RECUENTO DE BACTERIAS HETERTROFAS

INTRODUCCIN
Bacterias hetertrofas son aqullas que necesitan materia orgnica como
fuente de energa, al contrario de las bacterias auttrofas.
El recuento de bacterias hetertrofas proporciona un recuento aproximado
del nmero total de bacterias viables, lo que suministra valiosa informacin sobre
la calidad del agua y puede aportar datos que respalden el significado atribuido a
los resultados de los anlisis de coliformes.
El recuento hetertrofo en placa es til para valorar la eficacia de los distintos
procesos de tratamiento y puede tener una importante aplicacin como anlisis del
control dentro de una planta depuradora. Tambin es til para controlar la calidad
final del agua de un sistema de distribucin, como indicador del recrecimiento de
microorganismos y de la acumulacin de sedimento en secciones de circulacin
lenta y en extremos muertos. Tambin permite comprobar si el transporte del agua
ha sido correcto.
Frecuentemente las muestras que hay que estudiar tienen un nmero muy
elevado de microorganismos, por lo que se requiere diluirlas para poder contarlos.
Para ello se realizan diluciones seriadas, que posteriormente se siembran en
placas con medios de cultivo.
Existen varios mtodos, con medios de cultivos diferentes, segn las
caractersticas de los microorganismos y del medio a examinar.
La ley de aguas estipula que para realizar el recuento de hetertrofos hay
que contabilizar las colonias que se forman de una clula aislada y se denomina
UFC.
Se usa temperaturas de 37 para determinar patgenos y de 25 para
determinar bacterias ambientales.
Segn INDECOPI para el Recuento de Hetertrofos en placa de acuerdo con
la

Metodologa:

SMEWW-APHA AWWA-WEF.Part

9215

B,

22

nd

Ed.

2012.Heterotrophic Plate Count.Pour Plate Method; el parmetro es dado por el

Ministerio de Salud en el D.S. N 031-2010-MINSA que es de 500 UFC/ml a 35C.
OBJETIVOS

Conocer el procedimiento de recuento de bacterias hetertrofas mediante el

mtodo de la placa fluida.

Conocer el nmero de bacterias hetertrofas en una muestra de agua.

Determinar la calidad sanitaria del agua.

I. FUNDAMENTO
Las bacterias heterotrficas (hetertrofas) se definen como aquellas
bacterias que usan compuestos del carbono orgnico como fuente de energa y
el carbono para su crecimiento, en contraposicin con las bacterias autotrficas
que utilizan los compuestos inorgnicos como fuente de energa y el C0 2, como
fuente de carbono. Esta definicin de bacteria hetertrofa es amplia e incluye
tanto a las bacterias saprofticas como a las patgenas. Por lo tanto, tanto las
bacterias que causan como las que no causan enfermedades son hetertrofas.
Los medios para el recuento heterotrfico en placas (RHP) empleados para
enumerar los hetertrofos encontrados en el agua se consideran medios no
selectivos porque no tienen compuestos inhibitorios ni selectivos para un
determinado grupo de bacterias. Las condiciones de incubacin, incluida la
temperatura, pueden ser selectivas y por consiguiente tales condiciones deben
estar especificadas para las bacterias particulares que se procura detectar o
enumerar.
El RHP es un procedimiento sencillo que se puede realizar por el mtodo de
placa fluida, difusa o filtracin por membrana (FM) y es una herramienta muy til.
Aunque no es esencial para evaluar la seguridad del agua potable, los resultados
del RHP proporcionan informacin que complementa los resultados de los
coliformes totales.

El RHP se puede usar para indicar la composicin bacteriana general del

agua de la fuente y la eficacia y eficiencia de los procesos de tratamiento del
agua, como la sedimentacin, coagulacin, filtracin y cloracin. El monitoreo del
RHP en el agua distribuida puede proporcionar informacin sobre la limpieza del
sistema de distribucin, desarrollo de bacterias despus del tratamiento, efectos
de los cambios de temperatura en el agua y del cloro residual en la poblacin
bacteriana.
Mtodo de placa fluida (MPF).- Este mtodo para el anlisis del RHP de las
muestras de agua presenta algunas desventajas que limitan la recuperacin de
las bacterias. Como usa agar licuado a una temperatura de 44 a 46 C, las
bacterias en la muestra de agua estn expuestas a la presin del calor, lo cual
puede hacer que los microorganismos no sean viables. Adems, como se
emplea un medio rico en nutrientes, es probable que las bacterias
fisiolgicamente estresadas o daadas no se desarrollen debido a alguna forma
de inhibicin metablica. Tanto la presin del calor como el medio de crecimiento
rico producen una recuperacin reducida de las bacterias. Otra desventaja es
que mediante este mtodo slo se puede analizar un mximo de 1,0 ml de
muestra.
II. MATERIALES
Muestras:
o M. 3: Agua de pozo.
o M. 4: Agua de grifo 1.
Pipetas de 1 ml 10 ml
Placas
Frascos
Botellas
Agar Plate Count
III. PROCEDIMIENTOS
Mtodo de placa fluida
1 Homogenizar la muestra (agitar 25 veces la muestra de agua antes de verter
en placa)

