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INTRODUCCION

La mastitis bovina es una de las limitantes ms importantes de la produccin lechera en


todo el mundo (DeGraves and Fetrow, 1993). El control de la salud mamaria se basa en
prcticas de higiene durante el ordeo y terapia antibitica para el tratamiento de casos
clnicos y subclnicos. Los ndices de curacin bacteriolgica, entendiendo por esta, la
ausencia del organismo causante en la secrecin mamaria tres o cuatro semanas luego del
tratamiento, son altos frente a las distintas especies del gnero Streptococcus, mientras que
frente a Staphylococcus aureus y organismos coliformes son mucho menores (Francis,
1989). La pobre respuesta a la terapia antibitica frente a S. aureus se debe a factores tales
como incorrecta dosificacin, limitantes farmacocinticas, latencia bacteriana, accin
deletrea del antibitico sobre los neutrfilos reinfecciones y resistencia a los antibiticos
(Anderson, 1986; Sandholm, 1991).
Hoy en dia se siguen utilizando tratamientos empricos por parte de los dueos de establos
sin conocimiento alguno de los riesgos que implica para la salud publica y de las mismas
vacas en el establo asi como de la creacin de resistencia por parte de las bacterias,
principalmente contagiosas por lo que este trabajo va orientado a conocer la resistencia a
los antimicrobianos que presenta Staphylococcus aureus aislados de vacas que presentan
mastitis clnica y subclnica del distrito de Zurite Provincia de Anta.
JUSTIFICACION
La aplicacin de terapia antimicrobiana obliga a seguir los principios de un uso prudente de
antibiticos que es propuesta por varias organizaciones cientficas.
Al aplicar un protocolo prudente y eficaz para el tratamiento de la mastitis; deben ser
considerados diferentes factores como: el tipo de patgeno involucrado, susceptibilidad
patente al antibitico, severidad de la respuesta inflamatoria, duracin de la infeccin,
estadio de lactacin y edad de la vaca (Zecconi 2006).
Dichos principios deben ser aplicados al Staphylococcus aureus y en este aspecto tambin
la concentracin mnima inhibitoria, el anlisis mas comprehensivo de los diferentes
factores que afectan la tasa de cura para Mastitis Clinica, Subclinica y para vacas secas
afectadas por Staphylococcus aureus (Zecconi 2006; Zschock 2005).
Cuando estos factores son considerados y la terapia es aplicada seleccionando molculas en
relacin al resultado de susceptibilidad y es seguido un protocolo racional y eficiente la tasa
de cura especifica para S.aureus puede ser mayor al 75% para ambos casos (terapia de
vacas secas y tratamiento de vacas frescas)(Zecconi 2006).
En aos recientes; protocolos teraputicos severos basados en diferentes combinaciones de
tratamientos (inflamatoria + parenteral; diferentes combinaciones de molculas, diferentes

tratamientos en relacin al tiempo, administracin prolongada, etc) tienden a ser propuestos


( Osteras 1999; Radostits 1999; Zecconi 2006).
Sin embargo el mal uso y abuso de los frmacos en las granjas lecheras para el tratamiento
de enfermedades infecciosas como la Mastitis, ha llevado a que se establezca una alta
presin de seleccin por parte de los microorganismos contagiosos hacia los antibiticos y
por lo tanto; se ha dado el desarrollo de resistencia a antimicrobianos, la importancia de
esta radica en que tiene un impacto negativo en la salud pblica, econmica y eficiencia
productiva de la granja.

HIPOTESIS
Se asume que Staphylococcus aureus es resistente a los diferentes antibiticos por la
deficiente administracin para combatir la mastitis bovina.
OBJETIVOS
Objetivo general:
Conocer la resistencia a diferentes antimicrobianos que presenta Staphylococcus aureus
aislado de leche de vacas lecheras con mastitis del Distrito de Zurite, Provincia de AntaCusco.

Objetivos especficos:
a) Determinar de la presencia de Mastitis Clinica y Subclinica en establos del Distrito
de Zurite.
b) Aislar e identificar a Staphylococcus aureus en los casos de Mastitis Clinica y
Subclinica por la prueba de White side.
c) Evaluar la resistencia de Staphylococcus aureus por pruebas de difusin en gel de
agar.
d) Evaluar la resistencia de Staphylococcus aureus a diversar drogas antimicrobianas.

CAPITULO 1
MARCO TEORICO

1. ANTECEDENTES
1.1 ANTECEDENTES INTERNACIONALES

Russi Norma, M.V (2008). Argentina. Determin la susceptibilidad in vitro frente a


antimicrobianos de 95 cepas de Staphylococcus aureus aislados de mastitis bovina en la
cuenca lechera central de Argentina utilizando el mtodo de la concentracin inhibitoria
mnima (CIM) y el mtodo de difusin en agar.
Adems, se evaluaron los puntos de corte actualmente utilizados en las pruebas de difusin
en agar para la eritromicina para clasificar a cepas de S. aureus aisladas de mastitis bovina
en nuestro pas. Se estimaron los puntos de corte para el mtodo de difusin en agar
utilizando los puntos de corte de CIM indicados por el National Committee for Clinical
Laboratory Standards (NCCLS) sobre 192 cepas de S. aureus aisladas de mastitis bovina en
Argentina, utilizando anlisis de regresin lineal y mtodo de error rate-bounded.
Faria, jose; Garcia Aleida; Marquez Angelina.(1999). Venezuela Realizaron pruebas a
200 muestras de leche cruda recogidas aleatoriamente de cantaras provenientes de las fincas
de El laberinto, Maquiches de Perija, y la costa oriental del Lago de Maracaibo, se les
determino la presencia de inhibidores microbianos por el mtodo de cloruro difenil
tretazolium, los que eran antibiticos con el mtodo de disco ensayo. Las cepas aisladas se
conocen como cocos gran positivos por morfologa colonial y tincin gram. la sensibilidad
frente a 15 antomicrobianos se realiz con el mtodo de disco de Bauer. Todas las especies
mostraron resistencia mltiple, al ser resistente a mas de una droga.
Pelegrino, Frolla, Odierno (2002). Argentina. Evaluaron la resistencia de cepas de S.
aureus aisladas de leche frente a antimicrobianos utilizados en el tratamiento de la mastitis
bovina y estudiar la relacin entre las cepas resistentes y la presencia de casos de la
enfermedad. De las 271 muestras de leche se aislaron 300 cepas bacterianas. El anlisis de
los datos permiti determinar que no existe asociacin directa entre la presencia de mastitis
y el aislamiento de S. aureus resistentes. De acuerdo con estos resultados, se pudo concluir
que las cepas de S. aureus aisladas mostraron una elevada resistencia, sin que ello est
necesariamente relacionado con la presencia de mastitis bovina en los tambos estudiados.
Betancourt Orianna, Scarpa Cristian, Villagran Karen. (2003).Chile. Determinaron las
concentraciones mnimas inhibitorias de penicilina G, ampicilina, cloxacilina, neomicina y
enrofloxacino para 39 cepas de Staphylococcus aureus aisladas de leche de vacas afectadas
con mastitis subclnica provenientes de 3 sectores de la IX Regin de la Araucana (Chile),
con el propsito de evaluar in vitro sus patrones de resistencia. Para ello se utilizaron los
mtodos de difusin y dilucin en agar, segn las recomendaciones del NCCLS.
Adems, determin la presencia de cepas productoras de b-lactamasa mediante el mtodo
cromognico de nitrocefin. Se detect un alto porcentaje de cepas resistentes a penicilina G
y ampicilina. Cloxacilina, neomicina y enrofloxacino mostraron actividad hacia todas las
cepas.

