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Dosages par chromatographie (CPG/CLHP)

Il existe trois techniques de dosage par chromatographie dont les quations de traitement des
donnes sont rappeles ci-dessous. Lexploitation des rsultats nest possible (et na de sens)
que dans le cadre dune dmarche qualit : il est important de diagnostiquer les sources
derreurs (oprateur, appareil, mixtes).
Loprateur intervient lors :

de lchantillonnage (peses, prlvements de volumes laide dune pipette /


micropipette ou dune seringue, prparations de fioles etc.)
de linjection.

Les sources derreur dues lappareil sont nombreuses et varies et ne peuvent tre listes de
faon exhaustive ici.
La fidlit de chacune de ces sources derreur doit tre estime. Pour ceci, des tests
statistiques doivent tre effectus rgulirement.

1. Mthode de ltalonnage externe


Cette mthode permet de doser au moins une espce (P) dans un mlange et semploie lorsque
le volume inject est prcis (fidlit < ~0,5%). Elle ncessite la ralisation dau moins deux
chromatogrammes talons1 (et) et est base sur lexploitation de la relation2 :

P = etP .

% AP
% APet

Concentration massique dterminer

etP

Concentration massique moyenne de ltalon (fixe par loprateur)

% AP

Pourcentage surfacique du chromatogramme du produit P de lchantillon (dduit


du chromatogramme chantillon)
Pourcentage surfacique moyen du chromatogramme du produit P de ltalon
(dduit du chromatogramme talon)

% APet

Ce calcul implique lutilisation de valeurs de etP et de % APet valide par un test de


concordance (fidlit de lordre de 0,5-1% selon le dosage, ce qui permet destimer une
incertitude P ). De mme, le calcul P doit tre confirm par deux valeurs concordantes.
On exprime le rsultat sous la forme :
P = P ,moy P

Nous rappelons que les chromatogrammes talons doivent avoir des compositions proches des
chromatogrammes chantillons.
2
Nous rappelons que cette relation est dduite dune loi de proportionnalit masse / surface qui doit tre vrifie
et valide sur lappareil utilis. Elle repose aussi sur la ncessit de se trouver dans un domaine de linarit, ce
qui doit aussi tre vrifi et valid.
XB-ENCPB / 2012

RNCHIMIE

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Cette mthode peut tre utilise en CLHP lorsque le volume de boucle dinjection est correctement
calibr (source derreur : appareil) et quaucune bulle dair ny a t place (source derreur :
oprateur).
Cette mthode peut tre utilise en CPG3 lorsque le volume de liquide prsent dans la seringue est
correctement estim (source derreur : prcision de la seringue, oprateur).

Remarque. Si un effet de matrice est observ la mthode des ajouts doss peut tre utilise.

2. Mthode de ltalonnage interne


Cette mthode permet de doser au moins une espce (P) dans un mlange et semploie lorsque
le volume inject est peu prcis (fidlit > ~1 %). Elle ncessite la ralisation dau moins un
chromatogramme talon4 (et) et lajout dune espce inerte appele talon interne (E), dans
ltalon et dans lchantillon. Elle est base sur lexploitation de la relation5 :
P = E

etP % AEet % AP
.
.
etE % APet % AE

E
etE
% AE
% AEet

Concentration massique en talon interne dans lchantillon (fixe par


loprateur)
Concentration massique en talon interne de ltalon (fixe par
loprateur)
Pourcentage surfacique du chromatogramme en talon interne de
lchantillon (dduit du chromatogramme chantillon)
Pourcentage surfacique moyen du chromatogramme en talon interne
de ltalon (dduit du chromatogramme talon)

Cette mthode peut tre utilise en CLHP lorsque le volume de boucle dinjection est mal calibr
(source derreur : appareil).
Cette mthode peut tre utilise en CPG.

3. Mthode de la normalisation interne


Cette mthode permet de doser au moins une espce (P) dans un mlange et semploie lorsque
le volume inject est peu prcis (fidlit > ~1 %) et que toutes les espces prsentes sur le
chromatogramme sont identifies. Elle ncessite la ralisation dau moins un
chromatogramme talon6 (et) constitu du produit dintrt (P) et de toutes les autres espces
( Ii ) et est base sur lexploitation de la relation7 :
%mP =

% AP
% AP + K Imi / P .% AIi
i

ou encore, pour une des espces Ii : %mIi =

K Imi / P .% AIi

% AP + + K Imi / P .% AIi
i

Notons quen CPG, lutilisation despces volatiles augmente lerreur sur les mesures de volumes.
Voir note 1.
5
Voir note 2.
6
Voir note 1. Cette contrainte prend ici une grande importance.
7
Voir note 2.
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XB-ENCPB / 2012

RNCHIMIE

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o K Imi / P est appel coefficient de rponse massique relatif du produit Ii par rapport au produit
P est dfini par K

m
Ii / P

%mIeti % APet
=
.
et est calcul grce aux donnes extraites dun
%mPet % AIeti

chromatogramme talon.
Consquences :

Le calcul de %mP implique le calcul pralable des n-1 K Imi / P (si le chromatogramme

montre la prsence de n espces),


Si les K Imi / P sont proches de 1, alors % mP  % AP .

Si % AP  % AIi (un facteur 10 suffit) alors %mP  % AP .

Le calcul des pourcentages molaires se fait selon lquation :


K n Ii / P .% AIi
% AP
%nP =
ou encore %nIi =
% AP + K n Ii / P .% AIi
% AP + K n Ii / P .% AIi
i

o K Ini / P est appel coefficient de rponse molaire relatif du produit Ii par rapport au produit P
est dfini par K n Ii / P = K Imi / P .

MP
M I1

Consquences :

Si M P  M I1 alors %mP  %nP .

4. Tableau rsum

Sensibilit au
volume inject
Ncessit davoir identifi toutes
les espces du chromatogramme
Ncessit dajouter une
espce supplmentaire
Temps de calcul
Inconvnients

XB-ENCPB / 2012

Etalonnage
externe

Etalonnage
interne

Normalisation
interne

Oui

Non

Non

Non

Non

Oui

Non

Oui

Non

Rapide
Sassurer de la prcision
du volume inject

Moyenne
Connatre avec prcision
les concentrations en
talon interne

RNCHIMIE

Longue
1. Temps de calculs
2. Interdpendance des
rsultats

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