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COMPTE RENDU DE LA PRSENTATION DE PHILIPPE DELFOSSE

(CENTRE DE RECHERCHE PUBLIC GABRIEL LIPPMANN)

MICROBIOLOGIE DE LA DIGESTION
ANAEROBIE
La prsentation de Philippe Delfosse intervient dans le cadre de la rencontre du 10 et 11
fvrier 2010 organise par lAssociation des Agriculteurs Mthaniseurs de France.
Philippe Delfosse est chercheur au Centre de Recherche Public Gabriel Lippmann au
Luxembourg dans le laboratoire environnement et agro-biotechnologies. Il travaille
principalement sur la mthanisation et plus particulirement sur les ractions biologiques mises
en jeu lors de la digestion anarobie. Au travers de cet expos intitul Microbiologie de la
digestion anarobie, il va nous prsenter dans un premier temps les principes biologiques de la
digestion anarobie. Dans un second temps, il abordera une partie plus pratique en prsentant
les bonnes pratiques mettre en place pour assurer une mthanisation stable.

LA THEORIE DE LA METHANISATION (DIGESTION ANAEROBIE)


La mthanisation est un processus biologique naturel qui permet de convertir la matire
organique (glucides, lipides, protines) en lments simples (CH4, CO2, NH3 et H2S) grce
laction de bactries anarobies. Cette digestion anarobie, processus biologique complexe, peut
tre dcrit en quatre phases de dgradation : lhydrolyse, lacidognse, lactognse et la
mthanognse. Chaque phase fait intervenir un groupe de bactries particulires (figure 1).
Toutes les molcules qui ne seront pas dgrades par cette voie pour produire du biogaz (lignine
par exemple) et les dchets de ces ractions anarobies composeront le digestat.

FIGURE 1 :SCHEMA RECAPITULATIF DE LA METHANISATION

Microbiologie de la digestion anarobie

Chaque groupe de bactries possde des caractristiques spcifiques (pH, temprature,


sensibilit { des composs particuliers). Nous allons prsenter rapidement les proprits des
populations bactriennes de chacune des phases de la mthanisation.

LHYDROLYSE

Les bactries hydrolytiques dgradent la matire


organique fraiche (les polymres) en fragments solubles
(monomres). Ces bactries produisent des exo-enzymes qui
vont dgrader les polymres de la matire organique. Les
vitesses de dgradation dpendent des substrats. (figure 2).
Ainsi il est important de bien brasser le milieu afin
dhomogniser la solution et doptimiser lhydrolyse. Cette
tape est fondamentale pour la suite de la raction car elle
permet de fractionner la matire organique et donc de faciliter
laction des bactries qui interviennent par la suite.
FIGURE 2 : VITESSE DE DEGRADATION
PAR LES BACTERIES HYDROLYTIQUES
EN FONTION DU SUBSTRAT
TABLEAU 1 : CARACTERISTIQUES DES BACTERIES HYDROLYTIQUES

caractristiques
gamme de pH optimal
temps de division
sensibilit

Bactries hydrolytiques
bactries relativement rsistantes, tolrantes O2,
production dexo-enzymes
[4,5 6,3]
quelques heures (reproduction rapide)
lignine (pas dgradable, ralenti la raction)

LACIDOGENESE
Les bactries acidognes dgradent les molcules simples de matire organique
(monomres) en acides et en alcools. Les acides synthtiss sont des Acides Gras Volatils (AGV).
Ces AGV sont des acides avec une chaine carbone plus ou moins longue (de 2 10 atomes de
carbone en gnral).
TABLEAU 2 : CARACTERISTIQUES DES BACTERIES ACIDOGENES

caractristiques
gamme de pH optimal
temps de division
sensibilit

Bactries acidognes
bactries sensibles O2, participent en gnral
galement { lhydrolyse
[4,5 6,3]
quelques heures (reproduction rapide)
H2S, NH3, sels, antibiotiques

Microbiologie de la digestion anarobie

LACETOGENESE
Les bactries actognes vont transformer les AGV en acide actique (CH3-COOH) et en
H2 et CO2. Ces molcules vont ensuite servir de substrat aux bactries mthanognes. Les
bactries actognes produisent de lH2 mais leur activit est inhibe par un excs de H2 dans le
milieu. Ainsi, la symbiose de ces bactries avec les bactries consommatrices dH2
(mthanognes notamment) est indispensable pour garantir une bonne activit bactrienne
dans le digesteur. Les actognes et les mthanognes vivent fixes les unes aux autres, une
agitation rapide risque de dtruire ce lien do la recommandation dun brassage lent.
TABLEAU 3 : CARACTERISTIQUES DES BACTERIES ACETOGENES

caractristiques
gamme de pH optimal
temps de division
sensibilit

Bactries actognes
bactries relativement fragiles, sensibles O2,
production de H2
[6,8 7,5]
quelques jours (1-4 jours ; reproduction lente)
H2 en excs, H2S, NH3, sels, antibiotiques, variations de
temprature

LA METHANOGENESE
La mthanognse constitue la dernire tape de dgradation anarobie de la matire
organique. Les microorganismes qui ralisent cette tape sont des archaebactries,
microorganismes proches des bactries, on les appelle bactries mthanognes par abus de
langage. On distingue deux groupes de bactries mthanognes, les hydrognotrophes (qui
utilisent H2 et CO2) et les actoclastes (qui utilisent lacide actique). Dans les deux cas, elles vont
rduire leur substrat en mthane (CH4). La composition moyenne du biogaz ainsi produit est un
mlange de CH4 (~60%) et de CO2 (~40%) avec des traces de H2S, de NH3 et de H2.
Ces bactries mthanognes ont comme particularit de se dvelopper en condition
anarobie stricte, elles sont totalement intolrantes { lO2. Elles ont galement besoin de nickel
(Ni) pour se dvelopper. Ainsi il est important de garantir une absence totale dO2 dans le
digesteur ainsi quun apport en Ni satisfaisant pour leur croissance (en gnral la quantit de Ni
contenue dans la matire organique entrant dans le digesteur est suffisante).
TABLEAU 4 : CARACTERISTIQUES DES BACTERIES METHANOGENES

caractristiques
gamme de pH optimal
temps de division
sensibilit

Bactries mthanognes
archaebactries trs fragiles, trs sensibles O2, besoin
de Ni, plusieurs substrats possibles
[6,8 7,5]
quelques jours (5-15 jours ; reproduction lente)
O2, variations de pH et temprature, Cu, sels