Acua Vanesa, Rivadeneira Alexandra. (2008). Ecuador. Aisl e identific los agentes
causales de mastitis y determinar la sensibilidad de los patgenos en las muestras frente a
los diferentes antibiticos utilizados, empleando para ello la prueba de CMT (California
Mastitis Test).
La fase de laboratorio se llev a cabo en los Laboratorios Veterinarios del Instituto
Nacional de Higiene, ubicado en la provincia de Pichincha. En el mismo que fueron
sembradas las muestras de leche en agar sangre y MacConkey e incubadas por 24 horas a
37C. Posterior a su crecimiento se realiz: la coloracin Gram; pruebas bioqumicas de
catalasa, coagulasa y manitol para identificar bacterias Grampositivas y pruebas
bioqumicas con citrato de Simmons, TSI, urea, indol, Rojo de Metilo - Voges-Proskauer
(RM-VP), Lysine iron agar ( LIA) para identificar bacterias Gramnegativas.
Las pruebas bioqumicas permitieron una clara identificacin del patgeno, siendo cada
colonia una unidad experimental.
Kutchynskaya J Valero Leal. (2012). Venezuela. El estudio se llev a cabo en el estado
Zulia, Venezuela, en los municipios Jess Enrique Lossada, Miranda y Caada de Urdaneta.
Los animales consistieron en vacas mestizas de doble propsito que procedan de nueve
fincas lecheras donde se produce queso artesanal. Las muestras de leche de los animales
que padecan mastitis subclnica en el rebao fueron seleccionados utilizando la prueba de
California para Mastitis (CMT). A las muestras que arrojaron un resultado de CMT 2+ se
les realiz cultivo bacteriolgico. En total, 313 muestras de leche de cuartos mamarios con
mastitis subclnica, 9 muestras de leche de cntara, 9 de cuajada y 9 de queso fresco fueron
recolectadas. Para la identificacin presuntiva de todos los aislamientos se uso la coloracin
de Gram, prueba de catalasa, coagulasa, Voges- Proskauer y fermentacin del manitol.
Todos los aislamientos coagulasa positiva, adems fueron caracterizados por la galera de
pruebas API Staph. Posterior a la caracterizacin bioqumica, los aislamientos de S. aureus
fueron confirmados molecularmente mediante la amplificacin del gen nuc especfico de
especie. Las cepas de S. aureus fueron susceptibles a 8 de los 14 antimicrobianos probados
y mostraron resistencia a tetraciclina (11%), estreptomicina (8%), penicilina (4%),
ciprofloxacina y enrofloxacina (1%, respectivamente).
Bedolla Eduardo, (2011). Mexico. Determin la resistencia antibitica de Staphylococcus
aureus aislados de leche de vacas con mastitis de Tjaro, Michoacn. El estudio se realiz
en 16 hatos lecheros de la poblacin de Tjaro municipio de Tarmbaro, Michoacn, los
cuales cuentan con 8 vacas en promedio. La mastitis subclnica se determin mediante la
prueba de California de acuerdo con Wolter et al (2004), se obtuvieron 484 muestras de
leche de 122 vacas en produccin. La identificacin de los estafilococos se llev a cabo a
travs de su morfologa colonial, prueba de catalasa, tincin Gram, prueba de coagulasa,
prueba de manitol gelatina y hemlisis. La prueba de susceptibilidad antibitica se llev a
cabo a travs del mtodo de difusin en disco en agar Mueller-Hinton con 102 cepas de
estafilococos (41 S. aureus y 61 Estafilococos Coagulasa Negativos) aisladas de las
muestras de leche que se obtuvieron de los casos de mastitis subclnica de los hatos
lecheros. Se encontr que de las 41 cepas de S. aureus estudiadas, 26 (63.41%) fueron
resistentes a cuatro antibiticos, de las cuales 12 (29.2%) fueron resistentes a la penicilina,

9 (21.9%) a la ampicilina, 4 (9.7%) a la eritromicina y solamente 1 (2.4%) result resistente


a las tetraciclinas. Se concluye que las cepas de Staphylococcus aureus aisladas en este
trabajo mostraron mayor resistencia in vitro a los antibiticos de uso frecuente en la terapia
de la mastitis bovina como son la Penicilina y Ampicilina.
1.2 Antecedentes Nacionales y Locales
Adrianzen Gloria, (2007) Ayacucho. Realizo un estudio en la comunidad de Union
Paqchaq con el fin de identificar las bacterias que producen Mastitis clnica y subclnica
empleando la prueba modificada de White side y anlisis bacteriolgico.
De 36 vacas el 83.3 % resultaron positivas a la prueba de White side. El porcentaje de
mastitis subclnica fue mayor en el periodo de lactacin (11.20%) y segn el numero de
lactaciones, la primera tuvo 5 (13.9%) presentando los mayores porcentaje en la segunda y
tercera lactacin con 7 (22.2%) en la cuarta lactacin ,6 (18.4%) respectivamente.
De 144 cuartos , 02 estuvieron atrofiados , 02 con mastitis clnica y 140 con mastitis
subclnica. De 36 vacas, 10 (10.2%) presentaron afeccion en un cuarto, 38 (38.8%) en dos
cuartos, 27 (27.6%) en tres cuartos y 23 (23.5%) en los cuatro cuartos.
70.0 % de las muestras fueron positivas al anlisis bacteriolgico. Las principales bacterias
identificadas fueron: Staphylococcus aureus con un 20.4%, Escherichia coli y Penicillun,
con 7.3% respectivamente.
Los antibiticos resisensibles a Staphylococcus aureus fue la gentamicina.
Alagon Gilbert, (1979). Cusco. Realizo un estudio sobre Mastitis Bovina en el valle
sagrado de los Incas, hallando vacas con Mastitis y haciendo un anlisis bacteriolgico
obteniendo de 36 muestras procesadas, 16 aislamientos positivos, teniendo: 5 casos de
streptococcus (31.25%), 7 casos de Staphylococcus coagulasa positivos (43.75%) y 4 de
staphylococcus coagulasa negativos (25.00%), indicando que en el valle en estudio estn
presentes los agentes etiolgicos mas importantes de la mastitis.
1.3 DEFINICION DE MASTITIS
Del griego Mastos=Glandula mamaria y del sufijo itis=inflamacin , por lo tanto se define
como la inflacin de la glandula mamaria que generalmente se presenta como respuesta a la
invasin por microorganismos y se caracteriza por daos en el epitelio glandular, seguido
de una inflamacin clnica o subclnica, pudiendo presentarse como cambios patolgicos
localizados o generalizados dependiendo de la magnitud del dao ( Ruegg 2001; Avila
2004; Cano 2004, Radostits 1999; Leslie 2004).

1.4 TIPOS DE MASTITIS


1.3.1. Mastitis clnica

En algunos casos la inflamacin de los cuartos mamarios es acompaada de signos clnicos


