INTRODUCCION

EL cultivo de banano en el Ecuador, es el primer producto agrcola que

genera ms divisas para el pas por concepto de exportacin.

En nuestro pas, se ha confirmado la presencia del Virus del Rayado del

Banano (BSV). Frecuentemente se confunde en las primeras etapas de la
infeccin con el Virus del Mosaico del Pepino (CMV). La infestacin de virus
ha superado el 5% de la plantacin de banano (Estacin Experimental
Boliche).

Sobre el efecto del cultivo de tejido de meristemo, tratamiento fsicos

qumicos para obtener semillas libre de virus se conoce que no se logra un
saneamiento del Virus del Rayado del Banano, debido a que se encuentra
integrado en el genoma de la clula. Es importante que exista un sitio de
cuarentena de los meristemos que se va a propagar, as como poder
diagnosticar en estadas juveniles la presencia del virus.

Son los factores ecolgicos que influyen sobre los virus

tales como: la

variedad de Musa, raza del virus, momentos de la infeccin, condiciones

ambientales, nivel nutricional y la presencia de vectores

En 1998, la superficie afectada por el Fenmeno del Nio fue de 24.803

hectreas, entre perdidas tierras saturadas, que represent el 17,23% de
las 143.961 hectreas. El estrs ocasionado por la saturacin hdrica de los
suelos y los cambios de temperatura provocaron el incremento de sntomas
de BSV en las plantaciones de banano. Este incremento de la enfermedad no
solo arroj prdidas sustanciales sino que diversific la expresin sintomtica
del BSV. Consecuentemente, el control de la enfermedad es mediante la
erradicacin en las unidades de produccin, se requiere un diagnstico
certero capaz de diferenciar la enfermedad del BSV de otras afectaciones
comunes en las condiciones de estrs nutricional, trmico o hdrico.

Gran parte de la reposicin de las bananeras afectadas fueron rehabilitadas

mediante plantas propagadas in vitro. Ha sido tambin reportado, que el
cultivo in vitro del banano induce la expresin episomal del virus del rayado
del banano (BSV), de los integrantes del BSV en el genoma B de Musa.

Esta investigacin tiene como tema l: ESTUDIO DE LA INFLUENCIA DE

FACTORES ABIOTICOS SOBRE LA EXPRESION DEL VIRUS DEL
RAYADO DEL BANANO (BSV) EN PLANTAS DE BANANO.

Se planteo la siguiente hiptesis:

Existe influencia de factores abiticos que causan la expresin del BSV.

Para lograr demostrar esta hiptesis, se plante el siguiente objetivo:

OBJETIVO GENERAL

Establecer los sntomas tpicos ocasionados por el Virus del Rayado del
Banano (BSV) y su efecto sobre el vigor en plantas de banano en distintas
etapas de desarrollo, sometidas a estrs abitico.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Establecer l diagnostico diferencial visual en plantas adultas de banano.

Estudiar los efectos del estrs trmico, hdrico y la influencia hormonal en

la expresin de los sntomas del BSV y vigor en plantas juveniles
cultivadas in vitro.

Detectar precozmente los sntomas del BSV, en plantas procedentes de

cultivo de tejido.

Confirmar la sintomatologa mediante la comprobacin de la presencia del

BSV en las hojas de Banano por microscopa electrnica.

CAPITULO

1. GENERALIDADES DE LOS VIRUS

En patologa vegetal existen diferentes agentes causales que determinan

disciplinas independientes. De tal forma, la patologa vegetal indica que las
enfermedades pueden ser producidas por agentes biticos y afectan a las
plantas tales como virus, viroides, bacterias, hongos, micoplasmas,
protozoarios y agentes abiticos tales como: temperatura, humedad relativa,
sequa, carencia de oxigeno, herbicidas, suelos txicos (Al, Fe, NaCl),
iluminacin etc.

Para que se produzca una enfermedad es necesario que exista un contacto e

interaccin entre los tres componentes: patgeno, hospedante y ambiente. El
ambiente puede afectar tanto el crecimiento y la resistencia de la planta
hospedante y a la vez el patgeno aumenta o disminuye su grado de
virulencia.

La virulencia del patgeno esta dada por la capacidad de replicacin del

virus en la clula vegetal y su extensin por todo el organismo (1).

Esta capacidad de dao de los virus se basa en la replicacin de sus

componentes de cidos nucleicos (ADN o ARN) y la sntesis de las protenas
que ellos codifican al parasitar la clula y que conforman la cpsida de los
virus.

1.1

Composicin y Estructura
Los virus son patgenos obligados, esta constituido por cidos
nucleicos y protenas. El ADN o ARN pueden ser de simple o doble
cadena. Las protenas forman una envoltura de proteccin llamado
cpside (1).
La partcula viral se replica en el interior de la clula. El componente
infeccioso es el cido nucleico y las protenas de la cpsida facilitan el
transporte y la infeccin.
El ADN celular se localiza en el ncleo de la clula eucaritico vegetal,
en la mitocondras y cloroplastos. El cido desoxirribonucleico,
determina la secuencia de los aminocidos de una protena
determinada y regula la sntesis de la misma.
Los ARN celular se encuentran en el citoplasma de las clulas, en
forma de ARN ribosomal (ARNr), de transferencia (ARNt) y mensajero
(ARNm).
En los virus el ADN y el ARN pueden constituir desde un 5-40%,
mientras que la protena de la cpsida varia desde 60 - 95% en cada
virus.

