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Definindo um bioprocesso: so os processos biolgicos (processos que utilizam

organismos vivos ou substncias desses organismos para produzir produtos ou alterar


produtos) que utilizam como catalisadores enzimas, podem ser realizados por enzima
isoladas ou por um microrganismo ou clulas animais vegetais. Quando falamos em
bioprocesso em nivel industrial, estamos querendo transpor aquilo que acontece na
natureza(dentro de uma celula) para uma escala industrial(para um reator).
Desafios dos sistemas biologicos: os sistemas biologicos so mais sensiveis que os
sistemas quimicos, os fatores ambientas influenciam, ou seja, tem que se ter controle
de vrios fatores, que no seria necessrio se fosse um sistema quimico.So
processos que temos instabilidade do catalisador no caso enzimas ou das proprias
celulas que esto realizando aquele processo. (ph, temperatura)
Principais produtos da industria biotecnologico: farmacos, alimenticio, txtil
Processos fermentativos-->microorganismos
processos enzimticos-->enzimas isoladas
Biomassa, biotransformao, tratamento de efluentes.
Quais seriam as pespectivas de novos bioprocessos, tendencia na industrial de
bioprocesos? modificao genetica para obteno de novos compostos, ou pra
otimizar produo. Manipulao do meio, estudo dos fatores que podem influenciar no
crescimento do microorganismo.Utilizao de subprodutos, resduos de um processos,
como matria prima de outros processos biotecnologicos. Substituio de antigos
processos por processos mais viveis, substituio de processos quimicos por
processos biolgicos, por exemplo enzimas por ter maior especificidade tem uma
gerao menor de subprodutos alm disso tem uma produo mais limpa,
economicamente mais barata.
Comprao quimica x bio:tipo catalisador diferente, pode requerer esterilidade,,
seletividade, produtividade, menos possibilidade de poluio, condies mais
brandas(gastando menos energias), mas ao mesmo tempo pode ser complicado pois
um processo mais sensvel, mais instvel, e tem que ter um controle maior(controle
maior de temperatura, t e ph). Como o processo em maioria em grande escala
aquosa(pois necessrio colocar uma grande quantidade de meio para que o
microrganismo consiga trabalhar) o produto do bioprocesso muito diludo, dificuldade
de purificao podendo tornar o processo mais caro.

Passos do processo:
Preparao dos microorganismos adequados para o processo(inoculo)->faz-se
ativaes para mutiplicao at chegar na quantidade que voc precisa
Preparao do meio de cultura, alguns processos exigem que o meio de cultura seja
esterilizado (auto clave, e para preservao da esterilidade bico de bunsem).
O meio de cultivo um conjunto de nutrientes que devem ser fornecidos ao
microrganismo para que ocorra seu crescimento/manuteno (pode servir para
transporte). Tipos e sua funo: slido (isolamento), semisslido (avaliar motilidade),
lquidos (crescimento/produo de biomassa), diferencial (possui substncias mais

complexas), enriquecimento (crescimento), seletivo (inibe uma determinada


populao), sinttico (conhece a composio, estudo dos nutrientes essenciais),
complexos (composio desconhecida e transportador (armazenamento temporrio).
Ento coloca-se no reator o meio de cultivo com o inoculo(pequena quantidade de
matria que contem clulas vivas) e ento a reao vai acontecer.
Alguns processos necessitam de oxinio para que a reao ocorra e ento deve-se
fornecer este oxignio. Existem microoganismos que precisam de oxignio outros que
toleram, outros que no precisam. Depende da necessidade da clula tem que se
fornecer os nutrientes.
Ao longo do processos deve-se controlar ph, temperatura presso, todas as condies
que poderiam atrapalhar nossas clulas.
Aps acabar o processo deve-se fazer o processo de separao e purificao do
produto, as vezes queremos a clula e no o produto(processos de produo de
microorganismos(produo de biomassa)para venda para utilizao em outro
processo). E aps isso deve-se fazer o tratamento adequado dos efluentes.
Bioquimica:
Metabolismo: so as reaes que acontecem no interior da clula: estes so divididos
em degradao ou sintese, a degradao o catabolismo e sintese o anabolismo.
Estes processos so realizados pelas biomoleculas(molculas organicas que
encontram no inteior das clulas) as biomoleculas de maior importncia na clula so
os carboidratos, lipideos, proteinas e cidos nucleicos. So essas molculas que vo
sofrer as quebras e sinteses. As reaes de catabolismo e anabolismo esto
interligadas, degradao de uma molcula em uma menor e esta menor usada na
materia prima das sisteses, alm disso a energia gerada(na forma ATP) na quebra
pode ser usada na sintese. A energia fica armazenada(ligao anidrofosforica do
triofosfato de adenosina) que formada pela foforilaao do diofosfato de adenosina
ADP , para ser utilizada posteriormente. A energia gerada no catabolismo pode ser
usada no anabolismo(sintese), e tambm o transporte atravs da membrana( este
transporte pode ocorrer por difuso, ou seja, por diferena de concentrao e ai no
tem carga energtica e por transporte ativo quando a diferena de concentrao no
satisfatria sendo necessrio agente transportador o que requer energia)

