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QUÍMICA ORGÁNICA
(CIENCIAS BIOLÓGICAS)
Guía de Laboratorio
(Parte B)
2º Cuatrimestre 2015
PROGRAMA
1- Estructura y propiedades de los compuestos orgánicos:
Uniones químicas. Orbitales del carbono en los compuestos orgánicos. Hibridación. Forma de las
moléculas orgánicas. Longitud, ángulo y energía de enlace. Grupos funcionales. Nomenclatura.
Isomería. Isómeros de cadena.
2- Estereoquímica:
Isómeros geométricos e isómeros ópticos. Actividad óptica. Quiralidad. Enantiómeros y
diasterómeros. Configuración relativa y absoluta. Nomenclatura de Cahn, Ingold y Prelog.
Proyecciones de Fischer, de caballete y de Newman. Mezclas racémicas. Resolución química y
enzimática. Cicloalcanos. Isómeros conformacionales.
4- Espectroscopía:
Espectroscopía de infrarrojo (I.R.): utilidad para identificar grupos funcionales. Espectroscopía de
ultravioleta (U.V.) y visible. Cromóforos y auxócromos. Sustancias coloreadas y colorantes.
Nociones de espectroscopía de resonancia magnética nuclear protónica (R.M.N.-1H)
5- Hidratos de carbono:
a) Monosacáridos: Propiedades generales. Estructura hemiacetálica. Glicósidos. Mutarrotación.
Anómeros. Estereoisomería. Estructuras de Fischer, de Haworth y conformacionales.
Aminoazúcares. Desoxiazúcares.
b) Disacáridos: Maltosa, celobiosa, lactosa, sacarosa. Determinación de su estructura. Propiedades.
c) Polisacáridos: Clasificación. Almidón y celulosa. Propiedades.
6- Lípidos:
Ácidos grasos. Triglicéridos. Grasas y aceites. Índices. Saponificación. Reacciones de
caracterización. Jabones y detergentes. Fosfolípidos: lecitinas y cefalinas. Cerebrósidos,
glicolípidos. Estructura y propiedades.
8) Compuestos heterocíclicos:
Heterociclos con N, O y S de cinco y seis miembros. Pirrol. Furano. Tiofeno. Reacciones y
propiedades. Porfina y porfirinas. Hemoglobina, clorofila, vitamina B12. Piridina. Reacciones y
propiedades. Quinolina. Nicotina y piridoxina. Indol. Triptofano y escatol. Pirimidina. Uracilo,
citosina y timina. Purinas. Adenina y guanina.
9) Ácidos nucleicos:
Nucleósidos y nucleótidos. Estructura.
RÉGIMEN DE APROBACIÓN
El curso de Química Orgánica para los alumnos de la carrera de Ciencias Biológicas, se dictará en
dos cuatrimestres. En el primero (parte A) se desarrollarán los conceptos básicos de la Química
Orgánica y los correspondientes a la Química de los Productos Naturales; esto se realizará a través de
clases teóricas (4 hs. semanales) y de clases de problemas (4 hs. semanales) de asistencia no
obligatoria. En el segundo cuatrimestre (parte B) se llevarán a cabo los trabajos prácticos de
laboratorio (7 hs. semanales) de asistencia obligatoria.
SISTEMA DE EVALUACIÓN
Parte A: Se tomarán dos exámenes parciales sobre los temas desarrollados en las clases teóricas y de
problemas. La aprobación de cada parcial requerirá un mínimo de 50 puntos. Los parciales no
aprobados podrán recuperarse en un mismo día, al final del cuatrimestre, siempre que la suma de las
notas obtenidas en ambos parciales sea igual o mayor a 50 puntos. El ausente será considerado 0
(cero). Las recuperaciones se aprueban con 60 puntos. No se tendrán en cuenta certificados médicos.
El alumno que apruebe la parte A estará en condiciones de cursar la parte B el siguiente cuatrimestre.
Parte B: Deberán aprobarse los parciales y el laboratorio (ver más abajo). Se tomarán dos
exámenes parciales sobre las prácticas realizadas en el laboratorio. La aprobación de cada parcial
requerirá un mínimo de 55 puntos. Los parciales no aprobados podrán recuperarse al final del
cuatrimestre, siempre que la suma de las notas obtenidas en ambos parciales sea igual o mayor a 55
puntos. El ausente será considerado 0 (cero). Las recuperaciones se aprueban con 60 puntos. Sólo se
tendrán en cuenta certificados médicos emitidos por instituciones públicas.
APROBACION DE LA MATERIA
Promoción: Los alumnos que en ambos exámenes parciales de la parte A obtengan un puntaje igual ó
mayor a 75 puntos y en ambos parciales de la parte B un puntaje igual o mayor a 60 puntos, aprueban
la materia sin rendir examen final.
Firma de Trabajos Prácticos: Los alumnos que aprueben los exámenes parciales y el laboratorio y
no estén comprendidos en la promoción, firmarán los trabajos prácticos y deberán rendir examen
final.
Aprobación de laboratorio: Esto implica aprobar todas las prácticas, para lo cual se requiere:
i) la realización satisfactoria de la misma, a juicio del jefe de trabajos prácticos;
ii) aprobación de los interrogatorios respectivos (escritos)
iii) aprobación del informe correspondiente
INFORMES:
En los informes deberá constar:
a - nombre/s de el/los alumno/s que realizaron la práctica;
b - trabajo realizado: no transcriba lo que figura en la guía, describa todo lo hecho que no
sea según las instrucciones o no figure en ellas, por ejemplo modificaciones de reactivos
o volúmenes, solventes empleados, tiempos y temperaturas, etc. etc.
c - resultados esperados (teóricamente)
d - resultados obtenidos experimentalmente
e - explicación de las diferencias - si es que existen - entre c y d
f - observaciones y comentarios sobre el trabajo realizado
g - datos físicos y toxicológicos de las sustancias empleadas
h - todas las preguntas que forman parte de cada práctica (no se refiere al cuestionario)
Nota: se debe tener en cuenta que entregar el informe no significa que haya sido aprobado.
Ejemplos:
Parte B: 1º parcial 2º parcial
55 55 Aprueba la parte B
54 55 Recupera 1º parcial
55 54 recupera 2º parcial
Las recuperaciones se aprueban con 60 puntos.
Promoción: podrán acceder a la promoción aquellos alumnos que, sin haber recuperado
ningún parcial, hayan obtenido las siguientes notas como mínimo:
1º parcial 2º parcial
Parte A 75 75
Parte B 60 60
IMPORTANTE
Es requisito indispensable para realizar las prácticas, el saber y entender todos los temas
involucrados (a tal fin se tomarán interrogatorios orales y/o escritos). Como ayuda y ejemplo no
excluyente se ha agregado a cada Guía de T.P. un cuestionario con preguntas y problemas típicos.
BIBLIOGRAFIA
NORMAS DE SEGURIDAD
Los incendios provocados por causas eléctricas son muy frecuentes. Ellos ocurren por:
• sobrecalentamiento de cables o equipos bajo tensión debido a sobrecarga de los conductores.
• sobrecalentamiento debido a fallas en termostatos o fallas en equipos de corte de temperatura.
• fugas debidas a fallas de aislación.
• autoignición debido a sobrecalentamiento de materiales inflamables ubicados demasiado
cerca o dentro de equipos bajo tensión, cuando en operación normal pueden llegar a estar
calientes.
• ignición de materiales inflamables por chispas o arco.
Shock Eléctrico
Un shock eléctrico puede causar desde una sensación de cosquilleo hasta una desagradable estímulo
doloroso resultado de una perdida total del control muscular y llegar a la muerte.
Los mecanismos de muerte por electricidad son:
1. Fibrilación ventricular; es el más riesgoso ya que a menos que se disponga de un
desfibrilador o se esté en un centro médico se trata de un acontecimiento espontáneo
irreversible provocando la muerte.
2. Tetanización: produciendo la contracción de los músculos estriados de las extremidades
haciendo que la victima quede prendida al conductor.
3. Doble acción: de tetanización y fibrilación.
4. Parálisis bulbar, cardiocirculatorio y respiratorio.
Los factores que se deben tener en cuenta para evitar accidentes son:
La Intensidad de la corriente:
El umbral mínimo de percepción es 1.1 mA con Corriente Alternada.
El umbral mínimo dc contracción muscular se produce con 9 mA pudiendo ocurrir
contracción de los músculos que ocasiona la proyección del accidentado lejos del conductor y
cuando no sea asi se puede Ilegar a la asfixia por contracción de los músculos respiratorios.
El umbral de corriente peligroso es de 80 mA en Corriente Alternada de 50 ciclos, donde ya
se puede llegar a la fibrilación ventricular .
El umbral de corriente que pueden causar depresión del Sistema Nervioso Central ocurre con
corriente de 3 ó 4 A.
Asi según la intensidad y su acción sobre el organismo se clasifica:
Tiempo de contacto.
El corazón no puede producir la fibrilación a menos que el tiempo de contacto sea como mínimo del
orden de un periodo cardíaco en valor medio 0,75 seg. O sea que a tiempos de contactos menores no
se produce la fibrilación.
Esto es muy importante desde el punto de vista de la protección de los disyuntores diferenciales, ya
que el corte de la corriente se produce en tiempos de aproximadamente 200 mil segundos o sea que no
se puede llegar a que atraviesen el organismo corrientes peligrosas.
Este es un recordatorio para estudiantes y cualquier persona que trabaje en el laboratorio acerca de los
criterios de seguridad que se deben contemplar
• Asegúrese que su fuente y su circuito de alta tensión estén adecuadamente puestos a tierra
(verifique la tierra usada y que las conexiones sean firmes).
• NUNCA toque un cable de alta tensión o cualquier parte que haya sido conectada a una
fuente de alta tensión sin haber antes cortocicuitado a tierra AL MENOS DOS VECES dicho
elemento, con una -barra a tierra-. Para este propósito el laboratorio debe tener una barra con
aislación para ser usada con alta tensión. El procedimiento a seguir en este caso es: Fijar
mecánicamente el cable de la barra a una buena tierra y luego tocar el elemento que pudiera
estar a alta tensión con el extremo aislado de la barra.
• Ud debe suponer SIEMPRE que todos los condensadores ESTAN CARGADOS. Siempre
cortocircuite con la barra de tierra todos los condensadores antes de tocarlos.
• LA DESCARGA DE UN CONDENSADOR DE ALTA TENSION PUEDE SER LETAL
AUN SI NO HA ESTADO CONECTADO A UNA FUENTE DE ALTA TENSION POR
VARIOS DIAS.
• Las fuentes de alta tensión de su experimento pueden tener condensadores que pernanecen
cargados aún si la fuente ha sido apagada. Una descarga de tal condensador puede ser
LETAL. Utilice la barra de tierra antes de tocar la salida de la fuente.
• Cubra todas las conexiones de alta tensión para evitar contactos accidentales con las mismas.
• Coloque carteles "PELIGRO, ALTA TENSlÓN" en todo experimento o conexión que lo
requiera.
• Asegúrese que el piso o la mesa de trabajo no estén mojados cuando trabaja con alta tensión.
• Use cables de especificaciones adecuadas para alta tensión.
• Asegúrese de apagar las fuentes de alta tensión cuando no está controlando personalmente su
experimento.
• Las descargas rápidas de alta tensión emiten ruido electromagnético que pueden alterar el
funcionamiento de marcapasos.
• La tensión de Línea también es potencialmente peligrosa, ya que con más de 80 V el cuerpo
humano admite una corriente capaz de producir paro cardíaco.
• Controle la calidad de la tierra de su circuito antes de conectarlo.
• Por norma de seguridad todos los equipos tienen su correspondiente conexión a tierra.
Controle la calidad de este contacto cuando va a usar un equipo no comercial.
• Tenga especial cuidado al conectar un autotransformador o variac. El borne común de este
dispositivo debe estar conectado al neutro de la línea. Sea consiente que en este caso los
contactos del enchufe no son equivalentes.
• En el laboratorio muy frecuentemente se usan adaptadores de enchufes. Tenga siempre en
cuenta que cuando se usan estos aditamentos puede desconectarse la tierra del equipo que está
usando
• Disponga de las medidas de seguridad adecuadas para los gases tóxicos, (Esto incluye las
salidas de los bombas de vacío).
• No presurice en exceso recipientes que pueden explotar. Recuerde la presión en un recipiente
puede aumentar en un experimento por ejemplo con el aumento de la temperatura.
• No arroje residuos químicos al desagüe. Verifique con quien corresponda el procedimiento
adecuado para su desecho.
• Si utiliza lentes de contacto, el riesgo a los ojos es mayor pues los gases son ocluidos detrás
de las lentes. Utilice siempre antiparras protectoras.
• Cuando manipule líquidos criogénicos utilice siempre termos adecuados para este fin. Los
termos comunes con cobertura plástica no son adecuados y pueden explotar produciendo
graves accidentes.
• Nunca abrir la válvula de un tubo de alta presión que no tiene conectada una válvula
reguladora y los correspondientes manómetros.
• En el manejo de líquidos criogénicos, recordar que el aire liquido tiene un alto porcentaje de
oxigeno liquido, y que el nitrógeno liquido se enriquece de oxigeno a menos que este aislado
del ambiente por medio de una válvula que deja salir vapor de nitrógeno cuando la presión del
termo supero un cierto umbral por encima de presión atmosférica. El oxigeno liquido es un
excelente comburente de modo que no debe ponerse en contacto con elementos combustibles
y posibles chispas.
En esta categoría se incluyen fuentes radioactivas y rayos X. De manejar habitualmente estas fuentes
es imprescindible leer las medidas de seguridad indicadas en los respectivos manuales así como los
manuales de seguridad correspondientes. La exposición a este tipo de radiaciones no es dolorosa. Pero
es letal. Es importante que extreme las precauciones tanto para su seguridad como la de sus
compañeros, vecinos o transeúntes circunstanciales. Le recordamos algunas medidas elementales.
• Si trabaja habitualmente con fuentes de radiación ionizantes, solicite su dosímetro personal y
haga controles periódicos.
• Asegúrese que el recinto en que se encuentra la fuente está correctamente blindado.
• Deben haber carteles indicando el tipo de radiación y advirtiendo si hay peligro.