Los ARN son los encargados de procesar la informacin gentica para

la sntesis de la protena.

1.2

Funciones biolgicas de los componentes vrales

La sntesis y composicin de la protena depende nicamente del

cido nucleico, la protena sirve como proteccin del cido nucleico del
virus, pero solo su presencia aumenta el grado de virulencia del
mismo.

Los virus para formar su replicacin necesitan de la clula para

aprovechar un proceso metablico.

El ADN es la molcula que lleva la informacin gentica codificada de

una molcula a otra. La expresin de un gen se hace mediante una
copia en cido ribonucleico, este dirige la sntesis de la protena
especfica (26).

Replicacin

ADN

ARN
Transcripcin

Protena
Traduccin

La sntesis protena tiene dos fases:

La transcripcin consiste en producir un ARN complementario de una
cadena de ADN. El ARNm esta formado por una copia de una porcin
de ADN.

La traduccin se realiza en el citoplasma por los ribosomas.

La secuencia de los aminocidos en una cadena peptdica debe

hacerse segn un orden que se realiza gracias al ARNm, que lleva el
mensaje del ADN, comienza desde un punto de inicio AUG.

Se

expresa a travs de los codones. El ARNt lleva en los extremos el

aminocido y el correspondiente al codn del ARNm. Dentro de los
ribosomas se forma la cadena peptdica.
El ARNt y el ARNr, estn sintetizado por una transcripcin de un gen,
no existe la etapa de traducir.
La traduccin se realiza

en el citoplasma

por los ribosomas. La

secuencia de los aminocidos en una cadena peptdica debe hacerse

segn un orden que se realiza gracias al ARNm, que lleva el mensaje
del ADN comienza desde un punto de inicio AUG. Se expresa a travs
de los codones.

El ARNt lleva los extremos el aminocido

y el

correspondiente codn del ARNm. Dentro de los ribosomas se forma

la cadena peptdica.
1.3

Infeccin y replicacin viral

La replicacin de la partcula viral de doble cadena (ADNds), una vez

que ha entrado al ncleo de la clula donde parece enrollarse para
luego formar un mini cromosoma se duplica paralelamente y es

transcrito en dos cadenas simples de ARNs. El ARNs pequeo es

transcrito al citoplasma donde se encarga de traducir en protena
codificada por el virus y el otro ARN sirve como molde para el proceso
de transcripcin inversa o se transforma en ADN de doble cadena que
luego s encapsula por unidades proteica para formar versiones
completas(1), como se ilustra la figura 1.

El virus aprovecha los aminocidos del hospedante; pero est ligado

de acuerdo a la codificacin que lleva el ARN mensajero (viral) que es
utilizado exclusivamente por el virus como cubierta.

Los virus disminuyen el nivel de clorofila por hoja que se ve afectado

en el proceso de fotosntesis. Tambin disminuye la calidad de
sustancia reguladora de crecimiento (hormona de la planta), al inducir
un aumento en las sustancias inhibidora del crecimiento.

Los

efectos

que

muestran

los

virus

sobre

los

compuestos

nitrogenados, sobre compuestos fenlicos tienen gran efecto sobre el

crecimiento y diferenciacin tambin de los oxidados.

FIGURA 1.

Descripcin esquemtica de una infeccin viral del BSV en una

clula vegetal.

1.4 Los virus que infectan a la especie de Musa spp.

Las principales enfermedades vrales identificadas que afectan a las

variedades de Musa son:
-

Virus del arrepollamiento del cogollo del banano (BBTV).

Virus del mosaico de las brcteas del banano (BBMV).

Virus del mosaico del pepino (CMV).

Virus del rayado del banano (BSV).

Virus del arrepollamiento del cogollo del banano (BBTV)

10

Es la enfermedad viral que causa mayor dao econmico en las

plantaciones de banano, se encuentra distribuido en Africa, Asia y
Pacfico (36).
Se caracteriza por la apariencia de estras verde oscuro continuas en
lmina foliar y posterior en las nerviaciones, marcado enanismo,
apiamiento de las hojas y no se producen frutos.
La partcula viral es isomtrica de 18-20 nm. de dimetro redondo de
cadena sencilla de ADN de la familia Circoviridae. Es transmitida por
el fido Pentalonia nigronervosa pero no se transmite por
inoculacin mecnica.
El control de este virus se realiza mediante la erradicacin de la planta
y eliminacin de la presencia del vector.

- Virus del mosaico de las brcteas del banano (BBMV)

Este virus se registr primeramente en Filipinas; est presente en
Centro y Sur Amrica.

Se caracteriza por rayas clorticas en las

brcteas, posteriormente tiene un color rojizo y necrtica en las hojas

ms viejas.

El material gentico del virus es un ARN de cadenas sencillas y tiene

la forma de varillas de 750nm de largo.
medios mecnicos y por fidos.
- Virus del mosaico del pepino (CMV)

El virus se transmite por

11

Este virus est presente en los siguientes pases: Colombia, Costa

Rica, Ecuador, Guatemala, Honduras, Mxico, Nicaragua, Panam,
Venezuela, Taiwan y China. Inicialmente esta enfermedad se
manifiesta en forma de rayas clorticas paralelas en las hojas ms
jvenes y que se extiende a las hojas ms viejas; se acompaa de
desprendimiento del pseudotallo, necrosis interna y distorsin de los
dedos.

