Informe de Laboratorio Bioquímica

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA

201103 BIOQUMICA
INFORME DE LABORATORIO
BIOQUMICA
PRESENTADO POR
NEYY DVILA - Cdigo: 27143005
Correo: dana_samuel@hotmail.com
Celular: 3127966590
Tutor virtual. Alberto Garca
Grupo.201103-25
ROSA DELGADO Cdigo: 59825315

Correo. dialvid@gmail.com
Celular. 3206915802
Grupo. 201103-26
YURANY ZAMUDIO Cdigo:

Correo. Mayerliz2011@hotmail.es
Celular. 3128976338
GRUPO: 201103_29
WALTER BOLAOS Cdigo: 1.085.687.645
Correo. walterbolaos@hotmail.com
Celular.3128567916

201103 BIOQUMICA
Grupo.201103-29
DIANA PINTA Cdigo: 1086330751

Correo. anaid93@live.com
Celular. 3137740010
GRUPO: 201103_29
PRESENTADO A:
LUCILA RIASCOS FORERO
Tutora Laboratorio

CEAD
PASTO
Mayo, 2015

201103 BIOQUMICA
PRCTICA LABORATORIO 1: MTODOS CUALITATIVOS PARA LA

IDENTIFICACIN DE AMINOCIDOS Y PROTENAS
INTRRODUCCION
En este laboratorio fue muy importante saber trabajar en equipo, para realizar las
diferentes pruebas con cuidado teniendo un buen manejo de los reactivos con el
fin hacer un buen trabajo para identificar las protenas.
Las protenas son principios inmediatos orgnicos constituidos por largas cadenas
de aminocidos los cuales se une entre s mediante enlaces peptdicos. La
existencia del enlace peptdico, de aminocidos azufrados, puede ponerse de
manifiesto en el laboratorio mediante una serie de reacciones coloreadas
especficas que sirven para la identificacin de protenas. Para esta prctica se
realizan las diferentes pruebas como lo son la de biuret, milln, xantoproteica,
grupos SH, reaccin de la ninhidrina, prueba del nitro prusiato, precipitacin
acdica, precipitacin acdica, solventes orgnicos, desnaturalizacin por calor,
metales pesados, en todas estas obtuvimos diferentes resultados que fueron muy
interesantes.

201103 BIOQUMICA
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Identificar por medio de las diferentes pruebas en el laboratorio la tincin de
aminocidos y protenas.
Conocer las diferentes reacciones que hubo con la leche, huevo, y jugo en
las pruebas xantoproteica, prueba de biuret, milln, grupos SH, reaccin de
la ninhidrina, prueba de nitropruasiato, precipitacin acdica, solventes
orgnicos, desnaturalizacin por calor, metales pesados
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Hacer un uso adecuado de los elementos de trabajo del laboratorio.

Seguir paso a paso las medidas para que las pruebas salgan positivas.
Realizar cada prueba con cuidado.
Determinar la solubilidad de las protenas.
MARCO TEORICO

201103 BIOQUMICA
Por la estructura peptdica y la presencia de determinados grupos (grupos R),

las protenas pueden reaccionar con una variedad de agentes originndose
productos coloreados. Estas reacciones son la base para la determinacin
cuantitativa y cualitativa de las protenas y enzimas. Por presentarse variaciones
en la composicin de los aminocidos delas diferentes protenas, se manifiestan
diferentes colores y grados de intensidad para una misma reaccin,
ntimamente relacionado con la naturaleza de la protena analizada.
PRUEBA DE LA NINHIDRINA (HIDRATO DE TRICETOHIDRINDENO).

Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno
carboxilo libre, reaccionaran con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la
aparicin de un color violceo o amarillo. Debido a que las protenas y los
aminocidos, poseen esta caracterstica, la reaccin sirve para identificarlos.
Algunas soluciones de amonio y aminas, dan la coloracin caracterstica,
aparentemente debido a una oxidacin y reduccin intermolecular de la ninhidrina
en presencia de amonaco. Los aminocidos porina e hidroxiprolina, que no
poseen grupo amino sino imino (-NH-), dan un color rojo que pasa rpidamente a
amarillo.
REACCION DE LA PRUEBA DE LA NINHIDRINA
PRUEBA DE BIURET

201103 BIOQUMICA
Es una prueba general para polipptidos y protenas ya que sirve para reconocer
las uniones peptdicas. La positividad se manifiesta por la aparicin de una
coloracin violeta. La formacin de un complejo de coordinacin entre los cationes
cpricos en medio alcalino con las uniones peptdicas.
REACCION DE LA PRUEBA DE BIURET
PRUEBA DE SULFATO DE AMONIO

Las protenas, como otro coloide son precipitadas por soluciones concentradas de
sales de amonio [NaCl. (NH4) 2SO4 y NaSO4]. Aparentemente la precipitacin se
debe a la neutralizacin y deshidratacin de la molcula, seguida de agregacin y
precipitacin.
PRUEBA XANTOPROTEICA
Es una reaccin que reconoce los aminocidos que poseen el grupo bencnico
(tirosina, fenilalanina, triptfano). Las protenas que tienen en su composicin
estos aminocidos tambin darn la reaccin. La positividad se reconoce por la
aparicin de un color amarillo o verde debido a la formacin de nitrocompuestos.
PRUEBA DE LOS GRUPOS SH
Es una prueba para identificar aminocidos azufrados y las protenas que los
contienen, se reconocen por la formacin de una coloracin negra o gris. La figura
siguiente muestra dicha reaccin.
REACCION DE LOS GRUPOS SH

201103 BIOQUMICA
PRUEBA DE MILLN
La reaccin es debida a la presencia del grupo hidroxifenlico (-C6H4OH) en la
molcula proteica. Cualquier compuesto fenlico no sustituido en la posicin 3,5,
como la tirosina, fenol y timol, dan positiva la reaccin. El mecanismo de la
reaccin es poco conocido, posiblemente se deba a la formacin del complejo
oxido de mercurio y fenol
DESNATURALIZACIN POR CALOR
Una prdida de la estructura tridimensional suficiente para causar prdida de la
funcin se llama desnaturalizacin. Se forma un conjunto de cadenas poli
peptdicas con distinto grado de plegamiento. La desnaturalizacin no significa
que siempre se obtenga la cadena poli peptdica totalmente desplegada. Los
productos de desnaturalizacin en solucin se agregan fsicamente y segn las
condiciones de pH y fuerza inica, precipitan.
El objetivo de elegir un paso de purificacin desnaturalizante es crear las
condiciones donde la protena de inters no se desnaturalice mientras que los
otros componentes se desnaturalicen y precipiten.
PRUEBA PARA METALES PESADOS
Los metales pesados tienen el efecto de precipitar protenas de sus soluciones
creando enlaces entre los grupos amino libres y los grupos carboxilo libres.
Los iones ms comnmente usados para detectar la presencia de protenas

Incluyen Zn2+, Fe3+, Cu2+, Sb3+, Ag1+, Cd2+, and Pb2+
Entre los metales, Hg2+, Cd2+, and Pb2+ tienen una alta toxicidad. Estos pueden
causar serios daos a las protenas (especialmente enzimas) desatorndolas.
Victimas que han ingerido iones de mercurio o plomo (Hg2+ o Pb2+) se tratan con
un antdoto de algn alimento rico en protenas. La protena se combina con los
iones de mercurio y plomo minimizando la absorcin de tales iones. Los alimentos