• No permanezca en el recinto mas tiempo que el necesario para controlar el experimento.
• No deje el recinto con la fuente encendida, asegúrese que ninguna persona ingrese
inadvertidamente al mismo y que las señales indicando "Fuente encendida" son claramente
visibles.
• Los cuidados deben extremarse en caso de mujeres en su período de embarazo. El feto es más
sensible durante los primeros tres meses de embarazo, por lo tanto evite la exposición a
radiaciones ionizantes si planea quedar embarazada.
• Las descargas de alta tensión emiten rayos X. Tome las precauciones correspondientes.
• Como con cualquier radiación no visible, extreme las precauciones. El sentido común es
fundamental.
Los láseres están clasificados en 6 categorías de seguridad según su peligrosidad entre la clase I y
clase IV. La clase I es considerada no peligrosa. La clase IV produce daños en los ojos y piel aún en
exposiciones de luz dispersada.
• .Verifique la etiqueta de clasificación que tiene el láser que utiliza.
• Use siempre antiparras de seguridad.
• Evite usar objetos metálicos (relojes, anillos) que puedan producir una reflexión directa del
haz.
Las heridas deberán lavarse con agua y jabón (Espadol). Si hay cuerpos extraños, grasa u otras
suciedades, éstos deberán quitarse previamente con gasa estéril, no con algodón.
Si la herida es superficial se podrá aplicar un antiséptico (Pervinox) y se cubrirá con un apósito y un
vendaje si fuera necesario.
Lavar con abundante agua destilada o solución fisiológica, levantando el párpado superior e inferior y
permitiendo que fluya la solución de lavado en la superficie del ojo. No usar pomadas ni antisépticos
comunes. Cubrir el ojo con gasa estéril. Trasladar de inmediato al lesionado a un centro asistencial
especializado.
Atención de quemaduras.
En quemaduras leves deberá colocar la zona afectada en un baño de agua con cubos de hielo, con lo
que disminuirá el dolor y bajará la temperatura. Luego secar y aplicar una gasa de Pancután sobre la
zona a tratar cubriendo con vendaje liviano no compresivo (de sostén).
Cambiar el vendaje exterior una o dos veces por día, retirando la gasa de Pancután una vez que ésta se
desprenda espontáneamente. En caso de quemaduras más severas consultar inmediatamente al
médico.
Cuando la quemadura se produjera por salpicadura o derrame de un producto químico, lavar con
abundante cantidad de agua y luego tratar como quemadura común.
Atención de hemorragias.
En caso de hemorragia en un miembro elévelo más alto que el resto del cuerpo.
Puede actuar:
Por compresión directa sobre la herida (con apósito o pañuelo)
Por presión indirecta sobre los puntos de presión con un lazo hemostático simple.
PRECAUCIONES EN EL LABORATORIO
6. Al mezclar o calentar sustancias evite que la boca del recipiente esté dirigida hacia el rostro
10. Cuide que las uniones esmeriladas estén limpias. Es conveniente cargar los balones con un
embudo (líquidos) o proteger el esmerilado con papel satinado (sólidos).
11. Cuando deba desmenuzar o despegar sustancias del fondo de un recipiente de vidrio, use
una espátula flexible (no una varilla de vidrio), apoyando el recipiente sobre la mesada.
12. Cuando deba introducir un tubo de vidrio en un tapón, tome el tubo con un repasador cerca
del tapón. No presione los tubos acodados cerca del sitio doblado.
13. Use soportes que se apoyen bien en la mesa y controle especialmente los aparatos con
centro de gravedad alto.
14. Retire los capilares usados de los baños de punto de fusión. Nunca enfríe con agua los
baños de punto de fusión.
15. Evite que caigan papeles, vidrios y todo tipo de material en las piletas.
CORTADURAS
Lavar la herida con abundante agua. Si han quedado trozos de vidrio (cortaduras más
frecuentes) retirarlos con cuidado y dejar salir un poco de sangre. Lavar y desinfectar con agua
oxigenada de 10 volúmenes (o alcohol) y cubrir la herida con un apósito protector (o vendas,
colocando previamente sulfatiazol en la zona afectada).
No volver a trabajar sin haber protegido la herida. Si mana abundante sangre puede deberse a
un corte en vena o arteria, en tal caso aplicar un torniquete por encima de la herida y llamar a un
médico.
QUEMADURAS
Lavar con mucha agua y hielo. En caso de quemadura severa concurrir inmediatamente al
Instituto del Quemado.
FUEGO
En el laboratorio:
No arrojar agua. Lo más indicado es el uso de extinguidores de anhídrido carbónico (deben
dirigirse primero al borde de la zona en llamas y luego al centro) y arena. Cerrar las llaves de gas más
próximas y retirar las botellas con solventes inflamables.
En las ropas:
NO CORRA. Arrójese al suelo y gire sobre sí mismo, con esto se consigue sofocar las llamas
y proteger la cabeza. Ayude al accidentado cubriéndolo con una manta no inflamable o con sacos (no
usar telas de material sintético).
En caso de quemaduras con agentes químicos lo primero que debe hacerse es lavar con
abundante agua, a menos que específicamente se indique otra cosa. El paso siguiente será:
ACIDOS: lavar con solución saturada o pasta de bicarbonato de sodio y luego con abundante
agua.
BASES: lavar con ácido acético 4% o con ácido bórico.
Eliminar el bromo lavando con agua, luego tratar la quemadura con solución saturada de
tiosulfato de sodio, lavar con agua y poner un aceite suavizante.
Lavar con agua, quitar lo que quede de fenol con glicerina o etanol. No aplicar ungüentos
grasos.
Lavar la parte externa del ojo con abundante agua, luego abrir el ojo y lavar primero con agua y
luego con solución de bicarbonato de sodio 1% si se trata de un ácido o con solución 1% de ácido
bórico si se trata de una base. Ayudarse con un vasito ocular en los lavados.
EMETICOS:
EN CASO DE ACCIDENTES
Bomberos 100
CUESTIONARIO:
- ¿Qué debe hacer si le salpica una solución concentrada de H2SO4 en el ojo? ¿Cómo debería haber
evitado ese accidente?
- ¿Cómo se extinguen los fuegos causados por líquidos inflamables como grasas, pinturas, ceras,
solventes (como éter etílico)?
- ¿Cómo procedería en el caso de trabajar con una mezcla de acetona-metanol como solvente que
eventualmente debe calentarse?
Entrega de cajones: la semana previa al inicio de clases se realizará la entrega de cajones, cada
cajón contiene el material necesario para la realización de las prácticas de laboratorio. La fecha y hora
será indicada en la página de la materia y en la cartelera correspondiente. Cada cajón será compartido
hasta por tres turnos, por lo que es necesario que el día de la entrega cada alumno traiga un candado
con 3 (tres) llaves a fin de que todos los alumnos que lo comparten puedan utilizarlo al inicio de
clases y tengan acceso al material. Al final del cuatrimestre se fijará una fecha para la devolución de
los cajones, que deberán estar en iguales condiciones que en las que fueron recibidos.
1. Trípode de hierro........................................................................................................................ 1
2. Agarradera de hierro s/nuez 1 mín 23 cm de ancho mord. 25-30............................................. 3
3. Nueces de hierro o bronce plancha de espesor mín. 4 mm.................................................... 4
4. Anillo de hierro s/nuez................................................................................................................ 1
5. Mecheros de Bunsen.................................................................................................................. 2
6. Telas metálicas de 15 x 15 cm.................................................................................................... 2
7. Gradilla de madera para 12 tubos de ensayo de 16 x 150 mm.................................................. 1
8. Escobilla para tubos de ensayo D.E. 25 mm.............................................................................. 1
9. Pinza de madera largo 20 cm..................................................................................................... 2
10. Tubos de goma D.I. 9 mm. D.E. 12 mm. largo mín. 80 cm. ..................................................... 3
11. Tubos de ensayo Pyrex C.R. de 25 x 150 mm. con borde y zona para marcar......................... 2
12. Tubos de ensayo Pyrex C.R. de 16 x 150 mm. con borde y zona para marcar....................... 10
13. Tubos de ensayo Pyrex C.R. de 13 x 100 mm. con borde ....................................................... 10
14. Balón Pyrex de 250-300 ml. c/esmeril 24/40 seg. Cat. Rigolleau nº 4320................................ 1
15. Balón Pyrex de 100-125 ml. c/esmeril 24/40 seg. Cat. Rigolleau nº 4320................................. 1
16. Vaso de precipitados Pyrex de 500 ml....................................................................................... 1
17. Vaso de precipitados Pyrex de 250 ml........................................................................................ 2
18. Vaso de precipitados Pyrex de 100 ml........................................................................................ 2
19. Erlenmeyer Pyrex de 250 ml....................................................................................................... 2
20. Ampolla de decant. Pyrex 250 ml., robinete teflon tapa plástica 19/21 o 16/18 vást.9 cm......... 1
21. Embudo común D.E. 6-8 cm. vástago mín. 6 cm........................................................................ 1
22. Probeta graduada de 100 ml....................................................................................................... 1
23. Probeta graduada de 100 ml....................................................................................................... 1
24. Pipeta graduada de 10 ml........................................................................................................... 1
25. Pipeta graduada de 5 ml............................................................................................................. 1
26. Pipeta graduada de 1 ml............................................................................................................. 1
27. Tubo kitasato Pyrex según modelo............................................................................................. 1
28. Alargadera de destilación Pyrex esm. 24/40 según modelo....................................................... 1
29. Refrigerante Liebig Pyrex camisa 30/40 cm. esm 24/40 (R.2400).............................................. 1
30. Cabezal de destilación Pyrex esm 24/40 según modelo............................................................. 1
31. Embudo Büchner de porcelana GUNTHER 140/56.................................................................... 1
32. Embudo Hirsch de porcelana GUNTHER 144/12....................................................................... 1
33. Kitasato Pyrex 250 ml................................................................................................................. 1
34. Varillas de vidrio.......................................................................................................................... 2
35. Termómetro (indicar graduación)................................................................................................ 1
36. Portaobjetos................................................................................................................................ 6
37. Vidrio de reloj.............................................................................................................................. 1
Nota importante: se aceptará únicamente el material con las especificaciones detalladas anteriormente.
Cualquier diferencia en cuanto a: medidas, marca o calidad se deberá indicar al dorso de esta planilla en el
momento de recibir el material.
- Cuaderno de anotaciones.
- Espátula.
- Plato poroso
- Tijera
- Fósforos
- Tetina de goma o látex.
- Repasador.
- Trozos de neumático (cámara de auto)
- Detergente.
- Candado con 3 llaves
- Tapones de goma de varias medidas
- Tapones de corcho de varias medidas
- Tela adhesiva o lápiz marcador (de tinta no soluble en agua)
- Algodón
- Frascos de distintos tamaños, con tapa
- Etanol 500 ml
- Papel de aluminio, tornasol, pH.
- Anteojos de seguridad.
- Recipientes de vidrio con tapa, chicos (mínimo 3) (son útiles por su tamaño, los de
extracto de tomate) para efectuar cromatografías en microplacas.
- Pipetas Pasteur 5
- Guantes descartables de látex.
- Rollo de papel de cocina.
TRABAJO PRÁCTICO Nº 1
DESTILACIÓN DE LÍQUIDOS TOTALMENTE MISCIBLES.
1.-Objetivos
b) Antes de empezar a destilar, pida a un docente que revise el correcto armado del
aparato.
c) Al comenzar la ebullición regule la llama de modo de establecer una velocidad de destilación de
una gota por segundo. Recoja el destilado en una probeta graduada, midiendo la temperatura de
destilación al recoger las primeras gotas y luego cada 5 ml de destilado. Con estos datos construya
la curva de destilación (temperatura versus ml de destilado), y complete la tabla. Es muy
importante que mantenga constante la velocidad de destilación durante toda la experiencia para lo
cual será necesario ir aumentando progresivamente el tamaño de la llama.
No deje llegar a sequedad el balón y determine el volumen de residuo que queda en el mismo.
2.2.-Destilación Fraccionada.
d) Arme el aparato adecuado (figura 2). Destile 100 ml de mezcla agregando nuevamente material
poroso.
e) Antes de empezar, pida a un docente que revise el correcto armado del aparato.
f) Comience la destilación regulando siempre la llama. Recoja el destilado en una probeta
graduada cuidando de mantener la misma velocidad de destilación durante toda la experiencia.
Mida la temperatura de destilación al recoger las primeras gotas y luego cada 5 ml de destilado.
Construya la curva correspondiente a esta destilación en el mismo gráfico donde hizo la curva de
destilación simple. Termine de completar la siguiente tabla.
g) Presente los gráficos de temperatura versus mililitros junto con la tabla, y conteste los siguientes
puntos en el informe.
1- Explique las diferencias observables en el gráfico y en la Tabla entre ambas destilaciones.
Figura 2: Modificación para aparato de destilación fraccionada con columna Vigreaux y esquema de
columna rellena para destilación fraccionada.
3.-CUESTIONARIO.
1) a) Enuncie la ley de Raoult. Defina sistema ideal y no ideal de líquidos miscibles. ¿Cuál es el caso
general de desviación de la ley de Raoult observado en mezclas líquidas orgánicas?
b) Dibuje diagramas de presión de vapor versus composición para sistemas binarios: i- ideales; ii-
con desviación positiva de la ley de Raoult; iii- con desviación negativa de la ley de Raoult.
2) a) Indique en un diagrama de temperatura vs. composición cómo se obtiene la composición del
vapor en equilibrio con una mezcla líquida binaria (ideal) de composición conocida. Indique, en el
mismo diagrama, cómo se determina en un momento dado la composición del líquido que queda
en el balón.
b) n-Pentano (P.E. 36 ºC) y n-heptano (P.E. 98 ºC) forman una solución casi ideal. Dibuje
cualitativamente en un diagrama las curvas de punto de ebullición versus composición para dichas
sustancias. Con la ayuda de este gráfico indique qué sucede cuando se calienta hasta ebullición
una mezcla equimolecular de los componentes, los vapores se condensan y el condensado se
redestila.
3) ¿Puede separar dos líquidos de igual punto de ebullición por destilación fraccionada?¿Por qué?
