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reactivo debe ser luz de color amarillo verdoso, uno ms oscuro es intil); 56,8
M de vitamina C (cido L-ascrbico) solucin estndar hecha con solucin mM
uso 50 de cido oxlico como disolvente.
Determinacin de la vitamina E: etanol anhidro; xileno (mezcla de ismeros);
6.02 solucin mM de batophenanthroline * solucin (estable durante tres
semanas en un frigorfico), 0,98 mM de cloruro de hierro anhidro (III) (estable
durante una semana en un refrigerador) y una solucin de 40 mM de cido
ortofosfrico cristalino - todo en etanol anhidro; 23.2 M
estndar solucin de vitamina E (como sustancia de Trolox *
- En agua DI, o como -tocoferol - en anhidroetanol). Determinacin de la
vitamina A: xileno (a / a); Solucin de hidrxido de potasio 1 M en Etanol 90%.
Realizacin de determinaciones Analizar muestras frescas, trabajando en el
stand protegidos contra la lluvia directa ligero.
Determinacin de la vitamina C [Rutkowski et al. 1998]:
- Medida 1 ml del lquido analizado en el tubo de ensayo de centrfuga, aadir 1
ml de la PR, mezclar bien y dejar en una temperatura ambiente durante 30
minutos
- Centrifugar el tubo (7.000 g, 10 minutos), y recoger la totalidad de los
separados sobrenadante con una pipeta - el sobrenadante es una muestra de
ensayo espectrofotomtrico para mediciones
- Preparar la muestra estndar como anteriormente (usando 1 ml de la solucin
estndar en vez del lquido analizado), sin centrifugacin
- Medir la absorbancia de la Ax muestra de ensayo y de la muestra patrn
Como en 700 nm en contra de la mezcla de PR: solucin 50 mM de cido
oxlico = 1: 1 (v / v) como referencia muestra Concentracin calcular cx de
vitamina C (M) en el lquido analizado, utilizando el frmula:
* Batophenanthroline es un nombre coloquial comnmente usado para 4,7difenil-1,10-fenantrolina. Trolox es un anlogo sinttico soluble, el agua de la
vitamina E (precisamente de -tocoferol se se forma predominante),
constituyendo el 6-hidroxi-2,5,7,8-tetramethylchromano-2-carboxlico cido.
Determinacin de la vitamina E [Rutkowski et al. 2,005]:
- Medida de 0,5 ml del fluido analizado en el tubo de ensayo I (centrfuga) con
un apretado tapn, aadir 0,5 ml de etanol anhidro y agitar vigorosamente la
prueba enchufado tubo durante 1 minuto
- Aadir 3 ml de xileno, conecte el tubo de ensayo y agitar vigorosamente
durante otro 1 minuto
- Centrifugar el tubo para separar el extracto (1.500 g, 10 minutos);
simultneamente medir 0,25 ml de solucin de batophenanthroline en un tubo
de ensayo habitual II
En la primera etapa, manteniendo sin cambios las bases analticas que fue
ejecutado el - los equipos y de procedimiento modificaciones - como resultado
de los requisitos de la rutina anlisis '- en la realizacin de formas de
determinaciones definidas en los mtodos originales. Los resultado de esta
etapa de las investigaciones era atribucin a los mtodos modificados de una
tcnicamente forma til para la prctica analtica.
La segunda etapa del estudio incluy modificaciones de las bases analticas
para particulares mtodos con respecto a los resultados obtenidos en la
primera etapa con el fin de evitar las lagunas existentes descriptivos,
inconsistencias y defectos encontrados experimentalmente, as como para
adaptar el mtodo por el Tsen [1.961] que fue diseado exclusivamente para la
determinacin de la vitamina E en soluciones - para la determinacin en
material biolgico. Los resultados conjuntos de ambos la primera y segunda
etapa se convirti propias modificaciones de los mtodos originales
seleccionados, que el control de la correccin analtica fue sometido en la
tercera etapa del estudio. Las pruebas de control se realizaron de acuerdo con
el desempeo de las determinaciones en biolgica lquidos. Una serie de
soluciones estndar - en el suero bovino como un disolvente - de vitamina C y
Se han usado formas solubles en agua de las vitaminas E y A. Serie individual
incluido concentraciones dentro del rango fisiolgico para esos vitaminas (M):
para la vitamina C (como L- cido ascrbico): 14.2, 28.4, 56.8, 85.2, 113.6, para
la vitamina E (como sustancia Trolox) 5.8, 11.6, 23.2, 34.8, 46.4, para la
vitamina A (en forma de complejo de acetato de retinol y cyclodextrane) 0,465,
0,93, 1,86, 2,79, 3,72.
Las soluciones estaban sujetos a los procedimientos de acuerdo con los
algoritmos desarrollados de determinaciones y medidas de absorbancia finales
produjeron conjuntos de puntos determinar curvas de anlisis en la A, C
sistema que se presenta en la Figura 1. Basado coordinan en las curvas que
encontramos como sigue:
- Cumplimiento de la ley de Lambert-Beer dentro del rango especificado de las
concentraciones con la linealidad total resultante de las curvas y de su paso por
el punto 0
- Alta precisin de los mtodos modificados que fue determinado por el logro de
los coeficientes de curvas de correlacin casi hasta 1
- Muy buena sensibilidad de todos los mtodos (. Lmite de deteccin de la
aplicacin 0.05 M) resultante a partir de grandes ngulos de inclinacin de las
curvas
- Ningn efecto de las protenas de suero en la A / m curvas que sugiere su
desnaturalizacin completa durante los trabajos de anlisis y la falta de
injerencia de otros reductores presente en el suero. Precisin adecuada de los
mtodos modificados fue confirmada por pruebas de recuperacin, los valores
medios de los cuales se obtuvieron a partir de tres veces repetidas pruebas y
slo fueron ligeramente diferente a 100%. Adems, se confirm la alta precisin
de los mtodos por su repetibilidad y reproducibilidad. Los parmetros se