El CMV forma parte del grupo de los Cucomovirus. Se caracteriza

por partculas isomtricas de 28nm de dimetro y posee un genoma
tripartido de ARN caternario. Esta enfermedad es producida por un
virus ARN de la familia Bromoviridae gnero Cucomovirus.

Se

transmite en forma no persistente por varios fidos, entre ellos:

Aphis gossypi A, Craccivirus y Myzus persicae, mecnicamente y

por el material de propagacin vegetativo proveniente de material
enfermo.

Se controla mediante la erradicacin de material infectado, eliminacin

de los insectos vectores y no se logra un saneamiento al 100%,
mediante el cultivo de tejido. Las plantas transgnicas con resistencia
a la infeccin del virus del mosaico del pepino se encuentran en la
fase de desarrollo.

12

CAPITULO 2
2. IMPORTANCIA Y DISTRIBUCION DEL VIRUS DEL
RAYADO DEL BANANO (BSV)
Es una enfermedad viral que est incrementando el grado de infeccin en
las plantaciones bananeras ao tras ao, donde se han informado prdidas
hasta el 40% de la produccin de pases africanos (36).

Fue descrita por primera vez en el cultivar Poyo (Grupo AAA sub grupo
Cavendish) en la costa de Marfil. Tambin se ha registrado en pases como
Africa del Sur, India, Ecuador, Jordania, Madagascar, Madeira, Marruecos,
Mauricio, Nigeria, Repblica de China, Ruanda, Tanzania y Zanzbar(20).

La variedad Mysore (AAB) que se encuentra infectada por este virus, se la

ha observado en Australia, Brasil, Filipinas, Granada, India, Trinidad, y en
bancos de germoplasma in vitro en Cuba, Guadalupe, Honduras y Jamaica.
Han comprobado que el genoma del virus se ha integrado a la clula vegetal.
2.1

Composicin qumica

El Virus del Rayado del Banano (BSV) pertenece al grupo de los

Badnavirus, cuya forma es baciliforme que miden 30nm de ancho y

13

150nm de largo. Su genoma est constituido de ADN doble cadena

(ADNdb) circular de 7.1 kb (20). El BSV se expresa de tres maneras:
la forma episomal encapsulada, no encapsulada y la forma integral
(13).
Los badnavirus no han podido ser eliminados por el cultivo in vitro de
tejidos vegetales.
La partcula viral produce la enfermedad dentro de la planta, cuando
aprovecha las sustancias celulares ocupando los espacios libres de
las clulas, proceso celular y alterando los componentes, ocasionando
un mal metabolismo en las clulas, produciendo sustancias anormales
que repercuten en las funciones vitales de la planta.

La protena por s misma carece de infectividad, pero su presencia

aumenta el grado de virulencia del cido nucleico.

2.2

Sntomas caractersticos de la enfermedad viral

Los sntomas iniciales del BSV se expresan como un estriado amarillo

de lneas entrecortadas, perpendiculares hacia la nervadura central de
la hoja, posteriormente el tejido infectado se expresa con rayas
necrticas en las hojas en la planta afectada por el BSV, lo cual
usualmente no presenta en las afectadas por el CMV. Una
caracterstica del BSV es la latencia de la expresin de los sntomas

14

es decir que tiene la partcula viral pero no presenta sntomas por

varios meses. Otros sntomas son la forma de diamante a lo largo de
las venas, reduccin del vigor, racimos (20).
En Colombia se encontr en plantaciones de pltanos del clon
Dominico-Harton infectado por el BSV (38),

los sntomas son: un

rayado clortico, rayado necrtico, hnchamiento y cuarteamiento del

pseudotallo (Figura 2).

a)

b)

fig. a)

fig. b)

fig. c)
FIGURA

2.a-b-c. Sntomas tpicos del BSV: a) un rayado

clortico; b) un rayado necrtico c) cuarteamiento del
seudotallo

15

fig. a)
FIGURA 3.

2.3

fig. b)

Sntomas locales del BSV en la fruta de banano Lockhart b

ESPOL-2000; a) lesiones necrticas en el dedo de banano; b)
deformacin del racimo de banano.

Determinacin de los rangos de hospedero del patgeno.

La mayora de los badnavirus, el BSV tiene un rango restringido de

hospedero, en los que se han confirmado el cultivo de caa de azcar,
pltano del clon Domnico-Harton y en hojas de Achira (Canna eduli,
Figura 4).

a)

FIGURA 4.

b)

Sntomas de hospedero del BSV. a ) estras en la caa de

azcar b) sntoma mosaico en hoja de achira.

16

2.4 Formas de transmisin del Virus

El BSV es transmitido de forma semi persistente, de plantas de banano

infectadas

plantas

sanas,

por

el

insecto

Planococcus

citri

Saccharicoccus sachari (fig. 5), y la funcin que cumplen las hormigas

para su diseminacin y material vegetativo enfermo, que se transmite de
planta madre a los hijuelos (8). Es poco probable que el virus se disemine
a travs de herramientas. Y todava no existe un saneamiento de plntulas
provenientes de cultivo de tejidos.

