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25
Marzo
March
2004
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16
Correspondencia:
A. Zehe
Apartado Postal No. 1505, 72000 Puebla,
Mxico
E-mail: azehe@siu.buap.mx
RESUMEN
La manipulacin de clulas o de macromolculas (por ej. ADN) biolgicas cuyo tamao fsico cubre el rango nanomtrico, es parte
esencial de la novedosa nanotecnologa un hbrido entre biologa,
qumica e ingeniera, que pretende el ensamble de bionano estructuras funcionales a travs de un posicionamiento fsico de sus componentes. Al otro lado permite la manipulacin de estos objetos, su
anlisis biomdico y su separacin en poblaciones de ciertos tamaos. Las tcnicas electrocinticas a bajas frecuencias permiten el
estudio de la agregacin, rotacin, deformacin y orientacin, incluso la manipulacin, de pequeos objetos singulares en su dependencia de la frecuencia desde fracciones de 1 Hz hasta la regin de varios MHz. La fsica detrs de estas tcnicas est basada
en propiedades de impedancia de partculas o clulas en suspensin. Los efectos electrocinticos son consecuencia de la interaccin entre un campo incidente elctrico alterno y el momento dipolar inducido en estos objetos. Presentamos en este trabajo los
aspectos fsicos detrs de los diferentes mtodos electrocinticos,
que debido a los avances en la microestructuracin litogrfica para
la fabricacin de microcmaras de medicin encuentran un creciente inters en la investigacin bioqumica y el diagnstico mdico. Particularmente apuntan las actividades de investigacin en este
campo a la creacin de biosensores en un amplio rango de aplicaciones, e incluso a la integracin de diferentes aspectos de anlisis
biomdico y bioqumico en un laboratorio sobre-un-chip.
Palabras clave:
Clulas biolgicas, electrocintica, partculas elipsoidales, lab-on-achip.
ABSTRACT
The manipulation of nanometer-size biological cells or macromolecules (e.g. DNA) is an essential approach in recent nanotechnology,
-hydride of biology, chemistry and engineering-, which pretends the
assembly of functional bionanostructures by means of a mechanical
positioning of its components. On the other hand provides the manipulation of these objects for a biomedical analysis and size separation into certain populations. Electrokinetic techniques at low frequency allow to study aggregation, rotation, deformation, and
orientation, including manipulation, of small single objects in a wide
frequency range between 1 Hz up to several MHz. The physics behind
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Zehe A y col. Efectos electrocinticos de clulas biolgicas y partculas coloidales en la espectroscopia dielctrica MG
1. INTRODUCCIN
Los mtodos clsicos de impedancia registran la
respuesta dielctrica de una suspensin a un campo elctrico externo1-4. Los sistemas biolgicos son
complejos con respecto a su composicin y estructura geomtrica. La interaccin con un campo elctrico involucra por lo tanto mltiples procesos de relajamiento, e inclusive polarizaciones
interfaciales con los electrodos5-8. Informaciones
tiles respecto a las propiedades dielctricas se
obtienen solamente, si cada proceso de relajamiento puede ser extrado del comportamiento
total del sistema. Son indispensables para este fin
mediciones sobre un amplio rango de frecuencias y con una alta resolucin. Los mtodos electrocinticos con campos elctricos alternos a baja
frecuencia estn actualmente, y en creciente grado, sustituyendo las tcnicas comunes de impedancia9-11. La razn principal consiste en la alta
resolucin de estos mtodos referente a los parmetros elctricos de objetos singulares, basados
en sus principios de medicin diferentes. Los mtodos electrocinticos determinan o aplican efectos de fuerza, que surgen de la interaccin entre
un momento dipolar inducido en un objeto y el
campo elctrico externo. El anlisis microscpico
de movimientos de partculas o clulas en funcin
de la frecuencia del campo elctrico permite estudios tanto de traslacin y rotacin, como de
deformacin, orientacin y agregacin de partculas o clulas singulares12-14.