(signos pronunciados de inflamacin mamaria y de enfermedad sistmica), por lo que es
diagnosticada entonces como mastitis clnica (Djabri et al., 2002) .
La mastitis clnica es una anormalidad fcilmente observada por los granjeros en cualquiera
de los dos casos: la leche y/o la ubre (de Mol, 2000). Es un problema que subsiste en
muchos hatos lecheros (Barkema et al., 1999). Se caracteriza por la tumefaccin o dolor en
la ubre, enrojecimiento, la leche presenta una apariencia anormal y, en algunos casos, hay
aumento de la temperatura rectal, letargo, anorexia e incluso la muerte. Adems, las
bacterias estn presentes en la leche, el rendimiento es muy reducido, y su contenido est
alterado considerablemente (Heringstad et al., 2000; Schrick et al., 2001). La mastitis
clnica debida a Escherichia coli (E. coli), estreptococos ambientales, y Staphylococcus
aureus (S. aureus) continua siendo un problema importante (Schukken et al., 1999). Y
puede ser una condicin aguda y dolorosa que afecta el comportamiento animal (Zadoks,
2002). Durante la primera lactacin, este tipo de mastitis, resulta en obvias prdidas como
son disminucin en la produccin de leche y alteraciones en la composicin de la misma
(Barker et al., 1998). En un estudio realizado por Barker et al. (1998), demostraron que las
vacas con mastitis clnica durante la primera lactacin presentaron un prolongado intervalo
hasta el primer servicio (94 das) comparado con animales que no presentaron mastitis
clnica (71 das). Adems, las vacas con mastitis clnica entre el primer servicio y el
establecimiento de la gestacin tuvieron un aumento en el nmero de das abiertos y un
doble aumento de servicios por concepcin (Hockett et al., 2000). La mastitis clnica es una
enfermedad costosa en las granjas lecheras de los Estados Unidos, con una tasa promedio
de incidencia lactacional de 14.2% de acuerdo a un anlisis retrospectivo de 62 reportes
realizados (Smith et al., 2001).
En el Reino Unido, la incidencia de mastitis clnica es aproximadamente de 40 casos por
cada 100 vacas por ao o un milln de casos anualmente (Hillerton y Kliem, 2002). Segn
Heringstad et al. (2000) en 1993, el nmero de casos de mastitis clnica por 100 vacas al
ao fue de 56, 32, 30 y 21 en Dinamarca, Finlandia, Noruega y Suiza respectivamente. En
varios estudios realizados en California, Michigan y Ohio las incidencias de mastitis que se
encontraron fueron de 30, 33 y 37 casos por 100 vacas por ao respectivamente. Estas
estimaciones incluyen las mastitis reportadas por los dueos y tratadas por los veterinarios.
Los costos estimados por mastitis clnica varan dependiendo del pas y presupuesto e
incluyen los costos del tratamiento y veterinario, la reducida produccin de leche durante la
parte restante de la lactacin, las prdidas de leche que ha sido desechada debido a
contaminacin con antibiticos, eliminacin temprana, labor extra, disminucin de la
calidad de la leche e incremento de los riesgos de la enfermedad en el futuro. Los costos
estimados por caso de mastitis clnica en Noruega son de 460 dlares americanos, en base a
todos los costos arriba mencionados. Las prdidas econmicas estimadas en Finlandia
debido a un caso de mastitis clnica fueron de 215 dlares americanos en base al valor de
leche desechada, costos en veterinario, medicina y de labor extra. Los costos de la mastitis
clnica reportados por granjeros de Estados Unidos varan de 108 a 122 dlares por caso, en
base a medicamentos y veterinario, preventivos, de trabajo extra, desecho y prdidas de
leche (Heringstad et al., 2000).
1.3.2. Mastitis subclnica.

La mastitis subclnica es definida como la presencia de un microorganismo en combinacin


con un conteo elevado de clulas somticas de la leche (de Mol, 2000).
El conteo elevado de clulas somticas en la leche indica mastitis subclnica (Hultgren,
2002). Este tipo de mastitis no presenta cambios visibles en la leche o ubre. Se caracteriza
por el reducido rendimiento de leche (Schrick et al., 2001), composicin alterada de la
leche y la presencia de componentes inflamatorios y bacterias en la leche (Heringstad et al.,
2000). Cuando los signos no son visibles, la presencia de patgenos y las modificaciones
citolgicas de la leche traen como resultado una mastitis subclnica (Djabri et al., 2002),
por lo que las tcnicas de laboratorio como la medicin del conteo de clulas somticas y el
cultivo bacteriolgico son necesarios para detectar inflamacin e infeccin (Barker et al.,
1998). La mastitis, particularmente subclnica y crnica, es la ms persistente y ms comn
del grupo de enfermedades de importancia por la higiene de la leche en el ganado lechero.
La mastitis subclnica ocurre frecuentemente, y puede conducir a grandes prdidas
econmicas debido al reducido rendimiento de leche, y multas a causa de los elevados
conteos de clulas somticas presentes en los tanques de leche. En la prctica, los casos de
mastitis subclnica con frecuencia no son detectados rpidamente, o pueden incluso no ser
reconocidas por el ordeador (Wellenberg et al., 2002). Segn Wellenberg et al. 2002,
actualmente las prdidas ocasionadas por ambos tipos de mastitis clnica y subclnica
pueden ascender a 20% de la produccin potencial.
1.4. IMPACTO DE LA MASTITIS EN LA SALUD PBLICA
El amplio consumo de productos lcteos y las recientes epidemias de enfermedades
animales que reciben mucha publicidad ha aumentado la preocupacin del consumidor
acerca de la calidad de alimentos de origen animal, coincidente con estas tendencias, la
globalizacin que ha influenciado la definicin de leche de alta calidad adems que las
expectativas del consumidor cada vez afectan ms las prcticas de manejo animal (Patio,
2008). La resistencia cuesta dinero, medios de subsistencia y vidas humanas, y amenaza
con socavar la eficacia de los programas de atencin de la salud. Se ha descrito
recientemente como un problema para la estabilidad mundial y la seguridad de los pases.
Pocos estudios han indicado que los clones resistentes se pueden reemplazar por otros
susceptibles; sin embargo, en general, tarda en revertirse o es irreversible (Organizacin
Mundial de la Salud, 2001). La leche contaminada pone en peligro la salud de quienes la
consumen, en el caso del hombre cobra gran importancia la diseminacin de bacterias
causantes de enfermedades tales como: tuberculosis, brucelosis, faringitis estreptoccica,
entre otras (vila et al., 2004; Ruiz y Romero, 2003; Patio, 2008). Segn Reinemann,
(1998) las dos fuentes ms importantes de bacterias en la leche cruda son: 1) Los patgenos
de la mastitis de la ubre. 2) Los patgenos ambientales que contaminan la mquina de
ordeo (Patio, 2008).

1.5. CLASIFICACIN DE LOS AGENTES PATGENOS CAUSANTES DE LA


MASTITIS BOVINA

En la glndula mamaria bovina se han identificado hasta 140 especies, subespecies y


serovariedades microbianas. Las tcnicas microbiolgicas han permitido la determinacin
precisa de la identidad de muchos microorganismos patgenos de la mastitis. Tomando
como base la epidemiologa y la fisiopatologa, se han clasificado estos microorganismos
como causantes de la mastitis contagiosa o ambiental, en base a su asociacin
epidemiolgica con la enfermedad y a su proclividad de causar la infeccin oportunista,
persistente o transente, respectivamente (Bedolla y Castaeda, 2003; Radostits et al.,
2002; Riffon et al., 2001; Rossitto et al., 2002; Gallegos y Moncada, 2011). Segn Riffon
et al. 2001, las bacterias responsables de la mastitis bovina pueden ser clasificadas como
contagiosas y ambientales, dependiendo de su reservorio primario y el ambiente contra el
cuarto de la glndula mamaria infectada.
1.5.1. Patgenos causantes de la mastitis contagiosa
Los patgenos contagiosos de primera importancia incluyen al Staphylococcus aureus,
Streptococcus agalactiae, Corynebacterium spp., y al Mycoplasma spp. (Riffon et al.,
2001; Rossitto et al., 2002; Djabri et al., 2002). Son organismos transmitidos de vaca a
vaca a travs de los paos utilizados para limpiar las ubres, la leche residual en las
pezoneras y un equipo de ordeo inadecuado donde el reservorio primario que alberga los
patgenos es el animal infectado o el cuarto de la ubre (Bedolla y Castaeda, 2003; Rossitto
et al., 2002; Zadoks et al., 2001; Radostits et al., 2002), y la exposicin de los cuartos
mamarios no infectados se restringe al proceso de la ordea (Zadoks et al., 2001; Zadoks,
2002; Gallegos y Moncada, 2011; Bedolla, 2011).
Los patgenos contagiosos de la mastitis como el Staphylococcus aureus y Streptococcus
agalactiae que son infecciosos a nivel individual y a nivel de poblacin (Zadoks, 2002),
han sido reportados bajo control en los hatos lecheros a travs del uso de prcticas de
manejo que utilizan la desinfeccin de las tetas despus de la ordea, terapia de la vaca
seca, desecho, mantenimiento del equipo de ordeo, y terapia antibitica de las infecciones
intramamarias (Rossitto et al., 2002; Bedolla, 2011).
A pesar de que la mastitis por organismos contagiosos (especialmente Streptococcus
agalactiae) ha disminuido por mejoramiento en el manejo, las prdidas econmicas debido
a la enfermedad pueden continuar porque los organismos causales no pueden ser
erradicados del medio ambiente de las vacas lecheras (Nash et al., 2002). En general, un
programa de control de la mastitis concienzudo puede erradicar a Streptococcus agalactiae
de la mayora de los rebaos lecheros. Es mucho ms difcil tratar los rebaos en los que
Staphylococcus aureus tiene una prevalencia alta (Radostits et al., 2002).
1.5.2. Patgenos causantes de la mastitis ambiental
Los patgenos principales en este grupo son los bacilos entricos Gramnegativos
(Escherichia coli, Klebsiella spp.), Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, y
Enterococcus spp. (Rossitto et al., 2002).
Otros microorganismos patgenos se incluyen en la clase ambiental de este tipo de
infecciones. Se trata generalmente de oportunistas que invaden la glndula mamaria cuando
los mecanismos de defensa estn disminuidos o cuando se introducen inadvertidamente en

