viscosmetro de Brookfield, srie LV. O spindle
empregado foi o de n4.
Para a realizao da leitura, as amostras foram
acondicionadas em tubo de ensaio, tomando-se o cuidado

As associaes de agentes emulsionantes, todos

com o mesmo EHL (EHL 12), demostraram um ndice
de cremeao equivalente 96%, 94% e 79% para as
associaes Tween 80/lcool laurlico etoxilado 2OE, lcool
cetoestearlico etoxilado 20OE/lcool olelico etoxilado

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Tabela 1 Os EHLs e o respectivos ndices de cremeao (IC) das

emulses leo de oliva/gua na presena dos tensoativos lcool
olelico etoxilado/Tween 80, aps 24 hs da preparao.
EHL 8 9 10 11 12 13 14 15

265

Emulses leo de oliva/gua: estabilidade

3OE e lcool cetoestearlico etoxilado 20OE/lcool laurlico

etoxilado 2OE, respectivamente.

Tabela 3 - Valores dos pHs das emulses leo de oliva/gua

recentemente obtidas e armazenadas sob condies e perodos
diversos.

Estudo de estabilidade preliminar

A emulso com estabilidade mxima nos estudos
de EHL, acrescida dos auxiliares de emulsificao, foi
submetida aos estudos preliminares de estabilidade, por
um perodo de 15 dias (Brasil, 2004). As amostras foram
examinadas macroscopicamente e submetidas s anlises de
pH, viscosidade e centrifugao. Os resultados encontramse na Tabela 2.
Tabela 2 - Resultados dos testes preliminares de estabilidade das
emulses leo de oliva/gua com a associao de tensoativos no
inicos (Tween 80/lcool olelico etoxilado 3OE).
Aspecto*

pH
1 Dia

Controle

5,40(0,14)

Viscosidade
15Dia
5,51(0,01)

Estufa

5,33(0,05)

5,45(0,05)

Ciclo

5,31(0,02)

5,47(0,07)

Refrigerador
Luz solar

N
N

5,38(0,04)
5,44(0,10)

5,42(0,07)
5,48(0,04)

Centrifugao

1Dia

15Dia

140333,30

130000,00

(24090,11)

(12288,21)

131333,30

166333,30

(21197,48)

(16041,61)

144333,30

148333,30

(9712,53)

(9504,38)

142666,70

131333,30

(7023,77)

(8326,66)

138666,70

137666,70

(13428,82)

(3511,88)

1Dia

15Dia

Controle

1 dia

15 dia

60 dia

90 dia

5,490 (0,031)

5,565 (0,015)

5,525(0,095)

5,533(0,095)

Estufa

5,633 (0,040)

5,520(0,240)

5,220(0,028)

Refrigerador

5,583(0,033)

5,487(0,152)

5,370(0,057)

Controle (armazenamento temperatura ambiente sob ao abrigo da luz; Estufa (armazenamento

em estufa 50C); Refrigerador (armazenamento em refrigerador -5C).

Distribuio do tamanho de partculas

O perfil de distribuio do tamanho de partculas das
emulses recentemente obtidas e das emulses armazenadas
sob condies e perodos diversos est representado na
Figura 1.

Viscosidade referente tenso de cisalhamento de 0,025 s-1; Controle (amostras protegidas da luz
e mantidas temperatura ambiente); Estufa (amostras mantidas temperatura de 50C); Ciclos
(amostras submetidas por perodos alternados temperatura de -5C e 50C), Refrigerador (amostras
mantidas temperatura de -5C), Luz solar (amostras expostas luz solar).
* refere s propriedades organolpticas: cor, odor e aspecto.
N- normal.

Estudo de estabilidade acelerada

Diante da estabilidade apresentada nos estudos
preliminares de estabilidade, a emulso foi submetida aos
estudos de estabilidade acelerada, por uma perodo de 90
dias (Brasil, 2004). As amostras foram examinadas quanto
ao aspecto, cor e odor; e submetidas s anlises de pH,
centrifugao, viscosidade, potencial zeta e distribuio de
tamanho de partcula.
Ensaios Organolpticos
As emulses submetidas aos ensaios de estabilidade
demonstraram semelhana, no que se refere cor, odor e
aparncia, em relao s emulses recentemente elaboradas,
independente das condies e perodos de armazenamento.
Centrifugao
As emulses submetidas aos ensaios de estabilidade
mantiveram-se estveis nos ensaios de centrifugao, no
apresentando cremeao, to pouco separao de fase.
Determinao do pH
O pH das emulses em estudo foi ajustado para o pH
5,49 0,03 e acompanhado durante os estudos de estabilidade.
Os valores obtidos esto expressos na Tabela 3.

