Fagocitosis

Dr. Luis F. Sarmiento M. MSc

Ctedra de Inmunologa
Escuela de Medicina Dr. Jos M Vargas
Facultad de Medicina
Universidad Central de Venezuela

Fagocitosis
Antecedentes
Concepto
Clulas Fagocitarias
Fases
Mtodos de estudio
Trastornos

Antecedentes
lie Metchnikoff
Ilya Ilich Mechnikov

1845-1916

Concepto
Fagocitosis

se define como el acto

de engullir, con el propsito de
destruir, un objeto, tal como un
microorganismo

Liu H, Pope RM. Phagocytes: mechanisms of inflammation

and tissue destruction. Rheum Dis Clin N Am 30 (2004) 19-39

Clulas Fagocitarias

Polimorfonucleares
Macrfagos

Clulas
Fagocitarias

Clulas Fagocitarias:
Polimorfonucleares
Localizacin:
Sangre Perifrica
Vida media: Horas
Morfologa
Blanco: Bacterias
Pigenas

Grnulos Azurfilos

Grnulos
Especficos

0,5 M
1.500/ clula
Grnulos
Azurfilos

Lisozima
Mieloperoxidasa
Elastasa
Catepsina G
H+ Hidrolasas
Defensinas
BPI

Grnulos Especficos

Polimorfonuclear
neutrfilo (PMN)

0,2 M
3.000/ clula

Lisozima
Citocromo b558
OH- fosfatasa
Lactoferrina
Protena Fijadora de
Vitamina B12

Clulas Fagocitarias Profesionales:

Macrfagos

Localizacin
Vida Media
Morfologa
Blanco: bacterias, virus y protozoarios
intracelulares
Funciones Inmunitarias
Fagocitosis
Presentacin Antignica
Citotoxicidad

Monocitos y macrfagos

Clulas Fagocitarias Profesionales:

Macrfagos

Microglia
Precursores
sanguneos
de monocitos
Inflamacin
Crnica: MF
activados,
clulas gigantes
y epitelioides

Cl. Kupffer
Histiocitos
residentes del
TC

MF de
Ganglios
Linfticos
MF Alveolares
Osteoclastos
MF de Cavidad
Pleural
MF Esplnicos
MF Sinoviales
Clulas
Mesangiales
Glomerulares

Fases de la Fagocitosis

Movilidad
Reconocimiento y
Adhesin
Ingestin
Desgranulacin
Muerte intracelular

Fases de la Fagocitosis

Movilidad

Molculas de Adhesin
Quimiocinas
Complemento
Sistema de la Coagulacin

Fases de la Fagocitosis

Reconocimiento/Adhesin
Interaccin PAMP-PRR
Opsonizacin
Complemento
IgG

Factores que influencian la

Fagocitosis

Molculas de Reconocimiento

Patrones Moleculares
Asociados a Patgenos
PAMPs

Factores que influencian la

Fagocitosis

Molculas de Reconocimiento

Patrones Moleculares
Seal
de
Peligro
Asociados a Patgenos
PAMPs

Patrones de Reconocimiento
PAMPs en la superficie de los patgenos
Receptores de Reconocimiento de
Patrones (PRR) en la superficie de los
fagocitos

Se unen a residuos de carbohidratos

altamente conservados en procariotas

Receptores para el
Reconocimiento de
Patrones en la
superficie del
Macrfago

Receptor de LPS
(CD14)

Receptor de
Manosa

CD11b/CD18

Receptor de
Glucanos
Receptor
Scavenger

PAMPs
Infecciones Extracelulares
Lipopolisacrido
Bacterias Gamnegativas
cido lipoteicoico
Bacterias Grampositivas
Mananos
Pared celular de
levaduras
Glicolpidos
Micobacterias
Infecciones Intracelulares
Secuencias no
DNA Bacteriano
metiladas CpG
RNA bicatenario
Virus RNA

Reconocimiento de la Seal de
Peligro y activacin del Macrfago

Activacin del Macrfago

Mayor capacidad fagoctica

Mayor potencial para destruir
los patgenos una vez ingeridos
Mayor secrecin de mediadores
inflamatorios
Capacidad aumentada para
estimular a los linfocitos T.
Mayor capacidad de producir
protenas citotxicas para la
eliminacin de clulas
infectadas por virus, clulas
tumorales y bacterias
intacelulares.
Expresan mayores cantidades
de molculas MHC Clase II en
sus superficie

Fagocitosis en ausencia de seal

de Peligro

Fagocitosis de clulas
apoptticas
Seales de cmeme
No desencadena eventos
inflamatorios
Molcula Candidata: C1q

Fases de la Fagocitosis

Ingestin
Activacin del
Citoesqueleto
Emisin de
Pseudpodos
Englobamiento
Formacin del
Fagosoma

Fases de la Fagocitosis

Desgranulacin
En minutos
Formacin del
fagolisosoma
Mecanismos

Agentes bactericidas producidos o liberados por

fagocitos con la ingestin de microorganismos
Clase de Mecanismo

Productos especficos

Acidificacin

pH = ~ 3.5-4.0, bacteriosttico o
bactericida

Productos txicos derivados de

Oxgeno

Superxido, Perxido de Hidrgeno,

radical hidroxilo, hipoclorito

Productos txicos derivados de

Nitrgeno

NO

Pptidos Antimicrobianos

Defensinas y protenas catinicas

Enzimas

Lisozima (disuelve la pared celular de

ciertas bacterias grampositivas)
Hidrolasas cidas (digestin de la
bacteria)