Clasificao quanto a obteno de fontes de carbono para o anabolismo


Autotroficos: os autotroficos utilizam fontes de carbono simples, como fontes
orgasnicos como o co2
Heterotroficos: ja os heterotroficos precisam adiquirir fontes de carbono do meio
Clasificao quanto a fonte de energia
Quimiotroficos:precisam quebrar compostos organicos ou inorganicos para ter fontes
de energia,
fototroficos:utilizam a energia da luz solar
A importncia de entender isso que cada microorganismo tem uma necessidade de
nutrientes de de condies que est relacionada com suas caracteristicas e com seu
aparato enzimatico, com a capacidade do organismo de sintetizar ou no compostos,e
precisar adiquiri-los do meio. Ento em ltima analise a gentica do microorganismo,

suas caracteristicas que vo determinar o que eu vou precisar colocar quando eu


estou preparando um meio de cultivo.
Carboidratos: a importncia dos carboidratos so molculas que fornecem carbono
para que a clula possa realizar sintese de molculas que contm carbono e quando
os carboidratos so quebrados eles fornecem energia para a clula. Os carboidratos
podem ter diferentes tamanhos, a unidade minima dos carboidratos so os
monossacardeos que so ligados uns aos outros por ligaes glicosidicas(e formam
os dissacarideos, trissacarideos, oligossacarideos, polissacaridoes). Os carboidratos
mais importantes so as hexoses que so os de 6carbonos, glicose e a frutosa,
principalmente a glicose pois uma fonte facilmente assimilvel, ela entra na via
glicolitica e fornece energia para clula na forma de ATP e seus subprodutos vo pra
outras vias metabolicas. Muitos polissacarideos maiores podem ser quebrados em
glicose.
Proteinas: a grande importncia das proteinas so as enzimas, as proteinas tem
vrias funces como (transporte atraves da membrana, regulao de metabolismo) as
proteinas so as expresses geneticas da clula, as informaes genticas so
convertidas em uma sequncia de aminocidos(polimeros) que formam uma proteina.
Os aminocidos se ligam atravs da ligao peptidica. E atravs desses arranjos dos
aminocidos e das ligaes peptidicas a proteina ganha uma forma
tridimensional(forma nativa correta para que ela possa exercer sua funo), pois se a
proteina no se encontrar na sua conformao nativa ela perde sua atividade, perde
sua funo.

Lipideos: sua importncia principal a formao da membrana citoplasmtica(outras


funes, formao de vitaminas, hormonios). As membranas citoplsmticas so
formadas por uma bicamadas lipidica. Os lipideos so molculas anfipaticas ou seja
elas tem uma parte polar e uma parte apolar e ai em soluo aquosa elas tem a
caracteristica de formao da parte polar ficar em contato com a gua e a parte
hidrofobica contra a agua. E com isso a clula fica isolada, pois a camada forma uma
barreira, conseguindo um meio celular independete do meio externo. Para substncias
entrarem ou sairem da clular necessrio um meio de transporte. Alm disso os
lipideos formam as membranas de todas as organelas que tem nas
clulas( mitocondricas, nucleos). Existem tem trs tipos de lipideos(os triglicerideos, os
fosfolipideos e os esterois), a membrana na verdade formada por fosfolipideos. E os
lipideos normalmente, os triglicerideos por exemplo tem uma molcula de glicerol e 3
cidos graxos, no caso dos fosfolipideos se subtitui um acido graxo por um grupo
fosfato ligado ao glicerol o que d ainda mais caracteristica anfipatica para a molcula.
Acidos nucleicos: Sua funo basicamente trazer informao gentica da clula
que sero convertidos em sequencias de aminocios formando proteinas. Os cidos
nucleicos formam o DNA e o RNA, o DNA a informao gentica da clula e o RNA
uma meia cpia s pra levar a informao para fazer as proteinas.
Biologia celular: Procarioticos x Eucarioticos