4) Se tiene una columna de fraccionamiento ideal, aislada adiabáticamente del medio con la cual se
está fraccionando una mezcla de solventes que no forman azeótropo. Indique cuál será la
temperatura en ambos extremos de la columna.
5) ¿Qué es una mezcla azeotrópica y qué aplicaciones puede tener la formación de la misma? ¿Cómo
distinguiría una mezcla azeotrópica de una sustancia pura?
6) Una mezcla de 50 g de acetona (P.E. 56,2ºC) y 50 g de ciclohexano (P.E. 81,4ºC) se destila con una
buena columna de fraccionamiento. Se observa que primero destila una fracción de temperatura
de ebullición 53ºC. Después de haber destilado 75 g, la temperatura aumenta rápidamente a 81ºC,
donde se mantiene hasta el final. Esquematice las curvas y explique los resultados obtenidos.
11) Dos líquidos miscibles A y B, dan soluciones que se apartan del comportamiento ideal según la
ley de Raoult. A puro hierve a 110ºC y B puro a 90ºC, a presión atmosférica. Se determinó el
punto de ebullición y la composición de varias mezclas. Grafique los resultados:
¿Qué conclusiones puede sacar de los datos presentados? Discuta la posibilidad de separar las
siguientes mezclas por destilación fraccionada:
a) 70% A; 30 % B
b) 20% A; 80 % B.
12) Dibuje los gráficos de destilación (temperatura versus ml) para los siguientes sistemas:
a- mezcla ideal de dos líquidos de distinto punto de ebullición con columna de fraccionamiento
ideal.
b- Ídem al anterior en destilación simple.
c- mezcla de líquidos que dan azeótropos de P.E. máximo con columna.
d- una sustancia pura con y sin columna de fraccionamiento.
13) Conteste, justificando en cada caso su respuesta, si las siguientes afirmaciones son verdaderas o
falsas:
a) 2,2-dimetilbutano y n-hexano tienen el mismo punto de ebullición.
b) iodobutano y bromobutano tienen el mismo punto de ebullición.
c) Cuando se seca un solvente con sulfato de sodio anhidro, no es necesario retirar el desecante del
balón antes de destilar.
d) Cuando se seca tolueno con sodio metálico: i) se puede realizar la operación en un balón cerrado
herméticamente; ii) se puede retirar el sodio y filtrar antes de destilar.
e) La destilación a presión reducida se utiliza para destilar solventes que tienen punto de ebullición
muy alto a presión atmosférica.
f) La destilación a presión reducida de una mezcla azeotrópica a presión atmosférica permite separar
los dos componentes puros.
g) En una destilación a presión atmosférica, el termómetro se debe colocar en el interior del líquido.
h) Una mezcla etanol-agua se puede separar en sus componentes puros por destilación con una
columna de fraccionamiento ideal.
i) El material poroso se puede agregar sobre el solvente caliente.
j) El NaOH sólido es un buen agente desecante para compuestos como anilina y piridina. Puede
utilizarse también para secar ácido acético.
15) Al destilar con columna de fraccionamiento ideal una mezcla de 100 ml c/u de etanol (P. Eb
78,5° C) y n-hexano (P.Eb. 69,0°C) se obtienen 125 ml de destilado a 59,0°C y el resto a 78,5°C.
En base a estos datos:
i) Construya un diagrama de equilibrio liq. / vapor (T vs. comp.)
ii) Dibuje la curva de destilación correspondiente a una destilación simple de la mezcla
mencionada.
iii) Si se somete a destilación simple otra mezcla de ambos, la 1° gota aparece a los 65°C. ¿Cuál es
la composición de dicha mezcla?
iv) Para una mezcla con 70% etanol, dibuje las curvas de destilación fraccionada con columna real
y con columna ideal.
Extracción y cromatografía son dos formas sencillas y ampliamente utilizadas como métodos
para separar un compuesto deseado de sus impurezas, o para aislar cada componente presente en una
mezcla, y están basadas en el principio de distribución de las diferentes sustancias entre dos fases
inmiscibles.
Es importante, para lograr la integración entre el laboratorio y la teoría, aplicar las técnicas
separativas mencionadas al aislamiento de algunos productos naturales.
De esta forma, tendremos las siguientes asociaciones temáticas:
• Cromatografía de adsorción de "Pigmentos Vegetales"
• Cromatografía de partición de "Hidratos de Carbono" y "Pigmentos"
• Arrastre con vapor y extracción diferencial de " Alcaloides, terpenos o flavonoides"
• Extracción de "Lípidos"
Las prácticas que se inician a partir de ahora, se fundamentan en principios teóricos sencillos, y
apuntan básicamente a presentar herramientas para la resolución de problemas separativos concretos.
La dificultad está entonces, en utilizar correctamente esas herramientas, entendiendo la complejidad
de los problemas separativos que se planteen.
De aquí que no basta estudiar lógica y memoriosamente para entender el tema.
Las prácticas se diseñaron para preparar integralmente al estudiante, de tal forma que se propicia
la experimentación con distintos materiales (sustratos, adsorbentes, solventes de desarrollo,
reveladores, etc.) con el objetivo fundamental de que se planteen problemas experimentales no
previstos en la guía.
Para un aprovechamiento cabal de las posibilidades que brinda cada práctica, resulta
indispensable que cada alumno:
a) Comprenda el significado y la tarea que realizará en el laboratorio.
b) Tenga los conocimientos teóricos sobre el comportamiento de los productos naturales que se
utilizarán.
c) Utilice el margen de creatividad disponible.
d) Rescate la totalidad de la práctica, y no sólo la parte que le tocó realizar.
Referencias bibliográficas
* R. Robertson T. Jacobs. "Laboratory Practice of Organic Chemistry". Mac Millan Co. London,
1962.
* E. Heftmann. "Chromatography". Reinhold Publishing Corporation New York, 1961
* L Savidan. "Cromatografía". EUDEBA, Buenos Aires, 1979.
* E. y M. Lederer. "Cromatografía". El Ateneo, Buenos Aires, 1960.
* D. Abbot y R. Andrews. "Introducción a la Cromatografía". 2ª ed. Alhambra,Buenos Aires,
1970.
* I. Smith y J. Feinberg."Cromatografía sobre papel y capa fina. Electroforesis" Exedra, Buenos
Aires,1979.
* L.G. Galagovsky "Química Orgánica: Fundamentos Teorico-prácticos del Laboratorio."
Eudeba, Buenos Aires, 1992.
2.- Introducción:
El proceso de extracción con solventes es empleado generalmente en el
aislamiento de productos naturales y purificación de mezclas. En algunos casos se la utiliza para
remover impurezas solubles en mezclas de compuestos de interés, denominándosela en este último
caso, lavado.
La cromatografía es una técnica separativa basada en la distribución
diferencial de los componentes de una mezcla entre una fase estacionaria y una fase móvil. En la
cromatografía en capa delgada (c.c.d. o t.l.c., thin layer chromatography), se usa una placa de vidrio,
aluminio o plástico como soporte de la fase estacionaria.
El alumno será provisto de una muestra orgánica binaria la cual deberá separar mediante extracción
haciendo uso de sus características ácido-base. Los componentes separados serán identificados
mediante CCD, punto de fusión y espectroscopía (los espectros I.R y RMN serán provistos por el
docente).
En primer lugar se realizará un análisis por CCD de la mezcla incógnita. Para ello se disolverá
una punta de espátula de la muestra (5 mg) en 0.5 ml de diclorometano y se analizará por CCD
analítica (silicagel F254) usando solventes de desarrollo de distinta polaridad con el fin de encontrar las
condiciones óptimas de separación. Luego, mediante ensayos de mini-extracción en medio ácido y
básico se determinaran las características acido-base de los componentes de la muestra. Para llevar a
cabo la separación sistemática de una mezcla insoluble en agua, se trabaja con 1-2 g de mezcla sólida,
que se trata con 50 ml de CH2Cl2 (1) y se procede según el esquema 1. Tener en cuenta que el
esquema es solo orientativo.
La solución orgánica (1) se extrae con NaHCO3 (s.s.), agregándolo
lentamente, con cuidado y agitación (por qué?) (2×20 ml), queda una solución alcalina de pH cercano
a 8 (2) y una solución en cloruro de metileno (2’).
A continuación se procede a acidificar la solución alcalina (2) con HCl diluido hasta pH = 2,
luego de lo cual se extrae con CH2Cl2 (2×20 ml). El extracto orgánico obtenido (3’) se lava con agua
(2×20 ml), se seca con MgSO4 (anh), se filtra a un balón con boca esmerilada y se evapora el solvente
a presión reducida en un evaporador rotatorio, obteniéndose el residuo B (ácidos).
La solución orgánica (2’) que fue extraída anteriormente, se extrae ahora
con NaOH 10 %. La solución básica resultante (4) se lleva hasta pH ácido con HCl 10 % y se extrae
con CH2Cl2 (2×20 ml), se obtiene así la solución orgánica (5’). Dicha solución (5’) se lava con agua,
se seca con MgSO4 (anh), que se elimina por filtración y se evapora el solvente en rotavapor. Se
obtienen de esta forma los fenoles (residuo C).
Tenga en cuenta que la fracción obtenida anteriormente es soluble en
NaOH 5% e insoluble en NaHCO3.
La solución orgánica (4’), de la cual se han extraído ya todos los componentes ácidos, se
extrae con HCl 10% (2×15 ml); queda una fase acuosa ácida (6) y una fase orgánica (6’). La fase
acuosa ácida (6) se alcaliniza con NaOH 20% y se extrae con CH2Cl2 (2×15 ml), obteniéndose la fase
orgánica (7’). Ésta se lava con agua, se seca con MgSO4 (anh), se elimina el desecante por
filtración y luego el solvente a presión reducida, obteniéndose el residuo D (aminas
insolubles en agua). La fase orgánica (6’) se lava con agua (2×15 ml), se seca y se filtra. Se
elimina el solvente y se obtiene el extracto E (componentes neutros).
Esquema 1
Residuo C (fenoles)
fase orgánica (4')
HCl 10%
Residuo D (Básicos)
4. CUESTIONARIO
Extracción
1) Una mezcla constituida por los siguientes productos se sometió a los tratamientos que se
indican a continuación:
CO2CH3
CO2H NH2 OH
N
CH3 Cl
O
a) ¿Cuál de los cuatro compuestos es A y en qué se basa su separación de los otros compuestos.
b) Indique un esquema de separación que permita aislar los compuestos B, C y D.
mezcla
1) éter
2) Solución de NaHCO
3
fase acuosa 1
fase etérea 1
1)HCl 5% frío
-éter
2)éter
fase etérea 2
compuestos B, C, D.
fase acuosa 2
- éter
compuesto A
2) Separe por métodos convenientes la siguiente mezcla de compuestos, de forma tal que
obtenga cada uno por separado.
OH
O
NHCH3 O
CH3 CO2H
H3C CH3
O
1 2 3 4
OCH3
H3CO OCH3
HO2C
O O
O
B C
A NH2
OH
CO2H
HO O
CHNH2
CH3
D E
OCH3
4) Defina constante de partición. ¿De qué factores depende? ¿Por qué es conveniente hacer n
extracciones de volumen V y no una sola extracción de volumen n. V?
8) ¿En qué se basa la cromatografía de adsorción? Nombre los adsorbentes más comunes y
ordénelos según su poder de adsorción creciente.
9) Nombre los solventes más comunes y ordénelos de acuerdo con su polaridad creciente (serie
elutrópica).
10) Ordene los siguientes solventes de acuerdo con su poder de elución creciente en sílica:
a) Diclorometano, tolueno, hexano, isopropanol
b) Acetona, ciclohexano, ácido acético, acetato de etilo, benceno, metanol.
11) ¿Cómo influyen la polaridad de los compuestos a separar y la naturaleza del adsorbente y del
disolvente en la retención?
COOH
n-pentano
A
B C
COOH
O
OH
O
E F
D O
NH2
OH
I II III IV V VI
14) Dadas las siguientes afirmaciones, conteste a c/u si es Verdadera o Falsa y justifique:
a) Por cromatografía en capa delgada se pueden obtener puros los componentes de una mezcla
de colesterol, ácido benzoico y cloruro de metileno.
b) Una sustancia A, que en c.c.d. sobre sílica con benceno da Rf = 0,7, al usar benceno-metanol
1 : 1 dio Rf = 1,2.
HO OH
OH OH
. . . . .
1 2 3 4 5
Parte B_ Espectroscopía.
1.- Objetivos:
Introducción de los principios básicos para adquirir espectros de IR y UV, utilizando los
equipos disponibles.
Aplicación del entrenamiento en análisis de espectros adquirido en la Parte A de Química
Orgánica Ciencias Biológicas. Utilización de los espectros de IR y UV obtenidos en los turnos de
trabajos prácticos y los espectros de RMN suministrados por los docentes para la determinación de la
identidad de una sustancia incógnita.
2.- Introducción:
En la actualidad, los métodos espectroscópicos ocupan un lugar
predominante en el análisis de sustancias orgánicas, ya sea que provengan de fuentes naturales o
sintéticas. Si bien en algunos casos la utilización de espectros como única herramienta no permite
determinar la identidad de un compuesto, su versatilidad, y rapidez hacen de los mismos aliados
valiosos, y en algunos casos, indispensables, para el científico moderno. Los conocimientos teóricos
necesarios para llevar a cabo esta práctica ya han sido incorporados en la Parte A.
3.- Parte experimental
Deberán analizar espectroscópicamente la muestra incógnita cuyo punto de
fusión se determinó en el TP 3 (Consultar con el docente cuál de las dos muestras que posee va a ser
utilizada en este T.P.)
4.-CUESTIONARIO
1.- Se dispone de los datos espectroscópicos de tres isómeros. En función de dichos datos indique
cuales de ellos corresponden a los distintos isómeros que se presentan a continuación e indique
qué relación de isomería guardan entre sí:
CH3
CH3 NH2
A B C
2.- Se cuenta con tres botellas conteniendo un líquido incoloro cuyo rótulo ha sido extraviado. Se
sabe que se trata de acetona, 3-pentanona y metilisopropil cetona. Indique que espectroscopia sería la
más indicada para determinar la identidad del líquido contenido en cada recipiente, fundamentando
claramente su elección y el descarte de otras espectroscopias posibles.