la glndula mamaria al realizar un tratamiento intramamario. Este grupo de


microorganismos oportunistas incluyen a Pseudomona spp., levaduras, Prototheca spp.,
Serratia marcescens y Nocardia spp. Cada uno de estos agentes poseen caractersticas de
cultivo, mecanismos patgenos y consecuencias clnicas singulares (Radostits et al., 2002).
La fuente de estos agentes patgenos es el entorno de la vaca. La forma de transmisin
principal es del ambiente a la vaca a travs de un manejo inadecuado del primero. Algunos
ejemplos incluyen la cama hmeda, terrenos sucios, ubres mojadas por la leche,
preparacin inadecuada de la ubre y los pezones antes del ordeo y sistemas de
estabulacin que favorecen las lesiones en los pezones (Radostits et al., 2002). Y la
exposicin de los cuartos no infectados a los patgenos ambientales que puede ocurrir en
cualquier momento durante la vida de una vaca (Zadoks et al., 2001).
Estas infecciones generalmente ocurren de forma espordica. Sin embargo, se pueden
producir brotes en los rebaos o en una regin entera, normalmente como consecuencia de
problemas con la higiene o el tratamiento. Por ejemplo, se ha producido mastitis causada
por Pseudoma aeruginosa en brotes relacionados con la contaminacin de las conducciones
de goma en las salas de ordeo (Radostits et al., 2002).
La mastitis ocasionada por patgenos ambientales es el principal problema que afecta a
muchos hatos lecheros bien manejados, que aplican un programa de control de los
patgenos contagiosos de la mastitis (Calvinho et al., 1998; Phuektes et al., 2001). Debido
a que en la actualidad estos patgenos no han sido bien controlados por los mtodos arriba
mencionados, ahora estn surgiendo como la causa ms frecuente de mastitis en muchos
hatos, particularmente bien manejados, hatos con bajo conteo de clulas somticas
(<200,000 cs/ml) (Rossitto et al., 2002).
Tradicionalmente, los agentes ms comunes causantes de la mastitis tambin han sido
clasificados como patgenos principales (mayores) y menores segn el grado de
inflamacin que estos producen en la glndula mamaria (Ariznabarreta et al., 2002).
Los patgenos principales son definidos como los patgenos responsables, la mayora de
las veces, de las mastitis clnicas o de fuertes respuestas inflamatorias (conteos elevados de
clulas somticas en la leche) y comprenden al Staphylococcus aureus, estreptococos (S.
uberis, S. agalactiae, S. dysgalactiae) y coliformes (Ariznabarreta et al., 2002; White et al.,
2001; Djabri et al., 2002).
Los patgenos menores son definidos como los patgenos que infectan la glndula
mamaria, causando conteos moderados de clulas somticas, pero en lo general no causan
signos clnicos. Estas infecciones, son especialmente frecuentes, debidas sobre todo a
estafilococos coagulasa negativos (principalmente S. chromogenes, S. hyicus, S.
epidermidis, y S. xylosus) o por Corynebacterium bovis y Micrococcaceae coagulasanegativos (Ariznabarreta et al., 2002; White et al., 2001; Djabri et al., 2002).
1.6. GNERO Staphylococcus

El gnero Staphylococcus se ha clasificado tradicionalmente en la familia Micrococcaceae


junto con, entre otros, el gnero Micrococcus. Los estafilococos son cocos grampositivos
(de 0.5 a 1.5 um de dimetro) que se presentan sueltos, en parejas, en pequeas cadenas (de
3 4 clulas) y mas caractersticamente en grupos irregulares en forma de racimos (su
denominacin procede del griego staphyle, racimo de uvas) (Vadillo et al., 2002). Son
anaerobios facultativos, catalasas positivos, generalmente oxidasa negativos, no
esporulados, inmviles y generalmente no forman cpsula o tienen una limitada formacin
capsular. En la actualidad en el gnero Staphylococcus se reconocen 32 especies y varias
subespecies, si bien solo algunas de ellas tienen importancia desde el punto de vista clnico
(Vadillo et al., 2002).
1.7. HBITAT DE LOS ESTAFILOCOCOS
Los estafilococos estn ampliamente difundidos en la naturaleza. Su hbitat natural es la
piel y las membranas mucosas de los mamferos y las aves. Tambin pueden encontrarse de
forma transitoria en el tracto intestinal.
La presentacin de varias de las especies de estafilococos coagulasa negativos descritas en
los ltimos aos como est prcticamente restringida a la especie animal a la que se hace
referencia su denominacin latina. Otras especies, como Staphylococcus hyicus,
Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus sciuri y Staphylococcus lentus tienen una
difusin algo ms amplia y se presenta en los ungulados (Vadillo et al., 2002).
1.8. DIVISIN DE LOS ESTAFILOCOCOS
Los estafilococos, segn produzcan o no la enzima coagulasa, se dividen en dos grandes
grupos:
1. Estafilococos coagulasa positivos (ECP) (Staphylococcus aureus, Staphylococcus
intermedius, Staphylococcus hyicus).
2. Estafilococos coagulasa negativo (ECN) (Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus
heamolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus simulans, Staphylococcus
epidermidis y Staphylococcus hyicus).
Existe una buena correlacin entre la produccin de coagulasa y la capacidad patgena de
los estafilococos, de tal manera que, en general, se considera que los ECP son patgenos y
que los ECN no lo son (Cuadro 1) (Vadillo et al., 2002).

