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1.

En 1985 se crearon los primeros anticuerpos quimricos humanos a partir de


ratones, con la tecnologa del ADN recombinante, en la cual los genes que
codifican la regin variable de las Ig de ratn se unen con genes que codifican la
regin constante de las cadenas pesadas y livianas humana para, luego, ser
insertados en clulas de mieloma, donde producirn nuevas molculas de
anticuerpo que tendrn una parte humana pero que tienen la unin especfica del
antgeno (Fab) generada en ratones. El objetivo perseguido con la construccin de
un anticuerpo quimrico es reducir la inmunogenicidad para el humano de los
AcMo de raton o rata, pero sin afectar la especificad del Ac.
Una de las limitaciones presentadas con la quimerizacin de anticuerpos
monoclonales de ratn es la baja frecuencia de transformantes que produzcan el
anticuerpo quimrico. Aunque los anticuerpos monoclonales quimricos son
menos inmunognicos que los anticuerpos monoclonales de ratn, se han
observado respuestas importantes de tipo anticuerpo-antiquimricos en el 40% de
los productos que se han usado en humanos

La tcnica de "quimerizacin" fue desarrollada por Morrison y col. y Boulliane a


mediados de los aos 80. El procedimiento implica la clonacin de los genes V H y VL
mridos y la insercin de los genes clonados en vectores de expresin eucariota a los
que, previamente, se ha incorporado los genes codificadores de la porcin constante
de las cadenas pesada y liviana humanas. Estos vectores son finalmente
transfectados en forma estable en una lnea celular seleccionada. La clonacin de los
genes VH y VL se realiza mediante RT-PCR utilizando como molde ARN total o ARN
mensajero (ARNm) obtenido de un hibridoma secretor de la especificidad de inters y
oligonucletidos complementarios a los extremos 3 y 5 de cada gen como iniciadores.

2. Existen dos tipos de fragmentos con la capacidad de combinarse al Ag, stos son
el Fv y el Fab
La digestin con papana de anticuerpos produce dos fragmentos de unin a
antgeno idnticos, denominados fragmentos "Fab", cada uno con un nico sitio de
unin a antgeno, y un fragmento "Fe" residual, cuyo nombre refleja su capacidad
para cristalizar fcilmente "Fv" es el fragmento de anticuerpo
FUNCION DE LOS FRAGMENTOS Fab (cadena ligera):
Al romper una Ig con papana se originan dos fragmentos: el Fab (fragmento de
unin al antgeno) y el Fc (fragmento cristalizable, fue el primero que se cristaliz)
Fab se une al antgeno por las interacciones de las regiones hipervariables con los
determiantes antignicos. Estas interacciones se caracterizan por:
.- Existe un acoplamiento entre las estructuras.
.- En la zona hipervariable hay una hendidura (aprox. 2nm) donde encajan los
determinantes antignicos.
.- Se estabilizan por interacciones dbiles (puentes de Hidrgeno, por cargas
opuestas, etc.). En el dibujo de la fotocopia el Ag 3 no cabe perfectamente y la
interaccin es ms dbil, se habla de reaccin cruzada.
Las interacciones que se producen son semejantes a las que se dan entre enzima
y
sustrato.
Existen
anticuerpos
con
actividad
cataltica
que
se
denominan aloenzimas.

FUNCION DEL FRAGMENTO Fc (cadenas pesadas)


El Fc tiene tambin algo de especificidad, no es donde se une el Ag pero son los
responsables de la interacciones con los recepetores propios, receptores de las
membrana de algunas clulas. Se pueden unir a:

Macrfagos. Sobre todo estos dos.


Linfocitos.
Otros glbulos blancos como basfilos, eosinfilos y neutrfilos.

La unin depende de la clula a la que se una. Cuando se une a los macrfagos pueden
facilitar la fagocitosis.
Puede ser que al unirse a los basfilos (en este caso las IgE) se liberen mediadores
qumicos, histamina, esto es lo que ocurre en las alergias.
Puede servir tambin para unir otras protenas, como las protenas del complemento, es
lo ms importante.