3.- Indique en base al análisis espectroscópico qué espectro corresponde a cada estructura,
justificando las asignaciones mediante tablas.
H O
O
NH2 OH
A B C D
4.- A continuación se muestran los espectros de los siguientes productos naturales: alcanfor,
tripalmitina, testosterona y aspartamo (un terpeno, un triglicérido, un esteroide y un péptido. Realice
una búsqueda bibliográfica que le proporcione las estructuras correspondientes en caso de no
conocerlas y determine a cuál de ellos corresponden los siguientes espectros.
5.- El mirtenol y la fenchona son dos terpenos naturales, cuya fórmula y espectros de IR se muestran a
continuación:
CH2OH
O
Mirtenol Fenchona
Asigne el IR que corresponde a cada estructura indicando que datos de los mismos utilizó para
realizar dicha asignación.
6.- La mentona y la pulegona son dos terpenos monocíclicos cuya estructura es la siguiente:
O O
Mentona Pulegona
i) sobre un compuesto conocido que se sabe que da una señal positiva clara (testigo).
ii) en ausencia de cualquier compuesto (sólo con solvente, si fuera necesario), siguiendo el
procedimiento completo para observar qué ocurre al mezclar y reaccionar solamente los reactivos
involucrados en el ensayo (blanco),
iii) sobre la muestra incógnita y comparar con testigo y blanco. Deducir si el resultado del ensayo es
positivo o negativo.
El orden de los ensayos en cada diagrama tiene una secuencia lógica tal que evita falsos positivos y
resultados ambiguos, previniendo también procedimientos innecesarios que no son aplicables cuando
las reacciones precedentes dieron resultados negativos.
Bibliografía:
Experimento I
En este experimento los compuestos desconocidos se limitan a: alcanos, alquenos, halogenuros de
alquilo, alcoholes (primarios y secundarios, terciarios) y éteres. Se sigue el procedimiento indicado en
el Diagrama I. Como no se conocen buenos ensayos de reconocimiento para alcanos o éteres, la
presencia de estos grupos funcionales se deduce a través de la solubilidad en ácido sulfúrico,
resultados negativos en otros ensayos, y eventualmente por espectros IR y RMN.
La identidad del compuesto incógnita se deduce de los resultados de los ensayos, en combinación con
el punto de fusión y datos espectroscópicos, contando con una lista de compuestos posibles.
compuesto A
Soluble en
NO agua SI
Alcano, alqueno,
halogenuro de alquilo, alcohol (<C-5), éter (<C-5)
alcohol (>C-5), éter (>C-5)
Soluble/Reacciona Soluble en
en H2SO4 (c) éter
NO SI NO SI
Alcohol
Halogenuro de Clasificación por:
alquilo CrO3 (1º, 2º)
Lucas (1º, 2º, 3º)
Clasificación por:
CrO3 (1º, 2º)
Lucas (1º, 2º, 3º)
Experimento II
En este experimento se introducen aldehídos, aminas, amidas, ácidos carboxílicos, ésteres, cetonas y
fenoles. El procedimiento a seguir se indica en los Diagramas II y III.
El compuesto incógnita se identifica por los ensayos de solubilidad, de grupos funcionales y su punto
de fusión o ebullición, así como datos espectroscópicos.
compuesto B
Soluble en
NO agua SI
Controlar
pH
Fenol Ácido NO SI
Éster, Aldehído,
amida cetona Clasificar por:
Ensayo - Hinsberg
con FeCl3 Ensayo de
Tollens
Diferenciar por ensayo de
ácidos hidroxámicos en
EtOH y en propilenglicol
NO SI
Cetona Aldehído
Clasificar Clasificar
por por
iodoformo Fehling
compuesto B
Soluble / reacciona
NO en HCl 5% SI
Amina
NO SI
Aldehído, amida, Ácido, Clasificar por:
cetona, éster fenol - Hinsberg
Reacciona en
Ensayo NaHCO3 5%
2,4-DNFH NO SI
Fenol Ácido
NO SI
Amida, Aldehído,
éster cetona Ensayo
con FeCl3
Ensayo de
Tollens
Diferenciar por
ensayo de ác.
hidroxámicos en
EtOH y en NO SI
propilenglicol
Cetona Aldehído
Clasificar Clasificar
por por
iodoformo Fehling
Ensayos Cualitativos
1) Solubilidad en agua: Colocar 3 ml de agua en un tubo de hemólisis, agregar 5 gotas (o
una punta de espátula) de la muestra y agitar durante 1 minuto. Si algo del compuesto
permanece como una fase separada, se considera insoluble a temperatura ambiente.
Generalmente, los compuestos monofuncionles de hasta 4 átomos de carbono (hasta 5 si son
alcoholes) son solubles en agua.
Para los posteriores ensayos de reconocimiento, se debe tener en cuenta que si la sustancia
incógnita no es soluble en el medio de reacción, la misma se solubilizará en un solvente que no
interfiera con el ensayo a realizar
con NH3 (c), observando si hay formación de humos blancos. El ensayo se considerará
positivo si se consumen más de 2 gotas del reactivo y si no hay desprendimiento de HBr.
Nota: El desprendimiento de HBr indica que ha ocurrido una reacción de sustitución y no de
adición debida, posiblemente, a la presencia de sustancias aromáticas reactivas (fenoles,
aminas, etc.) o de compuestos que poseen grupos metilénicos activados (aldehídos, cetonas,
etc.).
10) Nitrato cérico: En un tubo de ensayos se diluyen 0.5 ml del reactivo con 3 ml de agua. Se
agregan 4 a 5 gotas de la muestra, se agita y se observa el cambio de color. Si la muestra no es
soluble en agua se usa dioxano en vez de ésta. Una prueba positiva para un alcohol queda
indicada por un por un cambio en el color del reactivo de amarillo a rojo. Los fenoles dan en
solución acuosa un precipitado que va de color café a café verdoso; en dioxano se forma una
coloración que va de rojo intenso a café.
(Reactivo: Se disuelven 200 g de nitrato cérico amónico [(NH4)2Ce(NO3)6] en 500 ml de
ácido nítrico 2 N.). Este ensayo no se llevará a cabo.
15) A) Ácidos hidroxámicos para ésteres: Para realizar este ensayo, la muestra debe dar
negativo el ensayo del cloruro férrico.
Se disuelve (o suspende) 1 gota (o 50 mg) de sustancia en 1 ml de reactivo y se agregan 0,2
ml de NaOH 6N. Se calienta a ebullición, se deja enfriar durante 30 segundos y se agregan 2
ml de HCl 6N. Si la solución es turbia deben agregarse 2 ml de etanol. Se añade entonces una
gota de solución de cloruro férrico 5% y se observa el color. Un color rojizo o violáceo indica
un resultado positivo; si el color no persiste se continúa agregando solución de cloruro férrico
hasta que el color sea estable.
(Reactivo: Solución de clorhidrato de hidroxilamina 0,5N en etanol.)
B) Ácidos hidroxámicos para amidas: Para realizar este ensayo, la muestra debe dar
negativo el ensayo del cloruro férrico.
Se colocan 30 mg (o 1 gota) de sustancia en un tubo de ensayos y se agregan 2 ml de reactivo
y 1 ml de hidróxido de potasio 1 M en propilenglicol. Se calienta la mezcla a ebullición
durante 2 minutos, se enfría y se agregan 5 gotas de solución de cloruro férrico 5 %. El
desarrollo de un color rojo o violeta indica un resultado positivo.
Los ésteres y anhídridos dan positivo este ensayo.
(Reactivo: Solución de clorhidrato de hidroxilamina 1M en propilenglicol)
CUESTIONARIO
Br CH3 Br
Br
3) Un compuesto A, que produce un precipitado amarillo con AgNO3, reacciona con hidróxido de
sodio en etanol, para dar un compuesto B. B da positivo el ensayo de Lucas sólo por calentamiento.
Por tratamiento de B con CrO3/H2SO4, se obtiene C (C7H6O2), que resulta soluble en hidróxido de
sodio diluído.
Por tratamiento de A con Br2/Fe, se obtiene D como producto mayoritario, que presenta en su
espectro RMN-1H, las siguientes señales:
singulete (2H) δ : 4,4 ppm
doblete (2H) δ : 7,0 ppm
doblete (2H) δ : 7,5 ppm
Deduzca las estructuras de A, B, C y D. Formule las reacciones involucradas.
4) Un compuesto A (C6H10), que decolora una solución de permanganato de potasio diluido y frío,
produce un compuesto B al ser tratado con Br2/H2O. B da positivo el ensayo de Beilstein, y también
reacciona con sodio metálico, liberando un gas. Por ozonólisis reductiva de A, se obtiene como único
producto un dialdehído C.
a) Proponga estructuras para A, B, y C, justificando los datos.
b) ¿Cómo reaccionará B con AgNO3/Etanol?
c) ¿Qué señal de importancia presentará el espectro I.R. de B?
d) Discuta si el compuesto B así obtenido presenta actividad óptica; escriba un diasterómero.
Indique cuáles forman parte de una mezcla ternaria que tiene las siguientes propiedades:
a) Es totalmente insoluble en agua.
b) Decolora Br2/CCl4 en la oscuridad.
c) Da positivo CrO3/H2SO4.
d) Es parcialmente soluble en NaOH diluido.
e) Con AgNO3/EtOH en frío da (-) y en caliente da (+).
7) Los compuestos A, B y C tienen la misma fórmula molecular (C9H9OBr). Sólo B y C son solubles
en NaOH 5 % y precipitan inmediatamente en AgNO3/EtOH, mientras que A reacciona con
CrO3/H2SO4 dando un precipitado verde. Los tres reaccionan con KMnO4 diluido en frío. Por otra
parte B y C con KMnO4 en caliente dan el mismo compuesto D que da negativo el test de Beilstein.
B presenta isomería cis/trans mientras que C no. D puede obtenerse a partir de un compuesto E por
reacción con CrO3/H2SO4. E es soluble en agua, tiene fórmula (C7H8O2) y da el ensayo de Lucas
positivo.
En los espectros I.R. en la zona entre 600 y 1000 cm-1, se observa para A dos bandas a 700 y
780 cm-1, mientras que para B y C solo se observa una a 820 cm-1.
Proponga estructuras posibles para A, B, C, D, y E, y justifique los resultados de los ensayos.
a) Determine que etiqueta le debe colocar a cada uno de los frascos, explicando los test
utilizados.
b) ¿Para cuál de los compuestos le sería útil el espectro I.R., en cuanto a la determinación
estructural y por qué?
es soluble en NaOH 5 %.
Da un precipitado amarillo al ser tratado con 2,4-dinitro-fenilhidrazina.
Da negativo el ensayo de Fehling.
Da positivo el ensayo de NaI/Acetona.
Su espectro IR. Presenta una banda entre 3500-3300 cm.-1.
Su espectro RMN-1H presenta las siguientes señales:
δ : 2,85 (2H, t)
δ : 3,35 (2H, t)
δ : 7,57 (2H, d)
δ : 7,80 (2H, d)
δ : 5-6 (1H, banda ancha)
a) proponga una estructura compatible con estos datos.
b) Escriba todas las reacciones involucradas.
c) Justifique todos los datos espectroscópicos.
10) Diferenciar los siguientes compuestos entre si, mediante ensayos sencillos Presente los resultados
en forma de tabla:
H3 C
a) OH O O O
H3 C
O OH
HO O
b)
O progesterona O HO colesterol
aldosterona
OH OH
HO estradiol O testosterona
12) Un frasco contiene una mezcla de tres de los siguientes compuestos : acetato de sodio; urea; ß-
naftol; ácido cinámico; benzofenona; p-metoxianilina. En base a los siguientes resultados
experimentales, conteste: ¿Cuál es la composición de la mezcla? Justifique
a) La mezcla resultó totalmente insoluble en agua.
b) La mezcla resultó totalmente soluble en éter.
c) La mezcla fue parcialmente soluble en NaOH 5 %.
d) La mezcla fue parcialmente soluble en HCl 5 %.
e) La mezcla fue totalmente insoluble en NaHCO3.
13) Un compuesto A (C17H14O5), que resultó insoluble en agua, pero soluble en NaOH diluido, dio
positivo el ensayo de ácidos hidroxámicos. Por calentamiento de A con NaOH acuoso y posterior
acidificación, se obtuvieron dos compuestos B y C.
El compuesto B dio positivo los ensayos con I2/NaOH y 2,4-dinitro-fenilhidrazina; y mostró en
su espectro I.R., entre otras, una banda ancha a 3500-3300 cm-1 y una señal fuerte a 820 cm-1. B dio
negativo el ensayo de Tollens, y no resultó soluble en solución diluida de NaOH.
El compuesto C (C8H6O4) resultó soluble tanto en NaOH diluido como en NaHCO3 diluido.
Por calentamiento de C, se obtuvo D (C8H4O3), que dio positivo el test de ácidos hidroxámicos.
Proponga estructuras para A, B, C y D, que sean compatibles con los datos experimentales.
Escriba las reacciones enunciadas, justificando los resultados obtenidos.
14) Un compuesto A (C9H8O2), reacciona con CrO3 en medio ácido para dar B. A presenta en su
espectro I.R., entre otras, una banda a 820 cm-1. Por tratamiento de B con SOCl2 se obtiene C, el
cual reacciona vigorosamente con agua para regenerar B. El tratamiento de C con D (C3H8O) en
medio ácido a reflujo, produce E. Teniendo en cuenta los datos de la tabla, formule A, B, C, D, y E.
Plantee su razonamiento deductivo. Complete la tabla indicando si los ensayos resultan positivos o
negativos.
15) Diferenciar los siguientes compuestos mediante ensayos sencillos. Hacer una tabla,
indicando si los resultados son positivos o negativos. Para cada ensayo, ejemplifique con un
compuesto y plantee la señal que se observa cuando el ensayo resulta positivo.
b) O c) d) Cl
a) CH3 CHO
OH O O
O
CH3
O CHO O
e)
f) g)
Cl
17) Se tienen 5 muestras ( A...E) de las cuales se dispone de los siguientes resultados experimentales:
Tollens Ac. Hidrox. Ag+/EtOH CrO3/ácido I2/base Sol. HCl dil fenil-hidrazina
A - + - - - - -
B - + + - + - +
C + - - + - - +
D - - - - - - +
E - - - + - + -
Sabiendo que A...E están entre las siguientes sustancias, asigne una estructura a cada muestra y
justifique brevemente.