Microbiologie de la digestion anarobie

CONSEILS PRATIQUES POUR ASSURER LA STABILITE DE LUNITE


DE METHANISATION
Comme nous venons de le voir, lactivit bactrienne mise en jeu lors de la digestion
anarobie est trs complexe et trs sensible, il est donc important de mettre en uvre des
pratiques pour maintenir dans le digesteur des conditions favorables aux bactries et donc
maintenir un bon fonctionnement de lunit de mthanisation.
Les paramtres suivis sont souvent de nature conomique (directement ou
indirectement) ou agronomique comme le taux de charge du digesteur, le temps de sjour dans
le digesteur, le potentiel mthanogne du substrat, la quantit de biogaz produit ou encore la
qualit du digestat. Mais ces paramtres ne permettent pas dapprhender laspect biologique
dans le digesteur. Il est important de suivre quelques paramtres dordre biologique afin de
prvenir et de maitriser les perturbations possibles du process, comme les intoxications des
bactries. Nous allons prsenter quelques exemples dintoxication ainsi que les solutions
possibles pour y remdier.

INTOXICATION AUX AGV : ACIDOSE


Lacidose correspond { la chute du pH dans le digesteur, entrainant un
disfonctionnement des bactries mthanognes et donc un diminution de la production de
biogaz. Lacidose peut tre due { un substrat trop abondant et trop fermentescible (forte activit
dhydrolyse et dacidognse, donc accumulation dAGV) ou { une inhibition des bactries
actognes ou mthanognes (variation de temprature, prsence dantibiotique, dH2S, de
mtaux lourds).
Les consquences de cette intoxication sont la baisse du pH, la diminution de la quantit
de biogaz produite et la perte de qualit du biogaz (augmentation de la concentration en CO 2).
Lorsque lon dtecte ces problmes, il est dj{ trop tard, le disfonctionnement est install.
Certains paramtres peuvent permettre de prvenir lintoxication :
Laugmentation de la pression partielle dH2 dans le biogaz, lH2 tant un inhibiteur des
bactries actognes, son augmentation traduit un dbut de disfonctionnement. Cette
mesure peut se faire { laide dune sonde { H2, cependant des erreurs de mesure peuvent
se produire cause de lH2S et du NH3, des recherches sont en cours pour amliorer les
sondes (capteur membrane spcifique H2).
La diminution de lalcalinit totale (pouvoir tampon) du milieu. Pour se faire, on peut
raliser la mesure du TIC (Carbone Inorganique Total), celle-ci est encore aujourdhui
difficilement ralisable sur site, mais de nouveaux appareils de mesure sont dvelopps.
Laccumulation dAGV et le changement de composition (de plus en plus dAGV de grande
taille). On peut suivre deux indicateurs, la concentration totale en AGV et le rapport acide
actique (deux carbones) sur acide propionique (trois carbones). Mais ces mesures
ncessite du matriel de laboratoire, donc difficilement ralisable sur site.
Quand lacidose est dtecte, larrt de lapport de substrat, le mlange du milieu pour
favoriser lactivit des bactries et lajout dune base (NaHCO3 par exemple) peuvent permettre
au systme de redevenir fonctionnel.
Remarque : lacidose est souvent ltape finale des autres intoxications. Un disfonctionnement dune
tape va entrainer une accumulation dAGV, donc une chute du pH et lacidose.

Microbiologie de la digestion anarobie

INTOXICATION A LAMMONIAC (NH 3 ) : ALCALOSE


Comme nous lavons vu prcdemment, le NH3 est toxique pour les bactries acidognes
et actognes. Par contre lhydrolyse et la mthanognse sont encore fonctionnelles tant que du
substrat est disponible pour ces bactries. Ainsi on observe dans le digesteur une accumulation
des produits de lhydrolyse (acides amins, acides gras) et une diminution de la quantit de
biogaz produit (mais mme qualit).
Pour dtecter cette intoxication, on peut mesurer la concentration en NH3 dans le
digesteur. Les mthodes jusqualors disponibles taient ralisables hors site et ncessitaient un
matriel de laboratoire (titrage automatique) ou bien ntaient pas pratiques (test
colorimtrique). Une nouvelle technologie venue dAllemagne permet de simplifier la
manipulation et de la raliser sur site. Cette mthode est simple et robuste mais utilise des
produits dangereux (soude concentre et oxydant fort), elle ncessite donc une attention
particulire et une protection lors de la manipulation.
Cet excs de NH3 dans le digesteur peut tre la consquence dun substrat en entre trop
riche en protine (forte teneur en N C/N < 30) comme les lisiers ou les fumiers de volaille par
exemple. Pour remdier ce problme il faut apporter un substrat moins riche en protine et
fortement fermentescible (C/N > 30) pour relancer lactivit des bactries.

INTOXICATION AU DIHYDROGENE DE SOUFFRE (H 2 S)


Tout comme le NH3, le H2S a un effet inhibiteur sur lactognse et lacidognse. Les
consquences sur lactivit bactrienne sont donc semblables une intoxication au NH3, on
observe une accumulation des produits de lhydrolyse et une diminution de la quantit de biogaz
produit.
Pour essayer de dtecter cette intoxication avant quil ne soit trop tard, on peut suivre la
composition du biogaz et en particulier la concentration en H2S. Des sondes existent pour
raliser de telles mesures en continue dans le biogaz.
La forte prsence de protines dans le substrat est, comme pour le NH3, responsable de
cette intoxication. En effet, les protines contiennent du souffre, en faible quantit dans certains
acides amines (cystine et mthionine). Une attention particulire doit donc tre porte la
qualit du substrat pour viter cette intoxication.