201103 BIOQUMICA
ms usados son leche y clara cruda de huevo. La protena que se precipita es

removida inmediatamente del estmago mediante un lavado estomacal.
PRCTICA 1: MTODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACIN DE
AMINOCIDOS Y PROTENAS EN HUEVO, LECHE Y JUGO.
PRUEBA
BIURET
MILLN
PROCEDIMIENT CANTID
O
AD
EN UN TUBO DE
A
ENSAYO
ADICION
COLOCAR:
AR
HUEVO
2 ml
NaOH al 30%
(cuidado,
2 ml
provoca
quemaduras
Mezclar
e
ir
aadiendo gota a
gota el
sulfato cprico al
1%
(CuSO4),
agitando
Despus de cada
adicin, hasta la
aparicin de un
color violeta, azul
o amarillo. El
color
violeta indica la
reaccin positiva
HUEVO
2ml
REACTIVO DE
0.5 ml
MILLN
Llevar a bao de
agua hirviendo
por
5min.Un color
rojo oscuro es
resultado
positivo.
RESULTADO
OBTENIDO
Coloracin violeta
es positivo para
protenas por la
coloracin que se
obtuvo.
Al llevarlo a bao
mara da un color
rojo formando un
precipitado
IMAGEN

201103 BIOQUMICA
HUEVO
2 ml
XANTOPROTEICA
GRUPOS SH
HNO3
concentrado por
las paredes del
tubo,
(cuidado,
provoca
quemaduras).
Mezclar
bien,
calentar
a
la
bao mara y
observar un color
amarillo
claro.
Adicionar
solucin
de
NaOH al 40%
lentamente
sin
agitar y observar
un
naranja
intenso
como
resultado
positivo.
HUEVO
Hidrxido de
sodio al 40 %
(NaOH),
(cuidado,
provoca
quemaduras).
Acetato de Plomo
al 0.5 %
Mezclar bien,
calentar a bao
de agua
1mL
se obtuvo un color
amarillo fuerte,
precipitado de
consistencia ms
dura que la
precipitacin de la
leche
2 ml
1 ml
1 ml
1 ml
Negativo para
carbohidratos.

201103 BIOQUMICA
hirviendo por 4
min, un
precipitado negro
es prueba
positiva.
HUEVO
AJUSTAR PH A
REACCIN DE
7.0
LA
Solucin de
NINHIDRINA
ninhidrina, hervir
a bao mara por
2 min. Observar
coloracin violeta
o morado intenso
PRUEBA DEL
HUEVO
NITROPRUSIA Solucin de nitro
TO
prusiato de sodio
Mezclar con el
extracto
problema
Adicionar
Hidrxido de
amonio (cuidado,
provoca
quemaduras y es
irritante para
Piel y fosas
nasales), deje
reposar por 5
min.
PRECIPITACI
HUEVO
N ACDICA cido actico al
30%
Agite y observe
la formacin
precipitado
(enturbiamiento)
Solucin
saturada de
Cloruro de sodio
(NaCl)
1ml
positivo
1ml
0.5 ml
2 ml
En la parte de
arriba amarillo
claro casi
transparente y al
fondo
transparente.
0. 5 ml
2 ml
0.5 ml
1 ml
se observa la
sustancia
transparente pero
en el medio hay
una partcula
blanca espesa

201103 BIOQUMICA
Mezclar bien y
calentar a la
llama por 1 min.
se
presenta un
enturbiamiento
ms o menos
intenso
que persiste al
enfriamiento,
tambin puede
Observarse
pequeos
grumos en las
paredes del tubo.
Observe el tubo
sobre un fondo
oscuro.
SOLVENTES
ORGNICOS
SOLVENTES
ORGNICOS
HUEVO
Etanol al 95%.
Observe la
formacin de
precipitado
(enturbiamiento)
HUEVO
Acetona
Observe la
formacin de
precipitado
(enturbiamiento)
2ml
2ml
Precipitado,
espeso blanco en
la parte de arriba y
abajo liquido
amarillo claro.
2ml
2ml
precipitado turbio

201103 BIOQUMICA
Precipitado de
color blanco
HUEVO
DESNATURAL Caliente en agua

IZACIN
hirviendo durante
POR CALOR 10 minutos
asegurndose
que la
temperatura
interna llegue
a los 95 100C.
Observe la
formacin de
Precipitado
(enturbiamiento).
METALES
PESADOS
PRUEBA
2ml
2ml
HUEVO
2 ml
Gotas del metal