266

Figura 1 - Distribuio de tamanho de partculas das emulses

leo de oliva/gua armazenadas sob condies e perodos
diversos. Controle T0 = emulses recentemente obtidas. A.
emulses armazenadas temperatura ambiente por 15, 60 e 90
dias. B. emulses armazenadas em estufa 50C por 15, 60 e 90
dias. C. emulses armazenadas em refrigerador -5C por 15, 60
e 90 dias.

Rev Cinc Farm Bsica Apl., 2009;30(3):263-271

Emulses leo de oliva/gua: estabilidade

diferentes tenses de cisalhamento, o que permitiu a

construo do reograma representado na Figura 2. A Tabela
4 apresenta os valores de viscosidade referente tenso
de cisalhamento de 0,05 s-1 das emulses leo de oliva/
gua recentemente obtidas e armazenadas sob condies e
perodos diversos.
Potencial Zeta
A Tabela 5 apresenta os valores do potencial zeta
das emulses leo de oliva/gua recentemente obtidas e
armazenadas sob condies e perodos diversos.
Tabela 5 - Valores do potencial zeta das emulses leo de oliva/
gua recentemente obtidas e armazenadas sob condies e
perodos diversos.
1 dia

15 dia

60 dia

90 dia

Controle

-36,40,4 mV

-40,20,8 mV

-52,12,8 mV

-49,60,6 mV

Estufa

-49,50,5 mV

-24,02,8 mV

Refrigerador

-51,72,9 mV

-22,80,7 mV

Controle (amostras protegidas da luz e mantidas temperatura ambiente); Estufa (amostras mantidas
temperatura de 50C); Ciclos (amostras submetidas por perodos alternados temperatura de
-5C e 50C), Refrigerador (amostras mantidas temperatura de -5C).

DISCUSSO
Emulses fisicamente estveis so melhores
preparadas por meio da presena de uma camada
condensada de emulsionante na interface leo/gua; e, os
filmes interfaciais complexos, obtidos mediante a mistura
de um agente emulsionante solvel em gua com outro
solvel em leo, permitem obter emulses com resultados
mais satisfatrios (Aulton, 2005).
O mtodo de equilbrio hidroflico-lipoflico (EHL)
tem se tornado uma ferramenta til na escolha do agente
emulsionante para uma determinada fase oleosa. O mtodo
parte do princpio que a emulsificao adequada se d
quando o agente emulsificante possui EHL igual ao da fase
oleosa a ser emulsificada. Assim, preparou-se uma srie de
emulses contendo 85% (p/p) de fase aquosa, 10% (p/p)
de leo de oliva e 5% (p/p) de uma mistura de tensoativos
(Tween 80/lcool olelico etoxilado 3OE; Tween 80/lcool
laurlico etoxilado 2OE; lcool cetoestearlico etoxilado 20
OE/lcool olelico etoxilado 3OE; lcool cetoestearlico
etoxilado 20OE/lcool laurlico etoxilado 2OE). Os

Figura 2 - Reogramas das emulses leo de oliva/gua armazenadas

sob condies e perodos diversos. Controle T0 = emulses
recentemente obtidas. A. emulses armazenadas temperatura
ambiente por 15, 60 e 90 dias. B. emulses armazenadas em
estufa 50C por 15, 60 e 90 dias. C. emulses armazenadas em
refrigerador -5C por 15, 60 e 90 dias.