INTOXICATION A LOXYGENE (O 2 )
LO2 inhibe quasiment toutes les phases de la mthanisation mis { part lhydrolyse qui
peut persister en milieu arobie. Ainsi on observe une accumulation des produits de lhydrolyse
et un arrt de la production de CH4.
La principale source dO2 dans le digesteur est lintroduction par les substrats poreux
(comme la paille par exemple) ou par des erreurs de manipulation qui entrainent une entre
dair dans le digesteur. La prsence doxygne peut se dtecter facilement par un capteur dO 2
dans le digesteur (mesures en continue). Afin de palier { ce problme il est prfrable dutiliser
des substrats denses, et dans le cas des pailles, il est recommander de la dfibrer avant (pas de
soucis avec la paille pitine par les animaux prsente dans les fumiers).

Microbiologie de la digestion anarobie

INTOXICATIONS AUX METAUX LOURDS (CUIVRE, ZINC) ET AUX


ANTIBIOTIQUES, DESINFECTANTS
Ces intoxications sont causes par des substances initialement prsentes dans le
substrat, contaminations : aux mtaux lourds dans les lisiers, aux mdicaments animaux (pour
traiter les mammites par exemple) dans les djections, aux dsinfectants de la salle de traite
dans les eaux de lavage Dans tous les cas, ces intoxications entrainent linhibition des bactries
acidognes, actognes et mthanognes, et donc une diminution de la production de biogaz et
une accumulation dAGV, ce qui entraine une baisse du pH et donc un risque dacidose (cf. cidessus).
Le facteur dterminant pour ces intoxications est donc la qualit des substrats introduits
dans le digesteur, il est donc primordial de bien connaitre ces substrats et donc de les faire
analyser en laboratoire pour viter ensuite toute dconvenue qui aurait pu tre vitable.

CAS PARTICULIER DE LA CARENCE EN NI


Les bactries mthanognes ont besoin de Ni pour se dvelopper. Hors le Ni peut faire
dfaut dans le substrat, il faut donc connaitre la composition des substrats pour apporter la
bonne ration aux bactries mthanognes. Une carence en Ni entraine linhibition de la
mthanognse donc la diminution de la production de mthane ainsi que laugmentation de la
concentration en AGV, donc la diminution du pH et un risque dacidose.
Certains remdes miracles pour apporter du Ni au milieu existent, mais leur efficacit
nest pas encore prouve.
Cependant, il est important de noter que ce problme intervient surtout en Allemagne o
les cultures nergtiques sont fortement utilises comme substrat pour la mthanisation, or ces
cultures sont gnralement pauvres en Ni, do les carences observes. En France, compte tenu
de la diversit et de la qualit des substrats utiliss dans les units de mthanisation, ce
problme ne devrait pas se poser.

CONCLUSION
La digestion anarobie fait intervenir un trs grand nombre de bactries et de ractions
biologiques, il sagit donc dun processus trs complexe. De plus il est impossible de gnraliser
toutes les approches car chaque digesteur est unique compte tenu du process mis en jeu, des
substrats utiliss, des populations bactriennes en prsence
Le principal conseil que lon peut apporter est davoir une bonne connaissance de tous
les substrats que lon introduit dans le digesteur (attention aux substrats ne provenant pas de
lexploitation) pour viter toute contamination facilement vitable (mtaux lourds,
mdicaments, dsinfectants antibiotiques). Ensuite il est galement conseill de raliser un
suivi de certains paramtres biologiques afin de prvenir les intoxications possibles et donc la
perte de productivit de lunit de mthanisation. On peut prconiser un suivi sous la forme
suivante :

Microbiologie de la digestion anarobie

Suivi quotidien ou continu de la temprature, du pH, des teneurs en CH4, CO2, H2S, O2 ,H2
et NH3 si substrat risques (riche en protines)
Suivi hebdomadaire ou bihebdomadaire du pouvoir tampon (TIC) et des teneurs en AGV
pour prvenir les variations de pH
De plus, il est prconis disoler les animaux malades pour viter les contaminations
mdicamenteuses, de faire attention aux concentrations en sels (KCl, NaCl) lorsquon utilise
des boues de STEP et dviter au maximum dintroduire des substrats riches en lignine et des
matires inertes dans le digesteur (plastique, verre, silice). Enfin, il est important de maintenir
une temprature constante dans le digesteur car certaines bactries sont sensibles aux
variations de temprature.

Microbiologie de la digestion anarobie

Microbiologie de la Digestion
Anarobie

Partie Thorique

Philippe DELFOSSE
delfosse@lippmann.lu

AILE, Rennes, 21 juin 2011

Digestion Anarobie ?

Solubilit des gaz dans leau

Processus biologique complexe de conversion de


la matire organique en:
CH4, CO2, NH3, H2S
Equation gnrale: (Buswell & Mller, 1952)
CcHhOoNnSs + y H2O x CH4 + n NH3 + s H2S + (c-x) CO2
SUCRES:
C6H12O6 3CO2 + 3 CH4
LIPIDES:
C12H24O6 + 3 H2O 4.5 CO2 + 7.5 CH4
PROTEINES: C13H25O7N3S 6.5 CO2 + 6.5 CH4 + 3 NH3 + H2S
Substrats

hydrates de carbone
Lipides
Proteines

Production thorique Composition thorique


de biogaz
de biogaz
Nl/kg DOM
746
1390
800

CH4 (%)
50
72
60

CO2 (%)
50
28
40

Protines: CO2 se lie NH3 et


H2S reste principalement en
phase liquide CH4 60%

Digestion Anarobie ?

La Digestion Anarobie
Caractristiques

Processus biologique complexe qui peut


tre dcrit en 4 phases de dgradation :
1. Hydrolyse
2. Acidognse
3. Actognse
4. Mthanognse

pH

Polymres complexes

Hydrol
Hydrolyse

Monomres, Dimres, a.a., ac. gras

Acidognse

temps

4.5 6.3

heures

4.5 6.3

heures

6.8 7.5

1-4 jours

AGV, CO2, H2, Alcooles


cool

Acetognse
Acide Actique

Mthanognse
ns
CH4, CO2

6.8 7.5 5-15 jours

O2

Les facteurs limitants et dinhibition

lignine, mlange

Exoenzymes produits par des bactries anarobies


facultatives ou obligatoires dgradent les substrats
insolubles (polymres: cellulose, hmicellulose, amidon,
protines, lipides) en fragments solubles (monomres)

H2S, NH3, sels,


antibiotiques

Les bactries anarobies facultatives consomment lO2


dissout dans leau et causent de ce fait une rduction du
potentiel redox ncessaire au dveloppment des bactries
anarobies strictes.