Calentar
suavemente a
bao mara si no
observa reaccin
inmediata.
5 gotas
PROCEDIMIENT CANTID
O
AD
EN UN TUBO DE
A
ENSAYO
ADICION
COLOCAR:
AR
JUGO
2 ml
Se forma un
precipitado de
color blanco
RESULTADO
OBTENIDO
No es positivo
IMAGEN

201103 BIOQUMICA
BIURET
MILLN
NaOH al 30%
(cuidado,
provoca
quemaduras
Mezclar
e
ir
aadiendo gota a
gota el
sulfato cprico al
1%
(CuSO4),
agitando
Despus de cada
adicin, hasta la
aparicin de un
color violeta, azul
o amarillo. El
color
violeta indica la
reaccin positiva
JUGO
REACTIVO DE
MILLN
2 ml
para protenas.
2ml
0.5 ml
Llevar a bao de
agua hirviendo
por
5min.Un color
rojo oscuro es
resultado
positivo.
XANTOPROTEICA
JUGO
HNO3
concentrado por
las paredes del
tubo,
(cuidado,
provoca
quemaduras).
Mezclar
bien,
calentar
a
la
bao mara y
Se obtuvo color
amarillo en la parte
de arriba y abajo
transparente
2 ml
1mL
2 ml
Precipitado de
color amarillo claro

201103 BIOQUMICA
observar un color
amarillo
claro.
Adicionar
solucin
de
NaOH al 40%
lentamente
sin
agitar y observar
un
naranja
intenso
como
resultado
positivo.
GRUPOS SH
REACCIN DE
LA NINHIDRINA
PRUEBA DEL
NITROPRUSIAT
JUGO
Hidrxido de
sodio al 40 %
(NaOH),
(cuidado,
provoca
quemaduras).
Acetato de Plomo
al 0.5 %
Mezclar bien,
calentar a bao
de agua
hirviendo por 4
min, un
precipitado negro
es prueba
positiva.
JUGO
AJUSTAR PH A
7.0
Solucin de
ninhidrina, hervir
a bao mara por
2 min. Observar
coloracin violeta
o morado intenso
JUGO
Solucin de nitro
1 ml
1 ml
1 ml
Positiva para
carbohidratos.
1ml
negativo
1ml
0.5 ml
Se ve un color
anaranjado casi

201103 BIOQUMICA
PRECIPITACIN
ACDICA
prusiato de sodio
Mezclar con el
extracto
problema
Adicionar
Hidrxido de
amonio (cuidado,
provoca
quemaduras y es
irritante para
Piel y fosas
nasales), deje
reposar por 5
min.
JUGO
cido actico al
30%
Agite y observe
la formacin
precipitado
(enturbiamiento)
Solucin
saturada de
Cloruro de sodio
(NaCl)
Mezclar bien y
calentar a la
llama por 1 min.
se
presenta un
enturbiamiento
ms o menos
intenso
que persiste al
enfriamiento,
tambin puede
Observarse
pequeos
grumos en las
paredes del tubo.
Observe el tubo
2 ml
transparente abajo
y en la parte de
arriba anaranjado
oscuro
.
0. 5 ml
2 ml
0.5 ml
1 ml
anaranjado en la
parte de arriba y
abajo transparente

201103 BIOQUMICA
sobre un fondo
oscuro.
SOLVENTES
ORGNICOS
SOLVENTES
ORGNICOS
JUGO
Etanol al 95%.
Observe la
formacin de
precipitado
(enturbiamiento)
JUGO
Acetona
2ml
2ml
No se ningn
cambio
2ml
2ml
No se nota ni
ninguna reaccin.
2ml
Se nota un color
Observe la
formacin de
precipitado
(enturbiamiento)
DESNATURALIZ
JUGO

