METABOLISMO DE LOS

CARBOHIDRATOS

Curso : Biotecnologa

Integrantes : Tapia Paredes Gustavo

Garca Aguilar Erick
Lecca Reyna Cesar

METABOLISMO DE LOS
CARBOHIDRATOS:

METABOLISMO PRIMARIO DE MONOSACRIDOS

M.D. Brownleader, J.B. Harborne y P.M. Dey

3.1Introduccin.
111
3.2La
gluclisis
.111
3.3Pentosa
fosfato
va.
116
3.4El
ciclo
del
cido
ctrico
121
3.5Electrn
transporteylafosforilacinoxidativa
126
Referencias
y
lecturas
adicionales.140

3.1 INTRODUCCION
En este captulo se refiere a la utilizacin de monosacridos como
reservas de energa en las plantas. Aunque una gran pltora de
sustratos tales como protenas y lpidos pueden ser oxidado en las
plantas, la respiracin tiende a ser dominado por oxidacin de
hidratos de carbono a travs de la va glucoltica y el cido
tricarboxlico Ciclo (TCA). Hidratos de carbono se convierte en
piruvato y malato por dos vas principales, glicolisis y la pentosa
fosfato oxidativo va. Las funciones principales de la pentosa fosfato
va, por ejemplo, para generar NADH para utilizar en reacciones
biosintticas y para proporcionar ribosa 5-fosfato para la sntesis de
nucletidos y erythrose- 4-fosfato para la sntesis de cido shikmico
Se discuten derivados. Tambin nos referimos a la regulacin de la va
pentosa fosfato y interconversiones entre la va glucoltica. Los lpidos
se establecen reservas de almacenamiento en las plantas. Durante la
germinacin, los lpidos se convierte en azcar cido graso / 3oxidacin,
el
ciclo
del
glioxilato
y
gluconeognesis.
La
gluconeognesis y su regulacin se discuten en este captulo. En
condiciones aerobias, el piruvato se oxida an ms al CO2 por el ciclo
de generacin de TCA equivalentes NADH / FADH2. Su regulacin y se
discuten los papeles fisiolgicos. Tanto NADH y FADH2 se oxidan por
O2 en el mitocondrial cadena de transporte de electrones que est
acoplado a Fosforilacin del ADP. La configuracin estructural de la

cadena de transporte de electrones, junto con hiptesis de la

contabilidad para el acoplamiento propuesto mecanismo entre el
transporte de electrones y la ATP Se discute la sntesis. Este captulo
destaca las principales vas de metabolismo de los carbohidratos que
juegan importante papeles en fisiologa vegetal como la mejora de los
cultivos rendimiento.
3.2 GLUCLISIS
La gluclisis o la va de Embden-Meyerhof-Parnas, primero reconocida
en clulas de levadura y de mamfero tejido muscular, es ahora uno
de los mejores establecida vas del metabolismo de carbohidratos en
las plantas (Fig. 3.1). Es uno de los dos principales vas por las que los
hidratos de carbono se degrada en ltima instancia a CO2, el otro es
el fosfato de pentosa va (seccin 3.3). Estas vas son catablico y se
refieren a la conversin de la carbono en forma reducida, que ha sido
capturado de la atmsfera por fotosntesis, en una forma oxidada con
la liberacin de energa. La gluclisis es una caracterstica metablica
clave del respiratorio proceso de la clula de la planta (seccin 3.4) y
es particularmente importante en las clulas de germinacin
plntulas y en las clulas no fotosintticas de la planta madura.

3.2.1 LA VA
El material de partida para la gluclisis es la glucosa-6- fosfato, que
est disponible en la fosforilacin de glucosa, catalizada por una
hexoquinasa.Esta reaccin requiere una molcula de ATP y el catin
de metal divalente Mg ^ "^, que forma un complejo con ATP antes de
que participa en la reaccin. La fosforilacin de la glucosa en la
posicin 6 es esencialmente irreversible, y el cambio en el estndar
de energa libre AG es
- 1 6. 7 k J m o l -1 .La glucosa-6-fosfato
tambin est disponible para el planta de la isomrica de glucosa-1fosfato,que se produce ya sea por la hidrlisis de sacarosa (Captulo
4) o como uno de los productos de desglose de almidn. La
interconversin de glucosa 1-fosfato a la 6-fosfato es catalizada por

fosfoglucomutasa (o fosfato de glucosamutasa) en una reaccin

reversible que muestraslo un pequeo cambio en la energa libre
estndar (-7.0 kJ mol-1). El pH ptimo es 7.S para este de reaccin,
durante el cual un ion fosfato es transitoriamente unido a una cadena
lateral de serina de la enzima. El primer paso comprometido de la
gluclisis es la conversin de glucosa-6-fosfato en fructosa-6- fosfato
en una reaccin reversible catalizada por hexosa fosfato isomerasa:

Esta es una interesante interconversin por el cual una hexosa,

glucosa, que ocupa la piranosa configuracin, se cambia a un azcar
ceto, fructosa,que tiene una configuracin de furanosa.El segundo
paso en la gluclisis es la fosforilacin con fosfato orgnico, de la
fructosa-6- fosfato para producir fructosa 1,6-bisfosfato.Este es
catalizada por la fosfofructoquinasa en el presencia de ATP en una
reaccin irreversible (Esquema 2).Hay una segunda enzima, la
fructosa-6-fosfato:fosfotransferasa pirofosfato, presente en el citosol
que es capaz de llevar a cabo la misma de reaccin, con pirofosfato
en lugar de ATP como el otro sustrato. Se opera con solamente un
pequeo cambio en la energa libre estndar (AG '- 2.9kJmol ~ ^) y
por lo tanto es fcilmente reversible. Tanto si se tiene un papel en la
gluclisis es todava discutible. Su importancia para el metabolismo
de los hidratos de carbono parece estar ms en la reaccin inversa,
por el cual se hidroliza fructosa-1,6-bisfosfato para suministrar
pirofosfato para la descomposicin de sacarosa a travs de UDPglucosa pirofosforilasa (ver Captulo 4).El tercer paso en la gluclisis
es clave en que implica la escisin de un enlace carbono-carbono y
dividiendo la molcula de fructosa-l, 6-bisfosfato en dos fragmentos
de tres carbonos. Este reaccin es catalizada por una aldolasa y los
rendimientos
dos
productos
estrechamente
relacionados,
dihidroxiacetona fosfato y gliceraldehdo-3-fosfato (Esquema 3).Los
productos de esta reaccin estn en equilibrio uno con el otro como

tautmeros ceto-enol y el cuarto paso de la gluclisis es la

interconversin de un ismero en el otro para dar dos molculas de
gIyceraldehyde-3-fosfato de la fructosa bifosfato originales. Este
interconversin es catalizada por la triosa fosfato isomerasa, de
acuerdo con la reaccin (Esquema 4).

La eficacia de la enzima isomerasa depende en la eliminacin

continua del producto en el siguiente paso de la reaccin, ya que slo
hay una pequea cambio en la energa libre estndar. El quinto paso
en la gluclisis es la conversin de gliceraldehdo-3-fosfato en Gly
cerato-1,3-bisfosfato, una reaccin que requiere una molcula de
NAD+. Un residuo de fosfato se aadi alresiduo carboxilo de cido
fosfoglicrico, segn con el esquema:

Esta oxidacin-hidrlisis es catalizada por glycerate- Quinasa 3-fosfato

y hay un requisito para Mg2 +.El sptimo paso en la gluclisis es el
equilibrio de glicerato-3-fosfato con glicerato-2-fosfato, por el cual el
grupo fosfato es movido de la 3- al grupo 2-hidroxilo. La enzima que
cataliza este paso es el fosfato de glicerato mutasa y esta es una
reaccin reversible, requiriendo poco cambio de energa:

El paso octava y penltima es la conversin de glicerato-2-fosfato en

fosfoenolpiruvato (PEP), es la escisin de una molcula de agua, una
reaccin catalizada por un enolasa en el presencia de Mg 2+, de
acuerdo con el esquema:

La novena y ltima etapa es la de ketolization PEP a piruvato,

catalizada por la piruvato quinasa, con la produccin de otra molcula
de ATP a partir de ADP segn la reaccin:

El proceso global proporciona as una considerable cantidad de

energa para la clula vegetal. Se requiere una molcula de ATP al
principio para producir fructosa-1,6-bisfosfato del monofosfato, pero
durante la va, produce cuatro molculas de ATP y dos molculas de
NADH por cada molcula de hexosa proporcionado al sistema de (Fig.
3.1).Piruvato, el producto de la gluclisis, puede ser transformado en
una de dos direcciones, dependiendo en el suministro de oxgeno.
Bajo condiciones aerbicas, se convierte en acetil coenzima A y de
carbono dixido, una reaccin catalizada por la piruvato
deshidrogenasa. La acetil coenzima A as formado entoncesentra en
el ciclo tricarboxlico de Krebs y los dos tomos de carbono del resto
acetilo son finalmente devuelto a la atmsfera por la planta como
respirado CO2 (seccin 3.4).Por el contrario, en condiciones
anaerbicas, por ejemplo, en races anegadas de una planta, el
piruvato se metaboliza por las enzimas reductoras. Es primero se
descarboxila a acetaldehdo, CH3CHO, y esto es entonces reducido a
etanol, CH3CH2OH, por el alcohol deshidrogenasa. Alternativamente,
el piruvato puede serreducido a lactato, CH3CHOHCO2, catalizada por
lactato deshidrogenasa. Esto es, sin embargo, probablemente ser slo
una va menor, ya que el descenso de la cytosohc pH causada por el
lactato producto, es probable para apagar la formacin de lactato,
permitiendo etanol para acumular en su lugar. Para ms detalles de la
metabolismo que puede tener lugar en los tejidos vegetales bajo
condiciones anaerbicas, ver Crawford (1989).Mucha evidencia ahora
indica que el glucoltico va puede operar tanto en el citoplasma y en
dentro de los cloroplastos de hojas de plantas. La mayora de enzimas
se han detectado en los cloroplastos, y todos ellos se han encontrado
en el citoplasma. Adems, las enzimas de la gluclisis se producen en
mayora de las plantas investigadas como pares de isoenzimas, con
propiedades diferentes en funcin de si se obtienen a partir del
cloroplasto o del citoplasma. Ellos son inmunolgicamente distintos y
puede ser codificada por genes nucleares independientes (Copeland y
Turner, 1987).
3.2.2 REGULACIN

Nuestra comprensin del control de la gluclisis en plantas sigue

siendo incompleta (Turner, 1980; Copeland y Turner, 1987). Sin
embargo, hay buena evidencia de que los puntos principales de la
regulacin involucrar a las reacciones catalizadas por la
fosfofructoquinasa y por piruvato quinasa. Tres tipos de apoyo
observacin esta opinin. En primer lugar, de los nueve pasos en la
gluclisis esbozado anteriormente, slo las reacciones catalizadas por
la fosfofructoquinasa y piruvato quinasa tienen ratios de
productisubstrate (relaciones de accin de masas) que son mucho
menor que sus constantes de equilibrio. Este indica que estas
reacciones son desplazadas de equilibrio y por lo tanto son
irreversibles bajo condiciones fisiolgicas normales. En contraste,
mediciones de reactivos y productos y ratios de accin de masas
calculadas para los dems pasos en la va demostrar que estas
reacciones se operar de forma reversible y cerca del equilibrio. En
segundo lugar, la tasa de gluclisis puede ser molesta por la
transferencia de tejidos de las plantas que llevan a cabo la gluclisis a
partir de una fase gaseosa de nitrgeno al aire o mediante la
exposicin a gaseosa etileno. Las mediciones de cambios en las
concentraciones de compuestos intermedios en la va luego son
consistentes con la regulacin de la fosfofructoquinasa y piruvato
quinasa pasos. Por ejemplo, mover los tejidos de la raz de la
zanahoria a partir de un nitrgeno a una fase gas oxgeno induce
unatriple aumento en la concentracin de fructosa1,6-bisfosfato y un
aumento del 60% en piruvato, con disminuciones ms pequeos en
las concentraciones dePEP y glicerato-3-fosfato.

