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NTC- 4967
GRASAS
Y
ACEITES
ANIMALES
Y
VEHETALES.
CROMATOGRAFIA DE GASES DE ESTERES METILICOS DE ACIDOS
GRASOS.
PARTE 2: PREPARACION DE ESTERES METLICOS DE ACIDOS GRASOS
1. OBJETO
Esta parte de la norma especfica los mtodos de preparacin de esteres
metlicos de cidos grasos. Incluye mtodos para preparar esteres metlicos
de cidos grasos. A partir de grasas animales y vegetales, cidos grasos y
jabones. Con el fin de cumplir todos los requisitos, se especifican cuatro
mtodos de metilacin, de la siguiente manera:
a) Un procedimiento de transmetilacin rpida, en condiciones alcalinas;
b) Un procedimiento de transmetilacin general, en condiciones alcalinas
y acidas consecutivas;
c) Un procedimiento de transmetilacin BF 3(trifluoruro de boro), y
d) Un procedimiento alternativo utilizando transmetilacin de glicridos
catalizado con cido.
Los esteres metlicos producidos de este modo se usan en varios
procedimientos analticos que requieren de tales derivados, por ejemplo,
la cromatografa de fase gaseosa-liquida GLC (por sus siglas en ingles
Gas-liquidChromatography), la cromatografa en capa fina TLC (por sus
siglas en ingles Thin-layerChromatography) y la espectrometra
infrarroja IR (por sus siglas en inglesInfraredSpectrometry).
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
El siguiente documento normativo referenciado es indispensable para la
aplicacin de este documento normativo. Para referencias fechadas, se
aplica nicamente la edicin citada. Para referencias no fechadas, se aplica
la ltima edicin del documento normativo referenciado (incluida cualquier
correccin).
NTC 5033, Grasas y aceites animales y vegetales. Preparacin de la
muestra para ensayo (ISO 661)
3. REACCIONES
4.2.2 Principio
Los esteres metlicos son los formados por transmetilacin con
hidrxido de potasio metanlico. Los cidos grasos libres no se
esterifican mediante este procedimiento.
4.2.3 Reactivos
Se utilizan nicamente reactivos con grado analtico reconocido, a
menos que se especifique de manera diferente.
Los reactivos no deben producir picos que interfieren con aquellos
de los esteres metlicos de los cidos grasos durante la GLC. Todo
4.2.3.5
4.2.3.6
4.2.3.7
4.2.3.8
4.2.4 Equipos
Equipo comn de laboratorio y, en particular, el siguiente:
4.2.4.1
4.2.4.2
4.2.4.3
4.2.4.4
4.2.5 Procedimiento
En un tubo de ensayo con tapa rosca de 10 ml (vase el numeral
4.2.4.1) se pesan 0,1 g aproximadamente de la muestra de
ensayo (vase el numeral 4.1). si se van determinar los cidos
grasos cuantitativamente con GLC usando estndares internos, es
esencial pesar la porcin de ensayo con precisin, es decir, con
aproximacin de 0,1 mg. Los resultados se expresan como
fracciones de masa, en porcentaje del cido graso en la grasa o el
aceite. Estos resultados no necesariamente concuerdan con los
resultados que se obtienen mediante normalizacin interna.
Se aaden (vase el numeral 4.24.2) 2 ml de isooctano (vase el
numeral 4.2.3.4) y se agita. En algunos casos, puede que no sea
posible usar el tamao especificado de la muestra de 0,1 g, en
cuyo caso la cantidad de isooctano aadida a la porcin de
ensayo se debera modificar proporcionalmente.
Para determinar de cido butanoico o el cido hexanoico, o
ambos, se pipetean (vase el numeral 4.2.4.2) 2 ml de la solucin
de referencia (vase el numeral 4.2.3.7), en lugar de isooctano. En
algunas circunstancias, puede ser necesario para analizar grasas
y aceites que contiene cantidades bajas de estos cidos grasos.