Procarioto: O prefixo pro, significa sem, ou seja, uma clula em que o ncleo no
est envolvido por uma carioteca. No tem delimitaes, a informao gentica est
no centro e chamada de nucleoide.
EUcarioto:O ncleo est envolvido por uma carioteca.
Mas o mais importante que nas clulas eucarioticas diferentes das procatiocas,
possuem organelas onde acontecem os procesos, ento por exemplo na respirao
eucariotica acontece na mitocondria, a fotosintese no cloroplasto a produo de
proteinas nos ribossomos. Nas celulas procarioticas tudo no citoplasma, pois ela
uma clula mais simples.
-Falamos sobre nomeclatura genero+especie
Bactrias: so organimos procatioticos, so os organismos mais simples que vamos
estudar. As bacterias podem ser patologicas ou no, mas na verdade a maioria delas
benefica ou inofensiva. E dentre as benficas esto aquelas que realizam bioprocesos
que utilizamos na industria.
As clulas alm da membrana citoplasmtica tem uma membrana mais externa
envolvendo estas celulas, formado de peptidioglicano(polissacarideos).
Bactrias gram positivas: As gram + tem maior quantidade de peptidioglicano, tendo
um envoltrio mais coeso, mais forte.
bactrias gram negativas: As gram negativas tem menor quantidade de
peptioglicano, tem uma parede mais fina, mais fraca. Alm disso a gram - tem depois
da camada de peptidioglicano de novo uma bicamada de fosfolipideos. Como ela tem
uma bi camada pode haver proteinas ou compostos, responsveis por algumas
caracteriscas da bacterias, externa talvez seja mais fcil entrar organismo patologicos
na bactria. Possiveis virulencias.
para diferencia-las faz se a colorao de gram, como as gram positivas tem uma
parede mais forte elas retem o corante violeta e as negativas no retem e ficam na
tolanidade de rosa.
MUITAS CARACTERISTICAS DAS CELULAS ESTO RELACIONADAS AO FATO
DELAS SEREM GRAM POSITIVAS OU GRAM NEGATIVAS. ENTO O PROCESSO
DE INDENTIFICAO DE UMA BACTRIA MUITO IMPORNTANTE, SENDO A
PRIMEIRA COISA A SER FEITA E DEPOIS FAZ-SE OUTROS TESTES PARA VER
QUAL BACTRIA AQUELA.
Como feita: Adiciona-se as bactrias o colorante cristal violeta e ento as bactrias
ficam violeta, aps utiliza-se uma soluo de iodo(lugol)e ento forma-se um composto
complexo CVI no interior das clulas que permacem violetas. Depois adiciona-se
alcool que faz com que desidrata as paredes as +, dimiuindo a porosidade e
permeabilidade das paredes da clula.Ento o composto CVI no consegue sair da
clula, j nas negativas h uma extrao de fosfolipideos da parede celular
aumentando a porosidade e assim o CVI removido da clula. Na ltima etapa
adiciona-se safarina ou fucsina e as + permanecem violetas como anteriormente(o
novo colorante no as afeta) e na - as clulas tomam o corante tornado-se vermelhas.
Leveduras e fungos: as leveduras e fungos so microorganismos eucariotos, ou seja
tem nucleo definido por membrana, e tem organelas. As leveduras so unicelulares
no tem parede celular s membrana citoplasmatica, fazem diversos procesos

fermentativos. E os fungos filamentosos so multicelulares, as celulas no se


comunicam no trocam materiais, mas elas se juntam e formam as chamada
hifas(aglomerados de clulas) e ai forma os miclios que podem ser vistos a olho nu.
Leveduras e fungos so mais complexos que as leveduras. Os fungos tem parede
formada de por exemplo quitina, so celulas mais resistentes, e os fungos atuam
principalmente na produo de enzima e antibioticos.
Meios de cultivo: algumas tecnicas de microbiologia. utilizao de meios solidos,
liquidos ou semi solidos. Adiciona-se agar no meio de cultivos, o agar um
solidificantes que a maioria dos microorganismos no atacam. Nos meios tem-se os
nutrientes necessrios para cada tipo de microorganismo.

VIAS METABOLICAS: o caminho que a clula utiliza para sintetizar ou degradar um


composto.
As mais importantes so:
Glicolise : a degradao da glicose(fonte de carbono) produzindo ATP, piruvato e
fatores reduzidos NADH.
gerao: 2ATP, 2NADH e 2pi
A clula necessita de energia, ento ela quebra uma fonte de carbono e obtem
energia, ela no utilizou totalmente o potencial energtico da glicose. Os fatores
reduzidos podem ser utilizados para produzir ATP, e o piruvato um produto que a
clula tem que dar um fim nele, o objetivo da clula produzir atp, mas ai tem dois
subprodutos que ela tem que dar um fim, no caso do nadh um pouco mais critico
pois a clula tem o NAD em quantidade reduzida ento se comea a transformar tudo
em nadh vai aprando a via glicosidica. Ento necessrio regenerar o nad para que
ele entre em outra vias que utilizem nad.Para isso se tiver na presena de oxignio
podemos ir pelo meio aerobio, ou na ausncia ou baixa concentrao de oxgignio
fazer fermentao. Depende do tipo de clula e o mecanismo que elas conseguem.
Tem clula que consegue fazer um ou outro e tem clula que consegue fazer os dois.
->Os dois processos recuperam o NAD e utilizam o piruvato, no caso da fermentao:
O NADH com H+ regenera o NAD+ e o piruvato se transforma em alcool se a
fermentao for alcoolica(feito por leveduras) ou lactato se a fermentao for
latica(feito por animais e bacterias). Assim o piruvato vira compostos mais
interessantes, etanol e lactato tem grande importncia energtica, sendo etanol
combustvel.
Na fermentao a produo de atp de 2atps, ou seja, no uma utilizao de todo
potencial energtico da glicose.
AEROBIO--->RESPIRAO-->Agora ele pode ir com o piruvato pro chamado ciclo do
cido citrico, no qual, retira-se a maior parte da energia da glicose e ai teremos a
gerao de 30atp + fatores reduzidos NADH+ piruvato
Na verdade no o ciclio do acido citrico que produz 30atp e sim em conjunto com a
cadeia transportadora de eletrons.
O oxignio funciona como recpetor de eletrons dos fatores reduzidos, recebe esses
eletrons , transforma em gua e no final das contas tem a produo de 30ATP(total

contando os dois da via glicolitica).


Ou seja um organismo que faz respirao produz muito mais energia do que um
organismo que est fazendo fermentao. Todos os dois processos cumprem seus
objetivos, ou seja, produzem energia pra clula, liberam o NAD+, utilizam o piruvato.
A clula precisa de energia para exercer as funes, mantendo a clula viva e fazendo
como que ela se mutiplique. Quanto mais energia mais ela se mutiplique, ou seja se
queremos produzir biomassa, mais interessante fazer respirao. A fermentao
quando se objetiva um produto especifico.Ento as vezes podemos usar dois
momentos diferentes no reator, um momento de respirao para que a clula se
mutiplique e depois retira-se o abastecimento de oxignio para que o microorganismo
desvie a rota para a fermentao.
Vimos tambm que na clula todo metabolismo passa por uma regulao, tem como
por exemplo regular a glicolise em relao ao balano, exemplo, se eu estou com
muito NAD+, que o que entra na via glicolitica, eu ativo a glicolise, mas se estou com
muito NADH ento vou desativar a glicolise e ativar a fermentao.
sacaromices cerevisiae uma levedura facultativa, ou seja, em presena de oxignio
ela realiza respirao e sem oxignio fermentao. Mas no bem assim, descobriuse que em presena de oxignio, mas se tem muita glicose ela faz fermentao. Ento
a regulao feita tambm pelo substrato e no s pela presena de oxignio.Uma
especia pode produzir diferentes metabolitos quando cultivada sob diferentes
condies de cultivo e de nutrientes.
Enzimas: sua funo na clula aumentar a velocidade da reao por diminuio da
energia de ativao, um catalisador biologico. A enzima estrututalmente uma
proteina. Ou seja, elas precisam estar na sua conformao nativa para manter sua
atividade. A enzima com o substrato tem-se um encaixe fisico-quimico, dos stios
ativos que so de alta especificidade, por causa da alta especificidade temos menos
gerao de subprodutos e maior eficincia do processo do que com catalisador
quimicos. Fatores que podem influnciar o funcionamento de uma enzima(ph e T).
Toda enzima em tese quando voc aumenta a temperatura, aumenta a velocidade da
treao pois temos maior cintica das molculas e consequentemente maiores
colises. S que chega em um ponto que pode-se desnaturar a enzima(mudando sua
conformao nativa), quando a desnaturao na estrutura primria ela torna-se
irreversvel, mesmo que abaixe a temperatura no volta, pois rompe-se a ligao
peptidica. Na quartenria(terciria e secundria) uma iterao das cadeiras
peptidicas, como no uma ligao quimica, apenas uma iterao, s h o
desenrolamento, afastamento, ento depois pode-se enrolar novamente.
Hoje h grande nmero de enzimas, mas no utuliza-se todo o potencial das enzimas
devido a dificuldade de obteno e utilizao, por ser um material biologico(instavel).
Cintica: importante estudar a cintica das reaes enzimticas para conhecer a
velocidade das transformaes enzimticas, verificando a influncia das condies no
substrato. Ento correlaciona-se as velocidades com estes fatores influenciadores,
com isso podemos estabelecer parametros ideais para o processos,modelando o
processo, otimizando-o. Alm disso com o conhecimento da cintica podemos planejar
melhor a reao e projetar o reator.NN

Michaelis-mentem
enzima+substrato->formando um completo enzima + substrato (es)-> PRODUTO
O completo um produto intermediario, sendo uma reao rpida e reversvel.
No final a enzima liberada sem ser modificada, pois a enzima se liga ao substrato,
catalisa a reao, libera o produto e est nova para receber um novo substrato.
O complexo formado por alta espeficidade.
Ao fazer um estudo cinetico, obtem-se as curvas:
-concentrao de substrato caindo
-concentrao de produto aumentando
-concentrao de enzimar diminuindo(a enzima em tese no consumida, porm
como ela muito instavel, temos uma ligeira reduo de concentrao mais por perda
de atividade da enzima.)
- e o complexo ES aumenta um pouco e depois fica constante.(pois depois o tempo
todo teremos enzima ligando e desligando ao subtrato)
E com essas concentraes que trabalhamos para fazer um estudo cintico.
A concentrao de enzima influencia diretamente a velocidade da reao uma
funo linear, j a concentrao de susbtrato linear no inicio, mas depois de um
tempo no adianta aumentar a concentrao de susbtrato que a velocidade fica
constante, o que chamamos de velocidade mxima.
A velocidade de uma reao enzimtica, vai depender dessa Vmax que se atinge no
tempo, Km(constante de MM), e da concentrao do susbtrato.
km a [S] no qual V=vmax/2
Inibio da atividade enzimtica: inibio competitiva e no competitiva.
Na inibio compectitiva o inibidor competitivo se liga ao sitio ativo(no mesmo que o
substrato se ligaria) da enzima,ento teremos menos enzimar para se ligar com o
substrato diminuindo a velocidade da reao. (fc il dribla-la: adiciona-se muito
substrato, pois a probabilidade do inibidor se ligar a enzima cai muito). Ento Vmax
no se altera. S que como adicionei muito mais substrato o Km muda, ele aumenta.
E na no compectitiva o inibidor se liga em outro sitio ativo da enzima(no o mesmo
que o do subtrato). Diminuindo a quantidade de enzima disponivel para se ligar com o
substrato, porque mesmo se o subtrato ligar no outro sitio ativo, o produto no
formado se o inibidor estiver presente. Neste caso no adianta-se mexer na
quantidade de substrato, no altera a velocidade. Ento na no competitiva o Km no
se altera, porm o Vmax diminui.
Ento atravs do estudo cintico eu sei se est havendo uma competividade ou uma
inibio no competitiva.
Regulao alosterica: temos o inibidor e o regulador alostrico.
O inibidor reduz a atividade e o regulador melhora a atividade das enzimas.