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2 /2014
Enviado em:
27/06/2013
Publicado em:
27/10/14
ISSN: 2318-8790
ISSN (at 2012): 1677-2318
Maria Teresa Pedrosa Silva Clerici1*, Rodrigo Henrique Sebastio2, Larissa Conde Oliveira2, Maysa Sales
dos Santos2, Ana Lcia Leite Moraes3, Slvia Silveira Clareto3
Docente da Faculdade de Engenharia de Alimento, da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMPSP)
2
Discente da Universidade Federal de Alfenas (UNIFAL-MG)
3
Docente da Universidade Federal de Alfenas (UNIFAL-MG)
*e.mail: mclerici@fea.unicamp.br
1
Resumo
Este trabalho apresenta uma aula prtica sobre o grupo de enzimas polifenoloxidases, que so
responsveis pelo escurecimento enzimtico de frutas e hortalias. As amostras de vegetais passaram pelo
processo de inativao enzimtica com o uso de reagentes qumicos e pelo mtodo de branqueamento com
aplicao de calor (fogo convencional e forno de micro-ondas). Aps os tratamentos, a eficincia do
processo foi avaliada de forma qualitativa verificando-se a atividade da enzima peroxidase pelo teste com
guaiacol e aps estocagem sob refrigerao ou congelamento. Os resultados prticos obtidos nesta aula
permitem trabalhar conhecimentos multidisciplinares na rea de cincia dos alimentos, com aplicaes
prticas no cotidiano.
Palavras-chave: Polifenoloxidase, Escurecimento enzimtico, Branqueamento.
Abstract
This paper presents a practical class about the enzymes polyphenol oxidases, which have been shown to be
responsible for the enzymatic browning of fruits and vegetables. Vegetables samples were submitted to
enzymatic inactivation process with chemical reagents, as well as by bleaching methods of applying heat by
conventional oven and microwave oven. Process efficiency was assessed qualitatively by both observing the
guaiacol peroxidase activity and after the storage period under refrigeration or freezing. The practical results
obtained in this class allow exploring multidisciplinary knowledge in food science, with practical applications
in everyday life.
Keywords: Polyphenol Oxidase, Enzymatic Browning, Bleaching.
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1 Introduo
Fatos como a ao do detergente na loua engordurada, o efeito do cozimento em
ovos e o escurecimento de frutas e hortalias podem ser observados em nossa rotina
diria e tm suas explicaes embasadas na cincia, principalmente nas reas de
Qumica, Fsica e Biologia. Neste sentido a aula prtica aparece como instrumento
didtico adequado e eficiente para proporcionar a aplicao de conceitos existentes em
situaes cotidianas, visto que essa uma das questes atuais na prtica de ensino de
cincias [1].
As aulas prticas so capazes de abranger o contedo terico e possibilitar a
interao do aluno com a possibilidade de aplicao dos conceitos aprendidos, tudo isso
de maneira mais envolvente e dinmica. Mas tambm devem apresentar versatilidade
para que possam ser adaptadas e se adequarem as condies disponveis ao docente,
como j abordado nos trabalhos de Galvo [2] e de Oliveira [3], sendo que muitas escolas
possuem estruturas e recursos extremamente limitados.
Desta forma o trabalho apresenta e discute a aula prtica com os principais
conceitos que a envolve, de forma a proporcionar e instigar o pensamento multidisciplinar
dos alunos.
A seguir ser apresentado o referencial terico relacionado ao escurecimento
enzimtico e as principais reaes envolvidas, para que o aluno possa estudar
previamente o assunto, executar a atividade prtica, propor explicaes para o que foi
vivenciado na aula prtica e aplicar estes conhecimentos no cotidiano.
2 Referencial terico
Estima-se que 50% das frutas tropicais so perdidas devido s reaes de
escurecimento enzimtico. Frutas e hortalias que possuem enzimas do grupo das
polifenoloxidases, enzimas que catalisam as reaes de escurecimento enzimtico, so
totalmente susceptveis a deteriorao quando sofrem danos, cortes e at pelo prprio
manuseio do alimento. Estas reaes provocam mudanas na cor, textura e sabor em
bananas, mas, peras, batatas, cogumelos, hortalias e outros [4].
De acordo com Toms-Barvern e Espin [5], duas enzimas so relevantes na
degradao oxidativa dos compostos fenlicos por causarem a produo de polmeros de
colorao marrom (melaninas): a polifenoloxidase (PPO) e a peroxidase (POD).
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proteo dos tecidos vegetais contra os efeitos txicos da H2O2 formada durante o
metabolismo celular do vegetal;
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PPO + O2
PPO + O2
fenol
Pigmentos
Coloridos
OH
OH
OH
o-difenol
o-quinona
Aminocidos
Protenas
Compostos fenlicos
Figura 1. Reaes responsveis pelo escurecimento enzimtico de muitos produtos vegetais. Onde: PPO=
polifenoloxidase e R= radical.