201103 BIOQUMICA
ACIN
POR CALOR
METALES
PESADOS
PRUEBA
Caliente en agua
hirviendo durante
10 minutos
asegurndose
que la
temperatura
interna llegue
a los 95 100C.
Observe la
formacin de
Precipitado
(enturbiamiento).
2ml
JUGO
2 ml
Gotas del metal
5 gotas
Calentar
suavemente a
bao mara si no
observa reaccin
inmediata.
PROCEDIMIENT CANTID
O
AD
EN UN TUBO DE
A
ENSAYO
ADICION
COLOCAR:
AR
LECHE
2 ml
claro pero no tubo

reaccin de
precipitacin.
Se forma un
precipitado, su
espesor est en la
parte de arriba y
liquido casi
transparente en la
parte de abajo
RESULTADO
OBTENIDO
positivo para
IMAGEN

201103 BIOQUMICA
NaOH al 30%
(cuidado,
provoca
quemaduras
BIURET
MILLN
Mezclar
e
ir
aadiendo gota a
gota el
sulfato cprico al
1%
(CuSO4),
agitando
Despus de cada
adicin, hasta la
aparicin de un
color violeta, azul
o amarillo. El
color
violeta indica la
reaccin positiva
LECHE
REACTIVO DE
MILLN
2 ml
protenas
2ml
0.5 ml
Llevar a bao de
agua hirviendo
por
5min.Un color
rojo oscuro es
resultado
positivo.
XANTOPROT
EICA
LECHE
HNO3
concentrado por
las paredes del
tubo,
(cuidado,
provoca
Se obtuvo un
precipitado
2 ml
1mL
Precipitado de
color amarillo

201103 BIOQUMICA
quemaduras).
Mezclar
bien,
calentar
a
la
bao mara y
observar un color
amarillo
claro.
Adicionar
solucin
de
NaOH al 40%
lentamente
sin
agitar y observar
un
naranja
intenso
como
resultado
positivo.
GRUPOS SH
REACCIN DE
LA
NINHIDRINA
LECHE
Hidrxido de
sodio al 40 %
(NaOH),
(cuidado,
provoca
quemaduras).
Acetato de Plomo
al 0.5 %
Mezclar bien,
calentar a bao
de agua
hirviendo por 4
min, un
precipitado negro
es prueba
positiva.
LEHCE
AJUSTAR PH A
7.0
Solucin de
ninhidrina, hervir
a bao mara por
2 ml
1 ml
1 ml
1 ml
Positiva para
carbohidratos.
negativo
1ml
1ml

201103 BIOQUMICA
PRUEBA DEL
NITROPRUSIA
TO
PRECIPITACI
N ACDICA
2 min. Observar
coloracin violeta
o morado intenso
LECHE
Solucin de nitro
prusiato de sodio
Mezclar con el
extracto
problema
Adicionar
Hidrxido de
amonio (cuidado,
provoca
quemaduras y es
irritante para
Piel y fosas
nasales), deje
reposar por 5
min.
LECHE
cido actico al
30%
Agite y observe
la formacin
precipitado
(enturbiamiento)
Solucin
saturada de
Cloruro de sodio
(NaCl)
Mezclar bien y
calentar a la
llama por 1 min.
se
presenta un
enturbiamiento
ms o menos
intenso
que persiste al
enfriamiento,
tambin puede
0.5 ml
2 ml
0. 5 ml
2 ml
0.5 ml
1 ml
Precipitado de
color degradado,
predomina el
blanco al fondo,
seguido de
amarillo oscuro y
amarillo claro en
poca cantidad.
.
Precipitado de
color blanco, ms
espeso en la parte
de arriba.

