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Revista Mexicana de Ingeniera Biomdica

Volumen
Volume

Nmero
Number

25

Marzo
March

2004

Artculo:

Efectos electrocinticos de clulas


biolgicas y partculas coloidales en la
espectroscopia dielctrica a bajas
frecuencias
Derechos reservados, Copyright 2004:
Sociedad Mexicana de Ingeniera Biomdica, AC

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MG Revista Mexicana de Ingeniera Biomdica volumen XXV nmero 1 Marzo 2004


REVISTA MEXICANA DE
INGENIERA BIOMDICA

ARTCULO DE INVESTIGACIN ORIGINAL


SOMIB

Vol. XXV, Nm. 1


Marzo 2004
pp 16 - 24

Efectos electrocinticos de clulas biolgicas y


partculas coloidales en la espectroscopia
dielctrica a bajas frecuencias
A. Zehe,* A. Ramrez*
*

Benemrita Universidad Autnoma de


Puebla. Facultad de Ciencias de la
Electrnica.

Correspondencia:
A. Zehe
Apartado Postal No. 1505, 72000 Puebla,
Mxico
E-mail: azehe@siu.buap.mx

RESUMEN
La manipulacin de clulas o de macromolculas (por ej. ADN) biolgicas cuyo tamao fsico cubre el rango nanomtrico, es parte
esencial de la novedosa nanotecnologa un hbrido entre biologa,
qumica e ingeniera, que pretende el ensamble de bionano estructuras funcionales a travs de un posicionamiento fsico de sus componentes. Al otro lado permite la manipulacin de estos objetos, su
anlisis biomdico y su separacin en poblaciones de ciertos tamaos. Las tcnicas electrocinticas a bajas frecuencias permiten el
estudio de la agregacin, rotacin, deformacin y orientacin, incluso la manipulacin, de pequeos objetos singulares en su dependencia de la frecuencia desde fracciones de 1 Hz hasta la regin de varios MHz. La fsica detrs de estas tcnicas est basada
en propiedades de impedancia de partculas o clulas en suspensin. Los efectos electrocinticos son consecuencia de la interaccin entre un campo incidente elctrico alterno y el momento dipolar inducido en estos objetos. Presentamos en este trabajo los
aspectos fsicos detrs de los diferentes mtodos electrocinticos,
que debido a los avances en la microestructuracin litogrfica para
la fabricacin de microcmaras de medicin encuentran un creciente inters en la investigacin bioqumica y el diagnstico mdico. Particularmente apuntan las actividades de investigacin en este
campo a la creacin de biosensores en un amplio rango de aplicaciones, e incluso a la integracin de diferentes aspectos de anlisis
biomdico y bioqumico en un laboratorio sobre-un-chip.
Palabras clave:
Clulas biolgicas, electrocintica, partculas elipsoidales, lab-on-achip.
ABSTRACT
The manipulation of nanometer-size biological cells or macromolecules (e.g. DNA) is an essential approach in recent nanotechnology,
-hydride of biology, chemistry and engineering-, which pretends the
assembly of functional bionanostructures by means of a mechanical
positioning of its components. On the other hand provides the manipulation of these objects for a biomedical analysis and size separation into certain populations. Electrokinetic techniques at low frequency allow to study aggregation, rotation, deformation, and
orientation, including manipulation, of small single objects in a wide
frequency range between 1 Hz up to several MHz. The physics behind

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Zehe A y col. Efectos electrocinticos de clulas biolgicas y partculas coloidales en la espectroscopia dielctrica MG

these techniques is based on impedance properties of particles or


cells in suspension. The electrokinetic effects are consequence of
the interaction between an incident electric a.c.-field and the induced
dipole moment of the dielectric objects. In the present paper we
outline physical aspects behind different electrokinetic methods. The
advanced state of lithographic techniques allows to make micro
chambers suitable for both biochemical investigation and medical
diagnostics. In particular point research activities in this field toward
the fabrication of biosensors in wide range of applications, including
the integration of different biomedical and biochemical analysis aspects within a single lab-on-a-chip.
Key W
ords:
Words:
Biological cells, Electrokinetics, Ellipsoidal particles, Lab-on-a-chip.