1 2 3 4 5
H
O
HO NH N O
O Ph N Cl
O Cl
O2C O
OH
O2C
O
H
8 O 9
6 7
2.-Introducción
Es una de las propiedades físicas más importantes para identificar sólidos
cristalinos. Desde el punto de vista práctico se puede considerar que el punto de fusión es la
temperatura a la cual un sólido - en contacto con el aire - se transforma bajo condiciones de equilibrio
en un líquido.
Cuando una sustancia es pura, el rango de temperaturas entre las cuales se produce su fusión
es muy pequeño (usualmente 0,5 a 1°C). Si es impura ese rango es muy amplio y está por debajo del
verdadero punto de fusión ( para ampliar este tema, lea propiedades coligativas en libros de química
inorgánica). Por ello las sucesivas purificaciones de una sustancia orgánica pueden controlarse por su
punto de fusión ya que cuanto más nítido y estrecho sea el rango de fusión, más pura puede
considerarse la sustancia. Esta propiedad que tienen las impurezas de disminuir el punto de fusión real
de un producto, se puede emplear como criterio de identificación (no de pureza) mediante el llamado
punto de fusión mezcla:
Si después de varias cristalizaciones el punto de fusión de una sustancia se mantiene nítido y
no varía, puede razonablemente suponerse que dicha sustancia es pura. Si por ejemplo su punto de
fusión fuera 148°C, se recurrirá a continuación a las tablas de Compuestos Orgánicos (por ejemplo C.
Hodgman "Handbook of Chemistry and Physics"; N.A. Lange, etc.), en los que se suelen encontrar
varios compuestos con puntos de fusión análogos. Si se mezcla la sustancia obtenida con muestras
puras de los distintos compuestos que poseen puntos de fusión similares sólo mantendrá la constancia
del punto de fusión en el caso de que se trate de la misma sustancia, pues las que son diferentes
actuarán como impurezas y al determinar los respectivos puntos de fusión estos serán más bajos.
Puede haber excepciones al comportamiento descripto, por lo que el punto de fusión mezcla
es una buena demostración y no una prueba concluyente de la identidad de sus dos componentes.
Estos ensayos se realizan empleando unos pocos mg de sustancia.
El punto de fusión de una mezcla puede presentar características que merezcan ser
mencionadas. Generalmente se suele describir dentro de una zona de temperaturas que, como se ha
dicho para sustancias puras suele ser muy estrecho, p. ej. p.f.: 130-131°C. Pero algunas sustancias
puras suelen presentar ablandamientos previos a temperaturas más bajas que la de fusión propiamente
dicha y en esos casos se indica de la siguiente manera: p.f: 115° (abl.), ocurre a 142°. Algunas
sustancias al fundir se descomponen y ello se indica así: p.f. 234° (d). Una causa de error en la
determinación del punto de fusión reside en la dilatación desigual de la columna de mercurio a
medida que se aleja de la zona caliente del baño. La temperatura de fusión leída se suele corregir
debido a la columna de mercurio emergente. Esta corrección es aplicable a los puntos de fusión altos.
Se aplica la siguiente fórmula:
C = 0,000158 ( T-t ) n
donde: T: temperatura leída
t: temperatura media de la columna emergente (que se determina con otro termómetro
colocado en la parte media de la columna emergente).
n: número de grados de la columna emergente.
0,000158: coeficiente de dilatación aparente del mercurio para temperaturas
inferiores a 150°C
Esta corrección a la temperatura leída se suma y el punto de fusión se indica así: p.f. 221° (corr.)
El método más usado para determinar el punto de fusión es el de tubo capilar cuya
preparación se detalla más adelante y para la cual se emplean tubos de vidrio neutro (los vidrios
alcalinos alteran el punto de fusión de las sustancias orgánicas) que previamente se ha lavado con
agua destilada y secado.
Si es necesario determinar temperaturas más elevadas que las que permite el baño de glicerina
(180ºC), se puede emplear ácido sulfúrico (250°C) o una mezcla de ácido sulfúrico y sulfato de
potasio (7:3) con lo que se llega a 325°C. El cloruro de zinc fundido puede usarse entre 360°-600°C.
3.-Desarrollo de la Práctica
3.2.-Llenado de capilares.
Para el llenado de los tubos capilares se coloca una pequeña porción de la sustancia seca en
un vidrio de reloj o plato poroso y se pulveriza con la ayuda de una espátula, formando finalmente un
montículo. Se introduce en el mismo el extremo abierto del capilar, se invierte y el sólido se hace
bajar golpeando suavemente el extremo cerrado del tubo en la mesa, permitiendo al mismo tiempo
que se deslice el tubo entre los dedos y sobre la mesa para impedir su rotura. Este proceso se repite
hasta que se forme en el fondo del tubo capilar una masa compacta de 2-3 mm de altura.
La sustancia que queda adherida en la parte externa del capilar debe limpiarse para impedir
que arruine el baño en el cual se determinará el punto de fusión.
3.3.-Determinación del punto de fusión y punto de fusión mezcla de una muestra incógnita.
El alumno entregará al docente un tubo de hemólisis limpio, seco y rotulado, en el que se le
suministrará una muestra incógnita para determinar el punto de fusión, el punto de fusión mezcla y
luego realizar el TP 4. Una vez cargado el tubo capilar con la muestra incógnita se adosa por
capilaridad al extremo inferior del termómetro de tal manera que la sustancia dentro del capilar quede
a la altura de la parte media del bulbo del mercurio, (el cual previamente ha sido humedecido con el
líquido del baño). No deben usarse bandas de goma, etc. El termómetro y el capilar adherido se
introducen en el baño cuidando que el bulbo quede en el centro de éste y completamente sumergido.
Se calienta rápidamente en una primera determinación con el objeto de establecer
aproximadamente el punto de fusión y luego en una segunda determinación, con un nuevo capilar, se
efectúa un calentamiento rápido hasta unos 20° por debajo del punto de fusión encontrado en la
primera determinación, siguiendo con una velocidad de calentamiento de aproximadamente
2°/minuto, hasta que la sustancia funda.
El aparato consiste en un balón de 100 ml de capacidad, de cuello largo, lleno hasta las 3/4
partes de glicerina u otro líquido. En una modificación (figura 1) los capilares se introducen por los
tubos laterales y se ponen en contacto con el bulbo del termómetro. El termómetro se fija por medio
de un tapón de corcho al cual se le ha practicado una ranura para permitir ver la escala íntegra, así
como la libre expansión del aire en el aparato.
Es conveniente observar la fusión con ayuda de una lupa y una lámpara ubicada lateralmente.
Anote la temperatura en que la sustancia comienza a fundir y aquella en la que la fase sólida ha
desaparecido totalmente.
Repetir la medición del punto de fusión, pero usando un aparato de Fisher-Jones.
Se compara el punto de fusión obtenido para la muestra incógnita con los puntos de fusión de
las sustancias puras de la Tabla proporcionada por el docente. Se solicitan muestras (unos pocos mg)
de todos aquellos patrones de punto de fusión similar al de la muestra incógnita. Cada uno de los
patrones se mezcla con la muestra incógnita en la proporción (1:1) y se determina el punto de fusión
de la mezcla en cada caso. Aquella sustancia que no manifieste depresión en el punto de fusión
mezcla se considera idéntica a la muestra incógnita.
Reservar el sobrante de muestra incógnita para realizar el TP 4 y confirmar su identidad.
.
Figura 1
4.-CUESTIONARIO
1) Además del punto de fusión: ¿Qué otras constantes físicas se pueden utilizar como criterio de
pureza de una sustancia sólida?
4) Un compuesto A funde a 104°C, un compuesto B funde a 156°C. Una mezcla de dos moles de
A con un mol de B funde neto a 81°C. Dibuje un diagrama de P.F. vs. composición para este sistema
y conteste las siguientes preguntas con referencia a dicho diagrama
a) ¿Qué se observa cuando se determina el punto de fusión de una mezcla de un mol de A con
dos moles de B?
b) ¿Cuál es la temperatura eutéctica para la combinación A + B?
c) Si una mezcla de A y B termina de fundir a 100º C, ¿Qué se puede decir acerca de su
composición?
5) La figura muestra un diagrama de P.F. para mezclas de dos sustancias A y B. Considere una
mezcla sólida de A y B que contiene 80% A; cuando la mezcla se calienta lentamente:
a)¿A qué temperatura aparecerá líquido y a qué temperatura la mezcla habrá fundido
totalmente?
b) Si la mezcla se enriquece en el
componente A, ¿Cómo variará teóricamente el punto
90º C de fusión? Explique este hecho.
40º C
100% A 100% B
6) ¿Qué efecto tendrán trazas de humedad y solvente sobre la mayoría de los puntos de fusión de
los compuestos orgánicos?
TRABAJO PRÁCTICO Nº 4
DESTILACIÓN POR ARRASTRE CON VAPOR Y EXTRACCIÓN
1.-Objetivos:
Ejemplificar el aislamiento de componentes orgánicos volátiles e insolubles en agua a partir de
material de origen biológico (o de una mezcla compleja), utilizando vapor de agua.
2.-Introducción:
LIMONENO
EUGENOL
3.-Procedimiento:
Nota: También pueden utilizarse otros vegetales para hacer el arrastre, consulte con el docente que
procedimiento debe seguir en cada caso. Busque en bibliografía cuáles son los principales
componentes volátiles que contiene su muestra.
Figura 1
4.-CUESTIONARIO
2) ¿Cuál es el objeto de alcalinizar el destilado? ¿Cuál es el objeto de la primera extracción con sv.
orgánico? ¿Qué pasaría si se alcalinizara con NaHCO3? ¿Qué ocurriría si se empleara Na2CO3?
3) De los siguientes desecantes, ¿Cuáles usaría para secar el extracto orgánico de eugenol? Justifique.
a) NaOH en forma de lentejas.
b) Sulfato de magnesio.
c) Sulfato de sodio.
d) Ácido sulfúrico concentrado.
e) Pentóxido de fósforo.
4) ¿Qué masa de agua es necesario agregar al balón para arrastrar todo el eugenol presente en 10 g de
clavos de olor (aprox. 15 % de eugenol), y qué masa de agua se necesita para arrastrar el 85 % del
eugenol presente?
Datos:
6) ¿Por qué la evaporación de los solventes de los extractos se realiza a presión reducida?
8) De las siguientes mezclas diga cuáles podrán separarse por arrastre por vapor de H2O justificando
claramente su respuesta. Entre paréntesis se indica la solubilidad promedio (g/100 ml) de la sustancia
en H2O entre 80 y 100 ºC, suponiendo que todos tienen presión de vapor apreciable.
OH
H3CO OCH3
NH2
H3CO
OCH3 CHO
MEZCALINA VAINILLINA
10) Se quieren separar por arrastre los componentes de una mezcla de 2 g c/u de X, Y, y Z, en base a
los datos de la tabla. Justifique todas sus respuestas.
i- ¿Cuál/es se arrastrarán con vapor de agua y cuales no?
ii- ¿Cuánta agua necesitaría para destilar el/los arrastrable/s; por qué? (¿Hizo alguna suposición para
este cálculo; cuál ?).
iii- ¿Puede separar los 3 compuestos entre si? Si no puede, sugiera un método alternativo basado en
los datos disponibles.
CO2Na
O
1) O3
+
2) H2O2 / HO-
1 2 3
Luego de 1/2 hora, a la mezcla de reacción A se le agrega agua, se destila y se sigue el siguiente
esquema separativo:
Sc acuosa C
destilado + éter
Sc etérea D
destilación
A + agua
1) acidifico
Residuo B Sc acuosa E
2) + éter
Sc etérea F
TRABAJO PRÁCTICO Nº 5
EXTRACCIÓN DE LÍPIDOS - REACCIONES DE LÍPIDOS - JABONES
1. Objetivos:
Ejemplificación de técnicas extractivas sólido-líquido en la obtención de lípidos naturales.
Purificación por recristalización de un producto sólido y comportamiento de un triglicérido frente a la
reacción de hidrólisis básica (saponificación). Análisis del comportamiento cromatográfico del
triglicérido y del producto hidrolizado (jabón). Comparación de las propiedades del jabón obtenido
con las de los detergentes comerciales.
2. Introducción
Lípidos:
Se definen así a los compuestos orgánicos de origen natural, insolubles en agua y solubles en
solventes orgánicos poco polares, p. ej: éter etílico o hidrocarburos.
Esta definición abarca muchos tipos de compuestos, los cuales tienen en común la solubilidad; al
mismo tiempo pueden diferir ampliamente en cuanto a sus estructuras y funciones biológicas.
Algunos de los lípidos más comunes son: las grasas y aceites, los lípidos complejos, los
esteroides, los terpenos, etc.
Grasas y aceites
Son los lípidos más abundantes en la naturaleza y se los llama triglicéridos o triacilgliceroles, porque
son ésteres compuestos por tres moléculas de ácidos grasos (iguales o diferentes) y una de glicerol (1,2,3-
propanotriol).
Los ácidos grasos son ácidos orgánicos de cadena hidrocarbonada larga, por ej el ácido esteárico
CH3-(CH2)16-COOH (se considera larga cuando tiene más de 8 carbonos).
Estas cadenas hidrocarbonadas pueden tener uniones simples (ácidos grasos saturados) o uno o
más dobles enlaces (ácidos grasos insaturados).
OH O2CR1
R1COOH
R2COOH + OH O2CR2 + H2O
R3COOH 3
OH O2CR
3 ácidos grasos glicerol triglicérido
O lecitina
Esteroides
Estos compuestos son muy comunes en la naturaleza e
incluyen - entre otros - hormonas animales, vitamina D y
colesterol.
Todos los miembros de este grupo tienen el mismo
esqueleto de cuatro anillos hidrocarbonados (ciclopentano-
perhidrofenantreno), con diferentes sustituyentes: Colesterol
alquílicos, oxigenados, ésteres, etc. HO
Terpenos
Los componentes olorosos de las plantas, que pueden separarse de otros materiales de las plantas
por arrastre con vapor (TP Nº5), se llaman aceites esenciales. Muchos de ellos se usan en perfumería.
