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Citometria de Flujo
La citometria de flujo (CMF) es una tcnica de anlisis celular
multiparametrico cuyo fundamento se basa en hacer pasar una suspensin de
partculas (generalmente clulas) alineadas y de una en una por delante de un
haz de lser focalizado. La citometra de flujo es una tecnologa (proceso) que
permite la medida simultnea de mltiples caractersticas fsicas de una sola
clula. Estas medidas son realizadas mientras las clulas (partculas) pasan en
fila, a una velocidad de 500 a 4000 clulas por segundo, a travs del aparato de
medida en una corriente de fluido (1).
Sistema optico
clula : Inmunofenotipo.
PARAMETROS
Caractersticas Morfolgicas de la
clula : tamao y complejidad del
citoplasma
Caractersticas antigenicas de la
PARAMETROS FISICOS
OBJETIVOS PRINCIPALES DE
LA CITOMETRIA DE FLUJO
Identificar y enumerar subpoblaciones celulares nicas y definidas.
Seleccionar y separar fsicamente subpoblaciones de clulas deseadas (por
defleccin electrosttica ; esta tecnologa de separacin se llama "electronic cell
sorting")
Medir capacidad funcional de subpoblaciones celulares definidas
COMO SE DETECTAN ESTAS CARACTERISTICAS
El citmetro de flujo detecta como las clulas interactan con un rayo lser
en trminos de cmo la clula :
desva la luz incidente (parmetros FSC y SSC)
emite fluorescencia (parmetros FL1. FL2. FL3)(1).
LAS PROPIEDADES DE DISPERSION DE LA LUZ UNA CELULA NOS DA
INFORMACION ACERCA DEL TAMAO CELULAR Y GRANULARIDAD
SEALES DE DISPERSION
Forward Scatter (FS) :luz dispersada frontalmente en ngulo cnico pequeo (0-10
grados ) coincidente con luz incidente y es proporcional a tamao de la partcula
que produce la dispersin.
La luz es desviada a bajos ngulos entre 1 y 10 grados
Generalmente proporcional al tamao celular
Detectada a lo largo del eje del rayo de luz incidente en direccin delantera
Side Scatter (SSC) : luz dispersada lateralmente es proporcional al la complejidad
de la estructura celular.
Luz es desviada a altos ngulos
Proporcional a la granularidad de la clula y su complejidad
Detectado a 90 grados del eje de luz incidente.
FLUORESCENCIA
INMUNOTIPIFICACIN
Es el proceso para determinar marcadores expresados en la superficie
celular.
Esta deteccin se hace empleando anticuerpos monoclonales antgeno-especficos
marcados con un fluorocromo dirigidos al marcardor que queremos evaluar.
Mtodo destructivo.
Incapacidad de visualizar las clulas que se analizan.