Determinao da Viscosidade
Determinou-se a viscosidade das amostras
armazenadas sob condies e perodos diversos em

Tabela 4 Valores de viscosidade (mPa.s) das emulses leo de oliva/gua recentemente obtidas e armazenadas e condies e perodos
diversos.
T0

Controle

Estufa

Refrigerador

T15

T60

T90

Mdia

DP

Mdia

DP

Mdia

DP

Mdia

DP

ida

72000,00

8000,00

66500,00

6363,96

64666,67

5965,17

71500,00

4596,19

volta

72666,67

8020,80

67500,00

5656,85

66166,67

6601,76

88500,00

13332,29

ida

70500,00

2179,44

142666,67

13428,82

159500,00

14256,57

157666,67

38135,72

volta

69833,33

1607,27

138666,67

17953,64

159666,67

13530,82

157000,00

39281,03

ida

74000,00

5656,85

74833,33

6525,59

71000,00

5267,82

69666,67

8519,58

volta

67333,33

12583,05

73666,67

9305,016

69666,67

5131,60

68000,00

7549,83

Viscosidade referente tenso de cisalhamento de 0,05 s-1; Controle (amostras protegidas da luz e mantidas temperatura ambiente); Estufa (amostras mantidas temperatura de 50C); Ciclos (amostras
submetidas por perodos alternados temperatura de -5C e 50C), Refrigerador (amostras mantidas temperatura de -5C). T0, T15, T60 e T90 correspondem ao 1, 15, 60 e 90 dia de armazenamento,
respectivamente. Os resultados correspondem mdia de trs leituras com os respectivos desvios padro.

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Emulses leo de oliva/gua: estabilidade

tensoativos foram associados em propores variveis,

de modo a originarem valores definidos, mas escalonados
de EHL (Prista et al., 1995). Os resultados (Tabela 1)
demonstram que a emulso (a base de leo de oliva) mais
estvel corresponde ao ndice de cremeao de 98%, cujo
EHL igual a 12. O valor de EHL do presente estudo se
diferencia do obtido por Gullapppali & Sheth (1999), os
quais apresentam um valor igual a 10. Segundo Gennaro
(1999), a presena ou ausncia de qualquer polaridade no
material a ser emulsificado pode afetar a polaridade exigida
do agente emulsificante. O leo de oliva contitudos por
triglicerdeos. A hidrlise destes compostos pode ocasionar
a formao de cidos graxos livres (Driscoll et al., 2001),
conferindo acidez ao leo; modificando, consequentemente,
as propriedades fsico-qumicas do mesmo. Considerando
que o ndice de acidez do leo de oliva empregado no
presente estudo de 1%, logo a polaridade do presente
leo requer emulsificantes com polaridades especficas,
justificando, assim, os distintos valores de EHLs observados.
Entretanto, os resultados obtidos esto condizentes com a
literatura, no que se refere ao EHL da famlia dos leos
vegetais, que est compreendido entre 7 e 12 (Prista et al.,
1995).
As associaes de agentes emulsionantes,
todos com o mesmo EHL, resultam em emulses com
estabilidades distintas. As misturas, que contm ao menos
um emulsificante com cadeia de cido graxo insaturado
similar ao leo de oliva (o qual possui em sua constituio
principalmente cido olico (75%), bem como, cido
linolico, cido esterico, cido palmtico) produziram
emulses mais estveis, demonstrando que a similaridade
estrutural entre os componentes da fase oleosa e os agentes
emulsificantes essencial para a estabilidade da emulso
(Petrowski, 1976; Garti & Remon, 1984; Gullapalli &
Sheth, 1999; Aulton, 2005).
Os colides hidroflicos tm sido freqentemente
utilizados como auxiliares de emulsificao em emulses
O/A, pois formam camadas multimoleculares ao redor das
gotculas dispersas, bem como aumentam a viscosidade da
fase contnua, retardando a separao gravitacional da fase
dispersa, promovendo, assim, a estabilidade (Klinkesorn et
al., 2004; Aulton, 2005). A estabilidade pode ser tambm
favorecida pelo complexo formado entre o agente de
viscosidade hidroflico e tensoativo hidroflico e pela
interao do tensoativo hidroflico com a fase oleosa.
Segundo Gullapalli & Sheth (1997), a metilcelulose
melhora a estabilidade de emulses de leos polares de
forma mais efetiva que leos apolares, em consequncia da
complexao da metilcelulose com o tensoativo hidroflico
no inico e da interao entre o leo polar com a cadeia
apolar do tensoativo hidroflico no inico.
Assim, visando otimizar a estabilidade dos sistemas,
incorporou-se emulso com estabilidade mxima
(monoleato de polioxietilenossorbitano (Tween 80) e lcool
olelico etoxilado 3OE), os colides hidroflicos constitudos
de polmeros do cido carboxivinlico (Carbopol 940) e de
derivados da celulose (hidroxietilcelulose), como auxiliares
de emulsificao. A adio de base inorgnica (soluo de
NaOH 20% p/v) disperso aquosa dos polmeros, at a
obteno de pH 5,5, otimizou o potencial de viscosidade do
polmero do cido carboxivinlico.
De acordo com a literatura, em uma emulso estvel
as gotculas dispersas mantm suas caractersticas iniciais,
268