1. INTRODUCCIN
Los mtodos clsicos de impedancia registran la
respuesta dielctrica de una suspensin a un campo elctrico externo1-4. Los sistemas biolgicos son
complejos con respecto a su composicin y estructura geomtrica. La interaccin con un campo elctrico involucra por lo tanto mltiples procesos de relajamiento, e inclusive polarizaciones
interfaciales con los electrodos5-8. Informaciones
tiles respecto a las propiedades dielctricas se
obtienen solamente, si cada proceso de relajamiento puede ser extrado del comportamiento
total del sistema. Son indispensables para este fin
mediciones sobre un amplio rango de frecuencias y con una alta resolucin. Los mtodos electrocinticos con campos elctricos alternos a baja
frecuencia estn actualmente, y en creciente grado, sustituyendo las tcnicas comunes de impedancia9-11. La razn principal consiste en la alta
resolucin de estos mtodos referente a los parmetros elctricos de objetos singulares, basados
en sus principios de medicin diferentes. Los mtodos electrocinticos determinan o aplican efectos de fuerza, que surgen de la interaccin entre
un momento dipolar inducido en un objeto y el
campo elctrico externo. El anlisis microscpico
de movimientos de partculas o clulas en funcin
de la frecuencia del campo elctrico permite estudios tanto de traslacin y rotacin, como de
deformacin, orientacin y agregacin de partculas o clulas singulares12-14.
Los mecanismos responsables para los procesos de relajamiento grandes a baja frecuencia
incluyen el efecto MAXWELL-WAGNER15 y el efecto
interfacial de polarizacin16. El anterior efecto ocurre en partculas, que son compuestas de un material aislante, cubiertas con una capa de mate-

rial conductivo, que resulta en una permitividad


compleja efectiva, y que depende de los volmenes relativos y sus propiedades dielctricas.
Para su descripcin se aplican frmulas de mixtura17, que se basan en el clculo del potencial interno y externo de partculas esfricas dispersas18
o en muestras con geometras elpticas, e incluso
cilndricas19. Establecidos sobre la teora MAXWELL-WAGNER-SILLARS (MWS) de la polarizacin interfacial 20-21, y considerando solamente partculas
esfricas, la frmula de mixtura para la funcin
dielctrica de la suspensin resulta en *
sus

*
sus

*
liq

(2

*
liq

*
sph

) - 2 p(

*
liq

*
sph

) (2

*
liq

*
sph

) - 2 p(

*
liq

*
sph

- 1

(1)

donde *sus es la permitividad dielctrica compleja


*
de las partculas esfricas suspendidas, liq se
refiere al medio de suspensin, y p es la fraccin
de volumen, que constituyen las partculas dispersadas. Los mtodos basados en suspensiones
detectan muchas partculas en un instante y pueden lograr as un significado estadstico dentro
de cortos tiempos de medicin. Son tiles tambin para partculas submicromtricas, que no
permiten una deteccin visual. No obstante, si
se observa por ejemplo un ensanchamiento de
un proceso de dispersin determinado, no ser
posible asociarlo o con las propiedades de cada
partcula singular o con la dispersin de la partcula dentro de la poblacin de partculas suspendidas. Adems, la teora MWS de polarizacin
lleva a resultados errneos, si las superficies de
las partculas contienen una densidad de carga
elctrica alta.
Aunque cualquier respuesta dielctrica es basada en el mismo principio de polarizacin interfacial y puede por tanto ser descrito por una teo-

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MG Revista Mexicana de Ingeniera Biomdica volumen XXV nmero 1 Marzo 2004

ra unificada, las propiedades de partculas singulares se presentan ms claramente en sus efectos


electrocinticos. La razn para esto consiste en el
hecho, que estos efectos son consecuencia de
la diferencia de la polarizabilidad entre el medio
de suspensin y las partculas, mientras la tcnica
de impedancia simplemente determina la permitividad dielctrica integral de la suspensin *sus
como seala la ecuacin (1).