Cuadro 1. Familia Micrococacceae

FAMILIA
Micrococacceae

GENERO
Staphylococcus

ESPECIE
Staphylococcus
aureus
S. intermedius
S. hyicus

Coagulasa +

S. chromogenes
S. heamolyticus
S. hominis
S. hyicus
S. simulans
Otros
Micrococcus

Coagulasa M. roseus
M. varians

Planococcus
Stomatococcus
(Fuente: Saran y Chaffer. 2000)
En el grupo de ECP se incluyen S. aureus, S. intermedius, S. hyicus (aunque solo entre un
24 y 56 % de las cepas son coagulasa positivas) (Vadillo et al., 2002).
1.9. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
Los estafilococos crecen en los medios de cultivo ordinarios, como el agar nutritivo, si
bien para la siembra de muestras clnicas (exudados, pus de abscesos, leche mamtica,
raspados de piel, orina, etc.) se utiliza habitualmente el agar sangre (preferentemente de
oveja), medio en que puede apreciarse la capacidad hemoltica producido por las bacterias.
Existen varios medios selectivos para los estafilococos, como el agar sal manitol y el medio
de Baird-Parker, que se utiliza principalmente para anlisis de alimentos. Las colonias
aparecen normalmente a las 24 horas de incubacin pueden alcanzar los 4 mm de dimetro.
Estas colonias son redondas, lisas y brillantes y en agar sangre opacas, lo que las diferencia
de las colonias de los estreptococos beta-hemolticos, que son ms pequeas y translcidas.
Las colonias pueden ser o no pigmentadas mostrando en este caso distintas tonalidades,
desde el crema plido al amarillo vivo (Vadillo et al., 2002). El criterio generalmente
utilizado para la identificacin de las especies patgenas es la capacidad de coagular el
plasma. Esta capacidad se determina bien con una prueba de tubo, o bien con una prueba en
portaobjetos. La prueba en tubo, permite detectar la coagulasa libre y se realiza aadiendo a
0.5 ml de plasma de conejo citratado o con EDTA un par de gotas bien en un cultivo lquido
de 18 horas, o bien de una suspensin densa preparada a partir de un cultivo de agar. La
lectura de la prueba se hace a las 4 y a las 24 horas. La prueba de la coagulasa en parte
permite detectar el clumping factor y se realiza preparando una suspensin muy densa de
bacterias en una gota de agua depositada en un portaobjetos y sobre la suspensin se aade

con un asa de platino una gota de plasma de conejo y se mezcla rotando el asa (Vadillo et
al., 2002).
1.10. Staphylococcus aureus
El Staphylococcus aureus (S. aureus) es la principal causa de infeccin intramamaria en los
rumiantes (Bayles et al.,1998; Yugueros et al.,1999; Zadoks et al., 2000; Mullarky et al.,
2001) por lo que se le considera el agente causal ms importante y frecuente de la mastitis
bovina (Ferens et al., 1998; Lammers et al., 2000; Sordelli et al., 2000; Tollersrud et al.,
2000; Fitzgerald et al., 2001; dos Santos et al., 2002).
Aunque varios patgenos bacterianos pueden causar la mastitis, el S. aureus es el primer
agente etiolgico en la mayor parte del mundo (Tollersrud et al., 2000), ha surgido como el
ms prevaleciente, y una vez establecido en la glndula mamaria es muy difcil de erradicar
(Sordelli et al., 2000) y causa las prdidas econmicas ms considerables en la industria de
la leche (Lammers et al., 2000).
En muchos pases el S. aureus es un patgeno de la ubre, muy importante que causa la
mastitis (Bjorland et al., 2001). En 1998 Smith, informo de un brote de mastitis causada por
S. aureus, en el estado de Washington, en un hato lechero (Middleton et al., 2002); el S.
aureus y las bacterias estreptococales son los agentes etiolgicos ms comunes
involucrados en los casos clnicos y subclnicos de mastitis en los hatos lecheros de Nueva
Zelanda (Douglas et al., 2000).
El S. aureus es el patgeno principal responsable de una amplia gama de infecciones
agudas y crnicas. El primer paso en las infecciones por S. aureus es la adherencia a las
diferentes superficies y colonizacin de tejidos del organismo infectado. Para este propsito
el S. aureus presenta una familia de adherencias llamada MSCRMMs (componentes de la
superficie microbiana que reconocen las molculas adhesivas de la matriz). Estas
interacciones permiten al S. aureus adherirse a una variedad de lneas celulares y promover
la invasin y muerte por apoptosis de clulas epiteliales infectadas. Otro paso en la
colonizacin del S. aureus es la formacin de una biopelcula. La formacin de esta
biopelcula es una inquietud importante en las infecciones porque protege a los
microorganismos de los leucocitos y antibiticos, llevando a la infeccin crnica y
septicemia. Fenmenos similares ocurren con otras bacterias patgenas, como
Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Neisseria
meningitisdis, Escherichia coli y Haemophylus influenzae (Cucarella et al., 2002).
El S. aureus se reconoce mundialmente como una causa frecuente de infecciones
intramamarias subclnicas en las vacas lecheras (Riollet et al., 2001). El reservorio
principal del S. aureus parece ser el cuarto infectado y la transmisin entre las vacas,
normalmente, ocurre durante la ordea (Akineden et al., 2001), la interaccin del S. aureus
con las clulas de la glndula mamaria bovina es considerada esencial en el rol que
desempea en la patognesis de la mastitis (Lammers et al., 1999). Recientemente se ha
demostrado que el S. aureus induce la apoptosis en las clulas epiteliales de la glndula
mamaria bovina, indicando que este proceso pudiera estar involucrado en la persistencia o
patognesis de este patgeno (Wesson et al., 1998).

En recientes experimentos que evalan la invasin y supervivencia intracelular del S.


aureus en las clulas del tejido endotelial, epitelial y osteoblasto; se ha indicado que la
supervivencia intracelular pudiera contribuir a la persistencia del patgeno, induciendo
endocarditis, mastitis bovina y osteomielitis (Gresham et al., 2000). El S. aureus es
actualmente uno de los patgenos ms difciles de controlar porque puede extenderse
rpidamente entre el hato y puede responder pobremente a una terapia antibitica
convencional (Soltys y Quinn, 1999); la naturaleza crnica de la mastitis bovina por S.
aureus, indica que algunos productos o componentes de este patgeno pueden interferir en
el desarrollo de la inmunidad protectora (Ferens et al., 1998). Este patgeno puede causar
muchas enfermedades en los humanos y animales (Fitzgerald et al., 2001), es el agente
causal de muchas infecciones oportunas en los humanos y los animales (Yugueros et al.,
1999). Las infecciones debidas al S. aureus es de la mayor importancia en la medicina
veterinaria y humana (Zadoks et al., 2000). En el humano el S. aureus es un patgeno
responsable de la septicemia, endocarditis y el sndrome del shock txico; ocasionando la
mastitis en las vacas y ovejas (Fitzgerald et al., 2001).
El S. aureus exporta una gran variedad de enzimas, algunas de las cuales tienen factores de
virulencia conocidos (Reed et al., 2001), algunas de estas enzimas son capaces de
incrementar las caractersticas invasoras del microorganismo y lo protegen de los
mecanismos corporales de defensa. El S. aureus sigue siendo un patgeno persistente
alrededor del mundo que causa serias infecciones. Las enfermedades que se han asociado
con el S. aureus son diversas, yendo de las infecciones en heridas menores a las
enfermedades ms serias, incluso la endocarditis, osteomielitis y el shock sptico (Wesson
et al., 1998).
1.11 RESISTENCIA DEL Staphylococcus aureus A LOS ANTIBITICOS
La resistencia no es un fenmeno nuevo; al principio se reconoci como una curiosidad
cientfica y luego como una amenaza a la eficacia del tratamiento. Sin embargo, el
desarrollo de nuevas familias de antimicrobianos en dcadas de 1950 y 1960, y las
modificaciones de esas molculas en las de 1960 y 1980 nos indujo a creer que siempre
podramos adelantarnos a los agentes patgenos. Al comenzar el nuevo siglo, estamos
pagando muy cara esa complacencia. La generacin de medicamentos nuevos se est
estancando y son pocos los incentivos para elaborar antimicrobianos nuevos que permitan
combatir los problemas mundiales de la farmacorresistencia (Patio, 2008). Las bacterias
adquieren la capacidad de resistir la accin de los antibiticos a travs de varios
mecanismos como lo son: La variabilidad gentica La modificacin de la permeabilidad de
la membrana interna La extraccin del compuesto y la inhibicin enzimtica La
modificacin del blanco ribosomal o la alteracin de la composicin y el contenido de
glicoprotenas de la pared bacteriana.
Esta resistencia es transmitida entre microorganismos de un mismo gnero (transmisin
horizontal) y entre microorganismos de gneros diferentes (transmisin vertical). A todo lo
anterior se adiciona el hecho de que se dispone de escasos datos de susceptibilidad a los
antimicrobianos y la vigilancia de la resistencia no se lleva a cabo en todos los pases
(Patio, 2008) La mastitis causada por S. aureus es casi imposible de controlar con terapia