Polymres complexes

Hydrolyse
Hydrol
exo-enzymes

Monomres, Dimres, a.a., ac. gras

Acidognse

AGV, CO2, H2, Alcools


cool

Excs H2, H2S, NH3,


sels, antibiotiques, T

Acetognse
Acide Actique

O2, pH, T, Cu, sels,


carence en Ni
Etroite association/actions concertes !

Mthanognse
CH4, CO2

1 HYDROLYSE

Glucides qqus heures


Protides et Lipides qqus heures qq
qqus jours
j
Lignocellulose qqus semaines
Lignine indigestible

2 Acidognse

Bactries hydrolysantes
Genre

Species

Description

Bacteroides

uniformis
acidifaciens
vulgatus
ruminicola

immobiles, Gram-neg, btonnets

Lactobacilus

pentosus
plantarum

immobiles, Gram-pos, btonnets


endospores

Propioni-bacterium

microaerophilium
propionicus
cyclohexanicum

immobiles, Gram-pos, btonnets


spores

Sphingomonas

subterranea

prsentes dans les sdiments profonds

Sporobacterium

olearium

Megaspheara

elsdenii

rumen

Bifidobacterium

Substrate

Inorganic

H 2O

Organic fraction

Carbohydrates

Proteins

Lipids

Monosaccharides

Amino Acids

Long Chain Fatty Acids

Anaerobic
Digestion
Volatile Fatty Acids
(VFA)

HPr, HBu, HVa,

HAc
CH4

HVa: valeric acid (C5)


HBu: butyric acid (C4)
HPr: propionic acid (C3)
HAc: acetic acid (C2)
2

Bactries acidognes
La majorit des acidognes participent aussi lhydrolyse !
Genres: Clostridium, Ruminococcus, Paenibacillus

Bactries acidognes
2. Ruminococcus: Glucides Acetate, Formate, Succinate, Lactate
EthOH, H2, CO2

1. Clostridium: grand groupe diversifi

3. Paenibacillus: Glucides Acetate, Formate, Lactate, Propionate


Clostridium tetani (ttanos) Clostridium botulinum (botulisme) ?

3 Acetognse

3. Actognse

Les actognes produisent obligatoirement H2

Bactries homoacetognes rduisent lH2 et CO2 en Actate

Inhibition si forte pression partielle en H2


Symbiose ncessaire avec des bactries consommatrices dH2

Bactries acetognes

4. Mthanognse

Symbiose obligatoire avec des bactries consommatrices de H2


Rgnration = 84 h
Acides organiques, Alcooles, a.a. Acetate, CO2, H2

Actoclastiques

Bactries methanognes

Bactries methanognes
Bactrie mthanogne
en symbiose avec le
protiste Nyctotherus
ovalis (dehydrogenase
coenzyme F )
Bactries primitives = Archaea
Possdent le co-facteur F420 (transporteur dH2, autofluorescent)
Principaux = Methanobacterium, Methanospirillum, Methanosarcina
Archaea methanognes =
Anaerobie stricte !!!
Substrats = acetate, formate, methanol/H2, H2/CO2
Nikel dpendantes
420

Methanosaeta

Hydrognotrophes

bactries hydrognotrophes
H2
CO2

CH4

METHANOGENESE
CO2

acide actique

bactries actoclatiques

methanol

bactries methyltrophiques

CH4

CH4

Methanosarcina
1

Comptition Bactrienne
Bactries rduisant les sulfates
Rduisent le SO42- en H2S en utilisant lactate et H2
consomment les deux substrats principaux de la mthanogense
Il faut maintenir un ratio Substrat/ SO42- > 3
Desulfobacterales
Desulfovibrionales

Comptition Bactrienne
Bactries homoactognes
Rduisent H2 et CO2 en Actate
consomment lH2
comptition avec les mthanognes hydrognotrophes (!)
favorisent les mthanognes actoclastiques (=actotrophes)
Digesteurs agricoles

Syntrophobacterales
Pass: CH4 70% viendrait AcAc et 30% CO2 + H2 = CH4
Depuis Klocke 2007 et 2008 linverse a t dmontr !

Thermodesulfobacteria

Desulfovibrio vulgaris

Biogaz la ferme

Partie Pratique

Les paramtres utiles suivre


et les bonnes pratiques pour assurer une
biomthanisation stable

La Biomthanisation la ferme

La Digestion Anarobie

Substrats = Matire organique :

CH4, H2

Vg (m3/j)

Djections animales

CO2, H2S, H2O

%CH4 %CO2

Production vgtale

Digestats :

Sous-produit de lagro-

Caractristiques
pH

Polymres complexes

Hydrol
Hydrolyse

4.5 6.3

heures

4.5 6.3

heures

6.8 7.5

1-4 jours

MO non digre

alimentaire, mnages,

Vr (m3)

Vs (m3/j)

T, pH

ms (kg/j)

Mlange
Et la BIOLOGIE

N, P, K
Odeur rduite

Monomres, Dimres, a.a., ac. gras

VD (m3/j)

mD (kg/j)

Acidognse

AGV, CO2, H2, Alcoles


cole

Acetognse
A. Quel substrat ? (qualit, digestibilit)

Quel approvisionnement ? OLR = mS x [DOM] / Vr (DOM kg/m3j)


Quel temps de sjour ? HRT = Vr / Vs (j)

temps

C. Les digestats peuvent-ils


encore produire du CH4 de
manire rentable ?