2. EFECTOS ELECTROCINTICOS
Las caractersticas de los campos elctricos aplicados determinan esencialmente, cul de los
varios efectos electrocinticos ocurre. Esto se refiere a campos homogneos o inhomogneos,
tanto como a campos rotativos o traslativos, ms
a la induccin de los momentos dipolares, es decir, de las fuerzas correspondientes. En la Figura 1
se presenta la actuacin de campos elctricos
homogneos sobre una partcula singular, que
tcnicamente se realiza entre las placas planas
de una capacitancia como contactos elctricos.
Los efectos electrocinticos son diferentes, si se
expone la partcula a un campo elctrico inhomogneo, como se muestra en la Figura 2. Las
relaciones de fase del campo elctrico en cuatro
contactos, que rodean la partcula en una microcmara, resulta en el efecto de electro-rotacin22,23. Su realizacin esquemtica se muestra
en la Figura 3. Finalmente se puede generar un
campo elctrico traslativo con un arreglo especial de contactos, donde las partculas no solamente se mueven en forma traslatoria, sino dependiendo de sus propiedades dielctricas sufren
fuerzas diferentes, que las separan en direccin
vertical sobre el arreglo de contactos (Figura 4).
Este mtodo es conocido como tcnica de field
flow fractionation 24,25.

3. POLARIZACIN Y FUERZA DE CAMPO


Los efectos de polarizacin de clulas biolgicas o partculas son aplicados para su manipulacin, entrampamiento, fusin e incluso transfeccin. El conocimiento de los parmetros
externos e internos, que afectan la polarizacin,
es por tanto indispensable para la descripcin de
los efectos esperados. Para clulas biolgicas, los
cambios en la polarizacin ms pronunciados,
dependiendo de la frecuencia en un campo
elctrico externo, resultan de efectos estructurales. Modelos dielctricos consideran las carac-

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Figura 1. Presentacin esquemtica de efectos dielctricos en campos homogneos elctricos alternos. (a) Orientacin de una celda no-esfrica: (b) Deformacin (elongacin compresin); (c) Atraccin entre varias partculas.
El campo elctrico homogneo se genera con dos contactos planos (capacitancia de capas planas).

Zehe A y col. Efectos electrocinticos de clulas biolgicas y partculas coloidales en la espectroscopia dielctrica MG

(a) Entrampamiento de clulas o partculas


(b) Dielectroforesis
Campos inhomogneos se generan con una combinacin de contactos placa-punta.

19

tersticas de clulas suponiendo geometras esfricas o elipsoidales 26,27, y recientemente tambin cilndricas19. Existen dos casos extremos para
la polarizabilidad de clulas biolgicas al sumergirlas en un medio con conductividad elctrica
baja: o su polarizabilidad es mucho menor que
la del medio o viceversa. El primer caso aplica
para frecuencias bajas, donde la membrana asla
al contenido de la clula. Con creciente frecuencia se disminuye el efecto de la membrana, y la
conductividad alta del (por ejemplo) cytoplasma
domina la polarizacin, como se muestra en la
Figura 5. Las fuerzas generadas por las capas de
polarizacin resultan en una compresin (caso b
en Figura 5) o en una elongacin de la clula
esfrica. Si la partcula tiene una geometra noesfrica, aparte de las fuerzas de deformacin
resulta una reorientacin tal, que el eje mayor
de la partcula se alinea con el campo externo
elctrico (consulte Figura 1a). Un arreglo de los
contactos elctricos externos como placa-punta (viz. Figura 2) genera un campo elctrico inhomogneo y consecuentemente un desequilibrio de las fuerzas de polarizacin entre los dos
hemisferios de la esfera (Figura 5) con el efecto,
que la clula se mueve hacia la regin del campo elctrico alto o en direccin opuesta, dependiendo del grado de su polarizabilidad relativa al
medio de suspensin. Como la ltima depende
tambin de la frecuencia del campo elctrico,
esta direccin puede ser controlada y aprovechada en el experimento. La tcnica lleva el
nombre de dielectroforesis en el arreglo de con-

Figura 2. Efectos electrocinticos en un campo elctrico


inhomogneo.