e permanecem uniformemente distribudas por toda a fase

contnua. Entretanto, podem ocorrer vrios tipos de desvios
deste comportamento, levando cremeao, floculao
ou separao.
Logo, um estudo aprofundado da estabilidade das
emulses foi conduzido, objetivando antever possveis
alteraes das amostras ao armazen-las em condies
que acelerem mudanas passveis de ocorrer; permitindo,
assim, obter informaes sobre a estabilidade do produto
em menor tempo possvel (Brasil, 2004).
A literatura apresenta diferentes mtodos
objetivando caracterizao da estabilidade das emulses,
dentro os quais podemos citar: exame macroscpico, pH,
tamanho de partcula, centrifugao, viscosidade, potencial
zeta e armazenamento sob condies adversas; que podem
mostrar uma indicao rpida do grau de instabilidade.
A emulso com estabilidade mxima nos estudos
de EHL, acrescida dos auxiliares de emulsificao, foi
submetida aos estudos preliminares de estabilidade, por
um perodo de 15 dias (Brasil, 2004). Para caracterizao
da estabilidade, as amostras foram examinadas
macroscopicamente e submetidas s anlises de pH,
viscosidade e centrifugao. Os resultados (Tabela 2) no
demonstam alteraes nos parametros avaliados.
Diante da estabilidade demonstrada nos estudos
preliminares de estabilidade, a emulso foi submetida aos
estudos de estabilidade acelerada, por uma perodo de 90
dias (Brasil, 2004). Para caracterizao da estabilidade, as
amostras foram examinadas quanto ao aspecto, cor e odor;
e submetidas s anlises de pH, centrifugao, viscosidade,
potencial zeta e distribuio de tamanho de partcula.
Os ensaios organolpticos permitiram avaliar, de
imediato, o estado em que se encontravam as amostras em
estudo por meio de anlises comparativas, com objetivo de
verificar alteraes (Brasil, 2004), no que se refere cor,
odor e aparncia; constatando semelhanas das emulses
submetidas aos ensaios de estabilidade em relao s
emulses recentemente elaboradas, independente das
condies e perodos de armazenamento.
Os ensaios de centrifugao das emulses
armazenadas em condies e perodos diversos, objetivando
verificar possveis instabilidade, como: separao de fase,
coalescncia, entre outras, pelo aumento da mobilidade
das partculas em consequncia do aumento da fora da
gravidade (Brasil, 2004); demonstraram estveis, no
apresentando cremeao, to pouco separao de fase.
O pH de uma formulao deve garantir a
estabilidade dos ingredientes da formulao, sua eficcia
e segurana (Brasil, 2004), bem como ser compatvel com
os fluidos biolgicos de acordo com a via de administrao
pretendida. A maior estabilidade dos sistemas d-se
quando estes so mantidos dentro de uma pequena
variao de pH. Desta forma, a diminuio progressiva
da estabilidade d-se quando o pH se afasta de seu limite
timo (Gennaro,1999).
O pH das emulses em estudo foi ajustado, com
hidrxido de sdio 20% p/v, para o pH 5,49 0,03,
visando adequar o produto via de administrao, bem
como otimizar a viscosidade do polmero derivado do
cido carboxivinlico; e acompanhado durante os estudos
de estabilidade. Os resultados (Tabela 3) demonstram
que as emulses armazenadas em perodos (15, 60 e 90
dias) e em condies diversas de temperatura (ambiente,
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Emulses leo de oliva/gua: estabilidade

