Marco terico

Hans Christian Jachim Gram (1853-1889) estaba buscando una tincin para
visualizar bacterias en biopsias de tejido y termin por descubrir todo un nuevo
mundo, el mtodo capital para diferenciar grandes grupos microbianos por
microscopia. (Ledermann, 2007)
La tincin de Gram es la tcnica principal utilizada para el examen
microscpico de las bacterias. Casi todas las bacterias de importancia clnica
pueden detectarse con este mtodo; las nicas excepciones son los
microorganismos que se hallan casi con exclusividad dentro de las clulas
husped, los que carecen de pared celular y los que tienen tamao insuficiente
para ser observados con el microscopio ptico. Puede utilizarse para separar la
mayora de las especies bacterianas en dos grandes grupos, a saber, las que
captan el color bsico, cristal violeta y las que pierden ese colorante por lavado
con el decolorante alcohol o acetona. (Forbes, 2009)
Esta tincin desarrollada por el doctor Christian Gram en 1884, es hoy la
ms utilizada en los laboratorios de bacteriologa y permite, de acuerdo con la
estructura y grosor de la pared bacteriana, agrupar las bacterias en Gram positivas
y en Gram negativas. Las Gram positivas poseen una capa gruesa de
peptidologlicn y carecen de membrana externa, mientras que las Gram negativas
tienen una capa ms delgada de peptidoglicn y poseen una membrana externa.
Algunas bacterias se clasifican como Gram variables, pues
simultneamente presentan tincin de Gram positivas y de Gram negativas, aun
bajo condiciones pticas de cultivo. Sin embargo, en su estructura estas bacterias
poseen una pared de Gram positivas, aunque la capa de peptidoglicn es ms
delgada que la mayora de las bacterias Gram positivas.
Esta tincin adems, correlaciona con otras propiedades como endotoxinas,
susceptibilidad a antibiticos, sensibilidad o resistencia a las sales biliares, punto
isoelctrico o tensin superficial.
Existen variaciones de esta tcnica, pero en trminos generales, la tincin
de gram involucra varios pasos:
Tincin inicial: las clulas se tien con cristal violeta, el cual es el colorante
primario. en este paso todas las clulas se tien de morado.
Mordente: se adiciona yudro(lugol) que reacciona con el cristal violeta y
forma un complejo cristal violeta-yoduro. En este punto todas las clulas continan
de color morado.

Decoloracin: se adiciona un solvente no polar, el cual actua lavando el

complejo cristal violeta-yoduro de las clulas Gram negativas. De esta manera las
bacterias Gram positivas continan moradas y las Gram negativas quedan
incoloras. Este es el paso critico de esta tincin, pes si se exagera, decolora las
Gram positivas y si se hace muy dbil no decolora a las Gram negativas.
Contra tincin: se vuelve a teir con safranina o fucsina, de manera que las
bacterias Gram negativas, que haban sido decoloradas, se tien de rosado o
fucsia segn el colorante empleado; en tanto, las bacterias Gram positivas no se
afectan con la contra tincin y permanecen moradas debido a lo intenso de esta
coloracin.
Un factor que puede influir en que las bacterias Gram positivas se observen
parcial o completamente rosadas, es la edad del cultivo; las clulas viejas tienden
a perder su capacidad de retener el complejo cristal violeta-yoduro y por lo tanto
las bacterias se vern rosadas. Otro factor de variabilidad podra ser condiciones
de estrs durante el cultivo, que generen formas Gram negativas no viables,
dentro de un cultivo de clulas Gram positivas. (Cavallini, 2005)
La coloracin de la tincin de Gram y la forma de las bacterias permiten
predecir el tipo de microorganismo que est causando la infeccin. Ejemplos de
cocos Gram positivos incluyen Staphylococcus aureus, la bacteria asociada a las
infecciones por estafilococo. Un ejemplo de bacteria Gram negativa es la
Escherichia coli, causante de muchas infecciones urinarias.
Con la tincin de Gram tambin pueden visualizarse hongos (en forma de
levaduras o mohos); sin embargo los virus no pueden detectarse con una tincin
de Gram.
La tincin de Gram constituye una prueba de primera lnea muy til para
detectar e identificar bacterias y algunos hongos. Sin embargo, los resultados
obtenidos deben completarse con otras pruebas adicionales. As, para confirmar el
diagnstico, son necesarias pruebas como cultivos, pruebas de deteccin de
antgenos o de anticuerpos, o pruebas moleculares.

Bibliografa
Ledermann, Walter. (2007)Una historia personal de las bacterias RIL Editores,
Santiago de Chile. 421 pginas

Forbes, Betty. (2009) Diagnostico microbiolgico Ed. Mdica Panamericana,

Argentina
Cavallini, E; Coronado, M. (2005)Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de
Laboratorio Editorial Universidad de Costa Rica, 475 pginas
American Association for Clinical Chemistry (2001
http://www.labtestsonline.es/tests/tinciondegram.html?tab=2

2015)

Web: