NEFELOMETRIA

INTRODUCCIN
TURBIDIMETRA Y NEFELOMETRA

La turbidez es la propiedad ptica de una muestra que hace que la radiacin sea dispersada y
absorbida ms que transmitida en lnea recta a travs de la muestra. La turbidez es ocasionada por
la presencia de materia suspendida en un lquido. Turbidimetra
La turbidimetra mide la disminucin de la luz transmitida a travs de una suspensin de
partculas utilizando para ello un espectrofotmetro (detector en la misma direccin del haz de luz,
se mide A o T). Se suele utilizar para soluciones concentradas (para que haya una buena
disminucin de la luz transmitida) ej. determinacin de protenas totales en suero, LCR u orina
(haciendo que las protenas precipiten con TCA o cido sulfosaliclico).
Nefelometra
La nefelometra: mide la luz dispersada en direccin distinta a la luz emitida (generalmente con
ngulos que oscilan entre 15 y 90).Utiliza como instrumento el nefelmetro (en el que el detector
se ubica con un ngulo que oscila entre 15 y 90 ej. a 90). Se suele utilizar para concentraciones
ms diluidas.
La eleccin entre turbidimetra y nefelometra viene dada por dos factores:
- Intensidad de la radiacin transmitida o dispersada con la intensidad de la radiacin procedente
de la fuente. Cuando la concentracin de partculas dispersantes en la disolucin es pequea, IT
ser muy similar a IO. Por lo que la mejor eleccin cuando la muestra contiene pocas partculas
dispersantes es la nefelometra. La turbidimetra es una buena tcnica para cuando las muestras
contienen grandes concentraciones de partculas dispersantes.
- Tamao de las partculas dispersantes. En la nefelometra la intensidad de la radiacin dispersada
a 90C es mayor si las partculas son bastante pequeas para que se produzca una dispersin
Rayleigh. Si las partculas son mayores, la intensidad de la dispersin disminuir a 90C. En
turbidimetra la seal consiste en la disminucin relativa de la radiacin transmitida, por lo que el
tamao de las partculas dispersantes es menos importante.
Aplicaciones en alimentos de la turbidimetra y nefelometra
Generalmente, nefelometra y tubidimetra se utilizan en el anlisis de la calidad qumica del agua
para determinar la claridad y para el control de los procesos de tratamiento. Se emplea para medir
las concentraciones especficas, de colonias de bacterias en algn medio de cultivo, as como la
medicin de muchas protenas utilizando as el principio de la dispersin luminosa molecular.
Tambin se utilizan para la determinacin de iones sulfato.
OBJETIVOS

Conocimiento de mtodos turbidimetricos, as como, la preparacin del nefelmetro

de Mac farland

FUNDAMENTO

En la turbidimetra se compara la intensidad del rayo de luz que emerge con la del que llega a la
disolucin. En cambio, en la nefelometra la medida de la intensidad de luz se hace con un ngulo
de 90 con respecto a la radiacin incidente. El instrumento usado en la nefelometra, el
nefelmetro se asemeja al fluormetro. En cambio en turbidimetra se utiliza el turbidmetro que
es un fotmetro de filtro.
Hay dos mtodos para medir la turbidez de una muestra, la turbidimetra y la nefelometra. Son
dos tcnicas complementarias que se utilizan para el anlisis cuantitativo de disoluciones
coloidales, emulsiones, humos o nieblas.
PROCEDIMIENTO
EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS
MATERIALES Y REACTIVOS

H2SO4 al 1 % 250 ml
BaCl2 al 1 % 250 ml.
10 tubos de ensaye con tapones de rosca.

DESARROLLO DE LA PRCTICA
METODOLOGIA
DE TUBO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

ml HSO al 1 %
9.9ml
9.8ml
9.7ml
9.6ml
9.5ml
9.4ml
9.3ml
9.2ml
9.1 ml
9.0ml

ml BaCl al 1 %
0.1ml
0.2ml
0.3ml
0.4ml
0.5ml
0.6ml
0.7ml
0.8ml
0.9ml
1.0ml

CLCULO Y REPORTE DE RESULTADOS

DE TUBO

ml HSO al ml BaCl al Nmero aproximado

1%
1%
de
bacterias
representadas
6
9.9ml
0.1ml
300 10
UFC

9.8ml

0.2ml

Millones/ml
6
600 10

9.7ml

0.3ml

Millones/ml
6
900 10

UFC

0.4ml

Millones/ml
6
1200 10

UFC

9.6ml

UFC

9.5ml

0.5ml

Millones/ml
6
1500 10

UFC
UFC

9.4ml

0.6ml

Millones/ml
6
1800 10

9.3ml

0.7ml

Millones/ml
6
2100 10

UFC

0.8ml

Millones/ml
6
2400 10

UFC
UFC
UFC

9.2ml

9.1ml

0.9ml

Millones/ml
6
2700 10

10

9.0ml

1.0ml

Millones/ml
6
3000 10
Millones/ml

INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES

ANEXOS
1. Cules son los mtodos directos ms utilizados en el recuento
de microorganismos?
Recuento de microorganismos totales
Recuento directo
epifluorescencia)

(microscopio

de

campo

claro

microscopa

Citometra de flujo
Contador Coulter
Recuento de microorganismos viables
Recuento en placas (dilucin en masa y superficie)
Filtracin por membrana
Nmero ms probable (NMP)

2. qu es lo que representa UFC y cul es su importancia?

de

Unidad formadora de colonia (UFC) a una clula bacteriana viva y aislada que
si se encuentra en condiciones de substrato y ambientales adecuadas da
lugar a la produccin de una colonia en breve lapso de tiempo.

3. a qu se refiere la tcnica de nmero ms probable?

EL METODO DE NUMERO MAS PROBABLE (NMP) es una estrategia
eficiente de estimacin de densidades poblacionales especialmente
cuando una evaluacin cuantitativa de clulas individuales no es factible. La
tcnica se basa en la determinacin de presencia o ausencia (pos o neg) en
rplicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de
microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes. Por lo
tanto, un requisito importante de este mtodo es la necesidad de poder
reconocer un atributo particular de la poblacin(es) en el medio de
crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad poblacional se obtiene del
patrn de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una
tabla probabilstica.
Algunas de las ventajas del NMP son: (i) la capacidad de estimar tamaos
poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad);
por ejemplo se puede determinar la densidad poblacional de organismos que
pueden nodular leguminosas en una muestra de suelo usando el mtodo
de infeccin de plantas, (ii) provee una recuperacin uniforme de las
poblaciones microbianas de suelos diversificados, (iii) determina slo
organismos vivos y activos metablicamente, y (iv) suele ser ms rpido e
igual de confiable que los mtodos tradicionales de esparcimiento en platos
de cultivo, entre otros.

4. citar ejemplos de mtodos para recuento microscpico.

Cmara de Hawksley
Cmara de petroff-Hausser
Mtodo de breed.
REFERENCIAS
BIBLIOGRAFIA BASICA:
ATLAS R.M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
EDITORIAL CECSA
INGRHAM J. L. Y G. A. INGRHAM
INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I Y II
EDITORIAL REVERTE S.A.
PRESCOTT-HARLEY KLEIN
MICROBIOLOGIA
EDITORIAL Mc GRAW HIL
www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm

www.uprm.edu/biology/profs/massol/.../p4-nmpenumeracion.pdf