B. Phnomnes dindigestion ? Acidose, Intoxication NH3, mtaux lourds, antibiotiques, sels, T

Acide Actique

Mthanognse
ns
CH4, CO2

6.8 7.5 5-15 jours

O2

Perturbations du processus

Les facteurs limitants et dinhibition

Intoxication due aux AGV (Acidose, pH<7)


Intoxication due NH3 (NH4>3kg/m3 dig.)
Intoxication due H2S (H2S>50 mg/l dig.)
Intoxication due lO2 (O2>0.1 mg/l dig.)
Intoxication due aux mtaux lourds
(Cu, Zn, Cr, Pb, Fe, Cd)
Intoxication due aux
antibiotiques/dsinfectants etc

Polymres complexes

Hydrol
Hydrolyse

lignine, mlange

exo-enzymes

Monomres, Dimres, a.a., ac. gras

H2S, NH3, sels,


antibiotiques

Acidognse

AGV, CO2, H2, Alcools


cool

Excs H2, H2S, NH3,


sels, antibiotiques, T

Acetognse
Acide Actique

O2, pH, T, Cu, sels ,


carence Ni
Etroite association/actions concertes !

Mthanognse
ns
CH4, CO2

Acidose

Que se passe-t-il ?
Origine ?
Comment les dtecter ?
Comment y remdier ?

Acidose : Que se passe-t-il ?


Polymres Complexes
Carbohydrates, Lipids, Proteins, Ac nucliques

Que se passe-t-il ?
Origine
Comment la dtecter temps ?
Comment y remdier ?

monomres, dimres

Signes annonciateurs
Accumulation:
H2 et CO2
acides organiques
Chute:

AGV : Ac., Prop., But,


Alcools, Acetone, CO2,

H2
Bact. Acetognes

Acetogenesis
H2, CO2

1. Paramtres communment disponibles sur site

Bourbes de vinification (riche en sucres solubles)


80

70

60

gas (m3/t)

50

40

30

CH4 (m3/t FM)


CO2 (m3/t FM)

20

Chute de production de biogaz


Perte de qualit du biogaz (CH4 < 50%, CO2 > 50%)
pH < 7
Dplacement de lH2S vers la phase gazeuse

10

0
0

100

200

300

400

500

600

700

800

900

heures

Inhibition des METHANOGENES par:

T
Cu, Zn, Cr, Pb,
O2 (introduit avec les substrats)
Carence en Ni

Bact. Methanognes

CH4 + CO2

Acidose : Comment la dtecter ?

Alimentation excessive
Substrats trop fermentescibles
Inhibition des ACETOGENES par:
Antibiotiques, dsinfectant
T
H2S (protines)
Sels (STEP)

Bact. Acidognes
Acidog

Acidogenesis

Methanogenesis

CH4, m3 biogaz

Acidose : Origine ?

sucres, acides gras branchs, a.a.,

Acetate

pH

Bact.Hydrolytiques

Hydrolysis

SOUVENT IL EST DEJA TROP TARD !!!

Pression partielle en HYDROGENE (H2)

Acidose : Comment la dtecter ?

Le plus prcoce = H2 puisquil


inhibe le processus
H2 est quasi insoluble dans leau et
se retrouve donc dans la phase
gazeuse
mesurer la pression partielle en H2
dans le biogaz 1ppm < H2 < 100
ppm
Dtecteur H2 prix abordable
existe aujourdhui sur le march
Attention aux interfrences avec
H2S et NH3 capteur spcifique
phase de dveloppement

2. Paramtres plus srs car prcurseurs de lacidose


Augmentation de la pression partielle en H2
Chute de lalcalinit totale = pouvoir tampon
= amortisseur dacidit
Accumulation des AGV et modification de la balance en
AGV (proprotion dAc Ac chute alors que Prop, But,
Val augmentent)

Projet INTERREG IV A OPTIBIOGAZ

Suivi de lHydrogne
2500

H2S

biogas rate

H2

feeding rate

CH4

CO2

350

300
2000
250

1500

200

150
1000
100

1100.0

900.0

700.0

500.0

300.0

100.0

Date

0
09/08

11/08

13/08

15/08

17/08

19/08

21/08

23/08

25/08

27/08

Pilot 1

Pilot 2

Pilot 3

Pilot 4

29/08

Date

Chute de lalcalinit totale

Comment mesurer lalcalinit totale (TIC) ?

Alcalinit totale = pouvoir tampon = amortisseur dacidit


Principal acteur = CO2 = carbone inorganique (TIC ou TAC)
Tampon d'acide carbonique (H2CO3) et de hydrognocarbonate
(HCO3-) maintient le pH entre 7,35 et 7,45.

Titrateur automatique
TAC=
TIC

20ml
M TAC 250
V

TIC: Total Inorganic Carbonate (mg/kg)


V:

volume of sample (mL)

MTAC : amount of 0.05 M sulfuric acid im mL


pH

AGV

6.5

10.4

Problmes:
TIC

Ralis en laboratoire
Forte production de mousse (CO2)

Utilisation H2SO4 [conc]


Source: Melanie HECHT, unpublished

www.hach-lange.de

Sonde pH pour solution organique

2011-06-26 00:00

2011-06-16 00:00

2011-06-06 00:00

2011-05-27 00:00

2011-05-17 00:00

2011-05-07 00:00

2011-04-27 00:00

-100.0

2011-04-17 00:00

50

1300.0

2011-04-07 00:00

500

Hydrogen
1500.0

H2 [ppm]

Temperature decrease

CH4, CO2 (%) and H2 (ppm) concentration, biogas production rate (mL/min)
and feeding rate (g/100L)

Double feeding rate

H2S concentration (ppm)

Suivi de lHydrogne

400

3000

Le QUANTOFIX ou lAGRO-LISIER pourraient tre adapts

Comment mesurer lalcalinit totale (TIC) sur site?

TIC
-CO2 + H2O H2CO3

Coopagri Bretagne, mars 1995

http://www.biogaspro.de/index.html

CH3-COOH
CH3-CH2-COOH
CH3-CHOH-COOH
CH3-(CH2)2-COOH
CH3-(CH2)3-COOH
CH3-(CH2)4-COOH
CH3-(CH2)6-COOH
CH3-(CH2)8-COOH

Extraction par entranement la vapeur et


titration (AGV tot), Chromatographie
Les premiers saccumuler sont les AGV de
taille suprieure lacetate. Accumulation du
propionique au dtriment de lactique
Les AGV branchs (isoBut, isoVal) sont plus
difficilement transforms en Actate
[Ac Actique] / [Ac propionique] 3 est OK

4.50

3.00

2.00

- i-Butyric acid

Chaque digesteur est unique !

