Laboratorio de Bioqumica General.

INSTITUTO POLITCNICO
NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS
BIOLGICAS.

CARRERA: INGENIERA BIOQUMICA

LABORATORIO DE BIOQUMICA GENERAL.
GRUPO: 3IV2
PROFESORES:
M. en C. OCTAVIO ALMAZN HERNNDEZ
Q.B.P. VICTOR HUGO PEAFORT SOTELO

EQUIPO NO. 2
SECCIN NO. 2
PRCTICA NO. 13
AISLAMIENTO DEL DNA PLASMDICO.

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

GARCA GONZLEZ PAOLA VIANEY.
LEAL CEDILLO MARA GUADALUPE.

FECHA DE ENTREGA: 23-mayo-2014.

Prctica No. 13 Aislamiento de DNA plasmdico.

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Prctica No. 13 AISLAMIENTO DEL DNA PLASMDICO.

INTRODUCCIN:

Los plsmidos son molculas de ADN extracromosmico circular o lineal que se replican y
transcriben independientes del ADN cromosmico. Estn presentes normalmente
en bacterias, y en algunas ocasiones en organismos eucariotas como las levaduras. Su
tamao vara desde 1 a 250 kb. El nmero de plsmidos puede variar, dependiendo de su
tipo, desde una sola copia hasta algunos cientos por clula.
Las molculas de ADN plasmdico, adoptan una conformacin tipo doble hlice al igual que
el ADN de loscromosomas, aunque, por definicin, se encuentran fuera de los mismos. Se
han encontrado plsmidos en casi todas las bacterias. A diferencia del ADN cromosomal,
los plsmidos no tienen protenas asociadas.
En general, no contienen informacin esencial, sino que confieren ventajas al hospedador
en condiciones de crecimiento determinadas. El ejemplo ms comn es el de los
plsmidos que contienen genes de resistencia a un determinado antibitico, de manera
que el plsmido nicamente supondr una ventaja en presencia de ese antibitico.
Hay algunos plsmidos integrativos, es decir, que tienen la capacidad de insertarse en el
cromosoma bacteriano. Estos rompen momentneamente el cromosoma y se sitan en su
interior, con lo cual, automticamente la maquinaria celular tambin reproduce el
plsmido. Cuando ese plsmido se ha insertado se les da el nombre de episoma.
Los plsmidos se utilizan como vectores de clonacin en ingeniera gentica por su
capacidad de reproducirse de manera independiente del ADN cromosomal as como
tambin porque es relativamente fcil manipularlos e insertar nuevas secuencias
genticas.
Los plsmidos usados en Ingeniera Gentica suelen contener uno o dos genes que les
confieren resistencia a antibiticos y permiten seleccionar clones recombinantes. Hay
otros mtodos de seleccin adems de la resistencia a antibiticos, como los basados en
fluorescencia o en protenas que destruyen las clulas sin uso de antibiticos. Estos
nuevos mtodos de seleccin de plsmidos son de uso frecuente en agrobiotecnologa,
debido a la fuerte crtica de grupos ecologistas contra la posibilidad de presencia de
antibiticos en los organismos modificados genticamente.
Los plsmidos sirven como una importante herramienta en laboratorios de gentica e
ingeniera bioqumica, donde son comnmente usados para multiplicar (hacer muchas
copias de) o como genes particulares expresos. Muchos plsmidos estn disponibles
comercialmente para dichos usos.
El gen a ser replicado se inserta en copias de un plsmido el cual contiene genes que
hacen clulas resistentes a un antibitico en particular. En el paso siguiente el plsmido es
insertado en la bacteria por medio de un proceso llamado transformacin. Luego, la
bacteria es expuesta a un antibitico particular. Solo la bacteria que toma copias del
plsmido sobrevive al antibitico debido a que el plsmido lo hace resistente. En
particular, los genes protectores son expresados (usados para hacer protena) y la
protena expresada evita la accin del antibitico. De esta forma, los antibiticos actan
como un filtro que seleccionan nicamente la bacteria modificada. Ahora, estas bacterias
pueden ser cultivadas en largas cantidades, cosechadas y el plsmido de inters puede
ser aislado.
Prctica No. 13 Aislamiento de DNA plasmdico.

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Otro uso importante de los plsmidos es fabricar grandes cantidades de protenas. En este
se deja crecer la bacteria que contiene el plsmido que encierra al gen de inters. Solo
como la bacteria produce la protena que le confiere si resistencia a los antibiticos, este
tambin puede ser usado para producir protenas en grandes cantidades desde el gen
insertado. Esta es una forma barata y fcil de producir genes o protenas que este codifica
de forma masiva, como por ejemplo insulina, o inclusive antibiticos.

OBJETIVO(S):

Obtener el DNA del plsmido pUC18.

Realizar una electroforesis en gel de agarosa del plsmido obtenido.
Discutir acerca de las formas moleculares obtenidas en el desarrollo experimental.

RESULTADOS:

En la siguiente imagen se observa la electroforesis realizada en un soporte de

agarosa y se ve el corrimiento del DNA plasmdico que obtuvimos.

INTERPRETACIN DE RESULTADOS:

Como se observ en la imagen el corrimiento fue avanzando conforme la sucesin de los

pozos, esto nos indica que en los ltimos pozos las molculas tenan menor peso
molecular. Tambin observamos que en los pozos se ve lneas, estas lneas, nos indican
que se encuentra DNA bacteriano.
Si nos ubicamos en el pozo penltimo y antepenltimo observaremos tres lneas
diferentes, la primera de esta ms gruesa que nos indica que se encuentra mayor DNA
Prctica No. 13 Aislamiento de DNA plasmdico.

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relajado, esto es, se rompi un de las dos cadenas y es por eso que se tiene un menor
corrimiento. La segunda lnea tiene un menor ancho de la mancha y esta mancha nos
indica que las dos cadenas se rompieron y que su corrimiento es intermedio. Por ltimo la
tercera mancha apenas es perceptible lo que indica que casi no hay DNA circular sper
enrollado compacto.
La mancha que se encuentra despus de lo descrito anteriormente es el barrido de RNA
que tiene mayor corrimiento ya que tiene menor peso molecular.

DISCUSIN(ES):

En sta prctica no se pudieron revelar nuestro plsmido obtenido por nosotros mismos y
para el anlisis de resultados se ocup una imagen del plsmido obtenido en semestres
anteriores.
De lo anterior se puede discutir que se
obtuvo un trabajo medianamente bueno, ya
que en mayor proporcin se obtuvo DNA
relajado y DNA superenrollado en menor
proporcin. Esto quiere decir que slo se
logr romper una de las cadenas de DNA y
es por eso que se obtuvo un corrimiento
intermedio.

CONCLUSIN(ES):

Del plsmido obtenido, la isoforma

que se obtuvo en mayor proporcin fue DNA relajado.
El DNA plasmdico de acuerdo a sus diferentes conformaciones puede correr a
diferentes velocidades en un gel durante la electroforesis.

PREGUNTA(S) EXTRA:

Estructura qumica del bromuro de etidio:

El bromuro de etidio (BrEt) es un agente intercalante usado comnmente como marcador

de cidos nucleicos en laboratorios de biologa molecular para procesos como
la electroforesis en gel de agarosa.

REFERENCIA(S) BIBLIOGRFICAS(S):

Pgina web:
http://es.wikipedia.org/wiki/Pl%C3%A1smido

Prctica No. 13 Aislamiento de DNA plasmdico.

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