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ELECTROFORESIS (anais)

La electroforesis es un mtodo de laboratorio en el que se utiliza una


corriente elctrica controlada con la finalidad de separar biomolculas
segn su tamao y carga elctrica a travs de una matriz gelatinosa.
Fue empleado por primera vez por en el ao 1937, pero su importancia
vino a incrementarse cuando en los aos cincuenta Durrum y Tiselius ,
impulsaron la electroforesis de zona, nombre que se asign a la
separacin de materiales en un campo elctrico en presencia de algn
tipo de soporte; aunque este trmino se limit originalmente al anlisis
de coloides y partculas submicroscopicas , se ha convertido en estos
ltimos aos en una metodologa aplicada a sustancias de bajo peso
molecular.
La separacin puede realizarse sobre la superficie hidratada de un
soporte slido, como por ejemplo la electroforesis realizada en acetato
de celulosa, a travs de una matriz porosa como lo son la electroforesis
realizada en gel de agarosa o poliacrilamida, o bien en disolucin
conocido como electroforesis libre.
Una aplicacin muy importante para la electroforesis en gel es en la
tecnologa del ADN.
Esta tcnica es una de las ms importantes herramientas en biologa
molecular y es de valor crtico en muchos aspectos de la manipulacin y
estudio gentico.
El principal uso es la separacin y purificacin de fragmentos
individuales conteniendo genes interesantes, los cuales pueden ser
recuperados del gel con actividad biolgica completa.
La electroforesis en gel hace posible determinar la diferencia gentica y
la relacin evolutiva entre especies y plantas y animales. Usando esta
tecnologa es posible separara e identificar las protenas que difieren en
por lo menos en un solo aminocido.
Electroforesis del ADN (pato)
Mediante la electroforesis podemos separar fragmentos de arn y adn en
funcin de su tamao, visuaizandolos mediante una sencilla tincin, y de esta
forma determinar el contenido de los ac. Nucleicos de una muestra, teniendo
una estimacin de su concentracion y el grado de entereza.
Podemos adems extraer del gel los fragmentos de adn que sean de inters,
para asi, posteriormente, utilizarlos en diferentes aplicaciones.
La electroforesis de adn fue y sigue siendo una herramienta de primordial
importancia en desarrollo de tcnicas del adn recombinante o ing. genetica

La electroforesis el gel de agarosa y poliacrilamida son unas de las


metodologas mas utilizadas hoy en dia en los laboratorios bioqcos. Y en todo
lo relacionado con trabajos de ac. Nucleicos
Electroforesis en gel de agarosa (pato)
La agarosa es un polisacrido (originalmente obtenido de algas, como el agaragar, pero de composicin homognea), cuyas disoluciones (tpicamente de 0.5
a 2 %) poseen la propiedad de permanecer liquidas por encima de 50 grados C
y formar un gel, semislido al enfriarse. Este gel esta constituido por una
matriz o trama tridimensional de fibras polimricas embebida en gran cantidad
de medio lquido, que retarda el paso de las molculas, se usa usualmente para
separar molculas grandes de alrededor 20.000 nucletidos.
Esta electroforesis es la mas utilizada y se aplica en la separacin de
fragmentos que se transfieran a una membrana gelosa, y la separacin de
fragmentos que resultan de la digestin con diferentes enzimas de restriccin.
La utilizacin de este gel es un mtodo estndar para separar y purificar
fragmentos de adn cuando no se requiere un alto poder de resolucin
Electroforesis en gel de poliacrilamida.(anais)
Los geles de poliacrilamida se forman por polimerizacin de la acrilamida por
accin de un agente entrecuzador, es qumicamente inerte, de propiedades
uniformes, capaz de ser preparado de forma rpida y reproducible. Forma,
adems, geles transparentes con estabilidad mecnica, insolubles en agua,
relativamente no inicos y que permiten buena visualizacin de las bandas
durante un tiempo prolongado. Adems tiene la ventaja de que variando la
concentracin de polmeros, se puede modificar de manera controlada en el
tamao del poro, lamentablemente cada vez se emplea menos en diagnostico
debido a su neurotoxocidad.
Esta membrana permite la obtencin de adn de alta pureza que puede
utilizarse para aplicaciones que requieran un adn totalmente libre de
impurezas.
Mtodo (pato)
el anailisis de los geles de agarosa y poliacrilamida se realizan
preferentemente en un equipo documentador de geles, los cuales tienen
incorporado un software que permite guardar fotografas del gel en formatos
TIFF,JPG, etc.
Adems de llevar a cabo anlisis densitometricos cuando se necesite realizar
una cuantigficacion precisa de la intensidad de las bandas en el gel.
Esta cuantificacin puede tener distintas aplicaciones, por ejemplo, la
estimacin de la concentracion del adn en una muestra mediante comparacin
con otra muestra de concentracion conocida, y la comparacin de cantidad del
adn en un experimento RT-PCR.

