Faculdade Maurcio de Nassau

Bioqumica
AULA PRTICA I:
RELATRIO DE PRECIPITAO DE PROTENAS

Aluna: Ilana Farias Andrade de Moura

Bacharel em Enfermagem - Noite C
Prof - Sra. Thas Pontes

Fortaleza / Cear
20.05.13

NDICE

1. Introduo ------------------------------------------------------------------------------- 3
2. Objetivo----------------------------------------------------------------------------------- 4
3. Materiais e mtodos -------------------------------------------------------------------- 5
4. Resultados e discusses ---------------------------------------------------------------- 7
5. Concluso -------------------------------------------------------------------------------- 9
6. Referncia Bibliogrfica ------------------------------------------------------------- 10

INTRODUO
As protenas so as molculas orgnicas mais abundantes e importantes nas
clulas. So encontradas em todas as partes de todas as clulas, uma vez que so
fundamentais sob todos os aspectos da estrutura e funo celulares. Existem muitas
espcies diferentes de protenas, cada uma especializada para uma funo biolgica
diversa, como por exemplo, transporte de substncias, manuteno da presso, defesa
contra organismos estranhos. Alm disso, a maior parte da informao gentica
expressa pelas protenas. Pertencem classe dos peptdeos, pois so formadas por
aminocidos ligados entre si por ligaes peptdicas, sendo esta uma ligao covalente
entre o grupo amino (-NH 2 ) e um aminocido com o grupo carboxila (-COOH)
de outro aminocido, atravs da formao de uma amida. Por estar muito prximo um
aminocido do outro eles comeam a interagir por pontes de hidrognio. Essas
interaes so do tipo ponte de hidrognio e pontes de dissulfeto, interaes
hidrofbicas e interaes inicas. A desnaturao protica se d no s pelo calor, mas
tambm por extremos de pH, por alguns solventes orgnicos miscveis com a gua
(lcool e acetona, por exemplo), por certos solutos como uria e cloridrato de
guanidnio ou por detergentes. Cada um desses agentes desnaturantes representa um
tratamento relativamente brando no sentido de que nenhuma ligao covalente na cadeia
polipepitdica rompida. Os solventes orgnicos (uria e detergente) agem
principalmente de modo a promover o rompimento de interaes hidrofbicas que
estabilizam as protenas globulares; os extremos de pH alteram a carga lquida da
protena, provocando a repulso eletrosttica e rompimento de algumas ligaes de
hidrognio.
A importncia das protenas, entretanto, est relacionada com suas funes no
organismo, e no com sua quantidade. Todas as enzimas conhecidas, por exemplo, so
protenas; muitas vezes, as enzimas existem em pores muito pequenas. Mesmo assim,
estas substncias catalisam todas as reaes metablicas e capacitam aos organismos
construo de outras molculas - protenas, cidos nucleicos, carboidratos e lipdios que so necessrias para a vida. O estudo de aspectos importantes da bioqumica nos
leva, invariavelmente, ao estudo de protenas. Portanto, torna-se importante a existncia
de mtodos adequados de purificao e quantificao destes compostos. A purificao e
caracterizao de uma protena baseiam-se em suas caractersticas fsico-qumicas.

OBJETIVO

Analisar o comportamento da protena ovoalbumina sob o efeito de diversos

fatores: temperatura, solventes orgnicos e altas concentraes salinas, podem ser feitos
experimentos no qual determinada protena exposta a diferentes condies. Para tal,
utilizaremos a albumina, presente na clara de ovo.

MATERIAIS DE MTODOS

1. Precipitao de protenas por adio de sais neutros (efeito de fora inica)

a) Reagentes e solues
- soluo de clara de ovo
- soluo saturada de sulfato de amnio [(NH4)2SO4]
- soluo de NaCl
- gua destilada
b) Vidraaria e instrumental
- Pipeta
- 1 tudo de ensaio
* Preparo da soluo de clara de ovo: Dissolver 3 ml de clara de ovo com 12 ml de
soluo de NaCl 1%. Misturar.
** Preparo da soluo saturada de (NH4)2SO4: Dissolva 7,7g de sulfato de amnia
(NH4)2SO4 em 10 ml de gua destilada.
c) Procedimento
1. Em um tubo de ensaio, colocar 2 ml da soluo de protenas (clara do ovo);
2. Adicionar, deixando escorrer pelas paredes do tubo, 2 ml da soluo de sulfato de
amnio;
3. Observe. Misture o contedo do tubo (por inverso) e anote os resultados.
4. Em um tubo de ensaio, colocar 2 ml da soluo de protenas (clara do ovo);
5. Adicionar, deixando escorrer pelas paredes do tubo, 2 ml da soluo de NaCl 1%.
6. Observe.
2. Precipitao por ao do calor (desnaturao)
a) Reagentes e solues
- soluo de protenas (soluo de clara de ovo)
b) Vidraaria e instrumental
- Pipeta
- 1 tudo de ensaio
c) Procedimento
1. Colocar 5 ml da soluo de clara de ovo em um tubo de ensaio;
2. Deixar o tubo em banho-maria fervente por 5 minutos (o tubo tambm pode ser
5