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Figura 3. La rotacin de una partcula suspendida se realiza con un arreglo de 4 contactos elctricos.

Figura 4. Esquema de un sistema de dielectroforesis con


onda viajera. No solamente una fuerza traslatoria acta,
sino la partcula puede levitarse de la cadena de contactos elctricos.

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MG Revista Mexicana de Ingeniera Biomdica volumen XXV nmero 1 Marzo 2004

3.1 DIELECTROFORESIS
En campos elctricos alternos, y referente a su distribucin en el espacio inhomogneo,
r se calcula
la fuerza promediada en tiempo < F > sobre una
partcula dielctrica por

r
< F >=

1
r
Re m E *
2

(2)

donde m es el momento dipolar inducido, E *


es el gradiente del conjugado complejo del campo elctrico externo, Re denota la parte real del
r
producto escalar. m es proporcional al volumen
de la partcula. El campo elctrico externo E con
su frecuencia circular se escribe cmodamente como

1
r r
E = E o e jw t , j = (- 1) 2

(3)

y tomado la permitividad del medio alrededor de


la clula como o m, se llega a la fuerza de dielectroforesis (DEP) sobre una partcula elipsoide

< FDEP >=

V Re{ Kw ( } ) Erms

(4)

El componente en direccin x del factor Clausius-Mossotti, K(), es

K (w ) x = (

Figura 5. La accin de fuerza y distribucin del campo


sobre una clula con geometra esfrica. (a): sin aplicacin de un campo, y en un campo elctrico homogneo a bajas (b) y altas (c) frecuencias. El medio de
suspensin es de baja conductividad elctrica. Los dos
casos extremos de polarizabilidad tienen analoga con
una burbuja de aire y a una esfera metlica en un
campo magntico.

*
p

)/

*
m

+ (

*
p

*
m

) nx

(5)

Las permitividades *p de la partcula, y *m


del medio de suspensin son nmeros complejos,
mientras o es la comn constante dielctrica del
vaco ( o . o. c2=1, c es la velocidad de luz, o
permeabilidad magntica del vaco). nx es el factor de depolarizacin en direccin x paralelo al
campo elctrico externo 28. Esferoides poseen dos
ejes iguales, y la tercera puede tomar valores entre cero (disco infinitamente delgado) e infinito (cilindro infinitamente largo; aguja). Tres ejes iguales corresponden a la esfera. Suponiendo que este
tercer eje se orienta paralelo al campo elctrico
externo, los factores de depolarizacin toman valores n = 1; 1/ 3; 0 para el disco delgado, la esfera
y el cilindro largo, respectivamente. Para cilindros
cortos y discos gruesos, que no pueden ser representados por esferoides, se desarroll un procedimiento de aproximacin 19. Uno de los ejemplos
ms llamativos al respecto lo forman los rouleaux,

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tactos mostrado en la Figura 2b. Con el uso de


cuatro contactos (viz. Figura 2a) se puede mover
la clula (o las clulas en el caso de una poblacin mayor) hacia el centro, o despoblar el centro, dependiendo de la frecuencia aplicada.

*
m

21

Zehe A y col. Efectos electrocinticos de clulas biolgicas y partculas coloidales en la espectroscopia dielctrica MG

que son agregaciones de eritrocitos en forma de


los llamados coin stacks23.
La relacin entre la conductividad elctrica
de un medio y su permitividad real se expresa
por

- j (s /

w )

(6)