FIGURA 5.

La cochinilla que transmite el BSV, en forma

persistente Lockhart B (ESPOL 2000)

semi -

2.5 Influencia de factores biticos y abiticos en la

expresin de los sntomas
Las plantas presentan una enfermedad, cuando existe un mal
funcionamiento de las clulas o tejidos del hospedante debido al

17

efecto de un patgeno o factor ambiental y que origina la aparicin de

los sntomas. Existiendo dos grupos de enfermedades:
- Enfermedades infecciosas o biticas de las plantas.

Las enfermedades causadas por organismos vivos-biticos pueden

ser provocadas por patgenos, tales como: hongos, bacteria,
microplasma, virus, viroides, nemtodos y protozoarios. Entre las
principales sustancias que secretan los patgenos en las plantas se
encuentran: las enzimas, toxinas, reguladores del crecimiento y
polisacridos. Excepto los virus o viroides que utiliza las enzimas
propias del hospedante modificando la ARN polimerasa de la clula
para sintetizar su propio ARN. Podemos mencionar los efectos que
tiene los factores biticas sobre la fisiologa de las plantas.

Los organismos patgenos en procesos infeciosos pueden (1):

Disminuir la fotosntesis al ser atacadas las plantas por hongos o

bacteria. La toxina (tentoxina y la terbtoxina) que producen estos
patgenos

pueden inhibir la accin de enzimas que intervienen

en el proceso fotosinttico.

Interferir con la translocacin ascendente del agua y los nutrientes

inorgnicos.

18

Bloquear la transpiracin.

Interferir la translocacin de los nutrientes orgnicos a travs del

floema. En algunas enfermedades virales, existe una acumulacin
de almidones en el enrrollamiento de la hoja y amarillamiento.

Afectar la respiracin de las plantas enfermas y su ritmo de

respiracin aumenta y utiliza con mayor rapidez su carbohidrato, y
alteran los mecanismos transcripcin y traduccin

Las enfermedades abiticos son aquellas inducidas por factores

fsicos o qumicos. Entre los factores fsicos ms frecuentes se
describen: estrs hdrico (exceso o carencia de agua), temperatura,
iluminacin y propiedades fsicas del suelo (1).

Entre los factores qumicos se describen la salinidad de los suelos, la

presencia de iones de metales en concentraciones txicos tales como:
Fe, K. El abuso de herbicidas es un estrs frecuente en las plantas
que pueden confundir sntomas

de otras enfermedades. Para el

banano han sido descritas diferentes enfermedades abiticas (Tabla

1).

19

TABLA 1
ENFERMEDADES ABITICOS O INDUCIDAS POR ESTRS FSICO O
QUMICO(45)
FACTOR

C O N D I C I O N E S
OPTIMA
PROM.AO

ENFERMEDAD 1

ENFERMEDAD 2

20-24

12
Paralizacin
Fotosntesis

7
Hiela racimo/daa
fruta/mal sabor

PRECIPITACION
(mm)

1200-2000-2500

<1200
Plantacin no
Prospera

Anegamientos
(tabla de agua alta)
Crecimiento
Deficiente
>48h mueren races

HELIOFANIA

Brillo solar durante

Todo el ao

Madurez tarda

Madurez prematura
Durante transporte

SUELO
Profundidad (m)

1.0-1.5
Profundo con buen
Drenaje

<1.0
Crecimiento
Deficiente

<.50
Atrofia de las
Races/mortalidad

SUELO
(Textura)

Franca

Suelo arenoso
Crecimiento
Deficiente

Suelo arcilloso
Mal drenaje/Rotura
Races/mortalidad

SUELO
(ph)

6.5-7.5

<6.5 o >7.5
Crecimiento
Deficiente

4.0 o 9.0
Malos rendimientos/
Maduracin rpida

SUELO
CE
(ohmios\cm)

>6.0

<6.0
Rendimientos
Anormales

>8.0
Salinidad cerca del
Mar
Toxicidad

TEMPERATURA
( C)

20

2.6

Evidencia de la distribucin de enfermedades vrales del banano

en el Ecuador: Virus del Rayado del Banano (BSV) y el Virus del
Mosaico del Pepino (CMV).
En nuestro pas la incidencia de virus en ciertas plantaciones de
banano ha superado el 5% de poblacin de plantas , esto incide en la
maduracin precoz de la fruta (Estacin Experimental Boliche, 1993).
En nuestro pas se confirm de manera oficial la presencia del Virus
del Rayado del Banano (BSV), al enviar muestras con sntomas de
BSV al laboratorio de la Universidad de Minessota (Lockhar B 1993).
En el fenmeno del nio de 1998, se observaron sntomas virticos
del BSV en los siguientes sitios: Milagro, El Empalme, Patricia Pilar,
Vnces, Valencia, La Man en las variedades Gran Enano, William y
Valery.

A continuacin se indica el nmero de plantas infectadas por el Virus

del Rayado del Banano, que han sido erradicadas y contabilizadas
124.788 plantas(1992-1996), por la CIA. UBESA(Tabla 2). Tambin en
las algunas variedades de banano y pltano que se encuentran
infectado por el virus fueron evaluadas por (Reyes, 1997,comunicacin
personal), como indican las tablas 3, 4,y 5.