aquecido
direto
na
chama
de
um
bico
3. Retire o tubo do banho, observe e anote os resultados.

de

Bunsen);

3. Precipitao das protenas por solventes orgnicos

a) Reagentes e solues
- soluo de protenas (clara de ovo)
- etanol (CH3CH2OH) 95% gelado
- acetona (CH3COCH3) gelada
- cloreto de sdio (NaCl) slido
- gua destilada
b) Vidraaria e instrumental
- 04 tubos de ensaio
- pipetas (vidro ou plsticas)
c) Procedimento
OBS: trabalhar a baixa temperatura
1. Tome dois tubos de ensaio e coloque, em cada um, 2 ml da soluo de protenas;
2. Adicionar 4 ml de etanol gelado a cada tubo;
3. Agite;
4. Em um dos tubos, coloque uma pequena quantidade de NaCl slido, sob agitao;
5. Observe e responda: qual o efeito do lcool sobre a protena na presena e na
ausncia do eletrlito?
6. Adicione 6 ml de gua destilada e observe.
7. Repita as etapas anteriores substituindo o etanol por 4 ml de acetona gelada a
cada tubo;
8. Compare os resultados.

RESULTADOS E DISCURSSES

1. Precipitao de protenas por adio de sais neutros (efeito de fora inica)

Foi dissolvido 2 ml de clara de ovo com 2 ml de soluo de NaCl 1% e
observado. Viu-se que houve homogeneizao parcial. Ocorreu precipitao da
albumina, pois em altas concentraes de sais as protenas precipitam de suas solues.
Em seguida, foi dissolvido 7,7g de sulfato de amnia (NH4)2SO4 em 10 ml de
gua destilada e adicionada tudo de ensaio, onde o composto ficou trifsico com a
albumina no meio, houve precipitao da albumina.
Conclu-se que altas concentraes de sais precipitam protenas de suas
solues. Este fenmeno denominado de salting out ou precipitao por sais. Os sais
desidratam as protenas, atraindo as molculas de gua do meio, de modo a ficar menos
gua disponvel para as molculas proteicas. A solubilidade de uma protena depende da
quantidade de gua disponvel ao redor de seus grupos inicos. Por outro lado, baixas
concentraes de sais podem aumentar a solubilidade de muitas protenas. o
fenmeno conhecido como salting in ou solubilizao por sais. Isso pode ser explicado
atravs da interao entre os ons salinos e as cargas inicas das protenas, aumentando,
assim, o numero efetivo de cargas e a quantidade de molculas de gua fixadas
ionosfera proteica. De modo geral, pequenos aumentos da fora inica solubilizam
melhor as protenas, enquanto que aumentos maiores provocam a precipitao das
mesmas.
2. Precipitao por ao do calor (desnaturao)
Foi colocado 5 ml da soluo de clara de ovo em um tubo de ensaio e deixado o
tubo em banho-maria fervente por 5 minutos. Observou-se que a substncia ficou densa
e a albumina desnaturou, a desnaturao promove alteraes que diminuem a
solubilidade da protena, levando sua precipitao.
As protenas possuem uma estrutura tridimensional bem definida, da qual dependem
fundamentalmente suas propriedades fsicas, qumicas e biolgicas. Essa estrutura
relativamente sensvel ao do calor, que causa desorganizao das cadeias peptdicas,
com consequente alterao na sua conformao. Esse fenmeno recebe o nome
de desnaturao, e altera as estruturas quaternria, terciria e secundria da
protena levando-as
at
a
sua
estrutura
primria.
A desnaturao promove alteraes que diminuem a solubilidade da protena,
levando sua precipitao.
3. Precipitao das protenas por solventes orgnicos
Em um tubo de ensaio foi inserido 2 ml da soluo de protenas e adicionado 4 ml
de etanol gelado, agitando-o. Colocado uma pequena quantidade de NaCl slido, sob
agitao. Em seguida, adicionado 6 ml de gua destilada. Observou-se que a protena
precipitou ficando homognea e densa. O etanol causa o rompimento das interaes
fracas, por isso ocorre precipitao.
7