Los programas de anlisis pueden realizar una estimacin del tamao de los
fragmentos por comparacin con los marcadores de peso molecular utilizado.

Ventajas y desventajas de los mtodos en matriz gelosa.(yicel)


El principal problema que afecta la estabilidad y la resolucin en todos los
medios de electroforesis es la absorcin y desorcin. Las caractersticas de
tamizaje del gel estn fundamentalmente dirigidas por el tamao del poro y
cuando el medio absorbe agua, el tamao medio del poro se incrementa, esto
hace que las molculas puedan migrar ms rpido a lo largo del gel y
disminuye la resolucin. Pero como la absorcin de agua no es uniforme en
cada porcin del gel, casi siempre es mayor en la regin central que en los
extremos, por lo que las molculas localizadas en esta migran a travs del gel
ms rapido que las que estn en los extremos, lo que deforma y afecta la
reproducibilidad de la electroforesis.
Ventajas y desventajas de la electroforesis en gel de agarosa (yicel)
Las ventajas son que el gel es fcilmente vertido, no desnaturalizas las
muestras y las muestras pueden ser tambin recuperadas.
Por otra parte, las desventajas son que los geles puede fundirse durante la
electroforesis, el buffer puede agotarse, y diferentes formas de material
gentico pueden tratarse cuando su forma no es predecible.
Ventajas y desventajas de la electroforesis en gel de poliacrilamida
(yicel).
Todos los geles de poliacrilamida absorben agua durante el proceso de
polimerizacin y durante la conservacin, pero la tendencia se incrementa con
el aumento del porcentaje de acrilamida. En el sistema de electroforesis con
tampn y gel heterogneos, la diferencia de concentracin entre los geles
concentrador y separador crea un potencial osmtico entre los 2 geles, lo que
provoca que el agua pase del gel concentrador (regin de bajo % acrilamida)
hacia el separador (regin de alto % de acrilamida). Este proceso es muy

rpido y contina hasta que se establezca un equilibrio entre ambos geles


como resultado de la difusin del agua al gel separador, por lo que el
porcentaje de acrilamida no es estable en el gel separador y es necesario
emplear los geles en el da de su preparacin. Cuando se mantiene en tampn,
el gel absorbe rpidamente agua de este hasta llegar al equilibrio, lo que
provoca inestabilidad en este y dificulta su comercializacin. Un gel no tiene
una calidad aceptable si presenta poros no uniformes como resultado de la
difusin de agua entre el gel de alto porcentaje y la atmsfera.16 Por todo lo
anterior se ha planteado la utilizacin de compuestos que restringen la
difusin, los que pueden ser polioles, polisacridos, alcoholes polimricos, etc.
Estos compuestos se adicionan en la parte del medio de electroforesis en que
se quiere inmovilizar el agua, en el caso de la electroforesis en poliacrilamida
cuando est sintetizando el gel concentrador, lo que no afecta 38 el proceso
electrofortico que se puede seguir segn el mtodo convencional. Si se desea
prevenir la difusin de agua desde el tampn hasta el gel, es necesario aadir
estos compuestos al tampn.

Factores que afectan a la electroforesis (pozo)


La electroforesis es una tcnica muy sensible y puede ser afectada por muchos
errores experimentales, como la temperatura durante la polimerizacin y la
corrida del gel, velocidad de la polimerizacin, niveles de catalizador, pureza
del reactivo, tiempo de corrida y preparacin de las muestras.
Conclusiones (pozo)
Las tcnicas de electrforesis de adn son bsicas e insustituibles para el
desempeo de cualquier trabajo en biologa molecular, bioqca y biotecnologa,
referente a ensayos con acidos nucleicos, por lo que seguirn utilizndose
previamente durante mucho tiempo.
Con el pasar de los aos se han ido desarrollando grandes avances en este tipo
de tcnica, como la PFGE, y aplicaciones nuevas, tales como la ENSA.
El continuo desarrollo de las tcnicas bioqumicas y biotecnolgicas, hace
prever que se desarrollaran aun mas aplicaciones para los diversos mtodos de
elctroforesis des acidos nucleicos en gel.
Lamentablemente la electroforesis es una tcnica demasiado sensible, por lo
que es necesario tener bajo control cada uno de los factores asociados a
errores en el mtodo, adems de la debida preparacin del personal.

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