CTEDRA DE MICOLOGA

Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas

Universidad Nacional del Litoral
TOMA DE MUESTRA DE MICOSIS SUPERFICIALES (2013)
OBJETIVOS
- Conocer las instrucciones que deber recibir el paciente para permitirnos realizar
una buena toma de muestra.
- Conocer las distintas formas de tomar una muestra de micosis superficial
dependiendo de la lesin y la clnica del paciente.
- Conocer los distintos mtodos para el procesamiento de la muestra.
- Conocer las diferentes condiciones de cultivo a utilizar segn la sospecha
diagnstica y lo observado al microscopio.
INTRODUCCIN

El diagnstico de una micosis se hace, fundamentalmente, por la demostracin

del hongo en las muestras biolgicas y su posterior identificacin taxonmica mediante
el estudio de sus caractersticas morfolgicas y fisiolgicas.
El diagnstico de una micosis superficial se realiza en 3 etapas:
1Preparacin previa del paciente y anamnesis.
2Toma de muestra:
a - antisepsia previa del paciente
b - obtencin del material biolgico
c - recoleccin del material
3Procesamiento de la muestra: a- mtodos directos
b- mtodos indirectos
1- PREPARACIN PREVIA DEL PACIENTE
El diagnstico de una micosis depende, en gran parte, de una correcta toma de
muestra, por lo que hay que poner especial atencin en su obtencin. Para ello se debe
entregar en forma escrita las siguientes indicaciones al paciente:

Indicaciones generales

Justificacin

a- No aplicarse en forma tpica o local La aplicacin tpica de medicamentos

medicamentos antifngicos por lo menos 5 antifngicos impide la recuperacin de hongos
das antes de la toma de muestra.
en los cultivos.

b- Higienizarse la zona antes de concurrir al

laboratorio con jabn blanco o solucin
salina (si est contraindicado el jabn)
lavando la lesin con una gasa y no con
algodn.

La higiene previa disminuye las posibilidades

de contaminacin del cultivo con hongos
filamentosos ambientales.
Se prefiere el uso de gasa porque cuando se
utiliza algodn pueden quedar fibras del mismo
que pueden interferir en la observacin
microscpica.

cNo colocarse cosmticos, talcos, Los cosmticos, talcos, etc. dificultan la

perfumes, etc. en la zona de la lesin.
visualizacin de las estructuras parasitarias al
directo ya que suelen ser oleosos y tener
cristales.
Indicaciones especiales para lesiones en uas
ainfectadas.

No cortarse al ras las uas

Justificacin
Para obtener suficiente material y observar las
caractersticas de la lesin

b- Cepillarse las uas infectadas luego de Esta operacin elimina detritos celulares y
realizar baos de inmersin en salmuera clulas muertas que interfieren en la realizacin
tibia de 30 minutos, repitiendo los 3 das del directo.
previos a la toma de muestra 3 veces por
da.
Indicaciones especiales para lesiones en piel o
uas de pies
a-

No concurrir con sandalias.

Justificacin
Para evitar que se produzca contaminacin de
la lesin con conidias y esporas de hongos
filamentosos ambientales

bLuego de realizar la higiene de la Para evitar contaminaciones.

zona infectada cubrir perfectamente el pie
con medias y calzado cerrado

2- TOMA DE MUESTRA
a -ANTISEPSIA PREVIA DEL PACIENTE
Antes de la toma de muestra se debe proceder a la higiene de la zona con etanol
70% para remover contaminantes tales como bacterias y hongos filamentosos
ambientales. Si se sospecha candidiasis utilizar solucin fisiolgica estril.