de antibiticos nicamente. La efectividad de la terapia tiene un rango de un 20 a un 70%,


dependiendo de si las infecciones son crnicas y/o acompaadas de formaciones grandes de
tejido de cicatrizante. Sin embargo, muchas infecciones persisten, provocando
manifestaciones clnicas durante el inicio de la lactancia. Los animales que presentan estos
signos deben separarse del hato pues representan una reserva significativa de contagio a
otras vacas. El tratamiento con antibiticos en la lactancia es de poco beneficio. Slo de un
10 a un 30% de los cuartos infectados sern curados. La infusin de drogas puede reducir
temporalmente el conteo de clulas somticas y hasta mejorar la apariencia de la leche en
cuartos clnicamente infectados, pero realmente no eliminan muchas infecciones. Esto se
debe a que los microorganismos quedan amurallados con el tejido cicatrizante el cual los
protege de los antibiticos (Patio, 2008). El S. aureus tambin desarrolla una resistencia a
ciertos antibiticos y puede producir una enzima (penicilinasa) que inactiva a la penicilina.
Por eso el mtodo para infecciones subclnicas usando terapia convencional durante la
lactancia, no debe recomendarse. Se han descrito a lo menos, tres mecanismos de
resistencia del S. aureus a los B-lactmicos, en muchas ocasiones relacionados entre s:
produccin de B-lactamasas, fenmenos de tolerancia, y resistencia por protenas fijadoras
de penicilina modificadas o supernumerarias, conocida como resistencia intrnseca a
meticilina (Patio, 2008).
Cuando se detecta una cepa resistente a oxacilina, ninguna otra penicilina resistente a
penicilinasa, cefalosporina, combinacin de B-lactmicos, con inhibidores de B-lactamasa
o incluso imipenem, sern eficaces para el tratamiento del S. aureus, independientemente
de que las distintas cepas muestren sensibilidad in vitro en los estudios de laboratorio
(Patio, 2008).
1.12 FRMACOS EMPLEADOS PARA EL TRATAMIENTO DE LA MASTITIS
BOVINA
Los antimicrobianos son sustancias producidas por fermentacin de microorganismos o en
forma sinttica y que se utilizan para curar infecciones bacterianas, favorecen la
recuperacin de los animales enfermos y alivian el sufrimiento y las lesiones asociados con
la enfermedad. El tratamiento de los animales con antibiticos debe tener una adecuada
relacin costo-beneficio, un claro ejemplo es el tratamiento de todas las glndulas
mamarias de todas las vacas que finalizan lactacin. Las mastitis subclnicas por lo general
no se tratan ya que realizando medidas de higiene y desinfeccin, buen ordeo y buen
funcionamiento de la mquina de ordeo se corrigen estos problemas (Patio, 2008). Si
bien existe una gran variedad de medidas de control de la enfermedad, la terapia con
antibiticos desempea un papel determinante en la eliminacin de la mastitis bovina. La
mayora de las drogas antimicrobianas utilizadas son -lactmicos, aminoglucsidos y
macrlidos). La respuesta a estos antibiticos vara segn el agente etiolgico (Patio,
2008; Pellegrino et al., 2011).

1.12.1 Aminoglucsidos

Se denominan as, por estar formados por aminoazcares unidos por enlaces glucosdicos.
Su mecanismo de accin incluye la inhibicin de la sntesis proteica bacteriana debido a la
unin de la sub-unidad ribosmica 308 de la bacteria. Estos son captados activamente por
la bacteria mediante un proceso que requiere condiciones aerbicas. La resistencia
bacteriana a estos antimicrobianos se desarrolla rpidamente y se produce como resultado
de la modificacin enzimtica del frmaco en varios lugares. Un microorganismo resistente
a un aminoglucsido puede ser todava sensible a otro del mismo grupo. Tienen una rpida
absorcin por la va intramuscular y subcutnea. Estos se distribuyen en los lquidos
extracelulares, pero tienen una escasa acumulacin en el lquido cefalorraqudeo. Se
inactivan rpidamente en altas concentraciones de pus (Fuentes, 1992; Patio, 2008). Los
de mayor uso en el bovino son la gentamicina, estreptomicina y dihidroestreptomicina
(derivado sinttico de la estreptomicina).
1.12.2 Cefalosporinas
Este grupo est estrechamente relacionado con las penicilinas y tiene un ncleo 7aminocefalospornico, siendo similar a su modo de accin, disposicin fisiolgica y toxicidad.
Tienen una resistencia superior a la inactivacin por las enzimas B-lactamasas producidas
por los estafilococos. Inhiben la formacin de la pared celular (Meyer, 1982; Patio, 2008).
1.12.3 Fenicoles
Son compuestos bacteriostticos de amplio espectro y presentan accin contra bacilos
gram-positivos y gram-negativos. Acta interfiriendo con la sntesis proteica mediante el
bloqueo de la sntesis en el ribosoma. Se combina competitivamente con la subunidad
ribosmica 50S, bloqueando la entrada de aminocidos en la cadena peptdica en
desarrollo. La conjugacin del cloranfenicol tiene lugar en el hgado y la eliminacin es
principalmente por va urinaria. Actualmente la utilizacin del cloranfenicol est limitada
en Mxico y otras partes del mundo debido a los casos de reacciones txicas, provocando
particularmente discrasias sanguneas. Este compuesto inhibe el metabolismo microsomal
del frmaco en el hgado y por lo tanto prolonga los efectos de otros frmacos, que
normalmente son eliminados del organismo por oxidacin. Adems de los efectos txicos
de este compuesto, su utilizacin est restringida por su implicacin en las resistencias
transmisibles (Meyer, 1982; Patio, 2008).
1.12.4 Macrlidos
Este grupo de componentes antimicrobianos posee un gran anillo lactnico. Son activos
contra la mayora de los microorganismos gram-positivos. La mayora de los macrlidos
son bacteriostticos, pero en altas concentraciones y contra determinadas bacterias pueden
ser bactericidas. Su modo de accin es por interferencia con la sntesis proteica por
alteracin de los ribosomas bacterianos (Sumano y Ocampo, 1997; Fuentes, 1992).