NOTA
segn
el
documento
International
Olive
Council
COI/T.20/Doc.No.24:2001, este mtodo se puede aplicar directamente a
muestras de las siguientes categoras de aceites:
4.3.3 Reactivos
Solo se utilizan reactivos con grado analtico reconocido. Los
reactivos no deben producir picos que interfieran con aquellos de
los esteres metlicos de los cidos grasos durante la GLC. Todo
lote de reactivo o solvente nuevo se debera verificar utilizndolo
para preparar esteres metlicos de cido oleico puro. Si aparece
algn pico adicional inesperado durante el anlisis final de GLC,
se recomienda rechazar el reactivo.
4.3.3.1
Isooctano
cromatogrfica.
(2,2,4-trimetilpentano),con
calidad
4.3.3.2
4.3.3.3
4.3.3.4
4.3.3.5
4.3.3.6
4.3.3.7
4.3.4.2
4.3.4.3
4.3.4.4
Embudo de vidrio.
4.3.4.5
4.3.4.6
4.3.5 Procedimiento
Se transfieren 50 mg de la muestra de ensayo (vase el numeral
4.1) en un baln volumtrico y cuello de vidrio esmerilado con
capacidad de 10 ml (vase el numeral 4.3.4.1).
Con la ayuda del embudo (vase el numeral 4.3.4.4), se aaden 2
ml de metxido de sodio de 0,2 ml/L en metanol (vase el numeral
4.3.3.3) y las perlas de ebullicin (vase el numeral 4.3.4.3).
Ajuste un condensador de reflujo (vase el numeral 4.3.4.2), agite
y lleve a ebullicin. Realice el reflujo de la mezcla hasta que la
solucin se torne transparente. Para la mayora de los aceites,
esto tarda cerca de 5 min, pero para aceites saturados ms duros
o de cadena larga, puede tardar hasta 20 min.
4.4.1 Principio
4.4.2 Aplicabilidad
Este mtodo es aplicable a la mayora de aceites, grasas y
derivados (cidos grasos, jabones) con excepcin de grasas
lcteas y grasas que contengan cidos grasos con grupos
especficos.
Durante la metilacin, las sustancias que contienen las siguientes
configuraciones se pueden descomponer total o parcialmente:
a) Grupos cetona, epoxi, hidroxilo, hidroperxido;
b) Grupos ciclo propilo y ciclo propenilo, y
c) cidos grasos acetilnicos.
Si la materia grasa contiene tales sustancias solo en cantidades
muy pequeas (por ejemplo, el aceite de semilla de algodn), se
puede aplicar el mtodo, de lo contrario se deberan usar los
mtodos especificados en los numerales 4.2 y 4.3.
Para la GLC, la recuperacin ptima de los esteres metlicos, a
partir de la mezcla de reaccin se obtiene usando isooctano. Sin
embargo, solo se recupera cerca de 75 % del caproato de metilo
presente.
4.4.3 Reactivos
Solo se utilizan reactivos con grado analtico reconocido.
4.4.3.2
4.4.3.3
4.4.3.4
4.4.3.5
4.4.3.6
4.4.3.7
4.4.3.8
Hexano, calidad
metlicos secos.
cromatografica,
solo
para
esteres
4.4.3.9
4.4.4 Equipos
Equipo comn de laboratorio y , en particular, el siguiente:
4.4.4.1
4.4.4.2
4.4.4.3
4.4.4.4
4.4.4.5
4.4.4.6
4.4.4.7
Evaporador rotatorio.
4.4.4.8
4.4.5 Procedimiento
ADVERTENCIA Debido a la naturaleza txica del trifluoruro de boro, realice la
metilacin bajo una cmara extractora. Es esencial lavar toda la cristalera con
agua inmediatamente despus del uso.
4.4.5.1
Porcin de ensayo
4.4.5.2
Saponificacin
4.4.5.3