Los fragmentos de anticuerpos pueden ser usados para el tratamiento de enfermedades


autoinmunes como el alzheimer y la enfermedad de Crohn, asi como para isquemia
cardaica, glaucomas, alergia.

3.- Qu es un anticuerpo humanizado? Por qu tiene especial utilidad?


Son un tipo de anticuerpo monoclonizado aquellos que solo conservan
los componentes mnimos necesarios del anticuerpo del ratn ests son
las CDRs que se incorporan a un anticuerpo humano; es decir, solo el
lugar de unin al antgeno se combina con la estructura de la regin V
humana y las secuencias de la regi C humana. Estos anticuepos
monoclonales solo conservan la capacidad de reconocer clulas diana,
pero son menos inmunogenicos que los anticuerpo de ratn o
quimricos.

Utilidad:
Independientemente de su uso en tcnicas de diagnstico, que han supuesto
una revolucin en el campo de la histopatologa o permitido el desarrollo de
tcnicas de laboratorio como la citometra de flujo, las posibilidades de
aplicacin para tratar enfermedades humanas son amplsimas. Dependiendo
de la regin Fc, la unin del anticuerpo monoclonal al antgeno contra el que
est diseado puede facilitar la produccin de citotoxicidad celular
dependiente de anticuerpos (ADCC) o citotoxicidad por la activacin del
sistema de complemento. La propia unin al antgeno puede bloquear
receptores de la membrana celular, unirse a factores presentes en el suero y
evitar su unin a receptores, o inducir seales intracelulares. Las
consecuencias finales de estas interacciones son numerosas y han encontrado
aplicacin en reas muy diversas.
Una manera de modificar la capacidad efectora de los anticuerpos
monoclonales es la conjugacin con molculas citotxicas con toxinas, con
radiofrmacos o con citocinas; esta ltima ha sido una estrategia utilizada en
oncologa mediante la creacin de protenas de fusin que incorporaban genes
de IL-2, IL-12 o GM-CSF, entre otras. La conjugacin de enzimas capaces de
convertir un profrmaco en frmaco con anticuerpos monoclonales dirigidos a

clulas tumorales ha permitido una accin muy selectiva en el tejido tumoral


del frmaco en cuestin.
La oncologa es, sin duda, el rea de aplicacin teraputica ms importante.
Son de amplia utilizacin los anticuerpos dirigidos contra HER2 en cncer de
mama, o contra el factor de crecimiento epidrmico (EGF) o el factor de
crecimiento del endotelio vascular (VEGF) en varios tipos de tumores, o los anti
CD20 o anti CD52 para linfomas/leucemias.
Las enfermedades autoinmunes son el grupo siguiente de patologa humana en
el que ms se han empleado estos productos y, fundamentalmente, en artritis
reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal, esclerosis mltiple, lupus
eritematoso, as como en el rechazo de trasplantes y enfermedad de injerto
contra el husped. Los ms utilizados han sido anticuerpos contra citocinas,
sobre todo TNF- y anti VLA4, pero tambin anti CD20 y anti CD25, entre otros

existen diferentes regiones V mridicas que han sido humanizadas _

4.- Por qu se utilizan roedores para obtener anticuerpos quimricos?


Pueden cultivarse in vitro por tiempo indefinido.
Las mejores lneas de mieloma para la produccin de Anticuerpos
monoclonales son las de ratn y de rata
Otra de las razones es que esta obtencin implica la clonacin de
genes Vh y Vl y en la actualidad se encuentran disponibles familias
de oligonucletidos para la clonacin de genes Vh y Vl de ratones y
seres humanos.
El anlisis muestra que el genoma humano est mucho ms prximo al
de la rata que al del ratn. La comparacin de las tres secuencias, las
nicas completas hasta ahora en lo que se refiere a mamferos, revela
que el 90% de los genes de la rata tiene una correspondencia, ms o
menos evidente, con los humanos, una cifra significativamente mayor
que el 80% descrito entre el genoma del ratn y el humano. Asimismo,
predice la existencia de un genoma compuesto por 2.750 millones de
pares de bases, algo ms pequeo que el humano (2.900 millones), pero
mayor que la del ratn (2.600 millones). Pese a ello, el nmero total de
genes para las tres especies se estima que podra ser muy similar, entre
25.000 y 30.000, pese a la distancia evolutiva que separa a ambos
roedores de los humanos.