201103 BIOQUMICA
Observarse
pequeos
grumos en las
paredes del tubo.
Observe el tubo
sobre un fondo
oscuro.
SOLVENTES
ORGNICOS
SOLVENTES
ORGNICOS
LECHE
Etanol al 95%.
Observe la
formacin de
precipitado
(enturbiamiento)
LECHE
Acetona
2ml
2ml
No se ningn
cambio
2ml
2ml
Se obtuvo un color
blanco con una
franja amarilla en
la parte de abajo y
espeso. Arriba
blanco menos
espeso
2ml
2ml
precipitado de
color amarillo
Observe la
formacin de
precipitado
(enturbiamiento)
DESNATURALI
ZACIN
LECHE
Caliente en agua

201103 BIOQUMICA
POR CALOR
hirviendo durante
10 minutos
asegurndose
que la
temperatura
interna llegue
a los 95 100C.
Observe la
formacin de
Precipitado
(enturbiamiento).
LECHE
2 ml
Gotas del metal
5 gotas
Calentar
suavemente a
bao mara si no
observa reaccin
inmediata.
METALES
PESADOS
claro, su espesor
est en la parte de
abajo y arriba, en
el medio se
encuentra un
lquido
transparente
precipitado blanco
de espesor en la
parte de arriba y
abajo, se nota
liquido en el centro
CONCLUSIONES
Si no se realiza las pruebas con sus respectivos pasos la prueba tiende a

no salir positiva, por lo tanto tocara volver a intentarlo.

201103 BIOQUMICA
PRCTICA DE LABORATORIO 2
ACTIVIDAD ENZIMTICA
INTRODUCCIN
La realizacin de esta actividad nos permiti ver el cambio que sufre las enzimas
por factores como la temperatura, el tiempo que transcurre para que la enzima se
desnaturalice, o se cataliza la degradacin del almidn.
El almidn en presencia del Lugol presenta una coloracin azulada debido a la
interaccin fsica entre el yodo y las molculas de almidn. Cuando la amilasa

201103 BIOQUMICA
degrada el almidn, elimina esa propiedad de interactuar con el yodo por lo tanto
presenta coloracin azulada.
Se trata de determinar cul es la temperatura y pH ptimos de esta enzima. Se
realizan diferentes pruebas para determinar sus cambios.
Teniendo en cuenta que las enzimas son macromolculas, como las protenas,
siendo estas las catalizadoras de las reacciones bioqumicas. Es importante
destacar que las enzimas no modifican el balance energtico ni el equilibrio de
aquellas reacciones en las que intervienen: su funcin se limita a ayudar a
acelerar el proceso. Esto quiere decir que la reaccin bajo el control de una
enzima alcanza su equilibrio de manera mucho ms rpida que una reaccin no
catalizada.
MARCO TERICO
ACTIVIDAD ENZIMTICA:
La sustancia sobre la cual acta una enzima se llama sustrato. Los sustratos son
especficos para cada enzima:
El grado de especificidad de las enzimas es muy alto, pueden distinguir incluso
entre diferentes tipos de ismeros. Se cree que la especificidad de la enzima es
debido a la forma particular de una pequea parte conocida como sitio activo, la
cual se fija a la contraparte complementaria en el sustrato.
Factores que afectan la actividad enzimtica

201103 BIOQUMICA
Concentracin del sustrato.- A mayor concentracin del sustrato, a una

concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima. Despus de que
se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del sustrato no tiene
efecto en la velocidad de la reaccin.
Concentracin de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible, un
aumento en la concentracin de la enzima aumenta la velocidad enzimtica hacia
cierto lmite.
Temperatura.- Un incremento de 10C duplica la velocidad de reaccin, hasta
ciertos lmites. El calor es un factor que desnaturaliza las protenas por lo tanto si
la temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su actividad.
pH.- El pH ptimo de la actividad enzimtica es 7, excepto las enzimas del
estmago cuyo pH ptimo es cido.
Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean
activadores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las enzimas que
tienen cofactores, la concentracin del cofactor debe ser igual o mayor que la
concentracin de la enzima para obtener una actividad cataltica mxima.
Los resultados que obtuvimos nos demostraron que la velocidad enzimtica se ve
afectada por la presencia de enzimas que hay en la solucin.
La amilasa es una enzima que acta en los procesos de digestin de
carbohidratos, especial mente acta sobre el almidn, es una enzima glucoltica, y
se presenta en las glndulas salivales en el ser humano.