1.12.5 Penicilinas

Se distribuyen en los lquidos extracelulares, incluyendo las articulaciones, los lquidos de


las heridas, la glndula mamaria y el feto en el animal gestante. Sin embargo, cuando se
administra parenteralmente no alcanza el lquido cefalorraqudeo ni el ojo. En general
presenta eficacia para la mayora de las bacterias Gram-positivas como los estafilococos.
Su mecanismo de accin interfiere con la sntesis de la pared celular bacteriana, siendo por
tanto bactericida, es decir, interfiere con la sntesis de los polipptidos necesarios para la
pared celular y presenta su eficacia mxima contra las bacterias en rpido crecimiento.
Presenta poco efecto contra las bacterias maduras que no estn en divisin. Determinadas
cepas de las bacterias estafiloccicas producen una penicilinasa (B-lactamasa), que
transforma la penicilina en cido peniciloico inactivo. Este grupo de compuestos no son
inactivados por la sangre, el pus, los autolisados tisulares, ni por un gran nmero de
bacterias. En algunos casos se pueden observar reacciones de hipersensibilidad que van
desde urticaria y prurito hasta anafilaxia aguda (Sumano y Ocampo, 1997).
1.12.6 Quinolonas
Son el grupo farmacolgico de mayor desarrollo en la actualidad. Se distinguen tres
generaciones con potencia antibacteriana y rasgos farmacolgicos progresivamente
mayores. Las bacterias resistentes a las quinolonas aparecen en clnica como resultado de la
terapia con estos agentes. Su efecto citotxico depende de que penetren a travs de la
membrana bacteriana y alcancen su diana celular (DNA girasa o topoisomerasa IV) para
inducir la muerte de la bacteria. En principio, las resistencias a las quinolonas puede
deberse a mutaciones que afecten cualquier paso de este proceso. As, los mecanismos de
resistencia bacteriana a las quinolonas pueden agruparse en tres categoras: a) Resistencia
de tipo cromosmico que dan lugar a mutaciones en segmentos definidos de los genes que
codifican la DNA girasa (especialmente en la subunidad A y la topoisomerasa IV, dando
lugar a las QRDR (regiones-determinantes-de resistencia-a quinolonas); b) Resistencia por
alteraciones en la membrana externa bacteriana que disminuyen la presin intracelular del
frmaco. Estas modificaciones se originan en alteraciones de los genes que codifican los
canales de las purinas, lo que impide la entrada del quimioterpico en la bacteria; c)
Resistencias basadas en la expulsin del antibacteriano desde el medio intracelular al
extracelular por accin de transportadores endgenos activos (Sumano y Ocampo, 1997;
Patio, 2008).
1.12.7 Sulfamidinas-Trimetoprim
Las sulfonamidas son cidos dbiles y moderadamente solubles. Actan interfiriendo con la
sntesis de acido flico a partir de acido paraminobenzoico (PABA). Dado que las
sulfonamidas actan de esta forma, los grmenes que pueden utilizar el cido flico
transformado son insensibles. Ya que la sntesis de cido flico es necesaria para un rango
amplio de bacterias, las sulfonamidas tienen un amplio espectro de accin. Su espectro
incluye a bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. La frecuente utilizacin previa de
sulfonamidas ha dado lugar a muchos grmenes resistentes. Para evitar la resistencia se ha
utilizado exitosamente la incorporacin de trimetoprim, que acta sinrgicamente con la
sulfonamida bloqueando la sntesis de cido flico, por tanto esta asociacin es eficaz
contra un amplio rango de grmenes. Tambin aumenta la potencia utilizando mezclas

mltiples (generalmente 3) de sulfonamidas las cuales ya se encuentran disponibles


comercialmente (Sumano, 1997; Patio, 2008).
1.12.8 Tetraciclinas
Tienen el espectro ms amplio que todos los antibiticos y acta bien contra los cocos
Gram-positivos. Actan interfiriendo la sntesis de proteica en la unidad ribosmica 30S, y
en menor grado interfieren con la fosforilacin oxidativa, con la oxidacin de la glucosa y
con permeabilidad de la membrana celular. Este grupo se distribuye ampliamente,
atraviesan la placenta y alcanza el lquido cefalorraqudeo (Patio, 2008).

1.13 DESVENTAJAS DE LOS ANTIBITICOS EN SALUD PBLICA Cada vez son


ms las pruebas cientficas que relacionan la administracin de antimicrobianos a los
animales destinados al consumo y el desarrollo de resistencia de los agentes patgenos
comunes (Patio, 2008).
La resistencia de las bacterias a los antibiticos es un problema que tiene consecuencias
para la salud animal y humana cuando los agentes patgenos se introducen en la cadena
alimentaria. Grupos de expertos cientficos tanto del Instituto de Medicina, la Sociedad
Americana de Microbiologa y la Organizacin Mundial de la Salud han expresado
preocupacin acerca del incremento global de las resistencias (Patio, 2008; Fedorka et al.,
1998).
En la prdida de sensibilidad a un antibitico intervienen varios factores. Las dos fuerzas
principales son la prevalencia de genes de resistencia (que determinan protenas que
protegen a las bacterias de los efectos de los frmacos) y la difusin del uso de antibiticos.
Si la flora bacteriana de una comunidad carece de genes que confieren resistencia contra un
antibitico, este podr eliminar con xito toda la infeccin, pero si en la flora existen genes
de resistencia y la comunidad hace uso persistente de un antibitico, las bacterias que
escapen a la erradicacin por ese frmaco harn acto de presencia y proliferarn y adems
la resistencia puede propagarse a lugares distantes. Los antibiticos si bien son necesarios
para el control de las infecciones bacterianas, pueden tener efectos indeseables sobre la
ecologa microbiana. Pudiendo producir cambios en las proporciones de las bacterias
sensibles/resistentes a los antibiticos, tanto en el individuo sometido al tratamiento como
en el medio y la comunidad en general (Stuart, 1998; Ruiz et al., 2001).
La contaminacin de la leche con diferentes frmacos como son; antibiticos, antispticos,
promotores del crecimiento, etc., es una secuela frecuente posterior al tratamiento o
prevencin de enfermedades que afectan a los animales de produccin. Existen prdidas
evidentes si se retiran de la ordea de manera muy estricta y sin datos especficos a los
animales tratados con frmacos. Por otro lado, la consecuencia de permitir la distribucin
de esos productos para la poblacin, puede acarrear serios problemas de salud. Un claro
ejemplo es la presencia de residuos antibiticos en la leche, puede inducir alergias y
resistencias bacterianas; a otro nivel puede afectar los procesos de industrializacin de la
misma. Aunado a esto el aspecto que ms temor causa es la incertidumbre de que aun no se
sabe cules y qu tan graves efectos tendrn los residuos de tantos frmacos ingeridos de
manera crnica. Por ejemplo, se ha estimado que la presentacin de anemia aplstica en

humanos se puede inducir con tan solo 1 ppm de cloramfenicol presente en productos de
origen animal (Doyle, 2008; Patio, 2008).
1.14 PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBITICA Los clnicos en cualquiera de las
reas de la salud, dependen ampliamente de los datos microbiolgicos de laboratorio para el
tratamiento de sus pacientes. Por esto la importancia de las pruebas de sensibilidad a
antibiticos, ya que proveen una informacin valiosa para las decisiones teraputicas; y
deben ser realizados en condiciones ptimas para su eficiente interpretacin (National
Committee for Clinical Laboratory Standars, 1999). Algunas de stas son las siguientes:
1. Pruebas de difusin en gel de agar o mtodo de Kirby - Bauer Este mtodo consiste
en el cultivo de los agentes patgenos en medios apropiados para su crecimiento, en el cual
se colocan antibiticos en discos que dependiendo de la concentracin del antibitico en
este y de la sensibilidad del microorganismo al antimicrobiano, da como resultado zonas
donde el crecimiento bacteriano es inhibido luego de varias horas de incubacin (National
Committee for Clinical Laboratory Standars, 1999). Este mtodo da como resultado datos
cualitativos ordinales (sensible, intermedio y resistente), dichos resultados son la
conclusin de varias consideraciones como la especie de microorganismo, la clase de
antibitico, concentracin del antibitico en el disco, el halo de inhibicin del crecimiento
(medido en mm) (Bauer et al., 1996).
2. Pruebas de dilucin o concentraciones minimas inhibitorias (C.M.I) La
determinacin de las Concentraciones Inhibitorias Mnimas (C.M.I.), para los patgenos
especficos, provee datos, que conjuntamente con los parmetros farmacocinticos de los
agentes antibacteriales en el animal, permiten predecir la eficacia in vivo del compuesto
en el tratamiento de una enfermedad especfica. Aunque existen regmenes teraputicos
para muchos agentes antibacteriales utilizados en el tratamiento de infecciones
intramamarias, la sensibilidad del germen puede variar de tal manera que es necesario
replantear el esquema teraputico; de acuerdo al patrn de sensibilidades desarrollado, y
para esto las C.M.I permiten a los veterinarios monitorear la sensibilidad antimicrobial de
las cepas en los hatos lecheros (Watts et al., 1995). La seleccin de los antibiticos se hace
teniendo en cuenta el microorganismo a evaluar y los diferentes grupos farmacolgicos que
serian de primera eleccin para la teraputica (de acuerdo con el espectro) y los resultados
de los C.M.I. que se reportan con criterios de interpretacin definidos como: sensible,
intermedio y resistente. 2.1. Sensible: Esta categora aplica a las infecciones por cepas que
pueden ser apropiadamente tratadas con dosis de antibiticos recomendadas para ese tipo
de infeccin y especie infectada. 2.2. Intermedio: sta categora incluye aislamientos
bacteriales, evaluados con agentes antibacterianos, cuyas C.M.I. se aproximan a los niveles
alcanzables en tejidos y sangre, y para los que la tasa de respuesta puede ser ms baja que
los de las cepas sensibles. La categora intermedia implica aplicabilidad clnica en los sitios
corporales en donde la droga es fisiolgicamente concentrada (por ejemplo, Quinolonas y
B-lactmicos en orina) o cuando altas dosis de la droga pueden ser usadas (por ejemplo Blactmicos). 2.3. Resistente: Las cepas no son inhibidas por las concentraciones sistmicas
usualmente alcanzables de un agente con rgimen teraputico normal y/o fallas atribuibles a
mecanismos de resistencias (por ejemplo B-lactamasa) y cuya eficacia clnica no es
confiable en estudios teraputicos (National Committee for Clinical Laboratory Standars.
1999). La determinacin de las Concentraciones Inhibitorias Mnimas es una prueba con