C2 Ac Actique
C3 Ac Propionique
C3 Ac Lactique
C4 Ac Butyrique
C5 Ac Valrique
C6 Ac Caproque
C8 Ac Caprylique
C10 Ac Caprique

- n-Butyric acid

Dans la pratique il ny a pas de


valeur standard pour les AGVtot

Lactic acid
- Acetic acid

Lorsque lAcetogense est inhibe par lexcs dH2, les AGV de


taille suprieure lactate (C2) saccumulent
Le premier saccumuler est lAc propionique (C3)

Spectre en AGV

- Propionic acid

Accumulation des AGV tot et modification de la


composition en AGV

1.00

0.00
min
10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0

Perturbations du processus

Acidose : Comment y remdier ?


Stopper lalimentation !!!
Mlanger pour favoriser les changes entre bactries
Diluer ?
Ajout de NaHCO3 (CaO, CaCO3)
Raction rapide

Augmentation du pH et de la capacit tampon des digestats


Faire un test prliminaire (10 litres de digestat + incrment de 1 g de
NaHCO3 jusqu un pH de 7.8 puis extrapoler au volume du digesteur)
Un stock de scurit de 500 kg est recommandable

Dvier le digestat acidifi vers un mthaniseur lit fixe

Intoxication due aux AGV (Acidose, pH<7)


Intoxication due NH3 (NH4+ > 3kg/m3 dig.)
Intoxication due H2S (H2S > 50 mg/l dig.)
Intoxication due lO2 (O2 >0.1 mg/l dig.)
Intoxication due aux mtaux lourds
(Cu, Zn, Cr, Pb, Fe, Cd)
Intoxication due aux
antibiotiques/dsinfectants etc

Que se passe-t-il ?
Origine ?
Comment les dtecter ?
Comment y remdier ?

Intoxication NH3

Intoxication NH3 : Que se passe-t-il ?


Excs de protines dans la ration
Polymres Complexes
Carbohydrates, Lipids, Proteins, Ac nucliques

Que se passe-t-il ?
Origine
Comment la dtecter temps ?
Comment y remdier ?

Hydrolysis
monomres, dimres
sucres, acides gras branchs, a.a.,

Accumulation dNH3 dans le


digestat pH augmente !
Effet inhibiteur principal de NH3
sur les Actognes et les
Acidognes

Acidogenesis
AGV : Ac., Prop., But,
Alcools, Acetone, CO2,

H2

Acetogenesis
Acetate

H2, CO2

LHydrolyse et la Mthanogense
fonctionnent
Accumulation de monomres,
AGV de grande taille, acides
amins, sucres, alcools, actone,

Methanogenesis
CH4 + CO2

CH4/CO2 reste favorable !!!


Nm3 biogaz chute

Intoxication NH3 : Origine ?


NH3 > 3 kg/m3 de digestat

Substrats riches en protines

Les bactries montrent en


gnral une bonne capacit
dadaptation

Rapport C/N < 30

Si le pH ou la T augmente le
N-NH3 devient encore plus
toxique (fragilit thermophile)

Intoxication NH3 : Comment la dtecter ?


Hors site
Titrateur automatique

Mthodes colorimtriques

Gluten, protines animales,


lisiers, fumier de volaille,

Problmes:

Prparation de lchantillon

NH3 + H2O NH4+ + OHCest la forme N-NH3 qui est toxique !

Comment mesurer NH3 sur site ?


Ajout dune base en excs

www.hach-lange.de

Forte dilution ncessaire

Le QUANTOFIX ou lAGRO-LISIER pourraient tre adapts


N-NH3
NH3+NaOCl NH2Cl+NaOH
NH2Cl+NaOCl NHCl2+NaOH
NHCl2+NaOCl NCl3+NaOH

Et dun oxydant fort NaOCl


NH4+ est converti en NH3 qui est a
son tour oxyd en NCl3 insoluble
On mesure le volume de NCl3
produit par dplacement de la
colonne deau
Pro: Simple et robuste
Con: NaOH [conc] et oxydant fort
PROTECTION
Coopagri Bretagne, mars 1995

Exemple dintoxication NH3

Intoxication NH3 :

Que faire ?

Peu de recommendation dans la litterature !

No
Dsignation
laboratoire
de
lchantillon

pH

Total des
acides gras
volatils en
mg/kg dans
la matire
telle quelle

Acide
actique
en mg/kg
dans la
matire
telle quelle

Acide
propionique
en mg/kg
dans la
matire telle
quelle

Acide
isobutyrique
en mg/kg
dans la
matire telle
quelle

Acide
butyrique
en mg/kg
dans la
matire telle
quelle

Acide
isovalrique
en mg/kg
dans la
matire telle
quelle

Acide
valrique
en mg/kg
dans la
matire
telle quelle

Acide
caproque
en mg/kg
dans la
matire telle
quelle

1726/09

Digesteur 1

1727/09

Digesteur 2

7,9

9.433

3.906

4.418

314

71

593

119

12

8,0

1.597

187

1.390

10

1728/09

Digesteur 3

8,1

1.860

165

1.671

14

Stopper lalimentation avec le substrat fautif riche en


protines et source du NH3
Acidifier le digestat (AcAc), Diluer ??

Ralimenter prudemment avec un substrat fortement


fermentescible pour retrouver un rapport C/N favorable = 30 :
production dacide
chute du pH
NH3 passe sous forme NH4+
toxicit diminue
LAcetogense et lAcidogense reprennent

Perturbations du processus

Intoxication due aux AGV (Acidose, pH<7)


Intoxication due NH3 (NH4+ > 3kg/m3 dig.)
Intoxication due H2S (H2S > 50 mg/l dig.)
Intoxication due lO2 (O2 >0.1 mg/l dig.)
Intoxication due aux mtaux lourds
(Cu, Zn, Cr, Pb, Fe, Cd)
Intoxication due aux
antibiotiques/dsinfectants etc

Intoxication H2S

Que se passe-t-il ?
Origine
Comment la dtecter temps ?
Comment y remdier ?