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OCH3
OCH3
OH
+ 4 H2O2
4
Guaiacol
POD
OCH3
+ 8 H2O
OCH3
Tetraguaiacoquinona
(composto marron escuro)
Figura 2. Reao do guaiacol com a gua oxigenada (H2O2) catalisada pela peroxidase (POD) formando um
pigmento de colorao escura
3 Objetivo
3.1 Objetivo geral
Elaborar um roteiro de aula prtica para ensino de nveis mdio, tcnico e superior
nas reas de Biologia, Qumica, Alimentos (Tecnologia e Cincia de Alimentos, Farmcia,
Nutrio, Gastronomia e outros) apresentando e discutindo os processos de inativao
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4 Material e Mtodos
A descrio da metodologia e a discusso dos resultados apresentam algumas
legendas que envolvem conhecimentos especficos de Qumica () e Fsica () e os que
no esto com legendas se referem aos conhecimentos de Biologia e Bioqumica de
Alimentos.
4.1 Matrias-primas
Ma
Outros vegetais opcionais: pera, banana, vagem, couve-flor, batata e outras frutas
e legumes regionais.
4.2 Vidraria e utenslios
Bqueres com capacidade de 500 mL e 250 mL
Balo volumtrico de 100 mL
Balo volumtrico de 200 mL
Peneiras pequenas
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5 Procedimentos
5.1 Preparo das amostras
Neste trabalho foram utilizadas mas classificadas (sem danos fsicos e ntegras),
higienizadas por imerso em soluo de gua sanitria (ver item 3.4.1) por 15 minutos e
em seguida lavadas com gua potvel, conforme a Figura 3.
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Figura 4. Fluxograma do processo de inativao enzimtica das fatias de mas com os diferentes tipos de
tratamento
5.2 Controle
Trs fatias da fruta foram separadas e foi realizado o teste do guaiacol aps 5, 10 e
15 minutos, para comparao com os demais tratamentos.
Uma poro de ma foi embalada em embalagem plstica, o ar foi retirado e a
embalagem fechada (selamento ou fita adesiva). O produto foi identificado como amostra
sem tratamento (CTRL), datado e armazenado no freezer por sete dias. Este grupo foi
usado para avaliao comparativa dos resultados.
5.3 Branqueamento
5.3.1 Tratamento com reagentes qumicos
Uma poro da fruta foi colocada, de forma a ficar submersa, em cada uma das
solues dos diferentes reagentes por 5, 10 e 15 minutos (com agitao suave com uma
colher), na seguinte sequncia:
cido ctrico 1% (A1)
refrigerante, que possui cido fosfrico em sua composio (A2)
suco de laranja, que possui cido ctrico (A3)
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6 Resultados e discusso
6.1 Uso de reagentes qumicos para evitar o escurecimento enzimtico
A Figura 5 mostra os resultados para os diferentes tratamentos qumicos nos
tempos de 5, 10 e 15 minutos das fatias submersas nas solues e do grupo controle.
Enquanto as frutas permaneceram submersas nas solues, elas no escureceram,
porm ao serem retiradas da gua, foi possvel observar que a POD no foi inativada pela
ao dos reagentes usados, indicando que os reagentes cidos e o metabissulfito de
sdio impediram o escurecimento por mecanismos de atuao somente na PPO. Como o
trabalho foi desenvolvido por alunos, que colocaram as gotas dos reagentes para
obteno da reao de cor do guaiacol com a POD, a Figura 5 apresenta a informao de
que todos apresentaram reao positiva ao guaiacol, mas nada se deve afirmar sobre a
variao de colorao, pois outros fatores podem estar envolvidos, como tempo que era
indicado para drenar a fruta aps a retirada da soluo e quantidade de reagente utilizado
para teste da atuao enzimtica, uma vez que foi usado frasco com tampa conta-gotas.
O uso de agentes acidulantes so geralmente utilizados para manter o pH do meio
abaixo do timo para a ao cataltica das enzimas em alimentos. Neste caso, foram
usados cidos orgnicos, ctrico e actico, e o inorgnico, o cido fosfrico, presente no
refrigerante.
Os cidos atuam por dois mecanismos:
agem diretamente na PPO, complexando o cobre do grupo prosttico, causando sua
inibio; e
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O uso de metabissulfito de sdio em alimentos pode causar efeito adverso que pode ser
pela ingesto ou inalao. As reaes adversas provocadas pelos agentes sulfitantes
esto relacionadas principalmente deficincia da enzima sulfito-oxidase, naturalmente
presente nos seres humanos, como bronco-constrio, que prejudicial para pessoas
alrgicas e/ou portadoras de asma, entretanto seus mecanismos no foram totalmente
elucidados [11].