En tercer lugar, tanto las enzimas de control putativo,

fosfofructoquinasa y piruvato quinasa, son sensible a un rango de
positivo y negativo efectores (Copeland y Turner, 1987) y ambos
tienen posiciones estratgicas en la va (Fig. 3.1).Al considerar la
regulacin de la gluclisis en plantas, es importante darse cuenta de
que en determinadas condiciones fisiolgicas, la va puede operar en
la direccin inversa con la formacin de azcar hexosa de PEP. Esta
inversin se conoce como gluconeognesis y se lleva a cabo en el
aceite de germinacin semillas (por ejemplo aguacate) a raz de la
ruptura de lpidos de almacenamiento. Se utiliza acetil coenzima A,
que es el producto de degradacin de cidos grasos (Captulo 6) y
este entra en un ciclo de Krebs modificado para producir oxaloacetato
que a su vez se convierte en PEP que es el punto de partida de la
gluconeognesis. Este proceso metablico de la conversin de lpidos
en hidratos de carbono es una caracterstica esencial en aquellas

plantas que almacenar la mayor parte de la energa de la semilla en

elforma de triglicridos de grasa en lugar de como almidn. Ella ahora
debera ser evidente que la enzimologa de gluconeognesis tiene
una influencia obvia sobre los posibles puntos de regulacin de la
gliclisis va. De hecho, la reacciones de la gluclisis y la
gluconeognesis diferir distintivamente en esos dos pasos catalizada
por la fosfofructoquinasa y piruvato quinasa, destacando una vez ms
su papel clave en la regulacin. De hecho, la gluconeognesis
requiere dos diferentes enzimas en estas posiciones a lo largo de la
va inversa. Por lo tanto, el primer paso en la gluconeognesis es la
conversin de oxaloacetato en PEP,catalizada por PEP carboxicinasa
de acuerdo con la reaccin:

Una vez ms, el octavo paso en la gluconeognesis no funciona con la

enzima glicoltico fosfructoquinasa, ya que cataliza una reaccin
irreversible (seccin 3.2.1 ). En su lugar, el paso es catalizada por
fructosa-l,6-bisfosfatasa segn la ecuacin se muestra en el Esquema
11.Por ltimo, a partir de la gluclisis y enzimas degluconeognesis
se encuentran juntos en citosol, debe existir un mecanismo para
asegurar el control de estas enzimas para que el flujo de carbono
funciona en uno u otro sentido , de acuerdo con las necesidades de la

planta en cualquier etapa de su ciclo de vida. Ahora es posible sobre

la base de lo que ha pasado antes de sugerir un plan para la
regulacin de

gluclisis y esto se ha hecho por Turner y Turner (1980) (Fig. 3.2). Un

punto de la regulacin,como se argument anteriormente, es la
conversin de la PEP en piruvato catalizada por la piruvato quinasa.
Como puede ser visto en la fig. 3,2, esta reaccin es inhibida por
ATPpero estimulada por ADP, de modo que un cambio en el
Relaciones ATPrADP en el citoplasma pudieron determinar su eficacia.
El piruvato quinasa es tambin inhibida por citrato o Ca ^ "^ y
estimulado por K + o Mg ^ "^. La regulacin de esta enzima por ATP
y citrato pueden ser observados cuando el tejido vegetal se mueve
desde el aire a nitrgeno; niveles de ATP ydisminucin citrato de
modo que la inhibicin de este paso es reheved y el camino de flujo
de carbono ^ S hacia abajo. Del mismo modo, una disminucin en las
concentraciones de ADP disminuye actividad de la quinasa de
piruvato, lo que provoca una acumulacinde PEP, que a su vez
provoca un aumento en glicerato-2-fosfato y glicerato-3-fosfato (Fig.
3.2). Todos estos productos intermedios luego inhibir la enzima
fosfofructoquinasa, convirtiendoel flujo de carbono a partir de
glucosa-6-fosfato a piruvato.
La regulacin dela gluclisisen elpaso en elva que implicala
fosfofructoquinasaes
bastante
complejae implicaun fosfatode azcarmshasta ahora nose ha mencionado,
en fructosa2,6-bisfosfato. Como ya se hadescrito, la regulacin de la
fosfofructoquinasapuede
verse
afectada
poruna
acumulacinenconcentracin dePEP, glicerato-2-fosfato o glicerato-3fosfato. Adems,sin embargo, suLa catlisis esfuertemente inhibida poreste
nuevometabolito, fructosa-2,6-bifosfato, que tiene tambinhandemostrado
que se producenen el citosol.Est formadoa partir de fructosa-6-fosfato por
la
accin
de
lafructosa-6-fosfato-2-quinasa
de
la
enzima.Se
puedeigualmenteserdesfosforiladode nuevo ala fructosa-6- fosfatoa travs
dela enzimafructosa-2,6-bisfosfatasa, que tambin ha sidodetectada en el
citosol:

Por lo tanto la concentracin de fructosa-2,6-bisfosfato,que puede

variar entre 1 y 30 / XM, escontrolado por las actividades relativas de
las
enzimas
de su sntesis y la degradacin.En esta situacin, una alta
concentracin
de triosafosfato
estimula
su desfosforilacin
yconcomitantemente inhibe su sntesis. Por el contrario, unaalta
concentracin de iones de fosfato y defructosa-6-fosfato aumenta su
sntesis yinhibe su degradacin. Por lo tanto, el flujo de carbono
degluclisis puede ser regulada a travs del control finode este nuevo
metabolito.Si triosa fosfato y glicerato-3-fosfatolas concentraciones
son
altas,
la
inhibicin
de
la
fructosa
2,6-bisfosfatasa ser relevado, fosfofructoquinasaactividad ser
inhibido y de carbono ahorafluya en la direccin inversa hacia la
gluconeognesis.El reverso de estas condiciones se asegurar de
quegluclisis contina en la direccin hacia la oxidacin,
con la eventual produccin de acetilocoenzima A. El ciclo metablico
por
el
cual
esto
producto de la gluclisis se convierte en carbonodixido se describe
en la seccin 3.4.
3.3. VA PENTOSA FOSFATO
HBarravaprincipalpara
la
oxidacin
dehidratos
de
carbono,sintetizadodurantecarbonofotosinttico'fijacin
",
esla
gluclisisseguidopor
el
cicloTCA.
VasSin
embargo,alternativaoxidativostales
comolava
oxidativade
las
pentosasfosfato
(OPP),
antes
llamadomonofosfatoshunthexosaovafosfogluconato, tambin existen.
Estevaest involucrada enlasinterconversionesyreordenamientosde
fosfatosde azcar conla redproduccin deNADPH.
3.3.1 UBICACINDE LA VA
Tantola gluclisisyla va pentosa fosfatoocurriren el mismo
compartimentocitoslicoy
puede
ocurrirsimultneamenteresultanteenprecisamenteinteraccionescompl
ejas y dinmicascontroladas.Elcitosolde ambosno fotosinttica(por
ejemplo,brotesde coliflor) y clulas fotosintticas(por ejemplo,
guisantesy hojas de espinaca) se cree quecontener todas lasenzimas
implicadas entantooxidativo.

Figura 3.2.Un esquemapara la regulacin dela gluclisis. La estimulacin

de laactividad de la enzimase indica mediantelneas en negritamientras que
la inhibicinse muestrapor las lneasgrises.DeTurneryTurner (1980).
P=fosfato.

y componentes nooxidativa de lapentosava del fosfato. El trabajo

deSchnarrenberger(1995) conhojas de espinacahamostrado una
localizacinpredominante delas actividades enzimticasde la va dela
pentosa fosfatoen el cloroplastofraccin.La actividad tambinse
encontr
en
elfraccin
citoslicay
estose
atribuy
a
laisoformascitosolespecficosconocidosde existir paraellosenzimas.Sin
embargo,un
anlisis
ms
detalladoparecamuestran
quelos
cloroplastosdelas
clulasde
las
hojasde
espinacasposeenel
complementocompleto
deenzimas
de
laoxidativova
pentosa
fosfatomientras
que
el citosolcontienelas enzimasde los dosprimeroreacciones dela va
pentosa
fosfato,
contrariamente
ala
opinin
generalizada
deque
las

plantasgeneralmente poseenuna pentosaoxidativacitoslicava del

fosfatocapazde la funcincclica.

3.3.2 EL CAMINO
Hay dossecuencias de reaccinprimaria enesteva(Fig.3.3), una
faseoxidativa(fase1) a partir de glucosa-6-fosfato aribulosa-5-fosfato y
una faseno oxidativa(fase2) deribulose-5-fosfato a un fosfatode
hexosayunatriosafosfato.
El primer pasoes la oxidacin deglucosa-6-fosfatode(5-glucono-l, 5lactona-6-fosfato
yes catalizadapor la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa conla
reduccin
simultnea
deNADP+.
Esta
reaccinconAG':0.42kjmol~^Eslibrementereversible.la enzima

Figura 3.3.Lava
hexoquinasa,(2)

del fosfato depentosay susHnksala gluclisis. (1)

la
glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa,(3)

lactonasagluconato-6-fosfato, (4) gluconato-6-fosfato deshidrogenasa, (5)

ribulosafosfato
de3-epimerasa,
(6)
ribosafosfato
isomerasa,
(7)
transcetolasa, (8) transaldolasa, (9) triosa fosfatoisomerasa, (10) aldolasa,
(11) fosfofructoquinasa, fosfato isomerasa(12) de hexosa.

tiene una altaespecificidad paraNADP"*" en lugar de NAD"^. Su

formaoligomricaactivamnima esun dmero, aunque oligomricayde
orden superiorSe han observadoformas. Citoslicayplastidicisoformas
dela
glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa
existir
enclulas
vegetales.Esta enzimaha sidopurificada a partir deplntulasde
guisantey comprende unheterotetrmerow^on unpeso molecular
de244kDa.Curiosamente,la
enzima
tieneunX^paraNADP+de14/iMyXmpara la glucosa-6-fosfato de120/
LIMy parece serabsolutamenteespecfica para estosdos sustratos. Los
anticuerpos generadoscontrala isoenzimacitoslico deglucosa6fosfato deshidrogenasaylaplastidic.

isoformanoreaccionan
de
forma
cruzadacon
su
respectivaisoformas.Hidrlisisnoenzimtica
degluconolactone-6fosfato puede ocurrir espontneamente. Sin embargo,formacin
degluconato-6-fosfato
tomacolocaren
elsiguiente
paso.
Estasegundaetapa est catalizadaporlactonasagluconato-6-fosfato, el
cual requiereMg^ "^ y la reaccinesirreversible(AG ': -.
209kJmorMrendimientogluconato-6-fosfato (Esquema13). El siguiente
pasode
esta
vaes
lairreversible
descarboxilacinoxidativa degluconato-6-fosfato aribulosa-5-fosfato
de liberacin deCO2w ^ITHla reduccinconcomitante deNADP"^yes
catalizadaporgluconato-6-fosfato deshidrogenasa.