21

TABLA 2
PLANTAS ELIMINADAS POR EL VIRUS DEL RAYADO DEL BANANO
(BSV) EN 13 PERIODOS DURANTE LOS AOS1992- 1996. ECUADOR
2002
PERIODOS
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
TOTAL
Calle H. (Ubesa).

1992
75
109
177
94
337
284
732
1,113
876
2,142
5,962
5,751
4,489
22,141

1993
2,924
806
998
796
1,377
1,675
2,283
2,419
3,012
2,365
2,388
3,736
2,541
27,320

1994
0
0
253
966
1,303
946
1,710
2,646
3,113
2,504
1,190
2,363
1,005
17,999

1995
547
710
1,037
626
3,054
577
373
1,038
994
712
540
301
543
11,052

1996
713
333
1,478
3,184
405
183
2,156
8,086
5,760
5,616
12,042
3,196
3,124
46,276

TABLA 3
INCIDENCIA (%) DEL VIRUS DEL ESTRIADO DEL BANANO (BSV) EN
CULTIVARES DE BANANO EN CINCO LOCALIDADES. ECUADOR. 2002
CULTIVARES
BANANO
FHIA
1
FHIA
2
FHIA
3
VALERY

L
EETP
0
0
0
2

P. PILAR
0
0
0
0

VENTANAS
0
0
0
0

PTO.INCA
0
0
0
0

S
EL ORO
0
0
0
0

La incidencia del BSV es nula en los FHIA 1,2,3.

TABLA 4
INCIDENCIA (%) DEL VIRUS DEL ESTRIADO DEL BANANO (BSV) EN
CULTIVARES DE PLATANO EN TRES LOCALIDADES. ECUADOR. 2002

22

CULTIVARES
PLATANO
FHIA 4
FHIA 6
FHIA 15
FHIA 16
FHIA 20
FHIA 21
DOMINICO
BARRAGANETE

L O C A
EETP
50
85
92
0
0
0
0
4

EETP
38
0
0
100
26
59
3
12

EL CARMEN
35
0
0
0
0
59
2
10

S
PTO.INCA
16
0
0
0
0
26
3
1

TABLA 5
NUMERO DE PLANTAS CON SINTOMAS DE BSV EVALUADAS EN
CUATRO LOCALIDADES DE LA PROVINCIA DE LOS RIOS POR REYES
W, EN 1997. ECUADOR .2002
LOCALIDADES
HDA.
LA ELVIRA
(Ventanas)
SAN JAVIER
(San Carlos)
TIERRA VERDE
(Via El Empalme)
Ma. AUXILIADORA
(Va El Empalme)

N planta virticas
(entre Marzo y Agosto/97
23

N plantas
Evaluadas
200

30

200

200

200

El porcentaje de infeccin de BSV de las plantas evaluadas es 7 %

CAPITULO 3
3. TECNICAS DE LABORATORIO PARA LA IDENTIFICACION
DE LOS VIRUS

23

Los virus pueden ser puestos en evidencia mediante la aplicacin de

diversas tcnicas como:

3.1

Transmisibilidad

Para cada virus citado, se ha indicado la forma en que l mismo se

transmite, esto incluye una cierta experiencia del investigador, el
identificar ciertos sntomas tpicos, en el caso del Virus del Mosaico del
Pepino (CMV) y el Virus del Rayado del Banano (BSV) que pueden
confundirse con

deficiencia de Ca, Zn,

B, P

y variaciones

somaclonales entre los cuales tenemos:

Plantas enanas.
Masada.
Variegado.
Hoja deforme.
Plantas ahiladas (Alargamiento).

Los virus pueden ser transmitidos de diversas formas: propagacin

vegetativa, mecnicamente a travs de la savia, semilla, polen,
insectos, caros, nemtodos y hongos.

24

3.2

Infeccin de plantas indicadoras

Para la determinacin del patgeno es necesario transmitirlo a las

plantas indicadoras para los virus que afectan a esa especie. Entre
ellas tenemos:
Chenopodium amaranticolor (susceptible a 40 virus diferentes)
Chenopodium quinua.
Cucumis sativus.
Nicotana glutinosa.

3.3

Comportamiento biolgico y fsico-qumico in vitro

Las propiedades in vitro solo pueden ser establecidas en virus que se

transmiten a travs de la savia.
Punto inactivacin trmica
Es la temperatura requerida para inactivar el virus que se encuentra en
la savia no purificada. La tolerancia al calor in vitro de los virus de las
plantas est en el rango de 45 a 95C. Se coloca en los tubos de
ensayo el extracto, luego en un recipiente con la temperatura deseada,
despus se pone en los morteros para inoculacin en plantas
susceptibles.
Punto final de dilucin.

25

Es la mxima dilucin a que es sometido el extracto puro del lquido.

Por cada dilucin debe ser inoculado a plantas susceptibles. El punto
de dilucin final fue de 10-1 a 10-3 del CMV.

Accin de los compuestos qumicos.

Existen compuestos qumicos como: formalina, cianuro de potasio,

alcohol etlico, que inactiva a muchos virus, an en concentraciones
mnimas.

Longevidad in-vitro.

Es la determinacin de cuanto tiempo se mantiene el extracto a la

temperatura ambiente de laboratorio, en cada perodo de inoculacin
en plantas diferentes.