El factor Clausius-Mossotti (CM) constituye una


medida para la polarizabilidad efectiva de una
partcula, y depende a travs de n x fuertemente
de su forma geomtrica, pero tambin debido
segn la ecuacin (5) a la frecuencia del campo
elctrico externo. Variaciones de este factor (CM)
con la frecuencia modifican la fuerza, que acta
sobre una determinada partcula.
fuerza <FDEP
>
:rop La
odarobale
FDP
mueve la partcula hacia la regin del campo (inhomogneo) fuerte,
hacia el electrodo
VC ed es
AS,decir,
cidemihparG
de punta, si Re{K()}>0. En caso contrario, la fuerza es orientada en direccin del campo
arap elctrico
decreciente, si Re{K()} es negativo. Obviamente acidmoiB
definen estas
diferencias
un protocolo de searutaretiL
:cihpargideM
paracin de partculas con diferente tamao (V) y
sustradode-m.e.d.i.g.r.a.p.h.i.c
geometra (nx). Comparamos en calidad de ejemplo una partcula esfrica de radios r (nx = 1/ 3) con
una partcula larga ( l ) en forma de cilindro (nx =
0), se reconocen las diferencias en las fuerzas dielectroforticas, cuya direccin depende adems
de la frecuencia aplicada (viz. ecuacin 5):

< FDEP >

< FDEP

esfera

= p 2 r 3 o

p r 2l
> cilindro =
o
3

*
m

Re

*
m

Re

*
p
*
p

-
+ 2

*
m
*
m

*
m

*
p

*
m

culas esfricas dentro de una poblacin de partculas cilndricas.


El campo elctrico rotativo sobre los electrodos
de la celda de Figura 3 puede inducir un momento dipolar rotativo en la clula biolgica. Cualquier
proceso de dispersin causa un desplazamiento
espacial de fase entre el vector de campo externo y el momento dipolar inducido, dando lugar a
un torque, que pone la clula en rotacin permanente en el sentido de rotacin del campo externo, o en su contra sentido.
3.2 ELECTRORROTACIN
En analoga al clculo de la fuerza F = ( P ) E ,
que lleva con la parte real del vector de polarizacin P a la ecuacin (1), se rencuentra para un
sustradode-m.e.d.i.g.r.a.p.h.i.c
campo
rotativo E el torque T proporcional a la
te imaginaria de la polarizacin P . El torque
par
cihpargidemedodabor
rotacional promedio en campos elctricos con
polarizacin circular
sobre una partcula con mor
mento dipolar m es

r
< T >=

(7)

(8)

Se pueden encontrar regiones de frecuencia,


en que la fuerza sobre un tipo de partcula es positiva, mientras sobre el otro tipo de partcula es
negativa, lo que explicara su separacin en el
espacio de la cmara de experimentacin. Una
evaluacin de la ecuacin (7) lleva a la Figura 6.
La fuerza dielectrofortica es mayor para elipsoides largos (s = l /r = 30) comparada con la esfera (s = 1). Sin embargo, tiene importancia mayor
el hecho, que la direccin de la fuerza se reserva
en regiones de diferentes frecuencias para diferentes longitudes de partculas. Esto permite (como
ejemplo) una separacin en el espacio de part-

(9)

Con las mismas denominaciones dadas en la


ecuacin (2, 3, 4), se llega a

m =

1
r r
Im[ m E]
2

*
m

V K (w ) E

*
m

(10)

V K r (w ) x + jK i (w ) x K r (w ) y + jK i (w ) y K r (w ) z + jK i (w ) z E

(11)

(i, r, parte imaginaria y, real, respectivamente). El


campo elctrico de la ecuacin (2) tiene sus componentes Ex, E y, Ez paralelo al mismo sistema ortor
normal de m . Circulando en el plano x-y con la
amplitud E0, tenemos

E y = jE x ; E *y = - jE x* ; E z =

(12)

En los casos prcticos, uno de los ejes principales del elipsoide siempre es vertical al plano
de campo, el componente k (sea x, y) del torque ser

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< T>

*
m

V E o2 K i (w ) x + K i (w ) y k (13)

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MG Revista Mexicana de Ingeniera Biomdica volumen XXV nmero 1 Marzo 2004