Las

siguientes

reacciones son una serie de reversible interconversiones y

reordenamientos (pocos cambios en AG ') de los fosfatos de azcar.
Ribulosa-5-fosfato se puede convertir cualquiera en ribosa-5-fosfato
en una reaccin de isomerizacin catalizada por la isomerasa de
ribosa-5-fosfato o en-5-fosfato de xilulosa (el grupo hidroxilo de
ribulosa-5-fosfato en la posicin C-3 es invertida) por ribulosa-5-

fosfato-3-epimerasa.
La ribosafosfato isomerasaha sido purificada a partir de brotesde
alfalfay los cloroplastosde las hojasde espinaca y pareceexistir
comodmeros, trmeroso tetrmeros con pesosmoleculares en el
intervalo 40 a 228kDay un valor de0,5-5,0mM durante ribosa-5fosfato.
Las
clulas
vegetalescontienen
tpicamente
citoslicayisoformasplastidic. Slolimitado cantidad de datosest
disponible parala ribulosa-5- epimerasafosfato.
La siguiente secuencia de reacciones est catalizada por
unatranscetolasa y una transaldolasa. La transcetolasatransfiere una
unidad
de
dos
carbonos
a
partir
de
una
sustrato cetosa a un aldehdo mientras transaldo-lase transfiere una
glyceraldehyde- de tres carbonosUnidad 3-fosfato. Las reacciones
enzimticas que forman oromper los enlaces carbono-carbono, tales
como los presentesen transaldolasa y transcetolasa reacciones por lo

generalgenerar un carbanin estabilizado que se aadir

a un centro electrfilo tal como un aldehdo.En esta va, la
transcetolasa
transfiere
una
C2-resto de xilulosa-5-fosfato de ribosa-5-fosfato produciendo un C7
ceto-azcar-fosfato,sedoheptulosa-7-fosfato
y
un
C3
aldosugarphosphate,gliceraldehdo-3-fosfato. La reaccin dees reversible.
Estrechamente ligado cofactores tiaminapirofosfato (TPP) y Mg ^ "se
requieren ^para la actividad cataltica. Un aducto covalente
entrexilulosa-5-fosfato
y
TPP
se
forma
en
este
reaccin.Transcetolasa se ha purificado a homogeneidadde hojas de
espinaca y hay tanto citoslicay isoenzimas plastidic. Sin embargo,
parece quela mayor parte de la actividad de la enzima reside en el
plstido.La enzima tiene un kilometro de aproximadamente 100 / XM
paraxilulosa-5-fosfato, eritrosa-4-fosfato yribosa-5-fosfato y su
molecular nativopeso es de aproximadamente 150 kDa con una
monomricasubunidad de 37,6 kDa (Esquema 16).Transaldolasa
cataliza la libremente reversibleinterconversin entre la pareja,
sedoheptulose-7-fosfato y gliceraldehdo-3-fosfato, yel par, eritrosa-4fosfato y fructosa-6-fosfato. Una unidad de tres carbonos se transfiere
desdesedoheptulosa-7-fosfato a gliceraldehdo-3-de fosfato con la
formacin de un producto C4y fosfato de hexosa (Esquema
17).Transaldolasa funciona de una manera similar aaldolasa de clase I
y utiliza un aldlica catalizada por basereaccin de escisin en la que
una
base
de
Schiff
intermedia
est formado entre un grupo e-amino de unaresiduo lisina-enzima
esencial y el carbonilogrupo de sedoheptulosa-7-fosfato. La
plantaenzima no requiere ningn cofactor y no tienetodava sido bien
caracterizado.Una segunda reaccin de transcetolasa transfiere una
C2-resto a eritrosa-4-fosfato de xilulosa-5-fosfato (formado como se
muestra anteriormente) para formar unasegundo fructosa-6-fosfato y
gliceraldehdo-3-fosfato que puede entrar en la gluclisis. (Esquema
18). Se ha prestado relativamente poca atencin a laestudio de la va
del fosfato de pentosa oxidativaen clulas vegetales. Es evidente que
hay dos discretavas, en el citoslicas y los compartimientos de
plstidos,que
parecen
estar
controlado
por
unadiferente
complemento de las isoformas.

Tresmolculasde la entradade la glucosa-6-fosfato lava del fosfato

depentosaoxidativasonoxidado
atres
molculas
dela
pentosafosfato,ribulosa-5-fosfato,
yconCO2la
formacin
deseismolculas deNADPH.el rbolmolculas deribulosa-5-fosfato se
utilizan en el fase nooxidativa dela vapara regenerardos molculas
defructosa-6-fosfato y unomolculadegliceraldehdo-3-fosfato, que
sonambosintermediosglicolticos.
3.3.3 REGULACIN
Aunquela va pentosa fosfatopuedeconvertir completamentela
glucosa-6-fosfato en CO2(vase la figura3.3;. reciclar elproducto,
fructosa-6- fosfato paragIucose-6-fosfato), lamshabitualproductos
songliceraldehdo-3-fosfato y fructosa6-fosfato que seintroduzcala
gluclisis. Por tanto, lava puedeoperarcomo un ciclodependiendo de
los requisitoscelulares.Lava del fosfato depentosaoxidativaconvierte
entre15y30% de fosfato dehexosaa gliceraldehdo-3-fosfato y CO2 en
guisante
y
cloroplastos
de
espinaca.
La
glucosa-6-fosfato
deshidrogenasay
una
lactonasa
catalizar
la
primerapaso
comprometido de la pentosa fosfato oxidativova que es un punto de
control estratgico. Es elimportante punto de ramificacin entre la
gluclisis y laoxidativo va pentosa fosfato. Los productosde la va

pentosa fosfato dependercrticamente sobre los requisitos celulares

PORQUE
epimerasa,isomerasa,
transketolasey
transaldolasecatalyzedreacciones son libremente reversible.Actividad
deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato esbajo el control regulador
grueso y fino. Lamarcado incremento en su actividad en la patata en
rodajasTambin se observ la raz durante la respiracin aerbica.Los
aumentos sustanciales en la actividad de la glucosa-6-Tambin se han
observado fosfato deshidrogenasadespus del envejecimiento de los
discos de zanahoria, colinabo y patatas.
Laisoenzima cloroplasto se ve afectada por la NADPH /NADP "^
relacin, pH, Mg ^" ^ y los niveles de glucosa-6-fosfato. Ashihara y
Komamine (1976) purificadodeshidrogenasa de glucosa-6-fosfato a
partir delos hipocotilos de plntulasy mostr que la inhibicin por
NADPH erainversamente relacionada con el pH. La glucosa-6fosfatodeshidrogenasa tambin es inhibida por la ribulosa-1,5bisfosfato. El control de la isoforma cloroplastopor lo tanto, por la
NADPH / NADP + relacin puede seramplificada por la ribulosa-l, 5bisfosfato. Ambosisoformas citoplasmticos y cloroplsticos de
glucosa6-fosfato deshidrogenasa a partir de hojas de guisante
sonactivado en la oscuridad (lov ^ NADPH / NADP +); luzreacciones
de fotosntesis generan NADPH.Gluconato-6-fosfato deshidrogenasa
es tambinfuertemente inhibida por NADPH y la fructosa-2,6bisfosfato.En el oxidativo pathw pentosa fosfato ^ ay,NADPH se forma
a travs de las reacciones catalizadaspor la glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa y gluconate-6-fosfato deshidrogenasa. Los valores de
NADPH para ambas enzimas son 11 // M y 20respectivamente, y la va
pentosa fosfato espor lo tanto regulada por la NADPH / NADP +
proporcin.
El tratamiento de la planta de tejidos v ^ ITH azul de metilenoy
nitrato, que acepta electrones de NADPH estimula la va de las
pentosas fosfato oxidativo.La relacin de NADPH / NADP "^ parece
serel factor principal que regula el flujo a travs de lava pentosa
fosfato. Un NADPH reducido /NADP "^ relacin debe, en principio, una
sealaumento de la demanda celular de NADPH, la activacinde
deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato y unaaumentar en el flujo a
travs
de
la
pentosa
oxidativava
del
fosfato.
Las reacciones finales de la pentosa fosfatova, catalizada por la
isomerasa de fosfato de ribosa,fosfato de ribulosa 4-epimerasa,
transcetolasay transaldolasa estn cerca del equilibrio.Ya sea que la
glucosa-6-fosfato entra en la oxidativova del fosfato de pentosa o la
glicolticava en las clulas vegetales es fundamental para nuestra
comprensindel
metabolismo
respiratorio
de
glucosa.
Experimentosmedicin ^ "^ rendimientos COI y los patrones de
etiquetadode
diversos
intermedios
sugerir
que
el
5-15%
demetabolismo de la glucosa en las clulas vegetales respiratoria
procede a travs de la pentosa fosfato oxidativova y probablemente
no sea superior al 30% en relacina la gluclisis. Sin embargo, la

cantidad relativa deglucosa metabolizada en la pentosa oxidativava

de fosfato y la gluclisis sigue siendo poco clara.
3.3.4 PAPEL
El papel delfosfato depentosaoxidativavaparece serla produccin dela
reduccin
equivalente, NADPHparabiosintticacitoslicareacciones ylosfosfatos
deazcar utilizados en lasntesis denucletidos,lpidos yla pared
celularpolmeros.La oxidacin deNADPHformado enesta vanoest
acoplado
ala
fosforilacin
deADP.
Enlos cloroplastos, NADPHse cree que esmantener nivelessuficientes
deglutatin
reducidoquetiene
variasfunciones
celularesimportantestales
comoladesintoxicacinH2O2.Aqu
estimportante sealar quela NADPHgeneradoenreacciones de luzen
los cloroplastosnoest disponible gratuitamenteal citosol. La ribosa-5fosfato y eritrosa-4-fosfato generadaen la vaestn disponiblespara la
sntesis
denucletidosyderivadosde
cidoshikmico(fenlicos)
(precursores
de
aminocidos
aromticosy
ligninaenclula
vegetalparedes), respectivamente.
Esta vanoest acoplado ala fosforilacin deADP. Enlos cloroplastos,
NADPHse cree que esmantener nivelessuficientes deglutatin
reducidoquetiene
variasfunciones
celularesimportantestales
comoladesintoxicacinH2O2.Aqu
estimportante
sealar
quela
NADPHgeneradoenreacciones de luzen los cloroplastosnoest
disponible gratuitamenteal citosol. La ribosa-5-fosfato y eritrosa-4fosfato generadaen la vaestn disponiblespara la sntesis
denucletidosyderivadosde cidoshikmico(fenlicos) (precursores de
aminocidos
aromticosy
ligninaenclula
vegetalparedes),
respectivamente.
3.4 EL CICLO DEL CIDOCTRICO
Elciclo
del
cido
ctricotieneun
papel
clave
encarbohidratosmetabolismo,ya
quecompleta
elcatabolismo
deglucosaa
dixido
de
carbono.
Esefectivamente'quema'
acetilcoenzima Ael producto final dela gluclisisque opera en
elcitosol,yesto
ocurre
especficamenteen la mitocondria.El ciclo estambinconocido como
elcidotricarboxlico(TCA) ciclo,aenfatizar el hecho deque los
cidosorgnicosson
los
intermediosdel ciclo, o comoel ciclo deKrebs,enhonor deHansKrebs,
quien aisl por primera vezelenzimas del ciclode tejidos
animalesen1937.
3.4.1 CONTORNODEL CICLO
El ciclo (Fig. 3.4) se ha descrito como "una inteligentemanera de
escindir un enlace carbono-carbono reacios ',aludiendo a la gran

estabilidad
de
acetato,
que
en
la forma del ster coenzima A es el de partidamaterial. Se trata como
el primer paso, la vinculacinde acetato de (C2) a oxalacetato (C4)
para
dar
elQ
citrato
cido
tricarboxlico.
Dos
enzymecatalyzedreordenamientos luego se llevan a cabo a
producir a su vez de dos cidos a-ceto, oxalosuccinatey acetoglutarato (G5), ambos de los cuales sondescarboxila fcilmente a
su vez, con la prdida deCO2. El producto, un cido C4, succinato,
entoncesse
somete
a
regeneracin
en
tres
pasos
(deshidrogenacin,hidratacin
y
deshidrogenacin)
aproducir
oxaloacetato para completar el ciclo. Comoel ciclo de gira, la energa
se libera en forma deNADH, FADH2 y ATP.
Antes de discutir la enzimologa del ciclo enms detalle, es necesario
mencionar la reaccinque comprende la oxidacin de piruvato a
acetilcoenzima A, ya que esto proporciona un enlace directoentre la
gluclisis y el ciclo del cido ctrico. Esto esunproceso de tres pasos
complejo, que implica dos portadorasmolculas, pirofosfato de
tiamina
(TPP)
y
lipoico,
que
tambin
est
presente
comoladihidroderivado, dihydroUpoate(DHL). Por lo tanto,la oxidacin
depiruvatoa
acetilcoenzima
Aes
catalizada porun complejo
enzimtico,
piruvato
deshidrogenasa,
y
ocurrecomo
demostracin^nenEsquema19:

Enel primer paso,se producela descarboxilacinylarestoacetilose

transfiere apirofosfato de tiaminaconla reduccin del grupocarboxilo,
a continuacin, Este intermedio, unahidroxietil-TPP, sufre otra
transferenciaalipoato, durante el cuallos dostomos de hidrgeno
deun-hidroxietil TPPreducenlipoatoadihidrolipoato(DHL). La etapa
finalenel proceso implicaotra reaccinde transferencia concoenzima
A,con el lanzamiento deDHL yelformacin de lacoenzima Asterde
acetato.
Lacomplejoenzima
tieneunFADfuertemente
unidocoenzimaque
est
vinculadocomoun
aceptor
de
electronesaNAD"^y la energase libera dela reaccincomoNADH.El
cambio global enestndar gratis