La mayor parte de los aceites esenciales son mezclas de terpenos, una clase de productos naturales
que se encuentra tanto en plantas como en animales.
Los terpenos poseen un esqueleto carbonado que proviene de unir “cabeza - cola” dos o más
unidades de isopreno. La cabeza es el extremo más próximo a la ramificación del metilo. Sus
moléculas pueden ser abiertas o cíclicas y si contienen otros elementos aparte de H y C se los llama
terpenoides
CHO
O Na
parte hidrofóbica parte hidrofílica
Laureato de sodio
En la solución de jabón los iones carboxilato rodean a las partículas aceitosas: sus partes no polares se
ubican (disuelven) dentro de dichas partículas, mientras que los
grupos carboxilato se ordenan sobre la superficie externa. Así
pueden asociarse con moléculas de agua y mantenerse en solución.
Estas pequeñas gotas que contienen las partículas no polares
rodeadas de aniones carboxilato, se denominan MICELAS.
La presencia de estos aniones hace que las superficies de
las micelas estén cargadas negativamente y se repelen entre sí,
impidiendo la coalescencia y manteniendo la emulsión, como se
observa en el gráfico.
Resulta entonces que la micela íntegra es soluble en agua y puede ser arrastrada (lavada) por
una corriente de agua.
Los jabones no pueden usarse fácilmente en “aguas duras”, por la formación de sarro y la
poca espuma que se logra. Ocurre que los iones metálicos (Mg2+, Ca2+) precipitan los ácidos grasos
pues forman sales insolubles y por lo tanto se requiere mucho más jabón para lograr un mismo efecto
limpiador. Además el sarro es un problema en lavanderías industriales. Una forma de evitar estos
inconvenientes es utilizar detergentes que no precipiten con estos iones, o usar agentes quelantes de
los iones metálicos.
Otra característica de los jabones es su incompatibilidad con ácidos. El jabón en medio ácido
se neutraliza, liberando el ácido graso que es insoluble en agua.
Los detergentes sintéticos contienen, a veces, compuestos que mantienen un nivel apropiado
de alcalinidad en el agua de lavado. Otros detergentes contienen grupos tipo sulfonato o amonio
cuaternario unidos a una cadena carbonada; éstos grupos no se ven tan afectados por las variaciones
de pH.
En la actualidad la variedad de productos limpiadores se ha incrementado notablemente.
Tanto los detergentes como los productos para lavar la ropa contienen enzimas que facilitan la
limpieza. Se agregan “proteasas” (hidrolizan las proteínas), “lipasas” (hidrolizan los lípidos) y
“mananasas” (remueven polisacáridos de la familia de los mananos. También son usadas como
agentes anti-redeposición.
Entre los aditivos usados en los productos para lavar la ropa se encuentran los blanqueadores,
el tradicionalmente usado es la lavandina, pero actualmente la utilización de perborato de sodio y
percarbonato de sodio está aumentando. Estos productos mantienen el color y son agentes
antimicrobianos. El percarbonato es activo aún usando bajas temperaturas de lavado y es “más
limpio” para el cuidado del medio ambiente.
También se agregan agentes para proteger las prendas (y la gente) de la acción de la luz solar.
Se utiliza “Tinosorb”, que con un solo tratamiento incrementa la protección 30 veces y se mantiene
luego de varios lavados.
Las, tabletas se fabrican agregando al agente limpiador (generalmente un surfactante tipo
alquilpoliglucósido, que es sólido a temperatura ambiente) un polímero de acrilato entrecruzado o
carboximetilcelulosa y un desintegrante, que le confieren solidez a la tableta sin estar fuertemente
comprimida y que permiten su solubilización fácilmente en el agua. La efervescencia se consigue con
la presencia de bicarbonato de sodio y ácido cítrico.
Las formulaciones de los productos para remover los olores están basadas en las
ciclodextrinas, moléculas en forma de anillo formadas por 6, 7 u 8 monómeros de glucosa que pueden
atrapar los olores.
a) Interprete los resultados obtenidos en el desarrollo de las placas en distintos solventes, para
cada uno de los compuestos.
Técnica opcional:
En un balón de 125 ml se colocan 5 g de grasa vacuna, 50 ml de KOH 7% en etanol y se calienta la
mezcla a reflujo suavemente. Después de 30 min., se investiga si se completó la reacción del siguiente
modo: Se deja enfriar un poco la solución, se toman unas gotas y se agregan a un tubo con agua. Si se
forma una fase aceitosa, la reacción no se completó y hay que seguir reflujando. Si no se forma, la
reacción se ha completado.
La mezcla de reacción se diluye con 25 ml de agua destilada y, mientras se agita, se agrega sal (NaCl)
en pequeñas porciones hasta que la solución se sature y el precipitado de jabón se separe. Se saca el
jabón con una espátula y se presiona sobre papel de filtro. La fase acuosa contiene glicerina.
El jabón obtenido se guarda para hacer los ensayos sobre jabones.
pH
CaCl2
MgCl2
Aceite vegetal
HCl dil.
HCl + CH2Cl2
1.- Prepare una solución de 1 g de detergente en 50 ml de agua destilada y otra de 1 g del jabón
obtenido en 50 ml de agua destilada.
2.- Tome el pH de ambas soluciones y registre el valor en la tabla VIII. Coloque 10 ml de la solución
de su jabón en un tubo de ensayos y 10 ml de la solución de detergente en otro. Agregue 2 ml de una
solución 0,5% de CaCl2 en cada uno y agite vigorosamente. Repita luego con MgCl2. Registre sus
observaciones.
3.- Coloque en sendos tubos 10 ml de su jabón y 10 ml de la solución de detergente. Agregue 4 gotas
de aceite vegetal común y agite vigorosamente. Anote lo observado.
4.- Coloque 4 ml de las soluciones de su jabón y del detergente en tubos de ensayos. Agregue gota a
gota HCl 5% hasta pH = 1. Anote lo que observa (utilice papel pH).
5.- Agregue 1 ml de CH2Cl2 a cada uno de los tubos del ítem anterior. Agite y observe. Registre en la
tabla el resultado.
1 ¿Con sus observaciones sobre jabón y detergente, puede usted determinar cuál es el mejor agente
emulsificante?
2 ¿Puede actuar el jabón como emulsificante si la solución está ácida? Explique.
3 ¿Cuáles son las ventajas del detergente sobre el jabón?
4 Mire bajo la acción de una luz fuerte la solución jabonosa ¿Qué coloración observa (efecto
Tyndall)? ¿Qué concluye de esta observación?
4.-CUESTIONARIO
1) Una semilla con alto contenido de CH3-(CH2)10-COO-CH2-CH3 y de CH3-COO-(CH2)10CH3, se
somete a los tratamientos indicados en la pág. siguiente.
Indique qué compuesto/s se obtienen en cada una de las etapas indicadas. Adjudique las
estructuras a las distintas manchas obtenidas por c.c.d. y a los distintos picos observados por CGL.
Justifique.
Semilla
Rf = 0.8
CCD, silica-gel, Hexano
Extracto en cloroformo
1) Evaporación cgl
2) Saponificación tr = 0.9 tr = 5.0 tr = 5.8
CCD Rf = 0.5
Producto de reacción
Rf = 0
Rf = 0.5
Rf = 0.3
Neutralización, CCD
Br Br
O OCH3 O (CH2)14CH3
Dicho extracto se reflujó con una solución de KOH 7% en EtOH durante 1 hora. La reacción
se siguió por c.c.d y se tomaron 3 alícuotas a t=0, 20 y 60 minutos. Cada alícuota se subdividió en
3 partes (A, B y C) y a cada una de ellas se les realizaron los siguientes tratamientos. A: se
sembró tal cual, B: se extrajo con éter etílico y agua, y se sembró la fase etérea. C: se acidificó
con HCl 10% hasta pH ácido, se extrajo con éter y se sembró la fase etérea.Se obtuvieron las
siguientes cromatografías:
0 min. 20 min. 60 min.
0,80
0,70
0,50
0,05
0,01
A B C A B C A B C
a) Asigne el Rf de cada compuesto al comenzar la reacción.
b) Explique por qué no obtiene la mancha de Rf=0 en la siembra de B.
3) ¿Qué métodos conoce para estudiar la composición en ácidos grasos de los lípidos?
O
O O O
O O
NH
CH3(CH2)14 C OCH3
OCH3 OCH
Se realizó la saponificación total de estos compuestos con NaOH/Etanol durante 1 hora a reflujo.
a) Escriba las reacciones de saponificación observadas indicando los productos obtenidos.
b) Esquematice la separación de los productos de la saponificación utilizando métodos extractivos.
TRABAJO PRÁCTICO Nº 6
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN
OBTENCIÓN DE PIGMENTOS NATURALES
1.-Introducción:
Los pigmentos presentes en las plantas
Cada primavera la Naturaleza nos asombra con su derroche de brillantes matices de verdes, amarillos,
rojos, rosas y magentas que se ven en el follaje de algunas plantas. A medida que los días pasan, el
despliegue cromático continúa. Las flores aparecen y exhiben prácticamente todos los colores y
formas que se puedan imaginar.
Cuando llega el otoño, la mayoría del follaje verde cambia su color a amarillo, naranja, rojo y
finalmente marrón, al aproximarse el invierno.
La mayoría de estos colores y cambios de color resultan de la producción, interacción y desaparición
de tres tipos fundamentales de estructuras: PORFIRINAS, CAROTENOIDES Y FLAVONOIDES.
(*) Los colores que presentan los pigmentos dependen también del pH y de otras interacciones
químicas.
PORFIRINAS :
Las porfirinas son derivados de la estructura porfirínica, que consiste en 4 anillos pirrólicos
heterocíclicos (que contienen nitrógeno), unidos por cuatro grupos metileno, formando un sistema
total con dobles ligaduras conjugadas. Muchas porfirinas tienen intensos colores: una de ellas es la
clorofila, que es el pigmento verde de las plantas; otro es el grupo hemo, responsable del color rojo de
la hemoglobina sanguínea.
En las plantas existen la clorofila a y la b, siendo la primera la predominante.
En la Figura V-a se muestra la estructura del anillo porfirínico y de la clorofila a. Como se observa,
en la clorofila un átomo de magnesio reemplaza a dos de los hidrógenos en el centro de la molécula,
además de tener un anillo más y varios grupos unidos al anillo porfirínico principal.
La clorofila juega un papel primordial en la actividad fotosintética de las plantas, durante la cual el
agua, el CO2 y la luz solar se transforman en hidratos de carbono.
La biosíntesis de clorofila responde al estímulo de la luz sobre la planta. La degradación hasta
CO OH
O
N
N (C 2 0 H 3 9 )
O
NH HN N Mg N
N
N
p orfirina
clo rofila a
Fig V a
compuestos más simples también ocurre en las hojas y de tal forma que la velocidad de este proceso
es menor que el de biosíntesis, de modo de garantizar el proceso sintético durante las horas de luz
(cuando el estímulo luminoso decrece, también lo hace la producción de clorofila).
CAROTENOS
Bajo este nombre se clasifican numerosos terpenos o derivados terpénicos coloreados, formados por
combinación de unidades de isopreno con dobles ligaduras conjugadas. Los carotenos contribuyen en
gran medida al conjunto de colores de vegetales, y los más importantes son: carotenos α, ß y γ,
licopeno, y xantofilas (que presentan oxígeno en su estructura). Las moléculas mencionadas se
muestran en la figura siguiente:
Los colores amarillos presentes en tejidos fotosintéticos se deben, principalmente, a carotenos y
xantófilas. El licopeno es el responsable del color rojo de pimientos, tomates y otras frutas.
Las zanahorias contienen pequeñas cantidades de α-caroteno y abundante cantidad del ß. En general,
las plantas no requieren luz para producir carotenos, y una vez producidos no se degradan
rápidamente. Es así como algunas moléculas de carotenos permanecen en la hoja durante todo el lapso
vital de la misma, ejerciendo una acción protectora (antioxidante).
H
H2 C C
C CH2
CH3
Isopreno: fórmula completa Isopreno: fórmula de esqueleto
Figura V-c
FLAVONOIDES :
Todos los flavonoides tienen la unidad estructural siguiente
Figura V-c
Figura V c
En los tres casos de flavonoides que detallaremos, la cadena de tres carbonos que conecta los anillos
se encuentra ciclada con un átomo de oxígeno como nexo, formando un anillo heterocíclico de 6
miembros.
En las flavonas (Fig. V-d), este anillo heterocíclico está sustituido con un oxígeno carbonílico.
Los flavonoles, tienen un hidroxilo unido a la estructura de flavona.
En las antocianinas, no se ha encontrado el oxigeno carbonílico sobre el anillo heterocíclico, y la
posición del hidroxilo de los flavonoles está ocupada por una unión glicosídica (formada por
deshidratación entre el hidroxilo mencionado y un azúcar, por ej. la glucosa).
Además, las antocianinas se encuentran en las plantas como sales (indicadas con la carga positiva
sobre el oxígeno heterocíclico).
Los distintos tipos de flavonas, flavonoles y antocianinas también presentan grupos hidroxilo
(sustituidos o no con metilos, acetilos, etc.) en distintas posiciones de los otros anillos.
Figura V-d
+
O O O
OH OGlu
O O
flavona flavonol antocianina
Los flavonoles y las flavonas son responsables de algunos colores amarillos de hojas, pero la gran
contribución la hacen a los colores de los pétalos de las flores.
Las antocianinas son responsables de la mayoría de los colores rojo, azul y púrpura de las plantas
superiores. Como glicósido (sustancia que tienen azúcares unidos a la estructura central de la
molécula), no es casual que la producción de antocianinas en plantas esté relacionada con la
disponibilidad de azúcares en la misma. En algunos casos la biosíntesis está influida por la luz. Por
ejemplo, la superficie de la fresa que da al sol, consigue su color rojo mucho antes que el lado más
oculto. Por el contrario, la luz no parece tener acción sobre la formación de antocianinas en rabanitos,
que están enterrados.