50 e -5C), no apresentam variao significativa de pH,

quando comparadas com o pH das emulses recentemente
obtidas (p>0,05). Entretanto, observa-se uma ligeira
diminuio do pH dos sistemas armazenados em estufas
e em refrigeradores, sendo indicativos de instabilidade.
Segundo Masmoudi et al. (2005), a diminuio do pH pode
representar uma oxidao da fase oleosa com formao
de hidroperxidos ou mesmo a hidrlise de triglicerdeos
levando formao de cidos graxos (Masmoudi et al.,
2005; Driscoll et al., 2001).
Segundo Aulton (2005), a instabilidade de uma
emulso resulta de qualquer processo que cause um
progressivo aumento do tamanho das partculas, e um
alargamento na distribuio de tamanhos, de forma que,
por fim as partculas dispersas podem tornar-se to grandes
a ponto de separar-se como lquido livre. Logo, um mtodo
preciso para a determinao da estabilidade avaliar o
tamanho dos glbulos com tempo.
A anlise do perfil de distribuio do tamanho de
partculas das emulses recentemente obtidas demonstra
uma distribuio monomodal, sugerindo uma distribuio
uniforme de partculas (Figura 1). Comportamento
semelhante apresentam as amostras armazenadas
temperatura ambiente e protegidas da luz por 60 e 90
dias. Entretanto, as amostras armazenadas por 60 e 90
dias em estufa 50 ou em refrigerador -5C apresentam
distribuio bimodal, caracterizando instabilidade destas
emulses sob estas condies de armazenamento.
A avaliao da viscosidade ajuda a determinar se
um produto apresenta a consistncia ou fluidez apropriada
e pode indicar se a estabilidade adequada, ou seja, fornece
indicao do comportamento do produto ao longo do tempo
(Brasil, 2004).
A reologia da emulso uma manifestao direta
da interao das foras que ocorrem no sistema. As
instabilidades provenientes da variao no tamanho e
no nmero de partculas e na orientao ou migrao do
emulsionante durante um perodo de tempo podem ser
detectadas por meio de alteraes na viscosidade aparente
do produto (Logaraj et al., 2008; Mostefa et al., 2006;
Aulton, 2005; Tadros,1999; 2004).
A avaliao do comportamento reolgico em funo
da temperatura fundamental para obter informaes da
estabilidade fsica e consistncia do produto. Segundo
Aulton, (2005), a solubilidade de emulsionantes no-inicos
muda com o aumento da temperatura e temperaturas acima
de 70C destri a maioria das emulses. Por outro lado, o
gelo formado a baixas temperaturas provoca a quebra das
emulses por romper o filme interfacial.
As Figuras (Figura 2) representadas demonstram que
as amostras em estudo apresentam fluxo pseudoplstico,
com a viscosidade diminuindo com o aumento da tenso de
cisalhamento aplicada.

Este tipo de comportamento desejado em formulaes

farmacuticas. necessrio ter uma viscosidade aparente
elevada a baixas tenses de cisalhamento para impedir a
mobilidade da fase dispersa, sendo importante que apresentem
fluxo livre quando agitados, apresentando baixa viscosidade
frente a altas tenses de cisalhamento, sendo essas alteraes
reversveis aps certo tempo de repouso, retardando a
coalescncia ou a cremeao (Aulton, 2005).

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Os estudos reolgicos das emulses, que