Figura3.4El
cidoctrico
ciclo.Lasenzimas
(nmeros
en
crculos)se
muestran
en
laFig.
3.5.
Los
sitios
deNADHy
LiberacinFADH2se muestran
con
flechas.

energa
es9.4kJmol~^Esto entonceses comoacetilcoenzima Ase suministra
alciclo del cido ctricoa travs dela gluclisis. Sin embargo,acetil
coenzimaA
es
tambin disponiblea la clulacomo el producto dela/Espiral3oxidacin, es decir, ladegradacin oxidativade los cidos grasos. La
fuentede
la
acetilcoenzimaA
para
el ciclo del cidoctricoentoncesvariar de vez entiempodentro de la
planta,
dependiendo
de
lo
metablicaprocesosestn
en
funcionamientoen cualquier momento.
3.4.2 LASENZIMAS DEL CICLO
Los ocho enzimas del ciclo del cido ctrico, y el reacciones que catalizan, se muestran
irrFig. 3.5. laprimera enzima, la citrato sintasa, controla la condensacin
del precursor, acetil coenzima A, conoxaloacetato; al mismo tiempo el ster coenzima
Agrupo se hidroliza y coenzima A se libera enla mdium. Esta reaccin tiene una gran
negativocambio en la energa libre estndar (Fig. 3.5) de manera que laformacin de
citrato es esencialmente irreversible.Citrato sintasa no es completamente sustrato
especfica y aceptar monofluoroacetato^ CHiFCO, como la coenzima A ster, en lugar
de acetil coenzima A. Fluoroacetato es una forma naturalse producen toxina, presentar
en particular en la planta

los
seres humanos es de 2-5 mg por kg de peso corporal.
Fluorocitratoproducida
a
partir
de
la
reaccin
de
fluoroacetilocoenzima A y oxaloacetato no en s es txico,pero es un
potente inhibidor de la enzima de la siguienteel ciclo, aconitasa. Por lo
tanto, los efectos fatales defluoroacetato en humanos o animales de
granja que ingiereneste material se deben a la inhibicin del cicloen
el paso de la aconitasa. La plantadebe proteger su ciclo TCA del
fluoroacetatoque produce, por compartimentacin.El siguiente
enzima, aconitasa, reorganiza citratoa isocitrato, a travs de una
deshidratacin a ds-aconitato,y una hidratacin posterior de este
transitoriaintermedio
a
isocitrato.
La
aconitasa
es
una
estereoespecficaenzima, que cataliza la eliminacin dew ^ ater para
dar un ds-cido y la adicin deagua para dar? / 7r ^ o-Ds-isocitrato.
El siguiente enzima del ciclo, isocitratodeshidrogenasa, cataliza la
descarboxilacin oxidativade isocitrato a un-cetoglutarato (o 2oxoglutarato) utilizando NAD "^ como oxidante. La reaccinexige que
los iones metlicos Mg ^ "^ o Mn ^" ^ ysuministra energa a la

mitocondria en formade NADH. Energa se da hacia fuera y la reaccin

es
esencialmente
irreversible.El
cuarto
enzima,
a-cetoglutarato
deshidrogenasa,
tambin cataliza una reaccin irreversible. Esun complejo, bastante
similar a la que se oxidapiruvato a acetil coenzima A (seccin 3.4.1).
Ellalleva a cabo la descarboxilacin oxidativa dea-cetoglutarato, al
mismo tiempo esterificar elproducto con la coenzima A. Dos
molculas portadoras,pirofosfato de tiamina y el cido lipoico, son
involucrado en la produccin final de succinilcoenzima A.El quinto
enzima, tiocinasa succinato, es unasencilla enzima hidrolizante,
rompiendo el tiosterBond y al mismo tiempo la generacin de una
molculade ATP a partir de ADP y fosfato inorgnico.
Los ltimos tres enzimas del ciclo de catalizan lareacciones estndar
de deshidrogenacin, hidrataciny deshidrogenacin y requieren
menos
comentario.
La conversin de succinato en fumarato, catalizadapor la succinato
deshidrogenasa, genera unamolcula de la flavoprotena FADH2 del
FAD.Esto puede ser reoxidado por el transporte de electronescadena,
donde est vinculada a la generacin deaproximadamente 1,5
molculas
de
ATP
por
oxidativofosforilacin.
Succinato
deshidrogenasa tambinde inters, porque est competitivamente
inhibida porla adicin de cido malnico, HO2C CH2CO2H,el
homlogo inferior de succinato. Esto proporciona unaposible punto de
control del ciclo, ya que la malonilcoenzima A es un constituyente
celular comn, requiere,por ejemplo, en la biosntesis de cidos
grasos.
HParacadavuelta delciclo, tres molculasdeNADHse producen, as
como
uno
FADH2y
unoATP,produciendo
de
este
modoaproximadamente10equivalentesde
ATP(NADHc^2.5ATP;
FADH2:
^1.5ATP).Por
lo
tanto,el
ciclo
del
cidoctricoes
unmuyimportantefuente de energa parala clula vegetalyrecuperala
energa restanteligadoenazcarque an no hasido puesto en
libertadporla
gluclisis.
es
posible
calcularque
elcataboHsmdeunomolcula
de
glucosaaseismolculas de CO2a travs dela gluclisisyel ciclo del
cidoctricoproporcionarla plantacelicon 32ATPs. Si la energalibre
estndarcambiarpara
la
oxidacinde
la
glucosa
porO2es
-2823KJmol-i y la hidrlisis deATPa ADPes30.5kjmol~^entonces
laconservacin de la energalibredela oxidacin biolgicade la
glucosaes casi34,5%.

3.4.3 REGULACIN
Se ha sugeridoqueel ciclo del cidoctrico enplantasest regulada
porel
volumen
de
negociosde
la
enzima,
portransportemetabolitodesde
dentro
ydesde
fuera
la membrana mitocondrial, porADP: relaciones deATPopor el
pH(Wiskitch,
1980).
Hasta
qu
puntoestos
diferentesfactoresestninvolucradosanno estdel todo claro. Sin
embargo,se sabe quemuchas de las enzimasdeel cicloest
reguladopor variosmetabolitos, comose indica en laFig. 3.6.
Puntosobviosde
la
regulacin
sonel suministro deacetil coenzima Aa partir deladescarboxilacin
delpiruvato,y la inhibicin delaenzimapiruvatodeshidrogenasaporsu
extremoproductos,acetilcoenzimaA
yNADH.Variosenzimasse
ven
fuertemente afectadospor los niveles deAMP, ADP oATP presente, por
ejemplo,citrato sintasaya-cetoglutarato deshidrogenasa.Por lo tanto,

estas
enzimas(Fig.3.6) pueden ser especialmenteimportanteen el control delflujo
de carbonoa travs del ciclo. Tambin se puedesealar quealgunos de los
intermediosen el cicloson capacesdela inhibicin deciertas enzimas, por
ejemplo,oxaloacetatoinhibe
lasuccinatodeshidrogenasa.Finalmente,
esevidenteque
el
citratoejerceindirectamenteunregulador
efecto sobrela gluclisis(seccin 3.2) y por tanto lacantidad depiruvatoque
se
suministra
alciclo.Muchomstrabajo,
sin
embargo,
todava
senecesitabadeterminar con precisin cmoesta funcinmetablicaclavede
la
degradacin
delos
hidratos
de
carbonose
controla
de
plantas.
3.4.4.FUNCIONES

Aunque el ciclo de citrato opera principalmentecomo una va

catablica, puede ser empleadosintticamente para proporcionar
productos
intermedios,
por
ejemplo,
para la sntesis de aminocidos. Por ejemplo, asprticocido es
producido por transaminacin de oxaloacetato(Captulo 7). El
oxaloacetato requierepodra ser sacado del ciclo, aunqueHay que
recordar que un poco ms de oxaloacetatotendra que ser aadido
(por ejemplo generadoa partir de piruvato) con el fin de mantener el
ciclode inflexin.El papel ms importante del ciclo TCA desdeel punto
de vista sinttico, sin embargo, es su lugar en elconversin de
carbohidratos en lpidos, queocurre en la germinacin de semillas de
aceite (vase el captulo 6).Aqu el ciclo de citrato se modifica
esencialmente puenteandoesos pasos en el ciclo que implican la
prdidade CO2 (Fig. 3.7). Dos nuevas reacciones sonintroducido: la
conversin de isocitrato englioxilato y succinato y la sntesis demalato

de glioxilato y externa acetil coenzimaA. Esta nueva va metablica

ingeniosa,conocido como el ciclo del glioxilato, permite que el
cicloseguir girando una y al mismo tiempoproporciona la clula con
succinato, que se convierteen oxaloacetato en la mitocondria yluego
en PEP en elcitosol. PEP es el de partidamaterial para la
gluconeognesis
(seccin
3.2.2)
y por cada dos molculas de succinato tomadafuera del ciclo del
glioxilato, una molcula deglucosa-6-fosfato ser producido.Las dos
nuevas enzimas, la isocitrato liasa y malatosintasa, se inducen
especficamente en la germinacindescendencia como la degradacin
de

lpidos ocurre. Se producenen orgnulos especiales, los glioxisomas,

de manera que laciclo del glioxilato se encuentra lejos de otros
metablicareacciones y est libre para producir glucosa-6-fosfato para
la planta de semillero hasta que la planta es capaz deproducir azcar
ms directamente por la fotosntesis.

3.5. TRANSPORTE DE ELECTRONESY LA FOSFORILACIN

OXIDATIVA
Como se describe en las secciones 3.2 y 3.4, NADH yFADH2 se forman
en la glicoltica y TCAciclos. Cada una de estas molculas ricas en
energa tiene unpar de electrones con potencial de transferencia de
alta, yla energa libre liberada durante la transferencia puede
serutilizado para la sntesis de ATP. La energa aprovechadaen ATP se
usa para accionar numerosos bioqumicaprocesos en la clula. La
transferencia
de
electrones
es
mediada por los transportadores de electrones presentes en
elmembrana mitocondrial interna. El electrncadena de transporte, se
hace referencia de otro modo como lacadena respiratoria, tiene una
serie de cuatro protena grandecomplejos a travs de la cual los
electrones pasan desdeinferior a potenciales redox ms altos. Slo
doscomplejos, sin embargo, son comunes a la oxidacin tanto de
NADH y FADH2. El flujo deelectrones provoca el bombeo de protones
a
partir
de
la
lado de la matriz al espacio intermembrana. Estemantiene una fuerza
motriz de protones compuesto de unagradiente de pH y un potencial

de
membrana.
Los
protones fluyen nuevamente dentro de la matriz a lo largo de
variosvas, pero sobre todo a travs de la ATPsynthesizingcomplejo
incrustado
en
la
membrana
durante la sntesis de ATP. La caracterstica central de esteproceso de
la fosforilacin oxidativa es lageneracin de gradiente de protones y
su
acompaamiento
potencial de membrana.
3.5.1 TRANSPORTE DE ELECTRONES
La secuencia de eventosque medianel flujo deelectrones deNADH
oFADH2alO2va
citocromo oxidasa(la va de cianuroy minsculas)parece ser
similarenambosanimales
ymitocondriasde
plantas.Algunas
diferenciasimportantesentre
las
mitocondriasde
animales
y
plantashansidoobservadas
ystosse
discutenenmayor
profundidadms adelante en estecaptulo.Ahora essuficiente parael
estadosimplemente queestas diferencias sonla presencia enplantas
de(1)
la
oxidacinrespiratoria-enlazada
de
NADHexterna,(2)
uncianuroyantimicinaAinsensitivealternativavade
transporte
de
electrones,
(3)
unasegundadeshidrogenasaNADPHque
oxidaexternaNADPHproducidoprincipalmente
de
laoxidativova
pentosa
fosfatoy(4)
unaoxidacin-rotenona
insensiblede
NADHinterna(distinto
delcomplejo
I).
Los principales componentes dela cadena respiratoriaestn
dispuestosen unidadesmulti-protena como se muestra enFig./, Se
hace
referenciade
otro
modo
comolaNADHcomplejodeshidrogenasaoNADH-ubiquinona
(UQ)
oxidorreductasa;
se
hace
referenciade
otro
modo
comosuccinatoreductasaocomplejosuccinatodeshidrogenasa-UQ;///,
Se
hace
referenciade
otro
modo
comoelcitocromo
complejo oUQH2-citocromo reductasa; ZV, referido de otro modo
comoelcitocromo
complejooxidasa.
Los complejos anteriormente mencionados son hidrfobosen
naturaleza. Sin embargo, el componente de citocromoentre el
complejo III y IV es una soluble en agua-protena perifrica en el
exterior de la mitocondrialmembrana.El primer complejo de la cadena
respiratoria (Fig. 3.8) es la NADH deshidrogenasa interno que es
responsable de la oxidacin de NADH yreduccin de ubiquinona
(tambin conocido como coenzimaQ, la CoQ, UQ). NADH puede
derivarse defuentes tales como ciclo de TCA, la oxidacin de
piruvatopor piruvato deshidrogenasa u oxidacin de glicina

