Seminario 9: Mutacin por CFTR

1. A qu se deben las infecciones respiratorias repetidas?

A las infecciones respiratorias que afectan las vas areas de la nariz, odos y
garganta. Pueden ser causadas por virus, bacterias y otros organismos microscpicos.
En el caso de la fibrosis qustica la sintomatologa se presenta principalmente en dos
sistemas, el respiratorio y el digestivo, manifestado como infecciones respiratorias
repetidas y signos de mala absorcin.
El sistema ms afectado es el respiratorio. Ello se debe a la obstruccin de los
bronquiolos por un moco espeso que favorece el crecimiento de microorganismos.
Este hecho explica las infecciones respiratorias repetidas por grmenes oportunistas.
La fibrosis
qustica (abreviatura FQ)
es
una enfermedad
gentica de
herencia autosmica recesiva que afecta principalmente
a los pulmones. La principal causa de morbilidad y
mortalidad es la afectacin pulmonar, causante del 95%
de los fallecimientos, sobre todo por infecciones
repetidas originadas por obstruccin bronquial debida a
la secrecin de mucosidad muy espesa. Los pulmones de
las personas con Fibrosis Qustica son colonizados e
infectados por bacterias desde edades tempranas. Los
microorganismos que se propagan en estos pacientes,
prosperan en el moco anmalo acumulado en las vas respiratorias ms estrechas. El
moco glutinoso estimula el desarrollo de microambientes bacterianos (biofilms) que
resultan difciles de penetrar para las clulas inmunes y los antibiticos. Por su parte,
los pulmones responden al dao continuo, infligido por las secreciones espesas y las
infecciones crnicas, remodelando gradualmente las vas respiratorias inferiores, lo
que vuelve a la infeccin an ms difcil de erradicar.
En 1986 se demostr que las clulas de las glndulas sudorparas y del epitelio
respiratorio de los pacientes con FQ eran relativamente impermeables al cloro y
tenan una absorcin de sodio aumentada. Estas dos anormalidades conducen a las
concentraciones altas de cloro y sodio en sudor caractersticas de esta enfermedad.
Por otro lado, se logr identificar la protena producida por el gen anormal,
denominndola Regulador Transmembrana de Fibrosis Qustica o CFTR por sus siglas
en ingls. La estructura de esta protena es similar a la de las que participan en el
futuro transporte epitelial activo. Estudios posteriores a nivel del epitelio respiratorio
sugieren que el CFTR es un canal de cloro defectuoso que impide el pasaje de este
electrolito aumentando su concentracin intracelular es necesaria una mayor
absorcin de sodio y por consiguiente de agua. Es muy probable que este fenmeno
se repita en todo epitelio secretor del organismo. Debido al proceso mencionado, a
nivel pulmonar, una reduccin en el contenido de agua del lquido periciliar y un

aumento de la viscosidad del moco bronquial que resulta en la obstruccin de las vas
areas y acumulo de secreciones.

2. A qu se debe la elevacin del cloro en el sudor?

La disfuncin de la protena CFTR puede ser documentada por la elevacin del cloro
en el sudor. La principal funcin del
CFTR
consiste
en
facilitar
el
transporte
activo
de
iones
de cloro hacia
el
exterior
de
la membrana
celular.
En
la
enfermedad
gentica
conocida
como fibrosis
qustica la
concentracin de cloro y sodio en las
secreciones
corporales
est
aumentada.
En el tbulo de la glndula
sudorpara se produce un bloqueo
del reingreso de cloro a la clula, lo
que induce una mayor cantidad de
ste electrolito y de sodio en el
sudor, manteniendo el volumen de agua inalterado. El mayor contenido de sodio y
cloro en el sudor hace que en momentos de gran sudoracin, se produzca
deshidratacin hipotnica con riesgo de vida si no se corrige rpidamente. La
prevencin debe ir dirigida especialmente a momentos de fiebre y a deportistas en
pocas de calor.

3. A qu se debe las heces voluminosas y ftidas del paciente?

En 85% de los pacientes con fibrosis qustica se puede observar como alteracin
digestiva una insuficiencia pancretica exocrina (con defecto en la produccin de
enzimas) que conduce a una obstruccin de los canales pancreticos y mala absorcin
de protenas.
Compromiso pancretico
Comienza durante el periodo de gestacin con el espesamiento de las secreciones
pancreticas y el aumento de la presin retrograda hacia el parnquima que comienza
a autodigerirse, induciendo a la aparicin de quistes y fibrosis progresiva, con lo cual
se produce insuficiente produccin y llegada al intestino de enzimas pancreticas.
Es
tambin
frecuente
la
asociacin
de
FQ
con
protrusin
de
las
membranas rectales internas (prolapso rectal), debida al mayor volumen fecal, a la
malnutricin, y a la elevacin de la presin intraabdominal por tos crnica. El moco

glutinoso observado en el pulmn tiene su correlato en las secreciones espesas del

Pncreas, rgano responsable de proveer jugos digestivos que facilitan
la descomposicin qumica de los alimentos. Estas secreciones impiden el movimiento
de las enzimas pancreticas hacia el intestino y producen dao irreversible en el
pncreas, a menudo acompaado de dolorosa inflamacin (pancreatitis). La
deficiencia de enzimas digestivas se traduce en un impedimento para absorber los
nutrientes, con la subsiguiente excrecin de stos en las heces: este trastorno es
conocido como malabsorcin. La malabsorcin conduce a la desnutricin y al retardo
en el crecimiento y desarrollo, ambos debidos a la baja biodisponibilidad calrica. Las
personas con FQ tienen, en particular, problemas para absorber las vitaminas A, D, E,
y K.
Adems
de
la
afeccin
pancretica,
suelen
experimentar acidez
crnica, xerostoma, obstruccin intestinal por intususcepcin, y constipacin.15 Los
pacientes mayores desarrollan tambin el sndrome de obstruccin intestinal distal
causado por las heces glutinosas.

4. En qu consiste la tcnica del PLFR

longitudinal de fragmentos restrictivos)?.

(polimorfismo

Caracterstica de un segmento de ADN de un cromosoma asociado a una enfermedad

hereditaria. Los PLFR se utilizan para la deteccin de las variaciones de secuencia en
segmentos de ADN del genoma humano.
El ADN de un individuo se extrae y se purifica. El ADN purificado puede ser
amplificado usando la tcnica molecular Reaccin en cadena de la polimerasa o PCR
(del ingls Polymerase Chain Reaction), luego tratado con enzimas de restriccin
especficas para producir fragmentos de ADN de diferentes longitudes. Estas enzimas
de restriccin hacen un proceso de digestin restrictiva en el cual reconocen cortas
secuencias especficas en el ADN donde cortan formando fragmentos de distintas
longitudes. Los fragmentos de restriccin se separan mediante electroforesis en geles
de agarosa a travs del cual corren debido a un campo elctrico y su disociacin
obedece a la masa o a la carga elctrica de las muestras segn la tcnica utilizada.
Esto proporciona un patrn de bandas que es nico para un ADN en particular debido
a la diferencia en las secuencias del ADN en los individuos donde los sitios de
restriccin varan. Las bandas pueden ser transferidas por Southern Blot a una
membrana donde se hibridan con una sonda que permite determinar la longitud y la
separacin de los fragmentos. En este paso las cadenas de ADN tienen que ser
desnaturalizadas y estar en cadena sencilla para permitir la hibridacin con las
sondas. Las endonucleasas de restriccin cortan el ADN de cadena doble en
secuencias especficas y cada enzima reconoce un sitio en particular. Un ejemplo es la
EcoRI: corta solamente cuando encuentra la secuencia 5`GAATTC3` en la doble
hlice. Suponiendo que este sitio de restriccin se encuentra en un cromosoma
especfico lo va a cortar formando dos fragmentos de ADN. Si una persona tiene una

mutacin en el sitio reconocido por la enzima no va a poder cortar y solo habr un

fragmento.

5. Cules son las caractersticas de la protena CFTR?.

El CFTR (Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) o regulador de la

conductancia transmembrana de la fibrosis qustica es una molcula cuya principal
funcin est relacionada con el transporte de iones de cloro. El CFTR es una protena
transmembrana multipaso que pertenece a la familia de los ABC (ATP Binding
Cassetes) transportadores. El gen que codifica el CFTR est mutado en la fibrosis
qustica.

6. Qu papel tendra esta protena?

La protena CFTR es una glicoprotena transportadora de membrana dependiente del
AMPc, responsable de una de las vas de transporte
de iones cloro
en las clulas epiteliales, que tambin puede
controlar la funcin de otras protenas de
membrana como los canales auxiliares
de cloro y los canales de sodio.
Esta protena se localiza en la membrana apical de
muchos tipos de clulas epiteliales: clulas
las vas areas, glndulas submucosas del tracto
gastrointestinal, hgado, vescula a biliar y

epiteliales de
pncreas.

La alteracin de la proteina a CFTR impide que

pueda realizar su accin de transporte y la imposibilidad de transportar cloruro. Esto
explica la historia natural de la enfermedad en las glndulas sudorparas aparato
respiratorio, pncreas, aparato o genital masculino y sistema hepatobiliar.
El CFTR codifica una protena que forma un canal de cloro dependiente de la proteinquinasa A que se expresa en tejidos con secrecin exocrina como glndulas
sudorparas, pncreas, intestino y rin. Las caractersticas del moco secretado en
distintos tejidos se altera. Los principales problemas que sufren los pacientes con
fibrosis qustica son las infecciones respiratorias y los problemas de absorcin
intestinal debidos a la alteracin de la funcin del pncreas exocrino provocada por la
obstruccin que causa el moco alterado.