foram submetidas s condies e perodos diversos de
armazenamento, demonstram que o comportamento
reolgico pseudoplstico no se modifica. Entretanto,
observa-se que a viscosidade se altera dependendo destas
condies de armazenamento (Tabela 4). As amostras
armazenadas por 15, 60 ou 90 dias temperatura ambiente
ao abrigo da luz, ou sob refrigerao -5C, no apresentam
alteraes significativas em relao s recentemente,obtidas.
Entretanto, as emulses em estudo apresentam variaes
representativas da viscosidade quando armazenadas
temperatura de 50C. A viscosidade das amostras aumenta
quando armazenadas sob estas condies. Observouse um aumento da viscosidade (referente viscosidade
de ida), em relao s emulses recentemente obtidas,
de aproximadamente 2,0 (p<0,01), 2,2 (p<0,001) e 2,2
(p<0,001) vezes, para a tenso de cisalhamento de 0,05
s-1, das amostras armazenadas 50C por 15, 60 e 90 dias,
respectivamente. Aumento semelhante da viscosidade
foi observado por Leonardi et al. (2000) e Guaratini et
al.(2006), os quais atriburam tal observao evaporao
da gua das formulaes.
Os agentes emulsionantes atuam como uma barreira
alterando a razo de coalescncia da fase dispersa, ou
criam um filme interfacial que produz foras eletrostticas
repulsivas entre as fases dispersas. Com o uso de agentes
emulsionantes inico, uma monocamada adsorve em volta da
fase dispersa. A carga da superfcie influncia a distribuio
de ons no meio aquoso. ons de carga oposta superfcie
so atrados em direo superfcie (denominados contraons), e ons de carga de mesmo sinal so repelidos para
longe da superfcie (denominados co-ons), resultando na
formao de uma dupla camada eltrica em volta da fase
dispersa. A dupla camada consiste da superfcie carregada
e de um excesso de neutralizante de contra-ons sobre coons, distribudos de uma maneira difusa no meio aquoso.
Se a concentrao do contra-on baixa, a espessura da
dupla camada larga, a fora repulsiva alta, fazendo com
que as fases dispersas se repelem entre si. Logo, o potencial
produzido pela dupla camada ocasiona um efeito repulsivo
entre as gotculas da fase dispersa, evitando a coalescncia
(Aulton, 2005; Lieberman et al., 1988; 1989).
A diferena de potencial entre a camada de ons
prxima superfcie da partcula e a regio eletroneutra da
soluo denominada potencial zeta e pode ser mensurada
por microeletroforese. Quando o potencial zeta alto, as
foras repulsivas predominam em relao s atrativas de
London, fazendo com as gotculas fiquem dispersas no
sistema. Por outro lado, quando o potencial zeta baixo,
as foras atrativas predominam em relao s repulsivas,
favorecendo a aproximao das partculas, podendo resultar
em instabilidade da preparao (Aulton, 2005; Lieberman
et al., 1988; 1989).
O uso de tensoativo no inico resulta tambm na
formao da dupla camada eltrica ao redor da gotcula
dispersa. Segunda a literatura, tal observao se deve ao
pH e fora inica da fase aquosa (Ahmad et al.,1996;
Ho & Ahmad, 1999; Hsu & Nacu, 2003). A carga eltrica
mensurada em emulses estabilizadas com tensoativos no
inicos tem sido atribuda adsoro dos ons H3O+ (em pH
baixo) ou OH- (em pH alto) da gua (Ho & Ahmad,1999).

269

Emulses leo de oliva/gua: estabilidade

A fim de caracterizar o grau de repulso das gotculas

dispersas, as emulses de leo de oliva/gua estabilizadas
com a associao de tensoativos no inicos (Tween 80/
lcool olelico etoxilado 3OE) foram analisadas quanto
ao potencial zeta. Os resultados apresentados na Tabela
5 mostram que as emulses armazenadas em condies
diversas apresentam diferenas absolutas do potencial zeta
maiores que 10 mV. De acordo com Roland et al. (2003),
quando a diferena absoluta do potencial zeta for ao menos
de 10 mV, pode-se predizer que amostras apresentam
estabilidades distintas.
Os resultados demonstram, ainda, que houve uma
reduo da magnitude do potencial zeta nas emulses
armazenadas em estufa 50C ou sob refrigerao -5C
por 90 dias, em relao s recentemente obtidas.
Segundo a literatura, os sistemas so considerados
estveis quando possuem um valor absoluto maior que 25
mV (Lieberman et al., 1989). Assim, quando o potencial
zeta relativamente alto, maior que 25 mV (valor
absoluto), as foras repulsivas predominam em relao s
atrativas de London, logo o sistema est disperso. Quando
o potencial zeta relativamente baixo, menor que 25 mV
(valor absoluto), as foras atrativas predominam em relao
s repulsivas, as partculas se aproximam, floculando
(Lieberman et al., 1989), podendo levar separao de
fases.
Logo, as emulses armazenadas em estufa 50C
ou sob refrigerao -5C por 90 dias apresentam valores
de potencial zeta fora dos limites considerados estveis.
Segundo a literatura, o pH, bem como a fora inica
podem interferir no potencial zeta (Ahmad et al.,1996; Ho
& Ahmad, 1999; Hsu & Nacu, 2003). Como previamente
mencionado, os pHs dos sistemas foram ajustados
para 5,490 (0,031), antes dos estudos de estabilidade,
empregando 0,5 mL da soluo de hidrxido de sdio a
20% p/v. Entretanto os resultados demonstram que os
pHs dos sistemas submetidos ao aquecimento em estufa
50C ou a refrigerao -5C sofreram uma ligeira
reduo, possivelmente decorrente da degradao de
algum componente da formulao, justificando, assim, a
reduo do potencial zeta. Alia-se reduo do potencial
zeta, a diminuio da viscosidade aparente e o aumento
da motilidade cintica nos sistemas armazenados sob
aquecimento; e cristalizao de compostos da formulao
nos sistemas armazenados sob aquecimento e refrigerao.
O aumento da temperatura leva diminuio da viscosidade
aparente e ao aumento da motilidade cintica, tanto da
fase dispersa, quanto do prprio agente emulsionante na
interface leo/gua, fazendo com que a barreira energtica
seja facilmente vencida, aumentado, assim, o nmero de
colises entre as gotculas (Aulton, 2005). A cristalizao
de componentes da formulao, em conseqncia da
refrigerao, ou da volatilizao do solvente do sistema,
exerce presses anmalas sobre a fase dispersa e sobre
a camada emulsionante, ou ainda leva concentrao de
eletrlitos dissolvidos, afetando a densidade de cargas das
gotculas (Aulton, 2005; Cortes-Munz & Chevalier-Lucia;
Dumay, 2009). Estes efeitos podem levar desestruturao
do meio, conduzindo instabilidade das preparaes, que
pode ser observada pela distribuio bimodal de tamanho
da partcula.