3.4

Diagnostico inmunoqumico.

26

Existiendo la propiedad de alta especifiidad bilogica de los antgenos

y anticuerpos que permite unirse en sitios especficos de cada
patgeno se han desarrollado pruebas inmunoqumicas que son:
Tcnicas de precipitacin en medio lquido y en gel de agar. Se
refiere a pruebas cuantitativas de precipitacin en tubos y la
microprecipitacin en gotas, un

segundo grupo de tcnicas se

refieran imnuno difusin radial, difusin doble en tubos, placas y

tambin tcnicas inmuno electroforticas.

Tcnicas por aglutinacin directa en porta objetos y placas, son

usada para l diagnostico de virus alargado e isomtricos.
Tcnicas con anticuerpos marcados: se han desarrollado diferentes
tipos de procedimientos.
Inmuno fluorescencia consiste en marcar el anticuerpo con un
colorante influorescente (sotocianato de fluorescena).
Tcnicas

Inmunoenzimticas.

Han

utilizado

enzimas

como

marcadores, entre ellos estn ELISA, DOT-BLOT(36)

Mediante las tcnicas inmunoquimcas y de microscopa electrnica fue
detectado en Australia en 1992 (Tabla 6), un grupo de genotipo de
banano que contena el BSV (19).

27

TABLA 6
GENOTIPOS INFECTADO POR EL BSV EN AUSTRALIA.1992.
GENOTIPO
Mysore
Mysore
Mysore
Dajaio
Cavendish
Cavendish
Cavendish
Lady Finger
Dwarf Cavendish
Goldfinger
Cavendish
Ho Chu Chu
Pisang Awak
Dai Jiao
FHIA 17
French Reversin
Cavendish
Mysore

NMERO
417
418
419
420
517
540
565
573
576
580
581
587
593
594-598
621
643
668
669

Localizacin
Thursday Island
South Johnstone Qld.
Wamuran, Qld.
Wamuran, Qld.
Babinda, Qld.
Kiamba, Qld.
Inmistail, Qld.
Flaxton, Qld.
Alstonville, NSW
Alstonville, NSW
Alstonville, NSW
Alstonville, NSW
Alstonville, NSW
Alstonville, NSW
Cudn, NSW
South Johnstone Qld.
South Johnstone Qld.
South Johnstone Qld.

DIAGNOSIS
ISEM
ISEM
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA
Miniprep/ISEM, ELISA, PCR
Miniprep/ISEM, ELISA

ISEM (Microscopa electrnica inmunoabsorbente)

ELISA(Ensayo Inmonoabsorbente ligado a una enzima)
PCR (Reaccon en cadena de la polimerasa)

3.5

Anlisis ultraestructural del BSV y genmico

Existen reportes previos donde fueron observadas en el microscopio
electrnico, partculas vrales baciliformes del virus del rayado del
banano (BSV) con un tamao de 150 x30 nm. El anlisis
espectofotmetro demostr una absorvancia de A 260/280 de 1.2,lo
cual es una caracterstica del BSV (Lockhart, 1986), fue aisladas de
una muestra foliar de pltano (Musa AAB) del clon Dominico Hartn,
con sntomas de rayado clrotico procedente de la localidad de
Antoquia - Colombia(38).

28

FIGURA 6.

Partculas virales baciliformes del virus del rayado del banano

BSV.

3.6 Estructura y expresin del genoma del BSV.

El virus del rayado del banano (BSV), se expresa de tres formas:

Episomal encapsula, no encapsulada y la forma integrada(13).
Forma episomal encapsulada
Es la manera que el ADN del genoma del virus est encapsulada por
una capa de protena viral. Esta forma de expresarse se encuentra en
plantas con sntomas y asintomticas.

Forma episomal no encapsulada

Una de las caractersticas de la infeccin del BSV es la aparicin y
desaparicin peridica de los sntomas.

En ste fenmeno de

supresin de sntomas el BSV, se comporta semejante a los

paretrovirus, el Virus del Mosaico de la Coliflor (CaMV), en ciertos
hospederos.

Estudios sobre la supresin de sntomas CaMV han

29

demostrado que este est asociado con la alteracin de la replicacin

viral. La replicacin de los Paretrovirus tiene dos etapas, la transmisin
desde un superenrrollado genoma viral en el ncleo y la transcripcin
inversa de ARN resultante en el citoplasma. La alteracin en CaMV en
el

estado

de

transcripcin

conduce

una

acumulacin

del

superenrrollamiento genoma viral a otros intermediarios de la

replicacin no encapsulada. La forma de superenrrollamiento puede ser
distinguida de otras intermediarias de replicacin viral no encapsulada
por su migracin en gel de electroforesis. Consecuente experimentos
son inicialmente planeados para determinar si la biologa molecular del
fenmeno de supresin de sntomas del BSV se asemeja al CaMV.

Forma integral

Investigaciones reciente indican que la forma integrada del BSV est

integrado al genoma del banano en algunas cultivares que pueden ser
activados por condiciones de estrs, que pueden dar origen a la forma
episomal que ocasionan las infecciones, tambin se sugiere que existen
dos formas de BSV integral.

Segmento inactivo.- Son aquellos

segmentos del genoma que no

pueden conducir las infecciones episomal a causa de mutaciones o

alteraciones.