Em um tubo de ensaio foi inserido 2 ml da soluo de protenas e adicionado 4

ml de cetona gelado, agitando-o. Colocado uma pequena quantidade de NaCl slido,
sob agitao. Em seguida, adicionado 6 ml de gua destilada. Observou-se que se
formou um conglomerado de protenas no fundo do tudo de ensaio.
Solventes orgnicos que tm uma poro hidrofbica (lipoflica) e uma poro
polar so agentes de precipitao de macromolculas. Os grupos polares interagem
com grupos polares proteicos em competio com molculas de gua. Os grupos
hidrofbicos podem romper interaes intramoleculares estabilizantes da estrutura da
protena. Um volume elevado de solvente orgnico reduz a concentrao efetiva da
gua, deixando menos molculas de gua para hidratao da protena. Isto ,
modificam
a
camada
de
solvatao
das
protenas.
A precipitao por solventes orgnicos depende muito da temperatura. Os
solventes orgnicos, quando utilizados a temperaturas baixas, so bastante teis na
separao de misturas de protenas. A temperaturas mais elevadas esses solventes
podem levar desnaturao por rompimento das pontes de hidrognio e
estabelecimento de interaes apolares, importantes na manuteno da conformao
proteica.

CONCLUSO
Conclu-se que as protenas possuem uma estrutura tridimensional bem definida
que est relacionada com suas propriedades fsicas e biolgicas. A modificao na
estrutura tridimensional nativa de uma protena, com a consequente alterao de suas
propriedades conhecida como desnaturao. A desnaturao envolve alteraes nas
estruturas quaternria, terciria e secundria de protenas, mas no da primria. A
desnaturao, usualmente decresce a solubilidade das protenas. A diminuio da
solubilidade pode ser explicada pela exposio de radicais hidrofbicos e outros que
prejudiquem a interao protena-gua e favoream a interao protena-protena. A
desnaturao o evento primrio e importante. A floculao e a coagulao, que muitas
vezes so confundidos com desnaturao de protenas, so simplesmente manifestaes
visveis das alteraes estruturais causadas pelos agentes desnaturantes. Existem vrios
agentes desnaturantes de protenas, tais como: calor, cidos, lcalis, solventes orgnicos,
solues concentradas de uria e guanidina, detergentes, sais de metais pesados, etc.
Entre as alteraes que se observam em decorrncia da desnaturao protica, pode-se
citar:diminuio da solubilidade, perda de atividade biolgica (por exemplo, da ao
enzimtica, da ao hormonal), aumento da reatividade de radicais da cadeia
polipeptdica, alteraes na viscosidade e coeficiente de sedimentao, etc. A
precipitao com desnaturao, alm de serem utilizadas para caracterizar a presena de
protenas em soluo, tambm so teis para proceder a desprotenizao de lquidos
biolgicos para anlise decomponentes no proteicos.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Relatrio
bioqumica
experimental:
protenas.
Disponvel
<http://www.ebah.com.br/content/ABAAABgX4AB/relatorio-bioquimicaexperimental-proteinas> Acessado em: 15/05/2013

em:

Experimento
de
bioqumica.
Disponvel
em:
<http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/precipitacao_protei
nas.htm> Acessado em: 15/05/2013
Protenas:
Reaes
de
colorao
e
precipitao.
Disponvel
<http://pt.scribd.com/doc/29031871/PROTEINAS-Reacoes-de-coloracao-eprecipitacao> Acessado em: 15/05/2013

em:

Desnaturao
de
protenas.
Disponvel
<http://educador.brasilescola.com/estrategias-ensino/desnaturacao-proteinas.htm>
Acessado em: 15/05/2013

em:

Extrao,
separao
e
purificao
enzimtica.
Disponvel
em:
<http://www.eq.ufrj.br/biose/nukleo/aulas/Enzimol%20Grad/aula8.pdf> Acessado em:
19/05/2013
Protenas.
Disponvel
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<http://www.geocities.ws/laboratoriodebioquimica/index_arquivos/Page929.htm>
Acessado em: 19/05/2013
As protenas. Classificao, estrutura e propriedades. Disponvel em:
<http://www.insumos.com.br/aditivos_e_ingredientes/materias/298.pdf> Acessado em:
19/05/2013

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