Que se passe-t-il ?
Origine ?
Comment les dtecter ?
Comment y remdier ?

Intoxication H2S : Que se passe-t-il ?

Intoxication H2S : Origine ?

Excs de protines dans la ration

H2S > 50 mg/l de digestat

Accumulation d H2S dans le digestat

H2S 2 000 ppm biogaz

Polymres Complexes
Carbohydrates, Lipids, Proteins, Ac nucliques

Hydrolysis
monomres, dimres
sucres, acides gras branchs, a.a.,
Acidogenesis
AGV : Ac., Prop., But,
Alcools, Acetone, CO2,

H2

Acetogenesis
Acetate

H2, CO2

Methanogenesis
CH4 + CO2

Effet inhibiteur principal de H2S sur les


Mthanognes hydro-gnotrophes, moins
sur les actoclastiques, mais aussi sur les
Acidognes et Actognes
LHydrolyse et la Mthanogense
fonctionnent malgr tout

Accumulation de monomres, AGV de


grande taille, acides amins, sucres,
alcools, actone,

Substrats riches en protines

Kratine = corne, peau, poils,


plume
Si le pH chute H2S devient
encore plus toxique (HS- H2S) protines animales, lisiers,
fumier, colza et autres
crucifres (Brassicaceae)
Vitamines (biotine, thiamine,
A)
coenzyme A
-s-s-

CH4/CO2 reste favorable !!!


Nm3 biogaz chute

Mthionine

Cystine

Cest la forme H2S qui est toxique ! Structure spatiale des protines

Intoxication H2S : Exemple

Plumes :

Intoxication H2S : Comment la dtecter ?

CH4/CO2 reste favorable !!!

MS : 26,5 %

Nm3 biogaz chute

MOS : 95,6 %

Plumes de poulet : Production cumule de CH4 et de CO2


(MATIERE FRAICHE)

Rappel:
Analyseur de gaz sur site

Capteur lectrochimique

35.0

Production cumule de CH4 [Nm/ t FM]

30.0

Lintoxication l H2S provoque


principalement linhibition des
Actognes:
Accumulation des AGV

25.0

20.0

Chute du pH

15.0

HS- H2S

10.0

Dplacement vers la phase


gazeuse

CH4
5.0
CO2
0.0
0

10

15

20

25

30

35

40

Temps [Jours]

Plumes: faible digestibilit et risque de corrosion pour les digesteurs et les


groupes de cognration. (cornes, poils, plumes, colza, )

Dtection accrue d H2S dans


le biogaz
700 ppm Mort Immdiate

Que faire ?

Intoxication H2S :
Peu de recommendation dans la litterature !

Stopper lalimentation avec le substrat fautif riche en


protines soufres, repos
Reprendre lalimentation prudemment avec un substrat
fortement fermentescible pour retrouver un rapport C/N
favorable = 30 :
production dacide
chute du pH

CORROSION !!!

Perturbations du processus

Intoxication due aux AGV (Acidose, pH<7)


Intoxication due NH3 (NH4+ > 3kg/m3 dig.)
Intoxication due H2S (H2S > 50 mg/l dig.)
Intoxication due lO2 (O2 >0.1 mg/l dig.)
Intoxication due aux mtaux lourds
(Cu, Zn, Cr, Pb, Fe, Cd)
Intoxication due aux
antibiotiques/dsinfectants etc

H2S est dplac vers la phase gazeuse

Insufflation dO2 dans le biogaz

2 H2S + O2 S2 + 2 H2O (fleur de soufre, lmentaire)


LAcetogense et lAcidogense reprennent

Intoxication O2

Perturbations du processus

Que se passe-t-il ?
O2 > 0.1 mg/l digestat
Seul lHydrolyse fonctionne bien
Accumulation de monomres

Hydrol
olyse
ol
Hydrolyse

Origine
Introduction avec les substrats (pailles)
Dsulfurisation biologique (O2)

Comment la dtecter ?
Capteur O2 (biogaz)
Nm3 Biogaz chute
CH4 chute

Acidognse

Intoxication due aux AGV (Acidose, pH<7)


Intoxication due NH3 (NH4+ > 3kg/m3 dig.)
Intoxication due H2S (H2S > 50 mg/l dig.)
Intoxication due lO2 (O2 >0.1 mg/l dig.)
Intoxication due aux mtaux lourds
(Cu, Zn, Cr, Pb, Fe, Cd)
Intoxication due aux
antibiotiques/dsinfectants etc

Acetognse

Comment y remdier
di ?
Substrats denses
Contrle de la dsulfurisation biologique

Que se passe-t-il ?
Origine ?
Comment les dtecter ?
Comment y remdier ?

Mthanognse

Que se passe-t-il ?
Origine ?
Comment les dtecter ?
Comment y remdier ?

Intoxication aux mtaux lourds

Intoxication aux mtaux lourds

Que se passe-t-il ?
La mthanogense est inhibe
Les autres phases fonctionnent

Origine

Hydrolyse

Cu > 50 mg/l
Zn > 150 mg/l
Cr > 100 mg/l

Comment la dtecter ?

Acidognse

CH4 chute, AGV augmentent, pH chute = Acidose


Dosage des mtaux lourds en laboratoire
ICP-MS (Inductively Coupled Plasma - MS)
Acetognse

Comment y remdier ?
Eviter les substrats dorigine inconnue
NaHCO3

Perturbations du processus

Intoxication due aux AGV (Acidose, pH<7)


Intoxication due NH3 (NH4+ > 3kg/m3 dig.)
Intoxication due H2S (H2S > 50 mg/l dig.)
Intoxication due lO2 (O2 >0.1 mg/l dig.)
Intoxication due aux mtaux lourds
(Cu, Zn, Cr, Pb, Fe, Cd)
Intoxication due aux
antibiotiques/dsinfectants etc

Que se passe-t-il ?
Origine ?
Comment les dtecter ?
Comment y remdier ?