Competidores

Lactoferrina (une Fe) y protena fijadora

de vitamina B12

Destruccin mediante
intermediarios reactivos de Oxgeno
Citosol

Proceso fagoctico
Membrana

Desencadenante

Flavocitocromo
b558

Grnulo

Destruccin mediante
intermediarios reactivos de
Nitrgeno
NO Sintetasa

L-ARGININA

CITRULINA

L-NMMA

Destruccin mediante mecanismos

independientes de Oxgeno
Catepsina G
Defensinas de bajo PM
Protenas catinicas de alto PM

Dao a las Membranas microbianas

Protena incrementadora de la
permeabilidad bacteriana (BPI)
Lisozima

Escinde los mucopptidos de la

pared celular bacteriana

Lactoferrina

Forma complejos con el hierro

Enzimas proteolticas

Digestin de microorganismos
digeridos

Otras enzimas hidrolticas diversas

Factores secretados por Macrfagos

Activados
Interleukina 1 (IL-1)

Promueve respuestas inflamatorias y fiebre

Interleukina 6 (IL-6)
Promueven la inmunidad Innata y la
Factor de Necrosis Tumoral
eliminacin de Patgenos
(TNF-)
Protenas del Complemento

Promueven la respuesta Inflamatoria y la

eliminacin de patgenos

Enzimas hidrolticas

Promueven la respuesta Inflamatoria

Interfern (IFN-)

Activa genes celulares, dando lugar a la

produccin de protenas que confieren un
estado antiviral a la clula

Factor de Necrosis Tumoral

Destruye algunas clulas tumorales
(TNF-)
GM-CSF
G-CSF
Promueve la hematopoyesis inducible
M-CSF

Mtodos de estudio de la
fagocitosis
Conteo de PMN Conteo de monocitos y
Macrfagos
Pruebas de Movilidad de PMN

Prueba de Movilidad al azar: Mtodo del tubo

capilar
Prueba de la membrana para quimiotaxia

Pruebas de reconocimiento y adherencia

CD18 (Subunidad de LFA-1, Mac-1 y CR4)

Prueba para quimiotaxia de

PMN
PMN

Sust. Quimiotctica

Sust. No
Quimiotctica

Prueba para quimiotaxia de

PMN

Mtodos para el Estudio de la

Fagocitosis
Pruebas

de Ingestin

Cuenta Directa al Microscopio de Luz

Estimacin de la radioactividad emitida
por fagocitos que han ingerido partculas
marcadas
Medicin de la tincin de lpidos
Anlisis mediante citometra de flujo

Mtodos para el Estudio de la

Fagocitosis
Pruebas

de Desgranulacin

Fagocitosis Frustrada
Pruebas

de Muerte Intracelular

Prueba de Reduccin del Azul de

Tetrazolio Nitrado
Quimioluminiscencia
Citometra de Flujo (Estallido Oxidativo)
Anlisis Microbicida de Neutrfilos

Fagocitosis Frustrada

PMN

Enzimas Lisosmicas

IgG agregada

Prueba Cuantitativa del NBT

azul de tetrazolio nitrado

NBT

Ltex

Formazn

Piridina

Quimioluminiscencia

O2

O2-

O2

H2 O2

O2

H2 O2
O2-

O2H2 O2

O2
H2 O2

O2

Quimioluminiscencia

O2

O2-

O2

H2 O2

O2

H2 O2
O2-

O2H2 O2

O2
H2 O2

O2

Quimioluminiscencia

O2

O2-

O2

H2 O2

O2

H2 O2
O2-

O2H2 O2

O2
H2 O2

O2

Quimioluminiscencia
COO-

O2-

O2O2O2

O2

O2
H2 O2
H2 O2

H2 O2

O2
O2-

H2 O2

Inestable

Quimioluminiscencia
COOH
Edo. Basal

O2-

O2O2O2

O2

O2
H2 O2
H2 O2

H2 O2

O2
O2-

H2 O2

Citometra de Flujo
2,7 diclorofluorescena

Anlisis Microbicida de Neutrfilos

No. de bacterias viables

1,E+06

Paciente con EGC

Portador Heterocigoto de EGC

1,E+05

Individuo sano
1,E+04

1,E+03

1,E+02

1,E+01

1,E+00

0,5

1,5

t (horas)

2,5

Alteraciones de la Funcin
Fagocitaria
Neutropenia
Sndrome de Job
Deficiencia de
Mieloperoxidasa
Deficiencia de Glucosa-6P Deshidrogenasa
Leucemia aguda
Disfuncin Transitoria del
Neutrfilo

Infecciones agudas
Ataxia-Telangiectasia
Crioglobulinemia

Enfermedad
Granulomatosa Crnica
Sndrome de ChdiakHigashi
Dficit de Adhesin
leucocitaria
Prematuridad
Sndrome de Down
Susceptibilidad a infeccin
por micobacterias
Modelo de Enfermedades
autoinmunes

Pregunta de Examen
Antecedentes
Concepto
Clulas Fagocitarias
Fases
Mtodos de estudio
Trastornos

Bibliografa Recomendada

Roitt: Inmunologa Fundamentos

Kuby: 5ta. Edicin
Stites (Seccin de mtodos de estudio)

Muchas
Gracias