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VETORES DE
CLONAGEM PARA E. coli
Tipos de vetores
Vetores de clonagem baseados em plasmdeos;
Vetores de clonagem baseados no bacterifago
M13;
Vetores de clonagem baseados no bacterifago
lambda ().
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pBR322
pequeno (4363 bp) permite clonagem de fragmentos
com 6Kbp e clonado facilmente.
Tem duas marcas de seleo (resistncia ampicilina e
tetraciclina) cada uma com um local de restrio nico.
Tem vrios locais de restrio nicos que permitem
clonar genes com vrios tipos de extremidades coesivas.
Tem um nmero de cpias razoavelmente elevado e
que pode ser aumentado na presena de um inibidor da
sntese proteica, o cloranfenicol (at 1000-3000 cpias).
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pBR327
Construdo pela remoo de 1.089 pb de
pBR322;
Manteve os genes de resistncia antibiticos;
Difere de pBR322 nos seguintes aspectos:
- Apresenta mais cpias por clula (30 a 40
cpias)
- A deleo eliminou a capacidade conjugativa de
pBR322, transformando-o em no-conjugativo.
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pUC8
Elevado nmero de cpias (500-700 por clula);
Identificao de recombinantes num nico passo uso
do gene LacZ;
Locais de restrio aglomerados numa nica regio e
que permitem que as duas extremidades dos
fragmentos sejam cortadas por enzimas diferentes;
Resistncia ampicilina.
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pGEM3Z
Semelhante a pUC: contm genes ampR e
lacZ, alm de ser do mesmo tamanho;
Possui 2 pedaos de DNA extras: regies
promotoras para RNA-polimerase atuar;
Transcrio in vitro do DNA clonado
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pGEM3Z
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relembrando...
BACTERIFAGOS
M13mp7
Caractersticas:
Genoma do fago.
Gene LacZ que permite a seleo de
recombinantes.
Polylinker local mltiplo de clonagem, no
interior do LacZ. Tem locais de restrio para
EcoRI, BamHI, SalI e PstI
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M13mp7
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MTODOS DE MODIFICAO
DE EXTREMIDADES DO DNA
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