La distancia evolutiva no es bice, sin embargo, para que la mayor parte


de los genes humanos conocidos que estn asociados a enfermedades
tengan su equivalente en el genoma de la rata, y que un alto porcentaje,
cercano al 40%, est conservado en el cdigo gentico de las tres
especies.
Entre los genes que claramente marcan distancias con el ratn, el
artculo publicado en Nature destaca distintas familias asociadas al
sistema inmunolgico, al sentido del olfato, la produccin de feromonas,
mecanismos de protelisis y sensibilidad a sustancias txicas. El uso de
la rata como modelo cientfico cuenta con cerca de 200 aos de historia,
lo que le ha convertido en el animal preferido para el estudio de
enfermedades cardiovasculares, neurodegenerativas, psiquitricas y de
comportamiento, metablicas o distintas formas de cncer, adems de
para evaluar su respuesta a frmacos. Su tamao, sin embargo, as
como un tiempo de gestacin superior, han desplazado en los ltimos
aos su popularidad cientfica frente al ratn, mucho ms manejable
como modelo gentico.

5. Cul es la porcin ms inmunognica de una


inmunoglobulina?
La porcin ms inmunognica de una inmunoglobulina, estn asociadas a la
porcin constante de la molcula, en particular a la regin Fc.
Al reemplazar estas regiones por las equivalentes de origen humano se
busca que la molcula resultante sea menos "extraa" para los
seres humanos y as facilitar su uso in vivo para la profilaxis y
tratamiento de enfermedades humanas.
A d i c i o n a l m e n t e , y a q u e l a fi s i o l o g a , c a t a b o l i s m o y
l a s f u n c i o n e s efectoras de un Anticuerpo estn asociadas al
fragmento Fc, los AcQ debieran comportarse en forma ptima al ser
administrados en humanos.
Cul es la importancia clnica de eso?
La construccin de genotecas de Anticuerpos es un
a s p e c t o q u e m e r e c e a t e n c i n especial, pues ha permitido
la generacin de repertorios de Anticuerpo cuya talla y
diversidad hace presumir que la totalidad del repertorio natural
se encuentra contenida en ellas.

6.- Cul es la prospeccin en ciencias mdicas de los anticuerpos quimricos?


Actualmente, la terapia con anticuerpos monoclonales representa el rea de
crecimiento ms grande de la industria farmacutica. Los productos

oncolgicos seguirn dominando el mercado; sin embargo, se


pronostica que los productos aplicados para trastornos inmunolgicos,
inflamatorios y artritis alcancen 40,1% del mercado de los anticuerpos
monoclonales para los siguientes aos.
Debido al creciente inters que existe en dilucidar el papel de la variedad de
protenas existentes en la superficie de muchos parsitos, virus y bacterias, los
anticuerpos monoclonales se han utilizado para investigar el papel de la
citoxicidad dependiente de anticuerpos para el control de las infecciones por estos
agentes y, tambin, dilucidar la importancia de estas protenas en la invasin y la
proliferacin celular

La naturaleza molecular de los anticuerpos teraputicos ha ido tambin evolucionando a


medida que se han ido desarrollando las diferentes tecnologas de produccin de los mismos.
Los primeros monoclonales eran molculas de origen murino, ya que la tcnica clsica de
produccin de anticuerpos monoclonales (mediante la generacin de hibridomas) se basaba
en cultivos celulares de ratn. Sin embargo, la biologa molecular y la ingeniera de protenas
han ido haciendo posible la creacin de monoclonales con cada vez ms proporcin de
secuencias humanas en su composicin y esto ha afectado tambin a su estrategia de
mercado.