30

Potencial activa.- Es identificar las secuencias de nucletidos activos

de la forma integral, por que es probable que la forma episomal

sea

una copia del ADN viral por la transcripcin inversa

Existen muchas interrogantes sobre la activacin de ciertos segmentos

del genoma viral y la interaccin de estrs.

Mencionaremos informe del Grupo de trabajo PROMUSA en Virologa

(5), con respecto al Virus del Rayado del Banano (BSV).

Las investigaciones indican que existen claras evidencias

que la

infeccin en el BSV surgen de las secuencias vrales integradas en el

genoma de Musa. Tanto las secuencias activables (que se expresan
episomalmente) y no activables (que no se expresan episomalmente)
del BSV estn integrados en el genoma de Musa (5).

Un segmento integrado activable del BSV (BSV-OL) est asociado con

el genoma B de Musa y no con el genoma A.

Otras especies

moleculares del ADN del BSV episomal (BSV-GF, BSV-IM y BSV-MYS)

estn tambin integrados en el genoma de Musa (5).

Los integrantes vrales que se manifiestan episomalmente (BSV-OL,

BSV-GF, BSV-IM), ocurren ampliamente en pltano (AAB) y banano

31

(AAA) en Amrica Central y del Sur. Unas de las conclusiones es que

estas especies moleculares de BSV no han sido introducidas en nuevas
reas cultivares con hbridos tetraploides AAAB producidas por
diferentes programas de mejoramiento.

Sin

embargo bananos del

grupo AAA se ha encontrado en Costa Rica, Ecuador y Venezuela, las

infecciones episomales con el BSV-OL y BSV-GF que han resultado de
una infeccin latente preexistente o de la transmisin del virus de los
pltanos (5).

Existe una hiptesis que la expresin episomal de los integrantes del

BSV en el genoma B de Musa parece requerir la presencia del genoma
A.

Este modelo es apoyado por todos los fenmenos similares de

infecciones vrales en el tabaco y la petunia.

3.7 Anlisis de marcadores moleculares

Algunas de las tcnicas de deteccin de cidos nucleicos se basan en la
complementariedad de las bases, que permite la hibridacin molecular.
Existen dos grupos(36):
a.

Hibridacin de cidos nucleicos: se distinguen varios mtodos.

Southerm-Blot (para ADN)
Northerm-Blot (para ARN)
Dot-Blot (para ADN y RNA)

32

Los cidos nucleicos son sometidos a un proceso de electroforesis en

gel de agarosa, transferido a una membrana de nyln nitrocelulosa.
La deteccin se hace mediante el empleo de una sonda molecular
marcada isotpicamente con marcaje no radiactivo. Dicha sonda es la
que hbrida con el ADN de inters.
b.-

Amplificacin enzimtica de cidos nucleicos, existiendo varias

tcnicas para el diagnstico de virus.
Reaccin de cadena de la polimerasa (PCR): Es un mtodo
enzimtico

in

vitro

que

utiliza

cebadores

oligonucleotidos

complementarios al ADN de molde y existen varias tcnicas.

La tcnica de inmunocaptura PCR(IC-PCR): es diez veces ms
sensible que el ISEM, para la identificacin del BSV.
PCR con Inmuno transcripcin inversa (RT-PCR).
A continuacin se detalla la situacin actual del diagnstico de los Virus
de Musa (18) y su disponibilidad (Tabla 7).

TABLA 7

33

LAS PRINCIPALES PRUEBAS SEROLOGICOS DE APLICACIN PARA

EL DIAGNOSTICO DE LOS VIRUS
VIRUS

DIAGNOSTICO (S)

C O M E N T A R I O S

BBTV

ELISA

BBrMv

PCR
Miniprep+ISEM

Antisuero comercial detecta las

cepas
Conocidas
Sensible pero especfico de la cepa.
Antisuero policlonal y antisuero
Recombinante disponible *

CMV

ELISA
Normalizacin con mniprep + ISEM
Miniprep+ISEM
Mtodo estandarizado
Miniprep+ISEM
Mtodo Normalizado
ELISA

BSV (pisomal)

Mtodo Normalizado-el mismo

antisuero
Miniprep+ISEM

BanMV
AbaMv

BSV (integrante
activable)
Otros Virus

Antisuero policlonal disponible *

Antisuero policlonal disponible *
Antisuero policlonal comercial
disponible
Detecta ambos serotipos
Antisuero poli-policlonal disponible *
Detecta virus episomal posibles
Problemas con la variacin de la
Cepa. Posibles problemas con el
Antisuero
E iniciadores en caso de variacin

IC-PCR
Mtodo normalizado mniprep + ISEM
PCR
Especfico de la cepa. Depende de la

Miniprep+EM

* No disponible para la deteccin comercial

0 Algunos anticuerpos disponibles contra el BDBV

Informacin sobre la secuencia de la

cepa
Detecta la presencia de losa virus
con
Forma de bastn y unido con el
antisuero 0*
Detecta virus no reconocido
anteriormente.
Ms difcil con la baja concentracin
de
Los virus isomtricos.

34

CAPITULO

4.

EFECTO

DE

FACTORES

ABIOTICOS

DEL

CULTIVO DE TEJIDO SOBRE LA EXPRESION DEL BSV.