en las mitocondrias de las hojas verdes de la descarboxilasa glicina.El

sitio de la oxidacin de NADH se enfrenta a la matrizde la membrana
mitocondrial; por tanto, sloel NADH se oxida matriz.La ubiquinona es
una
sustituido
1,4-benzoquinona
que contiene 9 o 10 de isopreno (C5) unidades y por lo tantose
refieren como Q-9 o Q 10, aunque ubiquinona de diferentes fuentes
contiene diferentenmero de unidades de isopreno. ubiquinona
oxidadopuede aceptar electrones y protones para formar una
Figura3.8Una

representacinesquemtica

dela

distribucin

de

componentesredoxdentro de lainterna mitocondrialmembrana.Lasflechas en

negritaindicanla vageneral deflujo de electronesde los complejosI oII a
travs
dela
piscinamvildeubiquinona(UQ)
a
los
complejosIIIyIV.
Abreviaturas:alt.
xido.
=
'Oxidasa
alternativa';
ext.
NADHdeshidrogenasa=externaNADHdeshidrogenasase
encuentra
en
lacaraCde la membranamitocondrial interna; Nl, N2, N3 ySI,S2, S3 hierroazufrecentrosde protenasdel complejo IyII, respectivamente complejo; CUA,
CUB
=cobre
tomosasociados
conla
citocromo
oxidasa;
cyt=citocromo;
Fe-S
=protenashierroazufre
del
complejo
III(Rieske
centro).DeAnderson
&Beardall, (1991), con el permiso.

ubiquinona reducida refiere como sea ubiquinolo hidroquinona a

travs de un ubisemiquinona establ intermedio (Fig. 3.9). La
ubiquinona
es
soluble
en
lpidos
y, por lo tanto, es capaz de actuar como un redox mvilportadora
entre los complejos en el interiormembrana mitocondrial.El complejo
NADH
deshidrogenasa-UQ
es
compuesta de fosfolpidos y polipptidos; comotantos como 30
polipptidos pueden estar presentes con solamenteunos pocos
participar
en
las
reacciones
redox
de
la
cadena respiratoria. Es tan grande como la subunidad grandede un
ribosoma y es probablemente la protena ms grandecomplejo de la
membrana mitocondrial interna.I complejo contiene una flavina no
covalentementemononucletido (FMN), hasta siete ironsulfurcentros
y, posiblemente, una ubiquinona interna.El hierro es lbil en medio
cido, a diferencia de la tetrapyrroleboundFe en citocromos. Tres de
estos ironsulfurcentros denominan Plumn, N2 y N3estn bien
caracterizados. Un camino previsto dela transferencia de electrones
en el complejo es: NAD ^F M N ^ N 3 - ^ N l b ^ N 2 -> U Q. El
procesotiende a ser inhibida por la rotenona. Hierro-azufre
centros son capaces de transferir electrones a travs de slola
oxidacin / reduccin de Fe ^ '^ / Fe ^ "'", respectivamente.Como los
electrones pasan a travs de los complejos I, protonesson trasladadas
desde la matriz a la intermembranaespacio (IM - espacio). El H + / e
relacin ~ esProbablemente 2.Succinato se oxida por la unida a la
membranadeshidrogenasa enzima succinato (II complejo)que
comprende adenina dinucletido de flavina(FAD), y las protenas
hierro-azufre. Este complejo esno implicado en la translocacin de la
matrizen el espacio inter-membrana, pero no reducirubiquinona (que
es mvil) como su punto final.El complejo II contiene dos grandes
Subcomplejos.El mayor subcomplejo hidrosoluble contienedos
subunidades conocidas como Fp e Ip conpesos moleculares de 65-67
kDa y 26-30 kDa,respectivamente. El FP (protena flavo-hierroazufre)contiene FAD (unido covalentemente) y dos ironsulfurprotenas
de
configuracin
2Fe-2S,
llamados
centros de SI y S2.
La subunidad contiene un Ip protenas hierro-azufre de la
composicin 4Fe-4S y esllamado S3. El otro subcomplex es hidrfoboy
consta de dos pequeos polipptidos (7 kDa y13kDa). Un citocromo b
se asocia con unode los polipptidos; su funcin es desconocida,
peroes equimolar con FAD. Se sugiere queuna de estas subunidades
hidrofbicas lleva elsitio (s) de unin semiquinona. Las subunidades
estnrequerido para la unin a la succinato deshidrogenasala
membrana y para la reduccin de ubiquinona.Ellos no, sin embargo,

participan
enoxidacin
de
succinato
en
presencia
de
artificialaceptores de electrones. Los electrones se transfieren
desdeFADH2 a travs de SI, S2 y S3 a la ubiquinona.Succinato + UQ
fumarato + UQH2Complejo II est estrechamente regulada y existe
como unaforma inactiva se estabiliz en una estequiometra 1: 1
porunin con oxaloacetato. La incubacin con cualquieraATP o
ubiquinol activa la enzima. Cuanto ms grandesubcomplex contiene
el sitio de unin inhibidor(Se une oxaloacetato) y el sitio activo
cataltico(Para la deshidrogenacin reversible de succinato).La
transferencia de electrones de ubiquinol acitocromo ocurre a travs
de la cual el complejo IIIcomplejo o ubiquinolcytochrome tambin se
denominaoxidorreductasa. Este complejo puedeser comparado con el
plastoquinol-plastocianinaoxidorreductasa, o cyt complejo de
tilacoides(Vase el captulo 2). Complejo III contiene trespolipptidos
con los grupos redox: cyt ^ i,y una protena de hierro-azufre conocido
como el Rieskeprotena. Esta protena tiene un clster 2Fe-2S
adjuntoal polipptido a travs de la quelacin de uno a dos
Fecistenas y el otro Fe a dos histidina

Figura3.10La cadenade transporte de electronesen las mitocondriasde

plantas superiores. Componentesde la cadenase agrupan ensus
presuntoscomplejos. Tambin se indicanlossitios de accindealgunos
inhibidoresde
uso
comnen
las
investigaciones
detransportede electronesrespiratoria(flechas en negrita) y el potencial
redoxestndaraproximada (EQ) de lacomponentes.Abreviaturas:Plumn, N2,
N3 =hierro-azufrecomplejos de protenasdecomplejo I; SI,S2, S3 =hierroazufrecomplejos de protenasdecomplejoII; CUA, CUB =tomos de

cobreasociados
acitocromo
oxidasaen
el
complejoIV;
Fe2S2=Rieskecentro deprotenashierro-azufre; UQ=ubiquinona. DeAnderson
&Beardall(1991), con el permiso.

Residuos. La estructura globular w ^ on la 2Fe-2S centro se extiende

dentro de la capa acuosa en el P-fase de la membrana mitocondrial
pero ancla a la membrana por el hidrfobo Nterminus. Citocromo
tambin es globular pero el hidrofbico C-terminal es el sitio de
anclaje. La cyt h subunidad se une tv ^ o hemes. Una hemo, conocida
como ^ L (tambin llamado ^ 555 debido a su absorcin a- pico) est
situado hacia la fase P de la membrana y el segundo hemo, ^ H
(tambin llamado ^ 560 para su pico a-absorcin) est en la matriz
lado de la membrana. Estos se abordarn a continuacin (vase
tambin
la
Fig.
3.10)
como
cytfc565
y
cytfe5605
respectivamente. El complejo tambin contiene protenas bsicas que
no tienen ninguna funcin redox aparente pero puede tener una papel
en H "^ translocacin. Complejo III se inhibe por bajas
concentraciones de antimicina A (1 mol complejo / 1 inhibidor moles).
Este complejo aislado de las mitocondrias de batata se pueden
resolver en ocho subunidades con pesos moleculares de 51, 49, 33,
32, 27, 17, 10 y lOkDa. Dos polipptidos de pesos moleculares
intermedios han sido caracterizado como cytfc (32 kDa) y (33 kDa).
Complejo transfiere electrones al complejo III IV (Citocromo oxidasa) a
travs del componente redox, transferencia citocromo Electron se
cree que producirse a travs de un "ciclo protonmotive-Q '(vase
seccin 3.5.6). Los portadores de electrones son tan dispuestos travs
de la membrana que los electrones son transportados en una
direccin y de hidrgeno en el otro resultante en el bombeo de
protones. La observada H "^ / e ~ proporcin es 2.
El complejo citocromo oxidasa IV abarca el membrana mitocondrial
interna.
Es
el
terminal
oxidasa de la cadena respiratoria en la transferencia de electrones de
cyt a O2. Citocromo no es una parte integral del complejo IV, pero es
estequiomtricamente asociado con l y se cree que es
espacialmente asociada con la subunidad II de la citocromo oxidasa.
El citocromo c es un electrn soluble en agua existe soporte y entre lo
interno y las membranas mitocondriales externas.
Se puede difundir libremente en este espacio, actuando as como un
servicio de transporte mvil llevar electrones entre el citocromo de
complejo III y citocromo un Complejo IV. La por lo tanto, tasa de flujo
de
electrones
puede
ser
regulada
por
la frecuencia de las colisiones de CYTC con el complejos. El flujo se
retarda por artificialmente la reduccin de su concentracin (dilucin
aadiendo
fosfolpidos) de endgeno cyt La estructura de este complejo ha sido
bien estudiado desde un nmero de fuentes; el hemo est situado en
una

hendidura hidrofbica. Complejo IV se inhibe por la azida, cianuro o

monxido de carbono. Mitocondrias de camote tener un complejo IV
contiene citocromo ^, citocromo <^ 3 y dos tomos de cobre
(designados
CUA
y
CUB).
Ferricitocromo
y
la
cprico
tomo CUA son paramagnticos y son visibles "por resonancia
electroparamagnetic espectroscopa (EPR) y CUB est acoplado a
antiferrimagnetically citocromo ^ 3 en el sitio activo de la enzima y
por lo tanto es "invisible" mediante espectroscopia EPR. La estructura
de la subunidad de cyt oxidasa es complejo: msde diez subunidades
pueden estar presentes, slo dos de la Tres subunidades ms grandes
que contienen los centros redoxson importantes para una
transferencia de electrones operativa.Tanto los hemos CUB y estn en
la subunidad mayor yCUA en la subunidad ms pequea, subunidad II
(Fig. 3.11).Como se muestra en la Fig. 3,11, cyt en el lado
citoplsmicode la membrana es la fuente de electrones quese
transfieren a CUB Cua-y heme son lacentros de gemelas (cerca uno
del otro) de la subunidad Isituado en el lado de la matriz de la
membrana yaceptar un electrn del CUA (o hemo Ella aceptacin de
la segunda de electrones conduce a la uninde O2. Las especies de
oxgeno no se libera comosera txico. Los protones son tomados de
la matrizlado y el centro acepta tercio de electrones produciendouna
Fe "*" ^ hemo. El cuarto de electrones forma la Fe ^ "^protones y
otras especies se toman de lalado de la matriz para producir agua.
Por lo tanto, los protones no estnextruida a partir de la matriz, como
en los sitios de acoplamiento1 y 2 (complejo I y III, respectivamente),
pero
se eliminan como unido covalentemente al oxgeno. LaH "* '/ e ~
relacin se considera como 1.