270

Por outro lado, os sistemas armazenados

temperatura ambiente em perodos diversos e protegidos
da luz, no demonstram variao de pH e apresentam um
potencial zeta favorvel (menor que -25 mV) , embora
varivel, possivelmente oriundo da acomodao dos
sistemas at o estabelecimento do equilbrio, caracterstica,
esta, que pode ser evidenciada pela distribuio de tamanho
de partcula.
Diante resultados de estabilidade apresentados,
pode-se concluir que as emulses leo de oliva/gua
mantm-se estveis quando armazenadas temperatura
ambiente e protegidas da luz, empregando a associao de
monooleato de polioxietilenossorbitano e lcool olelico
etoxilado 3OE (EHL 12), como agentes emulsivos, que
possuem similaridade estrutural com a fase oleosa, e
carbopol 940 e hidroxietilcelulose, como agentes de
viscosidade e auxiliares da emulsificao.
AGRADECIMENTOS
Universidade de Uberaba - UNIUBE e Faculdade
de Cincias Farmacuticas de Ribeiro Preto, em especial
Profa. Dra. Maria Vitria Lopes Badra Bentley e ao
Farmacutico Jos Orestes Del Ciampo pelo consentimento
e a realizao, respectivamente, das anlises de potencial
zeta e tamanho de partcula.
ABSTRACT
Development of olive oil-in-water emulsions:
assessment of physical stability

Olive oil-in-water emulsions, developed with non-ionic

emulsifiers, were assessed with regard to physical
stability. Emulsions were prepared with two different
emulsifiers, one of which was hydrophilic and the other
lipophilic, in various proportions. To improve emulsion
stability, auxiliary emulsifiers were added to the stablest
emulsions and stability studies were carried out, in
which the samples were stored for different periods and
under various conditions. To test emulsion stability, the
samples were examined macroscopically and various
physicochemical properties, such as pH, centrifugation,
viscosity, zeta potential and particle size distribution,
were assessed. The results showed that olive oil-in-water
emulsions are organoleptically and physicochemically
stable, when stored at room temperature and protected
from the light. Out of the emulsions developed, the
most stable was based on an emulsifier blend that
resulted in a hydrophilic-lipophilic balance (HLB) of
12. A blend of emulsifiers with unsaturated fatty acids
of similar chain length to that of olive oil produced the
stablest emulsions, showing that structural similarity
between the hydrocarbon moieties of the oil phase
and the surfactant is essential to successful emulsion
stabilization.
Keywords: O/W emulsion. Stability. Olive oil. HLB. Nonionic emulsifier.

Rev Cinc Farm Bsica Apl., 2009;30(3):263-271

Emulses leo de oliva/gua: estabilidade

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