mejor poder predictivo de la eficacia in vivo que las pruebas de difusin en gel de agar
(Salomon et al., 1998).
Considerando pues lo anteriormente expuesto, el tratamiento de las mastitis bovina con
antibiticos, es una prctica que debe hacerse con criterios profesionales debido a que son
muchos los factores que intervienen no slo para una eficiente teraputica, sino tambin
para la prevencin en la generacin de resistencia bacterial y la presencia de residuos de
antibiticos en leche; problemas que competen no slo a la salud animal sino tambin a la
salud humana. Por tales motivos el desarrollo de un programa de control efectivo requiere
un extenso conocimiento de la epidemiologa de la mastitis bovina, incluyendo la
evaluacin de la susceptibilidad a los antibiticos de los microorganismos aislados de la
glndula mamaria, as como programas de prevencin (Ruiz et al., 2001).

CAPITULO II
MATERIALES Y METODOS
2.1 REA DE ESTUDIO:
Las muestras de leche con mastitis clnica y subclnica fueron recolectadas de las
comunidades del Distrito de Zurite, Provincia de Anta-Cusco durante los meses de
agosto-diciembre del 2013. El muestreo y recoleccin de muestras con
staphylococcus iniciaron a partir de la prueba de White side, para confirmar leche
con microorganismos, realizando la pertinente desinfeccin del material a ser
utilizado. Las muestras se transportaron en un cooler al Laboratorio de Control de
Calidad de Aguas y Alimentos de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la
Universidad de San Antonio Abad del Cusco.
ESTABLOS

NUMERO DE VACAS

TOTAL

MUESTREADAS-SEMANA
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

5-1era semana
5-2da semana
5-3ra semana
5-4ta semana
5-5ta semana
5-6ta semana
5-7ma semana
5-8va semana
5-9na semana
5-10ma semana
Total de vacas

5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
50

Figura 1. Mapa del rea de estudio


2.1 MATERIALES:
2.2.1.- MATERIAL BIOLGICO

Muestras de leche, recolectada de vacas con mastitis clnica y subclnica.


Discos BioRad de Ampicilina, Amikacina, Cloramfenicol , Dicloxacilina ,
eritromicina , gentamicina, tetraciclina y Vancomicina.

2.2.2.- MATERIAL DE VIDRIO

Pipetas graduadas de 0.1 ml, 1ml y 10ml


Matraces 100 y 200ml
Probetas 100 ml
Tubos de ensayo 10 y 20ml
Placas Petri
Varillas de vidrio

2.2.3.- EQUIPOS Y APARATOS

Autoclave automtica modelo EAGLE TEN PLUS marca AMSCO / 121 C 15 min.
Incubadora modelo 4 marca THELCO / 35C
Bao Mara marca JSNB - II 44.5 0.5 C
Balanza digital modelo SL-600 marca SCIENTECH 2500 gr de capacidad.
Horno Pasteur marca MENMERT
Mechero Bunsen
Refrigeradora marca MABE.

2.2.4.- MEDIOS DE CULTIVO:

Caldo BHI (Merck Alemania).


Agar Mueller - Hinton (Difco - USA).
Agar Baird Parker (Merck Alemania).
Plasma de conejo (Merck Alemania).
Agar Nutritivo (Merck Alemania).
Agar Soya Tripticasa (Merck Alemania).

2.2.5.- REACTIVOS

NaOH al 4%

2.2.6.- OTROS MATERIALES

Batera de coloracin gram


Asa de siembra
Pinzas de acero
Papeles
Algodn
Alcohol 96%
Mascarilla
Guantes
Detergente
Leja 5%
Refrigerantes
Agua destilada, etc
Cooler pequeo o caja de tecnopor.
Hielo
Camara fotogrfica marca SONY de 7.2 megapixeles.
2.2 METODOLOGIA

El mtodo cientfico experimental es un procedimiento que permite llegar a la verdad


objetiva de los fenmenos, adems de un mtodo hipotetico deductivo que desempea un
papel fundamental en el proceso de verificacin de hiptesis y es la va primera de
inferencias lgicas deductivas para arribar a conclusiones particulares a partir de la
Hiptesis, que despus se pueden comprobar experimentalmente, por lo que se ajusta al
trabajo propuesto.

FLUJOGRAMA N 1
METODO DE RECOLECCION Y PROCESAMIENTO

Recoleccin de
muestras
Se realizar la prueba de White side

se reconocera las posibles ubres


que presuntamente esten
infectadas de mastitis

en el lugar de muestreo, para


confirmar las ubres mastiticas.

toma de muestras
se tomaran las muestras en frascos esteriles de 250ml

transporte de las muestras

Se transportaran las muestras recien obtenidas en un cooler a 4C o una caja de


tecnopor con hielo, cuidando de no revolver las muestras.

preparado y obtencion de
desprender el anillo de nata
se toma 5 a 10cc demicroorganismos
leche en un
mediante un asa de kolle, verter el
tubo de centrifuga, a 3000 RPM
durante 20 minutos.

contenido y mezclar la crema con el


sedimento del fondo del tubo.

inoculo a los medios de cultivo

con una pipeta esteril, aadirla a


una solucion salina fisiologica,
luego homogenizarla, sembrar en
placas con medio de cultivo Baird
Parker.

incubar por un periodo de 24 a 48


horas a 37C .

FLUJOGRAMA N 2
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE Staphylococcus aureus

identificar las colonias de Staphylococcus aureus


estas se haran mediante pruebas de coagulasa catalasa y tincion Gram

Aislamiento de colonias de Staphylococcus aureus y


prueba de sensibilidad a antibioticos

despues de identificar las colonias ,inocularlas en agar nutritivo o soya


tripticasa, suspenderlas en 2ml de caldo BHI; incubar a 37C por 24 horas.

las suspension bacteriana inocular en Agar Mueller - Hinton por


diseminacion.

por el metodo de difusion en disco de Bio Rad, colocar los discos con los
antibioticos e incubar a 37C/24-48 horas, posteriormente observar los
resultados

diferenciar los resultados obtenidos para cada antibiotico .