3.5.2 OXIDACINDEENDGENO
La membrana mitocondrial interna planta tiene una NADH
deshidrogenasa externa que est separado de la deshidrogenasa del
complejo I o interna NADH deshidrogenasa. A diferencia de los
mamferos mitocondrias, la oxidacin de NADH endgeno por NADH
deshidrogenasas internos en las plantas es solamente parcialmente
inhibido
por
la
rotenona.
Esto
es
porque hay dos NADH deshidrogenasas separadas en la superficie
interna de la mitocondrial interna membrana y slo uno de estos (Del
complejo I) es sensible a la rotenona. La enzima-rotenona insensible
es distinta de complejo I y tiene una X ^ de 80 / iM para NADH como
comparado con el 8 / IM para la rotenona y minsculas enzima. El
inhibidor de la enzima sensible se refiere como el "primer sitio de
acoplamiento
'porque
el
reversible
flujo de electrones de NADH a ubiquinona es acoplado a la generacin
de
H
"^
electroqumica
gradiente (y el potencial de membrana que acompaa a) travs de la
membrana mitocondrial interna. Ella se ha sugerido que la rotenona-

insensible
actividad simplemente representa una segunda reduccin UQ sitio
para el complejo I y no una deshidrogenasa adicional. Esta nocin
tiene
soporte
experimental
y un modelo del complejo I se present en que hay un sitio de unin a
NADH-y
dos
sitios para la reduccin de UQ, slo uno de los cuales es insensibles a
la rotenona. La existencia de una intermedio comn sugerir que su
nivel de reduccin puede influir en el sitio de unin a NADH.
Un kilometro alto para NADH de la rotenona y minsculas
enzima puede ser debido a las restricciones de acceso (oimpedimento
estrico) de UC a un rotenona y minsculassitio. Estos aspectos
siguen
siendo
discutible.
La enzima-rotenona insensible no est involucradoen la translocacin
de protones de la matriz en elIM espacio interior, por lo tanto, no se
acopla
a
la
cambio
en
H
"^
gradiente
electroqumico
y
asociados
potencial
de
membrana.
Esta
enzima
puede
ser
involucrado con la va de electrones cianuro resistente.Se ha sugerido
que la rotenoneinsensitiveasistencias deshidrogenasa del volumen de
negocios delos intermediarios del ciclo del cido ctrico con alto
citoslicaCociente ATP / ADP. Esta va est regulada por
laconcentracin de NADH real (alta en elmatriz mitocondrial y no la
proporcin de NADH /NAD "^. A diferencia de la NADH
deshidrogenasa externo,esta enzima no se ve afectada por EGTA o Ca
^ "^.La importancia fisiolgica de esta enzima espoco comprendido.
Sin embargo, es posible que enel caso de la inhibicin del complejo I,
que lo hardetener la translocacin de protones, la enzima se
asegurarcontinuacin
de
la
transferencia
de
electrones.
La posibilidad de la presencia de otra NADPdependentenzimas se ha
sugerido
en
el
matriz
de
mitocondrial,
por
ejemplo,
glutatin
reductasa, isocitrato deshidrogenasa y malatodeshidrogenasa. Esto
pone de relieve una ms importantepapel de NADP (H) en
mitocondrial
respiracin
de
las
plantas
que se haba previsto anteriormente.
3.5.4 OXIDACINDEEXGENO NAD (P) H
Las mitocondriasde las plantas superiores, en contraste conlas
mitocondrias de mamferos, catalizan una oxidacin rpida H exgeno
de
NAD
(P)
en
ausencia
de
aadido NADH citocromo externa se oxida por una deshidrogenasa
NADH
externo
ubicado
en
la superficie exterior de la mitocondrial interna membrana y dona
electrones
directamente
a
complejo de 111 + ubiquinona (sin pasar por el complejo I y el primer
sitio de H "^ translocacin). Este va se inhibe por la antimicina A, es
insensible

a la rotenona (Comparar con el complejo I) y lo hace no parece estar

relacionado con la oxidasa alternativa. No hay inhibidores especficos
de
esta
NADH
deshidrogenasa. Sin embargo, un nmero de flavonoides (Por ejemplo
platanetin: 3,5,7,8 tetrahidroxi-6-isoprenylflavone) inhibir la oxidacin
de
NADH
externo.
El calcio en concentracin micromolar (a menudo encontrado unidos a
las membranas mitocondriales) asegura la actividad mxima de la
enzima.
Sin
embargo,
ningn
calmodulina est involucrado. Era, por lo tanto, no sorprendente
observar la inhibicin de la enzima por Ca ^ "^ quelantes tales como
EGTA. La inhibicin de la la enzima es mayor si EGTA se aade antes
de la Adems NADH; unos resultados bajos de inhibicin si la
secuencia se invierte. Esto sugiere que la oxidacin de NADH de
alguna manera (cambio conformacional en la enzima) hace Ca ^ "*"
menos
accesible
a
EGTA.
NADPH exgena tambin se oxida, al parecer por una Ca ^ "^ deshidrogenasa dependiente Aunque. hay similitudes entre la
oxidacin
de
(relaciones externas NADH y NADPH ADP-O por debajo del 2 y
rotenona y minsculas), pH ptimo para NADPH es menor que para
NADH
y
la
respuesta
a los quelantes es diferente. Aqu, es importante notar que ni la
fosfatasa (NADPH conversinen NADH) ni un transdehydrogenase
nicotinamida participa en la oxidacin de NADPH mitocondrial. Por lo
tanto,
se
presume
que
en
las
plantas
dos
deshidrogenasas separadas estn presentes en el exterior superficie
de la membrana mitocondrial interna. Las estructuras de las
subunidades
de
la
NADH
o
externa
Deshidrogenasas NADPH no estn claras. Ellos parecen ser
flavoprotenas
y
no
parecen
contener centros hierro-azufre; por lo tanto sera interesante para
estudiar su mecanismo de Minteraccin con el complejo III o
ubiquinona. Relativamente poca informacin disponible sobre la papel
fisiolgico
de
la
NADH
deshidrogenasa
externa
que es capaz de oxidar citoslica NADH. El de NADH es baja, lo que
significa
que podra utilizar de manera eficiente NADH citoplasmtico
(De la va glucoltica, / ^ - oxidacin enperoxisomas, etc) y funcionan
como un servicio de transporte redoxa la cadena respiratoria. Tenga
en
cuenta
que
los
peroxisomas
son permeables a solutos pequeos. Esta enzima podratambin estar
implicados en la reduccin de nivel de lactato en la plantatejidos en
condiciones de hipoxia. NADPHla oxidacin por las mitocondrias en el
otro lado,podra mejorar la tasa de pentosa citoslicava del fosfato
(NADPH citoslico es unaregulador eficaz). La oxidacin de NADPH
podratambin mejorar el metabolismo de citrato (citrato convierte
en Qf-cetoglutarato en presencia de NADP "^ -isocitrato
deshidrogenasa dependiente y aconitasa).Por lo tanto, la rpida reoxidacin de NADPHsuministrara el esqueleto de carbono para

biosintticapropsitos y el crecimiento celular activo . Es, por tanto,

est implcito que el flujo de electrones a travs de la externa
NADPH deshidrogenasa debe estar bien regulado.
3.5.4 CIANUROALTERNATIVA-OXIDASARESISTENTE
Una caracterstica nica de las mitocondrias de plantas es la
presencia de un mecanismo alternativo de electrones transporte de
ubiquinol al oxgeno que hace no implica el complejo citocromo
oxidasa. Este va se inhibe por SHAM (salicilhidroxmico cido), pero
no es inhibida por cianuro o antimicina (Ver Fig. 3.10). No
translocacin de protones se produce a travs de esta va y los
protones necesarios para la reduccin de oxgeno se derivan de la
matriz. La oxidacin del ubiquinol libera los protones a la matriz.
Aunque la alternativa cianuro resistente la respiracin fue identificado
ya en 1927, el purificacin de la oxidasa alternativa ha sido difcil
debido a su naturaleza extremadamente lbil en preparaciones
solubilizadas. Varios de purificacin intentos se han reportado; en la
mayora de ellos purificadas muestran mltiples bandas de protenas
en SDS-PAGE. El mejor ejemplo de la purificacin es de las
mitocondrias col de mofeta que mostraron cuatro principales bandas
de
protenas
de
29,
36,
57
a
59
y
65 kDa. Un peso molecular nativa de 160 kDa fue identificado.
Espectros de diferencia Redox (borohidruro reducido aire menos
oxidado)
mostr
una
absorbancia
aumentar
en
el
intervalo
de
290-335
nm
y
una
disminuir por debajo de 285 nm con un mnimo alrededor 275 nm. No
hay evidencia firme de la presencia o la identificacin de los centros
redox en cualquiera de las muestras purificadas. La asociacin con
cualquier alternativa oxidasa de cofactores de transferencia de
electrones, tales como, flavoprotenas, 4>de tipo citocromos y
ironsulfur centros, se han sugerido, pero no evidencia concluyente
apoya la opinin. El producto de la reduccin de oxgeno se cree que
es ser H2O en lugar de H2O2 o superxido ion; la Este ltimo sera
energticamente ms fcil. Este apoya la posibilidad de un centro de
metal de transicin en la oxidasa alternativa. Una "protena de
acoplamiento factor "es esencial para el flujo de electrones de
acoplamiento entre la piscina ubiquinona y la alternativa va. A
medida que el cianuro de resistencia vara con etapa de desarrollo, el
tipo de tejido y fisiolgico estado de la planta, el factor de
acoplamiento puede actuar como una componente limitante de la
velocidad en la determinacin del grado de la resistencia cianuro. Los
detalles de cmo rama electrones en la va alternativa
y su mecanismo son desconocidos. La funcin fisiolgica de la
alternativa oxidasa no est claro. El flujo de electrones desde el
Piscina quinol travs de la va no producir un gradiente electroqumico
y ningn Se genera ATP. Se pierde la energa potencial en forma de
calor. En la col de mofeta la produccin de calor permite el
crecimiento a bajas temperaturas. En lirio de Arum el calor generado
se volatiliza atrayentes de insectos a la polinizacin de la ayuda. La

respiracin cianuro resistente Tambin puede considerarse como un

"sobre-flujo" para drenar de la energa producida por exceso de
hidratos de carbono en la sistema. Por lo tanto, la va es un
desperdicio con respecto al presupuesto de carbono de la planta y
conservacin de energa.
3.5.5 MITOCONDRIALUNIDOS
en ausencia de sustrato (estado 1). La tasa de Aumenta el consumo
de O2 al sustrato, tal como, malato se aade (estado 2). Cuando
recin aisladas mitocondrias intactas se incuban con ADP, hay un
rpido aumento en el consumo de oxgeno (Estado 3). Tras la
conversin de todos ADP en ATP, la actividad respiratoria de las
mitocondrias disminuye la tasa encontrado antes de la adicin de ADP
cuando todo ADP ha sido fosforilada (Estado 4). Las mitocondrias se
revertirn al estado 3 cuando se incuba con ms ADP que ser
seguido de "estado 4 'despus de ADP se agote. Actividad respiratoria
est controlada efectivamente por la disponibilidad de ADP. Este
"control respiratorio ' se cuantifica por la "relacin de control
respiratorio" o la relacin de estado 3: estado 4 (la relacin de la tasa
de El consumo de O2 a concentraciones saturantes de sustrato en
presencia de ADP a la lenta, tasa de descanso despus del
agotamiento de ADP). La respiratoria relacin de control se utiliza
para caracterizar la 'Estanqueidad' de acoplamiento de la oxidacin
de sustrato a conservacin de la energa (mayor sea la relacin, ms
estrecha la acoplamiento). Dependiendo del sustrato particular,
muchas
preparaciones
mitocondrias
planta
dan
ratios de control respiratorio entre 3 y 7.
3.5.6 MECANISMODEELECTRNTRANSPORTE
El transporte de electrones y la asociada translocacin de protones de
la
matriz
de
la
mitocondrias al espacio inter-membrana durante paso de electrones
de
NADH
a
O2
es
resumen en la Fig. 3.12. La naturaleza y la ubicacin de los diversos
componentes de la cadena de transporte de electrones hace que el
transportar posible. Los electrones de la interna NADH (producido en
la
matriz
a
travs
de
la
oxidacin
de
malato, piruvato, oxoglutarato y glicina) entrar complejo I, el primer
sitio de acoplamiento. Cuando los electrones se transfieren desde un
transportador de electrones a una componente que acepta ambos
electrones y protones, hace que la absorcin de protones a partir de
la matriz. Estos son los llamados bucles redox. Como se muestra en la
Fig. 3.12, los protones y los electrones son transferidos
a FMN en el complejo I en la cara de la matriz membrana. Esto sigue
a la transferencia de electrones a varias protenas hierro-azufre y
luego
a
la
ubiquinona.
La transferencia se acopla a la translocacin de protones de la matriz

a la inter-membrana espacio (ver ciclo Q). Los electrones luego

ingresan
complejo
IV travs CYTC (ver seccin 3.5.1).