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Figura 5. Resultado do teste de guaiacol para as fatias de mas que sofreram tratamentos por ao de
reagentes qumicos.As frutas ficaram mergulhadas na soluo correspondente pelo tempo determinado,
depois foram retiradas, deixadas em peneira por dois minutos para drenar a soluo e em seguida foi
realizado o teste do guaiacol.
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Figura 6. Resultado do teste de guaiacol para as mas que receberam aplicao de calor para o
branqueamento em forno micro-ondas e fogo convencional. A fruta controle apresentou reao positiva ao
teste, enquanto as demais que foram mergulhadas em gua quente e mantidas aquecidas pelo tempo
necessrio para inativao enzimtica apresentaram teste negativo, indicativo de sucesso na desnaturao
da peroxidase.
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responsvel por diminuir a energia de ativao das enzimas, de maneira que elas no
so capazes de catalisar a reao. No congelamento realizado de forma lenta o efeito do
escurecimento ser mais rpido, pois a formao de cristais de gelo pode perfurar os
tecidos. Segundo Reis [8], as clulas de plantas intactas no escurecem por via
enzimtica porque os fenis e as PPO esto em diferentes compartimentos da clula
vegetal. J no congelamento rpido, normalmente utilizado pelas indstrias, no ocorre a
formao de cristais de gelo de dimenses que so capazes de influenciar na clula.
N a Figura 7, que mostra as fatias de mas tratadas com reagentes qumicos e
congeladas por 7 dias, pode-se verificar que houve reaes de escurecimento ocorridas
nas amostras controle (CTRL), com cido ctrico (A1) e com vinagre (A4), j nas demais
amostras o escurecimento ainda no se manifestou. Cabe ressaltar que aps tempo
prolongado de congelamento (acima de 15 dias) todas as frutas vo apresentar o
escurecimento, pois os grandes cristais de gelo vo danificar as frutas e fazer com que
haja interao do substrato com a enzima, na presena do oxignio dissolvido nas clulas
vegetais.
Na Figura 8 se apresentam as fatias de ma que foram tratadas termicamente por
forno convencional e por micro-ondas, verificou-se que o armazenamento durante os sete
dias de congelamento no mostrou escurecimento enzimtico. Este resultado era
esperado, pois este processo usado para desnaturao irreversvel de enzimas.
Desta forma, pode-se verificar que o congelamento no inativa as enzimas do
escurecimento e para que as frutas e legumes permaneam com a colorao tpica, as
indstrias costumam usar mtodos combinados de calor e uso de cidos ou
matabissulfitos, para diminuir o tempo de tratamento trmico e evitar grandes perdas de
textura, sabor e cor.
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Figura 7. Mas embaladas em sacos plsticos no primeiro dia de tratamento com reagentes (antes) e
aps sete dias de congelamento lento a -18C por 7 dias (depois). O controle no teve tratamento com
reagentes.
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Figura 8. Mas embaladas em sacos plsticos no primeiro dia de tratamento com calor (antes) e aps sete
dias de congelamento lento a -18C por 7 dias (depois). O controle no teve nenhum tratamento trmico.
7 Concluso
Pode-se, atravs desta aula, verificar que as enzimas que promovem o
escurecimento em presena de oxignio e compostos fenlicos so de grande
importncia para o processamento de produtos vegetais, principalmente frutas, legumes e
verduras, pois podem gerar compostos escuros que mudam a cor e o sabor destes,
diminuindo a aceitao sensorial. Portanto, aprender alguns processos simples de
inativao enzimtica poder contribuir para diminuir a perda de alimentos durante o
preparo e consumo.
Como aula interdisciplinar, foi possvel revisar conceitos prticos de Bioqumica, em
relao presena de enzimas em tecidos vegetais, atividade tima e desnaturao; de
Qumica, em relao acidez e pH de solues e tcnicas fceis de preparo de solues,
em relao Fsica, sobre os processos de transferncia de calor, e Cincia e
Tecnologia de Alimentos, os conceitos de higiene de vegetais, classificao, seleo,
processos e embalagem.
Todas as fotos presentes neste trabalho foram resultados de aulas prticas, onde
os alunos participaram ativamente deste processo e a avaliao desta aula foi realizada
com questes subjetivas em provas, onde foi solicitado aos alunos que propusessem
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mtodos possveis de manter uma mandioca descascada crua para venda em feiras.
8 Propostas de trabalhos
8.1 Prtica de branqueamento
Possibilidade de uso do processo de inibio da atividade enzimtica de
polifenoloxidases de diversas frutas e vegetais de coloraes claras ou esverdeadas em
aulas experimentais, como mostrado na Figura 9.
Figura 9. A: Aula prtica de uso de cidos e do calor para evitar o escurecimento enzimtico de diversos
alimentos; de cima para baixo: pera e banana (cidos), vagem, couve flor e batata (tratamento trmico). B:
Vegetais crus e branqueados pelo calor
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