201103 BIOQUMICA
OBJETIVOS
OBEJTIVO GENERAL
Demostrar la accin de la amilasa salival sobre el almidn
Identificar que la amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la

saliva humana y
cataliza
la
degradacin
del
almidn,
que
es un polisacrido de reserva vegetal.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Identificar de forma cualitativa las propiedades de la amilasa salival.

201103 BIOQUMICA
Determinar caractersticas bsicas de la reaccin de hidrlisis del almidn

catalizada por la amilasa salival.
Asociar el efecto de la concentracin de la enzima, la temperatura y el pH

sobre la reaccin de degradacin de almidn.
Dentro del proceso digestivo es necesario degradar las biomolculas a nivel

es ms sencillos para poder absorbidas, reacciones en las cuales actan
diversas enzimas, entre las que se cuenta la Amilasa Salival o ptialina, que
participa en la degradacin de Almidn, obtenindose Maltosa y Glucosa.
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayo
Gradilla para tubos
Erlenmeyer de 100 ml
Plaquetas de porcelana
Pipetas de 5 ml
1 probeta de 100 ml
Papel indicador de pH

201103 BIOQUMICA
Solucin de almidn al 0,5% + NaCl al 0,25%

Amortiguadores de pH: (3,0) (5,0) (7,0) (10,0)
Bao de 37 C
Bao de agua hirviendo
Bao de hielo
1 beaker de 50 ml
1 termmetro
Mechero
Agua
Papel absorbente.
Saliva de un estudiante.
1. Estimule el flujo de saliva y colecte 10ml en una probeta de 100 ml.

2. Con ayuda de una probeta y depositando las soluciones en el Erlenmeyer de
100ml realice una serie de diluciones de la saliva con agua de la llave:

201103 BIOQUMICA
3. Mida la actividad de las cuatro diluciones de saliva de la siguiente manera:

a. En las placas de porcelana agregue una gota a casa pozo de solucin de yodo.
b. En un tubo de ensayo (tubo 1) vierta 2 ml de amortiguador de pH 7.0 y 2 ml de
la suspensin de almidn al 0.5%. Pruebe la presencia de almidn sacando una
gota de la suspensin de este tubo y agrguela en uno de los pozos de la placa de
porcelana. Verifique que d el color azul intenso caracterstico como blanco de
reaccin
c. En otro tubo (tubo 2) vierta 1 ml de solucin de saliva al 10%.
d. Registre el tiempo cero (0) en su cronometro e inmediatamente vierta el

contenido del tubo con el almidn (tubo 1) en el tubo que contiene la saliva al 10%
(tubo 2), agite y comience la medicin del tiempo de la reaccin; para ello cada 10
segundos saque una gota del tubo de la mezcla y colquela en un pozo con yodo
de la plaqueta de porcelana.
e. Contine la prueba cada 10 segundos hasta que el color sea igual al de la
solucin de yodo, este ser el indicio de que la reaccin ha terminado. Escriba el
dato del tiempo en minutos transcurrido desde el comienzo hasta el final de la
reaccin y calcule la velocidad como el inverso del tiempo 1/t en min1.

201103 BIOQUMICA
4. Repita el mismo procedimiento con las dems diluciones de saliva (5%, 2%,
1%). Dependiendo de las velocidades de reaccin, se pueden alargar los
intervalos de tiempo entre las pruebas.
5. Registre cada uno de los datos obtenidos tanto en minutos como en min-1.
Velocidad de Reaccin vs. Temperatura