Figura: 3.12Representacin delostransportistasque participan enlas

mitocondriasen el movimiento delos electrones deNADHabajo a
lacadena de transporte electrnicomitocondrialdeO2 yeltransporte
asociadode
protones(protones
translocacin)
de
la
matrizmitocondrialal espaciointer-membrana. Protntranslocacinse
asocia
con:
(i) la transferencia de electrones deNADHaUQendgeno; (ii) ciclo deQun
motivo
de
protones;
y(iii)
uncitocromola
bomba
de
protonesoxidasamuestra
como.
El
movimiento
delos
electronessolamentese muestran mediantelneas de puntos, mientras
que combinadoH+/ e~el transportese muestrapor las flechasnegras
intrpidas. La flechadiscontinuaen negritaindica que la bombade
protonesconformacionalasociado
conla
citocromo
oxidasa.
DeAnderson &Beardall(1991), con el permiso.

El mecanismodela participacin dela ubiquinonaen el procesode

transporte de electroneserapropuesto porPeterMitchellydenominado
como
'Q-ciclo motriz de protones' (Fig. 3.13). ubiquinonasexistir enexcesoen
la membranacomo un conjunto deUQyUQH2. Ellosson hidrfobosyno
cargado
y por lo tantopueden migrara lo largo delncleo hidrfobode la
membrana.La difusinse lleva a cabodeunaUQH2al sitio de
uninadyacente
a
laQp
ProtenaRieske(protenas hierro-azufre) en la caradePla membrana
mitocondrial(Fig.3.13). unoelectrn es transferidoa la protenaRieske,
la
UQaninsemiquinona~se forma, dos protonesse lanzana la faseP y
elsegundo electrnse transfiere a lahemo(bL; complejoIII), yUQse
forma. Lastransferenciasde protenasRieske

Figura3.13Elciclo-Q en las mitocondrias,(a)

transferencia
de
electronesque
siguen
a

Los eventosde
laoxidacin
de

unubiquinolenel ladoPde la
membranamitocondrial internaen
condicionesde
uninen
la
queelsitio
dequinonaen
elladoNesinicialmenteya
seavacanteu
ocupada
poruna
molcula
deubiquinona, (b) los eventos de transferencia de electronesque
siguen eloxidacin de unsegundoubiquinolen el ladoPde la
membranacuando elQnest ocupado por unradicalubisemiquinona.
Tenga en cuenta queel sitioQntambinse ha denominadoel
sitioQioQc(c
indica
ellado
citoplsmicode
la
membranaencomplejoscitocromobacterianas) en diversos sistemas
yel
sitioQpes
tambin
conocido
comoelQooQ^sitio.Lossitiosinhibitorios
de
laaccin
demyxothiazolyantimicinatambin
se
muestranpor
las
flechasonduladas.DesdeNichollsyFergusson(1992),
con
permiso,esquema
delcicloQ(c)
Unsimplifica.Sitiosinhibidorasde
accin:1, antimicina; 2, myxothiazol; 3, 5- - undecilo-6-hidroxi-4,7diobenzothiazol (UHDBT).

el electrn a lo largo de la cadena para cytci y citocromo oxidasa. El

electrn se mueve desde BL a BH (en la UQ cyt luego se une a BH en
el Q ^ sitio y electrn de la reducida BH forman UC " en este sitio.
Ahora una segunda molcula es UQH2 oxidada en el sitio Qp (Fig
3.13.): el proceso de siguiente como se describe anteriormente y el
segundo electrn forma completa la reduccin de la UC ~ para UQH2.
Dos protones se toman de la matriz para este propsito y lanzado a la
fase P. La reducida ubiquinona luego regresa a la piscina y por lo
tanto se completa el ciclo Q. Translocacin de protones puede tener
lugar por una "redox mecanismo de bucle '(cruzando a travs de
transportadores de electrones en una direccin y flavina o ubiquinona
en el otra) y / o la bomba de protones redox-vinculado. La bomba de
redox se basa en la protonacin / desprotonacin de los aminocidos
de protenas durante laprocesos de oxidacin / reduccin de una
manera cclica. Este proceso repetitivo se cree que est relacionado
con los cambios alternos en la orientacin de la protn-Binding pgina
web ni que el protn-Binding afinidad de la protena. Esto resulta en
un secuencial absorcin y liberacin de protones en sitios opuestos de
la membrana, por lo tanto lograr un bombeo accin. El mecanismo de
bombeo de protones del complejo IV no est claro; bombeo no es
reversible. Sin embargo, 2H "^ / 2e ~ aparece en el citoplasma y 4H"
^ / 2e ~ desaparecer de la matriz. No 'bucle redox' opera en este
sitio, pero la oxidasa muestra el caractersticas de la bomba de
protones: (a) que se extiende por la membrana y est en contacto
con la matriz y la espacio interior-mitocondrial, (B) un conformacional

cambio en la protena se produce en la reduccin de la

oxidasa y (c) los potenciales redox estndar Entre los compuestos
intermedios son dependientes del pH. La subunidad 3 (ver seccin
3.5.1)
se
sugiri
a
ser
involucrada en el mecanismo de bombeo conformacional.
Este
es
inhibida
por
N,
N'-diciclohexil
carbodiimida
(DCCD,
un
conocido
inhibidor
de
translocacin de protones en FIFQ-ATP sintasa). Sin embargo,
tambin
hay
sugerencias
de
que
esta
subunidad
se
no importante; no tiene Fe o Cu.

3.5.7 GRADIENTE ELECTROQUMICODE PROTONES

La oxidacin de NADH por O2 representa la general reaccin del

transporte de electrones mitocondrial cadena. La tendencia del
compuesto reducido a perder sus electrones reductores como, NADH
NAD + + H + + Zeis dada por la norma E potencial redox '. Esto es
la fuerza generada por el flujo de electrones a una

aceptor de electrones adecuado bajo condiciones estndar (PH 7,0,

IM, 25 C). Los electrones fluyen desde ms electronegativo
(renunciar a los electrones y convertido oxidado) a electropositivo
molculas (Aceptar electrones y convertirse reducida). La portadores
de la cadena de transporte de electrones son los portadores redox,
como se muestra en la Fig. 3.10 con su redox valores potenciales. Los
transportistas estn dispuestos en la membrana interna en un orden
especfico
de
potencial redox cada vez ms positiva. La oxidacin de NADH por el
oxgeno se acompaa por un gran cambio negativo en la energa
libre.
Parte de esta energa se conserva por la fosforilacin de ADP en ATP,
un transportable, verstil tienda de qumica de la energa libre. El
mecanismo
de acoplamiento de la cadena de transporte de electrones a ATP
sntesis fue propuesto por Peter Mitchell en 1961 y es conocida como
la hiptesis quimiosmtica. Ella propone un transporte vectorial de
protones
derivados
de la matriz mitocondrial a travs de la membrana que es de otra
manera impermeable a protones. El transporte se realice como los
electrones de NADH se pasan a O2. Un electroqumico de protones
gradiente (protn motriz la fuerza. A /?) se establece como los
protones son bombeados a cabo la creacin de un menor
pH fuera de la matriz que dentro. La relacin es como sigue, A ^ - Z
Un Ph donde A ^ es el potencial de membrana (fuera ms positivo
que en el interior), ApH es el gradiente de pH y el trmino Z (60 a 30

C)
se
utiliza
para
convertir
ApH en voltios, las unidades de los otros dos trminos. Cambio de
energa libre (AG ') puede estar relacionado con gradiente
electroqumico:
AG 7F = wA / iH + donde es la constante de Faraday, n es el nmero deprotones
bombeados por sitio de fosforilacin yes el gradiente electroqumico de protones. Lala
bomba de protones, ATP sintasa, que se encuentra en el interiormembrana de las
mitocondrias transfiere la energa deel gradiente electroqumico de protones en
elformacin de ATP (ver seccin 3.5.9).

3.5.8
INHIBIDORES
YDESACOPLADORESDELA
CADENADE
TRANSPORTE DE ELECTRONESY LA FOSFORILACINOXIDATIVA

en la determinacin de la organizacin de individuo

componentes de la va respiratoria (ver Fig. 3,10). Rotenona es el
inhibidor

ms

especfica

de complejo I. Otros inhibidores incluyen amital, piericidin A y

benciladenina. Sin embargo, interna NADH todava puede ser oxidado
por un rotenoneinsensitive deshidrogenasa cuando es compleja
inhibi completamente. Succinato de oxidacin puede ser
completamente inhibida por malonato, un competitivoinhibidor de la
succinato deshidrogenasa. Antimicina inhibe el complejo III y cianuro,
azida y carbono monxido de inhibir complejo IV. Sin embargo, debido
a
la presencia de la va CN-resistente alternativa, la oxidacin de
sustratos NAD-enlazados pueden contine incluso cuando el
cytochrorhe establecido cadena es completamente inhibido.
Sustituido
hidroxmico
cidos, tales como el cido salicilhidroxmico (SHAM), se utilizan con
frecuencia con mitocondrias aisladas como inhibidores especficos de
la va alternativa. Sin embargo, SHAM no es absolutamente especfico
y se ha encontrado para inhibir una variedad de enzimas.
Desacopladores Protonophoric son herramientas tiles para el estudio
de respiracin de las plantas. Ellos hacen la membrana permeable a
los protones y, por consiguiente inhibir la fosforilacin oxidativa. En la
presencia de un agente de desacoplamiento, tales como 2,4dinitrofenol
o
FCCP
(carbonylcyanide/
7
trifluoromethoxyphenylhydrazone), transporte de electrones y H ^ bombeo proceder a una velocidad mxima sin generacin
concomitante de un H "^ electroqumica degradado. Los agentes de
desacoplamiento son liposolubles cidos dbiles que actan como H
^ transportistas en todo el interior mitocondrial membrana
impidiendo H "^ pasaje a travs de la ATP sintasa. El H "^
electroqumica gradiente est completamente disipada y no ms ATP
se sintetiza. Incubando una desacoplador con mitocondrias provoca
un gran aumento de el consumo de oxgeno debido a la mayor
actividad de la cadena de transporte de electrones. Este efecto se
produce porque el transporte de electrones es cuando menor es la H
^ gradiente electroqumico aumenta a travs de la mem interna
mitocondrial
brana.
Lacadena
respiratoriaes
capaz
de"sentido"cambios
en
la
actividadATP
sintasa:
laenergyyieldingoxidacin yfosforilacin-utilizacin de la energa
comunicarse
entre
sa
travs
de
la
Hcomn "^ gradiente electroqumico. Reactivosque perturbanlas
membranastambin pueden actuar comodesacopladorespotentes, por
ejemplo, detergentes, fosfolipasasfosfolpidosde rendimientoque
actan
como
detergentes)y
protenasformadoras
de
poros(melitina
puede
crearagujeros
enlas
membranas).
Transmembranaprotenas

quepermitanel
movimientode
protonesvoluntadtambindisipar
elH^gradiente electroqumicocausandodesacoplamiento.