El color de las antocianinas depende del pH del medio en el que se disuelven, como se observa en la
siguiente figura, así como de su interacción con átomos o iones metálicos.
OH OH O-
OH O O
+
HO O HO O HO O
-H+
OGlu -H+
OGlu OGlu
+H+ +H+
OH OH OH
Figura V-e
El color en las hojas
Los colores que presentan las hojas se producen por combinación de los tres tipos de pigmentos que
hemos descripto.
En la mayoría de las plantas la clorofila se produce abundantemente durante la primavera, y el color
verde enmascara al amarillo y otros colores tenues debidos a los demás pigmentos.
El color distinto de verde que se desarrolla en algunas hojas jóvenes se debe a la presencia de
antocianinas. Se ha sugerido que los brotes tienen más cantidad de azúcares que la que necesitan y
esto activa la formación de antocianinas. A medida que las hojas van creciendo, la cantidad de
clorofila es tal que enmascara el color original, pero se ignora si los pigmentos juveniles se pierden
por degradación, o simplemente se diluyen.
Las plantas que ostentan colores distintos del verde durante esta época de desarrollo, tienen gran valor
ornamental. Algunas tienen colores rojos o púrpuras en su follaje, como algunos tipos de abedules,
arces, cerezos japoneses, ciruelos y manzanos silvestres. Estas plantas tienen la capacidad genética de
producir tal cantidad de antocianinas que modifican el color verde normalmente observable de la
clorofila.
2.-Objetivos:
El objetivo del presente trabajo práctico experimental es el logro del manejo de la técnica de
cromatografía de adsorción.
Para lograrlo, se aplicará dicha técnica a la separación de pigmentos vegetales. Primero se analizarán
por cromatografía analítica en capa delgada los pigmentos presentes en un extracto vegetal, y
luego se aplicará la información obtenida a la separación de los mismos por cromatografía en
columna.
3.-Desarrollo de la práctica
3.1.-Extracción de los pigmentos
Los alumnos deberán traer el material vegetal y la arena limpia.
Técnica A: Se toman 20 g de hojas de espinaca fresca, trébol u otro vegetal de color verde intenso, se
cortan en trozos pequeños y se trituran bien en un mortero con agregado de un poco de arena. Se
procede entonces a extraer los pigmentos, para lo cual se agregan 30 ml de acetona y se muele unos
5', imprimiendo un movimiento de rotación al pilón. Se forma una solución verdosa que se filtra a
través de un algodón. Esta solución se guarda, y el procedimiento se repite otras dos veces sobre el
residuo vegetal. Se evapora esta solución de acetona hasta que quede un residuo acuoso, que se extrae
2 veces con AcOEt. La fase orgánica se seca sobre MgSO4 o Na2SO4 (anh). El secado se completa en
unos 5 minutos (se reconoce cuando la solución se torna límpida) consulte con los docentes. Se filtra
la solución a un balón, usando un embudo con algodón (ver fig.1, Pag. 89). El residuo vegetal de la
molienda se extrae ahora con CH2Cl2 (2×20 ml, ver fig. 2, Pág. 89). Las soluciones orgánicas
obtenidas se juntan en el balón con la anterior (extracto de AcOEt) y se evaporan los solventes a
presión reducida hasta casi sequedad. Se analiza el número de componentes del extracto por
cromatografía en capa delgada.
Técnica B: Colocar 20 g de hojas de espinaca fresca, trébol u otro vegetal de color verde intenso,
previamente cortadas en trozos pequeños, en el recipiente de la licuadora. Agregar aprox. 150 ml de
etanol y licuar. Filtrar a través de un algodón. El filtrado se concentra en el rotavapor hasta obtener un
aceite que posteriormente se extrae con acetato de etilo. La fase orgánica de lleva a sequedad en el
rotavap.
Explicar los resultados obtenidos. En base a los mismos, discuta con el docente la secuencia de
solventes a utilizar para realizar la cromatografía en columna, y en qué momentos debe cambiar la
polaridad del solvente, durante el desarrollo de la misma.
Antes de proseguir con la siguiente etapa, debe tener claro los siguientes puntos:
i) ¿En qué solvente va a preparar la columna? ⇒ Sv. de armado
ii) ¿Cómo coloca la/s sustancia/s a separar en la columna? ⇒ Siembra
iii) ¿Con qué solvente o mezclas y en qué orden realiza la separación? ⇒ Sv. de elución
3.2.-Separación cromatográfica:
a) Preparación de la columna de cromatografía
Se toma una columna de cromatografía y se coloca en posición vertical. Se introduce hasta el
fondo de la misma un pequeño trozo de algodón, se aprieta suavemente y se alisa la superficie con
una varilla de vidrio a la que se le ha ensanchado la punta (lo que se consigue calentando al rojo la
punta de la varilla y apretándola suavemente sobre una superficie de hierro). Se moja el algodón con
el sv. de armado, se apisona con la varilla de vidrio, se cierra el robinete de la columna, y se agrega
solvente hasta una altura de 100 mm; luego se agregan una suspensión del adsorbente en el solvente
de armado, por medio de un embudo colocado en la parte superior de la columna. Esta operación
requiere mucho cuidado: debe agregarse despacio. Se agita entonces el adsorbente agregado con la
varilla para eliminar burbujas de aire que puedan haber quedado retenidas. Se añade otra porción
similar y se repite la operación (conviene remover la parte superior del agregado anterior para que no
queden zonas separadas). El proceso se vuelve a repetir hasta añadir todo el adsorbente. Cuando sea
necesario se podrá abrir el robinete para drenar el exceso de solvente pero es de suma importancia
que el nivel de éste sea siempre superior al del adsorbente.
b) Desarrollo de la cromatografía:
Se disuelve el extracto vegetal en el mínimo volumen de sv. de armado (¿qué hace si no es soluble en
él?) Se abre el robinete de la columna, cuando el nivel del líquido está sobre la arena, se agrega el
extracto con una pipeta Pasteur (un tubo de vidrio estirado), tratando de que el extremo de ésta esté
muy cerca de la arena. Se enjuaga el balón con otro ml de solvente y se agrega a la columna, una vez
adsorbida la porción anterior.
Si es necesario se enjuaga otra vez el balón y se vierte otra fracción de solvente por las paredes de la
columna para arrastrar las sustancias que hubiese adheridas. Se inicia el desarrollo cromatográfico
utilizando los solventes adecuados, en base a las conclusiones obtenidas previamente por el análisis
del extracto por ccd. Una ampolla de decantación adaptada al extremo superior de la columna puede
facilitar el agregado del eluyente.
Se verá extender la zona verde de la clorofila y luego comenzará a adelantarse una zona de color rojo-
anaranjado de algunos mm. de espesor que contiene los carotenos. Si la columna fue bien armada,
estas zonas tendrán bordes netos. Cuando se note la presencia de líquido coloreado a nivel del
algodón, se cambiará el recipiente colector y se recogerá el eluído de la columna en tubos de ensayo.
Se analiza el contenido de los tubos por ccd con el solvente apropiado, para comparar el contenido de
los mismos y el de la mezcla inicial; se observan las placas con luz U.V. (¿Qué observaría si revela
con iodo?)
Luego se trasvasa el contenido de cada tubo de caroteno a un balón de 125 ml, y se evapora el
solvente a presión reducida. Se deja enfriar el residuo aceitoso a temperatura ambiente: se separarán
los cristales de caroteno en forma de placas; con este residuo se realizan reacciones de carotenos y se
observa al iluminar con luz U.V. en un lugar oscuro.
Tenga en cuenta que los carotenos se oxidan rápidamente en presencia de luz y oxígeno. Si se deben
guardar algún tiempo, se toma el residuo con 1 ml de cloruro de metileno y se pasa a un tubo de
ensayos, se evapora a sequedad el solvente en un baño de agua a 70-80ºC, se envuelve el tubo en
papel y se lo guarda en desecador de vacío oscuro o en freezer.
Reacciones para clorofila: Las soluciones de clorofila son de color verde azulado; sin embargo,
presentan a la luz ultravioleta una fluorescencia rojo intensa.
Espectroscopía: Se realizará el espectro ultravioleta de las muestras coloreadas en solución
metanólica. Se compararán con los siguientes espectros.
Clorofilas y Caroteno
2,0
Abs.
1,5
1,0
0,5
0,0
320 370 420 470 520 570 620 670
Longitud de Onda (nm )
4.-CUESTIONARIO
1- ¿Qué técnicas cromatográficas preparativas conoce? Describa 3 de ellas. ¿Con qué masa puede
trabajar con cada una de ellas?
2- ¿Cuál es la relación usual entre la cantidad de adsorbente y la cantidad de producto a separar en
una columna cromatográfica?
¿Qué pasa si la relación es demasiado baja?
¿Qué pasa si la relación es demasiado alta?
3- ¿Cómo se arma una columna de cromatografía? ¿Qué función cumple la lana de vidrio o el algodón
en la parte inferior de la columna? ¿Cuál es la función de la arena o el papel de filtro en la parte
superior a sembrar?
4- ¿Qué es el sembrado de la columna cromatográfica? ¿Cómo se realiza? ¿Qué requisito debe
cumplir el solvente en el cual se disuelve el producto a sembrar?
5- ¿Cómo se procede cuando el producto a sembrar en la columna, sólo es soluble en un solvente más
polar que el solvente de elución?
6- ¿Cómo se procede para elegir el solvente (o mezcla de solventes), que serán empleados en la
elución de una columna cromatográfica?
7- ¿A qué se debe el ensanchamiento de las bandas observado a lo largo de la columna?
8- ¿Qué ocurre si deja secar una columna? ¿Y si suspende la corrida y la continúa al día siguiente?
9- Explique el orden de elución de observado para los compuestos de la práctica.
10- Indique Verdadero o Falso y justifique:
i) Si al extracto de colorantes de espinaca - sembrado en columna de sílica se lo eluye primero con
metanol y luego con hexano, se obtienen primero las clorofilas y luego los carotenos que son menos
polares.
ii) Si una columna aumenta su longitud al doble, la resolución aumenta al doble.
13- Las hojas de una planta X se extraen con Cl3CH:MeOH (9:1). El extracto se cromatografía en ccd
de sílica y se obtienen los siguientes resultados :
a) ¿Cómo procedería para separar 5 g del extracto original seco en c/u de los componentes?. Describa
claramente el proceso desde el armado hasta la elución total.
b) Una porción del extracto original se esterificó con MeOH. Al completarse la reacción se obtuvo
por ccd usando Cl3CH como solvente de desarrollo, 3 manchas de Rf = 0,4 ; 0,6 ; 0,7. Analice e
interprete los resultados obtenidos por ccd después de la reacción.
14- A partir de un extracto de alcaloides de un hongo, se obtuvieron las siguientes c.c.d. (reveladas
con iodo).
15- Se tiene una mezcla de tres compuestos A, B y C cuyos Rf en tres solventes distintos son los de la
tabla siguiente:
Solvente Rf A Rf B Rf C
I 0,2 0,8 1,0
II 0,2 0,3 0,9
III 0,9 0,9 1,0
Indique como procedería en la elución para obtener los tres compuestos separados por cromatografía
en columna.
TRABAJO PRÁCTICO Nº 7
CROMATOGRAFÍA DE PARTICIÓN
1.-Objetivos
El objetivo del presente trabajo práctico experimental es el logro del manejo de la técnica de
cromatografía de partición en placas de celulosa de 10 x 20 cm.
Para lograrlo, se aplicará dicha técnica al caso separativo de Hidratos de Carbono. Dado que este
grupo de compuestos fue estudiado tanto en Clases Teóricas, como en clases de problemas de la
Parte A, las evaluaciones estarán orientadas tanto hacia las técnicas experimentales empleadas, como
hacia las reacciones características de dichos productos naturales.
2.-Introducción
Cromatografía de Partición de Hidratos de Carbono.
Los azúcares - o hidratos de carbono - son compuestos sumamente polares (polihidroxicetonas, o
polihidroxialdehidos) de fórmula general Cn(H2O)n
Son solubles en agua en estado de monosacárido, y también en asociaciones de oligo- y polisacáridos;
esta solubilidad los hace susceptibles de ser separados por cromatografía de partición sobre papel o
celulosa.
Las polaridades de los hidratos de carbono son altas, y para lograr diferencias apreciables en sus
movilidades cromatográficas se requiere una gran distancia recorrida por el frente del solvente. Por
este motivo cuando se emplea la técnica en papel descendente para análisis cualitativos, el parámetro
que mide movilidades es Rg en vez de Rf.
Una regla práctica establece que, cuanto mayor sea la relación nº de grupos OH
nº de carbonos
más retenida quedará la sustancia; es decir, tendrá menor Rg. Además cuanto mayor es el
peso molecular, menor es el Rg obtenido.
En general un azúcar en forma furanósica tiene un valor de movilidad mayor que el mismo en forma
piranósica. Las metilaciones también aumentan la movilidad.
Los azúcares presentan una amplia gama de reveladores específicos, que además brindan datos no
sólo acerca de la ubicación de las manchas en el cromatograma, sino también, sobre propiedades
diferenciales de los azúcares.
Por ejemplo, se pueden diferenciar azúcares reductores de los no reductores, hexosas de pentosas, etc.
SUGERENCIA: Formule las reacciones que ocurrirían con los azúcares y reveladores utilizados en el
Trabajo Práctico.
5- Reveladores
a) Para azúcares:
Se mezcla una solución acuosa saturada de AgNO3 (0,1 ml) con acetona destilada (10 ml), el ppdo.
formado se disuelve agregando agua destilada gota a gota y agitando. La placa se pulveriza con esta
solución, y se deja secar en campana. Luego se pulveriza con una solución de NaOH 2 % en EtOH 50
%. Posteriormente se pueden fijar las manchas por inmersión en una solución de Na2S2O3 5 % en
agua.
c) Para polialcoholes:
A 8 ml de una solución de metaperiodato de sodio al 2% se agregan 2 ml de solución de
permanganato de potasio al 1% en solución de bicarbonato de sodio al 2%. Se debe preparar en el
momento. Se pulverizan los cromatogramas y se observan a los 5-10 minutos. Nota: Este revelado se
desvanece rápidamente.
