Bioensayo toxicidad del cobre sobre el alga Chlorella vulgaris

Rodrigo Rene Guerrero

Grupo de investigacin 3, Seminario de Ecotoxicologa Acutica, Escuela Superior Politcnica del Chimborazo
Panamericana Sur km 1 1/2, Riobamba Ecuador.
Autor de correspondencia: Rodrigo Guerrero.rodrigo_rene13@hotmail.com.Tel.:0979830898

RESUMEN
Bioensayo toxicidad del cobre sobre el alga Chlorella vulgaris

Se determin el efecto que produce el contaminante cobre en el desarrollo del alga Chlorella vulgaris, para este fin se desarroll
un bioensayo, cuyo fundamento consisti en realizar la siembra del alga Chlorella vulgaris en tubos de ensayo que contenan
diferentes concentraciones de solucin de Sulfato de cobre, las concentraciones utilizadas fueron la de 0,1, 10,15 ppm(mg/L),
posteriormente se coloc los tubos con las soluciones en una incubadora improvisada, conformada por un pedestal de diferentes
niveles y fluorescentes que sirven para dotar de la fuente lumnica necesaria para el crecimiento y desarrollo normal de las
algas, se realizaron observaciones durante los 3 das, trascurridos los mismos, se procedi con la prueba de la absorbancia en el
espectrofotmetro con 750nm, inmediatamente los datos que se obtuvieron se trasladaron a una tabla de Excel en donde de
manera automtica se obtuvieron datos de concentracin de clulas, tasa de crecimiento y tasa de inhibicin de crecimiento, la
grfica respectiva relaciona concentracin de Cu(mg/L) y tasa de inhibicin de crecimiento en (%), al realizar la respectiva
validacin los niveles fueron demasiado altos, estaban fuera del rango por lo que se procedi a una revisin de los datos,
identificando que existen datos errneos, probablemente por errores aleatorios, debido a una equivocacin en la toma de las
muestras o debido a errores sistemticos, producto de fallas en los equipos(espectrofotmetro, para corregir estos errores se
procedi a hacer una aproximacin entre los datos obtenidos de las repeticiones B y C, de esta manera se logr corregir la
grfica y as se obtuvo datos aceptables y validados puesto que se obtuvo un crecimiento de por lo menos 16X en los controles y
el coeficiente de varianza est por debajo del 20%, una vez validados continuamos con el ltimo anlisis de los datos que
consiste en trasferir los mencionados datos al programa PriProbit, realizando el respectivo anlisis y valoracin.

Palabras clave: Toxicidad, algas, Chlorella vulgaris, cobre, espectrofotmetro, absorbancia.

INTRODUCCIN
En la pasada dcada del 90 surgen a nivel
mundial
los
primeros
requerimientos
regulatorios que exigieron al mundo del cobre
generar conocimiento sobre los efectos del metal
en la salud del ser humano. Esto llev a realizar
una serie de estudios cientficos que
corroboraran sus aportes benficos a la salud y el
medio ambiente, lo cual hasta esa fecha slo se
reconoca por el traspaso de informacin desde
tiempos ancestrales (1).
La mayor parte del cobre del mundo se obtiene
de los sulfuros minerales como la calcocita,
covelita, calcopirita, bornita y enargita. Los
minerales oxidados son la cuprita, tenorita,
malaquita, azurita, crisocola y brocantita. El
cobre natural, antes abundante en Estados
Unidos, se extrae ahora slo en Michigan. El
grado del mineral empleado en la produccin de
cobre ha ido disminuyendo regularmente,
conforme se han agotado los minerales ms ricos
y ha crecido la demanda de cobre. Hay grandes
cantidades de cobre en la Tierra para uso futuro
si se utilizan los minerales de los grados ms
bajos, y no hay probabilidad de que se agoten
durante un largo periodo (2).
La produccin mundial de Cobre est todava
creciendo. Esto bsicamente significa que ms y
ms Cobre termina en el medioambiente. Los
ros estn depositando barro en sus orillas que
estn contaminados con Cobre, debido al vertido
de aguas residuales contaminadas con Cobre. El
Cobre entra en el aire, mayoritariamente a travs
de la liberacin durante la combustin de fuel. El
Cobre en el aire permanecer por un periodo de
tiempo eminente, antes de depositarse cuando
empieza a llover. Este terminar mayormente en
los suelos, como resultado los suelos pueden
tambin contener grandes cantidades de Cobre
despus de que est sea depositado desde el aire.

El Cobre puede ser liberado en el

medioambiente tanto por actividades humanas
como por procesos naturales. Ejemplo de fuentes
naturales son las tormentas de polvo,
descomposicin de la vegetacin, incendios
forestales y aerosoles marinos. Unos pocos de
ejemplos de actividades humanas que
contribuyen a la liberacin del Cobre han sido ya
nombrados. Otros ejemplos son la minera, la
produccin de metal, la produccin de madera y
la produccin de fertilizantes fosfatados. El
Cobre es a menudo encontrado cerca de minas,
asentamientos industriales, vertederos y lugares
de residuos. Cuando el Cobre termina en el suelo
este es fuertemente atado a la materia orgnica y
minerales. Como resultado este no viaja muy
lejos antes de ser liberado y es difcil que entre
en el agua subterrnea. En el agua superficial el
cobre puede viajar largas distancias, tanto
suspendido sobre las partculas de lodos como
iones libres.
El Cobre no se rompe en el ambiente y por eso
se puede acumular en plantas y animales cuando
este es encontrado en suelos. En suelos ricos en
Cobre slo un nmero pequeo de plantas
pueden vivir. Por esta razn no hay diversidad de
plantas cerca de las fbricas de Cobres, debido al
efecto del Cobre sobre las plantas, es una seria
amenaza para la produccin en las granjas. El
Cobre puede seriamente influir en el proceso de
ciertas tierras agrcolas, dependiendo de la
acidez del suelo y la presencia de materia
orgnica. A pesar de esto el estircol que
contiene Cobre es todava usado. El Cobre puede
interrumpir la actividad en el suelo, su influencia
negativa en la actividad de microorganismos y
lombrices de tierra.
La descomposicin de la materia orgnica puede
disminuir debido a esto. Cuando los suelos de las
granjas estn contaminados con Cobre, los
animales pueden absorber concentraciones de
Cobre que daan su salud. Principalmente las