Los mecanismos responsables para los procesos de relajamiento grandes a baja frecuencia
incluyen el efecto MAXWELL-WAGNER15 y el efecto
interfacial de polarizacin16. El anterior efecto ocurre en partculas, que son compuestas de un material aislante, cubiertas con una capa de mate-
*
sus
*
liq
(2
*
liq
*
sph
) - 2 p(
*
liq
*
sph
) (2
*
liq
*
sph
) - 2 p(
*
liq
*
sph
- 1
(1)
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2. EFECTOS ELECTROCINTICOS
Las caractersticas de los campos elctricos aplicados determinan esencialmente, cul de los
varios efectos electrocinticos ocurre. Esto se refiere a campos homogneos o inhomogneos,
tanto como a campos rotativos o traslativos, ms
a la induccin de los momentos dipolares, es decir, de las fuerzas correspondientes. En la Figura 1
se presenta la actuacin de campos elctricos
homogneos sobre una partcula singular, que
tcnicamente se realiza entre las placas planas
de una capacitancia como contactos elctricos.
Los efectos electrocinticos son diferentes, si se
expone la partcula a un campo elctrico inhomogneo, como se muestra en la Figura 2. Las
relaciones de fase del campo elctrico en cuatro
contactos, que rodean la partcula en una microcmara, resulta en el efecto de electro-rotacin22,23. Su realizacin esquemtica se muestra
en la Figura 3. Finalmente se puede generar un
campo elctrico traslativo con un arreglo especial de contactos, donde las partculas no solamente se mueven en forma traslatoria, sino dependiendo de sus propiedades dielctricas sufren
fuerzas diferentes, que las separan en direccin
vertical sobre el arreglo de contactos (Figura 4).
Este mtodo es conocido como tcnica de field
flow fractionation 24,25.
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Figura 1. Presentacin esquemtica de efectos dielctricos en campos homogneos elctricos alternos. (a) Orientacin de una celda no-esfrica: (b) Deformacin (elongacin compresin); (c) Atraccin entre varias partculas.
El campo elctrico homogneo se genera con dos contactos planos (capacitancia de capas planas).
Zehe A y col. Efectos electrocinticos de clulas biolgicas y partculas coloidales en la espectroscopia dielctrica MG
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tersticas de clulas suponiendo geometras esfricas o elipsoidales 26,27, y recientemente tambin cilndricas19. Existen dos casos extremos para
la polarizabilidad de clulas biolgicas al sumergirlas en un medio con conductividad elctrica
baja: o su polarizabilidad es mucho menor que
la del medio o viceversa. El primer caso aplica
para frecuencias bajas, donde la membrana asla
al contenido de la clula. Con creciente frecuencia se disminuye el efecto de la membrana, y la
conductividad alta del (por ejemplo) cytoplasma
domina la polarizacin, como se muestra en la
Figura 5. Las fuerzas generadas por las capas de
polarizacin resultan en una compresin (caso b
en Figura 5) o en una elongacin de la clula
esfrica. Si la partcula tiene una geometra noesfrica, aparte de las fuerzas de deformacin
resulta una reorientacin tal, que el eje mayor
de la partcula se alinea con el campo externo
elctrico (consulte Figura 1a). Un arreglo de los
contactos elctricos externos como placa-punta (viz. Figura 2) genera un campo elctrico inhomogneo y consecuentemente un desequilibrio de las fuerzas de polarizacin entre los dos
hemisferios de la esfera (Figura 5) con el efecto,
que la clula se mueve hacia la regin del campo elctrico alto o en direccin opuesta, dependiendo del grado de su polarizabilidad relativa al
medio de suspensin. Como la ltima depende
tambin de la frecuencia del campo elctrico,
esta direccin puede ser controlada y aprovechada en el experimento. La tcnica lleva el
nombre de dielectroforesis en el arreglo de con-
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Figura 3. La rotacin de una partcula suspendida se realiza con un arreglo de 4 contactos elctricos.