4.-CUESTIONARIO
14- Por hidrólisis ácida de un compuesto A, (C21H38O16) que no reduce el reactivo de Tollens, se
obtuvo glucosa, galactosa y un compuesto B (C3H8O). El espectro RMN - 1H de B mostró un doblete
a δ= 1,20, un multiplete a δ = 3,94 y un singulete ancho a δ= 4,50. Por tratamiento de A con periodato
de sodio y posterior hidrólisis, se obtuvieron dos moles de ácido fórmico y galactosa, entre otros
productos. El tratamiento de A con α-glucosidasa produjo glucosa y un disacárido C que no reduce el
reactivo de Tollens. El tratamiento de A con β-glucosidasa produce B y un trisacárido reductor D. Por
tratamiento con ioduro de metilo en medio alcalino y posterior hidrólisis ácida se obtuvo: 2,3,4,6-
tetra-O-metil-glucosa; 2,4,6-tri-O-metil-galactosa y 2,3,4-tri-O-metil-glucosa.
a) Escriba una estructura - en fórmulas de Haworth - para el compuesto A compatible con los
datos, justificando brevemente. ¿Existen otras estructuras posibles?
b) Asigne las señales correspondientes al espectro de RMN-1H de B.
15- Se desea conocer la estructura de un trisacárido X para lo cual se ensayaron distintas reacciones cuyos
productos se analizaron por cromatografía de partición en celulosa, comprando con patrones. Los resultados
son:
IO4-MnO4 (Rg)
Glucosa 1
Fructosa 1,2
Galactosa 0,9
Hidrólisis 30 minutos 0,1; 0,4; 0,5; 0,9; 1
Hidrólisis 3 horas 0,9; 1
Tratamiento con α-glucosidasaa 0,4; 1
Tratamiento con β-glucosidasa 0,5; 1
La oxidación de x con IO4_ dio 2 moles de ácido fórmico (se consumieron 4 moles de periodato).
Además, se sabe que X y el compuesto con Rf 0,4 no reaccionan con fenilhidrazina. Proponga una
estructura para el trisacárido que sea consistente con los datos observados.
16- La rafinosa es un azúcar que se encuentra en jarabes de remolacha, tiene la fórmula C18H32O16 y
no reacciona con los reactivos de Tollens ni Fehling. La rafinosa fue sometida a estudios
estructurales, cuyos resultados se muestran a continuación.
a) La hidrólisis ácida total seguida por derivatización y estudio por cromatografía gaseosa mostró tres
señales a tr 11, 13 y 15 min. Se comparó con la siguiente mezcla de testigos (convenientemente
derivatizados): glucosa (13 min), manosa (14 min), galactosa (15 min), xilosa (10 min), fructosa (11
min).
b) La hidrólisis con α-galactosidasa da D-galactosa y sacarosa (la α-galactosidasa rompe uniones α-
galactosídicas).
c) La hidrólisis con invertasa da D-fructosa y el disacárido melibiosa (la invertasa rompe uniones de
β-fructosa).
d) La hidrólisis con maltasa da fructosa y un disacárido (la maltasa rompe uniones α-glucosídicas).
e) El estudio por cromatografía gaseosa de los productos de metilación y posterior hidrólisis de la
rafinosa mostró 1,3,4,6-tetra-O-metil-D-fructosa, 2,3,4,6-tetra-O-metil-D-galactosa y 2,3,4-tri-O-
metil-D-glucosa.
Proponga una estructura para la rafinosa. Explique sus conclusiones.
TRABAJO PRÁCTICO NO 8
CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO (CGL) Y
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (CLAR)
1.-Objetivos:
El objetivo de esta práctica demostrativa es conocer teórica y prácticamente dos de las
técnicas cromatográficas de uso más extendido en la actualidad.
2.-Desarrollo de la práctica
2.2.-CGL:
Se analizará la composición de la mezcla incógnita de azúcares convenientemente
derivatizada, inyectando 1 µl de la fase orgánica. Se realizarán corridas en distintas condiciones y se
identificarán los componentes de la muestra comparando con los tiempos de retención de los patrones
adecuados.
Se analizará la composición de la fase orgánica de los compuestos arrastrables (volátiles) del
TP de destilación por arrastre con vapor. Se realizarán corridas en distintas condiciones y se
identificarán los componentes de la muestra comparando con los tiempos de retención de los patrones
adecuados.
2.3.-CLAR: (más conocida por su sigla en idioma inglés como HPLC : high performance liquid
chromatography):
Se separarán los analgésicos presentes en un comprimido, que podrá contener: ácido
acetilsalicílico, cafeína, paracetamol.
Moler el comprimido en mortero, pasar a un tubo de ensayos y agregar unos 5-10 ml de
MeOH. Analizar el contenido de la muestra por ccd.
Filtrar la muestra en embudo con vacío. La solución final debe tener una concentración de
principio activo de 0,5-1 mg/ml.
Se empleará una columna analítica RP-18 y un sistema de solventes MeOH-H2O. Se
determinarán los tiempos de retención de los componentes y la composición del analgésico utilizado.
3.-CUESTIONARIO
11) Por extracción y posterior metilación de los ácidos grasos de un aceite vegetal se obtuvieron
cuatro señales por C.G.L. usando una columna capilar SP2250 de 30 m de longitud y FID como
detector. Los tiempos de retención observados fueron: 2; 2,5; 4; 6 minutos respectivamente. Sabiendo
que los ácidos grasos precedentes son C16:1, C22:1, C16:0, C20:0 y que se usó la siguiente programación de
temperaturas T1= 150ºC, t1= 3 min.; T2=200ºC con una rampa de 10ºC/min.
a) Asigne los tr a los ácidos grasos presentes en la muestra.
b) Indique cualitativamente cómo variará cada tiempo de retención si solo se cambia:
i-La rampa de temperatura por una corrida isotérmica a 150ºC.
ii-El flujo, aumentándolo y disminuyéndolo.
iii-La longitud de la columna, por una de 60 m de longitud con el mismo relleno.
iv-El detector por uno de captura electrónica.
v-¿Podría haber analizado por CGL los ácidos grasos sin derivatizar? Justifique.
vi-¿Qué otra técnica podría haber usado para analizar cuantitativamente los ácidos grasos libres?
Describa brevemente las condiciones.
TRABAJO PRÁCTICO No 9
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO - AMINOÁCIDOS
1.-Introducción
Las proteínas están entre los compuestos más importantes del organismo animal. Son poliamidas que por
hidrólisis dan aminoácidos.
Por lo común sólo se encuentran veinte aminoácidos en las proteínas de plantas y animales, sin embargo,
estos veinte aminoácidos se pueden combinar en una gran variedad de formas, para originar músculos,
tendones, piel, uñas, plumas, seda, hemoglobina, enzimas, anticuerpos y muchas hormonas.
2.-Objetivo
Separar por cromatografía de intercambio iónico una mezcla de aminoácidos, verificando las propiedades
ácido/base de los mismos.
3.-Parte experimental
IMPORTANTE: En todos los pasos de este trabajo práctico debe utilizarse agua destilada.
4.-CUESTIONARIO
2) En el TP realizado explique:
a) ¿Para qué se usa una columna de intercambio?
b) ¿Qué habría ocurrido si se hubiera utilizado una resina ácida?
c) ¿Qué es y para qué se usa la ninhidrina?
Problema 1:
Una empresa fabricante de tolueno, durante el control de calidad del producto, detecta un lote
anómalo que presenta un diagrama de destilación como el que sigue:
T( ºC)
110
Diagrama 1
75
48 100
gramos de destilado
Se reconoció mediante diversos ensayos la presencia de un contaminante que pudo ser identificado
como una amina X (P. Eb. 96 °C). Ingresan entonces a un manual y encuentran que el tolueno
presenta con la amina X un azeótropo de mínima (P.Eb. 75°C), cuya composición expresada en %
m/m es (25:75) respectivamente.
a) Determine la proporción de amina X en el tolueno contaminado.
b) Proponga un método de purificación del tolueno.
c) Dibuje el gráfico de destilación fraccionada (temperatura versus gramos de destilado) para
una mezcla tolueno: amina X (1:1).
Problema 2:
Un alumno recibe una muestra sólida M que contiene dos de los siguientes analgésicos y se propone
separarlos mediante una extracción ácido-base:
O
O
COOH HN
O
O
N Cl
O
H
OH COOH
Aspirina Paracetamol Propoxifeno Clorhidrato Ibuprofeno
Al recibir la muestra el alumno realiza un análisis preliminar por C.C.D., para ello siembra la
muestra M disuelta en metanol y los patrones de los analgésicos que le proporcionó el docente
(cada uno de ellos disuelto en metanol). Obtiene el siguiente resultado:
C.C.D
Silicagel F254, Solvente de desarrollo éter petróleo/acetato de
etilo 1:1
Revelador: Luz U.V. long. Onda. 254 nm
Siembra:
1- Paracetamol
1 2 3 4 5
2- Aspirina
3- Muestra M
4- Ibuprofeno
5- Propoxifeno clorhidrato
Responda:
d) ¿Podría separarse una mezcla de los cuatro analgésicos mencionados mediante extracción ácido-
base? Justifique dibujando un esquema de extracción. Indique claramente que soluciones utiliza en
cada etapa (ácido, base, agua y/o solvente orgánico), indique los lavados, secados y filtrados que
realiza donde corresponda. Formule las especies presentes en cada fracción orgánica y acuosa.
e) Sabiendo que el Rf del paracetamol es 0.4 usando como solvente de desarrollo éter de
petróleo/acetato de etilo 1:1, como espera que varíe si usa como solvente:
Justifique su respuesta
Problema 3:
Dada la siguiente tabla, complete con el ensayo correspondiente, seleccionando entre los siguientes:
Lucas, NaI en acetona, Fehling, Br2/CCl4, ácido hidroxámicos, Tollens, CrO3, AgNO3/etanol.
OEt
O
OH
Ensayo Br O
H
A - - + -
B + - - +
C - + - -
D - - - +
E + - - -
Problema 4:
Indique si las siguientes suposiciones son verdaderas o falsas. Justifique brevemente (no más de 5
renglones)
a) El P.F de una mezcla de dos sólidos A y B puede ser mayor que cualquiera de los P.f. de A y de B
puros.
b) Si se mezcla α-naftol con vidrio molido, el P.f. desciende proporcionalmente al grado de molienda
del vidrio.
c) Si la adición de pequeñas cantidades de una sustancia A disminuye el punto de fusión de una
sustancia X, entonces X y A son sustancias distintas.
Problema 1:
Se desea conocer la estructura de un disacárido A para lo cual se ensayaron sobre éste distintas
reacciones. Algunas de estas reacciones se cromatografiaron posteriormente en placa de celulosa,
comparando con patrones y se revelaron con distintos reactivos. Los datos obtenidos fueron los
siguientes:
Siembra Rg (IO4-/MnO4-)
Hexosa 1 1,0
Hexosa 2 0,9
Hexosa 3 1,1
Hexosa 4 1,2
Hidrólisis ác de A 15 min 0,4; 1,2; 0,9
Tratamiento de A con β- -
glicosidasa
Además, la hidrólisis ácida total de A seguida de derivatización con borohidruro de sodio y posterior
tratamiento con anhídrido acético y piridina, mostró por cromatografía gaseosa tres señale a tR= 16,5;
18,5 y 21,0 con relación de áreas 10:20:10 respectivamente. El CGL de una mezcla de testigos de
arabinosa, xilosa, manosa, galactosa y glucosa con la misma derivatización y en las mismas
condiciones dio señales a tR= 8,4; 10,3; 16,5; 18,5 y 21,0 respectivamente.
La oxidación de un mol del metilglicósido de A con periodato de sodio consumió dos moles de
reactivo y liberó un mol de ácido fórmico.
El disacárido A dio positivo el ensayo de Tollens.
a) Siendo A un disacárido, por qué se observan tres señales por CGL luego de la hidrólisis total
y posterior derivatización ?
b) Indiqué qué hexosas forman el disacárido.
c) Escriba la estructura de A en fórmula de Haworth, compatible con los resultados obtenidos,
indicando claramente su razonamiento.
Problema2:
Dada la siguiente mezcla (lisina, ácido benzoico y glucitol)
CH2OH
O
O OH
H OH
H2N CH C OH
HO H
(CH2)3
H OH
CH2
H OH
NH2
Problema 3:
Con el objeto de separar los componentes de una mezcla de reacción, se analizaron las CCD
desarrolladas con distintos sistemas de solventes, con el fin de buscar condiciones para una separación
por columna:
Hexano-Acetato de etilo (7:3), Hexano-Acetato de etilo (1:1), Acetato de etilo-Metanol (7:3) y
Acetato de etilo-Metanol (1:1).
De acuerdo a las placas obtenidas indique:
a) con qué solvente fue corrida cada CCD.
b) Indique brevemente con qué solvente armaría la columna y con cuales eluiria. Aclare en que
orden los utilizaría y qué componente eluye en cada caso.
c) Cómo sembraría la columna en caso de que la mezcla fuera totalmente soluble solo en
metanol.
Rf = 0,94
Rf = 0,83
Rf = 0,78
Rf = 0,71
Rf = 0,63
Rf = 0,09
Rf = 0,00
A B C D
Problema 4:
En la figura 1 se muestra la separación por HPLC de una mezcla de las siguientes sustancias:
O O
NH
N O
H
1 2 3 4 5 6
Problema 5:
Con el objetivo de aislar los componentes principales (A-E) de una hierba aromática se sometió la
planta al siguiente tratamiento: una destilación de arrastre por vapor a pH=7. El destilado se extrae
con CH2Cl2 y la fase orgánica se analiza por cromatografía gaseosa.
O OH O
HO OH CH2 O C (CH2)12CH3 C NH3
O
O CHOH NH3
HO O CH2
OH
A B C D E
Fase Orgánica (FO1)
CH2Cl2
Destilado
Hierba 1. H2O, pH=7 Fase acuosa (FA1)
Aromática 2.Arrastre por
vapor Residuo (R1)
a) Indique en qué fracción (R1, FO1, FA1) se encuentra cada componente. Justificando la respuesta.
b) El análisis por cromatografía gaseosa de FO1 arrojó los siguientes resultados:
(los cromatogramas se realizaron a igual flujo de gas portador)
1. t=220 ºC 2. t=100 ºC