Mthanognse

Intoxication aux AB dsinfectants, etc

Que se passe-t-il ?

Acidogense et Actogense inhibes


Hydrolyse et Mthanogense fonctionnent

Origine

Mdication animale (mammite)


Bactriostatiques (levage porcin)
Dsinfectants (salle de traite)
Poubelle verte (AB usage humain)

Hydrolyse
Hydrol
olyse
ol

Comment la dtecter ?

CH4 CO2 biogaz chutent (Acidose ou Intox NH3)


Monomres augmentent
Dosage des xnobiotiques en laboratoire
HPLC

Acidognse
Acetognse

Comment y remdier ?
Eviter les substrats dorigine inconnue
Mthanognse
Sparer les animaux malades du troupeau
Stockage 2-3 semaines, la plupart sont dgrads

1. Les substrats rapidement hydrolyss


Substrats

Pomme de terre
Mlasse, Fruits

hydrates de carbone
Lipides
Proteines

Production thorique Composition thorique


de biogaz
de biogaz
Nl/kg DOM
746
1390
800

CH4 (%)
50
72
60

CO2 (%)
50
28
40

Crales en grain

INTERROGATION

Bourbes, Racines
Biogaz

Prenez un quart de feuille svp !

Substrat

Acides
organiques

digestion
rapide

Rq: Mme effet si on suralimente le digesteur

CH4
CO2

3. Les substrats lentement hydrolyss

2. Les substrats hydrolyss idalement

et fortement mthanognes

Cellulose

de part leur composition

Ensilage de mas et de crales immatures, fumier


(apport en bactries mthanognes),
Substrats

Graisses (insolubles dans leau)


Huiles

Production thorique Composition thorique


de biogaz
de biogaz
Nl/kg DOM
746
1390
800

hydrates de carbone
Lipides
Proteines

CH4 (%)
50
72
60

Biogaz

CO2 (%)
50
28
40

Substrats

CH4
Substrat
digestion
rgule

Substrat
Acides
organiques

CO2

Production thorique Composition thorique


de biogaz
de biogaz
Nl/kg DOM
746
1390
800

hydrates de carbone
Lipides
Proteines

CH4 (%)
50
72
60

Nl/kg DOM
746
1390
800

hydrates de carbone
Lipides
Proteines

CH4 (%)
50
72
60

CO2 (%)
50
28
40

CH4

Acides
organiques

CO2

Digestion en 2 tapes

fortement mthanognes
Dchets dabattoire

Production thorique Composition thorique


de biogaz
de biogaz

digestion
lente

4. Les substrats riches en protines


Substrats

Biogaz

Boues de laiterie, fromagerie, chocolaterie

CO2 (%)
50
28
40

Touteau de Colza

Dgradation de molcules
rcalcitrantes (ulvanes)
Hydrolyseur
Substrats fortement
dgradables prsentant un
CO2 H2
risque dacidose (fruits,
lgumes, racines, )
H2S
Fumier, ensilages

Biogaz

Protines riches en Mthionine et Cystine

Si Excs NH3 et H2S


CH4
Protines

Acides
organiques

On surralimente lHydrolyseur
Production rapide et importante dAcides organiques
Inhibition des Actognes et Mthanognes
Production de CO2 (80%) et dH2 (20%)
Mthaniseur
CH4 =70%

Ac org.

CO2

Analyse du digestat:

Diagnostic ?

Diagnostic ?

FOS: 17.300 mg/l


TAC: 24.800 mg/l

Ration:
1500 kg/j de crales
750 kg/j de contenu de pense de vache

750 kg/j graisses de flottation

Echantillon

pH

AGV
totaux
en
mg/kg
de MS

Acide
actique
en mg/kg
de MS

Acide
propionique
en mg/kg
de MS

FOS/TAC 0,70

Biogaz:

Biogaz:

pH 7,95

CH4: 58%

CH4: 48%

Ntot: 10 g/l

CO2: 41%

CO2: 50%

N-NH3: 7.9 g/l

Faible production

Faible production

Acide
isobutyriqu
e en mg/kg
de MS

Acide
butyrique
en mg/kg
de MS

Acide
isovalriqu
e en mg/kg
de MS

Acide
valrique
en mg/kg
de MS

Acide
caproque
en mg/kg
de MS

Digesteur 1

7.9

17300

6206

10018

514

71

593

119

12

Digesteur 2

8.0

1597

187

1390

10

Digesteur 3

8.1

1860

165

1671

14

Echantillon

pH

AGV
totaux
en
mg/kg
de MS

Acide
actique
en mg/kg
de MS

Acide
propionique
en mg/kg
de MS

Acide
isobutyrique
en mg/kg
de MS

Acide
butyrique
en mg/kg
de MS

Acide
isovalrique
en mg/kg
de MS

Acide
valrique
en mg/kg
de MS

Acide
caproque
en mg/kg
de MS

Digesteur

5.5

14 883

5 050

2 327

270

3 693

540

1 428

1 575

Conclusions
Connaissance des substrats
Suivi quotidien de la T, CH4, CO2, H2S, O2, H2
Suivi hebdomadaire du pouvoir tampon (TIC)
Suivi NH3 si substrats risques
Isoler les effluents des animaux malades
Attention aux mtaux lourds sous forme soluble (Cu, Zn)

Attention au sels (KCl, NaCl) STEP


Attention aux cosmtiques (SiH4, siloxanes)
Contrle rapproch de linsuflation dO2
Chaque digesteur est unique !

CO2

Merci !
Rfrences:
CH4
Dieter Deublein and Angelika Steinhauser. 2008. Biogas from
wastes and Renewable resources. Wiley-VCH Verlag GmbH & Co
KGaA, Weinheim, Germany. 443 pp. (ISBN 978-3-527-31841-4)
Michael H. Gerardi. 2003. The microbiology of anaerobic
digesters. Wiley-Interscience, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken,
New Jersey. 177 pp. (ISBN 0-471-20693-8)