2 Con una pipeta estril aplicar la cantidad de

muestra respectiva para cada dilucin.
Para la dilucin 100 y 10-1 se toma 1 ml y 0.1 ml respectivamente de la
muestra original y se vierte en placa e inmediatamente se le agrega el
agar (Agar Plate Count) diluido.
Para la dilucin 10-2 y 10-3, se diluye 1 ml de muestra en 49.5 ml de
diluyente.

De la dilucin se toma 1 ml y 0.1 ml para tener las diluciones 10 -2 y 10-3

respectivamente y se vierten en placas y se agrega inmediatamente el
agar diluido.

3 Mover las placas homogneamente para que la muestra se extienda por toda
la placa. Luego dejar que se solidifique el medio e Incubar.

Temperatura ambiente

35C
24 a 48 horas.

Luego se midi el pH de la muestra de agua.

IV. RESULTADOS
Para el recuento se toma las placas cuyo nmero de colonias este en entre 30300 y se multiplica por el factor de dilucin.
MUESTRA N

Temperatu
ra
Ambiente

Conteo:
100: + 300 colonias

10-1: +300 colonias

10-2: 280 colonias

10-3: 253 colonias

Temperatu
ra a 35C

Conteo:
100: +300 colonias

10-1: + 300 colonias

10-2: 99 colonias

MUESTRA N
Temperatu
ra
Ambiente

10-3: 26 colonias

Conteo:
100: 225 colonias

10-1: 174 colonias

10-2: 110 colonias.

10-3: 62 colonias

Temperatu
ra a 35C

Conteo:
100: + 300 colonias

pH:
8

10-1: 46 colonias

10-2: 11 colonias

10-3: 9 colonias

Recuento= (t. Ambiente + t.35C) UFC/ml

TABLAS DE RESULTADOS
MUESTRA N 3
100
10-1
10-2
10-3

T. AMBIENTE
+300 UFC
+ 300 UFC
99 UFC
26 UFC

T. 35C
+ 300 UFC
+ 300 UFC
280 UFC
253 UFC

PROM. UFC
189.5 UFC
139.5 UFC

UFC/ml
19 x 104
14 x 105

Recuento: 165 UFC/ml

MUESTRA N 4
0

10
10-1
10-2
10-3

T. AMBIENTE
225 UFC
174 UFC
110 UFC
62 UFC

T. 35C
+ 300 UFC
46 UFC
11 UFC
9 UFC

PROM. UFC
60.5 UFC
35.5 UFC

UFC/ml
61 x 103
36 x 104

Recuento: 48 UFC/ml

V. INTERPRETACON
La muestra N 3 presenta 165 UFC/ml. Esta dentro del rango establecido
por el MINSA.
La muestra N 4 presenta 48 UFC/ml. Esta dentro del rango establecido por
el MINSA.

Rango MINSA: <500 UFC/ml

VI. CONCLUSIONES
Se logr determinar la presencia de hetertrofos en el agua.

 Se logr determinar la calidad higinica del agua la cual es apta para el

consumo humano.
Se logr determinar la alcalinidad en la que se encontraba la muestra de
agua.

VII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA:

Madigan, M., J. Martinko y J. Parker, BROCK BIOLOGIA DE LOS

MICROOORGANISMOS-8va Edicin-Ed. Prentice May-1064pp.

Donald J. Reasoner, Ph.D. Recuento heterotrfico en placas Divisin de

Contaminantes Microbiolgicos, WSWRD, NRMRL Agencia de Proteccin
Ambiental de los Estados Unidos Cincinnati, Ohio 45268. Tomada el 12 de
junio del 2015 de
http://www.bvsde.paho.org/bvsala/e/fulltext/recuento/recuento.pdf.

http://www.digesa.minsa.gob.pe/publicaciones/descargas/reglamento_calida
d_agua.pdf