ovejas sufren un gran efecto por envenenamiento

con Cobre, debido a que los efectos del Cobre se
manifiestan a bajas concentraciones.
Chlorella vulgaris Beyerinck [Beijerinck], 1890
es un alga verde que, debido a su capacidad de
fotosintetizar y a su situacin en las cadenas
trficas como productor primario, la convierte en
un organismo ideal para acumular metales. Se ha
demostrado que es capaz de absorber grandes
cantidades
de
metales,
principalmente

2+

2+ Hg
2+ Pb
2+ Zn . Este proceso se realiza para
2+ Cu
4+ Fe

Cr

incorporar metales a sus clulas en dos etapas.

La primera de ellas, denominada biosorcin,
transcurre en muy poco tiempo y es similar tanto
en la pared celular como en toda la clula, es
decir que ambas estructuras introducen, en un
tiempo similar, Cd, Pb y Cu, mediante un
intercambio de iones en el que el Na, Mg y Ca
resultan desplazados a favor de los metales
pesados. A continuacin el metal puede unirse a
distintos grupos funcionales como aminas,
alcoholes, fosfatos, hidroxilos. La segunda fase,
llamada bioacumulacin requiere un perodo de
tiempo mayor y a diferencia de la primera etapa,
se trata de un proceso activo en el que se piensa
que interviene en el metabolismo de la clula.
MATERIALES Y METODOS
Organismos
El organismo que fue utilizado en la prctica fue
el alga Chlorella vulgaris (nombre comn:
clorela) es un gnero de algas verdes
unicelulares del filo Chlorophyta. Tiene forma
esfrica, midiendo de 2 a 10 m de dimetro, y
no posee flagelo. Chlorella contiene los
pigmentos verdes fotosintetizadores clorofila-a y
-b en su cloroplasto. A travs de la fotosntesis se
multiplica rpidamente, requiriendo slo dixido
de carbono, agua, luz solar y pequeas
cantidades de minerales.

Substancias qumicas
Se utiliz una o Solucin de 100mg/L de Cu o
Sulfato de Cobre, que es una sal insoluble de
color blanco, formada por el anin sulfato y el
catin cobre en estado de oxidacin +1, de
frmula Cu2SO4. Este estado de oxidacin es
poco estable, por tanto el sulfato de cobre (I) es
mucho menos frecuente que su anlogo el sulfato
de cobre (II) CuSO4.y adems una Solucin al
0,3% de nitrofoska 1 que servir como nutriente.
Localizacin y descripcin del rea de estudio
La investigacin se llev a cabo en el laboratorio
de fsico qumica de la Facultad de Ciencias de
la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo,
localizado en la Panamericana Sur km 1 de la
ciudad de Riobamba, Ecuador. La altura
promedio es de 2820 msnm, con una temperatura
mxima de 25 C y una temperatura mnima
promedio de 9 C.
Cultivo de Chlorella vulgaris
La cepa de microalga C. vulgaris fue obtenida
del laboratorio de alimento vivo del Instituto de
Acuicultura de la Universidad de los Llanos. El
stock del cultivo se conserv en recipientes de
vidrio de 3 l, previamente esterilizados en
autoclave (45 min a una temperatura de 121 C,
Tuttnauer 2540 MK, Holanda). Se utiliz un
medio de cultivo fertilizante inorgnico del
complejo NPK (REMITAL m 17-6-18) a
razn de 1 g/l, el cual ha mostrado los mejores
resultados con respecto al crecimiento
poblacional (Muoz et al., 2012). Las microalgas
se mantuvieron bajo condiciones controladas de
laboratorio con iluminacin blanca artificial
constante de 72 W y una intensidad lumnica de
2629 300 lux (31,8 3,6 mol m-2.s-1),
temperatura de 18 1 C y aireacin
permanente, mantenindose el cultivo hasta que
alcanz la fase exponencial.
Ensayo preliminar
Teniendo en cuenta las caractersticas lipoflicas
del fenantreno (98 % pureza, SigmaAldrich,
Alemania), se realiz un ensayo evaluando el

uso de dos solventes: dimetilsulfxido (DMSO

v/v Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) y
acetona (Merck, Darmstadt, Alemania). Para este
fin, se evaluaron para los dos solventes
concentraciones de 0,05 % a 1 % durante un
periodo de 24 h, obtenindose el mejor resultado
de solubilidad con acetona al 0,05 %, lo cual
minimiz los posibles efectos secundarios del
solvente.

Efectos sobre el crecimiento algal

Conclusiones (mximo 700 caracteres

incluyendo espacios)

Referencias bibliogrficas

- Se recomienda consultar los PDF

Saenz & Di Marzio
2009_Limnetica_Ecotoxicidad.gliofosfato.alg
as.clorofitas y
Otero-Paternina etal
2013_Acta.Bio.Colomb_hidrocarburo.Chlorel
la para entender la estructura de un
trabajo similar.

Resultados (mximo 4000 caracteres

incluyendo espacios)
Discusin (mximo 4000 caracteres
incluyendo espacios)

- Son libres de usar tambin datos de los

otros grupos (i.e. pueden comparar los
resultados obtenido con los datos de otros
grupos).