Para una partcula con geometra elipsoidal


aplica el factor Clausius-Mossotti segn la ecuacin (4). No obstante son solamente las partes
imaginarias K i () x y K i () y segn la ecuacin (5),
determinan la dependencia en frecuencia del
torque sobre la partcula. Por su proporcionalidad al torque ser suficiente dibujar la parte imaginaria del factor Clausius-Mossotti para reconocer la
fuerza en dependencia de la frecuencia, que

experimenta una partcula. En la Figura 7 se puede apreciar, que el torque tiene un mximo (aqu)
en el rango de 10 megahertz, dependiendo
adems de la longitud del elipsoide, inducido
con s = 1 para una esfera de radius r, y extendiendo el eje paralelo al plano de campo por factores s = 2, 3, ... . Valores mayores de s = l / r
corresponden a una elipsoide larga con el mismo
radius r de la esfera. No solamente se detecta un

43
s=3
33

s=1 s=2 s=3

Re{K(w } )

r
s=2

23

13
s=1
3
0
s=10
-7

s=5
9

8
log (frecuencia/Hz)

90

Figura 6. La fuerza vs la frecuencia del campo elctrico inhomogneo en el


espectro de dielectroforesis para partculas elipsoides con diferente largo l
de su eje mayor, descrita
por el parmetro s = l /r
y manteniendo constante
el radio r. La fuerza dielectrofortica es proporcional
a la parte real del factor
Clausius-Mossotti. En el
clculo se us m = 0.01
S/m; m = 80; p = 0.45 S/
m; p = 52.

S=5

80
s=1s=2 s=3

70

50
40
s=3

Im{K(w } )

60

30

s=1

20

edigraphic.com
s=2

10
0

7
log (frecuencia/Hz)

Figura 7. El torque vs la frecuencia del campo elctrico en el espectro de


electrorrotacin para partculas elipsoides con diferente largo l de su eje
mayor, descrito por el parmetro s= l /r y manteniendo constante el radio
r. El torque sobre la partcula es proporcional a la
parte imaginaria del factor
Clausius-Mossotti. ( m =
0.01 S/m; m = 80; p =
0.45 S/m; p = 52)

Zehe A y col. Efectos electrocinticos de clulas biolgicas y partculas coloidales en la espectroscopia dielctrica MG

aumento del torque con la longitud l del elipsoide, sino tambin un corrimiento de su mximo
hacia frecuencias menores.

2.

3.

4. CONCLUSIONES
En general, los diferentes mtodos de espectroscopia dielctrica muestran tanto ventajas como
desventajas en su comparacin mutua. Los mtodos clsicos de suspensiones detectan propiedades de muchas partculas en un solo turno de
medicin y asumen un significado estadstico
mayor. Sin embargo, los sistemas biolgicos muchas veces son complejos en su composicin y
estructura geomtrica de las partculas involucradas. Los espectros dielctricos vs la frecuencia del
campo elctrico aplicado pueden contener mltiples procesos de relajamiento, y para una interpretacin correcta se requiere la identificacin de
cada uno de ellos. Interacciones entre las partculas y con los electrodos de la cmara de medicin frecuentemente dificultan este procedimiento. Un aspecto positivo ms de esta tcnica es su
potencial tambin para partculas sub-microscpicas, que en el caso de partculas singulares puede ser restringido al rango de partculas microscpicas. No obstante, resulta una ventaja clara de
los mtodos electrocinticos para el hecho, que
la geometra y las caractersticas estructurales de
las partculas bajo observacin son conocidas.
Como se ha visto en los dos ejemplos tratados
aqu, esto es un prerrequisito para el correcto
modelo geomtrico (factor de depolarizacin) y
la deduccin de las propiedades del objeto en
estudio. Los avances en la tecnologa microelectrnica referente a la transferencia de estructuras
finas sobre un sustrato a travs de la fotolitografa
ha dado lugar a cmaras de medicin con arreglos de microelectrodos altamente precisos. Una
desventaja mayor de los mtodos de partculas
singulares, a saber, el rango limitado de la conductividad del medio de suspensin y de la frecuencia, ha sido levantada. La descripcin de
efectos novedosos de dispersin al nivel de clulas singulares29 es uno de sus logros. Particularmente aprovecharn las tcnicas lab-on-a-chip efectos electrocinticos para un eficiente y confiable
diagnstico mdico
m2d3gr 1p(h)3c

4.
5.

6.
7.

8.

9.
10.
11.
12.

13.

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