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3.1 DIELECTROFORESIS
En campos elctricos alternos, y referente a su distribucin en el espacio inhomogneo,
r se calcula
la fuerza promediada en tiempo < F > sobre una
partcula dielctrica por
r
< F >=
1
r
Re m E *
2
(2)
1
r r
E = E o e jw t , j = (- 1) 2
(3)
V Re{ Kw ( } ) Erms
(4)
K (w ) x = (
*
p
)/
*
m
+ (
*
p
*
m
) nx
(5)
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*
m
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Zehe A y col. Efectos electrocinticos de clulas biolgicas y partculas coloidales en la espectroscopia dielctrica MG
- j (s /
w )
(6)
< FDEP
esfera
= p 2 r 3 o
p r 2l
> cilindro =
o
3
*
m
Re
*
m
Re
*
p
*
p
-
+ 2
*
m
*
m
*
m
*
p
*
m
r
< T >=
(7)
(8)
(9)
m =
1
r r
Im[ m E]
2
*
m
V K (w ) E
*
m
(10)
V K r (w ) x + jK i (w ) x K r (w ) y + jK i (w ) y K r (w ) z + jK i (w ) z E
(11)
E y = jE x ; E *y = - jE x* ; E z =
(12)
En los casos prcticos, uno de los ejes principales del elipsoide siempre es vertical al plano
de campo, el componente k (sea x, y) del torque ser
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< T>
*
m
V E o2 K i (w ) x + K i (w ) y k (13)
22
experimenta una partcula. En la Figura 7 se puede apreciar, que el torque tiene un mximo (aqu)
en el rango de 10 megahertz, dependiendo
adems de la longitud del elipsoide, inducido
con s = 1 para una esfera de radius r, y extendiendo el eje paralelo al plano de campo por factores s = 2, 3, ... . Valores mayores de s = l / r
corresponden a una elipsoide larga con el mismo
radius r de la esfera. No solamente se detecta un
43
s=3
33
Re{K(w } )
r
s=2
23
13
s=1
3
0
s=10
-7
s=5
9
8
log (frecuencia/Hz)
90
S=5
80
s=1s=2 s=3
70
50
40
s=3
Im{K(w } )
60
30
s=1
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s=2
10
0
7
log (frecuencia/Hz)
Zehe A y col. Efectos electrocinticos de clulas biolgicas y partculas coloidales en la espectroscopia dielctrica MG
aumento del torque con la longitud l del elipsoide, sino tambin un corrimiento de su mximo
hacia frecuencias menores.
2.
3.
4. CONCLUSIONES
En general, los diferentes mtodos de espectroscopia dielctrica muestran tanto ventajas como
desventajas en su comparacin mutua. Los mtodos clsicos de suspensiones detectan propiedades de muchas partculas en un solo turno de
medicin y asumen un significado estadstico
mayor. Sin embargo, los sistemas biolgicos muchas veces son complejos en su composicin y
estructura geomtrica de las partculas involucradas. Los espectros dielctricos vs la frecuencia del
campo elctrico aplicado pueden contener mltiples procesos de relajamiento, y para una interpretacin correcta se requiere la identificacin de
cada uno de ellos. Interacciones entre las partculas y con los electrodos de la cmara de medicin frecuentemente dificultan este procedimiento. Un aspecto positivo ms de esta tcnica es su
potencial tambin para partculas sub-microscpicas, que en el caso de partculas singulares puede ser restringido al rango de partculas microscpicas. No obstante, resulta una ventaja clara de
los mtodos electrocinticos para el hecho, que
la geometra y las caractersticas estructurales de
las partculas bajo observacin son conocidas.
Como se ha visto en los dos ejemplos tratados
aqu, esto es un prerrequisito para el correcto
modelo geomtrico (factor de depolarizacin) y
la deduccin de las propiedades del objeto en
estudio. Los avances en la tecnologa microelectrnica referente a la transferencia de estructuras
finas sobre un sustrato a travs de la fotolitografa
ha dado lugar a cmaras de medicin con arreglos de microelectrodos altamente precisos. Una
desventaja mayor de los mtodos de partculas
singulares, a saber, el rango limitado de la conductividad del medio de suspensin y de la frecuencia, ha sido levantada. La descripcin de
efectos novedosos de dispersin al nivel de clulas singulares29 es uno de sus logros. Particularmente aprovecharn las tcnicas lab-on-a-chip efectos electrocinticos para un eficiente y confiable
diagnstico mdico
m2d3gr 1p(h)3c
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
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BIBLIOGRAFA
1. Pauly H, Schwan HP. ber die Impedanz einer Suspension
von kugelfrmigen Teilchen mit einer Schale. Z. Naturforsch. 14b: 125-131. (in German) 1959.
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