3.5.9. ATP SINTESIS

Seccin 3.5.6 describe la formacin de la H "^ gradiente
electroqumico por el cual algunos de los libres energa se utiliza para
la
sntesis
de
ATP
a
partir
de
ADP,
mediada por la ATP sintasa. La mayor parte de la detallada estudios
han sido llevados a cabo con mamferos ATP sintasa. La sntesis de
ATP
en
relacin
con
la fotosntesis se ha discutido en el captulo 2. Es importante hacer
hincapi en que la continuacin de La sntesis de ATP requiere que el
gradiente
de
protones
es
mantenida por los portadores de transporte de electrones
y que el ATP sintetizado es continuamente retirado del sitio de
sntesis.
La microscopa electrnica de la energa de transduccin
membrana
mitocondrial
interna
ti
negativamente
con
caractersticas "-mando como 'fosfotungstato espectculos se
proyecta hacia la matriz. Esta caracterstica perilla como es uno de
los
componentes
de
la
ATP
sintasa,
una
complejo trans-membrana. La estructura de este enzima es
altamente conservada y las caractersticas son notablemente comn
en todos los organismos. Esto es para ser esperada debido a su papel
clave en la energa conservacin en la clula. La enzima consiste en
un complejo Fi soluble en agua (como se proyecta hacia fuera perillas)
con actividad cataltica que fosforila ADP a ATP, y un complejo de FQ
unido
a
la
membrana
que
comprende
protenas
hidrfobas
incrustados
en
el
membrana mitocondrial interna y acta como un H ^ canal a travs
del cual los protones pasan del P fase a la fase N y inducir la sntesis
de ATP por el complejo Fi (Fig. 3.14). FQ sirve como la unin base para
Fj. La sintasa FQFI-ATP tambin puede

Figura3.14sintasade
ATP
enlas
mitocondrias,
(a)
Fiobservcomo
esferasenla
membranamitocondrial
interna(en
micrografas
electrnicasmanchadasnegativos),
(b)
de
detergentea
extraerFIFQATPsintasa, (c) Vista lateral de laATPsintasa,que muestralas
posiciones delas subunidades. (d) Vista superiorde la parteinalmbricade la
sintasa.
Un
par
desubunidadesyuna(designada
se
asocia
consubunidadesmasa central), la induccin deasimetra, (c ydse derivan
demicrografas electrnicasque utilizan tcnicasde reconstruccin de
imgenes.). DeHarris(1995), con el permiso.

hidrolizar ATP a ADP. Debido a esta reversibilidad,esta enzima se

conoce como la fofi-ATPasa.ATP se sintetiza o hidroliza en el lado de
la membrana de la que las perillas proyectan hacia fuera(Fase N).
El resto Fi tiene una masa molecular global deaproximadamente 350
kDa y puede ser separado de lamembrana mediante tratamientos
suaves,
como
la
sal
solucin de baja fuerza inica. Se compone de cincoprincipales
subunidades. Estos polipptidos son los a-, / -,7 ", y e-subunidades
(masas
moleculares
de
56
kDa,
53 kDa, 33 kDa, 16 kDa y 11 kDa, respectivamente)con una
estequiometra se cree que se(Subndices representan el nmero de
polipptidos
en
el complejo Fi). La actividad cataltica de internet yla unin de
nucletidos y fosfato residendentro del par subunidad a / 3. Los pares
de
subunidades
son

dispuestos como los segmentos de una naranja pelada talesque la

una y / 3 subunidades alternan entre s.Hay pruebas de que el /?
subunidades
tienen
uno
cada sitio cataltico. La subunidad A se consideraestar involucrado en
cierta medida con este sitio.La hidrlisis de ATP requiere la presencia
de a, / 3y 7 subunidades, mientras que la sntesis requiere los
cincosubunidades. El sitio de unin de nucletidos se considerapara
estar en la interfaz de un //? subunidades. El Glu-181
del dominio cataltico de la /? subunidad cuandoqumicamente
modificada con DCCD, los resultados en laprdida de actividad
cataltica.
Los
7,
6
y
e
subunidades
constituyen el pozo central / acechar parte de lacomplejo y estn
dispuestos en un asimtricaforma. Hay considerable homologa de
secuencia
entre la a, /? y 7 subunidades entre bacteriana,planta y sintasas ATP
de mamfero, pero comparativamenteexiste muy poca homologa
entre elS y E subunidades de diferentes especies. El
menorsubunidades tienen funciones de regulacin y / o
estructurales.Los 6 y E subunidades se cree que son
involucrado en la unin precisa de la Fj a la FQsector, el e subunidad
reguladora tambin se presentanfuncin (inhibe la actividad Fi en las
bacterias
y
cloroplastos). La subunidad 7 acta como un pivote enla organizacin
de la una, las subunidades alrededor de laeje central. Su posicin es
asimtrico
con
respecto
a la asamblea ^ 3/33. Esta subunidad tambin acta como una
puerta de protones manteniendo una estequiometra de lapaso de
tres protones acoplado a la sntesisuno de ATP. Alteraciones
estructurales de esta protenaprovocar el paso de protones sin ATPla
sntesis
y
la
membrana
se
desacopla.
Por lo tanto, la subunidad 7 juega un papel central en elmecanismo
de transferencia de energa de FQ a internet gratuita
sitios catalticos del complejo. Complejo Fi batataest compuesta por
seis subunidades, en, / ?, 7, ^, 6 ^, e.La subunidad puede ser un
proteoltica-degradacinproducto de una subunidad ms grande. ATP
sintasa
dey
las
de
otras
fuentes
tienen
similitudes subunidades. Sin embargo, aquellos de las mitocondrias y
tilacoides tienen subunidades adicionales; sufunciones no estn
claras.
El
6
subunidad
de
puede
ser
comparado
a
la
oligomycinsensitivitymitocondrialconfiriendo protenas (OSCP) de Fi. Lamitocondrial 6
subunidad
es
comparable
a
la
direccin
subunidad de una comparacin de las subunidades espresentan en la

Tabla
3.1.
El componente Fo de FIFQ-ATP sintasa,incrustado en la membrana,
tiene tres subunidades:una subunidad-A sin una funcin o estructura
conocida,
una subunidad-b que es responsable de vincular a FQFi, y una
subunidad-c, que es hidrofbico ycree que est implicada en la
translocacin
de
protones
a internet gratuita (en (la nomenclatura de las subunidades
es diferente para cloroplasto ATP sintasa, consulteTabla 3.1). El sitio
de DCCD vinculante reside ensubunidad-c. DCCD es un inhibidor de la
sntesis de ATP.Se requiere que todos tres subunidades para crear un
protncanal en la bicapa lipdica de la membrana; unaestequiometra
aproximada
es
ab2Cio_i2DCCD
o
oligomicina bloquea el canal de protones FQ. SolubleFi-ATPasa es
insensible a estos inhibidores.Aunque el componente aislado Fi
hidrolizaATP rpidamente, tanto Fi y FQ son necesarios para
ADPfosforilacin.
DCCD
es
generalmente
eficaz
en
ambas membranas bacterianas y tilacoides perooligomicina inhibe
FIFQ-ATP sintasa (ATPasa)

el paso

de
protones a

travs
est

de FQ no
claro. Es

posibleque los protones son transportados por grupo cido amino

ensubunidad-c (retransmitida por protonada / desprotonagrupos de
diferentes pl <C). Alternativamente, protonespuede pasar como HSO
"^ travs de un canal hidroflico.La subunidad-c tiene dos dominios
helicoidales que atraviesanla membrana hidrfoba y unidos por
unabucle de horquilla en la fase de N en el lado de Fisubunidad. La
televisin ^ o terminales (N- y C-) estn en el Pfase. El residente en
las hlice 2 reacciona Asp-61vs ^ ITH DCCD terminacin paso de
protones. La detalles del conjunto de subunidades c en FQ sonNo
sabe ^ n. Se considera que la subunidad-c est encontacto con la
subunidad
b
que
est
en
contacto
con
7
Offi.
El mecanismo exacto que sintasa cmo ATPfunciones tanto para la
hidrlisis y la sntesis de ATPha sido objeto de debate durante algn
tiempo.
Se
considera
que la fuerza motriz de protones a travs de la membrana
provoca un cambio conformacional en internet y altera suafinidades
para los sustratos y los productos. Comose muestra en la Fig. 3,14,
protones
pasan
a
travs
de
FQ
canal de fase a la fase P N; un gran protnexiste gradiente de
concentracin. La afinidad deprotones unin est coordinado con
conformacional
cambios que hace que la sntesis de ATP y suliberar posible. La unin
de protones de baja afinidadEl sitio se supone que existe frente a la
fase
P
y
el sitio de alta afinidad a la fase N de lamembrana. Cada uno de los
tres sitios catalticos de la /? Subunidadespuede adoptar tres
conformaciones: una conformacin apretado(T), donde el ATP se une
fuertemente, un abiertoconformacin (O) de la que ha sido
ATPexpulsado y el sitio es catalticamente inactiva, yun sitio suelto (L)
que
se
une
ATP
y
ADP
+
Pi
con igual afinidad. Cambios conformacionales debido apaso de
protones causa sitio T para liberar ATP yconvertido sitio de O e inducir
cambios
en
L
sitio
(Vagamente vinculado ADP + P ^ y no tiene preferencia porATP) que
se convierte en T sitio, un catalticamente activositio, lo que lleva a la
sntesis
de
ATP
que
permanece
fuertemente unido con este sitio hasta el siguiente ciclo decambios
conformacionales. Los cambios de unindurante la transicin entre los
sitios catalticos essugerido que es debido a la rotacin del 0 ^ 3,
ftconjunto de subunidad en relacin a la subunidad 7. Laasociacin de
la
asamblea
con
la
subunidad
7
en

el eje es asimtrica (uno a, /? toma de parcontacto a la vez, ver Fig.

3,14)
durante
la
rotacin.Las
seales
de
los
cambios
conformacionales a unpor lo tanto, en particular sitio activo se
transmite a travs de 7subunidad en asociacin con otros
componentes tallo.La sntesis de ATP en forma ligada a T web
casi no requiere energa, pero la energa de protonesmovimiento se
utiliza principalmente para conformacionalcambios (para la
transformacin de T al sitio o)expulsar a ATP con el fin de continuar el
ciclo
de
ATPsntesis.
Los
cambios
conformacionales
son
probablementecausado por la protonacin de la protena cida
grupos. El mecanismo descrito arriba es solosugerente y se basa en
estudios de rayos Xcristalografa, micrografa del electrn y el uso de
reactivos especficos. Estos mtodos proporcionado solamente
detalles estticos de la que las predicciones eran dinmicoshecho.
Una representacin esquemtica de la sntesis de ATPse muestra en
la
Fig.
3.15.
En resumen, diez protones son translocados pordos electrones de
NADH paso endgenoa travs de la cadena de transporte de
electrones. Tresse requieren protones para la sntesis de unoATP y un
protn es necesario para el transporte de ADP -h Pi en la mitocondria
y ATP a cabode la misma. Dos transportistas translocacin estn
involucrados, unopara la absorcin de ADP y exportacin de ATP, y el
otro para la absorcin de Pi (un symport protn-Pi).El portador de
nucletidos no transporta AMP.Teniendo en cuenta que se requieren
cuatro
protones
para
la
rendimiento de un ATP, ATP 2,5 sera el resultado de cadaNADH
oxidado. La oxidacin de succinato voluntadresultar en la sntesis de
ATP 1,5.Con respecto a la regulacin de la sntesis de ATP,
laexistencia de una protena reguladora de los mamferos ATP sintasa
es interesante. Esta protena se une asubunidad en ausencia de y
ralentiza
La hidrlisis de ATP. La presencia de vencela inhibicin. Por lo tanto,
bajo condiciones de oxgenodeficiencia cuando la sntesis de ATP se
ralentiza,
la
mecanismo de control retarda la hidrlisis de ATP. Lasubunidad de
bacterias tambin tiene funcin reguladora enel complejo Fi; tiene un
dominio
inhibitorio
en
Adems de un dominio de interaccin con elsubunidad.
En la fosforilacin oxidativa, la va deLa oxidacin de NADH
permanece en equilibrio peroel exceso de ATP debe revertir este
equilibrio.
Sin
embargo,
la
etapa
terminal
en
el
transporte
de
electrones,citocromo oxidasa, es irreversible. Este sitio es,por lo

tanto, un punto de control donde la disponibilidadde la reduccin de

citocromo es importante. Esto, a susu vez, es dependiente de una
mayor [NADH] /Ratio [NAD +] y / [ADP] proporcin inferior [ATP] [pi].
Un aumento de la demanda de ATP aumentar ADPla concentracin y
la relacin anterior (masa ATPrelacin de la accin) disminuir que
luego impulsola fosforilacin oxidativa. Como se sintetiza ATPen las
mitocondrias
y
utilizado
en
el
citosol,
es
el
relacin de la accin de masas en las mitocondrias que lo har
controlar directamente la sntesis de ATP. El mitocondrial interna
membrana es impermeable a la difusinde ADP y Pi, excepto a travs
de transportadores especficos.