1. Determine los tiempos de reaccin de la hidrlisis del almidn a pH 7.0, para
ello utilice la saliva de concentracin del 5% a diferentes temperaturas: bao de
hielo, temperatura ambiente, 37C, 60C y bao de agua hirviendo.
2. Prepare una placa de porcelana con gotas de yodo.
3. Para ello en un tubo de ensayo (tubo 1) vierta 2 ml de amortiguador de pH 7.0 y
2 ml de la suspensin de almidn al 0.5% y mantenga estos dos tubos en el bao
de la temperatura a evaluar por 5 minutos.
4. Manteniendo siempre los tubos de reaccin en el bao de temperatura a
evaluar registre el tiempo cero (0) en su cronometro e inmediatamente vierta el
contenido del tubo con el almidn (tubo 1) en el tubo que contiene la saliva al 5%
(tubo 2), agite y comience la medicin del tiempo de la reaccin; para ello cada 10
segundos saque una gota del tubo de la mezcla y colquela en un pozo con yodo
de la plaqueta de porcelana.
5. En las temperaturas extremas (0 grados y ebullicin) la reaccin puede
transcurrir muy lentamente, realice estos ensayos de manera simultnea con
intervalos de 1 a 5 minutos y por un mximo de 20 minutos.
6. Registre los datos obtenidos en cada reaccin tanto en minutos como en min-1.
Velocidad de Reaccin vs. pH

201103 BIOQUMICA
1. Siguiendo el mismo procedimiento de los experimentos anteriores determine el

tiempo de reaccin a pH de 3.0, 5.0, 7.0, 8.0 y 10.0 utilizando la solucin de saliva
al 5% a temperatura ambiente.
2. A los valores de pH extremos, la reaccin puede ser muy lenta. Realice estos
ensayos de manera simultnea con intervalos de 1 a 5 minutos y por un mximo
de 20 minutos.
3. Registre los datos obtenidos en cada reaccin tanto en minutos como en min-1.
Desarrollo de la Prctica
PRCTICA
PORCENTAJE
RESULTADO
10ml de saliva
%
10%
120 seg. Se
+ 90ml de agua
activ la
enzima
50 ml de
solucin al
10% +50 ml de
agua
5%
3min. Se activ
la enzima
IMAGN

201103 BIOQUMICA
10
ml
de
solucin
al
1%
5 min. Se activ
la enzima.
10% + 90 ml de
agua
PRCTICA
AGUA HIRVIENDO
PROCEDIMIENTO
Colocamos la solucin en bao
mara por 5min. Despus lo
mezclamos y comenzamos el
proceso.
La enzima no se activ sobre el
almidn y la temperatura.
Pasados 7min. No aclaro o sea no
hay degradacin.
A TEMPERATURA BAJA (Hielo)
Colocamos la solucin en hielo por

201103 BIOQUMICA
5min.
Pasados los 3 min. No hubo
A TEMPERATURA 37C
reaccin.
Colocamos la solucin por 5min. En
agua a temperatura 37C y esta
REACCIN pH 5.0
prueba se degrado a los 30 seg.

Colocamos la solucin pH 5.0 y la
REACCIN pH 10.0
reaccin fue a los 3min.

Colocamos la solucin en pH 10.0 y
en esta el proceso es ms lento por
el pH es alto o sea es bsico. Y la
enzima no se activ.
CONCLUSIONES.
Diferentes factores ambientales como la variacin de pH, temperatura o
presencia de inhibidores pueden afectar a la actividad enzimtica.
Las enzimas son los catalizadores biolgicos muy importantes ya que casi
todos los procesos en las clulas los necesitan para que ocurran a unas
tasas significativas.
La amilasa requiere de una temperatura de 37C para tener una ptima
actividad enzimtica.

201103 BIOQUMICA
Las enzimas dependen de dos factores importantes para su actividad

enzimtica como la temperatura y el pH medios en los que reacciona.
REFERENCIAS BIBLIGRAFICAS
Recuperado de: Definicin de enzima - Qu es, Significado y Concepto
http://definicion.de/enzima/#ixzz3bGTVpc81
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/352001/MODULO_BM_UNAD_UNIDAD_1.
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201103 BIOQUMICA

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