b - OBTENCIN DEL MATERIAL BIOLGICO

LESIONES DE PIEL LAMPIA
Lesiones "secas"
Se debe seleccionar para el raspado la zona perifrica de la lesin donde se
aprecia un borde eritematoso que indica el crecimiento activo del hongo, manifestacin
clnica producida por los dermatofitos (tinea). Si la lesin es homognea, podemos
raspar de cualquier zona de la mancha, este tipo de lesin es caracterstica de Pitiriasis
versicolor.
Lesiones "hmedas" o exudativas
Se deben tomar con un hisopo humedecido en solucin fisiolgica isotnica
estril. Si no se procesa inmediatamente la muestra, el hisopo se coloca en un tubo de
ensayo estril para transportarse rpidamente al laboratorio.
LESIONES DE CUERO CABELLUDO (PELOS)
Se realiza la toma de muestra por traccin con una pinza estril. No se debe
utilizar una tijera para cortar los pelos parasitados ya que existen infecciones desde la
emergencia del folculo que se informarn como falsos negativos. Las nicas
excepciones donde se pueden cortar los pelos con tijera es cuando se sospecha piedra
negra o piedra blanca, ya que en estas patologas los folculos nunca estn infectados.

UAS

Onicomicosis subungueal distal (OSD)

Como los dermatofitos en los pacientes con OSD invaden a las uas por el lecho
ungueal, la muestra debe tomarse en esa zona ya que all se encuentra una mayor
concentracin de hongos viables.
El material debe obtenerse con una cureta o bistur n15 estriles.
Onicomicosis Subungueal Proximal
El hongo invade la ua desde la cutcula y se instala en el lecho ungueal, por
esto se debe tomar la muestra por debajo de la ua propiamente dicha con una cureta
o bistur n15 estriles y lo ms cercano posible a la lnula.
Onicomicosis Blanca Superficial

El hongo infecta la ua en forma superficial, por ende, la toma de muestra se

realiza raspando la zona blanca afectada utilizando una cureta o bistur n15 o de
tamao mayor estriles.
Onicomicosis lateral o Candidisica
El material debe ser tomado de los bordes laterales y proximales buscando
obtener las escamas del lecho ungueal. En caso de ser escaso el material se puede
tomar por debajo de la ua. En ambos casos se debe utilizar para la toma de muestra
una cureta o bistur n15 estriles. Este tipo de infecciones suelen presentar perionixis
(inflamacin de la zona periungueal), donde normalmente se puede obtener, por
presin, material de supuracin. Este ltimo debe recogerse con hisopo estril y se lo
introduce en un tubo estril con un pequeo volumen de solucin fisiolgica estril para
mantener la humedad de la muestra para su posterior identificacin.
c - RECOLECCIN DEL MATERIAL
El material obtenido siguiendo las tcnicas descritas anteriormente (pelos y/o
escamas de piel y uas) se puede recoger sobre una placa de Petri estril o sobre un
portaobjeto limpio, flameado y enfriado colocado de canto por debajo de la superficie
que se raspa, se lo cubre con otro porta estril y se los envuelve en una hoja de papel
en la cual se ha anotado la historia clnica o el diagnstico presuntivo de la lesin,
nombre, edad, sexo y otros datos tiles del paciente.
3-PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
Para determinar la etiologa mictica de una lesin de piel y faneras se deben
realizar:

Mtodos directos:
-Exmen directo
-Coloraciones

Mtodos indirectos: - Cultivos

a- MTODOS DIRECTOS
Es importante tener en cuenta las limitaciones de la microscopa directa en el
diagnstico de las micosis superficiales ya que:
Hay un 5 a un 15% de falsos negativos en muestras de uas.
El tiempo dedicado a la observacin y la experiencia del observador influye en
los resultados obtenidos.

 Esta tcnica no permite realizar un diagnstico diferencial entre los patgenos, ya

que en la mayora de los casos es necesario obtener un cultivo puro para identificar
el patgeno.
Escamas de piel y uas.

Colocar una gota de KOH al 20 % en el centro de un portaobjeto. La gota

debe ser pequea porque al calentar pueden producirse proyecciones del KOH
sobre el cubreobjetos que al enfriarse forma cristales que interfieren en la
visualizacin.

Agregar las escamas sobre la gota y por encima un cubreobjeto.