Las plantas de banano se desarrollan dentro de ciertos limites de factores

abiticos; que inciden en el aumento disminucin de la expresin del BSV,
tales como: la temperatura, los nutrientes, tipo de suelo y agua.
El cultivo de tejido no erradica totalmente la presencia de la partcula viral
dentro del meristemo.

4.1

Influencia de la temperatura y precipitacin pluvial en

condiciones de campo

El virus del Rayado del Banano (BSV), se manifiesta con mayor grado de
virulencia cuando existe un desequilibrio nutricional, variaciones de
temperatura, dficit o exceso de agua, o situaciones que provocan estrs.
En nuestro pas en la poca del Nio en 1998, la incidencia de la infeccin

del BSV fue mayor; por los cambios de temperatura de 18-36C.(Personal)

35

Las investigaciones realizadas por el Instituto Internacional de Agricultura

Tropical (IITA 1998), reportan que los sntomas eran ms frecuentes y
severos, a temperatura inferior a 22-24C, que altas temperaturas (2832C).

Existen pocas investigaciones del efecto del Virus del Rayado del

Banano sobre el rendimiento de la fruta; entre los cuales tenemos:

Investigaciones realizadas

en Costa de Marfil (20), en el Clon Poyo

perteneciente al sub-grupo Cavendish, demuestran una disminucin del

rendimiento del banano entre el 7 y el 90%.

En dos plantaciones comerciales de Cavendish (cv Williams) en Australia

(9), encontro

infecciones alrededor del 5% de las plantas de esta

plantacin que estuvo infectada por el BSV. Se menciona el estudio de

los efectos de la cepa australiana del BSV sobre el rendimineto de los
bananos Cavendish (cv Williams) bajo condiciones locales Queensland
(Tabla 8)
TABLA 8
EL EFECTO DE LA INFECCIN CON EL BSV SOBRE EL DESARROLLO
DE LAS PLANTAS, RENDIMIENTO Y CALIDAD DE LA FRUTA,
AUSTRALIA, 1996.
Tratamiento

Infectados
Con el BSV
Libre del
BSV
Prueba F

Desde la
siembra
Hasta la
cosecha
(das)
376+

Racimo
Peso(Kg)

PesodelRaci
mo/ao
(Kg/planta
/cm)

% Extra
Fruta
Grande

Mano 3
Largo
del dedo
(cm)

Seudotallo
Altura (cm)

Seudotallo
Circunferen
cia (cm)

22.3

21.6

58,2

24,4

203

48,4

355

22.7

23.3

62,2

24,6

205

49,1

NS++

NS

NS

NS

NS

36

Los valores mostrados son el promedio de 12 parcelas replicadas. (Diseo

de bloque completo al azar 10 muestras de plantas por parcela).

++ Las diferencias no son significativas.

* Significativamente diferente a P<0.05
(Fruta Extra Grande > 23.5 cm de largo)

Estos resultados nos indicaron que la infeccin del

significativamente

BSV, afecto

en la etapa entre la siembra y la cosecha, que fue

retardado por tres semana en plantas infectadas, representando un 7% de

reduccin del rendimiento por unidad de tiempo. Ningn otro parmetro fue
afectado significativamente. Esto implica que el ensayo que se realiz al
norte de Queensland, que los factores abiticos (condiciones ambientales,
humedad del suelo, fertilidad del suelo), fue ptima, y no afect en su
crecimiento. Sin embargo en condiciones extremas, cuando sufren un estrs
las plantas de banano, la infeccin puede ser mayor.

4.2

Influencia del cultivo de tejido

El cultivo de tejido ayuda que se exprese la forma episomal de las

secuencias integradas del BSV. Tanto las secuencias activables(que
se exoresan episomalmente) y no activables ( que no expresan

37

episomalmente) del BSV que estn integrada en el genoma de Musa

(5).

El cultivo de meristema no elimina totalmente la presencia del BSV ,

existiendo una tcnica in vitro que es la crioconservacin,
parte experimental han logrado la erradicacin del BSV

en la

un 63 %,

estn investigando la ubicacin especifica de las partculas virales del

BSV dentro del meristema (15).

El Virus del Mosaico del Pepino (CMV)ha sido saneado a partir del
cultivo in vitro de puntos meristemticos por Berg y Bustamante
(1974) y Surga (1988), usando plantas del sub - grupo Cavendish
AAA. (42).

4.3

Influencia de sustancias antivirales

La aplicacin de sustancias reguladoras de crecimiento como el cido

giberelico, ha permitido estimular el crecimiento de las yemas axilares
inhibidas por virus en los amarillamiento del cerezo cido. Se ha
aplicado

ribavirina

en

forma

de

aspersiones

significamente los sntomas de algunos virus.

disminuyen

38

Las hormonas vegetales se clasifican en promotores y inhibidores,

pueden ser naturales y sintticos. Dentro de las hormonas promotoras
estn: auxinas, giberilinas, citoquninas y los inhibidores cidos
abcscico.

Se expresa como una hiptesis que las clulas

meristemticas acumulan sustancias de accin antivirus (guanidina)

(24).

La aplicacin a las plantas con cimetrina

los

tratamientos

dismunyen, las lesiones locales del hospedante causada por el virus

(1).