Flamear el portaobjeto hasta el desprendimiento de burbujas. Este

procedimiento sirve para aclarar la queratina. Si se sospecha de Pitiriasis Versicolor
se recomienda, adems, teir los preparados con Azul de Metileno. En caso de
sospechar Pseudomicosis se debe recoger el material digerido por el Hidrxido con
agua destilada, luego se centrifuga y se efecta la coloracin del sedimento por los
mtodos de Gram, Kinyoun y Giemsa.

Observar con objetivo de 10X y luego de 40X buscando:

a) Filamentos que pueden estar o no artrosporados.

Sospecha diagnstica: dermatofitosis.
Posibles agentes causales: Dermatofitos y raramente otros hongos filamentosos).
b)
Estructuras levaduriformes.
Sospecha diagnstica: candidiasis.
Posibles agentes causales: Candida spp.
c) Filamentos cortos y acumulo de levaduras de 3 a 8 um de dimetro.
Sospecha diagnstica: Pitiriasis versicolor.
Posibles agentes causales: Malassezia spp.
Observar con objetivo de 100X buscando:
d) Filamentos largos, flexuosos u ondulados de 0,6 a 0,8 um de dimetro, de
longitud variable presentando, algunos con ramificaciones. Son Gram + y
cido resistentes (Kinyoun +).
Sospecha diagnstica: Eritrasma. en lesiones de ingle, axila, espacios interdigitales y
surcos submamarios.
Agentes causales: Nocardia spp. o Corynebacterium spp.
Sospecha diagnstica: Queratlisis punctata. En lesiones de planta de pie.
Agentes causales: Corynebacterium spp. Dermatophilus congolensis o Kytococcus
sedentarius.

Pelos:

Cortar los pelos parasitados en fragmentos de unos 5 mm aproximadamente.

Montarlos entre portaobjetos y cubreobjetos con KOH al 20 %. Para pelos muy

atacados podemos visualizar mejor las estructuras con una gota de Guegun o
Lactofenol. En caso de sospechar Tricomicosis se debe recoger el material digerido
por el Hidrxido con agua destilada, luego se centrifuga y se efecta la coloracin
del sedimento por los mtodos de Gram, Kinyoun y Giemsa.
Calentar suavemente hasta el desprendimiento de burbujas.
Observar al microscopio en objetivos de10X y 40X. Buscando:
a) Conidios y/o hifas en el interior del pelo. Se denomina parasitacin endotrix
cuando se encuentran conidios invadiendo el cortex y la mdula del pelo. Este tipo de
parasitacin se presenta cuando el agente causal es Trichophyton rubrum, T. tonsurans
y otras especies ms raras del gnero Trichophyton. Cuando en el interior del pelo se
observan hifas largas, se denomina invasin fvica que es causada exclusivamente
por T. schoenlenii.
Sospecha diagnstica: Dermatofitosis
Agentes causales: Especies del gnero Trichophyton.
b) Conidios en el exterior del pelo, generalmente dispuestos en cadenas. Este tipo
de parasitacin se denomina parasitacin ectotrix que es causada por Microsporum
canis, M. gypseum, T. mentagrophytes, T. rubum y otras especies raras de
Microsporum y Trichophyton.
Sospecha diagnstica: Dermatofitosis
Agentes causales: Especies del gnero Trichophyton o Microsporum.
c) Micelio filamentoso ligeramente parduzco de 4 a 6 um. de dimetro, casi
totalmente segmentado acompaados de ascos elpticos de 25 a 35 um. en su
dimetro mayor conteniendo 8 ascosporos fusiformes con un filamento terminal
en cada polo.
Sospecha diagnstica: Piedra negra.
Agente causal: Piedraia hortai.
d) Micelio filamentoso con artroconidios de 2 a 4 um de dimetro medio, cuyo
desarrollo ha tenido lugar entre la epidermcula y el tallo del pelo.
Sospecha diagnstica: Piedra blanca.
Agente causal: Trichosporon spp.
Observar al microscopio en objetivos de100X. Buscando:
e) Filamentos largos, flexuosos u ondulados de 0,6 a 0,8 um de dimetro, de

longitud variable presentando, algunos, ramificaciones. Son Gram + y cido

resistentes (Kinyoun +).
Sospecha diagnstica: Tricomicosis. Ms comn en vello de axilas, pbico o
intergluteos.
Agente causal: Corynebacterium flavescens.
b - MTODOS INDIRECTOS : CULTIVO
Se debe realizar segn lo observado en el anlisis microscpico y/o segn la
sospecha clnica.
Tcnica de siembra
La muestra debe inocularse en el medio adecuado realizando tres toques
separados en la superficie del medio de cultivo seleccionado. Tomando material antes
de realizar cada uno de los toques. Esto se realiza para lograr una mayor sensibilidad
de la tcnica ya que se multiplica por tres la posibilidad de recuperar un hongo
patgeno por cada tubo sembrado.
Condiciones de cultivo segn el agente patgeno

Sospecha Observacin
Dermatofitia

Medios de cultivo a utilizar

Sabouraud*

Lactrimel*
Borrelli)
D.T.M.*

Tiempo de
incubacin

Temperatura
de incubacin

15 - 20 das

25 - 28 C

(Agar

Levaduras

Sabouraud*

Hasta 7 das

25 - 28 C

Malassezia spp.

Agar Dixon*
Agar Sab.
Oliva*

Hasta 15 das

32 C (ideal) a
28C tambin
desarrolla

Aceite

Piedra negra

Sabouraud*

Hasta 15 das

25 - 28 C

Piedra blanca

Sabouraud*

Hasta 15 das

25 - 28 C

EritrasmaTricomicosis

Agar sangre 5%

Hasta 7 das

35 C

*Se puede adicionar cloranfenicol (50 - 100 ug/ml) para evitar la contaminacin

bacteriana.

4-ACTIVIDADES
a - Toma de muestra:
Se realizar toma de muestra de micosis superficiales entre los alumnos por lo que
cada uno realizar la preparacin previa de la zona en donde existe la sospecha de
una infeccin fngica o de algn agente causal de las pseudomicosis.
b- Procesamiento de las muestras
Las muestras obtenidas durante el trabajo prctico se procesarn como fue
explicado anteriormente (Directos, Frescos y coloraciones). Adems se procesarn
muestras clnicas obtenidas previamente y que se entregarn como material de
trabajo.
cObservacin de preparados
Se realizar observacin de preparados de muestras clnicas de diversas patologas
fngicas.

BIBLIOGRAFIA
1- KONEMAN, E.; ROBERTS, G. - "Micologa prctica de laboratorio "3 edicin - Editorial Mdica
Panamericana - 1987 - Bs.As.- Argentina.
2RICHARDSON, M.; WARNOCK, D. - "Fungal infection, diagnosis and management"Blackwill Science - 2 edicin - 1997 - Reino Unido.
3- LPEZ MARTNEZ, R.; MNDEZ TROVAR, L.; HERNANDEZ HERNANDEZ, F.; CASTAN
OLIVARES, R.- "Micologa mdica, procedimientos para el diagnstico de laboratorio" - Editorial
Trillas - 1 edicin - 1995 - Mxico D.F. - Mxico.
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6ELEWSKI, B.; " Onychomycosis: Pathogenesis, Diagnosis, and Management" - 1998 Clinical Microbiology Reviews, Vol. 11, No. 3, p. 415 - 429.
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11- BONIFAZ A. Micologa Mdica Bsica. Editorial Mc Graw Hill Educacin. 4ta edicin. 2012
Mxico DF. Mxico.

Dr. Guillermo Garca-Effron

Prof. Adjunto Micologa
Investigador Adjunto CONICET
Fotografas:
Dra. Soledad Gamarra: Pelos (parasitacin endotrix y ectotrix) y exmenes
microscpicos de piel y uas.
Bioq. Pedro Sarsotti: Lesiones piel lampia y cuero cabelludo. Piedra blanca.
ELEWSKI, B. et al. Lesiones de uas.
Zuiani MF et al. Tricomicosis.